JPH1081685A - 高い親油性および抗虚血特性を有するエリトロ−ヒドロキシノニルアデニン類似体 - Google Patents
高い親油性および抗虚血特性を有するエリトロ−ヒドロキシノニルアデニン類似体Info
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- JPH1081685A JPH1081685A JP2769197A JP2769197A JPH1081685A JP H1081685 A JPH1081685 A JP H1081685A JP 2769197 A JP2769197 A JP 2769197A JP 2769197 A JP2769197 A JP 2769197A JP H1081685 A JPH1081685 A JP H1081685A
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）を阻害し
得る薬剤を提供する。 【解決手段】 下記分子構造： ［式中、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素原子
またはヒドロキシル基以外の化学的部分であり、エリト
ロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体を、
薬理学的に許容し得かつ非毒性であり、細胞培養試験に
おいて、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９
−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］
アデニンよりもさらに有効に、ヒト細胞に入り込み、可
逆的方法でアデノシンデアミナーゼの細胞内酵素活性を
阻害し得、心筋および脳組織からなる群から選ばれる少
なくとも１タイプの哺乳類組織において低酸素および虚
血傷害を低減化するのに治療上有効なものにする部分を
含む］をもつエリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化
学的修飾類似体からなる薬剤。
得る薬剤を提供する。 【解決手段】 下記分子構造： ［式中、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素原子
またはヒドロキシル基以外の化学的部分であり、エリト
ロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体を、
薬理学的に許容し得かつ非毒性であり、細胞培養試験に
おいて、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９
−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］
アデニンよりもさらに有効に、ヒト細胞に入り込み、可
逆的方法でアデノシンデアミナーゼの細胞内酵素活性を
阻害し得、心筋および脳組織からなる群から選ばれる少
なくとも１タイプの哺乳類組織において低酸素および虚
血傷害を低減化するのに治療上有効なものにする部分を
含む］をもつエリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化
学的修飾類似体からなる薬剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、化学および薬理学分
野に属し、アデノシンデアミナーゼと呼ばれる酵素（Ａ
ＤＡ、アデノシンアミノヒドロラーゼとしても知られて
いる）を阻害し得る薬剤に関するものである。ＡＤＡ−
阻害性薬剤を使用すると、化学療法剤および抗ウイルス
薬剤の酵素分解が低減化されることによって、前記薬剤
の治療有用性が高められ得る。本明細書に開示されてい
るとおり、ＡＤＡ−阻害性薬剤を使用すると、卒中、心
拍停止、心臓発作、窒息および様々な他の発作性症状中
に発生する虚血（不十分な血流）または低酸素症（不十
分な酸素供給）により誘発される損傷から心筋および脳
組織を防護することもできる。
野に属し、アデノシンデアミナーゼと呼ばれる酵素（Ａ
ＤＡ、アデノシンアミノヒドロラーゼとしても知られて
いる）を阻害し得る薬剤に関するものである。ＡＤＡ−
阻害性薬剤を使用すると、化学療法剤および抗ウイルス
薬剤の酵素分解が低減化されることによって、前記薬剤
の治療有用性が高められ得る。本明細書に開示されてい
るとおり、ＡＤＡ−阻害性薬剤を使用すると、卒中、心
拍停止、心臓発作、窒息および様々な他の発作性症状中
に発生する虚血（不十分な血流）または低酸素症（不十
分な酸素供給）により誘発される損傷から心筋および脳
組織を防護することもできる。
【０００２】
【従来の技術】アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）と呼
ばれる哺乳類酵素は、国際酵素分類システムのもとで
Ｅ.Ｃ.３.５.４.４.と指定されており、アデノシンの２
環アデニル構造における６番炭素からアミノ基を除去す
ることによりアデノシンをイノシンに変換する。ＡＤＡ
はまた、癌化学療法または抗ウイルス治療に使用される
幾つかのヌクレオシド類似体を含む若干の他の分子を分
解し得る。ＡＤＡは、癌およびウイルス感染症の処置に
使用される様々な薬剤の治療有用性を低下させることが
知られていることから、ＡＤＡ阻害剤として機能する薬
剤の開発に多大な量の研究が行われてきた。ＡＤＡ阻害
剤をアジュバント（すなわち、１次薬剤の有効性を増加
させる２次薬剤）として使用すると、癌または抗ウイル
ス化学療法中における治療薬の代謝半減期が延長され得
る。またＡＤＡ阻害剤を使用すると、ＡＤＡ欠失が人工
的に作製され得ることから、研究者の中にはこれを興味
の対象としている者もいる。
ばれる哺乳類酵素は、国際酵素分類システムのもとで
Ｅ.Ｃ.３.５.４.４.と指定されており、アデノシンの２
環アデニル構造における６番炭素からアミノ基を除去す
ることによりアデノシンをイノシンに変換する。ＡＤＡ
はまた、癌化学療法または抗ウイルス治療に使用される
幾つかのヌクレオシド類似体を含む若干の他の分子を分
解し得る。ＡＤＡは、癌およびウイルス感染症の処置に
使用される様々な薬剤の治療有用性を低下させることが
知られていることから、ＡＤＡ阻害剤として機能する薬
剤の開発に多大な量の研究が行われてきた。ＡＤＡ阻害
剤をアジュバント（すなわち、１次薬剤の有効性を増加
させる２次薬剤）として使用すると、癌または抗ウイル
ス化学療法中における治療薬の代謝半減期が延長され得
る。またＡＤＡ阻害剤を使用すると、ＡＤＡ欠失が人工
的に作製され得ることから、研究者の中にはこれを興味
の対象としている者もいる。
【０００３】
【発明の構成】エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン
（ＥＨＮＡと略し、通常「エエナー」（ｅｅｎａｈ）と
発音する）と呼ばれる化合物は、比較的緩やかなＡＤＡ
阻害剤であり、この明細書では特に興味深い対象となっ
ている。ＥＨＮＡは下記の化学的構造を有する立体異性
体であり、ノニル「側鎖」における（すなわち、２環ア
デニル基に結合しているエリトロ−ヒドロキシ−ノニル
直鎖における）炭素原子番号の付け方が示されている：
（ＥＨＮＡと略し、通常「エエナー」（ｅｅｎａｈ）と
発音する）と呼ばれる化合物は、比較的緩やかなＡＤＡ
阻害剤であり、この明細書では特に興味深い対象となっ
ている。ＥＨＮＡは下記の化学的構造を有する立体異性
体であり、ノニル「側鎖」における（すなわち、２環ア
デニル基に結合しているエリトロ−ヒドロキシ−ノニル
直鎖における）炭素原子番号の付け方が示されている：
【化４】
【０００４】「エリトロ−」という接頭辞は、ノニル側
鎖における２番および３番炭素に結合した原子のある種
の立体異性体配置を示す。２番および３番の両炭素原子
は、キラル原子（すなわち、炭素原子であって、そこに
結合している４つの異なる基を伴うもの）であるため、
４基の空間配置は、それらが“光学的精製”立体異性体
の水溶液を通過する偏光をどのように回転させるかによ
って、（＋）または（−）立体配置となる。エリトロ化
合物と同じ原子を有するが、異なる立体異性体配置を有
する他の光学的に純粋な立体異性体については、「トレ
オ−」化合物と称す。
鎖における２番および３番炭素に結合した原子のある種
の立体異性体配置を示す。２番および３番の両炭素原子
は、キラル原子（すなわち、炭素原子であって、そこに
結合している４つの異なる基を伴うもの）であるため、
４基の空間配置は、それらが“光学的精製”立体異性体
の水溶液を通過する偏光をどのように回転させるかによ
って、（＋）または（−）立体配置となる。エリトロ化
合物と同じ原子を有するが、異なる立体異性体配置を有
する他の光学的に純粋な立体異性体については、「トレ
オ−」化合物と称す。
【０００５】ＥＨＮＡの「ラセミ」混合物（すなわち、
エリトロ立体配置において＋および−異性体の５０−５
０混合物を含む）は、シャエファーおよびシュベンダー
（１９７４）によりＡＤＡ阻害剤として同定された。バ
スティアン等（１９８１）並びにベーカーおよびホーキ
ンス（１９８２）を含む後続の報告では、様々なヒドロ
キシノニルアデニン異性体の中から最も強力なＡＤＡ阻
害剤として（＋）−２Ｓ,３Ｒ異性体（エリトロ異性
体）が同定された。
エリトロ立体配置において＋および−異性体の５０−５
０混合物を含む）は、シャエファーおよびシュベンダー
（１９７４）によりＡＤＡ阻害剤として同定された。バ
スティアン等（１９８１）並びにベーカーおよびホーキ
ンス（１９８２）を含む後続の報告では、様々なヒドロ
キシノニルアデニン異性体の中から最も強力なＡＤＡ阻
害剤として（＋）−２Ｓ,３Ｒ異性体（エリトロ異性
体）が同定された。
【０００６】ＥＨＮＡの様々な類似体および誘導体が、
例えばハリマン等（１９９２）の報告に記載されてい
る。それらの他の類似体は、この明細書に記載されてい
るＥＨＮＡ類似体とは関係がない。
例えばハリマン等（１９９２）の報告に記載されてい
る。それらの他の類似体は、この明細書に記載されてい
るＥＨＮＡ類似体とは関係がない。
【０００７】明らかにＥＨＮＡは、哺乳類の血流からか
なり急速に代謝され、浄化される（マッコンネル等、１
９８０、ランベおよびネルソン、１９８２）。さらに、
ＡＤＡ阻害性薬剤としてのＥＨＮＡの活性は、デオキシ
コホルマイシン（ｄＣＦ、ペントスタチンとしても知ら
れている）を含む様々な他のＡＤＡ阻害性薬剤ほど強く
はない。ｄＣＦのいわゆる「Ｋｉ」値（すなわち、標定
量のＡＤＡの不活化に必要とされるｄＣＦのモル濃度の
負の対数値）は非常に低く、約２.５×１０-12モル
(Ｍ；ここでの全Ｋｉ値はモル濃度である)である。約１
０-12モルの範囲であるこの非常に低い値は、ｄＣＦが
ＡＤＡと非常に堅固に結合することを示している。ｄＣ
Ｆは「自殺阻害剤」と呼ばれることもあって、ｄＣＦお
よびＡＤＡ間の結合が事実上不可逆的であることを示し
ており、いずれの分子も再生され得ない。この不可逆的
結合プロセスはまた、酵素を「無力にする」ものとして
称される。
なり急速に代謝され、浄化される（マッコンネル等、１
９８０、ランベおよびネルソン、１９８２）。さらに、
ＡＤＡ阻害性薬剤としてのＥＨＮＡの活性は、デオキシ
コホルマイシン（ｄＣＦ、ペントスタチンとしても知ら
れている）を含む様々な他のＡＤＡ阻害性薬剤ほど強く
はない。ｄＣＦのいわゆる「Ｋｉ」値（すなわち、標定
量のＡＤＡの不活化に必要とされるｄＣＦのモル濃度の
負の対数値）は非常に低く、約２.５×１０-12モル
(Ｍ；ここでの全Ｋｉ値はモル濃度である)である。約１
０-12モルの範囲であるこの非常に低い値は、ｄＣＦが
ＡＤＡと非常に堅固に結合することを示している。ｄＣ
Ｆは「自殺阻害剤」と呼ばれることもあって、ｄＣＦお
よびＡＤＡ間の結合が事実上不可逆的であることを示し
ており、いずれの分子も再生され得ない。この不可逆的
結合プロセスはまた、酵素を「無力にする」ものとして
称される。
【０００８】ＡＤＡ阻害剤としての効力を有するがた
め、幾つかの研究班がｄＣＦを試験し、それが治療的に
使用され得るか否かを測定した。報告によるとｄＣＦは
心血管モデル（例、ドルハイム等、１９９１）、神経防
護（例、フィリスおよびオレーガン、１９８９）および
癌治療においてある有益な活性を呈したが、深刻で有害
な副作用を誘発することが見いだされた（例、オドイエ
ル等、１９８６）。従って、その後、より緩やかなＡＤ
Ａ阻害剤であれば副作用も少なく、毒性も低くなると期
待されて、ＥＨＮＡおよび様々な他の緩やかなまたは
「軽い」ＡＤＡ阻害剤に注意が戻された。（±）−ＥＨ
ＮＡのＫｉ値は約６×１０-9であり、ＥＨＮＡがｄＣＦ
よりも約１０００倍弱い力でＡＤＡに結合することを示
している。
め、幾つかの研究班がｄＣＦを試験し、それが治療的に
使用され得るか否かを測定した。報告によるとｄＣＦは
心血管モデル（例、ドルハイム等、１９９１）、神経防
護（例、フィリスおよびオレーガン、１９８９）および
癌治療においてある有益な活性を呈したが、深刻で有害
な副作用を誘発することが見いだされた（例、オドイエ
ル等、１９８６）。従って、その後、より緩やかなＡＤ
Ａ阻害剤であれば副作用も少なく、毒性も低くなると期
待されて、ＥＨＮＡおよび様々な他の緩やかなまたは
「軽い」ＡＤＡ阻害剤に注意が戻された。（±）−ＥＨ
ＮＡのＫｉ値は約６×１０-9であり、ＥＨＮＡがｄＣＦ
よりも約１０００倍弱い力でＡＤＡに結合することを示
している。
【０００９】この発明は、「遠位末端」炭素原子の一つ
の側鎖（すなわち、８番または９番炭素原子）に結合し
た水素原子が、部分、水素以外またはヒドロキシル基に
置き換えられて、ＥＨＮＡの８番または９番類似体を形
成し、これらは、虚血障害に弱い１個またはそれ以上の
内部器官(心臓または脳のような)において、虚血障害に
対して、(＋)ＥＨＮＡと書くＥＨＮＡの＋立体異性体、
またはＡbushanabに１９９６年２月に発行された米国特
許第５,４９１,１４６号に記載の(＋)ＥＨＮＡの９−ヒ
ドロキシ類似体と比較して、良好な治療実用性を有す
る。
の側鎖（すなわち、８番または９番炭素原子）に結合し
た水素原子が、部分、水素以外またはヒドロキシル基に
置き換えられて、ＥＨＮＡの８番または９番類似体を形
成し、これらは、虚血障害に弱い１個またはそれ以上の
内部器官(心臓または脳のような)において、虚血障害に
対して、(＋)ＥＨＮＡと書くＥＨＮＡの＋立体異性体、
またはＡbushanabに１９９６年２月に発行された米国特
許第５,４９１,１４６号に記載の(＋)ＥＨＮＡの９−ヒ
ドロキシ類似体と比較して、良好な治療実用性を有す
る。
【００１０】下記のように、ここで興味の対照の類似た
いは、２つの所望の特性の組み合わせを有する： (１)Ｋｉ値が約１０-7から約１０-10モルの間である、
所望の範囲のＡＤＡ控訴に対する結合親和製を有する。
この範囲のＫｉ値は、興味の対照の類似体が、ＡＤＡ酵
素の分子を不利に不活性化する“自殺阻害剤”にならず
に、比較的高いレベルの有効性を有することを意味す
る。
いは、２つの所望の特性の組み合わせを有する： (１)Ｋｉ値が約１０-7から約１０-10モルの間である、
所望の範囲のＡＤＡ控訴に対する結合親和製を有する。
この範囲のＫｉ値は、興味の対照の類似体が、ＡＤＡ酵
素の分子を不利に不活性化する“自殺阻害剤”にならず
に、比較的高いレベルの有効性を有することを意味す
る。
【００１１】(２)これらはまた卒中、心臓発作、心拍停
止、窒息および様々な他のタイプの発作性症状または病
状中に生じる虚血（不十分な血流）または低酸素症（不
十分な酸素供給）により誘発される損傷から心臓組織お
よび／または脳組織を防御する場合に非修飾(＋)ＥＨＮ
Ａまたは(＋)ＥＨＮＡの９−ヒドロキシ類似体よりみ実
質的により有効にする。
止、窒息および様々な他のタイプの発作性症状または病
状中に生じる虚血（不十分な血流）または低酸素症（不
十分な酸素供給）により誘発される損傷から心臓組織お
よび／または脳組織を防御する場合に非修飾(＋)ＥＨＮ
Ａまたは(＋)ＥＨＮＡの９−ヒドロキシ類似体よりみ実
質的により有効にする。
【００１２】本発明前に、虚血／低酸素症による損傷か
ら心筋または脳組織を防御する場合におけるＡＤＡ−阻
害性薬剤の有用性は、ほとんど述べられてなかった；例
えば、Zhu et al 1990およびMarangos et al 1990参
照。しかしながら、これらの文献にも拘わらず、(本発
明前の)ＡＤＡ阻害剤に関する研究はほぼ全て、ＡＤＡ
酵素による抗癌または抗ウイルス薬剤の分解を遅らせる
ことにより上記抗癌または抗ウイルス薬剤の効力を高め
るというそれらの潜在能力に焦点が絞られてきた。
ら心筋または脳組織を防御する場合におけるＡＤＡ−阻
害性薬剤の有用性は、ほとんど述べられてなかった；例
えば、Zhu et al 1990およびMarangos et al 1990参
照。しかしながら、これらの文献にも拘わらず、(本発
明前の)ＡＤＡ阻害剤に関する研究はほぼ全て、ＡＤＡ
酵素による抗癌または抗ウイルス薬剤の分解を遅らせる
ことにより上記抗癌または抗ウイルス薬剤の効力を高め
るというそれらの潜在能力に焦点が絞られてきた。
【００１３】ＡＤＡ酵素がほとんどすべての全内部細胞
で活性であることに注目すべきである。この酵素活性
は、細胞のアデノシン放出量に影響を当たることがで
き、細胞外アデノシンは、細胞表面にあるアデノシンレ
セプターにより開始される種々の役割をになう；加え
て、少量のＡＤＡが細胞表面で検出されることが言われ
ている。しかしながら、ＡＤＡ酵素は、ほぼ独占的に細
胞内で機能するという事実は残る。従って、ＡＤＡ阻害
剤が適切に機能するためには哺乳類細胞に入り込まなけ
ればならず、その効力は、それがいかに容易に細胞中に
取り込まれ得るかということに大いに左右される。
で活性であることに注目すべきである。この酵素活性
は、細胞のアデノシン放出量に影響を当たることがで
き、細胞外アデノシンは、細胞表面にあるアデノシンレ
セプターにより開始される種々の役割をになう；加え
て、少量のＡＤＡが細胞表面で検出されることが言われ
ている。しかしながら、ＡＤＡ酵素は、ほぼ独占的に細
胞内で機能するという事実は残る。従って、ＡＤＡ阻害
剤が適切に機能するためには哺乳類細胞に入り込まなけ
ればならず、その効力は、それがいかに容易に細胞中に
取り込まれ得るかということに大いに左右される。
【００１４】この発明の一目的は、非修飾またはヒドロ
キシル化ＥＨＮＡよりも高濃度で、細胞内ＡＤＡ酵素分
子に到達でき、阻害するように、哺乳類細胞内への取り
込みの割合を実質的に改善する方法で、側鎖にある８番
または９番炭素原子が修飾されたＥＨＮＡの一群の類似
体を開示することである。
キシル化ＥＨＮＡよりも高濃度で、細胞内ＡＤＡ酵素分
子に到達でき、阻害するように、哺乳類細胞内への取り
込みの割合を実質的に改善する方法で、側鎖にある８番
または９番炭素原子が修飾されたＥＨＮＡの一群の類似
体を開示することである。
【００１５】本発明の他の目的は、非修飾またはヒドロ
キシル化ＥＨＮＡのいずれかと比べて、心筋または脳組
織への虚血または低酸素症による損傷に対するこれらの
類似体の治療効力を実質的に改良する方法で、側鎖にあ
る８番または９番炭素原子が修飾されたＥＨＮＡの一群
の類似体を開示することである。
キシル化ＥＨＮＡのいずれかと比べて、心筋または脳組
織への虚血または低酸素症による損傷に対するこれらの
類似体の治療効力を実質的に改良する方法で、側鎖にあ
る８番または９番炭素原子が修飾されたＥＨＮＡの一群
の類似体を開示することである。
【００１６】この発明の別の目的は、所望の範囲に含ま
れるＡＤＡ酵素に対する結合親和力（好ましくは約１０
-7ないし約１０-10間のＫｉ値をもつ）を保持しながら
もこれらの類似体に様々な治療上の利点を与える形で側
鎖にある８番または９番炭素原子が修飾されたＥＨＮＡ
の一群の類似体を開示することである。比較的穏やかな
可逆的ＡＤＡ阻害剤としてのこの状態であれば、前記類
似体は治療有効レベルでＡＤＡ活性を阻害し得、かつＡ
ＤＡ酵素を不可逆的に不活化（無力化）したり、有害な
副作用の危険性を高めることもない。
れるＡＤＡ酵素に対する結合親和力（好ましくは約１０
-7ないし約１０-10間のＫｉ値をもつ）を保持しながら
もこれらの類似体に様々な治療上の利点を与える形で側
鎖にある８番または９番炭素原子が修飾されたＥＨＮＡ
の一群の類似体を開示することである。比較的穏やかな
可逆的ＡＤＡ阻害剤としてのこの状態であれば、前記類
似体は治療有効レベルでＡＤＡ活性を阻害し得、かつＡ
ＤＡ酵素を不可逆的に不活化（無力化）したり、有害な
副作用の危険性を高めることもない。
【００１７】この発明の別の目的は、ノニル側鎖中の様
々な制御可能な位置にハライド原子、カルボン酸または
塩、エステル結合またはエーテル結合部分または窒素含
有部分のあるタイプを含み、特にＥＨＮＡ分子の側鎖中
の８番または９番炭素原子に結合した新規部分を含むＥ
ＨＮＡの薬理学的に貴重なＥＨＮＡ類似体の生成に使用
され得る合成試薬および方法を開示することである。
々な制御可能な位置にハライド原子、カルボン酸または
塩、エステル結合またはエーテル結合部分または窒素含
有部分のあるタイプを含み、特にＥＨＮＡ分子の側鎖中
の８番または９番炭素原子に結合した新規部分を含むＥ
ＨＮＡの薬理学的に貴重なＥＨＮＡ類似体の生成に使用
され得る合成試薬および方法を開示することである。
【００１８】この発明の別の目的は、ある種のタイプの
抗癌剤、抗ウイルス剤または他の治療剤のＡＤＡ酵素に
よる分解を減速させるのに使用され得るＥＨＮＡ類似体
の新規セットを開示することである。
抗癌剤、抗ウイルス剤または他の治療剤のＡＤＡ酵素に
よる分解を減速させるのに使用され得るＥＨＮＡ類似体
の新規セットを開示することである。
【００１９】この発明のこれらおよび他の目的は、下記
の概要、詳細な記載および実施例からより明確および明
白になるはずである。
の概要、詳細な記載および実施例からより明確および明
白になるはずである。
【００２０】
【発明の概要】様々なタイプの部分を分子の「側鎖」部
分（すなわち、ＥＨＮＡ中の９−炭素エリトロ−ヒドロ
キシノニル直鎖部分、アデノシン環構造に結合してい
る）中の８番または９番炭素原子に結合させることによ
り修飾されたエリトロ−ヒドロキシノニルアデニン（Ｅ
ＨＮＡ）の類似体が開示されている。相対的に親油性部
分が側鎖中の８または９位に結合しているＥＨＮＡ類似
体は、虚血(不十分な血流)および／または低酸素(不十
分な酸素供給)による細胞死および組織障害の減少に改
善された効果を有することが見いだされた。初期の一連
の試験において、下記のヒドロキシル化ＥＨＮＡ類似体
の一つ(ここでは９−ＯＨ−ＥＨＮＡと称す、ヒドロキ
シル部分がＥＨＮＡ側鎖の９番炭素原子に結合)は、非
修飾ＥＨＮＡと比べて、血損傷から心筋を防護する際に
顕著な利点を有することが発見された。この検定につい
ては実施例４に記載されている。
分（すなわち、ＥＨＮＡ中の９−炭素エリトロ−ヒドロ
キシノニル直鎖部分、アデノシン環構造に結合してい
る）中の８番または９番炭素原子に結合させることによ
り修飾されたエリトロ−ヒドロキシノニルアデニン（Ｅ
ＨＮＡ）の類似体が開示されている。相対的に親油性部
分が側鎖中の８または９位に結合しているＥＨＮＡ類似
体は、虚血(不十分な血流)および／または低酸素(不十
分な酸素供給)による細胞死および組織障害の減少に改
善された効果を有することが見いだされた。初期の一連
の試験において、下記のヒドロキシル化ＥＨＮＡ類似体
の一つ(ここでは９−ＯＨ−ＥＨＮＡと称す、ヒドロキ
シル部分がＥＨＮＡ側鎖の９番炭素原子に結合)は、非
修飾ＥＨＮＡと比べて、血損傷から心筋を防護する際に
顕著な利点を有することが発見された。この検定につい
ては実施例４に記載されている。
【００２１】ＥＨＮＡ類似体に関する後続の研究は、い
くつかの類似体が、非修飾ＥＨＮＡを凌ぐだけでなく、
９番または８番ヒドロキシル化類似体と比べても重大な
治療的利点を有することを示していた。この後続の研究
は、実施例６に記載された幾分異なる心臓潅流技術を用
いており、９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体が、心臓防護の測
定に使用されるほとんどのパラメーターにおいて非修飾
ＥＨＮＡよりも実質的に優れた効力を発揮するわけでは
ないことを示していた。しかしながら、それが確認され
るときまでに、幾つかの他のＥＨＮＡ類似体がＥＨＮＡ
の非修飾またはヒドロキシル化形態のいずれかよりも著
しい改善を示したことが発見されたため、後続の研究は
それらの他の類似体に向けられ、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは
無視され、それ以上試験されなかった。
くつかの類似体が、非修飾ＥＨＮＡを凌ぐだけでなく、
９番または８番ヒドロキシル化類似体と比べても重大な
治療的利点を有することを示していた。この後続の研究
は、実施例６に記載された幾分異なる心臓潅流技術を用
いており、９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体が、心臓防護の測
定に使用されるほとんどのパラメーターにおいて非修飾
ＥＨＮＡよりも実質的に優れた効力を発揮するわけでは
ないことを示していた。しかしながら、それが確認され
るときまでに、幾つかの他のＥＨＮＡ類似体がＥＨＮＡ
の非修飾またはヒドロキシル化形態のいずれかよりも著
しい改善を示したことが発見されたため、後続の研究は
それらの他の類似体に向けられ、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは
無視され、それ以上試験されなかった。
【００２２】現在までに行われた研究で虚血組織障害に
対する最善の効果を示した類似体は、ヒドロキシル化類
似体よりも親油性が高い（すなわち、脂質および他の脂
肪性非極性流体における溶解性は高く、水溶性は劣る）
と考えられる。これらの親油性類似体は、それらの化学
的合成方法および側鎖の８番または９番炭素原子が修飾
されたＥＨＮＡの他の望ましい類似体があればそれも一
緒に下記に開示されている。ここに記載されている要領
で合成される上記類似体は全て、後記の検定法またはそ
の他当業界の熟練者に公知の方法を用いてスクリーニン
グされ得、特定類似体が本明細書に記載された所望の組
み合わせの特性を有するか否かが測定される。これらの
特徴には、（１）可逆的ＡＤＡ阻害剤として、緩和で、
非毒性効力、（２）細胞取り込みを増加させるのに望ま
しいレベルの親油性、および（３）虚血または低酸素症
による損傷の低減化、または抗癌剤、抗ウイルス剤また
は他の薬剤のＡＤＡ分解の低減化における治療有用性が
含まれる。
対する最善の効果を示した類似体は、ヒドロキシル化類
似体よりも親油性が高い（すなわち、脂質および他の脂
肪性非極性流体における溶解性は高く、水溶性は劣る）
と考えられる。これらの親油性類似体は、それらの化学
的合成方法および側鎖の８番または９番炭素原子が修飾
されたＥＨＮＡの他の望ましい類似体があればそれも一
緒に下記に開示されている。ここに記載されている要領
で合成される上記類似体は全て、後記の検定法またはそ
の他当業界の熟練者に公知の方法を用いてスクリーニン
グされ得、特定類似体が本明細書に記載された所望の組
み合わせの特性を有するか否かが測定される。これらの
特徴には、（１）可逆的ＡＤＡ阻害剤として、緩和で、
非毒性効力、（２）細胞取り込みを増加させるのに望ま
しいレベルの親油性、および（３）虚血または低酸素症
による損傷の低減化、または抗癌剤、抗ウイルス剤また
は他の薬剤のＡＤＡ分解の低減化における治療有用性が
含まれる。
【００２３】
【図面の説明】図１は、化合物［１０］と定められた
９'−ヒドロキシ（＋）−ＥＨＮＡ、すなわちさらに親
油性が高いＥＨＮＡの他の後続類似体の生成に使用され
る中間化合物の生成に使用される一連の化学反応を示す
図である。図２は、化合物［２３］と定められた８’−
ヒドロキシ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用された反応を
示す図である。図３は、化合物［１４］と定められた
８',９'−ジヒドロキシ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用
された反応を示す図である。図４は、９番炭素原子に結
合した様々な非ヒドロキシ部分を含むＥＨＮＡの類似体
の生成に使用された（実施例５参照）反応を示す図であ
る。図５、６および７は、９−クロロ−ＥＨＮＡ（化合
物［２９］）および９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合
物［２７］）が、実施例６記載の試験において、非修飾
ＥＨＮＡまたは９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損
傷から心筋を防護する効力が高かったことを示す棒グラ
フである。
９'−ヒドロキシ（＋）−ＥＨＮＡ、すなわちさらに親
油性が高いＥＨＮＡの他の後続類似体の生成に使用され
る中間化合物の生成に使用される一連の化学反応を示す
図である。図２は、化合物［２３］と定められた８’−
ヒドロキシ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用された反応を
示す図である。図３は、化合物［１４］と定められた
