JPH11506904A

JPH11506904A - Ｒａｇｅ腫瘍拒絶抗原

Info

Publication number: JPH11506904A
Application number: JP8528658A
Authority: JP
Inventors: ゴーグレ，ベアトリッス; ヴェン・デン・エインデ，ブノア; シュリール，ペーター; ブロアーンストリン，ナタリー; ブン−ファレール，ティエリー
Original assignee: ルートヴィヒ・インスティチュート・フォー・キャンサー・リサーチ; ライデン・ユニバーシティ
Priority date: 1995-03-21
Filing date: 1996-03-21
Publication date: 1999-06-22
Also published as: AU5429896A; CA2211448A1; WO1996029409A2; NZ306122A; AU705768B2; EP0815229A2; WO1996029409A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体族、それらの腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする核酸、腫瘍拒絶抗原ペプチドまたはその前駆体、およびそれに関連する抗体を記載する。ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体の発現を特色とする状態を診断および処置する方法および生成物も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原発明の分野本発明は、腫瘍拒絶抗原およびその前駆体をコードする核酸分子に関する。腫瘍拒絶抗原前駆体はプロセシングされて、特にＨＬＡ分子が提示する少なくとも１種類の腫瘍拒絶抗原となる。これらの核酸分子、それらの分子がコードするタンパク質、およびそれに由来するペプチド、ならびに関連の抗体および細胞毒性リンパ球は、特に診断および療法用として有用である。発明の背景哺乳動物の免疫系が異質または異種の物質を認識して反応する過程は複雑である。この系の重要な１面はＴ細胞の応答である。Ｔ細胞は、他の細胞上にある、ペプチドとヒト白血球抗原（“ＨＬＡ”）または主要組織適合性遺伝子複合体（ “ＭＨＣ”）と呼ばれる分子との細胞表面複合体を介して他の細胞を認識し、それらと相互作用することができる。これらのペプチドは、ＨＬＡ／ＭＨＣ分子をも提示する細胞によりプロセシングされた、さらに大型の分子に由来する。Male et al.,Advanced Immunology（J.P.リピンコット・カンパニー、1987）、特に6- 10章参照。Ｔ細胞とＨＬＡ／ペプチド複合体との相互作用には制限があり、ＨＬＡ分子とペプチドの特定の複合体には特異的Ｔ細胞が要求される。特異的Ｔ細胞が存在しない場合、その相手である複合体が存在してもＴ細胞応答はない。Ｔ細胞は存在するが特定の複合体が存在しない場合にも、応答はない。この機構は、異物に対する免疫系の応答、自己免疫病理、および細胞異常に対する応答に関与する。Ｔ細胞が異物を認識する機構は癌にも関与すると指摘されている。自己由来の黒色腫に指向性である多数の細胞溶解性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）クローンについての記載がある。幾つかの例では、これらのクローンが認識する抗原が解明されている。国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ９２／０４３５４号（１９９２年１１月２６日公開）には、“ＭＡＧＥ”族、すなわち腫瘍特異性遺伝子族が開示される。これらの遺伝子の発現生成物はプロセシングされてペプチドとなり、これらが細胞表面に発現する。これが特異的ＣＴＬによる腫瘍細胞溶解をもたらすことができる。これらの遺伝子は“腫瘍拒絶抗原前駆体”、すなわち“ＴＲＡＰ”分子をコードするといわれ、それに由来するペプチドは“腫瘍拒絶抗原”、すなわち“ＴＲＡ”と呼ばれる。この遺伝子族のより詳細な情報については、Traversari et al.,Immunogenetics 35:145(1992)；van der Bruggen et al.,Science 254:1643 (1991)を参照されたい。米国特許第５，３４２，７７４号も参照されたい。米国特許第５，４０５，９４０号には、ＨＬＡ−Ａ１分子が提示するＭＡＧＥノナペプチドが教示される。特定のＨＬＡ分子に対して特定のペプチドが特異性をもつことが知られているとすれば、ある特定のペプチドは一つのＨＬＡ分子に結合し、他には結合しないと予想するはずである。異なる個体は異なるＨＬＡ表現型をもつので、このことは重要である。その結果、特定のペプチドを特定のＨＬＡ分子の相手として確認することは診断および療法に関連はあるが、これらはその特定のＨＬＡ表現型をもつ個体に関係があるにすぎない。細胞異常は１つの特定のＨＬＡ表現型に限定されず、ターゲティング療法には問題となる異常細胞の表現型についてある程度の知識が要求されるので、この領域ではさらに研究の必要がある。ＭＡＧＥ発現生成物がプロセシングされて第２のＴＲＡになることも見出された。この第２のＴＲＡはＨＬＡ−Ｃクローン１０の分子により提示される。したがって、あるＴＲＡＰが複数のＴＲＡを生成する可能性がある。国際特許出願公開第ＷＯ９４／１４４５９号（１９９４年７月７日公開）には、チロシナーゼが腫瘍拒絶抗原前駆体として記載される。この参考文献には、ある正常細胞（たとえばメラニン細胞）により産生された分子が腫瘍細胞中でプロセシングされて、ＨＬＡ−Ａ２分子が提示する腫瘍拒絶抗原を生じることが開示される。国際特許出願公開第ＷＯ９４／２１１２６号（１９９４年９月２９日公開）には、チロシナーゼ由来でない第２のＴＲＡをＨＬＡ−Ａ２分子が提示すると教示される。このＴＲＡはＴＲＡＰに由来するが、非ＭＡＧＥ遺伝子によりコードされる。この開示は、特定のＨＬＡ分子が異なる供給源に由来するＴＲＡを提示する可能性のあることを示す。国際特許出願公開第ＷＯ９５／００１５９号（１９９５年１月５日公開）には、非関連腫瘍拒絶抗原前駆体であるいわゆる“ＢＡＧＥ”前駆体が記載される。このＴＲＡＰから誘導されるＴＲＡも記載される。それらはＭＨＣ分子であるＨＬＡ−Ｃクローン１０と複合体を形成する。国際特許出願公開第ＷＯ９５／０３４２２号（１９９５年２月２日公開）には、他の非関連腫瘍拒絶抗原前駆体であるいわゆる“ＧＡＧＥ”前駆体が記載される。ＧＡＧＥ前駆体はＢＡＧＥまたはＭＡＧＥ族とは関連がない。前記の報文、特許および特許出願明細書により示される研究は、大部分がＭＡＧＥ族遺伝子、ＢＡＧＥ遺伝子およびＧＡＧＥ遺伝子に関する。これらの遺伝子は多数の腫瘍に発現するが、精巣以外の正常組織中では完全に沈黙している。腎臓がんには全く発現しない。他の遺伝子族である“ＲＡＧＥ”遺伝子が他の腫瘍拒絶抗原およびその前駆体をコードすることが今回見出された。ＲＡＧＥ遺伝子は、ＭＡＧＥ族遺伝子、ＢＡＧＥ遺伝子またはＧＡＧＥ遺伝子との相同性を示さない。ＲＡＧＥ遺伝子は腎腫瘍細胞中に発現するが、正常な腎細胞中には発現しない。ＲＡＧＥ遺伝子は特定の他の腫瘍細胞タイプにも発現する。本発明を以下に詳細に開示する。発明の概要本発明は、単離した核酸分子、それらの分子を含む発現ベクター、それらの分子でトランスフェクションした宿主細胞を提供する。本発明は単離したタンパク質およびペプチド、ならびにそれらのタンパク質およびペプチドに対する抗体をも提供する。