JPH11286455A - 骨髄異形成症候群治療薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】マトリックスメタロプロテアーゼ阻害薬、ＴＮ
Ｆ−α転換酵素阻害薬および／またはＦａｓリガンドの
可溶化抑制薬を有効成分とする骨髄異形成症候群（ＭＤ
Ｓ）治療薬。 【効果】マトリックスメタロプロテアーゼ阻害薬、ＴＮ
Ｆ−α転換酵素阻害薬またはＦａｓリガンドの可溶化抑
制薬は、ＭＤＳ患者の骨髄細胞のアポトーシスを強く抑
制するので、これらを有効成分とする薬剤はＭＤＳ治療
薬として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】マトリックスメタロプロテア
ーゼ（以下、ＭＭＰ）とは、結合組織マトリックスを構
成するタンパク成分を分解する酵素であり、ＭＭＰを阻
害する化合物は、関節炎、骨粗鬆症等の結合組織疾患の
治療剤（ＭＭＰ阻害薬）として開発が期待されている。

【０００２】一方、ＭＭＰと類似のメタロプロテアーゼ
が生体内で種々のプロセッシングに関与していることが
明らかにされてきた。

【０００３】例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）（17
ｋＤ）が細胞表面に存在する前駆体（26ｋＤ）からある
種のメタロプロテアーゼ（ＴＮＦ−α転換酵素、ＴＡＣ
Ｅ）により切り出されて生成することが明らかにされた
〔Mohler他、Nature、370、218-220(1994)〕。

【０００４】また、アポトーシスについて、Ｆａｓのリ
ガンド（ＦａｓＬ）がある種のメタロプロテアーゼ（Ｆ
ａｓリガンド可溶化酵素）によって可溶化されて可溶性
ＦａｓＬとなり、Ｆａｓと結合した結果細胞死が引き起
こされるというメカニズムが提案されている〔Kayagaki
他、J.Exp.Med.、182,1777-1783(1995)〕。

【０００５】一方、骨髄異形成症候群（以下、ＭＤＳ）
とは、原因不明の造血幹細胞レベルの障害に起因する骨
髄造血細胞の成熟障害がもととなり、骨髄細胞の形態異
常（ミエロディスプラシア；myelodysplasia）や骨髄低
形成に因らない血球減少を来す疾患である。ＭＤＳの予
後は非常に悪く平均生存率は診断から2年程度である。

【０００６】本発明は、前記のＭＭＰ阻害薬、ＴＡＣＥ
阻害薬および／またはＦａｓリガンド可溶化酵素の阻害
薬を有効成分とするところのＭＤＳ治療薬に関する。

【０００７】

【従来の技術】ＭＤＳの治療は赤血球減少に伴う貧血、
血小板減少に伴う出血傾向、あるいは顆粒球減少に伴う
感染の防御を目的として、血球減少の改善を目指した治
療が行われている。プレドニゾロン、蛋白同化ホルモ
ン、ビタミンＤ3、造血因子（サイトカイン）などの投
与が血球減少の改善を目的として試みられているが、ほ
とんど効果が認められていない（小寺良尚、斉藤英彦監
修、造血幹細胞移植マニュアル、日本医学館、1995年、
30ページ）。

【０００８】最近、ＭＤＳの造血障害が骨髄細胞のアポ
トーシスに起因するとの考え方が注目されている。実
際、アポトーシスを引き起こすＦａｓリガンドおよびそ
の受容体がＭＤＳ患者の骨髄細胞で増加しているとの報
告がある〔Blood、88(3)、1122(1996)〕。また、アポト
ーシスを誘導することが知られているＴＮＦ−α、イン
ターロイキン（ＩＬ１β）等のサイトカインがＭＤＳ患
者で増加していることも報告されている〔Raza他、Int.
J.Hematol.、63、265(1996)〕。かかる背景から、アポ
トーシスの抑制剤をＭＤＳ治療に用いる検討がなされて
おり、ラザらは、ペントキシフィリン（前記サイトカイ
ンのシグナル伝達阻害剤）をＭＤＳ患者に投与して一定
の効果を認めている〔Raza他、Blood、88(Supple)、231
0(1996)〕。また、アポトーシス抑制作用を有するポリ
ペプチドをＭＤＳ治療薬として用いる提案もなされてい
る〔ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９７／６２５５号〕。