８',９'−ジヒドロキシ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用
された反応を示す図である。図４は、９番炭素原子に結
合した様々な非ヒドロキシ部分を含むＥＨＮＡの類似体
の生成に使用された（実施例５参照）反応を示す図であ
る。図５、６および７は、９−クロロ−ＥＨＮＡ（化合
物［２９］）および９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合
物［２７］）が、実施例６記載の試験において、非修飾
ＥＨＮＡまたは９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損
傷から心筋を防護する効力が高かったことを示す棒グラ
フである。
【００２４】好ましい態様の記載 この発明では、側鎖（すなわち、直鎖エリトロ−ヒドロ
キシノニル部分、アデニル環構造に結合している）が、
ある種のタイプの化学基（部分）を側鎖の“長端”の８
番または９番他炭素原子に結合させることにより化学的
に修飾されたＥＨＮＡ類似体が報告されている。ここに
記載のように、抗虚血類似体に好ましい部分は、生成す
る類似体にはある種の薬理学的および治療的活性が与え
られ、非修飾ＥＨＮＡまたは米国特許５,４９１,１４６
号に記載の９−ヒドロキシ類似体と比べて実質的に改良
されたものになる。
キシノニル部分、アデニル環構造に結合している）が、
ある種のタイプの化学基（部分）を側鎖の“長端”の８
番または９番他炭素原子に結合させることにより化学的
に修飾されたＥＨＮＡ類似体が報告されている。ここに
記載のように、抗虚血類似体に好ましい部分は、生成す
る類似体にはある種の薬理学的および治療的活性が与え
られ、非修飾ＥＨＮＡまたは米国特許５,４９１,１４６
号に記載の９−ヒドロキシ類似体と比べて実質的に改良
されたものになる。
【００２５】この発明の一態様では、ヒドロキシル基を
ＥＨＮＡ側鎖の８番または９番炭素原子に結合すること
により、ここでは８−ＯＨ−ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−
ＥＨＮＡと称するヒドロキシル化類似体（または両炭素
原子にヒドロキシル部分が結合しているジヒドロキシル
化類似体）が生成され得る。これらのヒドロキシル化類
似体を実施例１および２(および、更に詳細には、米国
特許第５,４９１,１４６号の実施例)記載の要領で合成
し、ラットから摘出した無傷の潅流心臓による実験モデ
ルを用いて試験すると、上記類似体は、虚血損傷から心
筋を防護する際に非修飾ＥＨＮＡと比べて軽微ではある
が重要な利点を有することが発見された。これらのヒド
ロキシル化類似体を用いて実施された限定試験により、
９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体の方が８−ＯＨ−ＥＨＮＡ類
似体よりも好ましいことが示された。
ＥＨＮＡ側鎖の８番または９番炭素原子に結合すること
により、ここでは８−ＯＨ−ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−
ＥＨＮＡと称するヒドロキシル化類似体（または両炭素
原子にヒドロキシル部分が結合しているジヒドロキシル
化類似体）が生成され得る。これらのヒドロキシル化類
似体を実施例１および２(および、更に詳細には、米国
特許第５,４９１,１４６号の実施例)記載の要領で合成
し、ラットから摘出した無傷の潅流心臓による実験モデ
ルを用いて試験すると、上記類似体は、虚血損傷から心
筋を防護する際に非修飾ＥＨＮＡと比べて軽微ではある
が重要な利点を有することが発見された。これらのヒド
ロキシル化類似体を用いて実施された限定試験により、
９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体の方が８−ＯＨ−ＥＨＮＡ類
似体よりも好ましいことが示された。
【００２６】それらの初期発見に基づいて、ＥＨＮＡの
他の類似体を合成し、様々な方法で試験した。これらの
類似体の研究は、非修飾ＥＨＮＡまたはＥＨＮＡの９−
ヒドロキシ類似体と比較して、いくつかが重要な治療的
利点を有することを示す。
他の類似体を合成し、様々な方法で試験した。これらの
類似体の研究は、非修飾ＥＨＮＡまたはＥＨＮＡの９−
ヒドロキシ類似体と比較して、いくつかが重要な治療的
利点を有することを示す。
【００２７】９−ＯＨ類似体は、光学的純粋(＋)立体異
性体として合成され、それから後に合成した他の類似体
すべて純粋(＋)立体異性体として産生した。
性体として合成され、それから後に合成した他の類似体
すべて純粋(＋)立体異性体として産生した。
【００２８】現在までに完了した研究で最善の組み合わ
せの特性を示した類似体は、ヒドロキシル化９−ＯＨ−
ＥＨＮＡ類似体よりも親油性が高く（すなわち、脂質お
よび他の脂肪性非極性流体における溶解性が高く）、水
溶性が低いと考えられる。９−クロロ−ＥＨＮＡおよび
９−フタルイミド−ＥＨＮＡを含むこれらの類似体は下
記に開示されている。別法として、ここに開示されてい
る化学的合成方法（および化学合成業界における熟練者
に周知の他の方法）を用いると、側鎖の８番または９番
炭素原子に他の官能基を付加することにより修飾された
ＥＨＮＡの他の類似体が生成され得る。合成後、この明
細書に記載された検定法または生物医学試験業界の熟練
者に周知の他の検定法を用いて、上記類似体をスクリー
ニングし、試験することにより、特定類似体が所望の組
み合わせの特性を有するか否かを決定した。
せの特性を示した類似体は、ヒドロキシル化９−ＯＨ−
ＥＨＮＡ類似体よりも親油性が高く（すなわち、脂質お
よび他の脂肪性非極性流体における溶解性が高く）、水
溶性が低いと考えられる。９−クロロ−ＥＨＮＡおよび
９−フタルイミド−ＥＨＮＡを含むこれらの類似体は下
記に開示されている。別法として、ここに開示されてい
る化学的合成方法（および化学合成業界における熟練者
に周知の他の方法）を用いると、側鎖の８番または９番
炭素原子に他の官能基を付加することにより修飾された
ＥＨＮＡの他の類似体が生成され得る。合成後、この明
細書に記載された検定法または生物医学試験業界の熟練
者に周知の他の検定法を用いて、上記類似体をスクリー
ニングし、試験することにより、特定類似体が所望の組
み合わせの特性を有するか否かを決定した。
【００２９】本発明では３つの特性が主として興味の対
象となっている。前記の１特性として、ヒト治療用とし
て意図されたＥＨＮＡ類似体は、可逆的ＡＤＡ阻害剤と
して適当な効力を有するべきであって、好ましくはＡＤ
Ａに対する結合親和力は約１０-7〜約１０-10の範囲の
Ｋｉ値を与える。この所望の範囲のＫｉ値を有するＥＨ
ＮＡ類似体は、ＡＤＡ酵素を可逆的に阻害し得、その
際、酵素分子を永続的に無力にすることはなく、かつ患
者または試験動物の中には効力の高い「自殺阻害剤」、
例えばデオキシコフォルマイシンにより誘発されること
もあったタイプの有毒な副作用を誘発することもない。
いずれのＥＨＮＡ類似体にせよ、そのＫｉ値は、検定法
として例えばハリマン等（１９９２）記載の分光測光法
（実施例３でさらに詳述されている）により測定され得
る。
象となっている。前記の１特性として、ヒト治療用とし
て意図されたＥＨＮＡ類似体は、可逆的ＡＤＡ阻害剤と
して適当な効力を有するべきであって、好ましくはＡＤ
Ａに対する結合親和力は約１０-7〜約１０-10の範囲の
Ｋｉ値を与える。この所望の範囲のＫｉ値を有するＥＨ
ＮＡ類似体は、ＡＤＡ酵素を可逆的に阻害し得、その
際、酵素分子を永続的に無力にすることはなく、かつ患
者または試験動物の中には効力の高い「自殺阻害剤」、
例えばデオキシコフォルマイシンにより誘発されること
もあったタイプの有毒な副作用を誘発することもない。
いずれのＥＨＮＡ類似体にせよ、そのＫｉ値は、検定法
として例えばハリマン等（１９９２）記載の分光測光法
（実施例３でさらに詳述されている）により測定され得
る。
【００３０】ヒト治療用として意図されたＥＨＮＡ類似
体に関する２つめの望ましい特性には、適当なレベルの
脂質溶解性（親油性とも呼ばれる）がある。一般に、親
油性薬剤は、２つの化学因子故に、親水性薬剤よりも容
易かつ大量に細胞中へ取り込まれる傾向がある。第１
に、水中の油滴のように、親油性薬剤では、薬剤自体お
よび水分子間に表面張力が発生する。それらは、細胞を
とり巻く水様液体中で「気楽に」浮遊しているわけでは
なく、水との接触表面の面積を最小限にする立体配置を
模索している。この表面張力により、親油性分子は、細
胞表面を含め、それらが出会った親油性表面に結合およ
び付着し、それらが水と接触している表面面積は最小限
にされる。
体に関する２つめの望ましい特性には、適当なレベルの
脂質溶解性（親油性とも呼ばれる）がある。一般に、親
油性薬剤は、２つの化学因子故に、親水性薬剤よりも容
易かつ大量に細胞中へ取り込まれる傾向がある。第１
に、水中の油滴のように、親油性薬剤では、薬剤自体お
よび水分子間に表面張力が発生する。それらは、細胞を
とり巻く水様液体中で「気楽に」浮遊しているわけでは
なく、水との接触表面の面積を最小限にする立体配置を
模索している。この表面張力により、親油性分子は、細
胞表面を含め、それらが出会った親油性表面に結合およ
び付着し、それらが水と接触している表面面積は最小限
にされる。
【００３１】そして第２に、哺乳類細胞の膜はそれ自体
が脂質２層膜でできているため、脂質に可溶性の分子
は、細胞膜に溶け、その中に移入し易い。これは細胞取
り込みにおける主要段階であって、これらの薬剤が細胞
膜を横切り、細胞中へ入り込むのを促す能動輸送機構を
必要とはしない。
が脂質２層膜でできているため、脂質に可溶性の分子
は、細胞膜に溶け、その中に移入し易い。これは細胞取
り込みにおける主要段階であって、これらの薬剤が細胞
膜を横切り、細胞中へ入り込むのを促す能動輸送機構を
必要とはしない。
【００３２】これらの因子は両方とも、親水性および／
または高荷電薬剤と比べて、親油性薬剤の細胞摂取を促
進かつ増加させる傾向をもつ。ＥＨＮＡおよびその類似
体は細胞の内側に存する分子機構を介して作用するた
め、これは、ＡＤＡ−阻害性ＥＨＮＡ類似体に関する潜
在的に重要な因子であると仮定され、そう信じられてい
る。
または高荷電薬剤と比べて、親油性薬剤の細胞摂取を促
進かつ増加させる傾向をもつ。ＥＨＮＡおよびその類似
体は細胞の内側に存する分子機構を介して作用するた
め、これは、ＡＤＡ−阻害性ＥＨＮＡ類似体に関する潜
在的に重要な因子であると仮定され、そう信じられてい
る。
【００３３】しかしながら、疎水性が増したからといっ
て、細胞への高い摂取性という望ましい特性が非限定的
に高まるわけではない。非常に疎水性の高い薬剤の場
合、慣用的経路、例えば注射または経口摂取による患者
への投与が困難となり得、一旦体内にはいると、それら
の薬剤は多くの場合脂質小胞または小球体中で封鎖され
る傾向があるか、またはそれらは小腸または血管内にお
いて様々な膜、プラーク沈澱物もしくは顆粒に付着する
傾向がある。
て、細胞への高い摂取性という望ましい特性が非限定的
に高まるわけではない。非常に疎水性の高い薬剤の場
合、慣用的経路、例えば注射または経口摂取による患者
への投与が困難となり得、一旦体内にはいると、それら
の薬剤は多くの場合脂質小胞または小球体中で封鎖され
る傾向があるか、またはそれらは小腸または血管内にお
いて様々な膜、プラーク沈澱物もしくは顆粒に付着する
傾向がある。
【００３４】これらの理由のため、充分な効力を生ずる
ために細胞内で摂取されなければならない治療剤の場
合、多くは適度な高さではあるが極端ではないレベルの
親油性（疎水性）が好ましい。従って、他の８番または
９番炭素原子に結合した類似体の方がヒドロキシル化９
−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体よりも虚血損傷から防護する力
が強いことが発見された以上は、他の親油性部分をもつ
他のＥＨＮＡ類似体が、本明細書に開示されている方法
および検定法を用いて合成および試験され、その結果こ
の治療的類似体を製造するための良好な候補を提供する
種々の分子を評価する。
ために細胞内で摂取されなければならない治療剤の場
合、多くは適度な高さではあるが極端ではないレベルの
親油性（疎水性）が好ましい。従って、他の８番または
９番炭素原子に結合した類似体の方がヒドロキシル化９
−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体よりも虚血損傷から防護する力
が強いことが発見された以上は、他の親油性部分をもつ
他のＥＨＮＡ類似体が、本明細書に開示されている方法
および検定法を用いて合成および試験され、その結果こ
の治療的類似体を製造するための良好な候補を提供する
種々の分子を評価する。
【００３５】いずれかの候補部分をもつＥＨＮＡ類似体
の親油性レベルは、二重溶媒検定、例えば広範に使用さ
れているオクタノール−水分配検定を用いて評価され得
る。分配係数は、通常Ｐo/w （ただし、「o/w」は油お
よび水を示す）として示される。通常この値は、ｐＨ値
に匹敵する、底１０の対数により示される。ｌｏｇＰ
o/w値が高いということは、油に関する溶解度が高いこ
とを示し、値が低い（または負である）ということは、
水溶度が高いことを示す。
の親油性レベルは、二重溶媒検定、例えば広範に使用さ
れているオクタノール−水分配検定を用いて評価され得
る。分配係数は、通常Ｐo/w （ただし、「o/w」は油お
よび水を示す）として示される。通常この値は、ｐＨ値
に匹敵する、底１０の対数により示される。ｌｏｇＰ
o/w値が高いということは、油に関する溶解度が高いこ
とを示し、値が低い（または負である）ということは、
水溶度が高いことを示す。
【００３６】オクタノール−水分配係数は、市販されて
いるコンピューターのソフトウェア（例えば、ＡＣＤ／
ＬｏｇＰソフトウェアプログラム、カナダ国トロントの
アドバンスト・ケミストリー・デベロップメント、イン
コーポレイテッド販売）を用いて評価され得る。このソ
フトウェアを用いることにより、表１に列挙されている
オクタノール−水分配係数が算出された。分配係数の算
出および評価に使用された方法の詳細は、それらの化学
構造に基づいたもので、ボダー等（１９８９）に記載さ
れている。
いるコンピューターのソフトウェア（例えば、ＡＣＤ／
ＬｏｇＰソフトウェアプログラム、カナダ国トロントの
アドバンスト・ケミストリー・デベロップメント、イン
コーポレイテッド販売）を用いて評価され得る。このソ
フトウェアを用いることにより、表１に列挙されている
オクタノール−水分配係数が算出された。分配係数の算
出および評価に使用された方法の詳細は、それらの化学
構造に基づいたもので、ボダー等（１９８９）に記載さ
れている。
【００３７】この発明を特定理論に結び付けるかまたは
限定しなくても、一般に信じられているのは、親油性溶
解度レベルが下記のクロロ−またはフタルイミド−類似
体に近いかまたはそれらよりも幾分大きいＥＨＮＡ類似
体は、本発明の使用のためにヒドロキシル化類似体およ
び他の親水性（水溶性）のさらに高い類似体よりも好ま
しいと思われることである。
限定しなくても、一般に信じられているのは、親油性溶
解度レベルが下記のクロロ−またはフタルイミド−類似
体に近いかまたはそれらよりも幾分大きいＥＨＮＡ類似
体は、本発明の使用のためにヒドロキシル化類似体およ
び他の親水性（水溶性）のさらに高い類似体よりも好ま
しいと思われることである。
【００３８】本明細書記載の用途を意図したＥＨＮＡ類
似体に関する第３の主たる望ましい特性には、ある種の
タイプの細胞損傷または薬剤分解に対する治療有用性の
適切なモデルを提供する実験室試験または哺乳類患者に
おける治療有用性がある。現在のところ、ここに記載さ
れているＥＨＮＡ類似体に関する２つの主要かつ最も緊
急の用途は、（ａ）傷つき易い組織、特に心筋または脳
組織における虚血または低酸素症により誘発される損傷
の量を低減化すること、並びに（ｂ）癌、ウイルス感染
症または他の病状に苦しむ患者の処置に使用されている
薬剤についてＡＤＡ酵素による分解速度の低減化によ
り、前記薬剤の半減期を延長し、治療的効果を増加させ
ることである。また、様々な他の用途に現在でも用い得
るが、またはこれらの化合物が公表され、科学者および
医学研究者に入手可能となった後、種々の用途が将来的
に発見されるかもしれない。
似体に関する第３の主たる望ましい特性には、ある種の
タイプの細胞損傷または薬剤分解に対する治療有用性の
適切なモデルを提供する実験室試験または哺乳類患者に
おける治療有用性がある。現在のところ、ここに記載さ
れているＥＨＮＡ類似体に関する２つの主要かつ最も緊
急の用途は、（ａ）傷つき易い組織、特に心筋または脳
組織における虚血または低酸素症により誘発される損傷
の量を低減化すること、並びに（ｂ）癌、ウイルス感染
症または他の病状に苦しむ患者の処置に使用されている
薬剤についてＡＤＡ酵素による分解速度の低減化によ
り、前記薬剤の半減期を延長し、治療的効果を増加させ
ることである。また、様々な他の用途に現在でも用い得
るが、またはこれらの化合物が公表され、科学者および
医学研究者に入手可能となった後、種々の用途が将来的
に発見されるかもしれない。
【００３９】この発明はまた、側鎖にある８番または９
番炭素原子に結合した他の官能基が付加されたＥＨＮＡ
類似体の合成方法を開示している。この方法は下記の段
階により構成される。
番炭素原子に結合した他の官能基が付加されたＥＨＮＡ
類似体の合成方法を開示している。この方法は下記の段
階により構成される。
【００４０】ａ.所望のキラル配向を有するエポキシド
試薬と２個の選択された炭素原子間に不飽和結合を有す
るアルキルハライド試薬とを、上記試薬によって所望の
キラル配向を有する第１部分および、ＥＨＮＡ類似体の
８番および９番炭素原子になる２つの炭素原子の間に位
置する不飽和結合を有する第２部分から成る不飽和脂肪
族化合物が生成される条件下で反応させ、および ｂ.好適な段階を用いて、不飽和側鎖をアデニル環に結
合させる。このような経路の一つは、図１に示すよう
に、化合物［６］、［７］および［８］を導く合成経路
において、５−アミノ−４,６−ジクロロピリミジン(Ａ
ＤＣＰ)を使用する。別の経路は、所望により、“Ｍits
unobu”状態を使用し、二環アデニル誘導体を側鎖に結
合し、次いで、アデニル誘導体を修飾する。
試薬と２個の選択された炭素原子間に不飽和結合を有す
るアルキルハライド試薬とを、上記試薬によって所望の
キラル配向を有する第１部分および、ＥＨＮＡ類似体の
８番および９番炭素原子になる２つの炭素原子の間に位
置する不飽和結合を有する第２部分から成る不飽和脂肪
族化合物が生成される条件下で反応させ、および ｂ.好適な段階を用いて、不飽和側鎖をアデニル環に結
合させる。このような経路の一つは、図１に示すよう
に、化合物［６］、［７］および［８］を導く合成経路
において、５−アミノ−４,６−ジクロロピリミジン(Ａ
ＤＣＰ)を使用する。別の経路は、所望により、“Ｍits
unobu”状態を使用し、二環アデニル誘導体を側鎖に結
合し、次いで、アデニル誘導体を修飾する。
【００４１】ｃ.不飽和脂肪族化合物と少なくとも１種
の第３試薬とを、第３試薬によって少なくとも１個のヒ
ドロキシル基（または他の所望の基または原子）を８番
および９番の炭素原子の間の不飽和結合に付加すること
により８番および９番炭素原子の間の二重結合が修飾さ
れ、その結果ヒドロキシル化（他の所望の基またはハラ
イド原子のような原子、またはエステルまたはエーテル
基）飽和脂肪族化合物生成される条件下で反応させる。
の第３試薬とを、第３試薬によって少なくとも１個のヒ
ドロキシル基（または他の所望の基または原子）を８番
および９番の炭素原子の間の不飽和結合に付加すること
により８番および９番炭素原子の間の二重結合が修飾さ
れ、その結果ヒドロキシル化（他の所望の基またはハラ
イド原子のような原子、またはエステルまたはエーテル
基）飽和脂肪族化合物生成される条件下で反応させる。
【００４２】これは８番または９番炭素原子に結合した
ヒドロキシル基または他の所望の官能基を有する飽和側
鎖を有し、その所望の立体配置ですべての原子を有する
ＥＨＮＡ類似体を作る。
ヒドロキシル基または他の所望の官能基を有する飽和側
鎖を有し、その所望の立体配置ですべての原子を有する
ＥＨＮＡ類似体を作る。
【００４３】ヒドロキシル基がＥＨＮＡ側鎖に結合して
いる場合、次の工程に使用できるヒドロキシル化中間体
を製造するために、ヒドロキシル基は、本明細書に記載
の通常の化学合成法を使用して、最終化合物をより親油
性にする異なる部分により置換または変換され得る。
いる場合、次の工程に使用できるヒドロキシル化中間体
を製造するために、ヒドロキシル基は、本明細書に記載
の通常の化学合成法を使用して、最終化合物をより親油
性にする異なる部分により置換または変換され得る。
【００４４】初期段階が全て完了すると、追加の処理工
程があれば、例えばベンジルもしくはその他の保護基の
除去を実施することにより、目的とする類似体が合成さ
れる。上記基は、合成中に常用され、保護された構成体
を巻き込む望ましくない反応を阻止する。次いで、最終
の脱保した護類似体を、適当な手段、例えばクロマトグ
ラフィー、ゲル電気泳動または等電点電気泳動により精
製する。
程があれば、例えばベンジルもしくはその他の保護基の
除去を実施することにより、目的とする類似体が合成さ
れる。上記基は、合成中に常用され、保護された構成体
を巻き込む望ましくない反応を阻止する。次いで、最終
の脱保した護類似体を、適当な手段、例えばクロマトグ
ラフィー、ゲル電気泳動または等電点電気泳動により精
製する。
【００４５】特定類似体の作製に使用される特定の処理
および精製段階は、目的類似体の正確な分子構造により
異なる。上記段階は当業界の通常熟練者の技術範囲内で
あり、前記目的に使用され得る適当な試薬および反応の
様々な例は下記に記載されている。実施例および図面に
おいて、各主要出発試薬または中間体は括弧内の番号に
より示されている。便宜上、次にその括弧内の番号を用
いて、後続の処理段階におけるその化合物を示す。
および精製段階は、目的類似体の正確な分子構造により
異なる。上記段階は当業界の通常熟練者の技術範囲内で
あり、前記目的に使用され得る適当な試薬および反応の
様々な例は下記に記載されている。実施例および図面に
おいて、各主要出発試薬または中間体は括弧内の番号に
より示されている。便宜上、次にその括弧内の番号を用
いて、後続の処理段階におけるその化合物を示す。
【００４６】実施例１（下記）では、側鎖における９番
炭素原子に結合したヒドロキシル基を有するＥＨＮＡ類
似体の合成に使用される試薬および反応を詳細に記載し
ている。ここでは９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡまたは９−
ＯＨ−ＥＨＮＡと称するこの化合物を、化合物［１０］
と定める。その完全な化学名は、９−［２（Ｓ），９−
ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニンであり、そ
の合成は図１に描かれている。この類似体は側鎖に２個
のヒドロキシ基を有するため、完全な化学名は「ジヒド
ロキシ」という語を含む。一方のヒドロキシ基を、非修
飾ＥＨＮＡに見られるのと同じ［Ｓ］配向で２番キラル
炭素原子に結合させる。他方のヒドロキシ基を９番炭素
原子に付加すると、９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体が生成さ
れる。
炭素原子に結合したヒドロキシル基を有するＥＨＮＡ類
似体の合成に使用される試薬および反応を詳細に記載し
ている。ここでは９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡまたは９−
ＯＨ−ＥＨＮＡと称するこの化合物を、化合物［１０］
と定める。その完全な化学名は、９−［２（Ｓ），９−
ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニンであり、そ
の合成は図１に描かれている。この類似体は側鎖に２個
のヒドロキシ基を有するため、完全な化学名は「ジヒド
ロキシ」という語を含む。一方のヒドロキシ基を、非修
飾ＥＨＮＡに見られるのと同じ［Ｓ］配向で２番キラル
炭素原子に結合させる。他方のヒドロキシ基を９番炭素
原子に付加すると、９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体が生成さ
れる。
【００４７】実施例２では、側鎖の８番炭素原子に結合
したヒドロキシル基を有するＥＨＮＡ類似体の合成に使
用される試薬および反応を記載している。ここでは８−
ヒドロキシ−ＥＨＮＡまたは８−ＯＨ−ＥＨＮＡと称す
るこの化合物を、化合物［２３］と定める。その完全な
化学名は、９−［２（Ｓ），８−ジヒドロキシ−３
（Ｒ）−ノニル］アデニンであり、その合成は図２に描
かれている。
したヒドロキシル基を有するＥＨＮＡ類似体の合成に使
用される試薬および反応を記載している。ここでは８−
ヒドロキシ−ＥＨＮＡまたは８−ＯＨ−ＥＨＮＡと称す
るこの化合物を、化合物［２３］と定める。その完全な
化学名は、９−［２（Ｓ），８−ジヒドロキシ−３
（Ｒ）−ノニル］アデニンであり、その合成は図２に描
かれている。
【００４８】実施例２はまた、ヒドロキシ基が８’およ
び９’の両炭素原子に付加された（２番炭素原子におけ
る標準ヒドロキシ基に加えて）ジヒドロキシル化ＥＨＮ
Ａ類似体である化合物［１４］の合成についても記載し
ている。その合成は図３に描かれている。
び９’の両炭素原子に付加された（２番炭素原子におけ
る標準ヒドロキシ基に加えて）ジヒドロキシル化ＥＨＮ
Ａ類似体である化合物［１４］の合成についても記載し
ている。その合成は図３に描かれている。
【００４９】３種のこれらのヒドロキシル化類似体は全
て、実施例３に記載されているとおり、可逆的方法でＡ
ＤＡ活性を阻害し、所望の範囲のＫｉ値を有することが
示された。次いで、実施例４に記載されているように、
潅流心臓を含むある種のタイプのインビトロ組織試験で
それらを試験した。ＡＤＡ阻害試験および心筋試験の両
方において、９−ＯＨ類似体は、８−ＯＨ類似体または
８，９−ジヒドロキシ類似体よりもやや優れた効力を示
した。９−ＯＨ類似体は３つの中でも最強の結合剤であ
り、３.８×１０-9のＫｉ値を有する。８−ＯＨ類似体
は最も弱く、Ｋｉ値は１５.８×１０-9であり、８，９
−ジヒドロキシ類似体は中間の強度を有し、Ｋｉ値は
６.４×１０-9であった。９−ＯＨ類似体はまた、８−
ＯＨ類似体が望ましくない筋肉硬直の低下を含め、有意
なレベルを示さなかった心筋再潅流検定において、有用
な防護効果を示した。
て、実施例３に記載されているとおり、可逆的方法でＡ
ＤＡ活性を阻害し、所望の範囲のＫｉ値を有することが
示された。次いで、実施例４に記載されているように、
潅流心臓を含むある種のタイプのインビトロ組織試験で
それらを試験した。ＡＤＡ阻害試験および心筋試験の両
方において、９−ＯＨ類似体は、８−ＯＨ類似体または
８，９−ジヒドロキシ類似体よりもやや優れた効力を示
した。９−ＯＨ類似体は３つの中でも最強の結合剤であ
り、３.８×１０-9のＫｉ値を有する。８−ＯＨ類似体
は最も弱く、Ｋｉ値は１５.８×１０-9であり、８，９
−ジヒドロキシ類似体は中間の強度を有し、Ｋｉ値は
６.４×１０-9であった。９−ＯＨ類似体はまた、８−
ＯＨ類似体が望ましくない筋肉硬直の低下を含め、有意
なレベルを示さなかった心筋再潅流検定において、有用
な防護効果を示した。
【００５０】従って、９−ＯＨ類似体は、好ましい候補
として同定され、他の類似体の合成における出発試薬と
して使用された（より正確には、実施例１で化合物
［９］と定めた９−ＯＨ類似体のベンジル保護前駆体が
出発物質として使用された。ベンジル基は２番炭素原子
に結合したヒドロキシ基を保護した）。所望ならば、本
明細書記載の同じ一般的方法および試薬を用い、８−ヒ
ドロキシまたは８，９−ジヒドロキシ類似体を代わりに
使用することにより、他の選択した部分が９番炭素原子
の代わりにまたはそれに追加して８番炭素原子に結合し
ている同等の親油性類似体が生成され得る。
として同定され、他の類似体の合成における出発試薬と
して使用された（より正確には、実施例１で化合物
［９］と定めた９−ＯＨ類似体のベンジル保護前駆体が
出発物質として使用された。ベンジル基は２番炭素原子
に結合したヒドロキシ基を保護した）。所望ならば、本
明細書記載の同じ一般的方法および試薬を用い、８−ヒ
ドロキシまたは８，９−ジヒドロキシ類似体を代わりに
使用することにより、他の選択した部分が９番炭素原子
の代わりにまたはそれに追加して８番炭素原子に結合し
ている同等の親油性類似体が生成され得る。
【００５１】あるいは、合成化学者は、ヒドロキシル化
中間体を経る必要がなく、ヒドロキシル化誘導体製造に
使用された１個またはそれ以上の反応に好適な別の試薬
を使用することにより(例えば、実施例１および図１の
化合物［８］を［９］に変換する反応において、８番と
９番炭素原子の間の不飽和結合を変換し、飽和させるの
に使用した工程中に)、側鎖の８番または９番炭素原子
を指向する他の非ヒドロキシ部分を添加することが可能
であることを認識しよう。上記のより直接的な合成方法
のほうが、収率も改善され、精製段階も少なくて済むと
思われることから、一般にここに記載された初めの研究