前記の分子を含むキットもさらに提供される。ＲＡＧＥＴＲＡまたはＴＲＡＰの発現を特色とする状態の診断または処置にこれらを使用できる。本発明の１態様によれば、単離したポリペプチドが提供される。これは少なくとも配列番号：４０のアミノ酸配列を含み、ＲＡＧＥＴＲＡである。好ましい態様においては、単離したポリペプチドは少なくとも配列番号：４３のアミノ酸配列を含む。他の態様においては、単離したポリペプチドは本質的に配列番号：４０もしくは配列番号：４３のアミノ酸配列からなるか、またはその配列のみであってもよい。本発明の他の態様によれば、単離した核酸分子が提供される。この分子は配列番号：４０および配列番号：４３よりなる群から選択されるポリペプチドをコードする。単離した核酸は配列番号:４４を含むことができ、好ましくは配列番号: ４５を含む。他の態様においては、単離した核酸は本質的に配列番号：４４もしくは配列番号：４５からなるか、またはその配列のみであってもよい。本発明の他の態様によれば、単離した核酸分子であって、配列番号：１、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：２３および／または配列番号：３５の核酸配列からなる分子に緊縮条件下でハイブリダイズし、かつＲＡＧＥＴＲＡまたはＴＲＡＰをコードする核酸分子が提供される。ただし単離した核酸分子はＭＡＧＥ、ＧＡＧＥまたはＢＡＧＥＴＲＡまたはＴＲＡＰをコードしない。好ましい態様においては、単離した核酸分子はｍＲＮＡ分子またはｃＤＮＡ分子である。１態様においては、単離した核酸分子は配列番号：１の２０４〜３２６、配列番号：１の３１３〜３９９、配列番号：１の４４４〜６６５、配列番号：１２の２７３〜４４９、配列番号：１２の２１７〜２７６、配列番号：１３の１８５〜２４７、および配列番号：１４の２６９〜８３２よりなる群から選択されるヌクレオチドに相補的である。他の態様においては、単離した核酸は本質的に配列番号：１、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：２３、配列番号：３５、配列番号：４４および／または配列番号：４５からなる。本発明の他の態様によれば、発現ベクター、およびそれらの発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。これらの発現ベクターは、前記の単離した核酸分子のいずれか１つまたはそれ以上を含む。１態様においては、発現ベクターは配列番号：４４または４５の単離した核酸を含む。本発明による他の発現ベクターは、前記の単離した核酸、および本発明のＴＲＡを細胞溶解性Ｔ細胞に提示しうるＨＬＡ分子をコードする核酸を含む。１例はＨＬＡ−Ｂ７である。宿主細胞はＨＬＡ分子、たとえばＨＬＡ−Ｂ７を、内因性発現することができる。本発明の他の態様によれば、配列番号：１、配列番号：１２、配列番号：１３もしくは配列番号：１４のユニークフラグメントである単離した核酸分子、またはそれらの相補体が提供される。これらのユニークフラグメントは、前記核酸を確認し、または選択的に増幅するために用いられる。前記核酸の発現を確認するためにこれらのユニークフラグメントを用いる場合、これらのユニークフラグメントは好ましくは２００〜１３１０ヌクレオチドの長さ、２００〜１２３４ヌクレオチドの長さ、２００〜２０５０ヌクレオチドの長さ、または２００〜１１６７ヌクレオチドの長さである。前記核酸分子を増幅するためにこれらのユニークフラグメントを用いる場合、ユニークフラグメントは１２〜３２ヌクレオチドの長さである。増幅方法が核酸分子を同定するために用いる方法を除外しないことは自明であろう。本発明の他の態様によれば、ＴＲＡまたはＴＲＡＰの発現の存在を検出するためのキットが提供される。これらのキットは、別個の容器中に単離し、かつ単一パッケージに包装した、２以上の前記分子を用いる。このようなキットの１つには一対の増幅プライマーが供給され、その一対のそれぞれは、本質的に配列番号：１もしくはその相補体、配列番号：１２もしくはその相補体、配列番号：１３もしくはその相補体、または配列番号：１４もしくはその相補体の１２〜３２ヌクレオチドの長さの連続セグメントからなり、それらの連続セグメントはオーバーラップしない。好ましくは増幅プライマーはＰＣＲプライマーであり、その際一方のプライマーはワトソン鎖の連続セグメントであり、他方のプライマーはクリック鎖の連続セグメントの相補体である。特定の態様においては、ＲＡＧＥ族の１つのみ、たとえばＲＡＧＥ１のみ、またはＲＡＧＥ１のみの一部などを選択的に増幅および／または同定するようにプライマーを構築および調整する。たとえば対の一方はＲＡＧＥ１遺伝子およびその対立変異体中では連続するが、ＲＡＧＥ２、３または４遺伝子中では連続しない。より詳細には一例として、第１プライマーは本質的に配列番号：５０〜５７のいずれか一つよりなる核酸であり、第２プライマーは第１プライマーの選択に応じて本質的に配列番号：１またはその相補体の１２〜３２ヌクレオチドの長さの連続セグメントからなる。本発明による他のキットは、ＲＡＧＥＴＲＡＰまたはＲＡＧＥＴＲＡを含む分子、およびそのＴＲＡと複合体を形成しかつ細胞溶解性Ｔ細胞応答を刺激するＨＬＡ提示分子をコードする、単離した別個の核酸分子部分を含む発現キットである。このようなキットの１つは、配列番号：４０または配列番号：４３のペプチドをコードする核酸、およびＨＬＡ−Ｂ７をコードする核酸分子を含む。本発明による他のキットは、配列番号：１、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：２３および／または配列番号：３５の核酸配列からなる分子に緊縮条件下でハイブリダイズし、かつＲＡＧＥＴＲＡＰをコードする単離した核酸分子の別個の部分、ならびにＨＬＡ−Ｂ７をコードする核酸分子を含む発現キットである。本発明の他の態様によれば、前記分子およびその有用なフラグメントによりコードされる単離したＴＲＡＰが提供される。それらの分子に対する、およびＨＬＡとＲＡＧＥＴＲＡの複合体に対する抗体も提供される。本発明の他の態様によれば、ＲＡＧＥＴＲＡＰの発現を特色とする障害の診断方法が提供される。１方法はＲＡＧＥＴＲＡＰがプロセシングされて、ＨＬＡ分子と複合体を形成するＲＡＧＥ由来ＴＲＡになることに関係する。この方法は、対象から単離した生物学的試料を、上記複合体を結合する物質と接触させ、次いで複合体と物質の結合をその障害の決定因子として測定することを含む。１態様においては、この方法はＲＡＧＥＴＲＡとＨＬＡ−Ｂ７の複合体への上記物質の結合を測定する。この態様においては、ＲＡＧＥＴＲＡを配列番号：４０のペプチドおよび配列番号：４３のペプチドよりなる群から選択できる。他の方法は、対象から単離した生物学的試料をＲＡＧＥ核酸またはその発現生成物に特異的な物質と接触させることを含む。次いでこの物質と核酸またはその発現生成物との相互作用を測定するが、この相互作用は障害を指示するものである。この物質は、配列番号：１、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：２３および配列番号：３５よりなる群から選択される核酸配列からなる分子に緊縮条件下でハイブリダイズし、かつＴＲＡＰをコードする核酸であってもよい。ただし単離した核酸分子はＭＡＧＥ、ＧＡＧＥまたはＢＡＧＥＴＲＡＰをコードしない。