JPH1066593A - エポキシミルベマイシンの微生物利用による製造方法 - Google Patents
エポキシミルベマイシンの微生物利用による製造方法Info
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- JPH1066593A JPH1066593A JP9189034A JP18903497A JPH1066593A JP H1066593 A JPH1066593 A JP H1066593A JP 9189034 A JP9189034 A JP 9189034A JP 18903497 A JP18903497 A JP 18903497A JP H1066593 A JPH1066593 A JP H1066593A
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- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
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- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N49/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, containing compounds containing the group, wherein m+n>=1, both X together may also mean —Y— or a direct carbon-to-carbon bond, and the carbon atoms marked with an asterisk are not part of any ring system other than that which may be formed by the atoms X, the carbon atoms in square brackets being part of any acyclic or cyclic structure, or the group, wherein A means a carbon atom or Y, n>=0, and not more than one of these carbon atoms being a member of the same ring system, e.g. juvenile insect hormones or mimics thereof
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
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Abstract
(57)【要約】
【課題】植物の吸液虫、食害虫、線虫や動物の寄生虫類
の防除に有効なエポキシミルベマイシンの微生物利用に
よる製法の提供。 【解決手段】液相中に溶解した式ＩＩＩのミルベマイシ
ンに、１４，１５−エポキシ化反応を行うことのできる
ストレプトマイセス種の微生物（ＡＴＣＣ３１５６０，
３１５６１等）を該反応を行うのに十分な時間接触させ
ることからなる式ＩＩの１４，１５−エポキシ−ミルベ
マイシンの微生物利用による一段階製法。 【化１】 〔基の例：Ｒ1 ’，Ｒ3 ＝メチル，エチル，イソプロピ
ル，第二ブチル基等、Ａ’，Ｒ4 ＝−Ｃ（ＯＨ）Ｈ−，
＞Ｃ＝Ｎ〜ＯＨ等〕
の防除に有効なエポキシミルベマイシンの微生物利用に
よる製法の提供。 【解決手段】液相中に溶解した式ＩＩＩのミルベマイシ
ンに、１４，１５−エポキシ化反応を行うことのできる
ストレプトマイセス種の微生物（ＡＴＣＣ３１５６０，
３１５６１等）を該反応を行うのに十分な時間接触させ
ることからなる式ＩＩの１４，１５−エポキシ−ミルベ
マイシンの微生物利用による一段階製法。 【化１】 〔基の例：Ｒ1 ’，Ｒ3 ＝メチル，エチル，イソプロピ
ル，第二ブチル基等、Ａ’，Ｒ4 ＝−Ｃ（ＯＨ）Ｈ−，
＞Ｃ＝Ｎ〜ＯＨ等〕
Description
【０００１】本発明は、液相中に溶解した次式ＩＩＩ：
【化２２】 （式中、Ｒ3 はＲ1 ’を、またＲ4 はＡ’を表し、そし
てＲ1 ’およびＡ’は下記式ＩＩで定義する意味を表
す）で表されるミルベマイシンに、１４，１５−エポキ
シ化反応を行うことのできるストレプトマイセス種の微
生物を該１４，１５−エポキシ化反応を行うのに十分な
時間接触させることを特徴とする次式ＩＩ：
てＲ1 ’およびＡ’は下記式ＩＩで定義する意味を表
す）で表されるミルベマイシンに、１４，１５−エポキ
シ化反応を行うことのできるストレプトマイセス種の微
生物を該１４，１５−エポキシ化反応を行うのに十分な
時間接触させることを特徴とする次式ＩＩ：
【化２３】 〔式中、Ｒ1 ’はメチル基、エチル基、イソプロピル基
または第二ブチル基を表すか、または次式：
または第二ブチル基を表すか、または次式：
【化２４】 （式中、Ｘはメチル基、エチル基またはイソプロピル基
を表す）で表される基を表し、Ａ’は次式：
を表す）で表される基を表し、Ａ’は次式：
【化２５】 （式中、Ｒ2 は水素原子、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 Ｏ−Ｃ
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式：
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式：
【化２６】 で表される基を表す〕で表される１４，１５−エポキシ
−ミルベマイシンの微生物利用による一段階製造方法に
関する。
−ミルベマイシンの微生物利用による一段階製造方法に
関する。
【０００２】本発明の範囲内における特に好ましいもの
は、液相中に溶解した次式ＩＩＩ：
は、液相中に溶解した次式ＩＩＩ：
【化２７】 （式中、Ｒ3 はメチル基、エチル基、イソプロピル基ま
たは第二ブチル基を表し、Ｒ4 は次式：
たは第二ブチル基を表し、Ｒ4 は次式：
【化２８】 （式中、Ｒ2 は水素原子、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 Ｏ−Ｃ
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式：
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式：
【化２９】 で表される基を表す表す）で表されるミルベマイシン
に、１４，１５−エポキシ化反応を行うことのできるス
トレプトマイセス種の微生物を該１４，１５−エポキシ
化反応を行うのに十分な時間接触させることを特徴とす
る次式ＩＩ：
に、１４，１５−エポキシ化反応を行うことのできるス
トレプトマイセス種の微生物を該１４，１５−エポキシ
化反応を行うのに十分な時間接触させることを特徴とす
る次式ＩＩ：
【化３０】 〔式中、Ｒ1 ’はメチル基、エチル基、イソプロピル基
または第二ブチル基を表し、そしてＡ’は次式：
または第二ブチル基を表し、そしてＡ’は次式：
【化３１】 （式中、Ｒ2 は水素原子、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 Ｏ−Ｃ
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式：
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式：
【化３２】 で表される基を表す〕で表される１４，１５−エポキシ
−ミルベマイシンの微生物利用による一段階製造方法で
ある。
−ミルベマイシンの微生物利用による一段階製造方法で
ある。
【０００３】上記式ＩＩＩで表されるミルベマイシンと
生体触媒であるストレプトマイセス種の微生物(Strepto
myces species)との液相での接触により、次式Ｉまたは
ＩＩ：
生体触媒であるストレプトマイセス種の微生物(Strepto
myces species)との液相での接触により、次式Ｉまたは
ＩＩ：
【化３３】 （式中、Ｒ1 およびＲ1 ’ならびにＡおよびＡ’はそれ
ぞれ上で定義した意味を表す）で表される１３β−ヒド
ロキシ−または１４，１５−エポキシ−ミルベマイシン
が通常得られる。
ぞれ上で定義した意味を表す）で表される１３β−ヒド
ロキシ−または１４，１５−エポキシ−ミルベマイシン
が通常得られる。
【０００４】Ｒ1 およびＲ1 ’が次式：
【化３４】 で表される基を表し、基Ｘ、Ａ、Ａ’およびＲ2 が上記
式ＩおよびＩＩに対して定義した意味を表す式Ｉおよび
ＩＩで表される化合物は、１３β−ヒドロキシ基または
１４，１５−エポキシ基を含み、５位に遊離のＯＨ基ま
たはオキシム基を有する天然の抗生物質Ｓ５４１の２３
−デオキシ誘導体に相当する。
式ＩおよびＩＩに対して定義した意味を表す式Ｉおよび
ＩＩで表される化合物は、１３β−ヒドロキシ基または
１４，１５−エポキシ基を含み、５位に遊離のＯＨ基ま
たはオキシム基を有する天然の抗生物質Ｓ５４１の２３
−デオキシ誘導体に相当する。
【０００５】この微生物を利用した製法においては、一
般的に両生成物ＩおよびＩＩが生成するが、通常はＩが
過剰に生成し、生成物ＩとＩＩとは通常約４：１の割合
で得られる。本方法によって得られる式ＩおよびＩＩで
表される化合物は、慣用の分離方法、例えば分別結晶ま
たはクロマトグラフィーにより、多大な技術的浪費を伴
うことなく互いに分離することができる。クロマトグラ
フィーには例えばシリカゲルのような鉱物性担体材料ま
たは有機交換樹脂を用いる、カラムクロマトグラフィ
ー、厚層クロマトグラフィーまたは薄層クロマトグラフ
ィーが含まれる。もし、式Ｉで表される化合物（１３β
−ヒドロキシミルベマイシン）にのみ興味があるなら
ば、ヨーロッパ特許公報ＥＰ−１８０５３９号に従って
式ＩＩで表される１４，１５−エポキシドを式Ｉで表さ
れる１３β−ヒドロキシミルベマイシンに変換できるの
で、生成物ＩとＩＩの分離は必要ない。
般的に両生成物ＩおよびＩＩが生成するが、通常はＩが
過剰に生成し、生成物ＩとＩＩとは通常約４：１の割合
で得られる。本方法によって得られる式ＩおよびＩＩで
表される化合物は、慣用の分離方法、例えば分別結晶ま
たはクロマトグラフィーにより、多大な技術的浪費を伴
うことなく互いに分離することができる。クロマトグラ
フィーには例えばシリカゲルのような鉱物性担体材料ま
たは有機交換樹脂を用いる、カラムクロマトグラフィ
ー、厚層クロマトグラフィーまたは薄層クロマトグラフ
ィーが含まれる。もし、式Ｉで表される化合物（１３β
−ヒドロキシミルベマイシン）にのみ興味があるなら
ば、ヨーロッパ特許公報ＥＰ−１８０５３９号に従って
式ＩＩで表される１４，１５−エポキシドを式Ｉで表さ
れる１３β−ヒドロキシミルベマイシンに変換できるの
で、生成物ＩとＩＩの分離は必要ない。
【０００６】本発明の範囲内における「微生物」および
「その活性成分」という用語は以下のものを含んでい
る： ａ）成長細胞の形態にある生きている微生物、 ｂ）死んだ微生物、好ましくは崩壊状態、すなわち細胞
壁／細胞膜を機械的または化学的に分裂または除去した
微生物、 ｃ）上記微生物の細胞内容物の粗抽出物、 ｄ）式ＩＩＩで表される化合物を、式ＩＩおよび／また
は式Ｉで表される化合物に変換する酵素および ｅ）上記微生物の胞子。 本発明において使用することのできる、上記ａ）ないし
ｅ）に記載した活性系は、簡素化のために以下において
生体触媒(biocatalyst) という用語で総括することと
し、該用語はこれらの系のあらゆるものを表すために使
用される。
「その活性成分」という用語は以下のものを含んでい
る： ａ）成長細胞の形態にある生きている微生物、 ｂ）死んだ微生物、好ましくは崩壊状態、すなわち細胞
壁／細胞膜を機械的または化学的に分裂または除去した
微生物、 ｃ）上記微生物の細胞内容物の粗抽出物、 ｄ）式ＩＩＩで表される化合物を、式ＩＩおよび／また
は式Ｉで表される化合物に変換する酵素および ｅ）上記微生物の胞子。 本発明において使用することのできる、上記ａ）ないし
ｅ）に記載した活性系は、簡素化のために以下において
生体触媒(biocatalyst) という用語で総括することと
し、該用語はこれらの系のあらゆるものを表すために使
用される。
【０００７】バクテリア類および高等菌類は本発明の方
法にとって特に適した微生物である。適当なバクテリ
ア、特にアクチノマイセテス(Actinomycetes) の代表
種、特にストレプトマイセス(Streptomyces)属である；
ストレプトマイセス・ジアスタトクロモゲネス(Strepto
myces diastatochromogenes)ＡＴＣＣ ３１５６１株、
および特にストレプトマイセス・ヴィオラセンス(Strep
tomyces violascens) ＡＴＣＣ ３１５６０は、式ＩＩ
Ｉで表される化合物の１３位に立体特異的にヒドロキシ
基を導入するため、および／または１４，１５−エポキ
シ化のために特に適していることが証明されている。
法にとって特に適した微生物である。適当なバクテリ
ア、特にアクチノマイセテス(Actinomycetes) の代表
種、特にストレプトマイセス(Streptomyces)属である；
ストレプトマイセス・ジアスタトクロモゲネス(Strepto
myces diastatochromogenes)ＡＴＣＣ ３１５６１株、
および特にストレプトマイセス・ヴィオラセンス(Strep
tomyces violascens) ＡＴＣＣ ３１５６０は、式ＩＩ
Ｉで表される化合物の１３位に立体特異的にヒドロキシ
基を導入するため、および／または１４，１５−エポキ
シ化のために特に適していることが証明されている。
【０００８】高等菌類の中で特に適しているのは不完全
菌類(Fungi imperfecti)、特にモニリアル目(Moniliale
s)の代表種である。式ＩまたはＩＩで表される生成物に
関してはアスペルギルス(Aspergillus) 属の代表種、特
に菌株アスペルギルス・ニガー(Aspergillus nigar) s
p. ＫＳ−１０１ ＡＴＣＣ ２０５６７を用いて、特
に良好な結果を得ることができる。
菌類(Fungi imperfecti)、特にモニリアル目(Moniliale
s)の代表種である。式ＩまたはＩＩで表される生成物に
関してはアスペルギルス(Aspergillus) 属の代表種、特
に菌株アスペルギルス・ニガー(Aspergillus nigar) s
p. ＫＳ−１０１ ＡＴＣＣ ２０５６７を用いて、特
に良好な結果を得ることができる。
【０００９】本発明の範囲内において使用される微生
物、すなわちストレプトマイセス菌株：ストレプトマイ
セス・ジアスタトクロモゲネスＡＴＣＣ ３１５６１、
そして特にストレプトマイセス・ヴィオラセンスＡＴＣ
Ｃ ３１５６０およびアスペルギルス菌株：アスペルギ
ルス・ニガーsp. ＫＳ−１０１ ＡＴＣＣ ２０５６７
は米国特許第４２２６９４１号明細書に開示されてい
る。上記米国特許明細書の第３ないし６欄の記載は参照
文献という形で本発明の一部を構成する。
物、すなわちストレプトマイセス菌株：ストレプトマイ
セス・ジアスタトクロモゲネスＡＴＣＣ ３１５６１、
そして特にストレプトマイセス・ヴィオラセンスＡＴＣ
Ｃ ３１５６０およびアスペルギルス菌株：アスペルギ
ルス・ニガーsp. ＫＳ−１０１ ＡＴＣＣ ２０５６７
は米国特許第４２２６９４１号明細書に開示されてい
る。上記米国特許明細書の第３ないし６欄の記載は参照
文献という形で本発明の一部を構成する。
【００１０】遊離の、またはアシル化された５−ヒドロ
キシ基を有する式Ｉで表される１３β−ミルベマイシン
は、ヨーロッパ特許公報ＥＰ−１８０５３９号に、生産
性家畜の体内および体外に寄生する害虫を防除するため
の高活性駆虫薬として開示されている。式Ｉで表される
化合物の公知製造方法（ＥＰ−１８０５３９号）におい
ては、本発明に係る微生物を利用した製造方法において
もそうであるように、出発物質として式ＩＩＩで表され
る化合物が使用されている。公知方法においては、第１
段階として式ＩＩＩで表される化合物を過酸によって式
ＩＩで表される１４，１５−エポキシドに変換し、
キシ基を有する式Ｉで表される１３β−ミルベマイシン
は、ヨーロッパ特許公報ＥＰ−１８０５３９号に、生産
性家畜の体内および体外に寄生する害虫を防除するため
の高活性駆虫薬として開示されている。式Ｉで表される
化合物の公知製造方法（ＥＰ−１８０５３９号）におい
ては、本発明に係る微生物を利用した製造方法において
もそうであるように、出発物質として式ＩＩＩで表され
る化合物が使用されている。公知方法においては、第１
段階として式ＩＩＩで表される化合物を過酸によって式
ＩＩで表される１４，１５−エポキシドに変換し、
【化３５】 次いで式ＩＩで表される１４，１５−エポキシドを特定
の錯体試薬によって式ＩＶで表される１５−ヒドロキシ
化合物に変え、
の錯体試薬によって式ＩＶで表される１５−ヒドロキシ
化合物に変え、
【化３６】 さらに別の段階で、式ＩＶで表される１５−ヒドロキシ
化合物を、クロム酸、ハロクロム酸または重クロム酸イ
オン、特に重クロム酸ピリジニウムと反応させ、
化合物を、クロム酸、ハロクロム酸または重クロム酸イ
オン、特に重クロム酸ピリジニウムと反応させ、
【化３７】 所望する式Ｉで表される１３β−ヒドロキシミルベマイ
シンとともに、除去しなければならない１３−オキソ化
合物もまた生成されていた。
シンとともに、除去しなければならない１３−オキソ化
合物もまた生成されていた。
【００１１】上記公知方法と比べると、本発明の微生物
を利用したヒドロキシル化方法は、一段階のみからな
り、全収率がより高くなり、そして使用しなければなら
ない化学薬品がより少ないので生態学的により安全であ
り、さらには副生成物として生物体が形成されるのみで
あるという明確な利点を有する。
を利用したヒドロキシル化方法は、一段階のみからな
り、全収率がより高くなり、そして使用しなければなら
ない化学薬品がより少ないので生態学的により安全であ
り、さらには副生成物として生物体が形成されるのみで
あるという明確な利点を有する。
【００１２】本発明の微生物を利用した製法から得られ
る１４，１５−エポキシドは、ヨーロッパ公開特許明細
書：ＥＰ−１８０５３９号，ＥＰ−１４７８５２号，Ｅ
Ｐ−１８４９８９号およびＥＰ−１８４１７３号によ
り、種々の置換ミルベマイシンを製造するための価値あ
る構成単位として知られている。
る１４，１５−エポキシドは、ヨーロッパ公開特許明細
書：ＥＰ−１８０５３９号，ＥＰ−１４７８５２号，Ｅ
Ｐ−１８４９８９号およびＥＰ−１８４１７３号によ
り、種々の置換ミルベマイシンを製造するための価値あ
る構成単位として知られている。
【００１３】ＡおよびＡ’がオキシム基である式Ｉおよ
びＩＩで表される化合物は新規であり、そしてそれら自
体が高活性の体外−および体内駆虫薬であるか、または
高活性の体外−および体内駆虫薬を製造するための中間
体である。
びＩＩで表される化合物は新規であり、そしてそれら自
体が高活性の体外−および体内駆虫薬であるか、または