中に使用されるヒドロキシル経由の間接的方法よりも好
ましい。
中間体を経る必要がなく、ヒドロキシル化誘導体製造に
使用された１個またはそれ以上の反応に好適な別の試薬
を使用することにより(例えば、実施例１および図１の
化合物［８］を［９］に変換する反応において、８番と
９番炭素原子の間の不飽和結合を変換し、飽和させるの
に使用した工程中に)、側鎖の８番または９番炭素原子
を指向する他の非ヒドロキシ部分を添加することが可能
であることを認識しよう。上記のより直接的な合成方法
のほうが、収率も改善され、精製段階も少なくて済むと
思われることから、一般にここに記載された初めの研究
中に使用されるヒドロキシル経由の間接的方法よりも好
ましい。
【００５２】それにも拘らず、側鎖の８番または９番炭
素に結合したヒドロキシル基を有する中間体(および消
耗により、２番炭素上の酸素原子に結合したベンジル保
護基を有する)の相対的安定性および操作のしやすさの
ために、ヒドロキシル中間体経路は、ヒドロキシル基の
置換または誘導体化により産生できる種々の類似体の合
成の有用な経路であると認識されている。
素に結合したヒドロキシル基を有する中間体(および消
耗により、２番炭素上の酸素原子に結合したベンジル保
護基を有する)の相対的安定性および操作のしやすさの
ために、ヒドロキシル中間体経路は、ヒドロキシル基の
置換または誘導体化により産生できる種々の類似体の合
成の有用な経路であると認識されている。
【００５３】例えば、８番または９番炭素元気のヒドロ
キシル基は、酸素含有基(アルデヒドまたはケトン基、
カルボン酸基、エステルまたはエーテルを含む)に、例
えば実施例に開示された技術または化学合成業界の熟練
者に知られた他の技術を用いて、相対的に容易に製造さ
れ得る。他の例として、ヒドロキシル基は、ヒドロキシ
ル基は、例えば化合物［２８］および［２９］に関する
実施例５における方法によりハライド基（例えば、塩
素、フッ素、臭素または沃素原子）に変換され得る。更
に、ヒドロキシル基は、公知方法により非常に多くの他
の基に変換され得る。
キシル基は、酸素含有基(アルデヒドまたはケトン基、
カルボン酸基、エステルまたはエーテルを含む)に、例
えば実施例に開示された技術または化学合成業界の熟練
者に知られた他の技術を用いて、相対的に容易に製造さ
れ得る。他の例として、ヒドロキシル基は、ヒドロキシ
ル基は、例えば化合物［２８］および［２９］に関する
実施例５における方法によりハライド基（例えば、塩
素、フッ素、臭素または沃素原子）に変換され得る。更
に、ヒドロキシル基は、公知方法により非常に多くの他
の基に変換され得る。
【００５４】一例として、ヒドロキシル基は、ヒドロキ
シルをｐ−トルエンスルホニルクロリド(ＴｓＣｌ)と反
応させてＯ−トシル基(図面ではＯＴｓと略す、トシル
はトルエンスルホニルを示す)を生成させ、次いでＯじ
ゃらトシル化合物をアジ化ナトリウム(ＮａＮ3)と反応
させてＯ−トシル基を置換し、炭素鎖に結合したＮ3基
が残されることによりアジド基に変換され得る。
シルをｐ−トルエンスルホニルクロリド(ＴｓＣｌ)と反
応させてＯ−トシル基(図面ではＯＴｓと略す、トシル
はトルエンスルホニルを示す)を生成させ、次いでＯじ
ゃらトシル化合物をアジ化ナトリウム(ＮａＮ3)と反応
させてＯ−トシル基を置換し、炭素鎖に結合したＮ3基
が残されることによりアジド基に変換され得る。
【００５５】ここに記載されている要領で合成され得る
類似体には、ノニル側鎖の８番または９番炭素原子に結
合している化学的部分が、ハライド、窒素含有部分例え
ばアミン、アミド、アジド、イミドまたはラクタム、カ
ルボン酸またはその塩、またはエステルまたはエーテル
結合により８番もしくは９番炭素原子に結合している部
分により構成される類似体があるが、それらに限定され
るわけではない。本明細書の請求の範囲に包含されるた
めには、上記類似体は全て、上記類似体がここに開示さ
れているとおり治療上有用なものとなり得る特性を示さ
なければならない（すなわち、生成した類似体は、約１
０-7〜約１０-10という所望の範囲内のＫｉを有するべ
きである。それは薬理学的に許容し得るものでなくては
ならない。さらにそれは、虚血または低酸素症による損
傷から組織を保護する際、または１種またはそれ以上の
抗癌剤、抗ウイルス剤または他の薬剤とのアジュバント
として治療上有用でなくてはならない）。
類似体には、ノニル側鎖の８番または９番炭素原子に結
合している化学的部分が、ハライド、窒素含有部分例え
ばアミン、アミド、アジド、イミドまたはラクタム、カ
ルボン酸またはその塩、またはエステルまたはエーテル
結合により８番もしくは９番炭素原子に結合している部
分により構成される類似体があるが、それらに限定され
るわけではない。本明細書の請求の範囲に包含されるた
めには、上記類似体は全て、上記類似体がここに開示さ
れているとおり治療上有用なものとなり得る特性を示さ
なければならない（すなわち、生成した類似体は、約１
０-7〜約１０-10という所望の範囲内のＫｉを有するべ
きである。それは薬理学的に許容し得るものでなくては
ならない。さらにそれは、虚血または低酸素症による損
傷から組織を保護する際、または１種またはそれ以上の
抗癌剤、抗ウイルス剤または他の薬剤とのアジュバント
として治療上有用でなくてはならない）。
【００５６】エポキシド［１］は、アブシャナブ等（１
９８４および１９８８）記載の要領で合成された。それ
は、エポキシド中の３番および４番炭素により与えられ
る、最終ＥＨＮＡ類似体中の２個のキラル炭素原子にお
ける置換基の配向を制御する。ここで検討されているＥ
ＨＮＡ類似体のいずれかの異なる立体異性体を合成する
ため、所望のキラル立体配置を有する異なるエポキシド
立体異性体が、出発試薬として使用され得る。
９８４および１９８８）記載の要領で合成された。それ
は、エポキシド中の３番および４番炭素により与えられ
る、最終ＥＨＮＡ類似体中の２個のキラル炭素原子にお
ける置換基の配向を制御する。ここで検討されているＥ
ＨＮＡ類似体のいずれかの異なる立体異性体を合成する
ため、所望のキラル立体配置を有する異なるエポキシド
立体異性体が、出発試薬として使用され得る。
【００５７】出発エポキシドにおいて３番炭素原子に酸
素原子を介して結合したベンジル基（−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5）
は、酸素原子に関する保護基として作用した。ヒドロキ
シル化ＥＨＮＡ類似体の各々の最終合成段階において、
ベンジル基を水素により置換すると、側鎖の２番炭素に
ヒドロキシル基が生成された。その２番ヒドロキシル基
は、正常ＥＨＮＡ分子の一部である。所望ならば、その
ヒドロキシル基は、保護された酸素原子を伴わない出発
エポキシドを用いることにより除去され得るか、または
上記要領に従い、それは合成中に修飾されて、ハライ
ド、カルボン酸、エステル、エーテル、アジドまたは他
の基を提供し得る。ある部分が最終ＥＨＮＡ類似体にお
ける１番炭素原子に所望される場合、それは、所望の部
分を有する出発エポキシドまたはエポキシドの４番炭素
原子における前駆体を用いることにより提供され得る。
素原子を介して結合したベンジル基（−ＣＨ2Ｃ6Ｈ5）
は、酸素原子に関する保護基として作用した。ヒドロキ
シル化ＥＨＮＡ類似体の各々の最終合成段階において、
ベンジル基を水素により置換すると、側鎖の２番炭素に
ヒドロキシル基が生成された。その２番ヒドロキシル基
は、正常ＥＨＮＡ分子の一部である。所望ならば、その
ヒドロキシル基は、保護された酸素原子を伴わない出発
エポキシドを用いることにより除去され得るか、または
上記要領に従い、それは合成中に修飾されて、ハライ
ド、カルボン酸、エステル、エーテル、アジドまたは他
の基を提供し得る。ある部分が最終ＥＨＮＡ類似体にお
ける１番炭素原子に所望される場合、それは、所望の部
分を有する出発エポキシドまたはエポキシドの４番炭素
原子における前駆体を用いることにより提供され得る。
【００５８】ここに記載されている合成反応はまた、ノ
ニル側鎖における４番、５番、６番または７番炭素原子
の誘導体化（すなわち、ある部分をそこに結合させる）
方法を提供する。ここで使用されている合成方法では、
それらの炭素原子は、試薬１−ペンテニルマグネシウム
ブロミドにより与えられたもので、この試薬はエポキシ
ド［１］を化合物［２］に変換する反応において図１で
示された構造を有する。１−ペンテニルという表示は、
不飽和二重結合が１−ペンテニルマグネシウムブロミド
における１番および２番炭素原子間に位置することを示
す。それらの炭素原子は、結局この発明のＥＨＮＡ類似
体における８番および９番炭素原子となる。二重結合ペ
ンテニル化合物における不飽和炭素原子は、化合物
［８］を化合物［９］へ変換する反応中におけるヒドロ
キシル基の結合点となった。ヒドロキシル基を両方の不
飽和炭素原子に付加し、続いて所望の位置にヒドロキシ
ル部分を有する化合物を精製した。別の方法の場合、ペ
ンテニル化合物により供される二重結合は、化合物［１
５］を生じる反応において図２で示されている通り、エ
ポキシド中間体に変換された。
ニル側鎖における４番、５番、６番または７番炭素原子
の誘導体化（すなわち、ある部分をそこに結合させる）
方法を提供する。ここで使用されている合成方法では、
それらの炭素原子は、試薬１−ペンテニルマグネシウム
ブロミドにより与えられたもので、この試薬はエポキシ
ド［１］を化合物［２］に変換する反応において図１で
示された構造を有する。１−ペンテニルという表示は、
不飽和二重結合が１−ペンテニルマグネシウムブロミド
における１番および２番炭素原子間に位置することを示
す。それらの炭素原子は、結局この発明のＥＨＮＡ類似
体における８番および９番炭素原子となる。二重結合ペ
ンテニル化合物における不飽和炭素原子は、化合物
［８］を化合物［９］へ変換する反応中におけるヒドロ
キシル基の結合点となった。ヒドロキシル基を両方の不
飽和炭素原子に付加し、続いて所望の位置にヒドロキシ
ル部分を有する化合物を精製した。別の方法の場合、ペ
ンテニル化合物により供される二重結合は、化合物［１
５］を生じる反応において図２で示されている通り、エ
ポキシド中間体に変換された。
【００５９】これらの方法のいずれかを用いると、ＥＨ
ＮＡ類似体の側鎖におけるヒドロキシル（または他の所
望の）基の位置は、所望の位置に二重結合を有するペン
テニルマグネシウムブロミド（または同様の）化合物を
用いることにより制御され得る。２−ペンテニル化合物
は、その２番および３番炭素原子間に二重結合を有し、
それらは最終ＥＨＮＡ類似体では８番および７番炭素原
子となる。３−ペンテニル試薬（その３番および４番炭
素原子間に二重結合を有する）は、ＥＨＮＡ類似体にお
ける７番または６番炭素に結合したヒドロキシル基を生
成させる。
ＮＡ類似体の側鎖におけるヒドロキシル（または他の所
望の）基の位置は、所望の位置に二重結合を有するペン
テニルマグネシウムブロミド（または同様の）化合物を
用いることにより制御され得る。２−ペンテニル化合物
は、その２番および３番炭素原子間に二重結合を有し、
それらは最終ＥＨＮＡ類似体では８番および７番炭素原
子となる。３−ペンテニル試薬（その３番および４番炭
素原子間に二重結合を有する）は、ＥＨＮＡ類似体にお
ける７番または６番炭素に結合したヒドロキシル基を生
成させる。
【００６０】図２はまた、ハロゲン化類似体、化合物
［２１］を示す。化合物［２１］では、ハロゲン（塩
素）原子がアデニン環構造中に置換された。その塩素原
子は化合物［２２］の合成中にアミン基により置換され
たが、その特定反応(すなわち、アミン基のハライド原
子による置換)は所望ならば省略され得るため、ハロゲ
ン部分はアデニル環構造に残存する。この試みをなした
場合、側鎖の２番のベンジル保護基は、非還元法により
(ＴＭＳＩのような試薬を使用することにより)除去し、
アデニル環構造からのハライド基の除去を避ける必要が
ある。
［２１］を示す。化合物［２１］では、ハロゲン（塩
素）原子がアデニン環構造中に置換された。その塩素原
子は化合物［２２］の合成中にアミン基により置換され
たが、その特定反応(すなわち、アミン基のハライド原
子による置換)は所望ならば省略され得るため、ハロゲ
ン部分はアデニル環構造に残存する。この試みをなした
場合、側鎖の２番のベンジル保護基は、非還元法により
(ＴＭＳＩのような試薬を使用することにより)除去し、
アデニル環構造からのハライド基の除去を避ける必要が
ある。
【００６１】ここに記載されているＥＨＮＡ類似体のア
デニル構造を生成するのに使用される方法により、アデ
ニン基に様々な変化を加える一般的方法が提供される。
アデニル構造は、化合物［６］を生成する反応において
図１に示されている複素環化合物、５−アミノ−４,６
−ジクロロピリミジン（ＡＤＣＰ）を供給し、次いで操
作することにより得られた。またこの同じ試薬を使用す
ることにより、図２に示されている化合物［２０］が生
成された。ＡＤＣＰの塩素原子の１つを側鎖に結合した
アミン基と置き換えることにより、ＡＤＣＰを側鎖に結
合させた。次いで、２個の近接窒素原子間に炭素結合を
形成させることにより、アデニン構造における５員環を
閉環した。
デニル構造を生成するのに使用される方法により、アデ
ニン基に様々な変化を加える一般的方法が提供される。
アデニル構造は、化合物［６］を生成する反応において
図１に示されている複素環化合物、５−アミノ−４,６
−ジクロロピリミジン（ＡＤＣＰ）を供給し、次いで操
作することにより得られた。またこの同じ試薬を使用す
ることにより、図２に示されている化合物［２０］が生
成された。ＡＤＣＰの塩素原子の１つを側鎖に結合した
アミン基と置き換えることにより、ＡＤＣＰを側鎖に結
合させた。次いで、２個の近接窒素原子間に炭素結合を
形成させることにより、アデニン構造における５員環を
閉環した。
【００６２】所望ならば、代替的複素環試薬をＡＤＣＰ
の代わりに用いることにより、環の１つに結合した部分
として、または環のいずれかに組み込まれた異なる原子
として、修飾アデニン構造をもつＥＨＮＡ類似体が生成
され得る。クリスタリ等（１９８８および１９９１）
は、修飾アデニン構造をもつある種のＥＨＮＡ類似体
（例えば３−デアザ−ＥＨＮＡ誘導体）がＡＤＡ阻害剤
として活性を示すことを報告している。アデニル構造に
加えられる上記修飾は、修飾された側鎖を有するこの発
明の類似体中に組み込まれ得る。
の代わりに用いることにより、環の１つに結合した部分
として、または環のいずれかに組み込まれた異なる原子
として、修飾アデニン構造をもつＥＨＮＡ類似体が生成
され得る。クリスタリ等（１９８８および１９９１）
は、修飾アデニン構造をもつある種のＥＨＮＡ類似体
（例えば３−デアザ−ＥＨＮＡ誘導体）がＡＤＡ阻害剤
として活性を示すことを報告している。アデニル構造に
加えられる上記修飾は、修飾された側鎖を有するこの発
明の類似体中に組み込まれ得る。
【００６３】上記で述べたところによると、ＡＤＡ阻害
について試験された（実施例４に記載された通り）３種
のヒドロキシル化ＥＨＮＡ類似体は全て、活性を呈する
ことが示された。９−ヒドロキシ類似体（化合物［１
０］）は、３つの中でも最強の結合剤であり、Ｋｉ値は
３.８×１０-9モルであった。８,９−ジヒドロキシ類似
体（化合物［１４］）は最も弱く、Ｋｉ値は１５.８×
１０-9であり、８−ＯＨ類似体（化合物［２３］）は中
間の強度を有し、Ｋｉ値は６.４×１０-9であった。
について試験された（実施例４に記載された通り）３種
のヒドロキシル化ＥＨＮＡ類似体は全て、活性を呈する
ことが示された。９−ヒドロキシ類似体（化合物［１
０］）は、３つの中でも最強の結合剤であり、Ｋｉ値は
３.８×１０-9モルであった。８,９−ジヒドロキシ類似
体（化合物［１４］）は最も弱く、Ｋｉ値は１５.８×
１０-9であり、８−ＯＨ類似体（化合物［２３］）は中
間の強度を有し、Ｋｉ値は６.４×１０-9であった。
【００６４】３つのこれらＫｉ値は全て、約１０-7〜約
１０-10に及ぶ所望の範囲内に含まれる。所望の範囲の
一端では、約１０-10よりも低いＫｉ値を有する非常に
有効なＡＤＡ阻害剤は、酵素へ非常に強く結合するた
め、実際的には、反応が不可逆的となることにより、酵
素を「無力化する」危険がある。所望の範囲の他端で
は、約１０-7よりも高いＫｉ値を有する弱いＡＤＡ阻害
剤は、効力が不十分なために所望のレベルのＡＤＡ阻害
が達成できない傾向がある。それらは比較的大量に投与
される必要があり、大量の場合でさえ、効力が充分では
ない場合もあり得る。
１０-10に及ぶ所望の範囲内に含まれる。所望の範囲の
一端では、約１０-10よりも低いＫｉ値を有する非常に
有効なＡＤＡ阻害剤は、酵素へ非常に強く結合するた
め、実際的には、反応が不可逆的となることにより、酵
素を「無力化する」危険がある。所望の範囲の他端で
は、約１０-7よりも高いＫｉ値を有する弱いＡＤＡ阻害
剤は、効力が不十分なために所望のレベルのＡＤＡ阻害
が達成できない傾向がある。それらは比較的大量に投与
される必要があり、大量の場合でさえ、効力が充分では
ない場合もあり得る。
【００６５】Ｋｉ値の所望の範囲は比較的広いため、候
補化合物は、様々な経路により所望の量で患者に投与さ
れ得る。約１０-9の範囲に含まれるＫｉ値を有する類似
体は、比較的低用量で投与されるべきで、例えば静脈内
注射の場合１日体重１キログラムにつき約１０ミリグラ
ム以下であり、経口投与の場合約５０ｍｇ／ｋｇ／日以
下である。約１０-7の範囲に含まれるＫｉ値を有する効
力の低い類似体は高い用量で投与され得、例えば経口投
与または重大な発作性症状に応じて注射される場合約２
５ｍｇ／ｋｇ／日以下、または静脈内注射の場合２０ｍ
ｇ／ｋｇ／日以下である。ＡＤＡ欠損により誘発される
代謝問題はゆっくりと蓄積する傾向があるため、短期用
量は幾分大きめであり得る。
補化合物は、様々な経路により所望の量で患者に投与さ
れ得る。約１０-9の範囲に含まれるＫｉ値を有する類似
体は、比較的低用量で投与されるべきで、例えば静脈内
注射の場合１日体重１キログラムにつき約１０ミリグラ
ム以下であり、経口投与の場合約５０ｍｇ／ｋｇ／日以
下である。約１０-7の範囲に含まれるＫｉ値を有する効
力の低い類似体は高い用量で投与され得、例えば経口投
与または重大な発作性症状に応じて注射される場合約２
５ｍｇ／ｋｇ／日以下、または静脈内注射の場合２０ｍ
ｇ／ｋｇ／日以下である。ＡＤＡ欠損により誘発される
代謝問題はゆっくりと蓄積する傾向があるため、短期用
量は幾分大きめであり得る。
【００６６】ＡＤＡ阻害について試験後、実施例４記載
の方法を用いて、心臓への虚血傷害に対する防護につい
てヒドロキシル化ＥＨＮＡ類似体を試験した。簡単に述
べると、これらの試験では、実験用ラットから摘出した
心臓を、潅流装置に据え付け、電気刺激を与えて心拍を
持続させ、候補薬剤で処置し、一定期間虚血状態にし、
次いで再潅流することにより、いかにうまく心臓がその
ポンプ機能を回復し得るかについて評価した。これら当
初の検定においては、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは、虚血後の
望ましくない筋肉硬直の低減化を含む特定パラメーター
において非修飾ＥＨＮＡよりも高いレベルの防御を呈し
た。実施例６に記載された幾分異なる心臓標本を用いる
後続検定において、９−ＯＨ−ＥＨＮＡの利点は、非修
飾ＥＨＮＡと比べて顕著なものではなかった。しかしな
がら、他の類似体は、それらの後続検定が実施された時
点までに生成されており、それらの他の検定の結果は、
他の好ましい類似体のほうが、虚血または低酸素症によ
る損傷から心臓を防護する場合に９−ＯＨ−ＥＨＮＡま
たは非修飾ＥＨＮＡよりも実質的に優れていることを明
白に示していた。
の方法を用いて、心臓への虚血傷害に対する防護につい
てヒドロキシル化ＥＨＮＡ類似体を試験した。簡単に述
べると、これらの試験では、実験用ラットから摘出した
心臓を、潅流装置に据え付け、電気刺激を与えて心拍を
持続させ、候補薬剤で処置し、一定期間虚血状態にし、
次いで再潅流することにより、いかにうまく心臓がその
ポンプ機能を回復し得るかについて評価した。これら当
初の検定においては、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは、虚血後の
望ましくない筋肉硬直の低減化を含む特定パラメーター
において非修飾ＥＨＮＡよりも高いレベルの防御を呈し
た。実施例６に記載された幾分異なる心臓標本を用いる
後続検定において、９−ＯＨ−ＥＨＮＡの利点は、非修
飾ＥＨＮＡと比べて顕著なものではなかった。しかしな
がら、他の類似体は、それらの後続検定が実施された時
点までに生成されており、それらの他の検定の結果は、
他の好ましい類似体のほうが、虚血または低酸素症によ
る損傷から心臓を防護する場合に９−ＯＨ−ＥＨＮＡま
たは非修飾ＥＨＮＡよりも実質的に優れていることを明
白に示していた。
【００６７】出発試薬として９−ＯＨ類似体のベンジル
保護前駆体（化合物［９］）を用いる、幾つかの他の類
似体の合成については、実施例５に記載され、図４に示
されている。これらの類似体には、２種の比較的親油性
のある類似体があり、ここでは９−クロロ−ＥＨＮＡ
（化合物［２９］）および９−フタルイミド−ＥＨＮＡ
（化合物［２６］）と称す。これら２種の類似体は、虚
血損傷から心筋および脳組織の両方を防御する際に、現
時点までに観察された中で最善の治療結果を示した。
保護前駆体（化合物［９］）を用いる、幾つかの他の類
似体の合成については、実施例５に記載され、図４に示
されている。これらの類似体には、２種の比較的親油性
のある類似体があり、ここでは９−クロロ−ＥＨＮＡ
（化合物［２９］）および９−フタルイミド−ＥＨＮＡ
（化合物［２６］）と称す。これら２種の類似体は、虚
血損傷から心筋および脳組織の両方を防御する際に、現
時点までに観察された中で最善の治療結果を示した。
【００６８】最初の生物学的試験の完了後かなりの量が
まだ利用可能だったため、幾つかの追加的類似体もま
た、サイプロス・ファーマシューティカル・コーポレー
ションにより出発試薬として脱保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ
類似体を用いて生成された。上記の一類似体は、実施例
５に記載された珪素含有類似体（化合物［３３］）であ
る。珪素含有部分は２つの理由で選択された。すなわ
ち、（１）計算結果はそれが非常に高い親油性を有する
ことを示し、その因子を評価するのに役立つ潜在的に有
用な試験化合物を提供できたこと、および（２）それが
脱保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ分子中の９番原子に付加され
得、側鎖の２番炭素原子におけるヒドロキシル基を妨害
しないことである。
まだ利用可能だったため、幾つかの追加的類似体もま
た、サイプロス・ファーマシューティカル・コーポレー
ションにより出発試薬として脱保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ
類似体を用いて生成された。上記の一類似体は、実施例
５に記載された珪素含有類似体（化合物［３３］）であ
る。珪素含有部分は２つの理由で選択された。すなわ
ち、（１）計算結果はそれが非常に高い親油性を有する
ことを示し、その因子を評価するのに役立つ潜在的に有
用な試験化合物を提供できたこと、および（２）それが
脱保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ分子中の９番原子に付加され
得、側鎖の２番炭素原子におけるヒドロキシル基を妨害
しないことである。
【００６９】都合上、実施例１、２または５に列挙され
た最終（脱保護）類似体に関して収集または計算された
Ｋｉ値および油／水溶解度値を、表１に編集している。
この表では、これらの類似体には、どのタイプの修飾基
が側鎖に付加されたか、そしてそれがどの炭素原子に結
合したかを示す簡単な名前が与えられている。完全な化
学名は実施例１、２および５で与えられており、括弧内
の化合物番号と相関させている。表１におけるＫｉ値は
細胞外ＡＤＡ酵素を使用したものであって、親油性類似
体がより容易かつ大量に細胞へ入り込む見かけ上の能力
を表してはいなかったことに留意すべきである。
た最終（脱保護）類似体に関して収集または計算された
Ｋｉ値および油／水溶解度値を、表１に編集している。
この表では、これらの類似体には、どのタイプの修飾基
が側鎖に付加されたか、そしてそれがどの炭素原子に結
合したかを示す簡単な名前が与えられている。完全な化
学名は実施例１、２および５で与えられており、括弧内
の化合物番号と相関させている。表１におけるＫｉ値は
細胞外ＡＤＡ酵素を使用したものであって、親油性類似
体がより容易かつ大量に細胞へ入り込む見かけ上の能力
を表してはいなかったことに留意すべきである。
【００７０】
【表１】 様々なＥＨＮＡ類似体に関する化学データ 化合物 修飾基 Ｋｉ値（モル） Ｌｏｇ Ｐo/w 番号 ×１０-9 （計算値） −− 非修飾ラセミＥＨＮＡ ６ ２.６０±０.４１ −− 非修飾(＋)ＥＨＮＡ ３ ２.６０±０.４１ ［10］ ９-ヒドロキシ-ＥＨＮＡ ３.８±０.４ ０.５９±０.４１ ［23］ ８-ヒドロキシ-ＥＨＮＡ ６.４ ０.４１±０.４１ ［14］ ８,９-ジヒドロキシ-ＥＨＮＡ １５.８±０.４ −１.１０±０.４２ ［25］ ９-ベンゾイルオキシ-ＥＨＮＡ ０.２ ３.５０±０.４１ ［27］ ９-フタルイミド-ＥＨＮＡ ２.３ ２.８６±０.４４ ［29］ ９-クロロ-ＥＨＮＡ ３.７ ２.２８±０.４１ ［31］ ９-カルボキシメチル-ＥＨＮＡ ５.０ ０.９５±０.４１ ［32］ ８,９-不飽和ＥＨＮＡ ２.５ ２.０６±０.４１ ［33］ ９-ｔ-ＢＤＰＳｉ-ＥＨＮＡ 測定されず ９.４６±０.６９
【００７１】化合物の利用性のため、純粋な(＋)立体異
性体よりもむしろ、非修飾ＥＨＮＡのラセミ混合物を試
験した。(−)異性体は、ＡＤＡ酵素の阻害について(＋)
異性体よりも非常に能力が低いことから、純粋な(＋)異
性体のＫi値は、ラセミ混合物の値のほぼ半分である
（即ち、約３×１０-9、むしろ６×１０-9）。
性体よりもむしろ、非修飾ＥＨＮＡのラセミ混合物を試
験した。(−)異性体は、ＡＤＡ酵素の阻害について(＋)
異性体よりも非常に能力が低いことから、純粋な(＋)異
性体のＫi値は、ラセミ混合物の値のほぼ半分である
（即ち、約３×１０-9、むしろ６×１０-9）。
【００７２】Ｋi値を測定する試験は、溶液中でＡＤＡ
酵素の細胞遊離調製を必要とする。対照してみると、虚
血症状または低酸素症状で攻撃された細胞中におけるラ
セミ混合物に対する純粋(＋)異性体の効力を比較した細
胞培養試験により、２つの調製物（ラセミ混合物対純粋
(＋)異性体）の保護能力の相異は、ラセミ混合物の有効
性の２倍を有すると言うよりはむしろ多くの試験におい
てだいたい約１０％程度の有効性を有するのみである純
粋異性体の場合、相対的に重要でないことが示された。
これらの試験は、実施例１０に記載しており、そのデー
タは、表９および１０に与える。
酵素の細胞遊離調製を必要とする。対照してみると、虚
血症状または低酸素症状で攻撃された細胞中におけるラ
セミ混合物に対する純粋(＋)異性体の効力を比較した細
胞培養試験により、２つの調製物（ラセミ混合物対純粋
(＋)異性体）の保護能力の相異は、ラセミ混合物の有効
性の２倍を有すると言うよりはむしろ多くの試験におい
てだいたい約１０％程度の有効性を有するのみである純
粋異性体の場合、相対的に重要でないことが示された。
これらの試験は、実施例１０に記載しており、そのデー
タは、表９および１０に与える。
【００７３】実施例６では、様々な類似体が虚血から心
筋を防御する能力を評価する試験について記載してい
る。結果は、比較的親油性のある類似体（９−クロロ−
ＥＨＮＡおよび９−フタルイミド−ＥＨＮＡを含む）の
ほうが、非修飾ＥＨＮＡまたはヒドロキシル化ＥＨＮＡ
よりも心筋を虚血損傷から防御する力が実質的に強いこ
とを示していた。
筋を防御する能力を評価する試験について記載してい
る。結果は、比較的親油性のある類似体（９−クロロ−
ＥＨＮＡおよび９−フタルイミド−ＥＨＮＡを含む）の
ほうが、非修飾ＥＨＮＡまたはヒドロキシル化ＥＨＮＡ
よりも心筋を虚血損傷から防御する力が実質的に強いこ
とを示していた。
【００７４】実施例７では、（１）ヒト細胞へ入り込
む、および（２）細胞内でＡＤＡ活性を阻害するとい
う、ＥＨＮＡおよび幾つかの類似体の両能力を評価する
細胞培養試験の結果について記載している。これらの試
験では、細胞にストレスをかけず、または虚血損傷に対
して類似体を試験しなかった。その代わり、試験では、
様々な類似体が細胞内酵素分子に達し、それらの活性を
阻害する場合の能力について評価した。これらの試験で
は、赤血球（研究対象とし易い）およびヒト星状細胞腫
細胞（細胞培養で再生し得る脳細胞である。これらを用
いることにより、ＥＨＮＡ類似体が脳組織における虚血
損傷の低減化を助け得るか否かの指標が提供された）の
両方が用いられた。これらの結果は、低いＩＣ50値が示
したところによると、非修飾ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−
ＥＨＮＡよりも親油性の高い幾つかのＥＨＮＡ類似体の
ほうが、細胞内でのＡＤＡ活性の阻害において非修飾Ｅ
ＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも実質的に効力が