他の方法は、対象から単離した生物学的試料をＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原性ペプチドに特異的な物質と接触させ、次いでこのペプチドと物質の相互作用を障害の決定因子として測定することを含む。１態様においては、ペプチドは配列番号：４０および配列番号：４３よりなる群から選択される。本発明の他の態様によれば、単離した生物学的調製物が提供される。この調製物は、ＨＬＡ分子とＲＡＧＥＴＲＡとの複合体に特異的な、細胞溶解性Ｔ細胞から本質的になる。１態様においては、細胞溶解性Ｔ細胞はＨＬＡ−Ｂ７分子とＴＲＡの複合体に特異的である。この態様においては、抗原は配列番号：４０のペプチドおよび配列番号：４３のペプチドよりなる群から選択されるペプチドでもよい。したがって本発明の他の態様は、Ｔ細胞集団をＨＬＡ分子とＲＡＧＥＴＲＡとの複合体に特異的な細胞溶解性Ｔ細胞で選択的に富化する方法を含む。この方法は、細胞溶解性Ｔ細胞前駆体を含む単離したＴ細胞集団を、この単離したＴ細胞集団を細胞溶解性Ｔ細胞で選択的に富化するのに十分な量の、ＲＡＧＥＴＲＡとＨＬＡ提示分子との複合体を提示する物質と接触させることを含む。好ましい１態様においては、ＨＬＡ分子はＨＬＡ−Ｂ７であり、ＲＡＧＥＴＲＡは配列番号：４０のアミノ酸からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸からなるペプチドよりなる群から選択される。本発明のさらに他の態様は、ＲＡＧＥＴＲＡまたはＴＲＡＰの発現を特色とする障害を伴う対象を処置する方法である。このような１方法は、この処置を必要とする対象に、対象においてＨＬＡとＲＡＧＥＴＲＡの複合体の存在を選択的に高めるのに有効な量の物質を投与して、障害を軽減するのに十分な、前記複合体と反応性である細胞溶解性Ｔ細胞の応答を生じるさせることを含む。このような物質には、ＲＡＧＥＴＲＡＰ、およびＨＬＡとＲＡＧＥＴＲＡの複合体を発現する組換え細胞が含まれる。１態様においては、このような物質にはＨＬＡ−Ｂ７と配列番号：４０のペプチドおよび配列番号：４３のペプチドからなるペプチドとの複合体を発現する細胞が含まれる。他の方法は、この処置を必要とする対象に、障害を軽減するのに十分な量の自己由来の細胞溶解性Ｔ細胞を投与するものであり、その際、自己由来の細胞溶解性Ｔ細胞はＨＬＡ分子とＲＡＧＥＴＲＡの複合体に特異的である。前記のＴＲＡＰまたはＴＲＡをコードする単離した核酸に関して、本発明はコドン配列が遺伝子コードの縮重のみによって単離核酸と異なる縮重核酸、または前記核酸の相補体をも包含する。本発明は、前記分子すべての機能性変異体および均等物をも包含する。本発明はまた、腫瘍細胞中、特に腎腫瘍細胞中で発現するが、正常な腎細胞中では発現しないＴＲＡＰおよびＴＲＡを見出し、単離するものである。他の多数の細胞タイプついて他のＴＲＡＰおよびＴＲＡが知られかつ確認されているにもかかわらず、本発明以前には本明細書に記載するタイプのＴＲＡＰおよび／またはＴＲＡは腎癌について知られておらず、確認されてもいない。意外にも、本発明のＲＡＧＥ−１遺伝子は５７例中１例の腎癌で発現したにすぎず、特定の細胞毒性Ｔ細胞クローンに対する最良の抗原性ペプチドは、通常のノナマーペプチドではなくデカマーであることが見出された。したがって本発明の他の態様によれば、本発明はＴＲＡＰ、ＴＲＡ、ならびにＴＲＡＰおよびＴＲＡをコードする核酸であって、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥおよびＧＡＧＥのＴＲＡＰ、ＴＲＡおよび核酸でなく、腫瘍細胞中、特に腎腫瘍細胞中で発現するが、正常な腎細胞中では発現せず、かつ以下の方法で得られ得るものを提供する：患者から腎腫瘍細胞を単離し、患者からリンパ球を単離し、インビボで腎腫瘍細胞をリンパ球と接触させ、腎腫瘍細胞と反応性であるリンパ球のうちから細胞毒性Ｔ細胞クローンを単離し、腎腫瘍細胞のｍＲＮＡから発現ライブラリーを調製し、細胞毒性Ｔ細胞クローンを用いて、細胞毒性Ｔ細胞クローンと反応性であるライブラリー構成員子につき発現ライブラリーをスクリーニングし、細胞毒性Ｔ細胞クローンと反応性であるライブラリー構成員子を単離し、そして該ライブラリー構成員子中の腎細胞核酸であって、ＴＲＡを含めたＴＲＡＰ（またはその一部）をコードする腎細胞核酸を配列決定する。本発明は、これらの核酸と相同でありかつ腎付随ＴＲＡＰおよびＴＲＡをコードする配列、緊縮条件下でこれらの核酸とハイブリダイズし、かつ腎付随ＴＲＡＰおよびＴＲＡをコードする配列、以上の配列の相補体、ユニークフラグメントおよび“縮重体”、ＴＲＡＰおよびＴＲＡ自身、ならびに以上の配列のいずれかの機能性変異体および均等物をも提供し、これらはすべてＲＡＧＥ核酸、ＴＲＡＰおよびＴＲＡであると考えることができる。本発明は、対象において薬剤として用いるＨＬＡ／ＲＡＧＥＴＲＡ複合体の存在を選択的に高める物質をも提供する。このような物質には、ＲＡＧＥＴＲＡおよび／またはＲＡＧＥＴＲＡＰ；ＲＡＧＥＴＲＡおよび／またはＲＡＧＥＴＲＡＰを発現し、かつ適切なＨＬＡ分子（組換え体、またはそうでないもの）をも発現する組換え細胞；ならびに以上に記載したものの機能性変異体および均等物が含まれるが、これらに限定されない。具体例には、配列番号：４３のＲＡＧＥＴＲＡ；配列番号：４３のＴＲＡを含む、配列番号：５のＲＡＧＥＴＲＡＰのフラグメント；配列番号：５のＲＡＧＥＴＲＡＰ；配列番号：４３のＴＲＡおよびＨＬＡ−Ｂ７を発現する組換え細胞；および／または他のいずれかのＲＡＧＥＴＲＡ、ＲＡＧＥＴＲＡＰもしくはその機能性フラグメント、および／またはそれらの分子を発現する細胞が含まれる。本発明は、対象において癌の処置に用いる薬剤の製造に際して、ＨＬＡ／ＲＡＧＥＴＲＡ複合体の存在を選択的に高める物質をも提供する。このような物質には、ＲＡＧＥＴＲＡおよび／またはＲＡＧＥＴＲＡＰ；ＲＡＧＥＴＲＡおよび／またはＲＡＧＥＴＲＡＰを発現し、かつ適切なＨＬＡ分子（組換え体またはそうでないもの）を発現する組換え細胞；ならびに以上に記載したものの機能性変異体および均等物が含まれるが、これらに限定されない。具体例には、配列番号：４３のＲＡＧＥＴＲＡ；配列番号：４３のＴＲＡを含む、配列番号：５のＲＡＧＥＴＲＡＰのフラグメント；配列番号：５のＲＡＧＥＴＲＡＰ；配列番号：４３のＴＲＡおよびＨＬＡ−Ｂ７を発現する組換え細胞；および／または他のいずれかのＲＡＧＥＴＲＡ、ＲＡＧＥＴＲＡＰもしくはその機能性フラグメント、および／またはそれらの分子を発現する細胞が含まれる。本発明は、薬剤として用いる、ＨＬＡとＲＡＧＥＴＲＡの複合体に特異的な細胞毒性Ｔ細胞をも提供する。限定ではない一例は、ＨＬＡ−Ｂ７とＲＡＧＥＴＲＡの複合体を発現する腫瘍細胞に特異的な自己細胞毒性Ｔ細胞である。本発明は、癌治療用の薬剤の製造における、ＨＬＡとＲＡＧＥＴＲＡの複合体に特異的な細胞毒性Ｔ細胞をも提供する。限定ではない一例は、ＨＬＡ−Ｂ７とＲＡＧＥＴＲＡの複合体を発現する腫瘍細胞に特異的な自己細胞毒性Ｔ細胞である。本発明は、前記または本明細書全体に記載した１またはそれ以上の薬剤を含有する薬剤調製物をも提供する。それらの薬剤調製物は薬剤学的に許容しうる希釈剤、キャリヤーまたは賦形剤を含有することができる。これらおよび他の本発明の目的を、本発明の詳細な記述と関連してさらに詳細に述べる。図面の簡単な説明図１は、ＣＴＬクローン２６３／１７がＨＬＡ−Ｂ７ｃＤＮＡおよびＲＡＧＥＴＲＡＰをコードするｃＤＮＡでトランスフェクションしたＣＯＳ細胞と組み合わせられた場合に産生する腫瘍壊死因子の濃度を示すグラフである。