高活性の体外−および体内駆虫薬を製造するための中間
体である。
【００１４】式ＩおよびＩＩで表される化合物の次に示
す亜群は、それらの著しい殺寄生虫および殺昆虫活性か
らして特に好ましいものである。 Ｉａ，ＩＩａ群：式ＩまたはＩＩ中、Ｒ1 およびＲ1 ’
がメチル基、エチル基、イソプロピル基または第二ブチ
ル基を表すか、または次式：
す亜群は、それらの著しい殺寄生虫および殺昆虫活性か
らして特に好ましいものである。 Ｉａ，ＩＩａ群：式ＩまたはＩＩ中、Ｒ1 およびＲ1 ’
がメチル基、エチル基、イソプロピル基または第二ブチ
ル基を表すか、または次式：
【化３８】 （式中、Ｘはメチル基、エチル基またはイソプロピル基
を表す）で表される基を表し、ＡおよびＡ’が次式：
を表す）で表される基を表し、ＡおよびＡ’が次式：
【化３９】 で表される基を表す化合物。 Ｉｂ，ＩＩｂ群：式ＩまたはＩＩ中、Ｒ1 およびＲ1 ’
がメチル基、エチル基、イソプロピル基または第二ブチ
ル基を表し、ＡおよびＡ’が次式：
がメチル基、エチル基、イソプロピル基または第二ブチ
ル基を表し、ＡおよびＡ’が次式：
【化４０】 で表される基を表す化合物。 Ｉｃ，ＩＩｃ群：式ＩまたはＩＩ中、Ｒ1 およびＲ1 ’
がメチル基またはエチル基を表し、ＡおよびＡ’が次
式：
がメチル基またはエチル基を表し、ＡおよびＡ’が次
式：
【化４１】 で表される基を表す化合物。
【００１５】特に最も好ましい個々の化合物は下に挙げ
るものである：１４，１５−エポキシ−５−オキシイミ
ノ−ミルベマイシンＡ4 、１４，１５−エポキシ−５−
オキシイミノ−ミルベマイシンＡ3 、１４，１５−エポ
キシ−５−オキシイミノ−ミルベマイシンＤ。
るものである：１４，１５−エポキシ−５−オキシイミ
ノ−ミルベマイシンＡ4 、１４，１５−エポキシ−５−
オキシイミノ−ミルベマイシンＡ3 、１４，１５−エポ
キシ−５−オキシイミノ−ミルベマイシンＤ。
【００１６】高活性の体外−および体内−駆虫薬とし
て、文献から公知となっているミルベマイシンは、例え
ば表１に示す式Ｍで表されるようなものである。
て、文献から公知となっているミルベマイシンは、例え
ば表１に示す式Ｍで表されるようなものである。
【表１】
【００１７】式中Ｒが第二ブチル基を表す化合物は、常
用の分類に従えばアベルメクチン誘導体から誘導される
ものであるけれども、ここでは、およびこれより以降は
ミルベマイシン誘導体としても考えられるべきである。
とはいえ、アベルメクチン−アグリコン（１３位にＯＨ
基を伴うもの）は米国特許第４１７３５７１号明細書の
記載に従って、ミルベマイシン同族体に変換することが
できる。
用の分類に従えばアベルメクチン誘導体から誘導される
ものであるけれども、ここでは、およびこれより以降は
ミルベマイシン誘導体としても考えられるべきである。
とはいえ、アベルメクチン−アグリコン（１３位にＯＨ
基を伴うもの）は米国特許第４１７３５７１号明細書の
記載に従って、ミルベマイシン同族体に変換することが
できる。
【００１８】天然の抗生物質Ｓ５４１の構造は西独公開
特許公報（ＤＥ−ＯＳ）第３５３２７９４号から公知で
あり、下の表２に示すようなものである。
特許公報（ＤＥ−ＯＳ）第３５３２７９４号から公知で
あり、下の表２に示すようなものである。
【表２】 以下、名称を簡単にするために、抗生物質Ｓ５４１の誘
導体を、これらファクター(Factor)に従って、Ｓ５４１
Ａ、Ｓ５４１Ｂ、Ｓ５４１Ｃ、Ｓ５４１Ｄ、Ｓ５４１
Ｅ、Ｓ５４１Ｆの誘導体として分類する。
導体を、これらファクター(Factor)に従って、Ｓ５４１
Ａ、Ｓ５４１Ｂ、Ｓ５４１Ｃ、Ｓ５４１Ｄ、Ｓ５４１
Ｅ、Ｓ５４１Ｆの誘導体として分類する。
【００１９】Ｒ3 が次式：
【化４２】 で表される基を表し、ＸおよびＲ4 が式ＩＩＩに対して
定義された意味を表し、そして本発明の方法において出
発物質として使用することのできる式ＩＩＩで表される
化合物は、天然の抗生物質Ｓ５４１からそれ自体公知の
方法によって製造することができる。
定義された意味を表し、そして本発明の方法において出
発物質として使用することのできる式ＩＩＩで表される
化合物は、天然の抗生物質Ｓ５４１からそれ自体公知の
方法によって製造することができる。
【００２０】抗生物質Ｓ５４１の２３位のヒドロキシ基
は米国特許第４３２８３３５号明細書に記載されている
方法と同様の方法によって除去することができ、こうし
て抗生物質Ｓ５４１は相当する２３−デオキシ誘導体に
変換することができる。５−ヒドロキシ基を有するよう
な化合物（Ｒ1 * ＝Ｈ）は、後述するシリル化剤Ｙ−Ｓ
ｉ（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）（Ｒ7 ）の一種または第三ブチルジ
メチルシリルオキシアセチルクロライドとの反応によっ
て最初に選択的に保護されなければならない。Ｒ1 * が
Ｓｉ（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）（Ｒ7 ）またはＣ（＝Ｏ）ＣＨ2
ＯＳｉ（ＣＨ3）2 ｔ−Ｃ4 Ｈ9 によって置換され、２
３−Ｃ原子がＯＨによって置換されたこれら保護化合物
とｐ−メチルフェニル−クロロチオノホルメートとの反
応は、２３位が−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）−ＯＣ6 Ｈ4 −ＣＨ3
−ｐに置換されている抗生物質Ｓ５４１誘導体を生成す
る。抗生物質Ｓ５４１のこれらの２３−Ｏ−（４−メチ
ルフェノキシ）−チオカルボニル誘導体は次いで出発物
質として使用され、トルエン中、アゾビスイソブチロニ
トリルの存在下、８０ないし１２０℃の温度でトリブチ
ルスズハイドライドで還元され、相当する（２３位が置
換された）２３−デオキシ誘導体を生じる。
は米国特許第４３２８３３５号明細書に記載されている
方法と同様の方法によって除去することができ、こうし
て抗生物質Ｓ５４１は相当する２３−デオキシ誘導体に
変換することができる。５−ヒドロキシ基を有するよう
な化合物（Ｒ1 * ＝Ｈ）は、後述するシリル化剤Ｙ−Ｓ
ｉ（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）（Ｒ7 ）の一種または第三ブチルジ
メチルシリルオキシアセチルクロライドとの反応によっ
て最初に選択的に保護されなければならない。Ｒ1 * が
Ｓｉ（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）（Ｒ7 ）またはＣ（＝Ｏ）ＣＨ2
ＯＳｉ（ＣＨ3）2 ｔ−Ｃ4 Ｈ9 によって置換され、２
３−Ｃ原子がＯＨによって置換されたこれら保護化合物
とｐ−メチルフェニル−クロロチオノホルメートとの反
応は、２３位が−Ｏ−Ｃ（＝Ｓ）−ＯＣ6 Ｈ4 −ＣＨ3
−ｐに置換されている抗生物質Ｓ５４１誘導体を生成す
る。抗生物質Ｓ５４１のこれらの２３−Ｏ−（４−メチ
ルフェノキシ）−チオカルボニル誘導体は次いで出発物
質として使用され、トルエン中、アゾビスイソブチロニ
トリルの存在下、８０ないし１２０℃の温度でトリブチ
ルスズハイドライドで還元され、相当する（２３位が置
換された）２３−デオキシ誘導体を生じる。
【００２１】シリル化に際し、次式：Ｙ−Ｓｉ（Ｒ5 ）
（Ｒ6 ）（Ｒ7 ）〔式中、Ｒ5 、Ｒ6 およびＲ7 は、好
ましくは互いに独立して炭素原子数１ないし４のアルキ
ル基、ベンジル基またはフェニル基を表し、そして基−
Ｓｉ（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）（Ｒ7）は例えば次の基：トリメ
チルシリル基、トリス（第三ブチル）シリル基、ジメチ
ル（２，３−ジメチル−２−ブチル）シリル基、ジフェ
ニル−第三ブチルシリル基、ビス（イソプロピル）メチ
ルシリル基、トリフェニルシリル基等の一つを表し、特
に第三ブチルジメチルシリル基を表す〕で表されるシラ
ンを用いるのが好都合である。Ｙは例えばブロミド、ク
ロリド、シアニド、アジド、アセタミド、トリフルオロ
アセテートまたはトリフルオロメタンスルホネートのよ
うなシリル脱離基である。この記述は限定するものでは
なく、他の典型的なシリル脱離基は当業者に知られてい
る。
（Ｒ6 ）（Ｒ7 ）〔式中、Ｒ5 、Ｒ6 およびＲ7 は、好
ましくは互いに独立して炭素原子数１ないし４のアルキ
ル基、ベンジル基またはフェニル基を表し、そして基−
Ｓｉ（Ｒ5 ）（Ｒ6 ）（Ｒ7）は例えば次の基：トリメ
チルシリル基、トリス（第三ブチル）シリル基、ジメチ
ル（２，３−ジメチル−２−ブチル）シリル基、ジフェ
ニル−第三ブチルシリル基、ビス（イソプロピル）メチ
ルシリル基、トリフェニルシリル基等の一つを表し、特
に第三ブチルジメチルシリル基を表す〕で表されるシラ
ンを用いるのが好都合である。Ｙは例えばブロミド、ク
ロリド、シアニド、アジド、アセタミド、トリフルオロ
アセテートまたはトリフルオロメタンスルホネートのよ
うなシリル脱離基である。この記述は限定するものでは
なく、他の典型的なシリル脱離基は当業者に知られてい
る。
【００２２】５−Ｏ−シリル化は無水媒体、好ましくは
不活性溶媒、そして最も好ましくは非プロトン性溶媒中
で行われる。反応は０℃ないし＋８０℃、好ましくは＋
１０℃ないし＋４０℃の温度範囲で有利に起こる。有機
塩基を添加するのが好ましい。適する塩基の例はトリエ
チルアミン、トリエチレンジアミン、トリアゾール、そ
して好ましくはピリジン、イミダゾールまたは１，８−
ジアザビシクロ〔５．４．０〕−ウンデセ−７−エン
（ＤＢＵ）のような第三アミンである。５位のこれらの
シリル基の除去は、例えばアリールスルホン酸のアルコ
ール溶液を用いた選択的な温和な加水分解によるそれ自
体公知の方法によって、または熟練者に知られた他の方
法に従って行われる。
不活性溶媒、そして最も好ましくは非プロトン性溶媒中
で行われる。反応は０℃ないし＋８０℃、好ましくは＋
１０℃ないし＋４０℃の温度範囲で有利に起こる。有機
塩基を添加するのが好ましい。適する塩基の例はトリエ
チルアミン、トリエチレンジアミン、トリアゾール、そ
して好ましくはピリジン、イミダゾールまたは１，８−
ジアザビシクロ〔５．４．０〕−ウンデセ−７−エン
（ＤＢＵ）のような第三アミンである。５位のこれらの
シリル基の除去は、例えばアリールスルホン酸のアルコ
ール溶液を用いた選択的な温和な加水分解によるそれ自
体公知の方法によって、または熟練者に知られた他の方
法に従って行われる。
【００２３】式ＩＩＩで表される範囲内のオキシル〔Ｒ
4 ＝−Ｃ（＝Ｎ−ＯＨ）−〕は、Ｒ4 が−Ｃ（＝Ｏ）−
によって置換されている式ＩＩＩで表される誘導体をヒ
ドロキシルアミンまたはその塩、好ましくはその鉱酸
塩、最も好ましくは塩酸塩と反応させることにより製造
される。反応は適当な溶媒、例えばメタノール、エタノ
ールまたはプロパノールのような低級アルカノール、テ
トラヒドロフランまたはジオキサンのようなエーテル性
化合物、酢酸またはプロピオン酸のような脂肪族カルボ
ン酸、水またはこれらの溶媒同士または他の慣用の溶媒
との混合物中で有利に行われる。反応温度は広い範囲内
で変化させ得る。約＋１０℃ないし＋１００℃の範囲で
反応を行うのが有利である。ヒドロキシルアミンをその
塩の形態で、例えば塩酸塩の形態で使用する場合には、
酸（例えばＨＣｌ）を中和するために、通常そのような
目的に使用される塩基を添加し、親水性剤、例えばモレ
キュラーシーブの存在下で反応を行うのが有利である。
適する塩基は有機塩基でも無機塩基でもよく、例えばト
リアルキルアミン（トリメチルアミン，トリエチルアミ
ン，トリプロピルアミン等）、ピリジン、ピリジン塩基
（４−ジメチルアミノピリジン，４−ピロリジルアミノ
ピリジン等）のような第三アミン、アルカリ金属および
アルカリ土類金属の酸化物、水素化物および水酸化物、
炭酸塩および重炭酸塩（ＣａＯ，ＢａＯ，ＮａＯＨ，Ｋ
ＯＨ，ＮａＨ，Ｃａ（ＯＨ）2 ，ＫＨＣＯ3 ，ＮａＨＣ
Ｏ3 ，Ｃａ（ＨＣＯ3 ）2 ，Ｋ2 ＣＯ3 ，Ｎａ2 Ｃ
Ｏ3 ）、ならびにＣＨ3 ＣＯＯＮａまたはＣＨ3 ＣＯＯ
Ｋのようなアルカリ金属アセテートである。Ｃ2 Ｈ5 Ｏ
Ｎａおよびｎ−Ｃ3 Ｈ7 ＯＮａのようなアルカリ金属の
アルコラートもまた適する塩基である。トリエチルアミ
ンが好ましい。
4 ＝−Ｃ（＝Ｎ−ＯＨ）−〕は、Ｒ4 が−Ｃ（＝Ｏ）−
によって置換されている式ＩＩＩで表される誘導体をヒ
ドロキシルアミンまたはその塩、好ましくはその鉱酸
塩、最も好ましくは塩酸塩と反応させることにより製造
される。反応は適当な溶媒、例えばメタノール、エタノ
ールまたはプロパノールのような低級アルカノール、テ
トラヒドロフランまたはジオキサンのようなエーテル性
化合物、酢酸またはプロピオン酸のような脂肪族カルボ
ン酸、水またはこれらの溶媒同士または他の慣用の溶媒
との混合物中で有利に行われる。反応温度は広い範囲内
で変化させ得る。約＋１０℃ないし＋１００℃の範囲で
反応を行うのが有利である。ヒドロキシルアミンをその
塩の形態で、例えば塩酸塩の形態で使用する場合には、
酸（例えばＨＣｌ）を中和するために、通常そのような
目的に使用される塩基を添加し、親水性剤、例えばモレ
キュラーシーブの存在下で反応を行うのが有利である。
適する塩基は有機塩基でも無機塩基でもよく、例えばト
リアルキルアミン（トリメチルアミン，トリエチルアミ
ン，トリプロピルアミン等）、ピリジン、ピリジン塩基
（４−ジメチルアミノピリジン，４−ピロリジルアミノ
ピリジン等）のような第三アミン、アルカリ金属および
アルカリ土類金属の酸化物、水素化物および水酸化物、
炭酸塩および重炭酸塩（ＣａＯ，ＢａＯ，ＮａＯＨ，Ｋ
ＯＨ，ＮａＨ，Ｃａ（ＯＨ）2 ，ＫＨＣＯ3 ，ＮａＨＣ
Ｏ3 ，Ｃａ（ＨＣＯ3 ）2 ，Ｋ2 ＣＯ3 ，Ｎａ2 Ｃ
Ｏ3 ）、ならびにＣＨ3 ＣＯＯＮａまたはＣＨ3 ＣＯＯ
Ｋのようなアルカリ金属アセテートである。Ｃ2 Ｈ5 Ｏ
Ｎａおよびｎ−Ｃ3 Ｈ7 ＯＮａのようなアルカリ金属の
アルコラートもまた適する塩基である。トリエチルアミ
ンが好ましい。
【００２４】Ｒ4 が−Ｃ（Ｏ）−を表す式ＩＩＩで表さ
れる誘導体は、相当する天然の抗生物質Ｓ５４１（Ｓ５
４１Ａ，Ｓ５４１Ｃ，Ｓ５４１Ｄ）から、および式Ｍで
表されるミルベマイシンから、例えば褐石(brown ston
e，ＭｎＯ2 ）、ＣｒＯ3 ／ピリジンによる温和な酸化
により、またはオッペナウアー酸化(Oppenauer oxidati
on) により製造することができる。Ｒ4 が−Ｃ（Ｏ）−
ＣＨ2 Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−
Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す式ＩＩＩで表
される化合物は、相当するミルベマイシンから、および
天然の抗生物質Ｓ５４１から、公知方法と同様な方法で
エステル化によって製造することができる。
れる誘導体は、相当する天然の抗生物質Ｓ５４１（Ｓ５
４１Ａ，Ｓ５４１Ｃ，Ｓ５４１Ｄ）から、および式Ｍで
表されるミルベマイシンから、例えば褐石(brown ston
e，ＭｎＯ2 ）、ＣｒＯ3 ／ピリジンによる温和な酸化
により、またはオッペナウアー酸化(Oppenauer oxidati
on) により製造することができる。Ｒ4 が−Ｃ（Ｏ）−
ＣＨ2 Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−
Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す式ＩＩＩで表
される化合物は、相当するミルベマイシンから、および
天然の抗生物質Ｓ５４１から、公知方法と同様な方法で
エステル化によって製造することができる。
【００２５】本発明の方法は詳細には以下のように行わ
れる。式Ｉで表される化合物もしくは式ＩＩで表される
化合物またはそれら２種の混合物を製造するため、式Ｉ
ＩＩで表される化合物の１３位への立体特異的ヒドロキ
シ基導入および／または１４，１５−エポキシ化、また
はそれらの両反応に適する生体触媒とを互いに直接接触
させ、そしてこの接触を、ヒドロキシル化および／また
はエポキシ化のために十分な時間維持する。最も都合よ
くは、本発明の方法は、式ＩＩＩで表される化合物が存
在する制御された条件下で、ヒドロキシル化／エポキシ
化を行うことのできる微生物を培養し、添加した式ＩＩ
Ｉで表される化合物の大部分、好ましくは８０ないし９
９．９％が式ＩまたはＩＩで表される化合物またはこれ
ら化合物の混合物に変換されるまで、上記微生物とその
基質の合同培養を維持することにより行われる。得られ
た式ＩまたはＩＩで表される化合物またはこれら化合物
の混合物の単離は、それ自体公知の方法、例えばシリカ
ゲルクロマトグラフィーにより行うことができる。
れる。式Ｉで表される化合物もしくは式ＩＩで表される
化合物またはそれら２種の混合物を製造するため、式Ｉ
ＩＩで表される化合物の１３位への立体特異的ヒドロキ
シ基導入および／または１４，１５−エポキシ化、また
はそれらの両反応に適する生体触媒とを互いに直接接触
させ、そしてこの接触を、ヒドロキシル化および／また
はエポキシ化のために十分な時間維持する。最も都合よ
くは、本発明の方法は、式ＩＩＩで表される化合物が存
在する制御された条件下で、ヒドロキシル化／エポキシ
化を行うことのできる微生物を培養し、添加した式ＩＩ
Ｉで表される化合物の大部分、好ましくは８０ないし９
９．９％が式ＩまたはＩＩで表される化合物またはこれ
ら化合物の混合物に変換されるまで、上記微生物とその
基質の合同培養を維持することにより行われる。得られ
た式ＩまたはＩＩで表される化合物またはこれら化合物
の混合物の単離は、それ自体公知の方法、例えばシリカ
ゲルクロマトグラフィーにより行うことができる。
【００２６】本発明では式ＩＩＩで表される化合物がヒ
ドロキシル化反応のための基質として使用される。これ
ら化合物は公知であるか（例えば式Ｍ参照）または公知
方法と同様の方法で公知化合物から製造することができ
る。それらは動物および植物の体内および体外における
有害生物を防除するのに適しており、さらにまた、式Ｉ
で表される化合物の製造における価値ある出発物質また
は中間体である。式ＩＩＩで表される化合物のヒドロキ
シル化のために微生物を用いずに、該微生物から作り出
されるヒドロキシル化に適する活性成分（上記ｂないし
ｄで定義したもの）を使用することによっても、式Ｉで
表される化合物を製造することができる。また、この方
法により式ＩＩで表されるエポキシ化合物および上記２
化合物の混合物を製造することもできる。
ドロキシル化反応のための基質として使用される。これ
ら化合物は公知であるか（例えば式Ｍ参照）または公知
方法と同様の方法で公知化合物から製造することができ
る。それらは動物および植物の体内および体外における
有害生物を防除するのに適しており、さらにまた、式Ｉ
で表される化合物の製造における価値ある出発物質また
は中間体である。式ＩＩＩで表される化合物のヒドロキ
シル化のために微生物を用いずに、該微生物から作り出
されるヒドロキシル化に適する活性成分（上記ｂないし
ｄで定義したもの）を使用することによっても、式Ｉで
表される化合物を製造することができる。また、この方
法により式ＩＩで表されるエポキシ化合物および上記２