強いことを示していた。
む、および（２）細胞内でＡＤＡ活性を阻害するとい
う、ＥＨＮＡおよび幾つかの類似体の両能力を評価する
細胞培養試験の結果について記載している。これらの試
験では、細胞にストレスをかけず、または虚血損傷に対
して類似体を試験しなかった。その代わり、試験では、
様々な類似体が細胞内酵素分子に達し、それらの活性を
阻害する場合の能力について評価した。これらの試験で
は、赤血球（研究対象とし易い）およびヒト星状細胞腫
細胞（細胞培養で再生し得る脳細胞である。これらを用
いることにより、ＥＨＮＡ類似体が脳組織における虚血
損傷の低減化を助け得るか否かの指標が提供された）の
両方が用いられた。これらの結果は、低いＩＣ50値が示
したところによると、非修飾ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−
ＥＨＮＡよりも親油性の高い幾つかのＥＨＮＡ類似体の
ほうが、細胞内でのＡＤＡ活性の阻害において非修飾Ｅ
ＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも実質的に効力が
強いことを示していた。
【００７５】実施例８では、脳細胞または血液細胞にお
いて虚血損傷を生じさせるのに幾つかの異なる方法を用
いた細胞培養試験の結果が記載されている。これらの試
験の中には、毒素、例えば２−デオキシグルコースまた
はアジ化ナトリウムを用いて呼吸および解糖を妨害させ
るものもあった。他の試験では、細胞培養培地に酸素ガ
スではなく窒素ガスを吹き込むことにより得られる、遊
離酸素を全く含まない培養培地を使用した。これらの試
験全てにおいて、細胞を一定期間の酸素奪取にかけ（通
常数分間続ける）、次いで酸素供給を復活した。短期間
で細胞を平衡状態に回復させた後、選択された代謝指標
を評価して、いかに周到に細胞がそれらの適切な代謝速
度を取り戻すに至ったかを測定した。結果は、ＥＨＮＡ
類似体（特に親油性類似体）の中には実際に虚血損傷か
ら脳細胞を防御し得るものもあることを示していた。
いて虚血損傷を生じさせるのに幾つかの異なる方法を用
いた細胞培養試験の結果が記載されている。これらの試
験の中には、毒素、例えば２−デオキシグルコースまた
はアジ化ナトリウムを用いて呼吸および解糖を妨害させ
るものもあった。他の試験では、細胞培養培地に酸素ガ
スではなく窒素ガスを吹き込むことにより得られる、遊
離酸素を全く含まない培養培地を使用した。これらの試
験全てにおいて、細胞を一定期間の酸素奪取にかけ（通
常数分間続ける）、次いで酸素供給を復活した。短期間
で細胞を平衡状態に回復させた後、選択された代謝指標
を評価して、いかに周到に細胞がそれらの適切な代謝速
度を取り戻すに至ったかを測定した。結果は、ＥＨＮＡ
類似体（特に親油性類似体）の中には実際に虚血損傷か
ら脳細胞を防御し得るものもあることを示していた。
【００７６】実施例９では、ＥＨＮＡ類似体に関し、虚
血に対して無傷の哺乳類脳組織を保護するその能力を定
量試験するのに使用され得る幾つかの検定法について記
載している。実施例７のように、摘出培養した脳細胞を
用いずに、これらの試験では、殺したラットの海馬領域
から得られた無傷の脳組織片を使用する。海馬領域を使
用するのは、それが虚血損傷に対して非常に傷つき易い
ためであり、電気刺激に応じて脳波をまだ発生し得る無
傷の海馬片を使用した方が、摘出細胞の代謝速度よりも
全体的組織機能がよい状態で確保される。これらの試験
は現在進行中である。最終結果はまだ入手できていない
が、ここに記載されたＥＨＮＡ類似体のうちの少なくと
も幾つかは、脳組織における虚血または低酸素症損傷を
顕著かつ治療的に低減化することが（潅流心臓試験およ
び培養脳細胞試験を含む、他の試験で提供された防護レ
ベルに基づき）確信されている。
血に対して無傷の哺乳類脳組織を保護するその能力を定
量試験するのに使用され得る幾つかの検定法について記
載している。実施例７のように、摘出培養した脳細胞を
用いずに、これらの試験では、殺したラットの海馬領域
から得られた無傷の脳組織片を使用する。海馬領域を使
用するのは、それが虚血損傷に対して非常に傷つき易い
ためであり、電気刺激に応じて脳波をまだ発生し得る無
傷の海馬片を使用した方が、摘出細胞の代謝速度よりも
全体的組織機能がよい状態で確保される。これらの試験
は現在進行中である。最終結果はまだ入手できていない
が、ここに記載されたＥＨＮＡ類似体のうちの少なくと
も幾つかは、脳組織における虚血または低酸素症損傷を
顕著かつ治療的に低減化することが（潅流心臓試験およ
び培養脳細胞試験を含む、他の試験で提供された防護レ
ベルに基づき）確信されている。
【００７７】実施例９に記載された海馬薄片試験で有望
な結果を示す類似体については、無傷の動物に関するイ
ンビボ試験でさらに試験する。例えばネルガードおよび
ヴィーロッホ（１９９２）、ブチャンおよびプルシネリ
（１９９０）、ミヒェンフェルダー等（１９８９）およ
びラニエル等（１９８８）の文献に記載されたところに
よると、これらの試験は、動脈クランピング、頚部止血
帯または試験動物の脳において局所的または全体的虚血
を誘導する他の方法を使用し得る。
な結果を示す類似体については、無傷の動物に関するイ
ンビボ試験でさらに試験する。例えばネルガードおよび
ヴィーロッホ（１９９２）、ブチャンおよびプルシネリ
（１９９０）、ミヒェンフェルダー等（１９８９）およ
びラニエル等（１９８８）の文献に記載されたところに
よると、これらの試験は、動脈クランピング、頚部止血
帯または試験動物の脳において局所的または全体的虚血
を誘導する他の方法を使用し得る。
【００７８】要約すると、実施例、表および図面は、こ
こに記載されているある種のＥＨＮＡ類似体が、虚血に
よる損傷から心筋および脳細胞を保護する場合に有用で
以前には知られていなかった治療上の利点を有すること
を示している。比較的親油性のある類似体がもたらす利
点は、非修飾ＥＨＮＡまたはヒドロキシル化ＥＨＮＡ類
似体が与える利点を上回り、凌駕している。
こに記載されているある種のＥＨＮＡ類似体が、虚血に
よる損傷から心筋および脳細胞を保護する場合に有用で
以前には知られていなかった治療上の利点を有すること
を示している。比較的親油性のある類似体がもたらす利
点は、非修飾ＥＨＮＡまたはヒドロキシル化ＥＨＮＡ類
似体が与える利点を上回り、凌駕している。
【００７９】異性体、塩、および類似体 ここに記載された目的に有用な一群の薬剤には、ここに
記載された化合物の異性体（「トレオ」異性体を含
む）、類似体または塩類が、ＡＤＡ阻害剤として機能的
に有効であり、薬理学的に許容し得、虚血もしくは低酸
素症損傷を低減化するかまたは抗癌剤、抗ウイルス剤も
しくは他の薬剤の分解を遅らせる場合に治療上有効であ
れば、それらは全て含まれる。ＡＤＡ活性の阻害におけ
る候補異性体、類似体または塩の効力は、例えば実施例
３に記載された方法を用いて試験され得る。虚血または
低酸素症損傷に対する候補異性体、類似体または塩の治
療効力は、各実施例に記載のインビトロ法を用いて初期
に試験することができ、インビトロ試験で良好な効力を
示す候補化合物を、続いて、更にインビボ試験で評価す
ることができる。
記載された化合物の異性体（「トレオ」異性体を含
む）、類似体または塩類が、ＡＤＡ阻害剤として機能的
に有効であり、薬理学的に許容し得、虚血もしくは低酸
素症損傷を低減化するかまたは抗癌剤、抗ウイルス剤も
しくは他の薬剤の分解を遅らせる場合に治療上有効であ
れば、それらは全て含まれる。ＡＤＡ活性の阻害におけ
る候補異性体、類似体または塩の効力は、例えば実施例
３に記載された方法を用いて試験され得る。虚血または
低酸素症損傷に対する候補異性体、類似体または塩の治
療効力は、各実施例に記載のインビトロ法を用いて初期
に試験することができ、インビトロ試験で良好な効力を
示す候補化合物を、続いて、更にインビボ試験で評価す
ることができる。
【００８０】虚血損傷を評価するためのより困難な試験
を必要とすることなく、ＡＤＡ−阻害効力を示し得る初
期インビボ試験は、通常は、“プローブ薬剤”として、
ＡＤＡにより迅速に分解されるヌクレオシド類似体を用
いて実施できる。候補ＥＨＮＡ類似体は、ヌクレオシド
プローブ薬剤を既に受けた、またはすぐに受けることと
なる実験動物（またはヒト）に投与できる。適切な期間
（薬剤によって変わるが、通常２から２４時間の範囲）
後、試験動物またはヒトの血液または組織中に存在する
プローブ薬剤の量を測定し、その量をＥＨＮＡ類似体で
処置されなかった動物またはヒトにおける同プローブ薬
剤の量と比較することができる。ＥＨＮＡ類似体が血流
分解に耐え、細胞に入り、ＡＤＡを阻害するのに成功す
るならば、処置した動物またはヒトにおいて検出され得
るプローブ薬剤のレベルを増大するであろう。
を必要とすることなく、ＡＤＡ−阻害効力を示し得る初
期インビボ試験は、通常は、“プローブ薬剤”として、
ＡＤＡにより迅速に分解されるヌクレオシド類似体を用
いて実施できる。候補ＥＨＮＡ類似体は、ヌクレオシド
プローブ薬剤を既に受けた、またはすぐに受けることと
なる実験動物（またはヒト）に投与できる。適切な期間
（薬剤によって変わるが、通常２から２４時間の範囲）
後、試験動物またはヒトの血液または組織中に存在する
プローブ薬剤の量を測定し、その量をＥＨＮＡ類似体で
処置されなかった動物またはヒトにおける同プローブ薬
剤の量と比較することができる。ＥＨＮＡ類似体が血流
分解に耐え、細胞に入り、ＡＤＡを阻害するのに成功す
るならば、処置した動物またはヒトにおいて検出され得
るプローブ薬剤のレベルを増大するであろう。
【００８１】「薬理学的に許容し得る」という語は、薬
剤をヒトへの投与に適当かつ実践的なものにする特性を
包含する。前記化合物は、無理のない貯蔵条件下で適当
な貯蔵寿命を有するのに充分な程度化学的に安定してい
なければならず、またそれらは、適当な投与経路により
体内へ導入されたときに生理学的に許容し得るものでな
くてはならない。
剤をヒトへの投与に適当かつ実践的なものにする特性を
包含する。前記化合物は、無理のない貯蔵条件下で適当
な貯蔵寿命を有するのに充分な程度化学的に安定してい
なければならず、またそれらは、適当な投与経路により
体内へ導入されたときに生理学的に許容し得るものでな
くてはならない。
【００８２】「塩類」の語は、本明細書中、慣用的な医
薬的意味で使用する。許容し得る塩類には、アルカリ金
属塩類および遊離酸または遊離塩基の付加塩類が含まれ
得る。薬理学的に許容し得る酸付加塩類の形成に広く使
用される酸の例としては、無機酸、例えば塩酸、硫酸お
よび燐酸、並びに有機酸、例えばマレイン酸、琥珀酸お
よびクエン酸がある。アルカリ金属塩類またはアルカリ
土類金属塩類には、例えばナトリウム、カリウム、カル
シウムまたはマグネシウム塩類が含まれ得る。これらの
塩類は全て、慣用的手段により製造され得る。非毒性で
あり、所望の活性を実質的に妨害するものでなければ、
選択した塩の性質は厳密なものではない。
薬的意味で使用する。許容し得る塩類には、アルカリ金
属塩類および遊離酸または遊離塩基の付加塩類が含まれ
得る。薬理学的に許容し得る酸付加塩類の形成に広く使
用される酸の例としては、無機酸、例えば塩酸、硫酸お
よび燐酸、並びに有機酸、例えばマレイン酸、琥珀酸お
よびクエン酸がある。アルカリ金属塩類またはアルカリ
土類金属塩類には、例えばナトリウム、カリウム、カル
シウムまたはマグネシウム塩類が含まれ得る。これらの
塩類は全て、慣用的手段により製造され得る。非毒性で
あり、所望の活性を実質的に妨害するものでなければ、
選択した塩の性質は厳密なものではない。
【００８３】特許請求の範囲で包含される類似体は、Ｅ
ＨＮＡ（レファレント分子）側鎖の８番および／または
９番の炭素原子の位置で修飾された類似体に限定され
る。本明細書では「類似体」の語は慣用的な医薬的意味
で使用されており、レファレント分子（この場合、ＥＨ
ＮＡ、９−ＯＨ−ＥＨＮＡまたは８−ＯＨ−ＥＨＮＡ）
と構造上似てはいるが、標的を定め制御された方法で修
飾が加えられることにより、レファレント分子の特定置
換基が水素以外の別の置換基により置き換えられた（９
−ＯＨ−ＥＨＮＡの９番ヒドロキシル基を水素原子によ
り置換すると、９−ＯＨ−ＥＨＮＡの真の類似体ではな
く非修飾ＥＨＮＡが得られるため）分子を包含する。化
学的類似体は「子孫」タイプの関係を必要とし、この場
合、類似体は既知化合物（親またはレファレント化合物
と呼ばれることも多い）の化学的修飾により生成され
る。従って、ヒドロキシル化化合物［１０］、［１４］
および［２３］はＥＨＮＡの類似体であるが、ＥＨＮＡ
はそれらのヒドロキシル化化合物の類似体とはみなされ
ない。
ＨＮＡ（レファレント分子）側鎖の８番および／または
９番の炭素原子の位置で修飾された類似体に限定され
る。本明細書では「類似体」の語は慣用的な医薬的意味
で使用されており、レファレント分子（この場合、ＥＨ
ＮＡ、９−ＯＨ−ＥＨＮＡまたは８−ＯＨ−ＥＨＮＡ）
と構造上似てはいるが、標的を定め制御された方法で修
飾が加えられることにより、レファレント分子の特定置
換基が水素以外の別の置換基により置き換えられた（９
−ＯＨ−ＥＨＮＡの９番ヒドロキシル基を水素原子によ
り置換すると、９−ＯＨ−ＥＨＮＡの真の類似体ではな
く非修飾ＥＨＮＡが得られるため）分子を包含する。化
学的類似体は「子孫」タイプの関係を必要とし、この場
合、類似体は既知化合物（親またはレファレント化合物
と呼ばれることも多い）の化学的修飾により生成され
る。従って、ヒドロキシル化化合物［１０］、［１４］
および［２３］はＥＨＮＡの類似体であるが、ＥＨＮＡ
はそれらのヒドロキシル化化合物の類似体とはみなされ
ない。
【００８４】同様に、本明細書で使用した“類似体”
は、別個かつ明瞭な薬理学的活性を有する第２成分分子
と結合したＥＨＮＡ分子を含有する二官能性コンジュゲ
ートを含んでいない。例えば、ＥＨＮＡが蛋白質に結合
しているものであるならば、生じたコンジュゲートは、
本明細書で使用した「類似体」とはみなさない。本明細
書で使用したＥＨＮＡ類似体は、潜在的治療用ＡＤＡ阻
害因子としてＥＨＮＡの既知および所望の活性を改善す
るために、相対的に小さい、低分子量物質が８番および
／または９番の炭素原子の位置でＥＨＮＡ構造に結合し
ている分子に限定される。
は、別個かつ明瞭な薬理学的活性を有する第２成分分子
と結合したＥＨＮＡ分子を含有する二官能性コンジュゲ
ートを含んでいない。例えば、ＥＨＮＡが蛋白質に結合
しているものであるならば、生じたコンジュゲートは、
本明細書で使用した「類似体」とはみなさない。本明細
書で使用したＥＨＮＡ類似体は、潜在的治療用ＡＤＡ阻
害因子としてＥＨＮＡの既知および所望の活性を改善す
るために、相対的に小さい、低分子量物質が８番および
／または９番の炭素原子の位置でＥＨＮＡ構造に結合し
ている分子に限定される。
【００８５】また、８番または９番炭素原子の位置で修
飾されているＥＨＮＡの類似体は、ここに開示された薬
理学的許容性、ＡＤＡ阻害効力および治療有用性という
必要条件を満たしてさえいれば、また上記類似体がＡＤ
Ａ阻害能力を保持し、Ｋｉ値が約１０-7〜約１０-10と
いう所望の範囲内に含まれてさえいれば（即ち、それら
は治療的に有効であるために充分に強力でなければなら
ないが、ＡＤＡ酵素の不可逆的「自殺」阻害因子であっ
てはならない。）、それらも本発明の請求の範囲に包含
されることに留意すべきである。
飾されているＥＨＮＡの類似体は、ここに開示された薬
理学的許容性、ＡＤＡ阻害効力および治療有用性という
必要条件を満たしてさえいれば、また上記類似体がＡＤ
Ａ阻害能力を保持し、Ｋｉ値が約１０-7〜約１０-10と
いう所望の範囲内に含まれてさえいれば（即ち、それら
は治療的に有効であるために充分に強力でなければなら
ないが、ＡＤＡ酵素の不可逆的「自殺」阻害因子であっ
てはならない。）、それらも本発明の請求の範囲に包含
されることに留意すべきである。
【００８６】本明細書に包含される類似体は、これらに
限定されないが、下記のとおり、側鎖の８番または９番
の炭素原子に結合した部分が、ハロゲン原子、例えば、
塩素またはフッ素；カルボン酸またはそれらの塩；エス
テルまたはエーテル結合を介して８番または９番の炭素
原子に結合した部分；または適切な窒素含有部分からな
る類似体である。
限定されないが、下記のとおり、側鎖の８番または９番
の炭素原子に結合した部分が、ハロゲン原子、例えば、
塩素またはフッ素；カルボン酸またはそれらの塩；エス
テルまたはエーテル結合を介して８番または９番の炭素
原子に結合した部分；または適切な窒素含有部分からな
る類似体である。
【００８７】エーテル−結合部分（酸素原子によりＥＨ
ＮＡ側鎖に結合したアルキル、アリール、アルケンおよ
びアルキン基を含む）は、更なる評価に期待できる基と
おもわれる。エステル−結合部分は、一般に、それら
が、様々の他の化学構造よりも、加水分解されやすく、
かつＥＨＮＡ分子から切断されやすいようであるので、
評価に最適な候補とはみなされない。
ＮＡ側鎖に結合したアルキル、アリール、アルケンおよ
びアルキン基を含む）は、更なる評価に期待できる基と
おもわれる。エステル−結合部分は、一般に、それら
が、様々の他の化学構造よりも、加水分解されやすく、
かつＥＨＮＡ分子から切断されやすいようであるので、
評価に最適な候補とはみなされない。
【００８８】様々な窒素含有部分もまた、かかる部分を
有するＥＨＮＡ類似体が適切な基準（例えば、類似体は
薬理学的に許容されなければならず、数週間または数カ
月、冷凍の必要なく貯蔵できる適当な化学安定性を有す
べきであり、ヒト血液中で不安定であったり、迅速に分
解してはならない、等）を満たすかどうかを測定するた
めの評価に適した候補を提供する。好適であり得る窒素
含有部分には、アミン、アミド、アジド、ニトリル、ラ
クタム、イミン、およびイミド部分がある。
有するＥＨＮＡ類似体が適切な基準（例えば、類似体は
薬理学的に許容されなければならず、数週間または数カ
月、冷凍の必要なく貯蔵できる適当な化学安定性を有す
べきであり、ヒト血液中で不安定であったり、迅速に分
解してはならない、等）を満たすかどうかを測定するた
めの評価に適した候補を提供する。好適であり得る窒素
含有部分には、アミン、アミド、アジド、ニトリル、ラ
クタム、イミン、およびイミド部分がある。
【００８９】本明細書の教示および請求の範囲によって
包含されるためには、いずれのＥＨＮＡ類似体も、本明
細書に記載のような治療的に有用な類似体を製造する特
性を示さなければならない；即ち、そのような類似体
は、効果的な、好ましくは、約１０-7ないし１０-10モ
ルの所望範囲のＫi値を有する、ＡＤＡ阻害因子でなけ
ればならず；薬理学的に許容できなければならず、それ
には非毒性および非発癌性などの基準があり；さらに、
本明細書に記載した２つの用途（内部器官における虚血
または低酸素症損傷の低減、またはＡＤＡ阻害因子の不
在下でＡＤＡにより分解される薬剤の効力の改善）のう
ち少なくとも１つに対して治療的に効果的でなければな
らない。
包含されるためには、いずれのＥＨＮＡ類似体も、本明
細書に記載のような治療的に有用な類似体を製造する特
性を示さなければならない；即ち、そのような類似体
は、効果的な、好ましくは、約１０-7ないし１０-10モ
ルの所望範囲のＫi値を有する、ＡＤＡ阻害因子でなけ
ればならず；薬理学的に許容できなければならず、それ
には非毒性および非発癌性などの基準があり；さらに、
本明細書に記載した２つの用途（内部器官における虚血
または低酸素症損傷の低減、またはＡＤＡ阻害因子の不
在下でＡＤＡにより分解される薬剤の効力の改善）のう
ち少なくとも１つに対して治療的に効果的でなければな
らない。
【００９０】所望ならば、（分枝状側鎖、または長側鎖
を作るために）側鎖の８番または９番の炭素原子に直接
結合したその他の炭素原子を有するＥＨＮＡ類似体もま
た、本明細書に記載の用途について評価できる。シェー
ファーおよびシュヴェンダーが１９７４年にこのような
幾つかの化合物の合成を報告し、ノニル側鎖が最高レベ
ルのＡＤＡ阻害を与えたことを示したことから、このよ
うな類似体は、現在のところ、迅速な評価の最善の候補
とはみなされていない。それにもかかわらず、ＥＨＮＡ
類似体の更なる開発は、長側鎖または分枝状側鎖を有す
るＥＨＮＡ変形体の初期研究を注意深く再評価すること
が充分に価値あることを指摘し得る。
を作るために）側鎖の８番または９番の炭素原子に直接
結合したその他の炭素原子を有するＥＨＮＡ類似体もま
た、本明細書に記載の用途について評価できる。シェー
ファーおよびシュヴェンダーが１９７４年にこのような
幾つかの化合物の合成を報告し、ノニル側鎖が最高レベ
ルのＡＤＡ阻害を与えたことを示したことから、このよ
うな類似体は、現在のところ、迅速な評価の最善の候補
とはみなされていない。それにもかかわらず、ＥＨＮＡ
類似体の更なる開発は、長側鎖または分枝状側鎖を有す
るＥＨＮＡ変形体の初期研究を注意深く再評価すること
が充分に価値あることを指摘し得る。
【００９１】本明細書で議論したＬｏｇ ＰO/W（油／水
分配）係数は、潜在的に有用な指標として単独で、化合
物が本明細書に記載した様々なアッセイ（細胞培養試
験、灌流心臓試験を、および脳組織試験を含む）を用い
た試験および分析用の好適な候補を提供することを示唆
するために使用および意図する。Ｌｏｇ ＰO/W値は、厳
密な要件としては使用または意図しない；その代わり、
本明細書に開示した発見および発明は、次の事実に集中
する：（１）側鎖の８番および／または９番の炭素原子
の位置で修飾されている様々なＥＨＮＡ類似体は、心臓
および／または脳組織における虚血／低酸素症損傷を予
防および低減する点で、既に知られているＥＨＮＡの非
修飾形態または米国特許5,491,146号に既に開示されて
いるＥＨＮＡの８番／９番加水分解類似体のいずれかよ
りも優れた効力を有する；さらに（２）出願人は、虚血
および低酸素症損傷を低減するための最善の効力を有す
るＥＨＮＡ類似体は、既に開示されている加水分解ＥＨ
ＮＡ類似体よりも脂肪親和性である。
分配）係数は、潜在的に有用な指標として単独で、化合
物が本明細書に記載した様々なアッセイ（細胞培養試
験、灌流心臓試験を、および脳組織試験を含む）を用い
た試験および分析用の好適な候補を提供することを示唆
するために使用および意図する。Ｌｏｇ ＰO/W値は、厳
密な要件としては使用または意図しない；その代わり、
本明細書に開示した発見および発明は、次の事実に集中
する：（１）側鎖の８番および／または９番の炭素原子
の位置で修飾されている様々なＥＨＮＡ類似体は、心臓
および／または脳組織における虚血／低酸素症損傷を予
防および低減する点で、既に知られているＥＨＮＡの非
修飾形態または米国特許5,491,146号に既に開示されて
いるＥＨＮＡの８番／９番加水分解類似体のいずれかよ
りも優れた効力を有する；さらに（２）出願人は、虚血
および低酸素症損傷を低減するための最善の効力を有す
るＥＨＮＡ類似体は、既に開示されている加水分解ＥＨ
ＮＡ類似体よりも脂肪親和性である。
【００９２】また、類似体の組織防護効力は、単離状態
のいずれかの単一因子ではなく因子の組み合わせに左右
されることに留意すべきである。他のパラメーターが、
虚血または低酸素症損傷に対する防護的有用性を予測す
る上でのより良い精度を表すことが示されるまで、低い
Ｋｉ値および高いＰo/w値という組み合わせが、いずれ
かの特性単独で判断する場合よりも確かな指標としてみ
なされるべきである。今の時点で、現在までに完了した
試験に基づくと、類似体は、（ａ）約５×１０-9未満の
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値、および
（ｂ）少なくとも約２のオクタノール／水分配係数を両
方とも有するべきであると考えられる。
のいずれかの単一因子ではなく因子の組み合わせに左右
されることに留意すべきである。他のパラメーターが、
虚血または低酸素症損傷に対する防護的有用性を予測す
る上でのより良い精度を表すことが示されるまで、低い
Ｋｉ値および高いＰo/w値という組み合わせが、いずれ
かの特性単独で判断する場合よりも確かな指標としてみ
なされるべきである。今の時点で、現在までに完了した
試験に基づくと、類似体は、（ａ）約５×１０-9未満の
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値、および
（ｂ）少なくとも約２のオクタノール／水分配係数を両
方とも有するべきであると考えられる。
【００９３】この特性の組み合わせは、常に信頼できる
能力指標ではない。例えば、非修飾ＥＨＮＡの純粋な
(＋)異性体は、両方の所望範囲（Ｋｉ＝３×１０-9；Ｌ
ｏｇＰO/W＝２.６）内に減少し、依然として、虚血およ
び低酸素症損傷に対する保護の上で９−クロロ−ＥＨＮ
Ａまたは９−フタルイミド−ＥＨＮＡのいずれかより
も、実質的に有益性が低いことを示した。従って、所望
のＫｉおよびＬｏｇ ＰO /W値の組み合わせは、単に、候
補類似体が更なる評価に期待できる候補であることの指
標とみなすべきである。このような候補化合物はいずれ
も、虚血／低酸素症損傷を低減するその能力の信頼でき
る評価に到達するために、実際の虚血および／または低
酸素症に関わる試験で評価されなければならない。
能力指標ではない。例えば、非修飾ＥＨＮＡの純粋な
(＋)異性体は、両方の所望範囲（Ｋｉ＝３×１０-9；Ｌ
ｏｇＰO/W＝２.６）内に減少し、依然として、虚血およ
び低酸素症損傷に対する保護の上で９−クロロ−ＥＨＮ
Ａまたは９−フタルイミド−ＥＨＮＡのいずれかより
も、実質的に有益性が低いことを示した。従って、所望
のＫｉおよびＬｏｇ ＰO /W値の組み合わせは、単に、候
補類似体が更なる評価に期待できる候補であることの指
標とみなすべきである。このような候補化合物はいずれ
も、虚血／低酸素症損傷を低減するその能力の信頼でき
る評価に到達するために、実際の虚血および／または低
酸素症に関わる試験で評価されなければならない。
【００９４】また、９−ベンゾイルオキシ−ＥＨＮＡ類
似体は、表１に列挙された全類似体の中で低いＫｉ値お
よび高いＰo/w値という最も優れた組み合わせを有する
ことが注目された。将来、それは、細胞培養および無傷
組織の両試験で試験されると思われる。それは、ベンゾ
イルオキシ基が様々な哺乳類酵素によりＥＨＮＡ分子か
ら切断され易く、それによって９−ＯＨ−ＥＨＮＡに変
換され、比較的低い組織保護効力を有することから、今
までに実施されたアッセイでは試験されなかった。
似体は、表１に列挙された全類似体の中で低いＫｉ値お
よび高いＰo/w値という最も優れた組み合わせを有する
ことが注目された。将来、それは、細胞培養および無傷
組織の両試験で試験されると思われる。それは、ベンゾ
イルオキシ基が様々な哺乳類酵素によりＥＨＮＡ分子か
ら切断され易く、それによって９−ＯＨ−ＥＨＮＡに変
換され、比較的低い組織保護効力を有することから、今
までに実施されたアッセイでは試験されなかった。
【００９５】また、異なる類似体が異なる過多の組織お
よび器官において異なる活性を有するようであることが
認識されている。例えば、今までに完了した試験から、
虚血損傷に対して心筋を保護する上での９−クロロ−Ｅ
ＨＮＡおよび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ間の差異は比
較的軽微であったことが示されている。しかしながら、
フタルイミド類似体は、脳細胞での細胞培養試験におい
て著しく優れた効力を示す傾向があった。従って、ある
類似体が心筋の防護に最善である場合もあれば、異なる
類似体が脳組織の防護に最善である場合もあることが予
想される。
よび器官において異なる活性を有するようであることが
認識されている。例えば、今までに完了した試験から、
虚血損傷に対して心筋を保護する上での９−クロロ−Ｅ
ＨＮＡおよび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ間の差異は比
較的軽微であったことが示されている。しかしながら、
フタルイミド類似体は、脳細胞での細胞培養試験におい
て著しく優れた効力を示す傾向があった。従って、ある
類似体が心筋の防護に最善である場合もあれば、異なる
類似体が脳組織の防護に最善である場合もあることが予
想される。
【００９６】ヒトまたは動物へのこの発明の化合物の投
与は、経口投与または静脈内もしくは筋肉内注射経路を
含め、血流中へ化合物を導入させ得る技術であればいず
れによっても行われ得る。活性化合物は、通常、医薬製
剤、例えば注射用水性担体、または経口摂取用のカプセ
ル、錠剤もしくは液体形態で投与される。上記製剤は、
１種またはそれ以上の活性化合物を１種またはそれ以上
の医薬的に許容し得る担体または希釈剤と混合して成る
混合物を含み得る。親油性薬剤を注射用に製剤化する場
合、通常それらを、水、緩衝化合物（例えばカルボン酸
およびその塩の混合物）、および複数のヒドロキシル基
を有する有機化合物と混合する。プロピレングリコー
ル、デキストラン化合物およびシクロデキストリン化合
物も上記目的に頻用される。
与は、経口投与または静脈内もしくは筋肉内注射経路を
含め、血流中へ化合物を導入させ得る技術であればいず
れによっても行われ得る。活性化合物は、通常、医薬製
剤、例えば注射用水性担体、または経口摂取用のカプセ
ル、錠剤もしくは液体形態で投与される。上記製剤は、
１種またはそれ以上の活性化合物を１種またはそれ以上