図２は、ＲＡＧＥ−１、２、３および４ｃＤＮＡの模式図である。閉じた黒色ボックスは３種類それぞれのリーディングフレーム中の異なるＯＲＦを示す。ＲＡＧＥ２、３および４ｃＤＮＡのシェーディングした領域はＲＡＧＥ−１配列と無関係の配列を表し、２つの挿入配列がこれに含まれる。ＰＣＲにより得た５′末端配列を点線のボックスで示す。このＰＣＲ配列の３′末端はＲＡＧＥ２、３および４ｃＤＮＡのオーバーラップ５′末端配列と等しい。ＲＡＧＥ−１がコードする抗原性ペプチドを示す。図３は、ＣＴＬクローン２６３／１７がＨＬＡ−Ｂ７ｃＤＮＡおよびＲＡＧＥＴＲＡＰをコードするｃＤＮＡまたはＲＡＧＥＴＲＡＰのＯＲＦ２をコードするミニジーンでトランスフェクションしたＣＯＳ細胞と組み合わせられた場合に産生する腫瘍壊死因子の濃度を示すグラフである。図４は、ＣＴＬクローン２６３／１７を、ＲＡＧＥ遺伝子のＯＲＦ２がコードするＴＲＡＰのペプチドフラグメント、およびＨＬＡ−Ｂ７でトランスフェクションしたＣＯＳ細胞と組み合わせた場合に産生される腫瘍壊死因子の濃度を詳細に示すグラフである。図５は、ＲＡＧＥＴＲＡを含む漸増する濃度のペプチドで間欠的に処理したＨＬＡ−Ｂ７^-ＬＢ２３−ＥＢＶＢに対するＣＴＬクローン２６７／１７の細胞溶解活性を示すグラフである。配列の簡単な記載配列番号：１は、ＲＡＧＥ−１ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。配列番号：２は、配列番号：１のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム１（ＯＲＦ１）である。配列番号：３は、配列番号：２の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：４は、配列番号：１のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム２（ＯＲＦ２）である。配列番号：５は、配列番号：４の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：６は、配列番号：１のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム３（ＯＲＦ３）である。配列番号：７は、配列番号：６の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：８は、配列番号：１のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム４（ＯＲＦ４）である。配列番号：９は、配列番号：８の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：１０は、配列番号：１のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム５（ＯＲＦ５）である。配列番号：１１は、配列番号：１０の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：１２は、ＲＡＧＥ−２ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。配列番号：１３は、ＲＡＧＥ−３ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。配列番号：１４は、ＲＡＧＥ−４ｃＤＮＡのヌクレオチド配列である。配列番号：１５は、配列番号：１２のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム２′（ＯＲＦ２′）である。配列番号：１６は、配列番号：１５の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：１７は、配列番号：１２のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム３′（ＯＲＦ３′）である。配列番号：１８は、配列番号：１７の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：１９は、配列番号：１２のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム４（ＯＲＦ４）である。配列番号：２０は、配列番号：１９の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：２１は、配列番号：１２のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム５（ＯＲＦ５）である。配列番号：２２は、配列番号：２１の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：２３は、配列番号：１３のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム６（ＯＲＦ６）である。配列番号：２４は、配列番号：２３の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：２５は、配列番号：１３のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム２′（ＯＲＦ２′）である。配列番号：２６は、配列番号：２５の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：２７は、配列番号：１３のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム３′（ＯＲＦ３′）である。配列番号：２８は、配列番号：２７の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：２９は、配列番号：１３のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム４（ＯＲＦ４）である。配列番号：３０は、配列番号：２９の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：３１は、配列番号：１３のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム５（ＯＲＦ５）である。配列番号：３２は、配列番号：３１の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：３３は、配列番号：１４のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム２′（ＯＲＦ２′）である。配列番号：３４は、配列番号：３３の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：３５は、配列番号：１４のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム３′（ＯＲＦ３′）である。配列番号：３６は、配列番号：３５の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：３７は、配列番号：１４のｃＤＮＡのオープンリーディングフレーム４′（ＯＲＦ４′）である。配列番号：３８は、配列番号：３７の翻訳されたアミノ酸配列である。配列番号：３９は、図４に関して述べたＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原を含むドデカマーペプチドである。