化合物の混合物を製造することもできる。
【００２７】発育細胞体の代わりに微生物の胞子を用い
る場合、該胞子は式ＩＩＩで表される化合物の立体特異
的１３β−ヒドロキシル化もしくは１４，１５−エポキ
シ化またはその両反応に適する微生物から収集され、次
いで相当する反応が起こるのに十分な時間、式ＩＩＩで
表される化合物とともに培養される。胞子と基質の培養
は、胞子が発芽することを防ぐために培地の不在下で行
うのが好ましい。
る場合、該胞子は式ＩＩＩで表される化合物の立体特異
的１３β−ヒドロキシル化もしくは１４，１５−エポキ
シ化またはその両反応に適する微生物から収集され、次
いで相当する反応が起こるのに十分な時間、式ＩＩＩで
表される化合物とともに培養される。胞子と基質の培養
は、胞子が発芽することを防ぐために培地の不在下で行
うのが好ましい。
【００２８】本発明の別の態様では、式ＩＩＩで表され
る化合物の立体特異的１３β−ヒドロキシル化もしくは
１４，１５−エポキシ化またはその両反応に適する成長
微生物細胞、該微生物の無細胞抽出物、胞子、酵素およ
び酵素混合物を固定化した形態で使用する。上記生体触
媒の固定化はそれ自体公知の方法に従って行われる。本
発明の範囲内において、上記生体触媒の固体で通常水不
溶性担体物質への吸着結合またはイオン性もしくは共有
結合、２価または多価官能性試薬による生体触媒の架
橋、マトリックスの封入、膜分離、または上記プロセス
の２もしくはそれ以上の組合せに基づくプロセスが特に
言及し得る。水不溶性担体（吸着剤）への吸着結合は特
にファンデルワールス力による。多数の無機および有機
化合物や合成ポリマーが吸着剤として適している。
る化合物の立体特異的１３β−ヒドロキシル化もしくは
１４，１５−エポキシ化またはその両反応に適する成長
微生物細胞、該微生物の無細胞抽出物、胞子、酵素およ
び酵素混合物を固定化した形態で使用する。上記生体触
媒の固定化はそれ自体公知の方法に従って行われる。本
発明の範囲内において、上記生体触媒の固体で通常水不
溶性担体物質への吸着結合またはイオン性もしくは共有
結合、２価または多価官能性試薬による生体触媒の架
橋、マトリックスの封入、膜分離、または上記プロセス
の２もしくはそれ以上の組合せに基づくプロセスが特に
言及し得る。水不溶性担体（吸着剤）への吸着結合は特
にファンデルワールス力による。多数の無機および有機
化合物や合成ポリマーが吸着剤として適している。
【００２９】そのような微生物の固定化のための方法
は、van Haecht等, 1985（酵母細胞／ガラス）、Black
等, 1984（酵母細胞／精製鋼，ポリエステル）、Wiegel
およびDykstra, 1984 〔クロストリディウム(Clostridi
a)／セルロース，ヘミセルロース〕、Forberg およびHa
ggstrom, 1984 （クロストリディウム／木屑）およびEh
rhardtおよびRehm, 1985（シュードモナス(Pseudomonad
os) ／活性炭）により記載されている。吸着結合による
固定化酵素の使用のための相当する詳述は、Krakowiak
等, 1984（グルコアミラーゼ／酸化アルミニウム）、Ca
bral等, 1984（グルコアミラーゼ／チタン活性化ガラ
ス）、MiyawakiおよびWingard, 1984 （グルコースオキ
シダーゼ／活性炭）、KatoおよびHorikoshi, 1984 （グ
ルコーストランスフェラーゼ／合成樹脂）中に特に見出
される。
は、van Haecht等, 1985（酵母細胞／ガラス）、Black
等, 1984（酵母細胞／精製鋼，ポリエステル）、Wiegel
およびDykstra, 1984 〔クロストリディウム(Clostridi
a)／セルロース，ヘミセルロース〕、Forberg およびHa
ggstrom, 1984 （クロストリディウム／木屑）およびEh
rhardtおよびRehm, 1985（シュードモナス(Pseudomonad
os) ／活性炭）により記載されている。吸着結合による
固定化酵素の使用のための相当する詳述は、Krakowiak
等, 1984（グルコアミラーゼ／酸化アルミニウム）、Ca
bral等, 1984（グルコアミラーゼ／チタン活性化ガラ
ス）、MiyawakiおよびWingard, 1984 （グルコースオキ
シダーゼ／活性炭）、KatoおよびHorikoshi, 1984 （グ
ルコーストランスフェラーゼ／合成樹脂）中に特に見出
される。
【００３０】イオン性結合は、担体物質（例えば多糖や
合成樹脂等をベースとする市販のイオン交換樹脂のよう
なもの）と結合される生体触媒の正反対の荷電基間の静
電的誘引に基づいている。イオン性結合に基づく微生物
の固定化方法は、DiLuccioおよびKirwan, 1984〔アゾト
バクター種(Azotobacter spec.) ／セレックスＥ(Celle
x E)（セルロース）〕および、Giard 等, 1977（動物細
胞／ＤＥＡＥ−セファデックス）により開示されてい
る。
合成樹脂等をベースとする市販のイオン交換樹脂のよう
なもの）と結合される生体触媒の正反対の荷電基間の静
電的誘引に基づいている。イオン性結合に基づく微生物
の固定化方法は、DiLuccioおよびKirwan, 1984〔アゾト
バクター種(Azotobacter spec.) ／セレックスＥ(Celle
x E)（セルロース）〕および、Giard 等, 1977（動物細
胞／ＤＥＡＥ−セファデックス）により開示されてい
る。
【００３１】相当する酵素の固定化はAlgelino等, 1985
（アルデヒドオキシダーゼ／オクチルアミノ−セファデ
ックス）、Kunh等, 1980（グルコースオキシダーゼ／Ｄ
ＥＡＥ−セファデックス，ＤＥＡＥ−セルロース）およ
びその他に詳述されているように行うことができる。固
定化の他の方法は、共有結合力の利用に基づいており、
該方法は一般的に生体触媒どうしを、または生体触媒と
担体材料を固定結合させることからなり、担体材料とし
ては多孔性材料、例えばガラス、シリカまたは他の不溶
性無機材料を用いることができる。
（アルデヒドオキシダーゼ／オクチルアミノ−セファデ
ックス）、Kunh等, 1980（グルコースオキシダーゼ／Ｄ
ＥＡＥ−セファデックス，ＤＥＡＥ−セルロース）およ
びその他に詳述されているように行うことができる。固
定化の他の方法は、共有結合力の利用に基づいており、
該方法は一般的に生体触媒どうしを、または生体触媒と
担体材料を固定結合させることからなり、担体材料とし
ては多孔性材料、例えばガラス、シリカまたは他の不溶
性無機材料を用いることができる。
【００３２】本発明方法の範囲内で、微生物は例えばMe
ssing およびOppermann, 1979 （エンテロバクテリア／
ボロシリケートガラス；酵母細胞／ジルコニウムオキシ
ド）、Romanovskaya等, 1981（メタンバクテリア／シロ
クロム）、NavaroおよびDurand, 1977（酵母細胞／多孔
性シリカ）等の方法に準じて固定され得る。酵素の固定
化は、Weetall およびMason, 1973 （パパイン／多孔性
ガラス）およびMonsan等, 1984（インベルターゼ／多孔
性シリカ）により開示された方法に従って行うことがで
きる。
ssing およびOppermann, 1979 （エンテロバクテリア／
ボロシリケートガラス；酵母細胞／ジルコニウムオキシ
ド）、Romanovskaya等, 1981（メタンバクテリア／シロ
クロム）、NavaroおよびDurand, 1977（酵母細胞／多孔
性シリカ）等の方法に準じて固定され得る。酵素の固定
化は、Weetall およびMason, 1973 （パパイン／多孔性
ガラス）およびMonsan等, 1984（インベルターゼ／多孔
性シリカ）により開示された方法に従って行うことがで
きる。
【００３３】本発明の方法において、担体材料として
は、固定化に適するものとして記述したもののみなら
ず、全シリーズの天然または合成ポリマー、例えばセル
ロース、デキストラン、デンプン、アガロース等、また
は例えば通常は反応性共重合体の製造に使用されている
アクリル酸またはメタクリル酸の誘導体をベースとする
ポリマーが挙げられる。生体触媒との結合が形成される
ことで適当である反応性基は、反応性ジニトロフルオロ
フェニル基またはイソチオシアネート基、特にオキシラ
ン基および酸無水物基である。さらに、可能性としては
塩素活性化されたカルボキシル基含有樹脂もあり、それ
らは例えばアンバーライト（登録商標Amberlite ）ＸＥ
−６４およびアンバーライトＩＲＣ−５０という名称で
市販されている。
は、固定化に適するものとして記述したもののみなら
ず、全シリーズの天然または合成ポリマー、例えばセル
ロース、デキストラン、デンプン、アガロース等、また
は例えば通常は反応性共重合体の製造に使用されている
アクリル酸またはメタクリル酸の誘導体をベースとする
ポリマーが挙げられる。生体触媒との結合が形成される
ことで適当である反応性基は、反応性ジニトロフルオロ
フェニル基またはイソチオシアネート基、特にオキシラ
ン基および酸無水物基である。さらに、可能性としては
塩素活性化されたカルボキシル基含有樹脂もあり、それ
らは例えばアンバーライト（登録商標Amberlite ）ＸＥ
−６４およびアンバーライトＩＲＣ−５０という名称で
市販されている。
【００３４】天然または合成担体材料を用いる微生物の
固定化は、Chipley, 1974 （バチラス・サブチリス／ア
ガロース）、Gainer等, 1980（アゾトバクター種／セル
ロース）、JackおよびZajic, 1977 〔マイクロコッカス
・ルテウス(Micrococcus luteus)／カルボキシメチルセ
ルロース〕、Jirku 等, 1980（酵母細胞／ヒドロキシア
ルキルメタクリレート）およびShimizu 等, 1975（バク
テリア細胞／エチレン−無水マレイン酸共重合体）等に
より記述されたようにして行うことができる。酵素の固
定化は、特にCannon等, 1984（ラクテートオキシダーゼ
／セルロース）、Clark およびBailey, 1984（キモトリ
プシン／セファロース）、Ibrahim 等,1985（エポキシ
ヒドロラーゼ／デキストラン）、Beddows 等, 1981（α
−ガラクトシダーゼ／ナイロン−アクリレート共重合
体）、Raghunath 等, 1984（ウレアーゼ／メタクリレー
ト−アクリレート）等の方法に準じて行うことができ
る。
固定化は、Chipley, 1974 （バチラス・サブチリス／ア
ガロース）、Gainer等, 1980（アゾトバクター種／セル
ロース）、JackおよびZajic, 1977 〔マイクロコッカス
・ルテウス(Micrococcus luteus)／カルボキシメチルセ
ルロース〕、Jirku 等, 1980（酵母細胞／ヒドロキシア
ルキルメタクリレート）およびShimizu 等, 1975（バク
テリア細胞／エチレン−無水マレイン酸共重合体）等に
より記述されたようにして行うことができる。酵素の固
定化は、特にCannon等, 1984（ラクテートオキシダーゼ
／セルロース）、Clark およびBailey, 1984（キモトリ
プシン／セファロース）、Ibrahim 等,1985（エポキシ
ヒドロラーゼ／デキストラン）、Beddows 等, 1981（α
−ガラクトシダーゼ／ナイロン−アクリレート共重合
体）、Raghunath 等, 1984（ウレアーゼ／メタクリレー
ト−アクリレート）等の方法に準じて行うことができ
る。
【００３５】架橋工程において、生体触媒は特に二−ま
たは多−官能性試薬、例えばグルタルジアルデヒド、ジ
イソシアネートにより互いに結合し、特徴として不溶性
の通常ゼラチン状の高分子量の集合体を形成する。その
ような微生物の固定化はDe Rosa 等, 1981（バクテリア
細胞／グルタルジアルデヒドにより卵アルブミンとヘテ
ロ架橋）と同様にして行うことができる。本発明の範囲
内において使用することのできる酵素固定化方法は、Ba
rbaric等, 1984（インベルターゼ／アジピン酸ジヒドラ
ジドで架橋）、TalskyおよびGianitsopoulos, 1984（キ
モトリプシン／架橋剤なしで酵素分子間のペプチド結
合）、Workman およびDay, 1984 （イヌリナーゼ／グル
タルジアルデヒドによる酵素含有細胞の架橋）、Khanお
よびSiddiki, 1985 （ペプシン／グルタルジアルデヒド
と架橋）、Bachmann等, 1981（グルコースイソメラーゼ
／グルタルジアルデヒドによりゼラチンとヘテロ架
橋）、Kaul等, 1984（α−ガラクトシダーゼ／グルタル
ジアルデヒドにより卵アルブミンとヘテロ架橋）により
記述されている。
たは多−官能性試薬、例えばグルタルジアルデヒド、ジ
イソシアネートにより互いに結合し、特徴として不溶性
の通常ゼラチン状の高分子量の集合体を形成する。その
ような微生物の固定化はDe Rosa 等, 1981（バクテリア
細胞／グルタルジアルデヒドにより卵アルブミンとヘテ
ロ架橋）と同様にして行うことができる。本発明の範囲
内において使用することのできる酵素固定化方法は、Ba
rbaric等, 1984（インベルターゼ／アジピン酸ジヒドラ
ジドで架橋）、TalskyおよびGianitsopoulos, 1984（キ
モトリプシン／架橋剤なしで酵素分子間のペプチド結
合）、Workman およびDay, 1984 （イヌリナーゼ／グル
タルジアルデヒドによる酵素含有細胞の架橋）、Khanお
よびSiddiki, 1985 （ペプシン／グルタルジアルデヒド
と架橋）、Bachmann等, 1981（グルコースイソメラーゼ
／グルタルジアルデヒドによりゼラチンとヘテロ架
橋）、Kaul等, 1984（α−ガラクトシダーゼ／グルタル
ジアルデヒドにより卵アルブミンとヘテロ架橋）により
記述されている。
【００３６】マトリックス封入は天然または合成ポリマ
ー中に生体触媒を包含させることからなり、それは通常
ゼラチン状構造である。細胞、オルガネラおよび胞子を
包含させるのに特に適しているマトリックス材料は天然
ポリマー、例えはアルギネート、カラゲーナン、ペクチ
ン、寒天、アガロースまたはゼラチンであり、これらの
化合物は毒性がなく、取扱い中の細胞を保護するからで
ある。また、合成ポリマー、例えばポリアクリルアミ
ド、特に光架橋樹脂のようなものも適当である。マトリ
ックス封入の形状は広い範囲で変更することができ、例
えば球状、円筒状、繊維状およびシート状のものを含ん
でよい。
ー中に生体触媒を包含させることからなり、それは通常
ゼラチン状構造である。細胞、オルガネラおよび胞子を
包含させるのに特に適しているマトリックス材料は天然
ポリマー、例えはアルギネート、カラゲーナン、ペクチ
ン、寒天、アガロースまたはゼラチンであり、これらの
化合物は毒性がなく、取扱い中の細胞を保護するからで
ある。また、合成ポリマー、例えばポリアクリルアミ
ド、特に光架橋樹脂のようなものも適当である。マトリ
ックス封入の形状は広い範囲で変更することができ、例
えば球状、円筒状、繊維状およびシート状のものを含ん
でよい。
【００３７】天然または合成マトリックス材料による微
生物の固定化は、Mazumder等, 1985（バクテリア細胞／
光架橋樹脂）、BettmannおよびRehm, 1984（バクテリア
細胞／ポリアクリルアミドヒドラジド）、Umemura 等,
1984（バクテリア細胞／カラゲーナン）、Karube等, 19
85（バクテリア原形質／寒天−アセチルセルロース）、
Cantarella等, 1984（酵母細胞／ヒドロキシエチルメタ
クリレート）、Qureshi およびTamhane, 1985 （酵母細
胞／アルギネート）、Deo およびGaucher, 1984 （叢生
菌／カラゲーナン）、EikmeierおよびRehm, 1984（叢生
菌／アルギネート）、Bihari等, 1984〔ハイホマイセテ
ス・コニディア(Hyphomycetes conidia)／ポリアクリル
アミド〕、Vogel およびBrodelius, 1984 （植物細胞／
アルギネート，アガロース）、Nakajima等, 1985（植物
細胞／寒天，アルギネート，カラゲーナン）に記述され
ているように行うことができる。酵素の固定化はMori
等, 1972（アミノアシラーゼ／ポリアクリルアミド）と
同様にして行うことができる。
生物の固定化は、Mazumder等, 1985（バクテリア細胞／
光架橋樹脂）、BettmannおよびRehm, 1984（バクテリア
細胞／ポリアクリルアミドヒドラジド）、Umemura 等,
1984（バクテリア細胞／カラゲーナン）、Karube等, 19
85（バクテリア原形質／寒天−アセチルセルロース）、
Cantarella等, 1984（酵母細胞／ヒドロキシエチルメタ
クリレート）、Qureshi およびTamhane, 1985 （酵母細
胞／アルギネート）、Deo およびGaucher, 1984 （叢生
菌／カラゲーナン）、EikmeierおよびRehm, 1984（叢生
菌／アルギネート）、Bihari等, 1984〔ハイホマイセテ
ス・コニディア(Hyphomycetes conidia)／ポリアクリル
アミド〕、Vogel およびBrodelius, 1984 （植物細胞／
アルギネート，アガロース）、Nakajima等, 1985（植物
細胞／寒天，アルギネート，カラゲーナン）に記述され
ているように行うことができる。酵素の固定化はMori
等, 1972（アミノアシラーゼ／ポリアクリルアミド）と
同様にして行うことができる。
【００３８】膜分離は反応が進行する特に限定された領
域を作り出すことを含んでいる。膜分離の基本変形は次
のように区別される： ａ）マイクロカプセル化、 ｂ）リポソーム法、 ｃ）膜反応器中での生体触媒の使用。 上記固定化方法は、例えば吸着と架橋というように互い
に組み合わせることができる。その場合、酵素は最初に
全て担体に吸着され、次いで二官能性試薬によって互い
に架橋される。
域を作り出すことを含んでいる。膜分離の基本変形は次
のように区別される： ａ）マイクロカプセル化、 ｂ）リポソーム法、 ｃ）膜反応器中での生体触媒の使用。 上記固定化方法は、例えば吸着と架橋というように互い
に組み合わせることができる。その場合、酵素は最初に
全て担体に吸着され、次いで二官能性試薬によって互い
に架橋される。
【００３９】１３β位にヒドロキシ基を導入するため、
および／または１４，１５−エポキシ化のための式ＩＩ
Ｉで表される化合物と一緒に本発明の範囲内で使用され
る生体触媒の培養は応用微生物学上慣用の方法によって
行うことができる。震盪培養の他、微生物学的研究およ
び工業的生産によって長期にわたって確立されてきた種
々の発酵システムを挙げることができる。
および／または１４，１５−エポキシ化のための式ＩＩ
Ｉで表される化合物と一緒に本発明の範囲内で使用され
る生体触媒の培養は応用微生物学上慣用の方法によって
行うことができる。震盪培養の他、微生物学的研究およ
び工業的生産によって長期にわたって確立されてきた種
々の発酵システムを挙げることができる。
【００４０】生体反応器の主要課題は、明白なミハエリ