【０００９】一方、ＭＭＰ阻害薬がＦａｓリガンドの可
溶化を抑制することから、過度なＴ細胞の活性化に起因
する疾患、例えば肝炎、移植片対宿主反応（ＧＶＨ
Ｄ）、自己免疫疾患等に対して、ＭＭＰ阻害薬の治療用
途（Ｆａｓリガンド可溶化抑制薬）が出願されている
（ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９７／９０６６号）。また、
いくつかのメタロプロテアーゼについて、ＴＡＣＥ阻害
薬、即ち、過剰なＴＮＦ−αにより媒介される疾患（例
えば炎症、急性感染症、ショック状態、ＧＶＨＤ等）の
治療剤としての用途出願もなされている〔ＰＣＴ国際公
開公報ＷＯ９４／１０９９０〕。しかしながら、ＭＤＳ
患者の骨髄細胞のアポトーシスを抑制するメタロプロテ
アーゼ阻害薬は全く知られていない。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】ＭＤＳ患者の骨髄細胞
は、健常人の骨髄細胞に比して脆弱で死滅しやすい事が
知られている。即ち、ＭＤＳ患者の骨髄細胞を取り出し
24時間培養すると、６０％程度がアポトーシスを起こし
て死滅することが観察され、このことがＭＤＳにおける
血球減少の一因と考えられる。本発明の目的は、ＭＤＳ
に伴う血球減少を改善する薬物を見い出し、ＭＤＳ治療
薬を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは種々検討し
た結果、下記に示す化合物が、培養したＭＤＳ患者骨髄
細胞のアポトーシスを強く抑制することを見い出し本発
明を完成した。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明は、ＭＭＰ阻害薬、ＴＡＣ
Ｅ阻害薬および／またはＦａｓリガンド可溶化抑制薬を
有効成分とする。本発明において使用できるＭＭＰ阻害
薬、ＴＡＣＥ阻害薬またはＦａｓリガンド可溶化抑制薬
としては、例えば下記の公報に記載されたメタロプロテ
アーゼ阻害薬を例示することができる。

【００１３】特開平７−１０１９２５号 米国特許公報４７４３５８７号 国際公開公報ＷＯ９２／０９５５６号 同公報ＷＯ９３／０９０９０号 同公報ＷＯ９３／２４４４９号 同公報ＷＯ９５／０４０３３号 欧州特許公報４８９５７９号 同公報２３６８７２号 同公報４９７１９２号 同公報５７５８４４号 国際公開公報ＷＯ９０／０５７１９号 同公報ＷＯ９４／２１６２５号 同公報ＷＯ９４／２４１４０号 同公報ＷＯ９４／０２４４７号 特開平６−１４５１４８号 特開平７−１５７４７０号 国際公開公報ＷＯ９７／２０８２４号 同公報ＷＯ９７／１８１９４号 同公報ＷＯ９６／３３１７２号 同公報ＷＯ９６／１５０９６号 同公報ＷＯ９５／１３２８９号 特開平９−１８８６３１号 特開平７−２９１９３８号 特開平６−２５６２９３号 中でも好ましいのが下記の化合物である。

【００１４】［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２
（Ｒ）−イソブチル−３（Ｓ）−メチルサクシニル］−
Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（特開平７−
１０１９２５号） ［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチ
ル−３（Ｓ）−（２−チエニルチオメチル）サクシニ
ル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド（国際
公開公報ＷＯ９０／０５７１９号） ３（Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−４−（４−（（ピリド−４
−イル）オキシ）ベンゼンスルホニル）−２，２−ジメ
チル−テトラヒドロ−２Ｈ−１，４−チアジン−３−カ
ルボキサミド（国際公開公報ＷＯ９７／２０８２４号） Ｎ²−［３（Ｓ）−ヒドロキシ−４−（Ｎ−ヒドロキシ
アミノ）−２（Ｒ）−イソブチルサクシニル］−Ｌ−te
rt−ロイシン−Ｎ¹−メチルアミド（国際公開公報ＷＯ
９４／０２４４７号） 本発明のＭＤＳ治療薬においては、ＦａｓＬの可溶化抑
制薬を有効成分とすることもできる。ＦａｓＬの可溶化
抑制薬としては、例えば、ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９７
／９０６６号に記載された化合物を使用することができ
る。

【００１５】中でも好ましいのが下記の化合物である。

【００１６】［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２
（Ｒ）−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−３
−（５，６，７，８−テトラヒドロ−１−ナフチル）ア
ラニン−Ｎ−メチルアミド ［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−フェニル
プロピルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メ
チルアミド 上記に掲げたＭＭＰ阻害薬、ＴＡＣＥ阻害薬またはＦａ
ｓＬ可溶化抑制薬はいずれも各公報に記載された方法に
よって製造することが可能であり、いずれかの薬剤を単
独で、または二種以上の薬剤を組み合わせて使用するこ
とも可能である。