配列番号：４０は、配列番号：３９に記載したペプチドのノナマーフラグメント（アミノ酸１〜９）である。配列番号：４１は、配列番号：３９に記載したペプチドのノナマーフラグメント（アミノ酸２〜１０）である。配列番号：４２は、配列番号：３９に記載したペプチドのノナマーフラグメント（アミノ酸３〜１１）である。配列番号：４３は、配列番号：３９に記載したペプチドのデカマーフラグメント（アミノ酸１〜１０）である。配列番号：４４は、配列番号：４０のペプチドをコードするＤＮＡのヌクレオチド配列である。配列番号：４５は、配列番号：４３のペプチドをコードするＤＮＡのヌクレオチド配列である。配列番号：４６は、ＲＡＧＥＴＲＡＰの発現を調べるＰＣＲ試験に用いるセンスプライマーである。配列番号：４７は、ＲＡＧＥＴＲＡＰの発現を調べるＰＣＲ試験に用いるアンチセンスプライマーであり、試験したすべてのＲＡＧＥ遺伝子に共通である。配列番号：４８は、ＲＡＧＥ−１ＴＲＡＰ遺伝子の発現を調べるＰＣＲ試験に用いる、ＲＡＧＥ−１に特異的なアンチセンスプライマーである。配列番号：４９は、ＲＡＧＥ遺伝子のＯＲＦ２挿入地点に隣接する領域を示し、挿入配列をＮで表示する。配列番号：５０〜５７は、ＲＡＧＥ−１の同定に有用なＰＣＲプライマーである。発明の詳細な記述腎細胞癌においてＨＬＡ−Ｂ７により限定された自己ＣＴＬが認識する抗原は、これまで知られていない遺伝子によりコードされる。この遺伝子は、網膜以外のすべての正常組織（精巣を含む）中では沈黙しており、数種類の腫瘍試料中に発現する。実施例１：患者ＬＥ９２１１の抗腎細胞癌ＣＴＬクローンに関する記述腫瘍系ＬＥ９２１１−ＲＣＣはＬＥ９２１１と命名した女性患者の腫瘍試料に由来する腎細胞癌である。非増殖性にするため、その試料を照射した。次いでこれらの照射細胞をそれに特異的な細胞溶解性Ｔ細胞クローン（“ＣＴＬ”）の単離に用いた。末梢血単核細胞（“ＰＢＭＣ”）の試料を患者ＬＥ９２１１から採取し、照射した癌細胞と接触させた。１４日後にこの混合物を癌細胞の溶解につき観察したところ、癌細胞が提示するペプチドとＨＬＡ分子との複合体に特異的なＣＴＬが試料中に存在することが示された。用いた細胞溶解アッセイ法はHerin et al.,Int.J.Cancer 39:390-396(1987)によるクロム放出アッセイ法であった。このアッセイ法につきここに簡単に説明する。標的癌細胞をインビトロで増殖させ、次いで３０％のウシ胎児血清を補充したダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１０⁷細胞／ｍｌに再懸濁し、３７℃で４５分間、２００μＣｉ／ｍｌのＮａ（⁵¹Ｃｒ）Ｏ₄と共にインキュベートした。標識細胞をＤＭＥＭで３回洗浄した。次いで１０ｍＭのＨｅｐｅｓおよび１０％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補充したＤＭＥＭにこれらを再懸濁したのち、１０³細胞を含有する１００μｌずつを９６ウェルミクロプレートに分配した。リンパ球の試料を同一培地１００μｌに添加し、二重試験法でアッセイを行った。プレートを１００ｇで４分間遠心し、３７℃で４時間、８％ＣＯ₂雰囲気でインキュベートした。プレートを再度遠心し、上清１００μｌずつを採取して計数した。⁵¹Ｃｒ放出率を下記により計算した：式中、ＥＲは観察された⁵¹Ｃｒ放出量実験値であり、ＳＲは１０³個の標識細胞を培地のみ２００μｌ中でインキュベートすることにより測定した自発放出量であり、ＭＲは１００μｌの０．３％トリトンＸ−１００を標的細胞に添加することにより得られた最大放出量である。高いＣＴＬ活性を示した単核細胞血液試料を増殖させ、限界希釈法によりクローン化し、同じ方法で再度スクリーニングした。こうして第１のＣＴＬクローンを単離した。このクローンを以下、２６３／１７と呼ぶ。同様に同実験で第２のＣＴＬクローン３６１Ａ／１７を得て、後記に詳述するようにＣＴＬ２６３／１７が無限に増殖しえなかった場合にこれを用いた。ＣＴＬクローン２６３／１７および３６１Ａ／１７は自己由来腫瘍細胞を特異的に溶解することができ、ＮＫ−標的Ｋ５６２細胞ではなかった。ＮＫ−標的Ｋ５６２細胞はＡＴＣＣ（メリーランド州ロックビル）から入手できる。ＣＴＬクローン２６３／１７は自己由来腫瘍細胞で刺激した場合にＴＮＦを産生した。ＣＴＬクローン２６３／１７に対する抗原を提示するＨＬＡ分子を同定するために、阻害実験を行ったが、この実験ではＨＬＡ分子またはＣＤ４／ＣＤ８補助分子に対し指向性のモノクローナル抗体の存在下で、ＴＮＦの産生を調べた。４種類のモノクローナル抗体がＣＴＬ２６３／１７によるＴＮＦ産生を阻害することが認められた：（１）モノクローナル抗体Ｗ６／３２、これはＨＬＡクラスＩ分子指向性であった（Parham et al.,1979,J.Immunol.,123:342）；（２）抗体Ｂ１.２３.２、これはＨＬＡ−ＢおよびＣ分子を認識する（Rebai et a l.,1983,Tissue Antigens,22:107）；（３）抗体ＭＥ−１、これはＨＬＡ−Ｂ７を特異的に認識する（Ellis et al.,1982,Hum.Immunol.,5:49）；（４）ＣＤ８に対する抗体Ｂ９.４.１。ＨＬＡクラスＩＩＤＲ分子指向性の抗体（Ｌ２４３；Lampson et al.,1980,J.Immunol.,125:293）、ＨＬＡ−Ａ３指向性の抗体（ＧＡＰＡ３；Berger et al.,1982,Hybridoma,1:87）またはＣＤ４指向性の抗体（１３Ｂ.８.８２）を用いた場合に阻害はみられなかった。結論は、ＣＴＬ２６３／１７はＣＤ８タイプのものであり、ＨＬＡ−Ｂ７が提示する抗原を認識するというものであった。このＣＴＬクローンの腫瘍特異性を判定するために、他の患者に由来する、同様にＨＬＡ−Ｂ７である正常な腎細胞（ＰＴＥＣ−ＨＬＡ−Ｂ７細胞）についても試験した。これらの細胞は腎細胞癌の起源部位である近位尿細管上皮に由来する。ＰＴＥＣ−ＨＬＡ−Ｂ７細胞はＣＴＬにより溶解せず、この抗原が腫瘍上に特異的に発現することを示唆する。他のＨＬＡ−Ｂ７患者に由来する腎細胞癌系ＭＺ−１８５１も、ＣＴＬにより溶解したが、これはこの抗原が独立した腫瘍に共有されることを示す。実施例２：ＣＴＬ２６３／１７が認識する抗原の発現を指令するｃＤＮＡクローンの単離Ａ．ｃＤＮＡライブラリーＲＮＡをＬＥ−９２１１−ＲＣＣから単離し、ポリ−Ａ⁺ＲＮＡをオリゴ−ｄＴ結合により精製した。ＮｏｔＩ部位を含むオリゴ−ｄＴプライーを用いる逆転写、次いで第２鎖の合成によりｃＤＮＡを調製した（スーパースクリプト・チョイス・システム（Superscript Choice System）、ＢＲＬ．ライフ・テクノロジーズ）。次いでこのｃＤＮＡをＢｓｔＸＩアダプターに連結させ、ＮｏｔＩで消化し、サイズ分画し（セファクリル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ−５００ＨＲカラム、ＢＲＬ．ライフ・テクノロジーズ）、そしてｐｃＤＮＡ−Ｉ−Ａｍｐ（インビトローゲン）のＢｓｔＸＩおよびＮｏｔＩ部位に１方向にクローン化した。次いでこの組換えプラスミドを電気穿孔法によりＤＨ５α大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中へ導入した。１００個の組換え大腸菌１５００プールを増幅し、各プールのプラスミドＤＮＡをアルカリ溶解、酢酸カリウム沈殿およびフェノール抽出により抽出した。Ｂ．