ス定数(Michaelis constant)を減少させるため、および
反応速度を高めるために最適の流体力学状態を作りだす
ことである。これは本質的には生体触媒と周囲媒体との
間の適正な相対移動を維持することで達成され、それは
実際上もはや妨害物がない程度まで外部物質移動を増加
させる。関連プロセスのための適当な反応器のタイプと
しては、例えば攪拌槽反応器(stirred vessel reacto
r)、ループ型反応器(loop-type reactor) 、ベッド反応
器(bed reactor) 、流動床反応器(fluidised bed react
or) 、膜反応器(membranereactor)および多くの特定形
状の反応器、例えば篩攪拌反応器(sieve-stirred react
or) 、ロムボイド反応器(rhomboid reactor)、チューブ
反応器(tube reactor)が特に挙げられる(W. Hartmeier,
Immobilisierte Biokatalysatoren, 1986;W. Crueger
およびA. Crueger, Biotechnologie-Lehrbuch der ange
wandten Mikrobiologie, 1984; P. Prave 等，Handbuch
der Biotechnologie, 1984)。
ス定数(Michaelis constant)を減少させるため、および
反応速度を高めるために最適の流体力学状態を作りだす
ことである。これは本質的には生体触媒と周囲媒体との
間の適正な相対移動を維持することで達成され、それは
実際上もはや妨害物がない程度まで外部物質移動を増加
させる。関連プロセスのための適当な反応器のタイプと
しては、例えば攪拌槽反応器(stirred vessel reacto
r)、ループ型反応器(loop-type reactor) 、ベッド反応
器(bed reactor) 、流動床反応器(fluidised bed react
or) 、膜反応器(membranereactor)および多くの特定形
状の反応器、例えば篩攪拌反応器(sieve-stirred react
or) 、ロムボイド反応器(rhomboid reactor)、チューブ
反応器(tube reactor)が特に挙げられる(W. Hartmeier,
Immobilisierte Biokatalysatoren, 1986;W. Crueger
およびA. Crueger, Biotechnologie-Lehrbuch der ange
wandten Mikrobiologie, 1984; P. Prave 等，Handbuch
der Biotechnologie, 1984)。
【００４１】本発明の範囲内においては攪拌槽反応器を
使用するのが好ましい。種々の反応器の中でも、攪拌槽
反応器は発酵生物工学の分野で最も多く使用されてい
る。このタイプの反応器は基質と生体触媒の迅速かつ十
分な混合を確実にし、結果として高攪拌能力および高酸
素転移能力が得られる。攪拌槽反応器の長所は、その簡
単で経済的な構造に、およびそのよく研究された特質に
存在する。原則的に、攪拌槽反応器が使用される時に
は、２種類の操作が可能であり、その第１は一括処理タ
イプの操作プロセス、いわゆるバッチプロセスで、そし
て第２は連続プロセスである。バッチプロセスにおいて
は、ひとたびそのプロセスが完了すれば、生体触媒は分
離または濾過により除去され、廃棄するか（栄養細
胞）、または第二バッチで再び使用される（固定化生体
触媒）。連続プロセスが用いられる場合、最終反応生成
物用の新たな基質が永続的に交換される。生体触媒は適
当な手段（篩，フィルター，返送装置）によって反応器
から去ることを防がなければならない。
使用するのが好ましい。種々の反応器の中でも、攪拌槽
反応器は発酵生物工学の分野で最も多く使用されてい
る。このタイプの反応器は基質と生体触媒の迅速かつ十
分な混合を確実にし、結果として高攪拌能力および高酸
素転移能力が得られる。攪拌槽反応器の長所は、その簡
単で経済的な構造に、およびそのよく研究された特質に
存在する。原則的に、攪拌槽反応器が使用される時に
は、２種類の操作が可能であり、その第１は一括処理タ
イプの操作プロセス、いわゆるバッチプロセスで、そし
て第２は連続プロセスである。バッチプロセスにおいて
は、ひとたびそのプロセスが完了すれば、生体触媒は分
離または濾過により除去され、廃棄するか（栄養細
胞）、または第二バッチで再び使用される（固定化生体
触媒）。連続プロセスが用いられる場合、最終反応生成
物用の新たな基質が永続的に交換される。生体触媒は適
当な手段（篩，フィルター，返送装置）によって反応器
から去ることを防がなければならない。
【００４２】本発明の範囲内における成長微生物細胞の
培養は、公知の一般的慣用方法に従って行われ、実用性
から液体培地が好ましく用いられる。培地組成物は、使
用する微生物によって変わる。一般的にわずかに限定さ
れた、容易に同化し得る炭素（Ｃ）源と窒素（Ｎ）源を
有する複合培地が好ましく、例えば抗生物質の生産にも
慣用的に使用されているようなものである。さらに、ビ
タミンおよび必須金属イオンが必要であるが、概して使
用する複合培地中に成分または不純物として適当な濃度
で含まれていることが必要である。所望により、上記成
分、例えば必須ビタミン、そしてまたＮａ+ ，Ｋ+ ，Ｃ
ａ2+，Ｍｇ2+，ＮＨ4 + ，ＰＯ4 3-，ＳＯ4 2-，Ｃ
ｌ- ，ＣＯ3 2-イオンおよび微量元素のコバルトとマン
ガンおよび亜鉛がそれらの塩の形態が添加されてもよ
い。特に、酵母エキス、酵母水解物、酵母自己分解物お
よび酵母細胞以外の適当な窒素源は、ダイズミール(soy
a meal) 、トウモロコシミール(maize meal)、オートミ
ール、エダミン（酵素により消化されたラクトアルブミ
ン）、ペプトン、カゼイン水解物、コーンスチープリカ
ー、肉エキスが特に挙げられる。適当な炭素源は、特に
グルコース、ラクトース、スクロース、デキストロー
ス、マルトース、デンプン、セレロース、セルロースお
よび麦芽エキスである。好ましい濃度範囲は１．０ない
し２５ｇ／ｌである。炭素源としてのＤ−グルコースま
たは溶解性デンプン、そしてまたセレロースの使用は、
後記ヒドロキシル化／エポキシ化プロセスにとって、特
に使用する微生物がストレプトマイセス属の代表種であ
る場合に有利である。このように、例えば次の培地がス
トレプトマイセス属の代表種にとって非常に適してい
る。
培養は、公知の一般的慣用方法に従って行われ、実用性
から液体培地が好ましく用いられる。培地組成物は、使
用する微生物によって変わる。一般的にわずかに限定さ
れた、容易に同化し得る炭素（Ｃ）源と窒素（Ｎ）源を
有する複合培地が好ましく、例えば抗生物質の生産にも
慣用的に使用されているようなものである。さらに、ビ
タミンおよび必須金属イオンが必要であるが、概して使
用する複合培地中に成分または不純物として適当な濃度
で含まれていることが必要である。所望により、上記成
分、例えば必須ビタミン、そしてまたＮａ+ ，Ｋ+ ，Ｃ
ａ2+，Ｍｇ2+，ＮＨ4 + ，ＰＯ4 3-，ＳＯ4 2-，Ｃ
ｌ- ，ＣＯ3 2-イオンおよび微量元素のコバルトとマン
ガンおよび亜鉛がそれらの塩の形態が添加されてもよ
い。特に、酵母エキス、酵母水解物、酵母自己分解物お
よび酵母細胞以外の適当な窒素源は、ダイズミール(soy
a meal) 、トウモロコシミール(maize meal)、オートミ
ール、エダミン（酵素により消化されたラクトアルブミ
ン）、ペプトン、カゼイン水解物、コーンスチープリカ
ー、肉エキスが特に挙げられる。適当な炭素源は、特に
グルコース、ラクトース、スクロース、デキストロー
ス、マルトース、デンプン、セレロース、セルロースお
よび麦芽エキスである。好ましい濃度範囲は１．０ない
し２５ｇ／ｌである。炭素源としてのＤ−グルコースま
たは溶解性デンプン、そしてまたセレロースの使用は、
後記ヒドロキシル化／エポキシ化プロセスにとって、特
に使用する微生物がストレプトマイセス属の代表種であ
る場合に有利である。このように、例えば次の培地がス
トレプトマイセス属の代表種にとって非常に適してい
る。
【００４３】培地１ 溶解性デンプン ０．１ｇ ペプトン ０．２ｇ 酵母エキス ０．２ｇ 蒸留水を加えて１リットル，ＮａＯＨでｐＨ７に調整，
オートクレーブ。 培地２ Ｄ−グルコース ５．０ｇ ペプトン １．０ｇ 酵母エキス ０．１ｇ 蒸留水を加えて１リットル，ＮａＯＨでｐＨ７に調整，
オートクレーブ。 培地３ セレロース ２２．０ｇ オキソ・ラブ・レムコ(Oxo Lab Lemco) *1 ４．０ｇ ペプトンＣ ５．０ｇ 酵母エキス ０．５ｇ カシトーン(casitone)*2 ３．０ｇ 塩化ナトリウム １．５ｇ 蒸留水を加えて１リットル，ＮａＯＨでｐＨ７に調整，
オートクレーブ。*1 Oxoid-Handbuch, 第２版，1972。*2 Difco Manual, 第９版，Difco Laboratories, 196
9。
オートクレーブ。 培地２ Ｄ−グルコース ５．０ｇ ペプトン １．０ｇ 酵母エキス ０．１ｇ 蒸留水を加えて１リットル，ＮａＯＨでｐＨ７に調整，
オートクレーブ。 培地３ セレロース ２２．０ｇ オキソ・ラブ・レムコ(Oxo Lab Lemco) *1 ４．０ｇ ペプトンＣ ５．０ｇ 酵母エキス ０．５ｇ カシトーン(casitone)*2 ３．０ｇ 塩化ナトリウム １．５ｇ 蒸留水を加えて１リットル，ＮａＯＨでｐＨ７に調整，
オートクレーブ。*1 Oxoid-Handbuch, 第２版，1972。*2 Difco Manual, 第９版，Difco Laboratories, 196
9。
【００４４】上記培地はまたアスペルギルス属の代表種
の培養に、およびヒドロキシル化および／またはエポキ
シ化反応に非常に適している。培地組成物についての上
記の一般的記述、そしてまたここで詳しく掲げた培地
は、両方とも単に本発明を説明するためのもので、限定
を意図するものではない。培地の組成は別として、培地
製造に使用される操作、例えば特に溶解または懸濁順
序、栄養液全体の滅菌または個々の成分の滅菌、汚染防
止等も重要な役目を果たし、従って関連する生産プロセ
スのために最適に活用されるべきである。滅菌は、培地
のｐＨ値の変化および沈澱の原因にもなり得ることに留
意すべきである。その他の培養法もまた、微生物培養に
慣用のプロセスと同様である。
の培養に、およびヒドロキシル化および／またはエポキ
シ化反応に非常に適している。培地組成物についての上
記の一般的記述、そしてまたここで詳しく掲げた培地
は、両方とも単に本発明を説明するためのもので、限定
を意図するものではない。培地の組成は別として、培地
製造に使用される操作、例えば特に溶解または懸濁順
序、栄養液全体の滅菌または個々の成分の滅菌、汚染防
止等も重要な役目を果たし、従って関連する生産プロセ
スのために最適に活用されるべきである。滅菌は、培地
のｐＨ値の変化および沈澱の原因にもなり得ることに留
意すべきである。その他の培養法もまた、微生物培養に
慣用のプロセスと同様である。
【００４５】小規模では、本発明の範囲内で行われてい
る発酵は通常震盪培養の形態をとり、その場合は０．５
ないし５リットル容量のガラス製フラスコを使用するの
が有利であり、それには０．１ないし２リットルの栄養
培地を含む。オートクレーブを圧熱し、ｐＨ値をｐＨ４
ないしｐＨ８、特にｐＨ７．０ないしｐＨ７．４（バク
テリア）、またはｐＨ６ないしｐＨ７．５（菌類）に調
整した後、相当する培養微生物を無菌条件下でフラスコ
に接種する。使用される接種物は、一般的に以下の記述
に示されているように保存した接種物から生産された予
備培養菌である。
る発酵は通常震盪培養の形態をとり、その場合は０．５
ないし５リットル容量のガラス製フラスコを使用するの
が有利であり、それには０．１ないし２リットルの栄養
培地を含む。オートクレーブを圧熱し、ｐＨ値をｐＨ４
ないしｐＨ８、特にｐＨ７．０ないしｐＨ７．４（バク
テリア）、またはｐＨ６ないしｐＨ７．５（菌類）に調
整した後、相当する培養微生物を無菌条件下でフラスコ
に接種する。使用される接種物は、一般的に以下の記述
に示されているように保存した接種物から生産された予
備培養菌である。
【００４６】培養菌は、好気性条件下、２５ないし３７
℃の温度、特に２８℃の温度で、ロータリー震盪機上、
２５０ｒｐｍ（回転数／分）で震盪し続けることで有利
に成長する。２４時間後、基質（式ＩＩＩで表される化
合物）を加えるが、微生物とヒドロキシル化／エポキシ
化される物質を互いに接触させるためには、どのような
方法であってもよい。操作における実際的な理由のため
に基質、すなわち式ＩＩＩで表される化合物を培養液中
の微生物に加えるのが有利ということが証明されてい
る。ヒドロキシル化／エポキシ化される物質は、例えば
粉末形、または溶媒例えばジメチルホルムアミド、アセ
トンもしくはジメチルスルホキシドまたはメタノール、
エタノール、第三ブタノールのようなアルコール性溶媒
等に溶解させた溶液形（０．５ないし１５容量％，好ま
しくは２容量％）で使用することができる。反応の過程
は、微生物学的研究において一般的に使用されているク
ロマトグラフィー法により連続的にモニターされる。上
記条件下、ストレプトマイセスでは、最適のヒドロキシ
ル化またはエポキシ化活性は一般的に２ないし６日培養
後に得られる。微生物のための最適成長条件は、最適ヒ
ドロキシル化およびエポキシ化条件でもあることが示さ
れている。
℃の温度、特に２８℃の温度で、ロータリー震盪機上、
２５０ｒｐｍ（回転数／分）で震盪し続けることで有利
に成長する。２４時間後、基質（式ＩＩＩで表される化
合物）を加えるが、微生物とヒドロキシル化／エポキシ
化される物質を互いに接触させるためには、どのような
方法であってもよい。操作における実際的な理由のため
に基質、すなわち式ＩＩＩで表される化合物を培養液中
の微生物に加えるのが有利ということが証明されてい
る。ヒドロキシル化／エポキシ化される物質は、例えば
粉末形、または溶媒例えばジメチルホルムアミド、アセ
トンもしくはジメチルスルホキシドまたはメタノール、
エタノール、第三ブタノールのようなアルコール性溶媒
等に溶解させた溶液形（０．５ないし１５容量％，好ま
しくは２容量％）で使用することができる。反応の過程
は、微生物学的研究において一般的に使用されているク
ロマトグラフィー法により連続的にモニターされる。上
記条件下、ストレプトマイセスでは、最適のヒドロキシ
ル化またはエポキシ化活性は一般的に２ないし６日培養
後に得られる。微生物のための最適成長条件は、最適ヒ
ドロキシル化およびエポキシ化条件でもあることが示さ
れている。
【００４７】本発明はまた、式ＩＩＩで表される化合物
の１３β位への立体特異的ヒドロキシル基導入もしくは
１４，１５−エポキシ化、またはその両反応を行うこと
のできる微生物の培養に関し、そして生体反応器、特に
攪拌槽反応器タイプの生体反応器中での前記化合物との
それらの培養に関する。現実の製造発酵槽中での生成物
形成の最適比率を確かめるために、まず第一に予備培養
で微生物を繁殖させることが推奨される。発酵槽予備培
養の数は、各々の特定の場合において最適となる接種物
濃度に依存する。好都合には、使用する微生物に依り、
発酵槽段階として次の接種物濃度が作られる：バクテリ
ア０．１〜３％，菌類５〜１０％，アクチノマイセタレ
ス(Actinomycetales) ５〜１０％，胞子懸濁液１〜５×
１０5 ｌ／培養液。
の１３β位への立体特異的ヒドロキシル基導入もしくは
１４，１５−エポキシ化、またはその両反応を行うこと
のできる微生物の培養に関し、そして生体反応器、特に
攪拌槽反応器タイプの生体反応器中での前記化合物との
それらの培養に関する。現実の製造発酵槽中での生成物
形成の最適比率を確かめるために、まず第一に予備培養
で微生物を繁殖させることが推奨される。発酵槽予備培
養の数は、各々の特定の場合において最適となる接種物
濃度に依存する。好都合には、使用する微生物に依り、
発酵槽段階として次の接種物濃度が作られる：バクテリ
ア０．１〜３％，菌類５〜１０％，アクチノマイセタレ
ス(Actinomycetales) ５〜１０％，胞子懸濁液１〜５×
１０5 ｌ／培養液。
【００４８】小さな発酵槽（２０リットルまで）の接種
は通常、震盪フラスコ予備培養で行われる。この場合、
全フラスコ内容物が発酵槽に接種するために用いられ
る。予備培養菌の生産のために使用される出発物は通
常、例えば凍結乾燥物または冷凍もしくは冷蔵したもの
の形であってもよい保存接種物である。本発明の範囲内
において使用される保存接種物は凍結乾燥物の形態が好
ましい。接種物はロータリー震盪機上のガラス製フラス
コ中の液体培地で、または胞子を用いる場合、固体栄養
基質上で増殖させるのが好ましい。
は通常、震盪フラスコ予備培養で行われる。この場合、
全フラスコ内容物が発酵槽に接種するために用いられ
る。予備培養菌の生産のために使用される出発物は通
常、例えば凍結乾燥物または冷凍もしくは冷蔵したもの
の形であってもよい保存接種物である。本発明の範囲内
において使用される保存接種物は凍結乾燥物の形態が好
ましい。接種物はロータリー震盪機上のガラス製フラス
コ中の液体培地で、または胞子を用いる場合、固体栄養
基質上で増殖させるのが好ましい。
【００４９】栄養基質の条件および培養パラメータ、例
えば特に温度、ｐＨ、酸素導入等は、使用する微生物や
プロセスに従って最適にされていなければならない。保
存された接種物にとっての培養時間は使用する出発物に
よって、２、３時間から数日に及ぶ。 凍結乾燥物 ３〜１０日 冷凍保存 バクテリア ４〜１８日 アクチノマイセタレス １〜 ５日 菌類 １〜 ７日 冷蔵培養物 バクテリア ４〜２４日 アクチノマイセタレス １〜 ３日 菌類 １〜 ５日
えば特に温度、ｐＨ、酸素導入等は、使用する微生物や
プロセスに従って最適にされていなければならない。保
存された接種物にとっての培養時間は使用する出発物に
よって、２、３時間から数日に及ぶ。 凍結乾燥物 ３〜１０日 冷凍保存 バクテリア ４〜１８日 アクチノマイセタレス １〜 ５日 菌類 １〜 ７日 冷蔵培養物 バクテリア ４〜２４日 アクチノマイセタレス １〜 ３日 菌類 １〜 ５日
【００５０】接種物として、もし胞子が使用されるなら
ば、まず第一に該胞子は標準化状態下（無菌通気，気候
室）、固体栄養基質上で増殖される。もし、ビート、ぬ
か、米または大麦をベースとした多孔性栄養基質が用い
られる場合、高胞子密度となるように培養物は毎日十分
に震盪される。他に、寒天または他の慣用のゲル化剤に
より固体化された栄養培地上で、保護接種物を培養する
可能性もあるが、胞子形成の契機となる栄養培地を使用
するのが好ましい。胞子形成時間は使用する微生物およ
び使用する栄養培地に依存し、７ないし３０日である。
予備培養発酵槽または製造発酵槽に接種するに際し、胞
子は界面活性剤、例えばツイーン８０と懸濁され、そし
て栄養培地と一緒に発酵槽に移されるか、または固体栄
養培地が用いられる場合、同様に上記界面活性剤を用い
て固体栄養基質を洗い落とすかする。この方法によって
得られた胞子含有液は次いで発酵槽へ接種するために使
用される。好ましくは、胞子の回収および発酵槽の接種