の医薬的に許容し得る担体または希釈剤と混合して成る
混合物を含み得る。親油性薬剤を注射用に製剤化する場
合、通常それらを、水、緩衝化合物（例えばカルボン酸
およびその塩の混合物）、および複数のヒドロキシル基
を有する有機化合物と混合する。プロピレングリコー
ル、デキストラン化合物およびシクロデキストリン化合
物も上記目的に頻用される。
【００９７】所望ならば、他の治療剤（例えば抗癌性ま
たは抗ウイルス性ヌクレオシド類似体）もまた、上記の
ＥＨＮＡ類似体を含む注射可能または摂取可能製剤中に
存在し得る。ＥＨＮＡ類似体は、ＡＤＡ酵素によるヌク
レオシド類似体の分解を抑制することにより、抗癌性ま
たは抗ウイルス性薬剤の半減期を延長させ得る（および
治療的有効性を増大し得る）ため、特に、ＡＤＡ−阻害
ＥＨＮＡ類似体と混合させた、通常はＡＤＡにより分解
される抗癌性または抗ウイルス性ヌクレオシド類似体と
ＥＨＮＡ類似体との混合物は非常に有用であり得る。
たは抗ウイルス性ヌクレオシド類似体）もまた、上記の
ＥＨＮＡ類似体を含む注射可能または摂取可能製剤中に
存在し得る。ＥＨＮＡ類似体は、ＡＤＡ酵素によるヌク
レオシド類似体の分解を抑制することにより、抗癌性ま
たは抗ウイルス性薬剤の半減期を延長させ得る（および
治療的有効性を増大し得る）ため、特に、ＡＤＡ−阻害
ＥＨＮＡ類似体と混合させた、通常はＡＤＡにより分解
される抗癌性または抗ウイルス性ヌクレオシド類似体と
ＥＨＮＡ類似体との混合物は非常に有用であり得る。
【００９８】
実施例１ ９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体の合成 本実施例は、完全な化学名および９−ＯＨ−ＥＨＮＡの
合成に使用された出発試薬および中間体の化合物番号を
列記する。その分子構造を図１に示す。合成法は、米国
特許第５,４９１,１４６号（１９９３年２月１３日）の
実施例に詳述しており、その内容を参考として本明細書
に包含させる。これらの合成法はまたヴァルギーズ等、
１９９４にも記載されており、その教示もまた本明細書
に参考として包含させる。
合成に使用された出発試薬および中間体の化合物番号を
列記する。その分子構造を図１に示す。合成法は、米国
特許第５,４９１,１４６号（１９９３年２月１３日）の
実施例に詳述しており、その内容を参考として本明細書
に包含させる。これらの合成法はまたヴァルギーズ等、
１９９４にも記載されており、その教示もまた本明細書
に参考として包含させる。
【００９９】化合物１：（２Ｓ,３Ｓ）−３−（ベンジ
ルオキシ）−１,２−エポキシブタン 化合物２：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−２,３−
ノナ−８−エン−ジオール 化合物３：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ
−トシル−２,３−ノナ−８−エン−ジオール 化合物４：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アジド−２−Ｏ−ベン
ジル−２−ノナ−８−エン−オール 化合物５：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アミノ−２−Ｏ−ベン
ジル−２−ノナ−８−エン−オール 化合物６：５−アミノ−６−クロロ−４［２（Ｓ）−Ｏ
−ベンジル−３（Ｒ）−ノナ−８−エニル］アミノピリ
ミジン 化合物７：６−クロロ−９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル
−３（Ｒ）−ノナ−８−エニル］プリン 化合物８：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−３（Ｒ）−
ノナ−８−エニル］アデニン 化合物９：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−９−ヒドロ
キシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物１０：９−［２（Ｓ），９−ジヒドロキシ−３
（Ｒ）−ノニル］アデニン。これは、実施例３で試験し
た９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体である。
ルオキシ）−１,２−エポキシブタン 化合物２：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−２,３−
ノナ−８−エン−ジオール 化合物３：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−Ｏ
−トシル−２,３−ノナ−８−エン−ジオール 化合物４：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アジド−２−Ｏ−ベン
ジル−２−ノナ−８−エン−オール 化合物５：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アミノ−２−Ｏ−ベン
ジル−２−ノナ−８−エン−オール 化合物６：５−アミノ−６−クロロ−４［２（Ｓ）−Ｏ
−ベンジル−３（Ｒ）−ノナ−８−エニル］アミノピリ
ミジン 化合物７：６−クロロ−９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル
−３（Ｒ）−ノナ−８−エニル］プリン 化合物８：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−３（Ｒ）−
ノナ−８−エニル］アデニン 化合物９：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−９−ヒドロ
キシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物１０：９−［２（Ｓ），９−ジヒドロキシ−３
（Ｒ）−ノニル］アデニン。これは、実施例３で試験し
た９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体である。
【０１００】実施例２ ８−ＯＨ−ＥＨＮＡおよび８,９−ジヒドロキシ類似体
の合成 本実施例は、完全な化学名および８−ＯＨ−ＥＨＮＡお
よび８，９−ジヒドロキシ−ＥＨＮＡの合成に使用され
た出発試薬および中間体の化合物番号を列記する。その
分子構造を図２および３に示す。合成法は、米国特許第
５,４９１,１４６号（１９９３年２月１３日）の実施例
に詳述しており、その内容を参考として本明細書に包含
させる。 化合物１１：６−クロロ−９［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル
−８,９−エポキシ−３（Ｒ）−ノニル］プリン 化合物１２：６−クロロ−９［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル
−８,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］プリン 化合物１３：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−８,９−
ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物［１２］は、［８］の製造に関して記載された方
法に従い［１１］から得られ、収率は９０％であった。 化合物１４：９−［２（Ｓ）,８,９−トリヒドロキシ−
３（Ｒ）−ノニル］アデニン。この化合物はＥＨＮＡの
８,９−ジヒドロキシ類似体であり、実施例３の記載に
従い試験された。それはＡＤＡ活性の適度に有効な阻害
剤であることが示されたが、その効力は９−ＯＨ−ＥＨ
ＮＡ類似体よりも低いため、それ以上は試験されなかっ
た。 化合物１５：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−
Ｏ−トシル−８,９−エポキシ−２,３−ノナンジオール 化合物１６：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−
Ｏ−トシル−２,３,８−ノネントリオール 化合物１７：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−
Ｏ−トシル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−２,３,８
−ノナントリオール 化合物１８：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アジド−２−Ｏ−ベ
ンジル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−２,８−ノナ
ンジオール 化合物１９：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アミノ−２−Ｏ−ベ
ンジル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−２,８−ノナ
ンジオール 化合物２０：５−アミノ−６−クロロ−４［２（Ｓ）−
Ｏ−ベンジル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−３
（Ｒ）−２,８−ジヒドロキシノニル］アミノピリミジ
ン 化合物２１：６−クロロ−９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジ
ル−２,８−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］プリン 化合物２２：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−２,８−
ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物２３：９−［２（Ｓ）,８−ジヒドロキシ−３
（Ｒ）−ノニル］アデニン。この化合物はＥＨＮＡの８
−ヒドロキシ類似体であり、実施例３記載の要領で試験
された。それは、所望の範囲内でＡＤＡ活性を阻害する
ことが示されたが、その効力は９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似
体よりも低かったため、それ以上は試験されなかった。
の合成 本実施例は、完全な化学名および８−ＯＨ−ＥＨＮＡお
よび８，９−ジヒドロキシ−ＥＨＮＡの合成に使用され
た出発試薬および中間体の化合物番号を列記する。その
分子構造を図２および３に示す。合成法は、米国特許第
５,４９１,１４６号（１９９３年２月１３日）の実施例
に詳述しており、その内容を参考として本明細書に包含
させる。 化合物１１：６−クロロ−９［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル
−８,９−エポキシ−３（Ｒ）−ノニル］プリン 化合物１２：６−クロロ−９［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル
−８,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］プリン 化合物１３：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−８,９−
ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物［１２］は、［８］の製造に関して記載された方
法に従い［１１］から得られ、収率は９０％であった。 化合物１４：９−［２（Ｓ）,８,９−トリヒドロキシ−
３（Ｒ）−ノニル］アデニン。この化合物はＥＨＮＡの
８,９−ジヒドロキシ類似体であり、実施例３の記載に
従い試験された。それはＡＤＡ活性の適度に有効な阻害
剤であることが示されたが、その効力は９−ＯＨ−ＥＨ
ＮＡ類似体よりも低いため、それ以上は試験されなかっ
た。 化合物１５：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−
Ｏ−トシル−８,９−エポキシ−２,３−ノナンジオール 化合物１６：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−
Ｏ−トシル−２,３,８−ノネントリオール 化合物１７：（２Ｓ,３Ｓ）−２−Ｏ−ベンジル−３−
Ｏ−トシル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−２,３,８
−ノナントリオール 化合物１８：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アジド−２−Ｏ−ベ
ンジル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−２,８−ノナ
ンジオール 化合物１９：（２Ｓ,３Ｒ）−３−アミノ−２−Ｏ−ベ
ンジル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−２,８−ノナ
ンジオール 化合物２０：５−アミノ−６−クロロ−４［２（Ｓ）−
Ｏ−ベンジル−８−Ｏ−テトラヒドロピラニル−３
（Ｒ）−２,８−ジヒドロキシノニル］アミノピリミジ
ン 化合物２１：６−クロロ−９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジ
ル−２,８−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］プリン 化合物２２：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−２,８−
ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物２３：９−［２（Ｓ）,８−ジヒドロキシ−３
（Ｒ）−ノニル］アデニン。この化合物はＥＨＮＡの８
−ヒドロキシ類似体であり、実施例３記載の要領で試験
された。それは、所望の範囲内でＡＤＡ活性を阻害する
ことが示されたが、その効力は９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似
体よりも低かったため、それ以上は試験されなかった。
【０１０１】実施例３ ＡＤＡ阻害に関する試験 ハリマン等（１９９２）の記載に従い、２６５ｎｍでの
直接分光測光検定法により３０℃で測定されたうし腸Ａ
ＤＡ（タイプIII、シグマ・ケミカル・カンパニー）を
用いることにより、化合物［１０］（９−ヒドロキシ類
似体）、化合物［２３］（８−ヒドロキシ類似体）およ
び化合物［１４］（８,９−ジヒドロキシ類似体）を、
ＡＤＡ活性について試験した。これらの試験では細胞外
酵素製品を使用したため、酵素へ到達させるのに類似体
のいずれかを細胞へ入り込ませる必要はなかった。表１
に列挙されているＫｉ値が示すところでは、標定量のＡ
ＤＡ酵素の５０％不活化を達成するのにより少ない量で
済むことから、９−ＯＨ類似体が他のヒドロキシル化類
似体のどれよりも強力であった。より強力であるため、
９−ヒドロキシ類似体は、他の類似体合成用の出発化合
物として使用された。
直接分光測光検定法により３０℃で測定されたうし腸Ａ
ＤＡ（タイプIII、シグマ・ケミカル・カンパニー）を
用いることにより、化合物［１０］（９−ヒドロキシ類
似体）、化合物［２３］（８−ヒドロキシ類似体）およ
び化合物［１４］（８,９−ジヒドロキシ類似体）を、
ＡＤＡ活性について試験した。これらの試験では細胞外
酵素製品を使用したため、酵素へ到達させるのに類似体
のいずれかを細胞へ入り込ませる必要はなかった。表１
に列挙されているＫｉ値が示すところでは、標定量のＡ
ＤＡ酵素の５０％不活化を達成するのにより少ない量で
済むことから、９−ＯＨ類似体が他のヒドロキシル化類
似体のどれよりも強力であった。より強力であるため、
９−ヒドロキシ類似体は、他の類似体合成用の出発化合
物として使用された。
【０１０２】表１は、実施例１、２または５に列挙され
た最終（脱保護）類似体の全てに関するＡＤＡ阻害デー
タおよびオクタノール−水分配係数（親油性の指数）を
まとめたものである。
た最終（脱保護）類似体の全てに関するＡＤＡ阻害デー
タおよびオクタノール−水分配係数（親油性の指数）を
まとめたものである。
【０１０３】実施例４ 組織への虚血損傷からの防護に関する９−ＯＨ−ＥＨＮ
Ａの試験 ＥＨＮＡの９−ヒドロキシおよび８−ヒドロキシ類似体
の合成後、本出願人は、試料をユニバーシティ・オブ・
ロードアイランドにあるデパートメント・オブ・ファー
マコロジー・アンド・トキシコロジーのロバート・ロジ
ャーズ博士に提供した。９−ＯＨ−ＥＨＮＡの量は充分
であり、８−ＯＨ−ＥＨＮＡの量はそれより少なかっ
た。従って、ほとんどの試験では９−ＯＨ−ＥＨＮＡを
使用し、それと非修飾ＥＨＮＡおよびジスルフィラムと
いう心臓血管組織においてある種の防護的抗虚血効果を
有することが知られている非関連化合物とを比較した。
ロジャーズ博士により行われた試験では、「作業心臓」
標本として知られ汎用されているプロトコルが使用され
た。これらの試験では、実験動物（雄のスプラーグ・ド
ーリーラットを使用）を殺して無傷の心臓を摘出し、一
定時間の間控えめな量（または不足気味）の酸素および
グルコースを含む液体により心臓を潅流した。これらの
実験で使用された方法は、ダビドフおよびロジャーズ、
「ハイパーテンション」１５：６３３−６４２（１９９
０）に詳細に記載されているが、ただしある種の小さな
修正が加えられた。左心房を１５ｃｍＨ2Ｏ圧で満た
し、左心室を、７２ｍｍＨｇに等しい圧力に対して緩衝
液充填カラム中へ排出させたが、虚血期間は例外とし
た。潅流液は、ＨＣＯ3 -（２５ミリモル）、Ｃａ
++（２.２ミリモル）およびグルコース（１０ミリモ
ル）を含むクレブス−ヘンゼレイト緩衝液であった。９
５％Ｏ2および５％ＣＯ2で処理すると、潅流液のｐＨは
７.４±０.２であった。潅流液および周囲温度を３７℃
に維持し、心臓の鼓動は自然にまかせておいた。
Ａの試験 ＥＨＮＡの９−ヒドロキシおよび８−ヒドロキシ類似体
の合成後、本出願人は、試料をユニバーシティ・オブ・
ロードアイランドにあるデパートメント・オブ・ファー
マコロジー・アンド・トキシコロジーのロバート・ロジ
ャーズ博士に提供した。９−ＯＨ−ＥＨＮＡの量は充分
であり、８−ＯＨ−ＥＨＮＡの量はそれより少なかっ
た。従って、ほとんどの試験では９−ＯＨ−ＥＨＮＡを
使用し、それと非修飾ＥＨＮＡおよびジスルフィラムと
いう心臓血管組織においてある種の防護的抗虚血効果を
有することが知られている非関連化合物とを比較した。
ロジャーズ博士により行われた試験では、「作業心臓」
標本として知られ汎用されているプロトコルが使用され
た。これらの試験では、実験動物（雄のスプラーグ・ド
ーリーラットを使用）を殺して無傷の心臓を摘出し、一
定時間の間控えめな量（または不足気味）の酸素および
グルコースを含む液体により心臓を潅流した。これらの
実験で使用された方法は、ダビドフおよびロジャーズ、
「ハイパーテンション」１５：６３３−６４２（１９９
０）に詳細に記載されているが、ただしある種の小さな
修正が加えられた。左心房を１５ｃｍＨ2Ｏ圧で満た
し、左心室を、７２ｍｍＨｇに等しい圧力に対して緩衝
液充填カラム中へ排出させたが、虚血期間は例外とし
た。潅流液は、ＨＣＯ3 -（２５ミリモル）、Ｃａ
++（２.２ミリモル）およびグルコース（１０ミリモ
ル）を含むクレブス−ヘンゼレイト緩衝液であった。９
５％Ｏ2および５％ＣＯ2で処理すると、潅流液のｐＨは
７.４±０.２であった。潅流液および周囲温度を３７℃
に維持し、心臓の鼓動は自然にまかせておいた。
【０１０４】潅流開始後、摘出心臓を１０分間安定させ
ておき、次いで、試験薬剤（非修飾ＥＨＮＡ、９−ＯＨ
−ＥＨＮＡまたはジスルフィラム）の１種または希エチ
ルアルコール（ＥＨＮＡまたは９−ヒドロキシ−ＥＨＮ
Ａの溶解度を高めるのに使用）もしくは希ジメチルスル
ホキシド（ジスルフィラムの溶解度を高めるのに使用）
を含む緩衝食塩水によりそれらを１０分間処理した。
ておき、次いで、試験薬剤（非修飾ＥＨＮＡ、９−ＯＨ
−ＥＨＮＡまたはジスルフィラム）の１種または希エチ
ルアルコール（ＥＨＮＡまたは９−ヒドロキシ−ＥＨＮ
Ａの溶解度を高めるのに使用）もしくは希ジメチルスル
ホキシド（ジスルフィラムの溶解度を高めるのに使用）
を含む緩衝食塩水によりそれらを１０分間処理した。
【０１０５】安定化させ、処理した後、心臓を２０分間
シミュレーション的虚血状態においた。この期間中、酸
素を潅流液には全く加えなかった。虚血期間が終了する
と、酸素を再び潅流緩衝液に加え、１０分間にわたって
下記パラメーターを測定した。 ＬＶＰＰ−左心室脈圧（時間依存圧、ピーク圧−拡張期
圧として算出、単位はｍｍＨｇ、すなわち水銀柱のミリ
メートル数） ＬＶＥＤＰ−左心室最終拡張期圧（すなわち、拡張期充
満中における心室の弛緩に応じた時間依存圧、ｍｍＨ
ｇ） ＣＦＲ−冠動脈流速（ｍｌ／分） ＨＲ−自発的鼓動速度（鼓動数／分） ＥＣＧ−心電図（表面電位、ｍＶ）
シミュレーション的虚血状態においた。この期間中、酸
素を潅流液には全く加えなかった。虚血期間が終了する
と、酸素を再び潅流緩衝液に加え、１０分間にわたって
下記パラメーターを測定した。 ＬＶＰＰ−左心室脈圧（時間依存圧、ピーク圧−拡張期
圧として算出、単位はｍｍＨｇ、すなわち水銀柱のミリ
メートル数） ＬＶＥＤＰ−左心室最終拡張期圧（すなわち、拡張期充
満中における心室の弛緩に応じた時間依存圧、ｍｍＨ
ｇ） ＣＦＲ−冠動脈流速（ｍｌ／分） ＨＲ−自発的鼓動速度（鼓動数／分） ＥＣＧ−心電図（表面電位、ｍＶ）
【０１０６】これらの結果は、ＥＨＮＡおよび９−ヒド
ロキシ−ＥＨＮＡが両方とも、細動の発生を低減化させ
ることを示していた。それらの間の差異は大したことは
なかった。また、ＥＨＮＡおよび９−ＯＨ−ＥＨＮＡは
両方とも、虚血後にＬＶＰＰおよび冠動脈流速の両方を
適度に高めた。また、それらの効果は有効レベルでは互
いに差異はなかった。
ロキシ−ＥＨＮＡが両方とも、細動の発生を低減化させ
ることを示していた。それらの間の差異は大したことは
なかった。また、ＥＨＮＡおよび９−ＯＨ−ＥＨＮＡは
両方とも、虚血後にＬＶＰＰおよび冠動脈流速の両方を
適度に高めた。また、それらの効果は有効レベルでは互
いに差異はなかった。
【０１０７】これらの初期試験においてＥＨＮＡおよび
９−ＯＨ−ＥＨＮＡ間で観察される最も重要な差異は、
ＬＶＥＤＰ（左心室最終拡張期圧）の測定で現れた。こ
のパラメーターは、左心室壁の筋肉が収縮後敏速に弛緩
し得るか否かを示す。収縮間における拡張期弛緩中、敏
速な弛緩によって心臓のポンピング小室が血液で満たさ
れるため、前記弛緩は不可欠である。ＬＶＥＤＰレベル
が高いということは、心筋が虚血損傷により硬直してし
まって、もはや充分な柔軟性および弾力性がなく、拡張
期弛緩中にポンピング小室を血液で適度に満たすことも
できないことを示すため、それは極度に望ましくない。
これらの試験において、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは、非修飾
ＥＨＮＡよりも筋肉硬直からの保護を示すレベルが高か
った。
９−ＯＨ−ＥＨＮＡ間で観察される最も重要な差異は、
ＬＶＥＤＰ（左心室最終拡張期圧）の測定で現れた。こ
のパラメーターは、左心室壁の筋肉が収縮後敏速に弛緩
し得るか否かを示す。収縮間における拡張期弛緩中、敏
速な弛緩によって心臓のポンピング小室が血液で満たさ
れるため、前記弛緩は不可欠である。ＬＶＥＤＰレベル
が高いということは、心筋が虚血損傷により硬直してし
まって、もはや充分な柔軟性および弾力性がなく、拡張
期弛緩中にポンピング小室を血液で適度に満たすことも
できないことを示すため、それは極度に望ましくない。
これらの試験において、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは、非修飾
ＥＨＮＡよりも筋肉硬直からの保護を示すレベルが高か
った。
【０１０８】これらの潅流心臓標本における８−ＯＨ−
ＥＨＮＡ類似体の試験は、少量しか入手できなかったた
め、限定されたものだった。しかしながら、それらの限
定された試験では、左心室硬直およびＬＶＥＤＰの低減
化において８−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体が９−ＯＨ−ＥＨ
ＮＡほど強力ではないことが示された。
ＥＨＮＡ類似体の試験は、少量しか入手できなかったた
め、限定されたものだった。しかしながら、それらの限
定された試験では、左心室硬直およびＬＶＥＤＰの低減
化において８−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似体が９−ＯＨ−ＥＨ
ＮＡほど強力ではないことが示された。
【０１０９】９−ＯＨ−ＥＨＮＡはＡＤＡ阻害剤として
８−ＯＨ−ＥＨＮＡより強力であり、９−ＯＨ−ＥＨＮ
Ａは心筋硬直の低減化においてさらに有用な効果を有す
ると思われたため、後続の研究では、他の類似体合成用
の出発化合物として９−ＯＨ−ＥＨＮＡ、化合物［１
０］またはそのベンジル保護前駆体、化合物［９］を使
用した。
８−ＯＨ−ＥＨＮＡより強力であり、９−ＯＨ−ＥＨＮ
Ａは心筋硬直の低減化においてさらに有用な効果を有す
ると思われたため、後続の研究では、他の類似体合成用
の出発化合物として９−ＯＨ−ＥＨＮＡ、化合物［１
０］またはそのベンジル保護前駆体、化合物［９］を使
用した。
【０１１０】ロジャーズ教授が使用した方法は、実施例
６記載の心筋試験とはいくつかの点で僅かに異なるもの
で、その後コロメド、インコーポレイテッド（トロイ、
ニューヨーク）という契約研究会社で行われた。出願
人、サイプロス・ファーマシューティカル・コーポレー
ションとの契約のもと、コロメドにより行われた試験に
おいて、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは、心筋防護について非修
飾ＥＨＮＡを凌ぐ改良を殆どまたは全く示さず、試験に
よってはＥＨＮＡほどの効力も示さないことがあった。
しかしながら、そのときまでに、他のさらに親油性の高
い類似体（９−クロロ−ＥＨＮＡおよび９−フタルイミ
ド−ＥＨＮＡを含む）が既に合成され、試験されてい
た。実施例６に記載されているところによると、それら
の他の類似体は、ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡと
比べ、虚血に対して心筋を防護する上で重大な利点を示
した。従って、後続の研究はそれらの他の類似体に向け
られ、９−ＯＨ−ＥＨＮＡおよび８−ＯＨ−ＥＨＮＡに
ついてはそれ以上積極的には試験されていない。
６記載の心筋試験とはいくつかの点で僅かに異なるもの
で、その後コロメド、インコーポレイテッド（トロイ、
ニューヨーク）という契約研究会社で行われた。出願
人、サイプロス・ファーマシューティカル・コーポレー
ションとの契約のもと、コロメドにより行われた試験に
おいて、９−ＯＨ−ＥＨＮＡは、心筋防護について非修
飾ＥＨＮＡを凌ぐ改良を殆どまたは全く示さず、試験に
よってはＥＨＮＡほどの効力も示さないことがあった。
しかしながら、そのときまでに、他のさらに親油性の高
い類似体（９−クロロ−ＥＨＮＡおよび９−フタルイミ
ド−ＥＨＮＡを含む）が既に合成され、試験されてい
た。実施例６に記載されているところによると、それら
の他の類似体は、ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡと
比べ、虚血に対して心筋を防護する上で重大な利点を示
した。従って、後続の研究はそれらの他の類似体に向け
られ、９−ＯＨ−ＥＨＮＡおよび８−ＯＨ−ＥＨＮＡに
ついてはそれ以上積極的には試験されていない。
【０１１１】実施例５ 改善された抗虚血特性を有するＥＨＮＡの他の類似体の
合成 この実施例および図４では、ＥＨＮＡの幾つかの追加的
類似体の合成について説明している。特記されている場
合を除き、下記合成反応では、出発試薬としてベンジル
保護化合物［９］（実施例１に記載）を使用し、全有機
溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下
蒸発乾燥させた。クロマトグラフィー溶媒の割合はｖ／
ｖで示す。フラッシュカラムクロマトグラフィーに好適
なシリカゲル(Davison, grade H, 230-245mesh)を、Fis
her Scientificから購入した。Chromatotron(遠心的に
加速、分取薄層、ラジアルクロマトグラフ)モデル７３
２４Ｔを種々の分離を簡潔させるために使用した。
合成 この実施例および図４では、ＥＨＮＡの幾つかの追加的
類似体の合成について説明している。特記されている場
合を除き、下記合成反応では、出発試薬としてベンジル
保護化合物［９］（実施例１に記載）を使用し、全有機
溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下
蒸発乾燥させた。クロマトグラフィー溶媒の割合はｖ／
ｖで示す。フラッシュカラムクロマトグラフィーに好適
なシリカゲル(Davison, grade H, 230-245mesh)を、Fis
her Scientificから購入した。Chromatotron(遠心的に
加速、分取薄層、ラジアルクロマトグラフ)モデル７３