【００１７】ＭＤＳは、不応性貧血（ＲＡ）、鉄芽球を
伴う不応性貧血（ＲＡＲＳ）、芽球の増加を伴う不応性
貧血（ＲＡＥＢ）、白血病になりかかっているＲＡＥＢ
（ＲＡＥＢ−ｔ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭｏ
Ｌ）の5つの疾患群に分類されるが、本発明のＭＤＳ治
療薬は特にＲＡ、ＲＡＲＳおよびＲＡＥＢ等で認められ
る血球減少症に対して好適に使用されうる。

【００１８】本発明のＭＤＳ治療薬は経口または非経口
で患者に投与される。投与量は、対象とされる症候群、
投与方法、患者の年齢、体重または症状等により異なる
が、一般に、有効成分であるＭＭＰ阻害薬、ＴＡＣＥ阻
害薬又はＦａｓリガンド可溶化抑制薬に換算して１〜６
００ｍｇ／日の範囲が適当であり、これを１日１回、ま
たは１日２〜４回に分けて投与する。

【００１９】剤形としては、経口投与または非経口投与
の投与形態に応じて錠剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル
剤、注射剤、リポソーム等が使用される。

【００２０】かかる製剤は常法によって製造され、錠
剤、顆粒剤、細粒剤は、有効成分であるＭＭＰ阻害薬、
ＴＡＣＥ阻害薬および／またはＦａｓリガンド可溶化抑
制薬と通常の医薬添加物、例えば、乳糖、合成ケイ酸ア
ルミニウム、ブドウ糖、マンニトール、結晶セルロー
ス、でんぷん等の賦形剤、カルボキシメチルセルロー
ス、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マ
グネシウム、タルク等の滑沢剤、あるいはヒドロキシメ
チルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒド
ロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリド
ン等の結合剤とを混合して製造され、カプセル剤は上記
の顆粒剤、散剤を適宜カプセルに充填して製造される。

【００２１】注射剤は、有効成分であるＭＭＰ阻害薬、
ＴＡＣＥ阻害薬および／またはＦａｓリガンド可溶化抑
制薬を滅菌水に溶解または懸濁し、これにマンニトー
ル、塩化ナトリウム、グルコース、ソルビット、グリセ
ロール、キシリトール、フルクトース、マルトース、マ
ンノース等の等張化剤を加え、要すれば更に亜硫酸ナト
リウム、アルブミン等の安定化剤およびベンジルアルコ
ール等の防腐剤を加えて無菌的にアンプルまたはバイヤ
ルに封入することによつて製造される。

【００２２】

【発明の効果】本発明のＭＤＳ治療薬は培養した骨髄細
胞のアポトーシスを強く抑制し（下記試験例参照）、特
に毒性は認められないのでＭＤＳ治療薬として有用であ
る。 ＜試験例＞ １．供試化合物 化合物ａ：［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）
−イソブチル−３（Ｓ）−メチルサクシニル］−Ｌ−フ
ェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（特開平７−１０１
９２５号） 化合物ｂ：［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）
−イソブチル−３−メチルサクシニル］−Ｌ−３−
（５，６，７，８−テトラヒドロ−１−ナフチル）アラ
ニン−Ｎ−メチルアミド（ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９７
／９０６６号） 化合物ｃ：［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）
−フェニルプロピルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリシ
ン−Ｎ−メチルアミド（ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９７／
９０６６号） 化合物ｄ：Ｎ²−［３（Ｓ）−ヒドロキシ−４−（Ｎ−
ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチルサクシニ
ル］−Ｌ−tert−ロイシン−Ｎ¹−メチルアミド（国際
公開公報ＷＯ９４／０２４４７号） 化合物ｅ：３（Ｓ）−Ｎ−ヒドロキシ−４−（４−
（（ピリド−４−イル）オキシ）ベンゼンスルホニル）
−２，２−ジメチル−テトラヒドロ−２Ｈ−１，４−チ
アジン−３−カルボキサミド（国際公開公報ＷＯ９７／
２０８２４号）