ＣＯＳ細胞のトランスフェクション種々のプールから得たプラスミドＤＮＡを、６０ｎｇのＨＬＡ−Ｂ７ｃＤＮＡ（他のＨＬＡ−Ｂ７患者のｃＤＮＡからＰＣＲによりクローン化し、プラスミドベクターｐｃＤＳＲα中へ挿入したもの）と共に、ＣＯＳ細胞中へ同時トランスフェクションした。トランスフェクションは２個ずつのウェル内で行われた。要約すると、１０％のウシ胎児血清を補充したＤＭＥＭ中において、ＣＯＳ−７細胞を１５，０００個／ウェルで組織培養用平底ミクロウェルに接種した。細胞を３７℃で一夜インキュベートし、培地を除去し、次いで１０％のＮｕ−Ｓｅｒｕｍ（コラボレイティブ・リサーチ、メリーランド州ベッドフォード）、４００ μｇ／ｍｌのＤＥＡＥデキストランおよび１００μＭのクロロキンを含有するＤＭＥＭ培地５０μｌ／ウェルならびに１００ｎｇの上記プラスミドで交換した。３７℃で４時間のインキュベーション後に培地を除去し、１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有するＰＢＳ５０μｌで交換した。この培地を２分後に除去し、１０％のＦＣＳを補充したＤＭＥＭ２００μｌで交換した。この培地交換後にＣＯＳ細胞を３７℃で２４〜４８時間インキュベートした。次いでトランスフェクション体をＣＴＬ２６３／１７でスクリーニングした。まず培地を除去したのち、２５Ｕ／ｍｌのＩＬ−２を含有する培地１００μｌ中において３０００個のＣＴＬ２６３／１７細胞を各ウェルに添加した。次いで上清中に存在するＴＮＦの量をＷＥＨＩ１６４.１３細胞に対する細胞毒性試験により測定した。大部分のプールはＴＮＦ濃度１０ｐｇ／ｍｌ未満であった。２プール（１１５７および１３１９）が２個のウェルの両方において、より高い濃度を示した（２４〜３７ｐｇ／ｍｌ）。プール１３１９の細菌をクローン化し、１２００クローンを得た。それらのプラスミドＤＮＡを抽出し、ＨＬＡ−Ｂ７と共にＣＯＳ細胞中へトランスフェクションした。トランスフェクション体をＣＴＬ２６３／１７でスクリーニングした。１つのｃＤＮＡクローン（９Ｈ３）はＣＴＬ２６３／１７によって高いＴＮＦ産生を示した。図１はこのｃＤＮＡ（６０ｎｇ）をＨＬＡ−Ｂ７ｃＤＮＡ（６０ｎｇ）と共にＣＯＳ細胞中へトランスフェクションし、ＣＴＬ２６３／１７でスクリーニングした場合に得られた結果を示す。このｃＤＮＡは、ＨＬＡ−Ｂ７肉腫系のＬＢ２３−ＳＡＲ細胞にも安定にトランスフェクションされた。次いで、ＣＴＬクローン２６３／１７と同一の抗原を認識するＣＴＬクローン３６１Ａ／１７を用いて細胞溶解試験を行った。これらの安定にトランスフェクションされた細胞はＣＯＳ−ＨＬＡ−Ｂ７−ｃＤＮＡ９Ｈ３細胞と同様に認識された。実施例３：ｃＤＮＡ９Ｈ３の配列ｃＤＮＡクローン９Ｈ３は１１３０ｂｐの長さである。このｃＤＮＡはそのサイズがノーザンブロットでみられたｍＲＮＡの長さ（１．６ｋｂ）より短いので、完全ではなかった。このｃＤＮＡの５′末端をＲＡＣＥ−ＰＣＲによりクローン化し、全配列を確認した。この全配列を配列番号：１として示す。データバンクに報告された配列と比較して、３′末端においてはその機能が分かっていない“ 発現した配列ｔａｇ”と呼ばれる２３５ｂｐの短い配列との高い相同性を示し（１）、５′末端においてはＲＴＬＶ−Ｈ２およびＲＧＨ２と呼ばれる２つのヒト内因性レトロウイルスのアンチセンス鎖と限られた相同性（９５塩基の範囲で７５％）を示した（２，３）。この遺伝子はＲＡＧＥ(renal tumor antiGEn)と呼ばれた。この配列は５つのオープンリーディングフレーム、ＯＲＦ１：３２残基のタンパク質をコードする９９塩基対；ＯＲＦ２：４０残基のタンパク質をコードする１２３塩基対；ＯＲＦ３：２８残基のタンパク質をコードする８７塩基対；ＯＲＦ４：９５残基のタンパク質をコードする２８８塩基対；およびＯＲＦ５：７３残基のタンパク質をコードする２２２塩基対（それぞれ配列番号：２、４、６、８および１０）を含む。配列番号：４は、ＣＴＬ２６３／１７と反応性である抗原性ペプチド（ＨＬＡ−Ｂ７ペプチド複合体として）が誘導されるＴＲＡＰをコードする。実施例４：他のＲＡＧＥ遺伝子の同定この実施例は他の３種類のＲＡＧＥ遺伝子を同定し、前記の実施例で同定した現在ＲＡＧＥ−１と表示されるＲＡＧＥ遺伝子のみが、ＣＴＬ２６３／１７と反応性のＲＡＧＥＴＲＡをコードすると判定されたことにつき記載する。ＲＡＧＥ−１ｃＤＮＡからプローブを調製し、他のＲＡＧＥ遺伝子に対するＬＥ９２１１−ＲＣＣｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングに用いた。ＲＡＧＥに相同な３種類のｃＤＮＡ、すなわちＲＡＧＥ−２（配列番号：１２）、ＲＡＧＥ−３（配列番号：１３）およびＲＡＧＥ−４（配列番号：１４）と表示されるものが単離された。ＲＡＧＥ−２、ＲＡＧＥ−３およびＲＡＧＥ−４遺伝子を標準法により配列決定した。これらのＲＡＧＥｃＤＮＡのヌクレオチド配列をＲＡＧＥ−１ｃＤＮＡと比較して、新たに同定されたこれらのＲＡＧＥｃＤＮＡにはトランケートした新規なオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が存在ことが示された。ＲＡＧＥ−２、ＲＡＧＥ−３およびＲＡＧＥ−４はＲＡＧＥ−１の位置２４９（ＲＡＧＥ−１のＯＲＦ２（配列番号：４）に対応する配列内）に３７ｂｐのインサートを含む。ＲＡＧＥ−２ｃＤＮＡについては、コスミド配列との比較によりこの挿入はエキソンの初めの部分に対応することが示された。これがＲＡＧＥ−１ｃＤＮＡに存在しないのは、別の下流受容体部位を用いることによると思われる。さらに、ＲＡＧＥ−２、３および４はＲＡＧＥ− １の位置１９２のヌクレオチドを欠如する点でＲＡＧＥ−１と異なる。これらの変化により、ＲＡＧＥ−１のＯＲＦ２および３と相同なＲＡＧＥ−２、３および４のＯＲＦが有意に修飾される。さらに、ＲＡＧＥ−３は５′末端に他の４７ｂｐの挿入配列をもつ。これらの相異以外はＲＡＧＥ−１、２および３配列は等しい。ＲＡＧＥ−４は他のＲＡＧＥｃＤＮＡより約８００ｂｐ長い。その５′側配列はＲＡＧＥ−２のものと等しいが、位置４３４からポリーＡテイルまではＲＡＧＥ−４の配列は他のＲＡＧＥｃＤＮＡと全く異なる。ＲＡＧＥ−４ｃＤＮＡはキメラではないことが示された。３′側の無関係な配列の開始位置はＲＡＧＥゲノム配列のエキソン−イントロン境界に対応し、３′側の無関係な配列はＲＡＧＥ遺伝子の３′末端に存在した。したがってＲＡＧＥ−４ｃＤＮＡはＲＡＧＥ−２遺伝子のディフェレンシャル（differential）スプライシングの結果生じたと思われる。４種類のｃＤＮＡを整列させた模式図を図２に示す。４種類のＲＡＧＥｃＤＮＡには１７のＯＲＦがある。これら１７中１０が異なる。これらのＯＲＦは以下のとおりである：ＲＡＧＥ−２、ＲＡＧＥ−３およびＲＡＧＥ−４ｃＤＮＡを当技術分野で標準的な方法により発現プラスミド中へクローン化し、ＨＬＡ−Ｂ７につき記載したと同様にＣＯＳ−７細胞中へトランスフェクションして、これらのｃＤＮＡもＣＴＬ２６３／１７が認識する抗原をコードするか否かを判定した。ＲＡＧＥｃＤＮＡ（ここではＲＡＧＥ−１と呼ぶ）およびＬＥ９２１１−ＲＣＣ細胞を用いた平行な対照実験も行った。ＬＥ９２１１−ＲＣＣ細胞、またはＲＡＧＥ−１とＨＬＡ−Ｂ７で同時トランスフェクションされたＣＯＳ−７細胞をＣＴＬ２６３／１７と共にインキュベートすると、ＣＴＬ２６３／１７によるＴＮＦの放出が強く誘導された。ＲＡＧＥ−２、ＲＡＧＥ−３またはＲＡＧＥ−４とＨＬＡ−Ｂ７との同時トランスフェクションでは、ＴＮＦ放出は誘導されなかった。