は無菌条件下で行われる。
ば、まず第一に該胞子は標準化状態下（無菌通気，気候
室）、固体栄養基質上で増殖される。もし、ビート、ぬ
か、米または大麦をベースとした多孔性栄養基質が用い
られる場合、高胞子密度となるように培養物は毎日十分
に震盪される。他に、寒天または他の慣用のゲル化剤に
より固体化された栄養培地上で、保護接種物を培養する
可能性もあるが、胞子形成の契機となる栄養培地を使用
するのが好ましい。胞子形成時間は使用する微生物およ
び使用する栄養培地に依存し、７ないし３０日である。
予備培養発酵槽または製造発酵槽に接種するに際し、胞
子は界面活性剤、例えばツイーン８０と懸濁され、そし
て栄養培地と一緒に発酵槽に移されるか、または固体栄
養培地が用いられる場合、同様に上記界面活性剤を用い
て固体栄養基質を洗い落とすかする。この方法によって
得られた胞子含有液は次いで発酵槽へ接種するために使
用される。好ましくは、胞子の回収および発酵槽の接種
は無菌条件下で行われる。
【００５１】本発明の範囲内では式ＩおよびＩＩで表さ
れる化合物を製造するために、約０．００１ｍ3 ないし
４５０ｍ3 の容量を有する種々の寸法の生体反応器が、
必要な生産量に応じて使用され得る。攪拌槽生体反応器
が使用される場合、反応過程を最適にするための限界と
して、以下の発酵パラメータが考慮されるべきである。 １．温度：本発明の範囲内での微生物によるヒドロキシ
ル化および／またはエポキシ化反応は、中温性の温度範
囲（２０ないし４５℃の温度範囲）で行うのが好まし
い。増殖および生成物形成のための最適温度範囲は２０
ないし３２℃、特に２４ないし３０℃である。 ２．通気：通気割合は０．１ないし１．０ｖｖｍ（空気
体積／液体積・分）、好ましくは０．３ないし０．６ｖ
ｖｍである。必要により、通気割合は、発酵過程中の後
天的Ｏ2 要求量に適合させなければならない。 ３．圧力：攪拌槽反応器は一般的に汚染の危険を少なく
するために、０．２ないし０．５ｂａｒのわずかに過剰
の圧力下で操作される。 ４．ｐＨ値：ｐＨ値は使用する微生物に依存してある範
囲内を変化してよい。アクチノマイセテスから選択され
る微生物を用いる場合、初期ｐＨ値はｐＨ６ないしｐＨ
８であり、ｐＨ７ないしｐＨ７．４が好ましい。菌類、
特にモニリアレス(Moniliales)群から選択される菌類を
用いる場合、培養液の初期ｐＨ値はｐＨ４ないしｐＨ８
が好ましく、特にｐＨ６ないしｐＨ７．５が好ましい。 ５．攪拌：攪拌速度は、使用する攪拌機のタイプおよび
発酵槽の大きさに依存する。本発明の範囲内において
は、ディスク型の羽根を備えた攪拌機が好ましく、該攪
拌機は０．００２ｍ3 の攪拌反応器であれば、２５０ｒ
ｐｍないし４５０ｒｐｍ、特に３５０ｒｐｍないし４０
０ｒｐｍの速度で操作される。
れる化合物を製造するために、約０．００１ｍ3 ないし
４５０ｍ3 の容量を有する種々の寸法の生体反応器が、
必要な生産量に応じて使用され得る。攪拌槽生体反応器
が使用される場合、反応過程を最適にするための限界と
して、以下の発酵パラメータが考慮されるべきである。 １．温度：本発明の範囲内での微生物によるヒドロキシ
ル化および／またはエポキシ化反応は、中温性の温度範
囲（２０ないし４５℃の温度範囲）で行うのが好まし
い。増殖および生成物形成のための最適温度範囲は２０
ないし３２℃、特に２４ないし３０℃である。 ２．通気：通気割合は０．１ないし１．０ｖｖｍ（空気
体積／液体積・分）、好ましくは０．３ないし０．６ｖ
ｖｍである。必要により、通気割合は、発酵過程中の後
天的Ｏ2 要求量に適合させなければならない。 ３．圧力：攪拌槽反応器は一般的に汚染の危険を少なく
するために、０．２ないし０．５ｂａｒのわずかに過剰
の圧力下で操作される。 ４．ｐＨ値：ｐＨ値は使用する微生物に依存してある範
囲内を変化してよい。アクチノマイセテスから選択され
る微生物を用いる場合、初期ｐＨ値はｐＨ６ないしｐＨ
８であり、ｐＨ７ないしｐＨ７．４が好ましい。菌類、
特にモニリアレス(Moniliales)群から選択される菌類を
用いる場合、培養液の初期ｐＨ値はｐＨ４ないしｐＨ８
が好ましく、特にｐＨ６ないしｐＨ７．５が好ましい。 ５．攪拌：攪拌速度は、使用する攪拌機のタイプおよび
発酵槽の大きさに依存する。本発明の範囲内において
は、ディスク型の羽根を備えた攪拌機が好ましく、該攪
拌機は０．００２ｍ3 の攪拌反応器であれば、２５０ｒ
ｐｍないし４５０ｒｐｍ、特に３５０ｒｐｍないし４０
０ｒｐｍの速度で操作される。
【００５２】本発明の範囲内において、発酵期間は使用
する微生物によって５ないし１０日と変化する。初めに
添加された基質（式ＩＩＩで表される化合物）の大部分
（８０〜９９％）が、式ＩもしくはＩＩで表される化合
物またはこれら２化合物の混合物に変換されたとき、発
酵は停止される。ヒドロキシル化および／またはエポキ
シ化反応の終了最適時を確かめるため、発酵全体を通じ
て反応過程が慣用の分析法、特に例えばＨＰＬＣまたは
薄層クロマトグラフィー法のようなクロマトグラフィー
法によってモニターされる。ヒドロキシル化および／ま
たはエポキシ化生成物、またはその両生成物の混合物を
回収するために、発酵ブロスの処置は、発酵技術分野で
慣用の方法(W. Crueger およびA. Crueger, 1984; P. P
rave, 1984) によって行うことができる。
する微生物によって５ないし１０日と変化する。初めに
添加された基質（式ＩＩＩで表される化合物）の大部分
（８０〜９９％）が、式ＩもしくはＩＩで表される化合
物またはこれら２化合物の混合物に変換されたとき、発
酵は停止される。ヒドロキシル化および／またはエポキ
シ化反応の終了最適時を確かめるため、発酵全体を通じ
て反応過程が慣用の分析法、特に例えばＨＰＬＣまたは
薄層クロマトグラフィー法のようなクロマトグラフィー
法によってモニターされる。ヒドロキシル化および／ま
たはエポキシ化生成物、またはその両生成物の混合物を
回収するために、発酵ブロスの処置は、発酵技術分野で
慣用の方法(W. Crueger およびA. Crueger, 1984; P. P
rave, 1984) によって行うことができる。
【００５３】まず第一に、粒子成分がフィルター、遠心
分離機またはセパレーターを用いて発酵ブロスから除去
される。成長細胞が使用される場合、細胞内に存在する
生成物の部分を回収しなければならない。この目的のた
めに、機械的、熱的、化学的または酵素的方法に基づく
様々な細胞破壊方法が利用できる。本発明の方法におい
て使用に適する機械的方法は、例えば攪拌ボールミルま
たはコロイドミル中での粉砕、ホモジナイザー中での圧
力および緩和の利用、および超音波の作用による細胞の
破壊である。非機械的方法には、乾燥による細胞破壊、
浸透圧ショックによる細胞分解、化学的自己分解および
細胞の酵素分解が包含される。粒子成分が除去された
ら、反応生成物は培養液および分離された細胞質状成分
を抽出することにより濃縮される。抽出するためにも、
例えば特に混合沈澱器、向流カラム、抽出遠心機のよう
な発酵技術分野で慣用の多くの補助器具が利用できる。
また、例えば特に膜濾過、限外濾過、凍結濃縮、イオン
交換法によって反応生成物を濃縮することも可能であ
る。
分離機またはセパレーターを用いて発酵ブロスから除去
される。成長細胞が使用される場合、細胞内に存在する
生成物の部分を回収しなければならない。この目的のた
めに、機械的、熱的、化学的または酵素的方法に基づく
様々な細胞破壊方法が利用できる。本発明の方法におい
て使用に適する機械的方法は、例えば攪拌ボールミルま
たはコロイドミル中での粉砕、ホモジナイザー中での圧
力および緩和の利用、および超音波の作用による細胞の
破壊である。非機械的方法には、乾燥による細胞破壊、
浸透圧ショックによる細胞分解、化学的自己分解および
細胞の酵素分解が包含される。粒子成分が除去された
ら、反応生成物は培養液および分離された細胞質状成分
を抽出することにより濃縮される。抽出するためにも、
例えば特に混合沈澱器、向流カラム、抽出遠心機のよう
な発酵技術分野で慣用の多くの補助器具が利用できる。
また、例えば特に膜濾過、限外濾過、凍結濃縮、イオン
交換法によって反応生成物を濃縮することも可能であ
る。
【００５４】抽出後に得られた粗生成物の次の処置は、
微生物学的および化学的研究により、および工業的応用
により十分に確立された方法によって行うことができ
る。これらの方法には、例えば吸着クロマトグラフィ
ー、イオン交換クロマトグラフィー、分子篩クロマトグ
ラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、疎水性
クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、共有ク
ロマトグラフィー等のようなクロマトグラフィー法が包
含されるが、これらに加えて種々の結晶化法も含まれ
る。上記したように、本発明の方法は式Ｉで表される化
合物および式ＩＩで表される化合物の両方の化合物を生
成する。一般的に、ヒドロキシル化された化合物とエポ
キシ化された化合物の混合物が得られ、そのヒドロキシ
ル化合物とエポキシ化合物との比は、微生物、出発物質
および反応条件（培養液，有機溶媒，基質の添加割合，
通気）の選択によって影響され得る。混合物中に存在す
る化合物はＣ−１３，Ｃ−１４およびＣ−１５原子領域
でのみ異なり；
微生物学的および化学的研究により、および工業的応用
により十分に確立された方法によって行うことができ
る。これらの方法には、例えば吸着クロマトグラフィ
ー、イオン交換クロマトグラフィー、分子篩クロマトグ
ラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、疎水性
クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、共有ク
ロマトグラフィー等のようなクロマトグラフィー法が包
含されるが、これらに加えて種々の結晶化法も含まれ
る。上記したように、本発明の方法は式Ｉで表される化
合物および式ＩＩで表される化合物の両方の化合物を生
成する。一般的に、ヒドロキシル化された化合物とエポ
キシ化された化合物の混合物が得られ、そのヒドロキシ
ル化合物とエポキシ化合物との比は、微生物、出発物質
および反応条件（培養液，有機溶媒，基質の添加割合，
通気）の選択によって影響され得る。混合物中に存在す
る化合物はＣ−１３，Ｃ−１４およびＣ−１５原子領域
でのみ異なり；
【化４３】 そして、その他の分子構造に違いはない。ヒドロキシル
化された化合物（Ｉ）およびエポキシ化された化合物
（ＩＩ）は既述したように容易に互いに単離および分離
することができ、また（ＩＩ）を（Ｉ）に変換すること
もできる。
化された化合物（Ｉ）およびエポキシ化された化合物
（ＩＩ）は既述したように容易に互いに単離および分離
することができ、また（ＩＩ）を（Ｉ）に変換すること
もできる。
【００５５】式ＩおよびＩＩの範囲内の新規オキシムを
含む式ＩおよびＩＩで表される化合物は、動物の外部寄
生生物を含む動物および植物の有害生物を防除するのに
非常に適している。これらの有害生物とは、ダニ目の生
物、特にマダニ科(Ixodidae)、ワクモ科(Dermanyssida
e) 、ヒゼンダニ科(Sarcoptidae) 、プソロプチド科(Ps
oroptidae) に属する有害生物；マロファガ(Mallophag
a)、シフォナプテラ(Siphonaptera)、アノプルラ目(Ano
plura)〔例えばヘマトピニド科(Haematopinidae)のも
の〕および双翅目(Diptera) 、特にイエバエ科(Muscida
e)、クロバエ科(Calliphoridae) 、ヒツジバエ科(Oeste
rridae) 、アブ科(Tabanidae) 、シラミバエ科(Hippobo
scidae) およびウマバエ科(Gastrophilidae)に属する有
害生物を包含する。
含む式ＩおよびＩＩで表される化合物は、動物の外部寄
生生物を含む動物および植物の有害生物を防除するのに
非常に適している。これらの有害生物とは、ダニ目の生
物、特にマダニ科(Ixodidae)、ワクモ科(Dermanyssida
e) 、ヒゼンダニ科(Sarcoptidae) 、プソロプチド科(Ps
oroptidae) に属する有害生物；マロファガ(Mallophag
a)、シフォナプテラ(Siphonaptera)、アノプルラ目(Ano
plura)〔例えばヘマトピニド科(Haematopinidae)のも
の〕および双翅目(Diptera) 、特にイエバエ科(Muscida
e)、クロバエ科(Calliphoridae) 、ヒツジバエ科(Oeste
rridae) 、アブ科(Tabanidae) 、シラミバエ科(Hippobo
scidae) およびウマバエ科(Gastrophilidae)に属する有
害生物を包含する。
【００５６】式ＩおよびＩＩで表される化合物は、衛生
害虫、特に双翅目〔ニクバエ科(Sarcophagidae) 、イノ
フイリダニ科(Anophilidae) およびクリシダエ科(Culic
idae) に属するもの〕の害虫、直翅目(Orthoptera)、網
翅目(Dictyoptera) 〔例えばゴキブリ科(Blattidae) の
もの〕および膜翅目(Hymenoptera) 〔例えばアリ科(For
micidae)のもの〕の害虫に対しても使用することができ
る。式ＩおよびＩＩで表される化合物はまた、植物に寄
生するダニおよび昆虫に対し永続する効力を有してい
る。ダニ目のハダニ類を防除するために使用すると、ハ
ダニ科〔テトラニクス類(Tetranychus spp) およびパノ
ニクス類(Panonychusspp)の卵、蛹および成虫に対して
有効である。
害虫、特に双翅目〔ニクバエ科(Sarcophagidae) 、イノ
フイリダニ科(Anophilidae) およびクリシダエ科(Culic
idae) に属するもの〕の害虫、直翅目(Orthoptera)、網
翅目(Dictyoptera) 〔例えばゴキブリ科(Blattidae) の
もの〕および膜翅目(Hymenoptera) 〔例えばアリ科(For
micidae)のもの〕の害虫に対しても使用することができ
る。式ＩおよびＩＩで表される化合物はまた、植物に寄
生するダニおよび昆虫に対し永続する効力を有してい
る。ダニ目のハダニ類を防除するために使用すると、ハ
ダニ科〔テトラニクス類(Tetranychus spp) およびパノ
ニクス類(Panonychusspp)の卵、蛹および成虫に対して
有効である。
【００５７】これら化合物は同翅目(Homoptera) の吸液
昆虫、特にアブラムシ科(Aphididae) 、ウンカ科(Delph
acidae) 、ヒメヨコバイ科(Cicadellidae)、キジラミ科
(Psyllidae) 、ロシダエ(Loccidae)、マルカイガラムシ
科(Diaspididae) およびエリオフィダエ(Eriophydidae)
（例えばレモン果実上のサビダニ）の有害生物に対し、
また半翅目(Hemiptera) 、異翅亜目(Heteroptera) およ
びアザミウマ目(Thysanoptera)の有害生物に対しても良
好な効果を示し、鱗翅目(Lepidoptera) 、鞘翅目(Coleo
ptera)、双翅目(Diptera) および直翅目(Orthoptera)の
植物食害昆虫に対しても良好な効果を有する。それらは
また、土中の有害生物に対して使用するためにも適して
いる。
昆虫、特にアブラムシ科(Aphididae) 、ウンカ科(Delph
acidae) 、ヒメヨコバイ科(Cicadellidae)、キジラミ科
(Psyllidae) 、ロシダエ(Loccidae)、マルカイガラムシ
科(Diaspididae) およびエリオフィダエ(Eriophydidae)
（例えばレモン果実上のサビダニ）の有害生物に対し、
また半翅目(Hemiptera) 、異翅亜目(Heteroptera) およ
びアザミウマ目(Thysanoptera)の有害生物に対しても良
好な効果を示し、鱗翅目(Lepidoptera) 、鞘翅目(Coleo
ptera)、双翅目(Diptera) および直翅目(Orthoptera)の
植物食害昆虫に対しても良好な効果を有する。それらは
また、土中の有害生物に対して使用するためにも適して
いる。
【００５８】従って、式ＩおよびＩＩの化合物は、穀
物、ワタ、イネ、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、
野菜、果物、タバコ、ホップ、ミカン類、アボガドおよ
びその他のような作物中の吸液害虫および食害昆虫の全
ての発達段階に対して有効である。式ＩおよびＩＩの化
合物はまた、植物線虫類、メロイドギネ科(Meloidogyn
e)、ヘテロデラ科(Heterodera)、プラチレンクス科(Pra
tylenchus)、ジチレンクス科(Ditylenchus) 、ラドルフ
ァス科(Radolphus) 、リゾグリファス科(Rhizoglyphus)
およびその他の科に属する種の線虫に対しても有効であ
る。
物、ワタ、イネ、トウモロコシ、ダイズ、ジャガイモ、
野菜、果物、タバコ、ホップ、ミカン類、アボガドおよ
びその他のような作物中の吸液害虫および食害昆虫の全
ての発達段階に対して有効である。式ＩおよびＩＩの化
合物はまた、植物線虫類、メロイドギネ科(Meloidogyn
e)、ヘテロデラ科(Heterodera)、プラチレンクス科(Pra
tylenchus)、ジチレンクス科(Ditylenchus) 、ラドルフ
ァス科(Radolphus) 、リゾグリファス科(Rhizoglyphus)
およびその他の科に属する種の線虫に対しても有効であ
る。
【００５９】しかしながら、特に、それらの化合物は寄
生虫、特に哺乳動物および鳥、例えばヒツジ、ブタ、ヤ
ギ、ウシ、ウマ、ロバ、イヌ、ネコ、モルモット、飼育
小鳥等の病気を起こす原因となり得る内部寄生線虫に対
して作用を有する。このような線虫の代表的なものを挙
げると、ヘモンクス(Haemonchus)、トリコストロンギル
ス(Trichostrongylus)、オステルタギア(Ostertagia)、
ネマトディルス(Nematodirus) 、コーペリア(Cooperi
a)、アスカリス(Ascaris) 、ブノストマム(Bunostomu
m)、エスファゴストマム(Oesphagostomum)、チャベルテ
ィア(Chabertia) 、トリクリス(Trichuris) 、ストロン
ギリス(Strongylus)、トリコネア(Trichonema)、ジクチ
オカウルス(Dictyocaulus)、カピラリア(Cappillaria)
、ヘテラキス(Heterakis) 、トクソカラ(Toxocara)、
アスカリディア(Ascaridia) 、オキシウリス(Oxyuris)
、アンシロストマ(Ancylostoma) 、ウンシナリア(Unci
naria) 、トキサスカリス(Toxascaris)およびパラスカ
リス(Paracaris) である。式ＩおよびＩＩの化合物の特
に有利な点は、ベンズイミダゾール系殺寄生虫剤に対し
て耐性である寄生虫に対しても有効であることである。
生虫、特に哺乳動物および鳥、例えばヒツジ、ブタ、ヤ