【００２３】２．試験方法 ＭＤＳ患者の骨髄より骨髄穿刺針を用いて骨髄液をヘパ
リン存在下に採取し、比重遠心法により骨髄有核細胞を
分離して、１０％牛胎児血清添加RPMI-1640培養液（抗
生物質としてペニシリンとストレプトマイシンを含有す
る）に１×１０⁵／ｍＬの濃度で浮遊させた。供試化合
物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で１０ｍＭの濃
度に溶解し培養液にて希釈して、最終濃度が１０又は２
０μＭの濃度になるよう調製して添加した。培養は炭酸
ガス培養器（５％炭酸ガス、９５％室内大気）を用いて
おこなった。培養１８時間後に浮遊細胞用遠心器を用い
てサイトスピン塗沫標本を作製し、十分乾燥させた後、
ベーリンガーマンハイム社製細胞死検出キット（in sit
u cell death detection kit）を用いてエンドラベリン
グ法（in situ end labelling法）でアポトーシス細胞
を染色し、光学顕微鏡下にアポトーシス細胞の判定をし
た。すべての実験において、少なくとも５００個以上の
細胞を観察し、薬物無添加群に対する供試化合物添加群
のアポトーシス細胞の割合（％）を算定した。アポトー
シス誘導に対する抑制効果はペアードｔ−テスト（pair
ed t test）にて判定した。 ３．試験結果 試験結果を表１に示す。

【００２４】

【表１】

【００２５】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に
説明する。 実施例１錠剤の製造 以下の通り、［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２
（Ｒ）−イソブチル−３（Ｓ）−メチルサクシニル］−
Ｌ−フェニルグリシン−Ｎ−メチルアミド（化合物ａ）
１００ｍｇを含有する錠剤を得る。 ［操作］主薬、コーンスターチ及び微結晶セルロースを
混合し、これに水５０重量部に溶解したヒドロキシプロ
ピルセルロースを加えて充分練合する。この練合物を篩
に通して顆粒上に造粒して乾燥した後、得られた顆粒に
ステアリン酸マグネシウムを混合し１錠２５０ｍｇに打
錠する。

【００２６】実施例２顆粒剤の製造 以下の通り、Ｎ²−［３（Ｓ）−ヒドロキシ−４−（Ｎ
−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチルサクシニ
ル］−Ｌ−tert−ロイシン−Ｎ¹−メチルアミド（化合
物ｂ）２００ｍｇを含有する顆粒剤を得る。 ［操作］主薬、乳糖及びコーンスターチを混合し、これ
に水１２０重量部に溶解したヒドロキシプロピルセルロ
ースを加えて充分練合する。この練合物を２０メッシュ
の篩に通して造粒し、乾燥して整粒後５００ｍｇ宛を分
包して顆粒剤を得る。

【００２７】実施例３カプセル剤の製造 以下の通り、１カプセル中にＮ²−［３（Ｓ）−ヒドロ
キシ−４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソ
ブチルサクシニル］−Ｌ−tert−ロイシン−Ｎ¹−メチ
ルアミド（化合物ｂ）１００ｍｇを含有するカプセル剤
を得る。 ［操作］上記の各成分を充分混合して、この混合末の２
００ｍｇ宛をカプセルに充填してカプセル剤を得る。

【００２８】実施例４注射剤の製造 ［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イソブチ
ル−３（Ｓ）−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニルグリ
シン−Ｎ−メチルアミド０．５重量部およびソルビット
５重量部の混合物に注射用蒸留水を加えて溶解し、１０
０重量部とし、この水溶液をメンブランフィルターで濾
過する。濾液を窒素置換したアンプルに５ｇずつ充填
し、溶閉後、１２０℃で１５分間滅菌処理して１アンプ
ル中に［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２（Ｒ）−イ
ソブチル−３（Ｓ）−メチルサクシニル］−Ｌ−フェニ
ルグリシン−Ｎ−メチルアミド２５ｍｇを含有する注射
剤を得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 有村 光生 鹿児島市下荒田４丁目32番18号（森永方１ Ｆ)

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】マトリックスメタロプロテアーゼ阻害薬、
   ＴＮＦ−α転換酵素阻害薬および／またはＦａｓリガン
   ドの可溶化抑制薬を有効成分とする骨髄異形成症候群治
   療薬。
2. 【請求項２】マトリックスメタロプロテアーゼ阻害薬を
   有効成分とする請求項１の骨髄異形成症候群治療薬。
3. 【請求項３】ＴＮＦ−α転換酵素阻害薬を有効成分とす
   る請求項１の骨髄異形成症候群治療薬。
4. 【請求項４】Ｆａｓリガンドの可溶化抑制薬を有効成分
   とする請求項１の骨髄異形成症候群治療薬。