したがってＲＡＧＥ−１のみがＣＴＬ２６３／１７が認識しうる抗原の発現を伝達できた。実施例５：ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原を含むＯＲＦの確認ＲＡＧＥ−２、３および４中の３７ｂｐの挿入はこれら３遺伝子においてＯＲＦ２を早期に終止させた。したがってＣＴＬ２６３／１７が認識した抗原性ペプチドはＯＲＦ２の３′末端によりコードされたと推論した。この仮説を調べるために、ＲＡＧＥ−１のＯＲＦ２ならびにＲＡＧＥ−２およびＲＡＧＥ−３のＯＲＦ２′に対応するＤＮＡ配列を前記に従って発現ベクター中へクローン化し、ＨＬＡ−Ｂ７と共にＣＯＳ−７細胞中へトランスフェクションした。陽性対照として、ＣＯＳ−７細胞中へＲＡＧＥ−１ｃＤＮＡをＨＬＡ−Ｂ７と同時トランスフェクションし、またはＬＥ２９１１−ＲＣＣ細胞を用いた。これらのトランスフェクション体またはＬＥ２９１１−ＲＣＣ細胞を用いて、ＣＴＬ２６３／１７細胞からのＴＮＦの放出を誘導した。ＯＲＦトランスフェクション体のうちＲＡＧＥ−１由来のＯＲＦ２のみが、ＣＴＬ２６３／１７細胞からのＴＮＦの放出を効果的に刺激した（図３）。この実験で、ＣＴＬ２６３／１７細胞が認識するＲＡＧＥ抗原性ペプチドはＲＡＧＥ−１のＯＲＦ２の３′末端によりコードされることが確認された。実施例６：ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドの確認ＲＡＧＥ−１ＯＲＦ２の３′末端に対応する合成ペプチドを合成し、ＣＴＬ２６３／１７細胞からのＴＮＦ放出の刺激につき試験した。ＣＯＳ−７細胞を前記に従ってＨＬＡ−Ｂ７でトランスフェクションし、培養物にＯＲＦ２の３′部分に対応する合成ペプチドを添加した。ＣＴＬ２６３／１７細胞を添加し、１８時間後にＴＮＦの産生を測定した（図４）。ペプチドＳＰＳＳＮＲＩＲＮＴＳＴ（配列番号：３９）がＣＴＬ２６３／１７からのＴＮＦ放出を効果的に刺激した。ＨＬＡクラスＩ分子が提示するペプチドは通常は９アミノ酸の長さであるので、予めＣＴＬ２６３／１７細胞からのＴＮＦ放出の刺激に用いたドデカマーペプチド（配列番号：３９）由来のノナマーペプチド（配列番号：４０、４１および４２）を調べた。これらの実験結果を図４に示す。これらのペプチドのうちの１つ（ＳＰＳＳＮＲＩＲＮ、配列番号：４０）はＣＴＬ２６３／１７により認識されたが、ドデカマーペプチドよりはるかに低い程度であった。これはノナマー（配列番号：４０）が最適ペプチドでないことを示唆した。デカマーペプチド（ＳＰＳＳＮＲＩＲＮＴ、配列番号：４３）はＣＴＬ２６３／１７によりきわめて効果的に認識された。実施例７：ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ノナマーおよびデカマーペプチドの活性この実施例は、ＲＡＧＥＴＲＡペプチドがＨＬＡ−Ｂ７発現細胞の溶解を誘導する効力、ならびにノナマーおよびデカマーペプチドの相対効力を示す。ノナマーおよびデカマーＲＡＧＥペプチド（それぞれ配列番号：４０および４３）を、ＣＴＬ２６３／１７細胞によるＨＬＡ−Ｂ７^-ＬＢ２３−ＥＢＶＢ細胞の細胞溶解誘導効力につき用量応答アッセイ法により調べた。凍結乾燥ペプチドを２０ｍｇ／ｍｌでＤＭＳＯに溶解し、次いで１０ｍＭ酢酸に２ｍｇ／ｍｌに希釈し、−８０℃に保存した。標的細胞であるＨＬＡ−Ｂ７^-ＥＢＶ形質転換したリンパ芽球（ＬＢ２３−ＥＢＶ細胞）を前記に従って⁵¹Ｃｒで３７℃において１時間標識し、次いで取り込まれていない標識を除去するために十分に洗浄した。次いでＬＢ２３−ＥＢＶ細胞を９６ウェルミクロプレート中で種々の濃度のペプチドの存在下に３７℃で３０分間インキュベートした。次いで等容量の培地中のＣＴＬ２６３／１７をエフェクター：標的の比率１０：１で添加した。４時間後にクロム−５１の放出を測定した。図５は用量応答アッセイの結果を示す。ＬＢ２３−ＥＢＶ細胞の半最大溶解が濃度３０ｎｇ／ｍｌのＳＰＳＳＮＲＩＲＮＴペプチド（配列番号：４３）で誘導された。実施例８：ＲＡＧＥ−１遺伝子の発現ＲＡＧＥの発現を、以下のプライマーを用いるＰＣＲにより調べた：まず全ＲＮＡを当技術分野で認められた方法により特定の試料から採取した。このＲＮＡを用いてｃＤＮＡを調製した。ｃＤＮＡを調製するのに用いたプロトコールは、下記による：４μｌの５×逆転写酵素用緩衝液、各１μｌのｄＮＴＰ（１０ｍＭ）、２μｌのジチオトレイトール（１００ｍＭ）、２μｌのｄＴ−１５プライマー（２０μＭ）、０．５μｌのＲＮａｓｉｎ（４０単位／μｌ）および１μｌのＭ−ＭＬＶ逆転写酵素（２００単位／μｌ）を混和した。次いで６．５μｌの鋳型ＲＮＡ（１μｇ／３．２５μｌの水、または２μｇの全鋳型ＲＮＡ）を添加した。混合物の全容量は２０μｌであった。これを混合し、４２℃で６０分間インキュベートしたのち、氷上で冷却した。次いで合計８０μｌの水を添加して合計１００μｌにした。この混合物をＰＣＲに用いるまで−２０℃に保存した。ＰＣＲ用試薬は以下のものを含有していた： − ５μｌの１０×ダイナ・ザイム(Dyna Zyme)用緩衝液 − 各２０ｐｍｏｌのプライマー − 各５０ｎｍｏｌのｄＮＴＰ − １単位の重合酵素“ダイナザイム(Dynazyme)”（２単位／μｌ） − ５μｌのｃＤＮＡ（１００ｎｇの全ＲＮＡに相当） − 最終容量５０μｌとなる量の水混合物を混和し、１滴の鉱油を積層した。混合物を９４℃に予熱したサーモサイクラーブロックに移し、９４℃で１５分の１サイクル、次いで以下の３３サイクルの増幅を行った： − ９４℃で１分 − ５６℃または６０℃で２分（後記参照） − ７２℃で３分次いで７２℃で１５分の最終延長工程を行った。ｐａｎ−ＲＡＧＥセンスプライマー（配列番号：４６）およびアンチセンスプライマー（配列番号：４７）を用い、６０℃で２分のアニーリング工程によるＰＣＲ増幅により、すべてのＲＡＧＥ遺伝子の発現を調べた。ＲＡＧＥ−１遺伝子の発現のみは、ｐａｎ−ＲＡＧＥセンスプライマー（配列番号：４６）およびＲＡＧＥ−１特異的アンチセンスプライマー（配列番号：４８）を用い、５６℃で２分のアニーリング工程によるＰＣＲ増幅により調べた。１９４ｂｐ（試験したすべてのＲＡＧＥ遺伝子に一般的）および２３９ｂｐ（ＲＡＧＥ−１遺伝子に特異的）のＰＣＲ生成物が、臭化エチジウム含有アガロースゲル（１．５％）上で視覚化された。この遺伝子は腫瘍特異的であることが見出された。この遺伝子は網膜以外は試験したすべての正常組織で沈黙していた。特にこの遺伝子は副腎、膀胱、骨髄、脳、乳房、小脳、結腸、心臓、腎臓、肝臓、肺、メラニン形成細胞、筋肉、神経、卵巣、胎盤、前立腺、皮膚、脾細胞、胃、精巣、胸腺細胞、子宮および治癒しつつある創傷においては沈黙していた。しかしこの遺伝子は多様な腫瘍細胞系および腫瘍組織試料中で発現することが見出された（表１）。これは、ここに挙げたもの以外の幾つかの腫瘍においても、頻度は低いが発現した。以上の実施例はＴＲＡＰをコードする核酸分子の単離を示す。しかしこのＴＲＡＰコード分子は前掲の参考文献に記載される、これまでに示されたコード配列の何れのものとも相同ではない。したがって本発明の１態様は、配列番号：１、配列番号：４、配列番号：６または配列番号：１０に示したヌクレオチド配列の全部またはユニーク部分を含む単離された核酸分子である。配列番号：１２、１３および１４がコードする他のＲＡＧＥＯＲＦ由来の抗原がＣＴＬ２６３／１７以外の細胞溶解性Ｔリンパ球クローンにより認識されることも予想される。