ギ、ウシ、ウマ、ロバ、イヌ、ネコ、モルモット、飼育
小鳥等の病気を起こす原因となり得る内部寄生線虫に対
して作用を有する。このような線虫の代表的なものを挙
げると、ヘモンクス(Haemonchus)、トリコストロンギル
ス(Trichostrongylus)、オステルタギア(Ostertagia)、
ネマトディルス(Nematodirus) 、コーペリア(Cooperi
a)、アスカリス(Ascaris) 、ブノストマム(Bunostomu
m)、エスファゴストマム(Oesphagostomum)、チャベルテ
ィア(Chabertia) 、トリクリス(Trichuris) 、ストロン
ギリス(Strongylus)、トリコネア(Trichonema)、ジクチ
オカウルス(Dictyocaulus)、カピラリア(Cappillaria)
、ヘテラキス(Heterakis) 、トクソカラ(Toxocara)、
アスカリディア(Ascaridia) 、オキシウリス(Oxyuris)
、アンシロストマ(Ancylostoma) 、ウンシナリア(Unci
naria) 、トキサスカリス(Toxascaris)およびパラスカ
リス(Paracaris) である。式ＩおよびＩＩの化合物の特
に有利な点は、ベンズイミダゾール系殺寄生虫剤に対し
て耐性である寄生虫に対しても有効であることである。
【００６０】ネマトディルス、コーペリアおよびエスフ
ァゴストマム属のある種は宿主動物の腸管を攻撃し、一
方ヘモンクスおよびオステルタギア属のある種は胃に、
そしてジクチオカウルス属のある種は肺組織に寄生す
る。フィラリイダエ(Filariidae)およびセタリイダエ(S
etariidae)属の寄生体は内部細胞組織および内部器官、
例えば心臓、血管、リンパ管内および皮下組織内に見ら
れる。これに関連して、イヌの心臓寄生虫、ジロフィラ
リア・イミチス(Dirofilaria immitis) を特に記載す
る。式ＩおよびＩＩの化合物はこれらの寄生体に対して
非常に有効である。
ァゴストマム属のある種は宿主動物の腸管を攻撃し、一
方ヘモンクスおよびオステルタギア属のある種は胃に、
そしてジクチオカウルス属のある種は肺組織に寄生す
る。フィラリイダエ(Filariidae)およびセタリイダエ(S
etariidae)属の寄生体は内部細胞組織および内部器官、
例えば心臓、血管、リンパ管内および皮下組織内に見ら
れる。これに関連して、イヌの心臓寄生虫、ジロフィラ
リア・イミチス(Dirofilaria immitis) を特に記載す
る。式ＩおよびＩＩの化合物はこれらの寄生体に対して
非常に有効である。
【００６１】それらはまた、ヒトの病因性寄生体の防除
にも適しており、それらの寄生体の中で消化管に発生す
る典型例として、アンシロストマ(Ancylostoma) 、ネカ
トール(Necator) 、アスカリス(Ascaris) 、ストロンギ
イロイデス(Strongyloides)、トリチネラ(Trichinella)
、カピラリア(Capillaria)、トリクリス(Trichuris)
およびエンテロビウス(Enterobius)種の寄生体を挙げる
ことができる。本発明の化合物は血液、組織および種々
の器官に存在するフィラリイダエ属のウチエレリア(Wuc
hereria)、ブルギア(Brugia)、オンコセルカ(Onchocerc
a)およびロア(Loa) 種の寄生体に対しても有効であり、
そしてさらに、ドラクンクルス(Dracunculus) 、そして
特に胃腸管にはびこるストロンギロイデスおよびトリチ
ネラ種の寄生体に対して有効である。
にも適しており、それらの寄生体の中で消化管に発生す
る典型例として、アンシロストマ(Ancylostoma) 、ネカ
トール(Necator) 、アスカリス(Ascaris) 、ストロンギ
イロイデス(Strongyloides)、トリチネラ(Trichinella)
、カピラリア(Capillaria)、トリクリス(Trichuris)
およびエンテロビウス(Enterobius)種の寄生体を挙げる
ことができる。本発明の化合物は血液、組織および種々
の器官に存在するフィラリイダエ属のウチエレリア(Wuc
hereria)、ブルギア(Brugia)、オンコセルカ(Onchocerc
a)およびロア(Loa) 種の寄生体に対しても有効であり、
そしてさらに、ドラクンクルス(Dracunculus) 、そして
特に胃腸管にはびこるストロンギロイデスおよびトリチ
ネラ種の寄生体に対して有効である。
【００６２】式ＩおよびＩＩで表される化合物はそのま
ま、または好ましくは製剤業界で慣用的に使用されてい
る助剤と共に組成物として使用され、そしてこの目的の
ために、公知方法により例えば乳剤原液、直接噴霧また
は希釈しうる溶液、希釈乳剤、水和剤、水溶剤、粉剤、
粒剤、およびさらに例えばポリマー物質に充填したカプ
セル剤に製剤化される。組成物の性質と同様に、施用方
法、例えば噴霧、散布、散水または注水等は、目的とす
る対象および施用環境によって選択される。式Ｉおよび
ＩＩで表される化合物は温血動物に対して体重１ｋｇあ
たり０．０１ないし１０ｍｇの割合で投与し、閉鎖され
た作付地域、囲い、家畜小屋または他の建物に対して１
ヘクタールあたり１０ｇないし１０００ｇの割合で施用
する。
ま、または好ましくは製剤業界で慣用的に使用されてい
る助剤と共に組成物として使用され、そしてこの目的の
ために、公知方法により例えば乳剤原液、直接噴霧また
は希釈しうる溶液、希釈乳剤、水和剤、水溶剤、粉剤、
粒剤、およびさらに例えばポリマー物質に充填したカプ
セル剤に製剤化される。組成物の性質と同様に、施用方
法、例えば噴霧、散布、散水または注水等は、目的とす
る対象および施用環境によって選択される。式Ｉおよび
ＩＩで表される化合物は温血動物に対して体重１ｋｇあ
たり０．０１ないし１０ｍｇの割合で投与し、閉鎖され
た作付地域、囲い、家畜小屋または他の建物に対して１
ヘクタールあたり１０ｇないし１０００ｇの割合で施用
する。
【００６３】製剤、すなわち式ＩまたはＩＩで表される
有効成分、またはその両成分を含む組成物、製剤または
混合物は、公知の方法により、例えば有効成分を増量
剤、例えば溶媒、固体担体および適当な場合には表面活
性化合物（界面活性剤）と均一に混合および／または摩
砕することにより製造される。
有効成分、またはその両成分を含む組成物、製剤または
混合物は、公知の方法により、例えば有効成分を増量
剤、例えば溶媒、固体担体および適当な場合には表面活
性化合物（界面活性剤）と均一に混合および／または摩
砕することにより製造される。
【００６４】適当な溶媒は次のものである：芳香族炭化
水素、好ましくは炭素原子数８ないし１２の部分、例え
ばキシレン混合物または置換ナフタレン；ジブチルフタ
レートまたはジオクチルフタレートのようなフタレー
ト；シクロヘキサンまたはパラフィンのような脂肪族炭
化水素；エタノール、エチレングリコール、エチレング
リコールモノメチルまたはモノエチルエーテルのような
アルコールおよびグリコール並びにそれらのエーテルお
よびエステル；シクロヘキサノンのようなケトン；Ｎ−
メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシドまたは
ジメチルホルムアミドのような強極性溶媒；並びにエポ
キシ化ココナッツ油または大豆油のような植物油または
エポキシ化植物油；または水。
水素、好ましくは炭素原子数８ないし１２の部分、例え
ばキシレン混合物または置換ナフタレン；ジブチルフタ
レートまたはジオクチルフタレートのようなフタレー
ト；シクロヘキサンまたはパラフィンのような脂肪族炭
化水素；エタノール、エチレングリコール、エチレング
リコールモノメチルまたはモノエチルエーテルのような
アルコールおよびグリコール並びにそれらのエーテルお
よびエステル；シクロヘキサノンのようなケトン；Ｎ−
メチル−２−ピロリドン、ジメチルスルホキシドまたは
ジメチルホルムアミドのような強極性溶媒；並びにエポ
キシ化ココナッツ油または大豆油のような植物油または
エポキシ化植物油；または水。
【００６５】例えば粉剤および分散性粉末に使用される
固体担体は通常、方解石、タルク、カオリン、モンモリ
ロナイトまたはアタパルジャイトのような天然鉱物充填
剤である。物性を改良するために、高分散ケイ酸または
高分散吸収性ポリマーを加えることも可能である。適当
な粒状化吸収性担体は多孔性型のもので、例えば軽石、
破砕レンガ、セピオライトまたはベントナイトであり；
そして適当な非吸収性担体は方解石または砂のような物
質である。更に非常に多くの予備粒状化した無機質およ
び有機質の物質、特にドロマイトまたは粉状化植物残骸
が使用し得る。
固体担体は通常、方解石、タルク、カオリン、モンモリ
ロナイトまたはアタパルジャイトのような天然鉱物充填
剤である。物性を改良するために、高分散ケイ酸または
高分散吸収性ポリマーを加えることも可能である。適当
な粒状化吸収性担体は多孔性型のもので、例えば軽石、
破砕レンガ、セピオライトまたはベントナイトであり；
そして適当な非吸収性担体は方解石または砂のような物
質である。更に非常に多くの予備粒状化した無機質およ
び有機質の物質、特にドロマイトまたは粉状化植物残骸
が使用し得る。
【００６６】製剤化すべき有効成分の性質に応じて、適
当な表面活性化合物は良好な乳化性、分散性および湿潤
性を有する非イオン性、カチオン性および／またはアニ
オン性界面活性剤である。「界面活性剤」という用語は
界面活性剤の混合物をも含むものと理解されるであろ
う。適当なアニオン性界面活性剤は、いわゆる水溶性石
鹸および水溶性合成表面活性化合物の両方であり得る。
適当な石鹸は高級脂肪酸（Ｃ10〜Ｃ22）のアルカリ金属
塩、アルカリ土類金属塩、または非置換もしくは置換の
アンモニウム塩、例えばオレイン酸またはステアリン
酸、または例えばココナッツ油もしくは獣脂から得られ
る天然脂肪酸混合物のナトリウムまたはカリウム塩であ
る。脂肪酸メチルタウリン塩もまた記載し得る。しかし
ながら、いわゆる合成界面活性剤、特に脂肪スルホネー
ト、脂肪サルフェート、スルホン化ベンズイミダゾール
誘導体またはアルキルアリールスルホネートが更に頻繁
に使用される。
当な表面活性化合物は良好な乳化性、分散性および湿潤
性を有する非イオン性、カチオン性および／またはアニ
オン性界面活性剤である。「界面活性剤」という用語は
界面活性剤の混合物をも含むものと理解されるであろ
う。適当なアニオン性界面活性剤は、いわゆる水溶性石
鹸および水溶性合成表面活性化合物の両方であり得る。
適当な石鹸は高級脂肪酸（Ｃ10〜Ｃ22）のアルカリ金属
塩、アルカリ土類金属塩、または非置換もしくは置換の
アンモニウム塩、例えばオレイン酸またはステアリン
酸、または例えばココナッツ油もしくは獣脂から得られ
る天然脂肪酸混合物のナトリウムまたはカリウム塩であ
る。脂肪酸メチルタウリン塩もまた記載し得る。しかし
ながら、いわゆる合成界面活性剤、特に脂肪スルホネー
ト、脂肪サルフェート、スルホン化ベンズイミダゾール
誘導体またはアルキルアリールスルホネートが更に頻繁
に使用される。
【００６７】脂肪スルホネートまたはサルフェートは通
常アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩または非置換も
しくは置換のアンモニウム塩の形態にあり、そしてアシ
ル基のアルキル部分をも含む炭素原子数８ないし２２の
アルキル基を一般に含み、例えばリグノスルホン酸、ド
デシルサルフェートまたは天然脂肪酸から得られる脂肪
アルコールサルフェートの混合物のナトリウムまたはカ
ルシウム塩である。これらの化合物には硫酸化およびス
ルホン化脂肪アルコール／エチレンオキシド付加物の塩
も含まれる。スルホン化ベンズイミダゾール誘導体は、
好ましくは二つのスルホン酸基と８ないし２２個の炭素
原子を含む一つの脂肪酸基とを含む。アルキルアリール
スルホネートの例は、ナフタレンスルホン酸／ホルムア
ルデヒド縮合生成物のナトリウム、カルシウムまたはト
リエタノールアミン塩である。対応するホスフェート、
例えば４ないし１４モルのエチレンオキシドを含むｐ−
ノニルフェノール付加物のリン酸エステルの塩、または
リン脂質もまた適当である。製剤業界で慣用の界面活性
剤は例えば下記の刊行物に記載されている："Mc Cutche
on's Detergents and Emulsifiers Annual" The Manufa
cturingConfectioner Publishing Co., Glen Rock, New
Jersey, 1986 。
常アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩または非置換も
しくは置換のアンモニウム塩の形態にあり、そしてアシ
ル基のアルキル部分をも含む炭素原子数８ないし２２の
アルキル基を一般に含み、例えばリグノスルホン酸、ド
デシルサルフェートまたは天然脂肪酸から得られる脂肪
アルコールサルフェートの混合物のナトリウムまたはカ
ルシウム塩である。これらの化合物には硫酸化およびス
ルホン化脂肪アルコール／エチレンオキシド付加物の塩
も含まれる。スルホン化ベンズイミダゾール誘導体は、
好ましくは二つのスルホン酸基と８ないし２２個の炭素
原子を含む一つの脂肪酸基とを含む。アルキルアリール
スルホネートの例は、ナフタレンスルホン酸／ホルムア
ルデヒド縮合生成物のナトリウム、カルシウムまたはト
リエタノールアミン塩である。対応するホスフェート、
例えば４ないし１４モルのエチレンオキシドを含むｐ−
ノニルフェノール付加物のリン酸エステルの塩、または
リン脂質もまた適当である。製剤業界で慣用の界面活性
剤は例えば下記の刊行物に記載されている："Mc Cutche
on's Detergents and Emulsifiers Annual" The Manufa
cturingConfectioner Publishing Co., Glen Rock, New
Jersey, 1986 。
【００６８】
【発明の実施の形態】殺虫剤組成物は一般に０．０１な
いし９５重量％、好ましくは０．１ないし８０重量％の
式ＩもしくはＩＩで表される化合物またはその両者の化
合物、９９．９９ないし５重量％の固体または液体助
剤、および０ないし２５重量％、好ましくは０．１ない
し２５重量％の界面活性剤を含有する。化合物Ｉと化合
物ＩＩの混合物が使用される場合、そのＩ：ＩＩの比は
通常９９．９：０．１ないし０．１：９９．９である。
市販の製品は濃厚物として製剤化されるのが好ましい
が、最終使用者は通常１ないし１００００ｐｐｍの濃度
の希釈製剤を用いるであろう。
いし９５重量％、好ましくは０．１ないし８０重量％の
式ＩもしくはＩＩで表される化合物またはその両者の化
合物、９９．９９ないし５重量％の固体または液体助
剤、および０ないし２５重量％、好ましくは０．１ない
し２５重量％の界面活性剤を含有する。化合物Ｉと化合
物ＩＩの混合物が使用される場合、そのＩ：ＩＩの比は
通常９９．９：０．１ないし０．１：９９．９である。
市販の製品は濃厚物として製剤化されるのが好ましい
が、最終使用者は通常１ないし１００００ｐｐｍの濃度
の希釈製剤を用いるであろう。
【００６９】従って、本発明はまた、有効成分として式
ＩまたはＩＩで表される化合物の少なくとも１種または
その両者の化合物の混合物を通常の担体および／または
分散剤と共に含む有害生物防除組成物に関する。該組成
物はまた、その他の助剤、例えば安定剤、消泡剤、粘度
調節剤、結合剤、増粘剤ならびに肥料または特別な効果
を得るためのその他の有効成分を含有し得る。
ＩまたはＩＩで表される化合物の少なくとも１種または
その両者の化合物の混合物を通常の担体および／または
分散剤と共に含む有害生物防除組成物に関する。該組成
物はまた、その他の助剤、例えば安定剤、消泡剤、粘度
調節剤、結合剤、増粘剤ならびに肥料または特別な効果
を得るためのその他の有効成分を含有し得る。
【００７０】
製造実施例 実施例Ｈ１：ストレプトマイセス・ヴィオラセンス予備
培養菌の製造 ストレプトマイセス・ヴィオラセンス（ＡＴＣＣ ３１
５６０）の凍結乾燥試料を、５０ｍｌ震盪フラスコ中の
培地２０ｍｌに加え、全体を２８℃および２５０ｒｐｍ
で７２時間培養する。続いてこの最初の予備培養物２ｍ
ｌを、５００ｍｌ震盪フラスコ中、２００ｍｌの栄養液
体培地１と共に、２８℃および２５０ｒｐｍで４８時間
培養する。同様の方法により、培地１、２および３を用
いてストレプトマイセス・ヴィオラセンス（ＡＴＣＣ
３１５６０）、ストレプトマイセス・ジアスタトクロモ
ゲネス（ＡＴＣＣ ３１５６１）およびアクチノマイセ
テス・ニガー（ＡＴＣＣ２０５６７）の予備培養菌を製
造することもできる。
培養菌の製造 ストレプトマイセス・ヴィオラセンス（ＡＴＣＣ ３１
５６０）の凍結乾燥試料を、５０ｍｌ震盪フラスコ中の
培地２０ｍｌに加え、全体を２８℃および２５０ｒｐｍ
で７２時間培養する。続いてこの最初の予備培養物２ｍ
ｌを、５００ｍｌ震盪フラスコ中、２００ｍｌの栄養液
体培地１と共に、２８℃および２５０ｒｐｍで４８時間
培養する。同様の方法により、培地１、２および３を用
いてストレプトマイセス・ヴィオラセンス（ＡＴＣＣ
３１５６０）、ストレプトマイセス・ジアスタトクロモ
ゲネス（ＡＴＣＣ ３１５６１）およびアクチノマイセ
テス・ニガー（ＡＴＣＣ２０５６７）の予備培養菌を製
造することもできる。
【００７１】実施例Ｈ２：震盪フラスコ中でのミルベマ
イシンＡ4 のヒドロキシル化のための培養条件 ４５０ｍｌの培地２中の、実施例Ｈ１で製造された２日
齢のストレプトマイセス・ヴィオラセンス予備培養菌に
ミルベマイシンＡ4 ０．２ｇを加え、全体を２８℃およ
び２５０ｒｐｍで震盪する。反応の過程をＨＰＬＣ（カ
ラム２５ｃｍ／０．５ｃｍ，溶離剤ヘキサン／ジメトキ
シエタン３：１，１ｍｌ／分，ＵＶ検出器２２０ｎｍ）
によりモニターする。４日間震盪後、および転化率３７
％で、７０％の１３β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4
および３０％の１４，１５−エポキシミルベマイシンＡ
4 が得られる。後処理のため、ジエチルエーテル（Ｅｔ
2 Ｏ）２００ｍｌを反応混合物に加え、全体をハイフロ
・スーパーセル（登録商標Hyflo Supercel）〔スーパー
セル(Super Cel) ；ケイソウ土, 精製およびカ焼物；主
要粒径２〜２５μｍ；フルカ・カタログ(Fluka Katalo
g) 番号５６６７８〕に通して濾過する。濾過残渣を注
意深くＥｔ2 Ｏ１００ｍｌ中で洗浄する。水相を各回Ｅ
ｔ2 Ｏ２００ｍｌで２回抽出する。一緒にしたエーテル
相をＭｇＳＯ4 で乾燥し、減圧濃縮する。得られた粗生
成物（０．２１ｇ）をＳｉＯ2 （シリカゲル６０，０．
０４０〜０．０６３ｍｍ）上にヘキサン／酢酸エチル
１：１でクロマトグラフィーを行い（W. Clark-Still
等, J. Org. Chem., 43, pp.2923, 1978）、個々の生成
物を３００ＭＨｚ１Ｈ−ＮＭＲで確認する。ミルベマイ
シンＡ4 を用い転化率４３％の別の試験において、該方
法では１３β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4 ７８％、