２４Ｔを種々の分離を簡潔させるために使用した。
【０１１２】分子構造は、多くの方法で確認した。元素
分析(測定値対計算値の比較のため)は、ＭＨＷ Labora
tories(Phoenix, AZ)で行った。融点は、Buchi 535融点
装置で測定し、1Ｈ ＮＭＲスペクトルはVarian EM-39
0、Bruker AM-300またはBruker AM-500スペクトロメー
ターで記録した。光学rpmは、Perkin Elmer Model 141
デジタル読み取りポラリメーターで得た。これらのすべ
ての分析は、限定された範囲のデータを提供し、各化合
物は分析上純粋な形で生成されることが確認されたが、
ただし化合物［２６］および［２８］については例外で
あった。これらは完成類似体ではなく中間体であり、充
分に精製されていたわけではなかった。
分析(測定値対計算値の比較のため)は、ＭＨＷ Labora
tories(Phoenix, AZ)で行った。融点は、Buchi 535融点
装置で測定し、1Ｈ ＮＭＲスペクトルはVarian EM-39
0、Bruker AM-300またはBruker AM-500スペクトロメー
ターで記録した。光学rpmは、Perkin Elmer Model 141
デジタル読み取りポラリメーターで得た。これらのすべ
ての分析は、限定された範囲のデータを提供し、各化合
物は分析上純粋な形で生成されることが確認されたが、
ただし化合物［２６］および［２８］については例外で
あった。これらは完成類似体ではなく中間体であり、充
分に精製されていたわけではなかった。
【０１１３】実施例３記載の方法を用いることにより、
ＡＤＡ酵素阻害について、ここに記載されている最終
（脱保護）類似体（化合物［２５］、［２７］、［２
９］、［３１］および［３２］）を試験すると、全て所
望の範囲の効力を有することが見いだされ、それらがＡ
ＤＡ酵素を阻害し得、不可逆的にそれを無力化すること
もないことが示された。これらのＫｉ値は表１に示され
ている。
ＡＤＡ酵素阻害について、ここに記載されている最終
（脱保護）類似体（化合物［２５］、［２７］、［２
９］、［３１］および［３２］）を試験すると、全て所
望の範囲の効力を有することが見いだされ、それらがＡ
ＤＡ酵素を阻害し得、不可逆的にそれを無力化すること
もないことが示された。これらのＫｉ値は表１に示され
ている。
【０１１４】化合物２４：９−［９−ベンゾイルオキシ
−２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−３（Ｒ）−ノニル］アデニ
ン ２番炭素に結合したベンゾイルオキシ基および９番炭素
原子にベンジルオキシ基を有するこの類似体は、ＴＨＦ
（５ｍｌ）中、化合物［９］（３１４ｍｇ、０.８２ミ
リモル）、安息香酸（ＢｚＯＨ、１２２ｍｇ、１ミリモ
ル）およびトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ3、２６２
ｍｇ、１ミリモル）から成る撹拌溶液にＮ,Ｎ−ジイソ
プロピルアゾ−ジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、２０２
ｍｇ、１ミリモル）を加えることにより製造された。混
合物を室温で２４時間撹拌し、沈澱したトリフェニルホ
スフィンオキシドを濾過した。濾液を濃縮し、残留物
を、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を用いるシリカゲルクロ
マトグラフィーにかけると、［２４］が得られ、９：１
のＥｔＯＡｃおよびメタノール（ＭｅＯＨ）を用いるプ
レパラティブ薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により
さらに精製した。収量は２５０ｍｇ（６３％）であっ
た。
−２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−３（Ｒ）−ノニル］アデニ
ン ２番炭素に結合したベンゾイルオキシ基および９番炭素
原子にベンジルオキシ基を有するこの類似体は、ＴＨＦ
（５ｍｌ）中、化合物［９］（３１４ｍｇ、０.８２ミ
リモル）、安息香酸（ＢｚＯＨ、１２２ｍｇ、１ミリモ
ル）およびトリフェニルホスフィン（ＰＰｈ3、２６２
ｍｇ、１ミリモル）から成る撹拌溶液にＮ,Ｎ−ジイソ
プロピルアゾ−ジカルボキシレート（ＤＩＡＤ、２０２
ｍｇ、１ミリモル）を加えることにより製造された。混
合物を室温で２４時間撹拌し、沈澱したトリフェニルホ
スフィンオキシドを濾過した。濾液を濃縮し、残留物
を、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を用いるシリカゲルクロ
マトグラフィーにかけると、［２４］が得られ、９：１
のＥｔＯＡｃおよびメタノール（ＭｅＯＨ）を用いるプ
レパラティブ薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により
さらに精製した。収量は２５０ｍｇ（６３％）であっ
た。
【０１１５】化合物２５：９−［９−ベンゾイルオキシ
−２（Ｓ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン ９番炭素原子に結合したベンゾイルオキシ基を有するこ
のアルコールは、エタノール（ＥｔＯＨ、１８ｍｌ）お
よびシクロヘキサン（６ｍｌ）中化合物［２４］（２０
０ｍｇ）を２０％水酸化パラジウム・炭素（ＰｄＯＨ2
／Ｃ、０.１５ｇ）で処理することにより生成された。
懸濁液を１２時間還流撹拌した。室温に冷却後、混合物
を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカによる
クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃおよびＭｅＯＨ、９：
１）にかけると、純粋な［２５］、１３０ｍｇ（８０
％）が得られた。
−２（Ｓ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン ９番炭素原子に結合したベンゾイルオキシ基を有するこ
のアルコールは、エタノール（ＥｔＯＨ、１８ｍｌ）お
よびシクロヘキサン（６ｍｌ）中化合物［２４］（２０
０ｍｇ）を２０％水酸化パラジウム・炭素（ＰｄＯＨ2
／Ｃ、０.１５ｇ）で処理することにより生成された。
懸濁液を１２時間還流撹拌した。室温に冷却後、混合物
を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残留物をシリカによる
クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃおよびＭｅＯＨ、９：
１）にかけると、純粋な［２５］、１３０ｍｇ（８０
％）が得られた。
【０１１６】化合物２６：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジ
ル−９−フタルイミド−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物［２６］は、化合物［２４］の場合と同様にして
化合物［９］から収率８７％で製造されたが、ただし、
安息香酸の代わりにフタルイミド（１ミリモル、１４７
ｍｇ）を使用した。上記化合物は常に痕跡量のトリフェ
ニルホスフィンオキシドおよびジヒドロ−ＤＩＡＤを含
有するため、分析上純粋な化合物は得られなかった。そ
れは次の段階で試薬として使用され、化合物［２７］が
製造された。
ル−９−フタルイミド−３（Ｒ）−ノニル］アデニン 化合物［２６］は、化合物［２４］の場合と同様にして
化合物［９］から収率８７％で製造されたが、ただし、
安息香酸の代わりにフタルイミド（１ミリモル、１４７
ｍｇ）を使用した。上記化合物は常に痕跡量のトリフェ
ニルホスフィンオキシドおよびジヒドロ−ＤＩＡＤを含
有するため、分析上純粋な化合物は得られなかった。そ
れは次の段階で試薬として使用され、化合物［２７］が
製造された。
【０１１７】化合物２７：９−［２（Ｓ）−ヒドロキシ
−９−フタルイミド−３（Ｒ）−ノニル］アデニン このアルコールは、［２５］の生成に使用されたのと同
じパラジウム炭素（ＰｄＯＨ2／Ｃ）触媒的方法を用
い、出発試薬（２５５ｍｇ、０.５ミリモル）として
［２６］を用いることにより、収率８５％で製造され
た。 化合物２８：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−９−クロ
ロ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン
−９−フタルイミド−３（Ｒ）−ノニル］アデニン このアルコールは、［２５］の生成に使用されたのと同
じパラジウム炭素（ＰｄＯＨ2／Ｃ）触媒的方法を用
い、出発試薬（２５５ｍｇ、０.５ミリモル）として
［２６］を用いることにより、収率８５％で製造され
た。 化合物２８：９−［２（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−９−クロ
ロ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン
【０１１８】２番炭素原子におけるベンジル環および９
番炭素原子に結合した塩素原子を伴う類似体［２８］
は、無水ＣＣｌ4（５ｍｌ）中［９］（５００ｍｇ、１.
３ミリモル）およびＮａＨＣＯ3（５０ｍｇ）から成る
撹拌溶液にＰＰｈ3（４００ｍｇ、１.５ミリモル）を加
えることにより製造された。混合物を１２時間還流処理
し、次いで濾過し、濾液を濃縮した。残留物をシリカゲ
ルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）にかけると、３８
０ｍｇ（７５％）が得られた。上記化合物は痕跡量のト
リフェニルホスフィンオキシドを含むため、分析上純粋
な化合物は得られなかった。それは次の段階で試薬とし
て使用され、化合物［２９］が生成された。
番炭素原子に結合した塩素原子を伴う類似体［２８］
は、無水ＣＣｌ4（５ｍｌ）中［９］（５００ｍｇ、１.
３ミリモル）およびＮａＨＣＯ3（５０ｍｇ）から成る
撹拌溶液にＰＰｈ3（４００ｍｇ、１.５ミリモル）を加
えることにより製造された。混合物を１２時間還流処理
し、次いで濾過し、濾液を濃縮した。残留物をシリカゲ
ルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）にかけると、３８
０ｍｇ（７５％）が得られた。上記化合物は痕跡量のト
リフェニルホスフィンオキシドを含むため、分析上純粋
な化合物は得られなかった。それは次の段階で試薬とし
て使用され、化合物［２９］が生成された。
【０１１９】化合物２９：９−［９−クロロ−２（Ｓ）
−ヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン ９番炭素にハライド部分および２番炭素原子にアルコー
ル基をもつこの類似体は、［２５］の生成に使用された
のと同じパラジウム炭素（ＰｄＯＨ2／Ｃ）触媒的方法
を用い、出発試薬として［２８］を用いることにより、
収率８２％で製造された。
−ヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］アデニン ９番炭素にハライド部分および２番炭素原子にアルコー
ル基をもつこの類似体は、［２５］の生成に使用された
のと同じパラジウム炭素（ＰｄＯＨ2／Ｃ）触媒的方法
を用い、出発試薬として［２８］を用いることにより、
収率８２％で製造された。
【０１２０】フッ素、臭素または沃素原子を伴う他のハ
ライド類似体は、所望ならば、上記原子を含む試薬を適
切に選択することにより生成され得る。例えば、化合物
［２８］について記載した合成方法は、ＣＣｌ4の代わ
りにＣＢｒ4またはＣＩ4を用いることにより修飾され得
る。別の例として、９−フルオロ−ＥＨＮＡ類似体は、
化合物［９］（ベンジル保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似
体）をよく知られたフッ素化剤ジエチルアミノ硫黄三フ
ッ化物（ＤＡＳＴ）と反応させることにより製造され得
る。
ライド類似体は、所望ならば、上記原子を含む試薬を適
切に選択することにより生成され得る。例えば、化合物
［２８］について記載した合成方法は、ＣＣｌ4の代わ
りにＣＢｒ4またはＣＩ4を用いることにより修飾され得
る。別の例として、９−フルオロ−ＥＨＮＡ類似体は、
化合物［９］（ベンジル保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ類似
体）をよく知られたフッ素化剤ジエチルアミノ硫黄三フ
ッ化物（ＤＡＳＴ）と反応させることにより製造され得
る。
【０１２１】化合物３０：メチル−７（Ｒ）−アデニン
−９−イル）−８（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−ノノエート ９番炭素にエステル基および２番炭素にベンジル基をも
つ類似体［３０］は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、
２ｍｌ）に［９］（１.３６９ｇ、３.４ミリモル）を溶
かした溶液に重クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ、２.７
５５ｇ、７.３ミリモル）を加えることにより製造され
た。混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで酢酸エチル
で希釈し、シリカゲルおよびＮａ2ＳＯ4（１：１）から
成る混合物に通すことにより、対応する酸（２２０ｍ
ｇ、１５.７％収率）が得られた。この酸をメチルアル
コールおよび硫酸を使用することにより、メチルエステ
ルに変換し、続いて中和および乾燥した。
−９−イル）−８（Ｓ）−Ｏ−ベンジル−ノノエート ９番炭素にエステル基および２番炭素にベンジル基をも
つ類似体［３０］は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、
２ｍｌ）に［９］（１.３６９ｇ、３.４ミリモル）を溶
かした溶液に重クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ、２.７
５５ｇ、７.３ミリモル）を加えることにより製造され
た。混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで酢酸エチル
で希釈し、シリカゲルおよびＮａ2ＳＯ4（１：１）から
成る混合物に通すことにより、対応する酸（２２０ｍ
ｇ、１５.７％収率）が得られた。この酸をメチルアル
コールおよび硫酸を使用することにより、メチルエステ
ルに変換し、続いて中和および乾燥した。
【０１２２】化合物３１：メチル−７（Ｒ）−アデニン
−９−イル）−８（Ｓ）−ヒドロキシ−ノノエート ９番炭素にエステル基および２番炭素にヒドロキシ基を
もつ類似体［３１］は、出発試薬としてベンジル類似体
［３０］を用いる、［２５］の製造に使用したのと同じ
パラジウム炭素（ＰｄＯＨ2／Ｃ）触媒方法を用いて収
率８２％で生成された。エステル３１はまた、９−［２
（Ｓ）−ヒドロキシ−８−カルボキシメチル−３（Ｒ）
−ノニル］アデニンとも称され得る。
−９−イル）−８（Ｓ）−ヒドロキシ−ノノエート ９番炭素にエステル基および２番炭素にヒドロキシ基を
もつ類似体［３１］は、出発試薬としてベンジル類似体
［３０］を用いる、［２５］の製造に使用したのと同じ
パラジウム炭素（ＰｄＯＨ2／Ｃ）触媒方法を用いて収
率８２％で生成された。エステル３１はまた、９−［２
（Ｓ）−ヒドロキシ−８−カルボキシメチル−３（Ｒ）
−ノニル］アデニンとも称され得る。
【０１２３】化合物３２：９−［２（Ｓ）−ヒドロキシ
−３（Ｒ）−ノナ−８−エニル］アデニン 不飽和類似体［３２］は、出発試薬として、図３に示さ
れ実施例１に記載されている不飽和ベンジル保護類似体
［７］を用いることにより製造された。トルエン（１０
ｍｌ）中化合物［７］（２００ｍｇ、０.５５ミリモ
ル）をドライアイス／アセトンにより冷却し、混合物の
体積が４０ｍｌに達するまでアンモニアを溶液中に吹き
込んだ。混合物が強い青色になるまで、ナトリウム金属
を激しく撹拌しながら分割して加えた。２時間撹拌後、
混合物をＮＨ4Ｃｌおよびメタノールにより中和し、濃
縮乾固した。次いで化合物をＣＨ2Ｃｌ2で抽出し、抽出
物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。生成物を、酢酸
エチルを用いる分取薄層クロマトグラフィーにより精製
すると、７０％収率で［３２］が得られた。
−３（Ｒ）−ノナ−８−エニル］アデニン 不飽和類似体［３２］は、出発試薬として、図３に示さ
れ実施例１に記載されている不飽和ベンジル保護類似体
［７］を用いることにより製造された。トルエン（１０
ｍｌ）中化合物［７］（２００ｍｇ、０.５５ミリモ
ル）をドライアイス／アセトンにより冷却し、混合物の
体積が４０ｍｌに達するまでアンモニアを溶液中に吹き
込んだ。混合物が強い青色になるまで、ナトリウム金属
を激しく撹拌しながら分割して加えた。２時間撹拌後、
混合物をＮＨ4Ｃｌおよびメタノールにより中和し、濃
縮乾固した。次いで化合物をＣＨ2Ｃｌ2で抽出し、抽出
物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。生成物を、酢酸
エチルを用いる分取薄層クロマトグラフィーにより精製
すると、７０％収率で［３２］が得られた。
【０１２４】化合物３３：９−［９−ｔ−ブチルジフェ
ニルシリルオキシ−２（Ｓ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−
ノニル］アデニン 注目に値する追加的類似体は、９−ＯＨ−ＥＨＮＡの最
初の生物学的試験の完了後入手可能であったため、９番
炭素原子に結合したシリコン含有基を有する更なる化合
物を、出発物質としての９−ＯＨ−ＥＨＮＡの脱保護を
使用して合成した。珪素含有部分は、（１）計算結果か
ら、それが非常に高いレベルの親油性を有し（クロロお
よびフタルイミド類似体の場合の２または３と比べて、
９の範囲に含まれるｌｏｇＰo/w値）、高レベルの親油
性の評価に役立つ潜在的に有用な化合物を提供し得るこ
とが示されたこと、および（２）この部分が、側鎖の２
番炭素原子における非保護ヒドロキシル基を妨害するこ
となく、脱保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ分子中の９番原子に
付加され得る、という２つの理由で選択された。
ニルシリルオキシ−２（Ｓ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−
ノニル］アデニン 注目に値する追加的類似体は、９−ＯＨ−ＥＨＮＡの最
初の生物学的試験の完了後入手可能であったため、９番
炭素原子に結合したシリコン含有基を有する更なる化合
物を、出発物質としての９−ＯＨ−ＥＨＮＡの脱保護を
使用して合成した。珪素含有部分は、（１）計算結果か
ら、それが非常に高いレベルの親油性を有し（クロロお
よびフタルイミド類似体の場合の２または３と比べて、
９の範囲に含まれるｌｏｇＰo/w値）、高レベルの親油
性の評価に役立つ潜在的に有用な化合物を提供し得るこ
とが示されたこと、および（２）この部分が、側鎖の２
番炭素原子における非保護ヒドロキシル基を妨害するこ
となく、脱保護９−ＯＨ−ＥＨＮＡ分子中の９番原子に
付加され得る、という２つの理由で選択された。
【０１２５】従って、化合物［１０］（３０ｍｇ、０.
１０２ミリモル）を０.５ｍｌのＤＭＦに溶かし、１ｍ
ｌのＣＨ2Ｃｌ2に含ませた５０μｌのジイソプロピルエ
チルアミンおよび１５ｍｇのジメチルアミノピリジンか
ら成る溶液に加えた。この溶液に４０ｍｇ（０.１４ミ
リモル）のｔ−ブチルクロロジフェニル−シランを加
え、混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を蒸発さ
せ、生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０％Ｃ
Ｈ3ＯＨ／ＣＨＣｌ3）により精製すると、２６ｍｇ（４
８％）の９−ｔ−ＢＤＰＳｉ−ＥＨＮＡ化合物［３３］
が得られた。
１０２ミリモル）を０.５ｍｌのＤＭＦに溶かし、１ｍ
ｌのＣＨ2Ｃｌ2に含ませた５０μｌのジイソプロピルエ
チルアミンおよび１５ｍｇのジメチルアミノピリジンか
ら成る溶液に加えた。この溶液に４０ｍｇ（０.１４ミ
リモル）のｔ−ブチルクロロジフェニル−シランを加
え、混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を蒸発さ
せ、生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０％Ｃ
Ｈ3ＯＨ／ＣＨＣｌ3）により精製すると、２６ｍｇ（４
８％）の９−ｔ−ＢＤＰＳｉ−ＥＨＮＡ化合物［３３］
が得られた。
【０１２６】実施例６ 虚血に対する心筋の防御 いわゆる「ランゲンドルフ心臓標本」を用いて、実施例
５記載の類似体の幾つかを試験することにより、それら
が虚血から心筋を保護する能力について評価した。簡単
に述べると、体重２５０〜３５０グラムの雄スプレイグ
−ドーリーラットにヘパリンナトリウムで麻酔をかけ、
ＣＯ2により殺した。開胸により心臓を迅速に摘出し、
収縮が止むまで生理的食塩水（ＰＳＳ）中に置いた。次
いで、心臓を、大動脈の付け根を介してカニューレに取
り付け、８０ｍｍＨｇ、３７℃でＮａＣｌ（ミリモルに
して１１８、以下同様）、ＫＣｌ（４.７）、ＣａＣｌ2
（２.２）、ＫＨ2ＰＯ4（１.１８）、ＭｇＳＯ4（１.１
７）、ＮａＨＣＯ3（２５）、デキストロース（１１）
を含むＰＳＳにより逆行的に潅流した。潅流溶液を９５
％Ｏ2／５％ＣＯ2により曝気してｐＨを７.４に維持し
た。心臓を１５分間平衡させておき、その間バルーンを
先端に装着したカテーテルを、左心房にあけた小さな切
り口から左心室の内腔に導入した。カテーテルを圧力変
換器に連結し、左心室の血流力学的能力、すなわち左心
室収縮期圧（ＬＶＳＰ）、左心室拡張終期圧（ＬＶＥＤ
Ｐ）、左心室発生圧（ＬＶＤＰ）、＋ｄＰ／ｄｔmax
（各収縮中左心室に圧力が発生する際の最大速度）、−
ｄＰ／ｄｔmax（左心室圧が各収縮後に下降する際の最
大速度）および心拍数の測定に使用した。バルーンを先
端に装着したカテーテルを設置後、肺動脈にカニューレ
を挿入して冠動脈流出液を集め、冠動脈流を測定した。
５記載の類似体の幾つかを試験することにより、それら
が虚血から心筋を保護する能力について評価した。簡単
に述べると、体重２５０〜３５０グラムの雄スプレイグ
−ドーリーラットにヘパリンナトリウムで麻酔をかけ、
ＣＯ2により殺した。開胸により心臓を迅速に摘出し、
収縮が止むまで生理的食塩水（ＰＳＳ）中に置いた。次
いで、心臓を、大動脈の付け根を介してカニューレに取
り付け、８０ｍｍＨｇ、３７℃でＮａＣｌ（ミリモルに
して１１８、以下同様）、ＫＣｌ（４.７）、ＣａＣｌ2
（２.２）、ＫＨ2ＰＯ4（１.１８）、ＭｇＳＯ4（１.１
７）、ＮａＨＣＯ3（２５）、デキストロース（１１）
を含むＰＳＳにより逆行的に潅流した。潅流溶液を９５
％Ｏ2／５％ＣＯ2により曝気してｐＨを７.４に維持し
た。心臓を１５分間平衡させておき、その間バルーンを
先端に装着したカテーテルを、左心房にあけた小さな切
り口から左心室の内腔に導入した。カテーテルを圧力変
換器に連結し、左心室の血流力学的能力、すなわち左心
室収縮期圧（ＬＶＳＰ）、左心室拡張終期圧（ＬＶＥＤ
Ｐ）、左心室発生圧（ＬＶＤＰ）、＋ｄＰ／ｄｔmax
（各収縮中左心室に圧力が発生する際の最大速度）、−
ｄＰ／ｄｔmax（左心室圧が各収縮後に下降する際の最
大速度）および心拍数の測定に使用した。バルーンを先
端に装着したカテーテルを設置後、肺動脈にカニューレ
を挿入して冠動脈流出液を集め、冠動脈流を測定した。
【０１２７】安定化期間の終わりに、左心室の血流力学
的能力、心拍数および冠動脈流の測定を行った。次い
で、心臓を、賦形剤、非修飾ＥＨＮＡ(ラセミ)、９−ク
ロロ−ＥＨＮＡまたは９−フタルイミド−ＥＨＮＡを含
むＰＳＳにより１０分間潅流し、測定を反復した。大動
脈カニューレをクランプで締めることにより全体的虚血
を発生させ、これらのパラメーターの測定を５分間隔で
行った。全体的虚血の３５分後、心臓を８０ｍｍＨｇの
圧力で２０分間ＰＳＳにより再潅流した。再潅流期間中
５分間隔で再び測定を行った。
的能力、心拍数および冠動脈流の測定を行った。次い
で、心臓を、賦形剤、非修飾ＥＨＮＡ(ラセミ)、９−ク
ロロ−ＥＨＮＡまたは９−フタルイミド−ＥＨＮＡを含
むＰＳＳにより１０分間潅流し、測定を反復した。大動
脈カニューレをクランプで締めることにより全体的虚血
を発生させ、これらのパラメーターの測定を５分間隔で
行った。全体的虚血の３５分後、心臓を８０ｍｍＨｇの
圧力で２０分間ＰＳＳにより再潅流した。再潅流期間中
５分間隔で再び測定を行った。
【０１２８】表２−４および図５−７における結果か
ら、親油性の高い類似体のほうが、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を防護す
る能力が実質的に優れていることがわかった。
ら、親油性の高い類似体のほうが、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を防護す
る能力が実質的に優れていることがわかった。
【０１２９】実施例７ 細胞培養試験、ストレスを被っていない細胞 最初の一連の細胞培養試験において、ヒト赤血球細胞
（比較的研究対象とし易い）およびヒト星状細胞腫細胞
（細胞培養で再生し得る脳細胞である。これらを用いる
ことにより、ＥＨＮＡ類似体が脳組織において虚血損傷
の低減化を促し得るか否かの指標が与えられた）という
２種の異なるタイプの細胞において、ＥＨＮＡおよびそ
の類似体がＡＤＡ活性を阻害する場合のそれらの能力に
ついて評価した。
（比較的研究対象とし易い）およびヒト星状細胞腫細胞
（細胞培養で再生し得る脳細胞である。これらを用いる
ことにより、ＥＨＮＡ類似体が脳組織において虚血損傷
の低減化を促し得るか否かの指標が与えられた）という
２種の異なるタイプの細胞において、ＥＨＮＡおよびそ
の類似体がＡＤＡ活性を阻害する場合のそれらの能力に
ついて評価した。
【０１３０】最初の一連の試験は、「正常酸素（normox
ic）」条件（すなわち、細胞が、デオキシグルコースま
たはアジ化ナトリウムを用いた、低酸素症またはシミュ
レーションの虚血によるストレスを被らなかった）を用
いて実施され、ＥＨＮＡおよび幾つかの類似体に関する
ＩＣ50値が測定された。ＩＣ50値とは、細胞においてＡ
ＤＡ活性の半分を阻害するのに必要とされる薬剤濃度を
示す。この値は、薬剤が細胞へ入り込み、ＡＤＡ酵素に
達する能力、および細胞の内側でＡＤＡ酵素に結合し、
それを阻害する際の薬剤の効力の両方を反映している。
ＩＣ50値が低いということは、薬剤が強力なＡＤＡ阻害
剤であり、容易に細胞へ入り込め得ることを示す。
ic）」条件（すなわち、細胞が、デオキシグルコースま
たはアジ化ナトリウムを用いた、低酸素症またはシミュ
レーションの虚血によるストレスを被らなかった）を用
いて実施され、ＥＨＮＡおよび幾つかの類似体に関する
ＩＣ50値が測定された。ＩＣ50値とは、細胞においてＡ
ＤＡ活性の半分を阻害するのに必要とされる薬剤濃度を
示す。この値は、薬剤が細胞へ入り込み、ＡＤＡ酵素に
達する能力、および細胞の内側でＡＤＡ酵素に結合し、
それを阻害する際の薬剤の効力の両方を反映している。
ＩＣ50値が低いということは、薬剤が強力なＡＤＡ阻害
剤であり、容易に細胞へ入り込め得ることを示す。
【０１３１】これらの試験を実施するため、細胞集団
を、１時間様々な濃度でＥＨＮＡまたはＥＨＮＡ類似体
とプレインキュベーションした。次いで、細胞を、燐酸
基をアデノシンに付加するアデノシンキナーゼと呼ばれ
る異なる酵素の活性を阻害する１０マイクロモルの５−
ヨードツベルシジンと３０分間インキュベーションし
た。この段階は、アデノシンレベルが、無傷細胞におい
てアデノシンを消費し得る燐酸化経路によって改変され
ないことを確実なものにした。次に、細胞を３０分間１
００マイクロモルの放射性標識アデノシンとインキュベ
ーションした。３０分後、放射性標識イノシンおよびヒ
ポキサンチン（ＡＤＡ酵素がアデノシンを分解するとき
に生成される分子）の濃度を、セルロース薄層クロマト
グラフィーを用いて分離した後細胞培地において測定し
た。幾つかの濃度のＥＨＮＡまたはＥＨＮＡ類似体を各
一連の試験で使用し、各化合物に関するＩＣ50を、その
化合物の用量応答曲線に基づいて計算した。
を、１時間様々な濃度でＥＨＮＡまたはＥＨＮＡ類似体
とプレインキュベーションした。次いで、細胞を、燐酸
基をアデノシンに付加するアデノシンキナーゼと呼ばれ
る異なる酵素の活性を阻害する１０マイクロモルの５−
ヨードツベルシジンと３０分間インキュベーションし
た。この段階は、アデノシンレベルが、無傷細胞におい
てアデノシンを消費し得る燐酸化経路によって改変され
ないことを確実なものにした。次に、細胞を３０分間１
００マイクロモルの放射性標識アデノシンとインキュベ
ーションした。３０分後、放射性標識イノシンおよびヒ
ポキサンチン（ＡＤＡ酵素がアデノシンを分解するとき
に生成される分子）の濃度を、セルロース薄層クロマト
グラフィーを用いて分離した後細胞培地において測定し
た。幾つかの濃度のＥＨＮＡまたはＥＨＮＡ類似体を各
一連の試験で使用し、各化合物に関するＩＣ50を、その
化合物の用量応答曲線に基づいて計算した。
【０１３２】表５における結果は、９−クロロ−ＥＨＮ
Ａが、赤血球細胞の内側でＡＤＡ活性を阻害する場合に
非修飾ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも実質的
に強力であったこと（低い阻害濃度値により示されてい
る）、および９−フタルイミド−ＥＨＮＡが、脳（星状
細胞腫）細胞内側でＡＤＡ活性を阻害する場合に非修飾
ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも実質的に強力
であったことを示している。この表のＩＣ50値は、平均
の後に標準偏差が示されている。
Ａが、赤血球細胞の内側でＡＤＡ活性を阻害する場合に
非修飾ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも実質的
に強力であったこと（低い阻害濃度値により示されてい
る）、および９−フタルイミド−ＥＨＮＡが、脳（星状
細胞腫）細胞内側でＡＤＡ活性を阻害する場合に非修飾
ＥＨＮＡまたは９−ＯＨ−ＥＨＮＡよりも実質的に強力
であったことを示している。この表のＩＣ50値は、平均
の後に標準偏差が示されている。
【表２】 表５ 細胞培養試験におけるＡＤＡ活性の阻害 細胞型／化合物 ＩＣ50（μＭ） 赤血球細胞 ＥＨＮＡ(ラセミ) １.２００±０.７０ ９−ＯＨ−ＥＨＮＡ化合物［１０］ ２.１００±０.９０ ９−クロロ−ＥＨＮＡ化合物［２９］ ０.２２０±０.１４ 星状細胞腫細胞 ＥＨＮＡ(ラセミ) ３.０±２.５ ９−ＯＨ−ＥＨＮＡ［１０］ ３.５±０.８ ９−クロロ−ＥＨＮＡ化合物［２９］ ４.８±１.９ ９−フタルイミド−ＥＨＮＡ化合物［２７］ １.１±０.９ ８,９−不飽和−ＥＨＮＡ化合物［３２］ ２.５±０.８
【０１３３】実施例８ 虚血防御に関する細胞培養試験 第２の一連の細胞培養試験では、低酸素または虚血損傷
をシミュレーションするという２方法のいずれかにより
細胞にストレスをかけた。これらの試験では、放射性標
識ＡＴＰを含む星状細胞腫細胞の１集団を、ＥＨＮＡま
たは類似体と６０分間インキュベーションした。次い
で、解糖および呼吸を中断させるため、２−デオキシグ
ルコースまたはアジ化ナトリウム（いずれの毒素の場合
も最終濃度５.５ミリモル）を加え、細胞を６０分間イ
ンキュベーションした。インキュベーション後、培養物
を試験することにより、それらが培地中へどれ程の量の
放射性標識アデノシンを放出したかを測定した。アデノ
シン放出は、虚血または低酸素症中における細胞の正常
かつ適切な代謝機能であり、ＥＨＮＡ処理または類似体
処理細胞により放出されたアデノシンの量と、同じ毒素
により同様にストレスをかけたが、ＥＨＮＡまたは類似
体による処理は全く行わなかった対照細胞により放出さ
れたアデノシンの量とを比較した。表６および７におけ
る結果は、非処理対照細胞と比較した、処理細胞により
放出されたアデノシンのパーセンテージで表されてい
る。
をシミュレーションするという２方法のいずれかにより
細胞にストレスをかけた。これらの試験では、放射性標
識ＡＴＰを含む星状細胞腫細胞の１集団を、ＥＨＮＡま
たは類似体と６０分間インキュベーションした。次い
で、解糖および呼吸を中断させるため、２−デオキシグ
ルコースまたはアジ化ナトリウム（いずれの毒素の場合
も最終濃度５.５ミリモル）を加え、細胞を６０分間イ
ンキュベーションした。インキュベーション後、培養物
を試験することにより、それらが培地中へどれ程の量の
放射性標識アデノシンを放出したかを測定した。アデノ
シン放出は、虚血または低酸素症中における細胞の正常
かつ適切な代謝機能であり、ＥＨＮＡ処理または類似体
処理細胞により放出されたアデノシンの量と、同じ毒素
により同様にストレスをかけたが、ＥＨＮＡまたは類似
体による処理は全く行わなかった対照細胞により放出さ
れたアデノシンの量とを比較した。表６および７におけ
る結果は、非処理対照細胞と比較した、処理細胞により
放出されたアデノシンのパーセンテージで表されてい
る。
【表３】 表６ 低酸素シミュレーション中における星状細胞腫細胞によるアデノシン放出 （デオキシグルコースによりストレスをかける） 防御薬剤 対照値のパーセント 非処理 ＝１００％（基線） ＥＨＮＡ(ラセミ) ３３９±２５ ９−ＯＨ−ＥＨＮＡ［１０］ ２８９±１２ ９−クロロ−ＥＨＮＡ化合物［２９］ ３７５±２５ ９-フタルイミド-ＥＨＮＡ化合物［２７］ ５５９±１９ ８,９−不飽和−ＥＨＮＡ化合物［３２］ ３００±４８ ９-ブチルジフェニルシリルオキシ-ＥＨＮＡ［３３］２４４±２１
【０１３４】
【表４】 表７ 正常酸素条件および低酸素シミュレーション下における星状細胞腫細胞による アデノシン放出 防御薬剤（μＭ、条件） 対照値のパーセント 非処理 ＝１００％（基線） ＥＨＮＡ(ラセミ) ０.０１ 正常酸素下 ９９±１０ ０.１ 正常酸素下 ９２±８ ０.０１ ストレス下 １３９±７ ０.１ ストレス下 ２５３±２１ ９−フタルイミド−ＥＨＮＡ化合物［２７］ ０.０１ 正常酸素下 １０２±１１ ０.１ 正常酸素下 １１１±１３ ０.０１ ストレス下 ２４２±９ ０.１ ストレス下 ４２５±４０ ８,９−不飽和−ＥＨＮＡ化合物［３２］ ０.０１ 正常酸素下 １１５±２２ ０.１ 正常酸素下 １１９±１２ ０.０１ ストレス下 １５９±１１ ０.１ ストレス下 ２２５±３１
【０１３５】これらの結果は、９−クロロおよび９−フ
タルイミドＥＨＮＡ類似体の方が、非修飾ＥＨＮＡより
も、脳細胞培養における低酸素損傷中にアデノシン放出
を促す能力が高いことを示している。
タルイミドＥＨＮＡ類似体の方が、非修飾ＥＨＮＡより
も、脳細胞培養における低酸素損傷中にアデノシン放出
を促す能力が高いことを示している。
【０１３６】さらに、正常酸素（「normoxic」）条件下
で培養した細胞では大した効果が認められないというこ
とは、ＥＨＮＡがストレスを被っていない細胞の正常な
代謝活性を破壊しないことを示しているため、重要なこ
とである。ＥＨＮＡは、専らストレスを被っている細胞
でのみ活性を示す。
で培養した細胞では大した効果が認められないというこ
とは、ＥＨＮＡがストレスを被っていない細胞の正常な
代謝活性を破壊しないことを示しているため、重要なこ
とである。ＥＨＮＡは、専らストレスを被っている細胞
でのみ活性を示す。
【０１３７】第３の一連の細胞培養試験では、星状細胞
腫細胞を、嫌気性チャンバー中２時間実際の低酸素条件
下におき、窒素ガス（酸素ではない）を細胞培養培地に
吹き込んだ。低酸素期間後における培養培地中への放射
性標識アデノシンの放出（表８）を測定した。
腫細胞を、嫌気性チャンバー中２時間実際の低酸素条件
下におき、窒素ガス（酸素ではない）を細胞培養培地に
吹き込んだ。低酸素期間後における培養培地中への放射
性標識アデノシンの放出（表８）を測定した。
【表５】 表８ ２時間の低酸素状態後の脳細胞によるアデノシン放出 防御薬剤（μＭ） 対照値のパーセント 非処理 ＝１００％（基線） ＥＨＮＡ(ラセミ) ０.０５ ２５７±３４ ０.５ ７６９±６７ ９−フタルイミド−ＥＨＮＡ ０.０５ ３８６±５１ ０.５ ８６６±８３
【０１３８】これらの結果は、ＥＨＮＡおよびその９−
フタルイミド類似体が、シミュレーションまたは非シミ
ュレーションによる低酸素の両条件下においてアデノシ
ン放出を高めること、およびフタルイミド類似体がさら
に高いレベルの防御性を呈することを示している。虚血
発作に直面しても脳細胞において正常な代謝機能の維持
を促すこの能力は、フタルイミド類似体が虚血損傷に対
する脳組織の防御を助長し得るということを示してい
る。
フタルイミド類似体が、シミュレーションまたは非シミ
ュレーションによる低酸素の両条件下においてアデノシ
ン放出を高めること、およびフタルイミド類似体がさら
に高いレベルの防御性を呈することを示している。虚血
発作に直面しても脳細胞において正常な代謝機能の維持
を促すこの能力は、フタルイミド類似体が虚血損傷に対
する脳組織の防御を助長し得るということを示してい
る。
【０１３９】実施例９ 脳組織の防御に関する追加的検定 様々な検定が現在進行中であり、いくつかのＥＨＮＡ類
似体が、培養細胞とは区別して、無傷の脳組織において
低酸素または虚血損傷を低減化させる能力を定量してい
る。これらの検定の場合、本出願人であるサイプロス・
ファーマシューティカル・コーポレーションがスポンサ
ーとなって、資金を供給しており、関係の無い研究者に
よりロサンゼルスのＵＣＬＡメディカル・センターで実
施されている。
似体が、培養細胞とは区別して、無傷の脳組織において
低酸素または虚血損傷を低減化させる能力を定量してい
る。これらの検定の場合、本出願人であるサイプロス・
ファーマシューティカル・コーポレーションがスポンサ
ーとなって、資金を供給しており、関係の無い研究者に
よりロサンゼルスのＵＣＬＡメディカル・センターで実
施されている。
【０１４０】現在実施されているインビトロ検定では、
２つの理由により、殺したラットの脳から採取した無傷
の海馬組織片が使用される。第１に、脳の海馬領域から
採取した組織は、虚血損傷によって非常に傷つき易いこ
とが知られている。そして第２に、無傷の結合組織(ニ
ューロンおよびグリアル細胞のような他の型の支持細胞
を含む)からは、破壊細胞片または人工条件下で培養さ
れた摘出細胞（特に上記細胞は癌性であるかまたは遺伝
子的に改変されたため人工細胞培養条件で複製速度を増
した場合）のいずれかよりもインビボ細胞および組織行
動の優れたモデルを得られることが多いため、潅流した
無傷の脳組織片を用いる試験は神経学研究で好まれるこ
とが多い。
２つの理由により、殺したラットの脳から採取した無傷
の海馬組織片が使用される。第１に、脳の海馬領域から
採取した組織は、虚血損傷によって非常に傷つき易いこ
とが知られている。そして第２に、無傷の結合組織(ニ
ューロンおよびグリアル細胞のような他の型の支持細胞
を含む)からは、破壊細胞片または人工条件下で培養さ
れた摘出細胞（特に上記細胞は癌性であるかまたは遺伝
子的に改変されたため人工細胞培養条件で複製速度を増
した場合）のいずれかよりもインビボ細胞および組織行
動の優れたモデルを得られることが多いため、潅流した
無傷の脳組織片を用いる試験は神経学研究で好まれるこ
とが多い。
【０１４１】適切に潅流した場合、海馬組織片中のいわ
ゆる「ＣＡ１」神経細胞は、数時間、電気脳波計に相当
する装置を用いて迅速かつ容易に測定され得る電気生理
学的応答（生体動物での脳波に相当する）を発する。従
って、候補神経防御薬剤を試験することにより、それ
が、潅流した海馬組織片中の神経細胞が正常で望ましい
振幅および周波数を有する電気スパイク波を発生させる
能力を延長、回復または別の方法で増加させ得るか否か
を見いだすことができる（異常な振幅または周波数を有
するスパイク波を誘導する発作誘導性痙攣薬の場合とは
区別される）。虚血発作にも拘らず候補薬剤によって海
馬薄片がそれらの正常な電気生理学的応答を回復または
延長し得る場合、このことは、実際に候補薬剤が脳組織
への虚血損傷に対する実質的防御活性を有するという強
力かつ直接的証拠を提供する。上記試験は広く使用さ
れ、許容されており、様々な参考文献、例えばビッティ
ンガム等（１９８４）並びにシュウルおよびリガー（１
９９２）に記載されている。
ゆる「ＣＡ１」神経細胞は、数時間、電気脳波計に相当
する装置を用いて迅速かつ容易に測定され得る電気生理
学的応答（生体動物での脳波に相当する）を発する。従
って、候補神経防御薬剤を試験することにより、それ
が、潅流した海馬組織片中の神経細胞が正常で望ましい
振幅および周波数を有する電気スパイク波を発生させる
能力を延長、回復または別の方法で増加させ得るか否か
を見いだすことができる（異常な振幅または周波数を有
するスパイク波を誘導する発作誘導性痙攣薬の場合とは
区別される）。虚血発作にも拘らず候補薬剤によって海
馬薄片がそれらの正常な電気生理学的応答を回復または
延長し得る場合、このことは、実際に候補薬剤が脳組織
への虚血損傷に対する実質的防御活性を有するという強
力かつ直接的証拠を提供する。上記試験は広く使用さ
れ、許容されており、様々な参考文献、例えばビッティ
ンガム等（１９８４）並びにシュウルおよびリガー（１
９９２）に記載されている。
【０１４２】下記プロトコルは、ワリス等（１９９２）
で詳細に記載されている。簡単に述べると、スプレイグ
−ドーリーラットにハロセインで麻酔をかけ、次いで断
頭する。脳をすばやく摘出し、１分間冷たい人工脳脊髄
液（ＣＳＦ）中に入れる。この髄液は、ＮａＣｌ、１２
６（ミリモル、以下同様）、ＫＣｌ、４.０、ＫＨ2ＰＯ
4、１.４、ＭｇＳＯ4、１.３、ＣａＣｌ2、２.４、Ｎａ
ＨＣＯ3、２６およびグルコース、４.０を含有し、ｐＨ
は７.４で、９５％Ｏ2および５％ＣＯ2から成る気体混
合物により飽和している。次いで、冷えた脳組織を薄く
切って得られた海馬組織薄片を、自記ウェルに入れ、サ
ーモスタットで周囲浴の温度を３４℃に制御する。
で詳細に記載されている。簡単に述べると、スプレイグ
−ドーリーラットにハロセインで麻酔をかけ、次いで断
頭する。脳をすばやく摘出し、１分間冷たい人工脳脊髄
液（ＣＳＦ）中に入れる。この髄液は、ＮａＣｌ、１２
６（ミリモル、以下同様）、ＫＣｌ、４.０、ＫＨ2ＰＯ
4、１.４、ＭｇＳＯ4、１.３、ＣａＣｌ2、２.４、Ｎａ
ＨＣＯ3、２６およびグルコース、４.０を含有し、ｐＨ
は７.４で、９５％Ｏ2および５％ＣＯ2から成る気体混
合物により飽和している。次いで、冷えた脳組織を薄く
切って得られた海馬組織薄片を、自記ウェルに入れ、サ
ーモスタットで周囲浴の温度を３４℃に制御する。
【０１４３】自記ウェル中に薄片を入れた１時間後、順
方向のＣＡ１集団スパイク（ＰＳ）を各組織片について
測定する。細胞機能の指標であるこの出力は、ＣＡ３シ
ャッファー側副枝の上に置かれたよじれた二極電極を用
いて電気刺激に対する応答として誘導される。ＣＡ１の
錐体層に挿入されたタングステン電極を用いて応答を記
録する。電流強度（刺激用電極で）および電極深度（測
定用電極について）を調節することにより、ＣＡ１スパ
イクの最大振幅を達成する。初回評価で３ｍＶまたはそ
れより大きい順方向のＣＡ１ ＰＳを示す薄片のみ、さ
らに別の試験に使用する。
方向のＣＡ１集団スパイク（ＰＳ）を各組織片について
測定する。細胞機能の指標であるこの出力は、ＣＡ３シ
ャッファー側副枝の上に置かれたよじれた二極電極を用
いて電気刺激に対する応答として誘導される。ＣＡ１の
錐体層に挿入されたタングステン電極を用いて応答を記
録する。電流強度（刺激用電極で）および電極深度（測
定用電極について）を調節することにより、ＣＡ１スパ
イクの最大振幅を達成する。初回評価で３ｍＶまたはそ
れより大きい順方向のＣＡ１ ＰＳを示す薄片のみ、さ
らに別の試験に使用する。
【０１４４】対照試料において、ＥＨＮＡ類似体または
他の神経防御剤を全く含まない人工ＣＳＦ液に組織片を
浸す。試験試料も同様に処理するが、ＣＳＦ液は既知濃
度のＥＨＮＡまたはここに記載されているＥＨＮＡ類似
体を含有する。
他の神経防御剤を全く含まない人工ＣＳＦ液に組織片を
浸す。試験試料も同様に処理するが、ＣＳＦ液は既知濃
度のＥＨＮＡまたはここに記載されているＥＨＮＡ類似
体を含有する。
【０１４５】これらの検定法では、海馬組織片を限定さ
れた時間低酸素条件にさらし、次いでその低酸素期間後
の電気刺激に対するＣＡ１細胞の応答能力を測定する。
酸素圧低下を開始させるため、対になった海馬薄片（す
なわち、同じ動物から採取した２組織片）を２つの自記
ウェルに入れ、両ウェルへの潅流液を、遊離酸素不含有
の人工ＣＳＦに変える。ＣＳＦ液を９５％Ｎ2（Ｏ2の代
わり）および５％ＣＯ2で飽和させる。
れた時間低酸素条件にさらし、次いでその低酸素期間後
の電気刺激に対するＣＡ１細胞の応答能力を測定する。
酸素圧低下を開始させるため、対になった海馬薄片（す
なわち、同じ動物から採取した２組織片）を２つの自記
ウェルに入れ、両ウェルへの潅流液を、遊離酸素不含有
の人工ＣＳＦに変える。ＣＳＦ液を９５％Ｎ2（Ｏ2の代
わり）および５％ＣＯ2で飽和させる。
【０１４６】各対の１片を、酸素圧低下開始の３０秒前
から始め、さらにＥＨＮＡまたはＥＨＮＡ類似体に曝
し、酸素圧低下終了後１５分まで続ける。酸素圧低下に
よる欠乏期間は種々の薄片によって変動する。酸素圧低
下中、各対照組織片（すなわち、ＥＨＮＡまたはＥＨＮ
Ａ類似体により処理されなかった各薄片）をモニターす
ると、「低酸素傷害の可能性」（ＨＩＰ、フェアチャイ
ルド等、１９８８）が依然として存在するという確証が
得られる。
から始め、さらにＥＨＮＡまたはＥＨＮＡ類似体に曝
し、酸素圧低下終了後１５分まで続ける。酸素圧低下に
よる欠乏期間は種々の薄片によって変動する。酸素圧低
下中、各対照組織片（すなわち、ＥＨＮＡまたはＥＨＮ
Ａ類似体により処理されなかった各薄片）をモニターす
ると、「低酸素傷害の可能性」（ＨＩＰ、フェアチャイ
ルド等、１９８８）が依然として存在するという確証が
得られる。
【０１４７】未処理薄片におけるＨＩＰ消失の５分後、
潅流媒質へ酸素を加えることにより、対になった薄片に
おける酸素圧低下による欠乏を終結させる。次いで、２
対の薄片をさらに９０秒間モニターし、脳波の振幅を記
録する。次いで、最終ＣＡ１順方向性ＰＳ振幅を、処理
前に測定したもとのＣＡ１順方向性ＰＳ振幅と比較す
る。また、逆方向性ＰＳ振幅を、酸素圧低下前および回
復の９０分後に評価する。
潅流媒質へ酸素を加えることにより、対になった薄片に
おける酸素圧低下による欠乏を終結させる。次いで、２
対の薄片をさらに９０秒間モニターし、脳波の振幅を記
録する。次いで、最終ＣＡ１順方向性ＰＳ振幅を、処理
前に測定したもとのＣＡ１順方向性ＰＳ振幅と比較す
る。また、逆方向性ＰＳ振幅を、酸素圧低下前および回
復の９０分後に評価する。
【０１４８】幾つかの試験では、低酸素期間を含む潅流
期間全体を通して海馬組織片に３０秒毎に電気刺激を与
える。これらの試験において、定期的刺激を続行する
と、追加の代謝要求が強要され、そのため毒素刺激性傷
害が悪化し、よりいっそう精密な試験となる。
期間全体を通して海馬組織片に３０秒毎に電気刺激を与
える。これらの試験において、定期的刺激を続行する
と、追加の代謝要求が強要され、そのため毒素刺激性傷
害が悪化し、よりいっそう精密な試験となる。
【０１４９】酸素圧低下中終始平均ＰＳ回復についてモ
ニターした、刺激薄片から集められたデータを、スチュ
ーデントのｔ−テストを用いて分析する。実験の最初と
最後にのみＣＡ１オルトドロミックおよびアンチドロミ
ックＰＳ振幅について評価した、非刺激薄片から集めら
れたデータを、ウィルコクソン順位−総数試験を用いて
分析する。
ニターした、刺激薄片から集められたデータを、スチュ
ーデントのｔ−テストを用いて分析する。実験の最初と
最後にのみＣＡ１オルトドロミックおよびアンチドロミ
ックＰＳ振幅について評価した、非刺激薄片から集めら
れたデータを、ウィルコクソン順位−総数試験を用いて
分析する。
【０１５０】これらの試験プロトコルの設計故に、この
検定で酸素圧低下により誘発されたＣＡ１傷害は、非投
薬の非刺激片の場合、厳密で通常は絶対的に信頼性があ
るため、比較目的に有用なベースラインが提供される。
検定で酸素圧低下により誘発されたＣＡ１傷害は、非投
薬の非刺激片の場合、厳密で通常は絶対的に信頼性があ
るため、比較目的に有用なベースラインが提供される。
【０１５１】今日までで完了している最初の検定は、非
修飾ＥＨＮＡが１０マイクロモルのＥＣ50レベル(すな
わち、平均５０％回復レベルをもたらすモル濃度)で虚
血に対して神経保護を提供する。９−ヒドロキシ類似体
は、５０μＭまでの濃度で有意な保護は提供しない。ベ
ンゾイルオキシ類似体(化合物［２５］)は、２０μＭま
での濃度で保護をせず、８,９−ジデヒドロ類似体は、
１０から２０μＭの間の濃度で保護を提供する。９−フ
タルイミド類似ちあは、今日までで最も良い保護を提供
し、ＥＣ50濃度は約７.５μＭである。
修飾ＥＨＮＡが１０マイクロモルのＥＣ50レベル(すな
わち、平均５０％回復レベルをもたらすモル濃度)で虚
血に対して神経保護を提供する。９−ヒドロキシ類似体
は、５０μＭまでの濃度で有意な保護は提供しない。ベ
ンゾイルオキシ類似体(化合物［２５］)は、２０μＭま
での濃度で保護をせず、８,９−ジデヒドロ類似体は、
１０から２０μＭの間の濃度で保護を提供する。９−フ
タルイミド類似ちあは、今日までで最も良い保護を提供
し、ＥＣ50濃度は約７.５μＭである。
【０１５２】次いで、これらの比較的簡単で費用の安い
インビトロ試験において低酸素または虚血傷害を実質的
に低減化する特定のＥＨＮＡ類似体は、例えばネルガー
ドおよびビーロッホ（１９９２）（ラットにおける外科
的に誘導された虚血）、ブチャンおよびプルシネリ（１
９９０）（アレチネズミにおける外科的虚血）、ミヒェ
ンフェルダー等（１９８９）（いぬにおける外科的虚
血）およびラニエル等（１９８８）（霊長動物における
頚部止血帯）の文献に記載されているインビボ試験を用
いるか、当業界の熟練者に知られた他のプロトコルを用
いて、無傷の動物において試験され得る。
インビトロ試験において低酸素または虚血傷害を実質的
に低減化する特定のＥＨＮＡ類似体は、例えばネルガー
ドおよびビーロッホ（１９９２）（ラットにおける外科
的に誘導された虚血）、ブチャンおよびプルシネリ（１
９９０）（アレチネズミにおける外科的虚血）、ミヒェ
ンフェルダー等（１９８９）（いぬにおける外科的虚
血）およびラニエル等（１９８８）（霊長動物における
頚部止血帯）の文献に記載されているインビボ試験を用
いるか、当業界の熟練者に知られた他のプロトコルを用
いて、無傷の動物において試験され得る。
【０１５３】実施例１０：ラセミ(±)ＥＨＮＡ対(＋)Ｅ
ＨＮＡの比較 化合物利用能の状態の変化により、ここに記載の試験は
対象化合物として(±)ＥＨＮＡのラセミ混合物を使用
し、一方他の試験は、ＡＤＡ阻害剤として(−)異性体よ
りも有効な(＋)立体異性体を使用した。これらの異なっ
た型の対照の可能性のある異なる活性レベルの良好な比
較をするために、低酸素または虚血傷害に対する保護に
おいて、ラセミ混合物と(＋)異性体を直接に比較する幾
つかの試験を行った。今日まで、成されているこれらの
試験は、実施例７および８に記載のような、ヒト星状細
胞腫(ＨＡＣ)細胞を使用した、細胞培養試験のみであ
る。今日まで行われている試験では、ラセミ混合物およ
び純粋(＋)異性体の間で、虚血／低酸素防御における大
きな差は示されていない。
ＨＮＡの比較 化合物利用能の状態の変化により、ここに記載の試験は
対象化合物として(±)ＥＨＮＡのラセミ混合物を使用
し、一方他の試験は、ＡＤＡ阻害剤として(−)異性体よ
りも有効な(＋)立体異性体を使用した。これらの異なっ
た型の対照の可能性のある異なる活性レベルの良好な比
較をするために、低酸素または虚血傷害に対する保護に
おいて、ラセミ混合物と(＋)異性体を直接に比較する幾
つかの試験を行った。今日まで、成されているこれらの
試験は、実施例７および８に記載のような、ヒト星状細
胞腫(ＨＡＣ)細胞を使用した、細胞培養試験のみであ
る。今日まで行われている試験では、ラセミ混合物およ
び純粋(＋)異性体の間で、虚血／低酸素防御における大
きな差は示されていない。
【０１５４】最初の試験は、無傷ＨＡＣ細胞のＡＤＡ活
性測定を含む。これらの試験は、放射標識イノシンおよ
びヒポキサンチン濃度の測定を基本にし、放射標識アデ
ノシン(最終濃度１００μＭ)を細胞に添加した後、実施
例７に記載の方法を使用して、細胞により産生され、イ
ンドツベルシヂンの使用を含む。これらの試験は、種々
の濃度のＥＨＮＡ(ラセミまたは(＋)異性体いずれか)を
使用し、細胞に無酸素チャンバーで負わせる低酸素発症
直前に添加した。低酸素２時間後、文筆イノシンおよび
ヒポキサンチン濃度を測定し、阻害パーセントをＥＨＮ
Ａ処理細胞のレベルと同時に処理したがＥＨＮＡにはさ
らしていない対照細胞と比較することにより決定した。
性測定を含む。これらの試験は、放射標識イノシンおよ
びヒポキサンチン濃度の測定を基本にし、放射標識アデ
ノシン(最終濃度１００μＭ)を細胞に添加した後、実施
例７に記載の方法を使用して、細胞により産生され、イ
ンドツベルシヂンの使用を含む。これらの試験は、種々
の濃度のＥＨＮＡ(ラセミまたは(＋)異性体いずれか)を
使用し、細胞に無酸素チャンバーで負わせる低酸素発症
直前に添加した。低酸素２時間後、文筆イノシンおよび
ヒポキサンチン濃度を測定し、阻害パーセントをＥＨＮ
Ａ処理細胞のレベルと同時に処理したがＥＨＮＡにはさ
らしていない対照細胞と比較することにより決定した。
【０１５５】結果を表９に示す。(＋)異性体は、ラセミ
混合物より僅かによい結果を示すが、差は有意ではな
い。更なる試験を、０.００５Ｍ濃度で行ったが、結果
は例外的であり、信頼できないとして除去した。
混合物より僅かによい結果を示すが、差は有意ではな
い。更なる試験を、０.００５Ｍ濃度で行ったが、結果
は例外的であり、信頼できないとして除去した。
【表６】 表９ 低酸素星状細胞におけるラセミまたは(＋)ＥＨＮＡによるＡＤＡ阻害 ＡＤＡ阻害(％) ＥＨＮＡ濃度(μＭ) ラセミ (＋)異性体 改善 ０.０５ ３９.１ ４２.２ ８％ ０.２５ ７１.６ ７６.７ ７％ ０.５ ８３.９ ８２.７ −１％ １.０ ８１.６ ８３.１ ２％
【０１５６】２番目の試験は、実施例８に記載のよう
に、無酸素チャンバーで、窒素ガス下低酸素２時間後星
状細胞腫細胞から遊離されるアデノシンの測定を含む。
対照細胞を処理し、すぐに測定したが、ＥＨＮＡでは処
理しなかった。データは表１０に示す。前記のように、
試験はまた０.００５Ｍでも行ったが、、結果は例外的
であり、信頼できないとして除去した。
に、無酸素チャンバーで、窒素ガス下低酸素２時間後星
状細胞腫細胞から遊離されるアデノシンの測定を含む。
対照細胞を処理し、すぐに測定したが、ＥＨＮＡでは処
理しなかった。データは表１０に示す。前記のように、
試験はまた０.００５Ｍでも行ったが、、結果は例外的
であり、信頼できないとして除去した。
【０１５７】
【表７】 表１０ 低酸素星状細胞によるアデノシン遊離 Ａｄｏ遊離阻害(対照濃度の％) ＥＨＮＡ濃度(μＭ) ラセミ (＋)異性体 改善 ０.０５ １２８ １２９ ＜１％ ０.２５ １２８ １８１ ４１％ ０.５ １５６ １８１ １６％ １.０ １８２ ２１４ １８％
【０１５８】前記のように、(＋)異性体は幾分良好に作
用する；しかしながら、(＋)異性体の効果のレベルは、
平均で、ラセミ混合物より２０％は高くなかった。
用する；しかしながら、(＋)異性体の効果のレベルは、
平均で、ラセミ混合物より２０％は高くなかった。
【０１５９】すなわち、虚血または低酸素傷害を低減化
し、有用な抗癌剤および抗ウイルス剤の代謝分解を遅ら
せるのに有用な新しい種類のＥＨＮＡ類似体について開
示および記述されている。この発明について説明および
記述目的のためにある種の実施態様を引用して実証した
が、当業界の熟練者であれば、説明された実施例の様々
な修正および改変が可能であることは明らかなはずであ
る。何らかの変形でも、この明細書での教義から直接誘
導され、発明の精神および範囲から逸脱していなけれ
ば、この発明に包含されるものと考えられる。
し、有用な抗癌剤および抗ウイルス剤の代謝分解を遅ら
せるのに有用な新しい種類のＥＨＮＡ類似体について開
示および記述されている。この発明について説明および
記述目的のためにある種の実施態様を引用して実証した
が、当業界の熟練者であれば、説明された実施例の様々
な修正および改変が可能であることは明らかなはずであ
る。何らかの変形でも、この明細書での教義から直接誘
導され、発明の精神および範囲から逸脱していなけれ
ば、この発明に包含されるものと考えられる。
【０１６０】参考文献 アブシャナブ、Ｅ.等、『プラクティカル・エナンティ
オスペシフィック・シンセシス・オブ・（＋）−エリト
ロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン』、
「テトラヘドロン・レターズ」、２５：３８４１（１９
８４） アブシャナブ、Ｅ.等、『ザ・ケミストリー・オブ・Ｌ
−アスコービック・アンド・Ｄ−イソアスコービック・
アシッズ：１．ザ・プレパレーション・オブ・キラル・
ブタントリオールズ・アンド・−テトロールズ』、「ジ
ャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー」、５
３：２５９８−２６０２（１９８８） バスティアン、Ｇ.等、『アデノシン・デアミナーゼ・
インヒビターズ：コンバージョン・オブ・ア・シングル
・キラル・シンソン・イントゥ・エリトロ−・アンド・
トレオ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデナイ
ンズ』、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミスト
リー」、２４：１３８３−１３８５（１９８１） ベーカー、Ｄ.Ｃ.およびホーキンス、Ｌ.Ｄ.、『シンセ
シス・オブ・インヒビターズ・オブ・アデノシン・デア
ミナーゼ：ア・トータル・シンセシス・オブ・エリトロ
−３−（アデニン−９−イル）−２−ノナノール・アン