１４，１５−エポキシミルベマイシンＡ4 ２２％の割合
で生じる（ＨＰＬＣ分析）。
イシンＡ4 のヒドロキシル化のための培養条件 ４５０ｍｌの培地２中の、実施例Ｈ１で製造された２日
齢のストレプトマイセス・ヴィオラセンス予備培養菌に
ミルベマイシンＡ4 ０．２ｇを加え、全体を２８℃およ
び２５０ｒｐｍで震盪する。反応の過程をＨＰＬＣ（カ
ラム２５ｃｍ／０．５ｃｍ，溶離剤ヘキサン／ジメトキ
シエタン３：１，１ｍｌ／分，ＵＶ検出器２２０ｎｍ）
によりモニターする。４日間震盪後、および転化率３７
％で、７０％の１３β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4
および３０％の１４，１５−エポキシミルベマイシンＡ
4 が得られる。後処理のため、ジエチルエーテル（Ｅｔ
2 Ｏ）２００ｍｌを反応混合物に加え、全体をハイフロ
・スーパーセル（登録商標Hyflo Supercel）〔スーパー
セル(Super Cel) ；ケイソウ土, 精製およびカ焼物；主
要粒径２〜２５μｍ；フルカ・カタログ(Fluka Katalo
g) 番号５６６７８〕に通して濾過する。濾過残渣を注
意深くＥｔ2 Ｏ１００ｍｌ中で洗浄する。水相を各回Ｅ
ｔ2 Ｏ２００ｍｌで２回抽出する。一緒にしたエーテル
相をＭｇＳＯ4 で乾燥し、減圧濃縮する。得られた粗生
成物（０．２１ｇ）をＳｉＯ2 （シリカゲル６０，０．
０４０〜０．０６３ｍｍ）上にヘキサン／酢酸エチル
１：１でクロマトグラフィーを行い（W. Clark-Still
等, J. Org. Chem., 43, pp.2923, 1978）、個々の生成
物を３００ＭＨｚ１Ｈ−ＮＭＲで確認する。ミルベマイ
シンＡ4 を用い転化率４３％の別の試験において、該方
法では１３β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4 ７８％、
１４，１５−エポキシミルベマイシンＡ4 ２２％の割合
で生じる（ＨＰＬＣ分析）。
【００７２】実施例Ｈ３：２．５％ＤＭＳＯによる培地
３中のミルベマイシンＡ4 のヒドロキシル化 あるパラメータ〔例えばＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシ
ド）の濃度〕を変えることにより、反応生成物同士（１
３β−ヒドロキシ−および１４，１５−エポキシミルベ
マイシン）のバランスを変え、ヒドロキシ化合物を優勢
とすることは可能である。培地３（２００ｍｌ）中のス
トレプトマイセス・ヴィオラセンスの１日齢培養菌に、
ミルベマイシンＡ4 ０．２５ｇおよびＤＭＳＯ５ｍｌを
加え、全体を２８℃および２５０ｒｐｍで震盪する。３
日後、培地３をさらに５０ｍｌ加える。反応の過程をＨ
ＰＬＣ（カラムKontron LiSi 60,２５ｃｍ／０．５ｃ
ｍ，溶離剤ヘキサン／ジメトキシエタン３：１，１ｍｌ
／分，ＵＶ検出器２２０ｎｍ）によりモニターする。７
日間震盪し、転化率９１％となった後に、９２％の１３
β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4 および８％の１４，
１５−エポキシミルベマイシンＡ4 が得られる。
３中のミルベマイシンＡ4 のヒドロキシル化 あるパラメータ〔例えばＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシ
ド）の濃度〕を変えることにより、反応生成物同士（１
３β−ヒドロキシ−および１４，１５−エポキシミルベ
マイシン）のバランスを変え、ヒドロキシ化合物を優勢
とすることは可能である。培地３（２００ｍｌ）中のス
トレプトマイセス・ヴィオラセンスの１日齢培養菌に、
ミルベマイシンＡ4 ０．２５ｇおよびＤＭＳＯ５ｍｌを
加え、全体を２８℃および２５０ｒｐｍで震盪する。３
日後、培地３をさらに５０ｍｌ加える。反応の過程をＨ
ＰＬＣ（カラムKontron LiSi 60,２５ｃｍ／０．５ｃ
ｍ，溶離剤ヘキサン／ジメトキシエタン３：１，１ｍｌ
／分，ＵＶ検出器２２０ｎｍ）によりモニターする。７
日間震盪し、転化率９１％となった後に、９２％の１３
β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4 および８％の１４，
１５−エポキシミルベマイシンＡ4 が得られる。
【００７３】実施例Ｈ４：ミルベマイシンＡ3 およびミ
ルベマイシンＤのヒドロキシル化 同様の方法でミルベマイシンＡ3 およびミルベマイシン
Ｄが反応する場合、例えば転化率１０％では１３β−ヒ
ドロキシミルベマイシンＡ3 ４０％および１４，１５−
エポキシミルベマイシンＡ3 ６０％の割合で得られ、ま
た、転化率１３％では１３β−ヒドロキシミルベマイシ
ンＤ２９％および１４，１５−エポキシミルベマイシン
Ｄ７１％の割合で得られる（ＨＰＬＣ分析）。
ルベマイシンＤのヒドロキシル化 同様の方法でミルベマイシンＡ3 およびミルベマイシン
Ｄが反応する場合、例えば転化率１０％では１３β−ヒ
ドロキシミルベマイシンＡ3 ４０％および１４，１５−
エポキシミルベマイシンＡ3 ６０％の割合で得られ、ま
た、転化率１３％では１３β−ヒドロキシミルベマイシ
ンＤ２９％および１４，１５−エポキシミルベマイシン
Ｄ７１％の割合で得られる（ＨＰＬＣ分析）。
【００７４】実施例Ｈ５：ミルベマイシンＡ4 −５−オ
キシムのヒドロキシル化 上記と同様の方法で、１３−デオキシ−２２，２３−ジ
ヒドロ−Ｃ−０７６−Ｂｌａ−アグリコンおよびＡが次
式：
キシムのヒドロキシル化 上記と同様の方法で、１３−デオキシ−２２，２３−ジ
ヒドロ−Ｃ−０７６−Ｂｌａ−アグリコンおよびＡが次
式：
【化４４】 を表す式Ｉの化合物に相当する１３β−ヒドロキシ化合
物に変えることも可能である。培地３（２００ｍｌ）中
のストレプトマイセス・ヴィオラセンスの１日齢培養菌
に、ミルベマイシンＡ4 −５−オキシム０．２５ｇおよ
びジメチルスルホキシド５ｍｌを加え、全体を２８℃お
よび２５０ｒｐｍで震盪する。反応過程を薄層クロマト
グラフィー（予め被覆されたプレート状シリカゲル６０
Ｆメルク(Merk)，溶離剤ヘキサン／酢酸エチル１：１）
によりモニターする。９日間震盪後は、それ以上の反応
を検出することはできない。処理のために、反応混合物
にジクロロメタン（ＣＨ2 Ｃｌ2 ）１００ｍｌを加え、
全体をハイフロ・スーパーセル（登録商標Hyflo Superc
el）に通して濾過する。濾過残渣をＣＨ2 Ｃｌ2 ５０ｍ
ｌ中で洗浄する。水相をＣＨ2 Ｃｌ2 各回１００ｍｌで
３回抽出する。有機相を一緒にし、ＭｇＳＯ4 で乾燥
し、減圧濃縮する。得られた粗生成物をＳｉＯ2 （シリ
カゲル６０メルク，０．０４０〜０．０６３ｍｍ）上に
ヘキサン／酢酸エチル１：１でクロマトグラフィーを行
う。１３β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4 −５−オキ
シムが２６％の収率で得られる。
物に変えることも可能である。培地３（２００ｍｌ）中
のストレプトマイセス・ヴィオラセンスの１日齢培養菌
に、ミルベマイシンＡ4 −５−オキシム０．２５ｇおよ
びジメチルスルホキシド５ｍｌを加え、全体を２８℃お
よび２５０ｒｐｍで震盪する。反応過程を薄層クロマト
グラフィー（予め被覆されたプレート状シリカゲル６０
Ｆメルク(Merk)，溶離剤ヘキサン／酢酸エチル１：１）
によりモニターする。９日間震盪後は、それ以上の反応
を検出することはできない。処理のために、反応混合物
にジクロロメタン（ＣＨ2 Ｃｌ2 ）１００ｍｌを加え、
全体をハイフロ・スーパーセル（登録商標Hyflo Superc
el）に通して濾過する。濾過残渣をＣＨ2 Ｃｌ2 ５０ｍ
ｌ中で洗浄する。水相をＣＨ2 Ｃｌ2 各回１００ｍｌで
３回抽出する。有機相を一緒にし、ＭｇＳＯ4 で乾燥
し、減圧濃縮する。得られた粗生成物をＳｉＯ2 （シリ
カゲル６０メルク，０．０４０〜０．０６３ｍｍ）上に
ヘキサン／酢酸エチル１：１でクロマトグラフィーを行
う。１３β−ヒドロキシミルベマイシンＡ4 −５−オキ
シムが２６％の収率で得られる。
【００７５】実施例Ｈ６：攪拌槽反応器中でのミルベマ
イシンＡ4 のヒドロキシル化用培養条件 式ＩＩＩで表される化合物のヒドロキシル化反応を行う
ために、ＭＢＲ（スイス）により市販されている攪拌槽
反応器型の生体反応器(Modell Mini) を使用する。これ
らの反応器は２リットルの容量を有し、ディスク型の攪
拌機を備えている。通気は、無菌濾過圧縮空気により行
う。発酵開始前、反応器と培地を別々にオートクレーブ
処理する。次いで無菌条件下、無菌の２Ｎ ＮａＯＨ溶
液を加えてｐＨ値をｐＨ７ないしｐＨ７．４に調整す
る。発酵培地を冷却した後、ストレプトマイセス・ヴィ
オラセンスの３日齢予備培養菌２００ｍｌを加え、また
ＤＭＳＯ１０ｍｌ中に溶解したミルベマイシンＡ4 １．
５ｇを加えて発酵を開始させる。製造発酵槽への接触も
また無菌条件下で行う。発酵は温度２８℃および通気割
合０．４４ｖｖｍで行う。攪拌速度は４００ｒｐｍであ
る。全培養期間を通じて、毎日１００ｍｌの新鮮培地３
を無菌条件下で発酵槽に入れる。全発酵期間中、反応過
程をクロマトグラフィー分析（ＨＰＬＣ）でモニターす
る。全９日間の培養後、発酵の開始時に加えたミルベマ
イシンＡ4 の８６％が反応していた。反応したミルベマ
イシンＡ4 の６１％は１３β−ヒドロキシミルベマイシ
ンとして確認され、１４，１５−エポキシミルベマイシ
ンとしては８％であった。反応が完了した時、反応混合
物にメチレンクロライド（ＣＨ2 Ｃｌ2 ）４００ｍｌを
加え、全体をハイフロ・スーパーセル（登録商標Hyflo
Supercel）に通して濾過する。この方法によって得られ
た濾液を続いてＣＨ2 Ｃｌ2 で抽出する。４８時間後、
有機層を分離し、ＭｇＳＯ4 で乾燥し、減圧濃縮する。
得られた粗生成物を次に実施例Ｈ２に記載した方法に従
い、クロマトグラフィー法によって精製する。
イシンＡ4 のヒドロキシル化用培養条件 式ＩＩＩで表される化合物のヒドロキシル化反応を行う
ために、ＭＢＲ（スイス）により市販されている攪拌槽
反応器型の生体反応器(Modell Mini) を使用する。これ
らの反応器は２リットルの容量を有し、ディスク型の攪
拌機を備えている。通気は、無菌濾過圧縮空気により行
う。発酵開始前、反応器と培地を別々にオートクレーブ
処理する。次いで無菌条件下、無菌の２Ｎ ＮａＯＨ溶
液を加えてｐＨ値をｐＨ７ないしｐＨ７．４に調整す
る。発酵培地を冷却した後、ストレプトマイセス・ヴィ
オラセンスの３日齢予備培養菌２００ｍｌを加え、また
ＤＭＳＯ１０ｍｌ中に溶解したミルベマイシンＡ4 １．
５ｇを加えて発酵を開始させる。製造発酵槽への接触も
また無菌条件下で行う。発酵は温度２８℃および通気割
合０．４４ｖｖｍで行う。攪拌速度は４００ｒｐｍであ
る。全培養期間を通じて、毎日１００ｍｌの新鮮培地３
を無菌条件下で発酵槽に入れる。全発酵期間中、反応過
程をクロマトグラフィー分析（ＨＰＬＣ）でモニターす
る。全９日間の培養後、発酵の開始時に加えたミルベマ
イシンＡ4 の８６％が反応していた。反応したミルベマ
イシンＡ4 の６１％は１３β−ヒドロキシミルベマイシ
ンとして確認され、１４，１５−エポキシミルベマイシ
ンとしては８％であった。反応が完了した時、反応混合
物にメチレンクロライド（ＣＨ2 Ｃｌ2 ）４００ｍｌを
加え、全体をハイフロ・スーパーセル（登録商標Hyflo
Supercel）に通して濾過する。この方法によって得られ
た濾液を続いてＣＨ2 Ｃｌ2 で抽出する。４８時間後、
有機層を分離し、ＭｇＳＯ4 で乾燥し、減圧濃縮する。
得られた粗生成物を次に実施例Ｈ２に記載した方法に従
い、クロマトグラフィー法によって精製する。
【００７６】第１表：式Ｉで表される化合物の典型的代
表例
表例
【表３】
【００７７】第２表：式ＩＩで表される化合物の典型的
代表例
代表例
【表４】
【００７８】製剤例（％は全て重量％である） 実施例Ｆ１：水和剤 a) b) c) 表の化合物 25% 50% 75% リグノスルホン酸ナトリウム 5% 5% − ラウリル硫酸ナトリウム 3% − 5% ジイソブチルナフタレンスルホン酸ナトリウム − 6% 10% オクチルフェノールポリエチレングリコールエーテル （エチレンオキシド７〜８モル) − 2% − 高分散ケイ酸 5% 10% 10% カオリン 62% 27% − 有効成分を助剤と十分に混合した後、混合物を適当なミ
ル中で十分に摩砕すると、水で希釈することにより所望
濃度の懸濁液を得ることのできる水和剤が得られる。
ル中で十分に摩砕すると、水で希釈することにより所望
濃度の懸濁液を得ることのできる水和剤が得られる。
【００７９】 実施例Ｆ２：乳剤原液 表の化合物 10% オクチルフェノールポリエチレングリコールエーテル （エチレンオキシド４〜５モル) 3% ドデシルベンゼンスルホン酸カルシウム 3% ヒマシ油ポリグリコールエーテル （エチレンオキシド３６モル) 4% シクロヘキサノン 30% キシレン混合物 50% この乳剤原液を水で希釈することにより、あらゆる所望
の濃度の乳剤が得られる。
の濃度の乳剤が得られる。
【００８０】 有効成分を担体と混合し、そして得られる混合物を適当
なミル中で摩砕することにより、そのまま使用しうる粉
剤を得る。
なミル中で摩砕することにより、そのまま使用しうる粉
剤を得る。
【００８１】実施例Ｆ４：押出し粒剤 表の化合物 10% リグノスルホン酸ナトリウム 2% カルボキシメチルセルロース 1% カオリン 87% 有効成分を助剤と混合および摩砕して、そして該混合物
を水で湿めらせる。この混合物を押出し、その後空気流
中で乾燥する。
を水で湿めらせる。この混合物を押出し、その後空気流
中で乾燥する。
【００８２】 実施例Ｆ５：錠剤または丸薬 Ｉ 表の化合物 33.00% メチルセルロース 0.80% 高分散ケイ酸 0.80% トウモロコシデンプン 8.40% メチルセルロースを水中で攪拌し、そして膨潤させる。
その後、ケイ酸を加えて攪拌して均質懸濁液を得る。式
Ｉで表される化合物およびトウモロコシデンプンを混合
し、そして水性懸濁液を混合物に添加し、混練してペー
スト状とする。このペーストを１２Ｍシーブに通して造
粒し、そして該粒状物を乾燥させる。 II 結晶質ラクトース 22.50% トウモロコシデンプン 17.00% 微結晶質セルロース 16.50% ステアリン酸マグネシウム 1.00% ４種の助剤全てを完全に混合する。相ＩおよびIIを混合
し、そして圧縮して錠剤または丸薬とする。
その後、ケイ酸を加えて攪拌して均質懸濁液を得る。式
Ｉで表される化合物およびトウモロコシデンプンを混合
し、そして水性懸濁液を混合物に添加し、混練してペー
スト状とする。このペーストを１２Ｍシーブに通して造
粒し、そして該粒状物を乾燥させる。 II 結晶質ラクトース 22.50% トウモロコシデンプン 17.00% 微結晶質セルロース 16.50% ステアリン酸マグネシウム 1.00% ４種の助剤全てを完全に混合する。相ＩおよびIIを混合
し、そして圧縮して錠剤または丸薬とする。
【００８３】有効化合物またはそれを含有する組成物を
飼育動物および生産性家畜、例えばウシ、ヒツジ、ヤ
ギ、ネコおよびイヌ等の内部寄生線虫、条虫類および吸
虫類を防除するために使用するならば、これらは動物に
対して１回または反復投与することができる。動物の種
類によっては各回の投与量は体重１ｋｇに対して０．１
ないし１０ｍｇの範囲内が好ましい。長期間の投与によ
ってより良好な効果が得られることが多いが、より少な
い総投与量でも十分である。この化合物またはそれを含
有する組成物は飼料または飲料に添加することもでき
る。調製された飼料に０．００５ないし０．１重量％の
濃度で有効成分を含有するのが好ましい。組成物は溶
液、乳剤、懸濁液、粉剤、錠剤、丸薬またはカプセル剤
の形で動物に経口投与することができる。もし、溶液ま
たは乳剤の物理的および薬理学的性質が注射を許容する
ならば、式ＩもしくはＩＩの化合物またはそれを含有す
る組成物を動物に、例えば皮下注射することもできる
し、反芻胃内に投薬することもできるし、または動物の
体内に注入方法によって施用することもできる。嘗め塩
（家畜用岩塩）または糖蜜塊の方法で投与することも可
能である。
飼育動物および生産性家畜、例えばウシ、ヒツジ、ヤ
ギ、ネコおよびイヌ等の内部寄生線虫、条虫類および吸
虫類を防除するために使用するならば、これらは動物に
対して１回または反復投与することができる。動物の種
類によっては各回の投与量は体重１ｋｇに対して０．１
ないし１０ｍｇの範囲内が好ましい。長期間の投与によ
ってより良好な効果が得られることが多いが、より少な
い総投与量でも十分である。この化合物またはそれを含
有する組成物は飼料または飲料に添加することもでき
る。調製された飼料に０．００５ないし０．１重量％の
濃度で有効成分を含有するのが好ましい。組成物は溶
液、乳剤、懸濁液、粉剤、錠剤、丸薬またはカプセル剤
の形で動物に経口投与することができる。もし、溶液ま
たは乳剤の物理的および薬理学的性質が注射を許容する
ならば、式ＩもしくはＩＩの化合物またはそれを含有す
る組成物を動物に、例えば皮下注射することもできる
し、反芻胃内に投薬することもできるし、または動物の
体内に注入方法によって施用することもできる。嘗め塩
（家畜用岩塩）または糖蜜塊の方法で投与することも可
能である。
【００８４】生物学的実施例 実施例Ｂ１：スポドプテラ・リットラリス(Spodoptera
littoralis) に対する胃毒殺虫作用 鉢植えのワタ植物が第５葉期の時に試験化合物を３、１
２．５または５０ｐｐｍ含有するアセトン／水溶液を噴
霧する。塗膜が乾燥したら、スポドプテラ・リットラリ
スの幼虫（Ｌ1 段階）約３０匹をこの植物に生息させ
る。各試験化合物および試験種について２本の植物を使
用する。試験は約２４℃、相対湿度６０％で実施する。
瀕死の昆虫、幼虫の成長および食害等の評価およひ中間
評価は２４時間、４８時間および７２時間後に行う。式
ＩおよびＩＩで表される化合物（第１表および第２
表）、特に本発明の新規オキシム化合物は１２．５ｐｐ
ｍの施用濃度で１００％効果的であった。
littoralis) に対する胃毒殺虫作用 鉢植えのワタ植物が第５葉期の時に試験化合物を３、１
２．５または５０ｐｐｍ含有するアセトン／水溶液を噴
霧する。塗膜が乾燥したら、スポドプテラ・リットラリ
スの幼虫（Ｌ1 段階）約３０匹をこの植物に生息させ
る。各試験化合物および試験種について２本の植物を使
用する。試験は約２４℃、相対湿度６０％で実施する。
瀕死の昆虫、幼虫の成長および食害等の評価およひ中間
評価は２４時間、４８時間および７２時間後に行う。式
ＩおよびＩＩで表される化合物（第１表および第２
表）、特に本発明の新規オキシム化合物は１２．５ｐｐ
ｍの施用濃度で１００％効果的であった。
【００８５】実施例Ｂ２：植物損傷性ダニ：ＯＰ−感受
性ナミハダニ(Tetranychus urticae)に対する作用 試験開始１６時間前にマメ植物(Phaseolus vulgaris)の
第１葉にナミハダニを大量に発生させた葉片によって感
染させる。この葉片を除去し、あらゆる成長段階のナミ
ハダニが蔓延している植物に試験化合物を０．８ｐｐｍ