ド・イッツ・アイソマーズ・フロム・キラル・プレカー
サーズ』、「ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミス
トリー」、４７：２１７９−２１８４（１９８２） ボダー、Ｎ.等、『ア・ニュー・メソッド・フォー・ジ
・エスティメーション・オブ・パーティション・コエフ
ィシエンツ』、「ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミ
カル・ソサエティー」、１１１：３７８３−３７８６
（１９８９） ブチャン、Ａ.およびプルシネリ、Ｗ.Ａ,、『ハイポタ
ーミア、バット・ノット・ジ・ＮＭＤＡ・アンタゴニス
トＭＫ−８０１、アテニュエイツ・ザ・ニューロナル・
ダメージ・イン・ガービルズ・サブジェクティッド・ト
ゥ・トランジエント・グローバル・イスキーミア』、
「ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス」、１０：３
１１−３１６（１９９０） クリスタリ、Ｇ.等、『アデノシン・デアミナーゼ・イ
ンヒビターズ：シンセシス・アンド・バイオロジカル・
アクティビティー・オブ・デアザ・アナログズ・オブ・
エリトロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニ
ン』、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリ
ー」、３１：３９０−３９７（１９８８）、 クリスタリ、Ｇ.等、『アデノシン・デアミナーゼ・イ
ンヒビターズ：シンセシス・アンド・ストラクチャー−
アクティビティー・リレーションシップス・オブ・イミ
ダゾール・アナログズ・オブ・エリトロ−９−（２−ヒ
ドロキシ−３−ノニル）アデニン』、「ジャーナル・オ
ブ・メディシナル・ケミストリー」、３４：１１８７−
１１９２（１９９１）、 ダビドフ、Ａ.Ｊ.およびロジャーズ、Ｒ.Ｌ.、『インシ
ュリン、タイロイド・ホーモン、アンド・ハート・ファ
ンクション・オブ・ダイアベティック・スポンティニア
スリイ・ハイパーテンシブ・ラット』、「ハイパーテン
ション１５」：６３３−６４２（１９９０） ドルハイム、Ｔ.Ａ.等、『エンハンスト・インターステ
ィシャル・フルーイド・アデノシン・アテニュエーツ・
マイオカーディアル・スタンニング』、「サージェリ
ー」１１０：１３６−１４５（１９９１） フェアチャイルド、Ｍ.Ｄ.等、『ア・ヒドキシック・イ
ンジャリー・ポテンシャル・イン・ザ・ヒドッカンパル
・スライス』、「ブレイン・リサーチ」４５６：３５７
−３６１（１９８８） ハリマン、Ｇ.Ｃ.Ｂ.等、『アデノシン・デアミナーゼ
・インヒビターズ：シンセシス・アンド・バイオロジカ
ル・エバリュエイション・オブ・Ｃ１’・アンド・Ｎｏ
ｒ−Ｃ１’・デリバティブズ・オブ・（＋）−エリトロ
−９−（２（Ｓ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル）ア
デニン』、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミス
トリー」、３５：４１８０−４１８４（１９９２） ランベ、Ｃ.Ｕ.およびネルソン、Ｄ.Ｊ.、『ファーマコ
キネティックス・オブ・インヒビション・オブ・アデノ
シン・デアミナーゼ・バイ・エリトロ−９−（２−ヒド
ロキシ−３−ノニル）アデニン・イン・ＣＢＡ・マイ
ス』、「バイオケミカル・ファーマコロジー」、３１：
５３５−５３９（１９８２） ラニエル、Ｗ.等、『ジ・エフェクツ・オブ・ディゾシ
ルピン・マレエート（ＭＫ−８０１）、アン・アンタゴ
ニスト・オブ・ジ・ＮＭＤＡ・レセプター、オン・ニュ
ーロロジカル・リカバリー・アンド・ヒストパソロジー
・フォロウイング・コンプリート・セレブラル・イスキ
ーミア・イン・プライメーツ』、「アニステシック・レ
ビューズ」１５：３６−３７（１９８８） マランゴス、Ｐ.Ｊ.等、『アデノシナージック・アプロ
ーチ・トゥー・ストローク・セラピューティクス』、
「メディカル・ヒポセーシス」３２：４５−９（１９９
０） マランゴス、Ｐ.Ｊ.等、「エマージング・ストラタギー
ズ・イン・ニューロプロテクション」(ビルクハウザー
・パブリッシュ、ボストン、１９９２） マッコウネル、Ｗ.Ｒ.等、『メタボリズム・アンド・デ
ィスポジション・オブ・エリトロ−９−（２−ヒドロキ
シ−３−ノニル）［14Ｃ］アデニン・イン・ザ・レース
ス・モンキー』、「ドラッグ・メタブ．ディスプ．」
８：５−７（１９８０） ミヒェンフェルダー、Ｊ.等、『エバリュエーション・
オブ・ザ・グルタメート・アンタゴニスト・ディゾシル
ピン・マレエート（ＭＫ−８０１）・オン・ニューロロ
ジカル・アウトカム・イン・ア・カニン・モデル・オブ
・コンプリート・セレブラル・イスキーミア：コレレー
ション・ウイズ・ヒッポカンパル・ヒストパソロジ
ー』、「ブレーン・リサーチ」４８１：２２８−２３４
（１９８９） ネルガード、Ｂ.およびビーロッホ、Ｔ.、『ポストイス
キーミック・ブロッケージ・オブ・ＡＭＰＡ・バット・
ノット・ＮＭＤＡ・レセプターズ・ミティゲイツ・ニュ
ーロナル・ダメージ・イン・ザ・ラット・ブレーン・フ
ォロウイング・トランジェント・シビア・セレブラル・
イスキーミア』、「ジェイ．セレブ．ブラッド・フロー
・メタブ．」１２：２−１１（１９９２） オドワイア、Ｐ.Ｊ.等、『アソーシエイション・オブ・
シビア・フェータル・インフェクションズ・アンド・ト
リートメント・ウイズ・ペントスタチン』、「キャンサ
ー・トリート．レプ．」、７０：１１１７−１１２０
（１９８６） フィリス、Ｊ.Ｗ.およびオレーガン、Ｍ.Ｈ.、『デオキ
シコフォルマイシン・アンタゴナイジーズ・イスキーミ
ア−インデュースト・ニューロナル・デジェネレーショ
ン』、「ブレーン・リサーチ・ブレタン」２２：５３７
−４０（１９８９） シェッファー、Ｈ.Ｊ.およびシュベンダー、Ｃ.Ｆ.、
『エンザイム・インヒビターズ・ＸＸＶＩ：ブリッジン
グ・ハイドロフォビック・アンド・ハイドロフィリック
・リージョンズ・オン・アデノシン・デアミナーゼ・ウ
イズ・サム・９−（２−ヒドロキシ−３−アルキル）ア
デナインズ』、「ジャーナル・オブ・メディシナル・ケ
ミストリー」１７：６−８（１９７４） スクール、Ａ.およびリゴール、Ｂ.Ｍ.、『モデリング
・ニュードデジェネレーション・アンド・ニューロプロ
テクション・イン・ヒポカンパル・スライス』、「マラ
ンゴスおよびラール」編集（１９９２） バルギーゼ、Ｃ.等、『アデノシン・デアミナーゼ・イ
ンヒビターズ：シンセシス・アンド・バイオロジカル・
エバリュエーション・オブ・ピュータティブ・メタボラ
イツ・オブ・ＥＨＮＡ』、「ジャーナル・オブ・メディ
シナル・ケミストリー」３７：３８４４（１９９４） ワリス、Ｒ.Ａ.等、『プロテクティブ・エフェクツ・オ
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ブ・フェルバメート・アゲインスト・ヒポキシア・イン
・ザ・ラット・ヒポカンパル・スライス』、「ストロー
ク」２３：５４７−５５１（１９９２） ウィッティンガム、Ｍ.Ｓ.等、『アン・インビトロ・モ
デル・オブ・イシェミア：メタボリック・アンド・エレ
クトリカル・アルタネーションズ・イン・ザ・ヒポカン
パル・スライス』、「ジャーナル・オブ・ニューロサイ
エンス」４：７９３−８０２（１９８４） ズー、Ｑ.Ｙ.等、『プロテクティブ・エフェクツ・オフ
・アン・アデノシン・デアミナーゼ・インヒビター・オ
ン・イシェミア−レパーフージョン・インジャリー・イ
ン・アイソレーテッド・パーフューズド・ラット・ハー
ト』、「アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジオロジ
ー」２５９：Ｈ８３５−８（１９９０)
【図１】 化合物［１０］と定められた９'−ヒドロキ
シ（＋）−ＥＨＮＡ、すなわちさらに親油性が高いＥＨ
ＮＡの他の後続類似体の生成に使用される中間化合物の
生成に使用される一連の化学反応を示す図である。
シ（＋）−ＥＨＮＡ、すなわちさらに親油性が高いＥＨ
ＮＡの他の後続類似体の生成に使用される中間化合物の
生成に使用される一連の化学反応を示す図である。
【図２】 化合物［２３］と定められた８’−ヒドロキ
シ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用された反応を示す図で
ある。
シ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用された反応を示す図で
ある。
【図３】 化合物［１４］と定められた８',９'−ジヒ
ドロキシ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用された反応を示
す図である。
ドロキシ（＋）−ＥＨＮＡの生成に使用された反応を示
す図である。
【図４】 ９番炭素原子に結合した様々な非ヒドロキシ
部分を含むＥＨＮＡの類似体の生成に使用された（実施
例５参照）反応を示す図である。
部分を含むＥＨＮＡの類似体の生成に使用された（実施
例５参照）反応を示す図である。
【図５】 ９−クロロ−ＥＨＮＡ（化合物［２９］）お
よび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合物［２７］）
が、実施例６記載の試験において、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を
防護する効力が高かったことを示す棒グラフである。
よび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合物［２７］）
が、実施例６記載の試験において、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を
防護する効力が高かったことを示す棒グラフである。
【図６】 ９−クロロ−ＥＨＮＡ（化合物［２９］）お
よび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合物［２７］）
が、実施例６記載の試験において、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を
防護する効力が高かったことを示す棒グラフである。
よび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合物［２７］）
が、実施例６記載の試験において、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を
防護する効力が高かったことを示す棒グラフである。
【図７】 ９−クロロ−ＥＨＮＡ（化合物［２９］）お
よび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合物［２７］）
が、実施例６記載の試験において、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を
防護する効力が高かったことを示す棒グラフである。
よび９−フタルイミド−ＥＨＮＡ（化合物［２７］）
が、実施例６記載の試験において、非修飾ＥＨＮＡまた
は９−ヒドロキシ−ＥＨＮＡよりも虚血損傷から心筋を
防護する効力が高かったことを示す棒グラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ポール・ジェイ・マランゴス アメリカ合衆国92024カリフォルニア州エ ンチニタス、ラニング・スプリング・プレ イス2224番
Claims (28)
- 【請求項１】 下記分子構造： 【化１】 ［式中、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素原子
またはヒドロキシル基以外の化学的部分であって、エリ
トロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体
を、 （ａ）ヒトおよび実験動物に投与する場合、薬理学的に
許容し得かつ非毒性であり、 （ｂ）細胞培養試験において、エリトロ−ヒドロキシノ
ニルアデニンまたは９−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ
−３（Ｒ）−ノニル］アデニンよりもさらに有効に、ヒ
ト細胞に入り込み、可逆的方法でアデノシンデアミナー
ゼの細胞内酵素活性を阻害し得、 （ｃ）エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９−
［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］ア
デニンよりもさらに有効に、心筋および脳組織からなる
群から選ばれる少なくとも１タイプの哺乳類組織におい
て低酸素および虚血傷害を低減化するのに治療上有効な
ものにする部分を含む］をもつエリトロ−ヒドロキシノ
ニルアデニンの化学的修飾類似体からなる薬剤。 - 【請求項２】 エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの
化学的修飾類似体が、アデノシンデアミナーゼ阻害に関
して約１０-7〜約１０-10モルの範囲のＫｉ値を有す
る、請求項１記載の薬剤。 - 【請求項３】 エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの
化学的修飾類似体が、 （ａ）約５×１０-9モル未満である、アデノシンデアミ
ナーゼ阻害に関するＫｉ値、および （ｂ）底１０の対数値が少なくとも約２のオクタノール
／水分配係数を有する、請求項１記載の薬剤。 - 【請求項４】 Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つ
が、 ａ．ハライド原子、 ｂ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエステル結合基、および ｃ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエーテル結合基から成る群から選ばれる、請
求項１記載の薬剤。 - 【請求項５】 少なくとも一つのＲ１およびＲ２が、ア
ミン、アミド、アジド、ニトリル、ラクタム、イミンお
よびイミド部分からなる群から選択される、窒素含有部
分である、請求項１記載の薬剤。 - 【請求項６】 ノニル側鎖に結合したアデニル環構造を
含むエリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体から成る薬剤であって、前記側鎖はヒドロキシル
部分以外の少なくとも１個の化学的部分をノニル側鎖の
８番および９番炭素原子からなる群から選択される炭素
原子に側鎖に結合させることにより修飾されており、エ
リトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体
が、 （ａ）ヒトおよび実験動物に投与する場合、薬理学的に
許容し得かつ非毒性であり、 （ｂ）細胞培養試験において、エリトロ−ヒドロキシノ
ニルアデニンまたは９−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ
−３（Ｒ）−ノニル］アデニンよりもさらに有効に、ヒ
ト細胞に入り込み、可逆的方法でアデノシンデアミナー
ゼの細胞内酵素活性を阻害し得、 （ｃ）エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９−
［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］ア
デニンよりもさらに有効に、心筋および脳組織からなる
群から選ばれる少なくとも１タイプの哺乳類組織におい
て低酸素および虚血傷害を低減化するのに治療上有効で
ある、薬剤。 - 【請求項７】 エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの
化学的修飾類似体が、 （ａ）約５×１０-9モル未満である、アデノシンデアミ
ナーゼ結合に関するＫｉ値、および （ｂ）底１０の対数値が少なくとも約２のオクタノール
／水分配係数を有する、請求項６記載の薬剤。 - 【請求項８】 Ｒ１およびＲ２の少なくとも一つが、 ａ．ハライド原子、 ｂ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエステル結合基、および ｃ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエーテル結合基から成る群から選ばれる、請
求項６記載の薬剤。 - 【請求項９】 少なくとも一つのＲ１およびＲ２が、ア
ミン、アミド、アジド、ニトリル、ラクタム、イミンお
よびイミド部分からなる群から選択される、窒素含有部
分である、請求項６記載の薬剤。 - 【請求項１０】 処置を必要とする哺乳類患者において
アデノシンデアミナーゼ活性を阻害する方法であって、
患者に、下記分子構造： 【化２】 ［式中、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素原子
またはヒドロキシル基以外の化学的部分であって、エリ
トロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体
を、 （ａ）ヒトおよび実験動物に投与する場合、薬理学的に
許容し得かつ非毒性であり、 （ｂ）細胞培養試験において、エリトロ−ヒドロキシノ
ニルアデニンまたは９−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ
−３（Ｒ）−ノニル］アデニンよりもさらに有効に、ヒ
ト細胞に入り込み、可逆的方法でアデノシンデアミナー
ゼの細胞内酵素活性を阻害し得、 （ｃ）エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９−
［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］ア
デニンよりもさらに有効に、心筋および脳組織からなる
群から選ばれる少なくとも１タイプの哺乳類組織におい
て低酸素および虚血傷害を低減化するのに治療上有効な
ものにする部分を含む］を有するエリトロ−ヒドロキシ
ノニルアデニンの化学的修飾類似体の治療有効量を投与
することを含む方法。 - 【請求項１１】 患者が、アデノシンデアミナーゼ阻害
剤の非存在下でアデノシンデアミナーゼにより分解され
る有用な治療薬を投与されている、請求項１０記載の方
法。 - 【請求項１２】 患者が虚血または低酸素脳傷害に罹患
している、請求項１０記載の方法。 - 【請求項１３】 患者が、アデノシンデアミナーゼ阻害
剤非存在下でアデノシンデアミナーゼにより分解され
る、有用な治療薬を投与されている、請求項１０記載の
方法。 - 【請求項１４】 エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン
の化学的修飾類似体が、 （ａ）約５×１０-9モル未満である、アデノシンデアミ
ナーゼ阻害に関するＫｉ値、および （ｂ）底１０の対数値が少なくとも約２のオクタノール
／水分配係数を有する、請求項１０記載の方法。 - 【請求項１５】 Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１
つが、 ａ．ハライド原子、 ｂ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエステル結合基、および ｄ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエーテル結合基から成る群から選ばれる、請
求項１０記載の方法。 - 【請求項１６】 少なくとも一つのＲ１およびＲ２が、
アミン、アミド、アジド、ニトリル、ラクタム、イミン
およびイミド部分からなる群から選択される、窒素含有
部分である、請求項１０記載の方法。 - 【請求項１７】 処置を必要とする哺乳類患者において
アデノシンデアミナーゼ活性を阻害する方法であって、
患者に、ノニル側鎖に結合したアデニル環構造を含むエ
リトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体
から成り、前記側鎖はヒドロキシル部分以外の少なくと
も１個の化学的部分をノニル側鎖の８番および９番炭素
原子からなる群から選択される炭素原子に側鎖に結合さ
せることにより修飾されており、エリトロ−ヒドロキシ
ノニルアデニンの化学的修飾類似体が、 （ａ）ヒトおよび実験動物に投与する場合、薬理学的に
許容し得かつ非毒性であり、 （ｂ）細胞培養試験において、エリトロ−ヒドロキシノ
ニルアデニンまたは９−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ
−３（Ｒ）−ノニル］アデニンよりもさらに有効に、ヒ
ト細胞に入り込み、可逆的方法でアデノシンデアミナー
ゼの細胞内酵素活性を阻害し得、 （ｃ）エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９−
［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］ア
デニンよりもさらに有効に、心筋および脳組織からなる
群から選ばれる少なくとも１タイプの哺乳類組織におい
て低酸素および虚血傷害を低減化するのに治療上有効な
ものにする部分を含む］を有するエリトロ−ヒドロキシ
ノニルアデニンの化学的修飾類似体の治療有効量を投与
することを含む方法。 - 【請求項１８】 エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン
の化学的修飾類似体が、 （ａ）約５×１０-9モル未満である、アデノシンデアミ
ナーゼ阻害に関するＫｉ値、および （ｂ）底１０の対数値が少なくとも約２のオクタノール
／水分配係数を有する、請求項１７記載の方法。 - 【請求項１９】 Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１
つが、 ａ．ハライド原子、 ｂ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエステル結合基、および ｄ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエーテル結合基から成る群から選ばれる、請
求項１７記載の方法。 - 【請求項２０】 少なくとも一つのＲ１およびＲ２が、
アミン、アミド、アジド、ニトリル、ラクタム、イミン
およびイミド部分からなる群から選択される、窒素含有
部分である、請求項１７記載の方法。 - 【請求項２１】 哺乳類患者におけるアデノシンデアミ
ナーゼ活性を低減化するための医薬の製造におけるエリ
トロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体の
用途であって、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン化
学的修飾類似体が、下記分子構造： 【化３】 ［式中、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、水素原子
またはヒドロキシル基以外の化学的部分であって、エリ
トロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体
を、 （ａ）ヒトおよび実験動物に投与する場合、薬理学的に
許容し得かつ非毒性であり、 （ｂ）細胞培養試験において、エリトロ−ヒドロキシノ
ニルアデニンまたは９−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ
−３（Ｒ）−ノニル］アデニンよりもさらに有効に、ヒ
ト細胞に入り込み、可逆的方法でアデノシンデアミナー
ゼの細胞内酵素活性を阻害し得、 （ｃ）エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９−
［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］ア
デニンよりもさらに有効に、心筋および脳組織からなる
群から選ばれる少なくとも１タイプの哺乳類組織におい
て低酸素および虚血傷害を低減化するのに治療上有効な
ものにする部分を含む］を有するものである、用途。 - 【請求項２２】 エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン
の化学的修飾類似体が、 （ａ）約５×１０-9モル未満である、アデノシンデアミ
ナーゼ阻害に関するＫｉ値、および （ｂ）底１０の対数値が少なくとも約２のオクタノール
／水分配係数を有する、請求項２１記載の方法。 - 【請求項２３】 Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１
つが、 ａ．ハライド原子、 ｂ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエステル結合基、および ｃ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエーテル結合基から成る群から選ばれる、請
求項２１記載の方法。 - 【請求項２４】 少なくとも一つのＲ１およびＲ２が、
アミン、アミド、アジド、ニトリル、ラクタム、イミン
およびイミド部分からなる群から選択される、窒素含有
部分である、請求項２１記載の方法。 - 【請求項２５】 哺乳類患者におけるアデノシンデアミ
ナーゼ活性を低減化するための医薬の製造における、エ
リトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾類似体
の用途であって、エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン
の科学的修飾類似体が、ノニル側鎖に結合したアデニル
環構造を含み、前記側鎖はヒドロキシル部分以外の少な
くとも１個の化学的部分をノニル側鎖の８番および９番
炭素原子からなる群から選択される炭素原子に側鎖に結
合させることにより修飾されており、エリトロ−ヒドロ
キシノニルアデニンの化学的修飾類似体が、 （ａ）ヒトおよび実験動物に投与する場合、薬理学的に
許容し得かつ非毒性であり、 （ｂ）細胞培養試験において、エリトロ−ヒドロキシノ
ニルアデニンまたは９−［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ
−３（Ｒ）−ノニル］アデニンよりもさらに有効に、ヒ
ト細胞に入り込み、可逆的方法でアデノシンデアミナー
ゼの細胞内酵素活性を阻害し得、 （ｃ）エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンまたは９−
［２（Ｓ）,９−ジヒドロキシ−３（Ｒ）−ノニル］ア
デニンよりもさらに有効に、心筋および脳組織からなる
群から選ばれる少なくとも１タイプの哺乳類組織におい
て低酸素および虚血傷害を低減化するのに治療上有効で
ある、用途。 - 【請求項２６】 エリトロ−ヒドロキシノニルアデニン
の化学的修飾類似体が、 （ａ）約５×１０-9モル未満である、アデノシンデアミ
ナーゼ結合に関するＫｉ値、および （ｂ）底１０の対数値が少なくとも約２のオクタノール
／水分配係数を有する、請求項２５記載の方法。 - 【請求項２７】 Ｒ１およびＲ２の少なくとも一つが、 ａ．ハライド原子、 ｂ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエステル結合基、および ｃ．エリトロ−ヒドロキシノニルアデニンの化学的修飾
類似体を、約１０-7〜約１０-10モルの範囲内に存する
アデノシンデアミナーゼ阻害に関するＫｉ値を有するも
のにし得るエーテル結合基から成る群から選ばれる、請
求項２５記載の方法。 - 【請求項２８】 少なくとも一つのＲ１およびＲ２が、
アミン、アミド、アジド、ニトリル、ラクタム、イミン
およびイミド部分からなる群から選択される、窒素含有
部分である、請求項２５記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US59979096A | 1996-02-12 | 1996-02-12 | |
| US08/599790 | 1996-02-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1081685A true JPH1081685A (ja) | 1998-03-31 |
Family
ID=24401102
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2769197A Pending JPH1081685A (ja) | 1996-02-12 | 1997-02-12 | 高い親油性および抗虚血特性を有するエリトロ−ヒドロキシノニルアデニン類似体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1081685A (ja) |
-
1997
- 1997-02-12 JP JP2769197A patent/JPH1081685A/ja active Pending
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