含有する溶液を滴がしたたり落ちるまで噴霧する。温室
内の温度は約２５℃である。移動状態（成虫および蛹）
および卵の百分率を７日後に立体顕微鏡下で評価する。
式ＩおよびＩＩで表される化合物、特に本発明の新規オ
キシム化合物は使用した有効成分濃度で６０％ないし１
００％のダニを死亡に到らしめた。
性ナミハダニ(Tetranychus urticae)に対する作用 試験開始１６時間前にマメ植物(Phaseolus vulgaris)の
第１葉にナミハダニを大量に発生させた葉片によって感
染させる。この葉片を除去し、あらゆる成長段階のナミ
ハダニが蔓延している植物に試験化合物を０．８ｐｐｍ
含有する溶液を滴がしたたり落ちるまで噴霧する。温室
内の温度は約２５℃である。移動状態（成虫および蛹）
および卵の百分率を７日後に立体顕微鏡下で評価する。
式ＩおよびＩＩで表される化合物、特に本発明の新規オ
キシム化合物は使用した有効成分濃度で６０％ないし１
００％のダニを死亡に到らしめた。
【００８６】実施例Ｂ３：ルシリア・セリカータ(Lucil
ia sericata)のＬ1 段階幼虫に対する作用 試験化合物の水性懸濁液１ｍｌを特定の幼虫培養液３ｍ
ｌと約５０℃で混合して有効成分２５０ｐｐｍまたは１
２５ｐｐｍ含有する均一な組成物を得る。約３０匹のル
シリア・セリカータ幼虫（Ｌ1 ）を各有効成分含有試験
管に入れる。４日後に死虫率を調べる。式ＩおよびＩＩ
で表される化合物はルシリア・セリカータのＬ1 段階の
幼虫に対して良好な作用を示した。本発明の新規オキシ
ム化合物はわずかに２５０ｒｐｍの施用濃度で１００％
の効果を示した。
ia sericata)のＬ1 段階幼虫に対する作用 試験化合物の水性懸濁液１ｍｌを特定の幼虫培養液３ｍ
ｌと約５０℃で混合して有効成分２５０ｐｐｍまたは１
２５ｐｐｍ含有する均一な組成物を得る。約３０匹のル
シリア・セリカータ幼虫（Ｌ1 ）を各有効成分含有試験
管に入れる。４日後に死虫率を調べる。式ＩおよびＩＩ
で表される化合物はルシリア・セリカータのＬ1 段階の
幼虫に対して良好な作用を示した。本発明の新規オキシ
ム化合物はわずかに２５０ｒｐｍの施用濃度で１００％
の効果を示した。
【００８７】実施例Ｂ４：ボーフィルス・ミクロプルス
ビアッラ種(Boophilus microplus;Biarra strain)に
対する殺ダニ作用 ＰＶＣ板に粘着テープを垂直に貼りつけ、十分に飽食し
たメスのボーフィルス・ミクロプルス（ビアッラ種）１
０匹を、背側を板に向け１列に順に固定する。試験化合
物をダニ１匹あたり１、０．５または０．１ｍｇの量で
溶解したポリエチレングリコールとアセトンの１：１混
合物を含有する液体１μｌを注射針から各々のダニに注
射する。対照ダニには試験化合物を含有しない液体を注
射する。この処置後、ダニを支持台から解放し、正常な
条件下約２８℃、相対湿度８０％の昆虫飼育箱の中で、
産卵するまで、そして対照ダニの卵から幼虫が孵化する
まで保持する。試験化合物の有効性は、ＩＲ90、すなわ
ち１０匹のメスダニのうち、９匹（９０％）が３０日後
でも幼虫が孵化し得ない卵を産むのに有効な投与量につ
いて測定する。式ＩおよびＩＩで表される化合物（第１
表および第２表）はボーフィルス・ミクロプルスに対す
るＩＲ90が１μｇで、良好な有効性を示す。本発明の新
規オキシム化合物は上記ＩＲ90値まで非常に低い施用濃
度（０．５μｇ）で達する。
ビアッラ種(Boophilus microplus;Biarra strain)に
対する殺ダニ作用 ＰＶＣ板に粘着テープを垂直に貼りつけ、十分に飽食し
たメスのボーフィルス・ミクロプルス（ビアッラ種）１
０匹を、背側を板に向け１列に順に固定する。試験化合
物をダニ１匹あたり１、０．５または０．１ｍｇの量で
溶解したポリエチレングリコールとアセトンの１：１混
合物を含有する液体１μｌを注射針から各々のダニに注
射する。対照ダニには試験化合物を含有しない液体を注
射する。この処置後、ダニを支持台から解放し、正常な
条件下約２８℃、相対湿度８０％の昆虫飼育箱の中で、
産卵するまで、そして対照ダニの卵から幼虫が孵化する
まで保持する。試験化合物の有効性は、ＩＲ90、すなわ
ち１０匹のメスダニのうち、９匹（９０％）が３０日後
でも幼虫が孵化し得ない卵を産むのに有効な投与量につ
いて測定する。式ＩおよびＩＩで表される化合物（第１
表および第２表）はボーフィルス・ミクロプルスに対す
るＩＲ90が１μｇで、良好な有効性を示す。本発明の新
規オキシム化合物は上記ＩＲ90値まで非常に低い施用濃
度（０．５μｇ）で達する。
【００８８】実施例Ｂ５：線虫に感染したヒツジについ
ての試験〔ヘモンクス・コンコルトゥス(Haemonchus co
ncortus)およびトコストロンギルス・コルブリホルミス
(Trichostrongylus colubriformis)〕 人工的にヘモンクス・コンコルトゥスおよびトコストロ
ンギルス・コルブリホルミスに感染させたヒツジに懸濁
液の形で胃ゾンデまたは第１胃内注射によって試験化合
物を投与する。各投与について１ないし３匹のヒツジを
使用する。各ヒツジは体重１ｋｇあたり１ｍｇまたは
０．５ｍｇの単独投与量で１回だけ処置する。排泄物中
に排泄された線虫の卵の数を処置前と処置後について比
較することによって評価する。対照として、同時に、同
じ方法で感染させた未処置のヒツジを使用する。未処置
で感染させたヒツジの群と比較して、第１表または第２
表の化合物のうちの１種によって１ｍｇ／ｋｇで処置し
たヒツジでは線虫の蔓延が６０ないし１００％減少した
（１００％＝排泄物中の線虫卵の完全な減少）。
ての試験〔ヘモンクス・コンコルトゥス(Haemonchus co
ncortus)およびトコストロンギルス・コルブリホルミス
(Trichostrongylus colubriformis)〕 人工的にヘモンクス・コンコルトゥスおよびトコストロ
ンギルス・コルブリホルミスに感染させたヒツジに懸濁
液の形で胃ゾンデまたは第１胃内注射によって試験化合
物を投与する。各投与について１ないし３匹のヒツジを
使用する。各ヒツジは体重１ｋｇあたり１ｍｇまたは
０．５ｍｇの単独投与量で１回だけ処置する。排泄物中
に排泄された線虫の卵の数を処置前と処置後について比
較することによって評価する。対照として、同時に、同
じ方法で感染させた未処置のヒツジを使用する。未処置
で感染させたヒツジの群と比較して、第１表または第２
表の化合物のうちの１種によって１ｍｇ／ｋｇで処置し
たヒツジでは線虫の蔓延が６０ないし１００％減少した
（１００％＝排泄物中の線虫卵の完全な減少）。
【００８９】実施例Ｂ６：マメアブラムシ(Aphis cracc
ivora)に対する接触作用 全ての成長段階の当該アブラムシがはびこった幼若エン
ドウ植物に、供試化合物の乳剤原液から製造された５０
ｐｐｍ、２５ｐｐｍまたは１２．５ｐｐｍで有効成分を
含有する溶液を噴霧する。３日後、少なくとも８０％の
アブラムシが死亡または植物からの落下に到ったかによ
り評価を行う。組成物はこの活性のレベルでのみ有効で
あると評価される。各表の式ＩおよびＩＩで表される化
合物、特にまた本発明の新規オキシム化合物は１２．５
ｐｐｍないし２５ｐｐｍの低濃度で完全な殺虫（＝１０
０％）を示した。
ivora)に対する接触作用 全ての成長段階の当該アブラムシがはびこった幼若エン
ドウ植物に、供試化合物の乳剤原液から製造された５０
ｐｐｍ、２５ｐｐｍまたは１２．５ｐｐｍで有効成分を
含有する溶液を噴霧する。３日後、少なくとも８０％の
アブラムシが死亡または植物からの落下に到ったかによ
り評価を行う。組成物はこの活性のレベルでのみ有効で
あると評価される。各表の式ＩおよびＩＩで表される化
合物、特にまた本発明の新規オキシム化合物は１２．５
ｐｐｍないし２５ｐｐｍの低濃度で完全な殺虫（＝１０
０％）を示した。
【００９０】実施例Ｂ７：エジプトヤブ蚊(Aedes aegyp
ti) に対する殺幼虫作用 試験化合物の０．１重量％アセトン溶液をピペットでビ
ーカー中の水１５０ｍｌの表面に、１０ｐｐｍ、３．３
ｐｐｍおよび１．６ｐｐｍの濃度を与えるのに十分な量
添加する。アセトンが蒸発したら、３日齢のエジプトヤ
ブ蚊３０ないし４０匹を各ビーカーに入れる。１、２お
よび５日後の死虫数を数える。この試験において各表中
の式ＩおよびＩＩで表される化合物は３．３ないし１０
ｐｐｍの低濃度でさえ、１日後に全ての幼虫を完全に死
亡させた。
ti) に対する殺幼虫作用 試験化合物の０．１重量％アセトン溶液をピペットでビ
ーカー中の水１５０ｍｌの表面に、１０ｐｐｍ、３．３
ｐｐｍおよび１．６ｐｐｍの濃度を与えるのに十分な量
添加する。アセトンが蒸発したら、３日齢のエジプトヤ
ブ蚊３０ないし４０匹を各ビーカーに入れる。１、２お
よび５日後の死虫数を数える。この試験において各表中
の式ＩおよびＩＩで表される化合物は３．３ないし１０
ｐｐｍの低濃度でさえ、１日後に全ての幼虫を完全に死
亡させた。
【００９１】実施例Ｂ８：デルマニッサス・ガリナエ(D
ermanyssus gallinae)に対する殺ダニ作用 試験溶液２ないし３ｍｌ（試験化合物１００，１０，１
および０．１ｐｐｍ）を上部の開いたガラス容器中に入
れ、異なった発育段階にある約２００匹のダニをこの容
器中に入れる。その後、該容器を脱脂綿でふたをして、
ダニが完全に湿るまで１０分間一様に震盪する。次い
で、過剰の試験溶液が脱脂綿によって吸収されるまで、
容器を逆さにする。再度容器を逆さにして、処理したダ
ニを試験化合物の効果を評価するため、実験室条件下で
３日間観察し続ける。死虫率は効果に対する基準であ
る。式ＩおよびＩＩで表される化合物は１００ｐｐｍの
濃度で１００％の殺虫効果を示した。
ermanyssus gallinae)に対する殺ダニ作用 試験溶液２ないし３ｍｌ（試験化合物１００，１０，１
および０．１ｐｐｍ）を上部の開いたガラス容器中に入
れ、異なった発育段階にある約２００匹のダニをこの容
器中に入れる。その後、該容器を脱脂綿でふたをして、
ダニが完全に湿るまで１０分間一様に震盪する。次い
で、過剰の試験溶液が脱脂綿によって吸収されるまで、
容器を逆さにする。再度容器を逆さにして、処理したダ
ニを試験化合物の効果を評価するため、実験室条件下で
３日間観察し続ける。死虫率は効果に対する基準であ
る。式ＩおよびＩＩで表される化合物は１００ｐｐｍの
濃度で１００％の殺虫効果を示した。
【００９２】
【表５】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:525） (72)発明者 ハンス−ペーター シェール スイス国，4147 エッシュ，エッグフルー ヴェーク 11 (72)発明者 ブルーノ フライ スイス国，4410 リースタル，ビュンテン ストラーセ 16 (72)発明者 ペーター マイエンフイッシュ スイス国，4147 エッシュ，トラウゴット マイヤー−ストラーセ ５ (72)発明者 アンソニー コルネリウス オーサリバン スイス国，4055 バーゼル，ハプスブルガ ーストラーセ 38
Claims (25)
- 【請求項１】 液相中に溶解した次式ＩＩＩ： 【化１】 （式中、Ｒ3 はＲ1 ’を、またＲ4 はＡ’を表し、そし
てＲ1 ’およびＡ’は下記式ＩＩで定義する意味を表
す）で表されるミルベマイシンに、１４，１５−エポキ
シ化反応を行うことのできるストレプトマイセス種の微
生物を該１４，１５−エポキシ化反応を行うのに十分な
時間接触させることを特徴とする次式ＩＩ： 【化２】 〔式中、 Ｒ1 ’はメチル基、エチル基、イソプロピル基または第
二ブチル基を表すか、または次式： 【化３】 （式中、Ｘはメチル基、エチル基またはイソプロピル基
を表す）で表される基を表し、 Ａ’は次式： 【化４】 （式中、Ｒ2 は水素原子、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 Ｏ−Ｃ
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式： 【化５】 で表される基を表す〕で表される１４，１５−エポキシ
−ミルベマイシンの微生物利用による一段階製造方法。 - 【請求項２】 液相中に溶解した次式ＩＩＩ： 【化６】 （式中、 Ｒ3 はメチル基、エチル基、イソプロピル基または第二
ブチル基を表し、 Ｒ4 は次式： 【化７】 （式中、Ｒ2 は水素原子、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 Ｏ−Ｃ
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式： 【化８】 で表される基を表す表す）で表されるミルベマイシン
に、１４，１５−エポキシ化反応を行うことのできるス
トレプトマイセス種の微生物を該１４，１５−エポキシ
化反応を行うのに十分な時間接触させることを特徴とす
る次式ＩＩ： 【化９】 〔式中、 Ｒ1 ’はメチル基、エチル基、イソプロピル基または第
二ブチル基を表し、そしてＡ’は次式： 【化１０】 （式中、Ｒ2 は水素原子、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ2 Ｏ−Ｃ
（Ｏ）−ＣＨ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ
Ｈ2 ＣＨ2 −ＣＯＯＨを表す）で表される基または次
式： 【化１１】 で表される基を表す〕で表される１４，１５−エポキシ
−ミルベマイシンの微生物利用による請求項１記載の一
段階製造方法。 - 【請求項３】 上記ストレプトマイセス種の微生物がス
トレプトマイセス・ジアスタトクロモゲネスである請求
項２記載の製造方法。 - 【請求項４】 上記ストレプトマイセス種の微生物がス
トレプトマイセス・ジアスタトクロモゲネスＡＴＣＣ
３１５６１である請求項３記載の製造方法。 - 【請求項５】 上記ストレプトマイセス種の微生物がス
トレプトマイセス・ヴィオラセンスである請求項２記載
の製造方法。 - 【請求項６】 上記ストレプトマイセス種の微生物がス
トレプトマイセス・ヴィオラセンスＡＴＣＣ ３１５６
０である請求項５記載の製造方法。 - 【請求項７】 上記ストレプトマイセス種の微生物が崩
壊形態の死菌である請求項１記載の製造方法。 - 【請求項８】 上記ストレプトマイセス種の微生物の胞
子が使用される請求項１記載の製造方法。 - 【請求項９】 上記ストレプトマイセス種の微生物が固
定化された形態にある請求項１記載の製造方法。 - 【請求項１０】 上記エポキシ化反応が生体反応器中で
行われる請求項１記載の製造方法。 - 【請求項１１】 上記生体反応器が攪拌槽反応器である
請求項１０記載の製造方法。 - 【請求項１２】 ａ）僅少に限定された容易に同化しえ
る炭素源と窒素源及び、他の必須成分として、ビタミ
ン、金属イオンおよび微量元素を含む複合栄養培地中で
上記微生物を培養し、 ｂ）細胞濃度がエポキシ化反応のために最適となること
を保証する適当な時間を経てから式ＩＩＩで表される化
合物を加え、 ｃ）エポキシ化反応が遂行されるのに十分な時間、スト
レプトマイセス種の微生物およびその基質（式ＩＩＩで
表される化合物）を一緒に保温し、そして ｄ）それ自体公知である方法によって反応生成物を単離
することからなる請求項１記載の製造方法。 - 【請求項１３】 プロセス温度が２０ないし３２℃であ
る請求項１２記載の製造方法。 - 【請求項１４】 培地のｐＨ値がｐＨ４ないしｐＨ８で
ある請求項１２記載の製造方法。 - 【請求項１５】 上記複合栄養培地が、 ａ）窒素源として：酵母エキス、酵母水解物、酵母自己
分解物、酵母細胞、ダイズミール、トウモロコシミー
ル、オートミール、エダミン、ペプトン、カゼイン水解
物、コーンスチープリカー、肉エキスまたは他の容易に
同化し得る窒素源、 ｂ）炭素源として：グルコース、ラクトース、スクロー
ス、デキストロース、マルトース、デンプン、セレロー
ス、セルロース、麦芽エキスまたはあらゆる他の容易に
同化し得る炭素源、 ｃ）ビタミンとして：チアミン、ビオチン、ニコチン
酸、リン酸ピリドキサールおよび他の必須ビタミン、 ｄ）無機金属イオンとして：Ｎａ+ ，Ｋ+ ，Ｃａ2+，Ｍ
ｇ2+，ＮＨ4 + ，ＰＯ4 3-，ＳＯ4 2-，Ｃｌ- ，ＣＯ3
2-および塩を形成している他の必須金属イオン、および ｅ）微量元素として：Ｍｎ2+，Ｃｏ2+，Ｚｎ2+及び塩を
形成している他の必須微量金属元素を、個々にまたは組
み合わせて、最適な細胞成長のために、および最適な反
応条件を用意するために必要な濃度で含む請求項１２記
載の製造方法。 - 【請求項１６】 窒素源の濃度が０．１ｇ／ｌないし６
ｇ／ｌの範囲内である請求項１１記載の製造方法。 - 【請求項１７】 炭素源の濃度が１．０ｇ／ｌないし２
５ｇ／ｌの範囲内である請求項１１記載の製造方法。 - 【請求項１８】 次式ＩＩ： 【化１２】 〔式中、 Ｒ1 ’はメチル基、エチル基、イソプロピル基または第
二ブチル基を表すか、または次式： 【化１３】 （式中、Ｘはメチル基、エチル基またはイソプロピル基
を表す）で表される基を表し、 Ａ’は次式： 【化１４】 で表される基を表す〕で表される化合物。 - 【請求項１９】 式ＩＩ中、Ｒ1 ’がメチル基、エチル
基、イソプロピル基または第二ブチル基を表し、そして
Ａ’が次式： 【化１５】 で表される基を表す請求項１８記載の化合物。 - 【請求項２０】 式ＩＩ中、Ｒ1 ’がメチル基またはエ
チル基を表し、そしてＡ’が次式： 【化１６】 で表される基を表す請求項１９記載の化合物。 - 【請求項２１】 以下の群：１４，１５−エポキシ−５
−オキシイミノ−ミルベマイシンＡ4 、１４，１５−エ
ポキシ−５−オキシイミノ−ミルベマイシンＡ3 、１
４，１５−エポキシ−５−オキシイミノ−ミルベマイシ
ンＤから選択される請求項１８記載の化合物。 - 【請求項２２】 次式ＩＩ： 【化１７】 〔式中、 Ｒ1 ’はメチル基、エチル基、イソプロピル基または第
二ブチル基を表すか、または次式： 【化１８】 （式中、Ｘはメチル基、エチル基またはイソプロピル基
を表す）で表される基を表し、 Ａ’は次式： 【化１９】 で表される基を表す〕で表される化合物の少なくとも１
種を慣用の担体、分散剤または担体および分散剤ととも
に含む外部−および内部−寄生体および昆虫に対する有
害生物防除組成物。 - 【請求項２３】 次式ＩＩ： 【化２０】 〔式中、 Ｒ1 ’はメチル基、エチル基、イソプロピル基または第
二ブチル基を表し、 Ａ’は次式： 【化２１】 で表される基を表す〕で表される化合物の少なくとも１
種を慣用の担体、分散剤または担体および分散剤ととも
に含む請求項２２記載の外部−および内部−寄生体およ
び昆虫に対する有害生物防除組成物。 - 【請求項２４】 動物の体内または体外に、植物の体内
または体外に、またはそれらの生育環境に、請求項１８
記載の式ＩＩで表される化合物の有害生物防除有効量を
施用することからなる、動物および植物の有害生物防除
の方法。 - 【請求項２５】 動物の体内または体外に、植物の体内
または体外に、またはそれらの生育環境に、請求項１９
記載の式ＩＩで表される化合物の有害生物防除有効量を
施用することからなる、動物および植物の有害生物防除
の方法。
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