したがって本発明の他の態様は、単離されたユニーク部分、たとえばＴＲＡＰおよびＴＲＡをコードする部分を含むＲＡＧＥ族遺伝子のうち１またはそれ以上、それに由来するＲＡＧＥＴＲＡＰおよびＴＲＡ、ならびにそれに関連するすべての診断および療法の様式を包含する。以上の配列は、それらを参考文献に記載されたＭＡＧＥ、ＢＡＧＥまたはＧＡＧＥ配列と比較することにより分かるように、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥまたはＧＡＧＥ配列ではない。同様に非ＭＡＧＥ、非ＢＡＧＥおよび非ＧＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードし、ただし前記ヌクレオチド配列からなる核酸分子に緊縮条件下でハイブリダイズする核酸配列も本発明の一部である。本明細書中で用いる“緊縮条件”という用語は、当技術分野で一般的なパラメーターを意味する。より詳細には、本明細書中で用いる緊縮条件は６５℃でハイブリダイゼーション緩衝液（３.５×ＳＳＣ、０.０２％ファイコル(Ficoll)、０.０２％ポリビニルピロリドン、０.０２％ウシ血清アルブミン、２５ｍＭＮａＨ₂ＰＯ₄（ｐＨ７）、０.５％ＳＤＳ、２ｍＭＥＤＴＡ）中でのハイブリダイゼーションを意味する。ＳＳＣは０．１５Ｍ塩化ナトリウム／０．１５Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ７）であり、ＳＤＳはドデシル硫酸ナトリウムであり、ＥＤＴＡはエチレンジアミン四酢酸である。ハイブリダイゼーション後に、ＤＮＡが伝達された膜を室温の２×ＳＳＣ、次いで６５℃の０．１×ＳＳＣ／０．１×ＳＤＳで洗浄する。同程度の緊縮を得るのに使用しうる他の条件、試薬などがある。当業者にはそのような条件が周知であるので、本明細書には示さない。細胞、好ましくは癌細胞を前記分子の発現につきスクリーニングし、これらの分子を常法により単離し、次いで関連核酸を単離する方法も当業者には周知である。ＲＡＧＥ族員子をスクリーニングする際には、上記の条件を³²Ｐプローブと共に用いてサザンブロット法を行うことができる。ＤＮＡが最終的に伝達された膜を洗浄したのち、膜をＸ線フィルムに向けて配置し、放射活性シグナルを検出する。したがって本発明は、配列番号：１の単離したユニークフラグメントまたはその相補体を提供する。ユニークフラグメントは、ＲＡＧＥ遺伝子の“シグネチャー”であるフラグメントである。それはたとえば、請求項２３に定めるようにその配列そのものがＲＡＧＥ族以外の分子中に見られないことを保証するのに十分な長さである。好ましいユニークフラグメントはＯＲＦ２中のみに見られるもの、またはその相補体である。ユニークフラグメントはＯＲＦ２を発現するものを含めたＲＡＧＥ族員子を同定するためのサザンブロットアッセイ法においてプローブとして使用でき、またはＰＣＲに用いるような増幅アッセイ法に使用できる。当業者に知られるとおり、特定の用途、たとえばサザンブロット法にはたとえば２００ｂｐ以上の大型プローブが好ましいが、ＰＣＲなどの用途にはより小型のフラグメントが好ましいであろう。当業者に自明のとおり、ユニークフラグメントの大きさは遺伝子コード中での保存性に依存するであろう。たとえば配列番号：１、配列番号：１２、配列番号：１３および配列番号：１４の若干の領域はユニークであるためには比較的長いセグメントを必要とするが、他は短いセグメント、一般に１２〜３２ｂｐ（たとえば12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、 24、25、26、27、28、29、30、31および／または32塩基の長さ）を必要とするにすぎないであろう。配列番号：１の１８ヌクレオチド以上の長さのセグメントは実質的にいずれもユニークであろう。一般にユニークフラグメントが族以外の員子からのインサートの配列を選択的に区別しうることに基づいて当該配列を選択する方法は、当業者に周知である。一般にそのフラグメントの配列を既知のデータに基づく配列と比較しさえすればよいが、ただしインビトロで確認のためのハイブリダイゼーションおよび配列分析を行ってもよい。ＲＡＧＥ−１を選択的に増幅するように構築および調整されるＰＣＲプライマー対のいずれにも、ＲＡＧＥ−１特異性プライマーを使用できる。このようなプライマーは、他のＲＡＧＥ遺伝子において付加的なヌクレオチドの挿入により変化したＯＲＦ２の挿入地点の両側にハイブリダイズするＲＡＧＥ−１の連続範囲である。このような特異的プライマーはＲＡＧＥ−１中のヌクレオチドの連続範囲にのみ完全にハイブリダイズするが、ＯＲＦ２を共有しないＲＡＧＥ遺伝子にも部分的にはハイブリダイズするであろう。効果的なＰＣＲ開始およびＲＡＧＥ −１同定のためには、その３′末端でＲＡＧＥ−１以外のＲＡＧＥ遺伝子に効率的にハイブリダイズしないようにＲＡＧＥ−１特異性プライマーを構築および調整すべきである。これを達成するためには、プライマーは以下の２末端をもつものとして記載できる：挿入地点の一方側と連続的かつ相補的である５′末端、これは挿入地点の反対側と連続的かつ相補的である３′末端に直接に結合している。プライマーの５′末端を３′末端より実質的に長く作成し、かつ３′末端を短く作成することにより（すなわち１〜４ヌクレオチド）、ハイブリダイゼーションの反応速度は５′末端の方が大きくなるであろう。この場合、３′側で開始するＰＣＲ延長は、５′末端と３′末端の両方が核酸にハイブリダイズする場合にのみ、すなわちインサートを含まないＯＲＦ２が存在する場合にのみ起こるであろう。上記のＲＡＧＥ−１特異性プライマーは、本明細書中でワトソン鎖およびクリック鎖と記載するＤＮＡらせんのいずれの鎖上でもＤＮＡ合成が開始するように設計できる。ＲＡＧＥ−１において挿入地点に隣接する配列は５′−ＣＡＡＡＣＡＮＧＧＡＴＣＡ−３′(配列番号：４９；ワトソン鎖、Ｎはヌクレオチドインサート)である。ＲＡＧＥ−１のワトソン鎖を優先的に増幅するように設計されたＲＡＧＥ−１特異性プライマーは、一般に挿入地点の３′側のワトソン鎖のヌクレオチドに対し相補的な１２以上、好ましくは１５以上のヌクレオチドを含む。プライマーの残りの部分は１〜４ヌクレオチドの長さのものであり、挿入地点の５′側の配列に対して相補的である。このようなプライマーはＲＡＧＥ−１中のその相補体と完全に相補的かつ連続的である。このプライマーの３′末端はワトソン鎖中のそれの相補体にハイブリダイズし、延長を開始する。ＲＡＧＥ−１以外のＲＡＧＥ遺伝子では、ＯＲＦ２の挿入地点にある非相補的ヌクレオチドの挿入のため、ＲＡＧＥ−１特異性プライマーの３′末端はインサートの５′側のワトソン鎖にハイブリダイゼーションしないであろう。ＲＡＧＥ−１以外のＲＡＧＥ遺伝子にハイブリダイズした場合にプライマーの３′末端に生じるミス対合は、それらの遺伝子が効果的に増幅するのを妨げるであろう。プライマーの一例は、本質的に以下の配列からなる。配列中のＮは適切なワトソン鎖またはクリック鎖上の０、１またはそれ以上の連続ヌクレオチドである：ＲＡＧＥ−１の発現は、挿入地点の向き合った側で延長を開始するプライマーを用いるＰＣＲにより検出することもできる。増幅生成物を分析すると、増幅生成物の長さによりＲＡＧＥ−１増幅生成物を非ＲＡＧＥ−１増幅生成物と区別できる。ＲＡＧＥ−１遺伝子は他のＲＡＧＥ遺伝子にあるインサートを含まないので、ＲＡＧＥ−１由来の増幅生成物は他のＲＡＧＥ遺伝子に由来する増幅生成物より短いであろう（約３７塩基対だけ）。この相異は当技術分野の標準法によって容易に区別できる。実質的に相同なヌクレオチド配列を区別できる他の方法、たとえばリガーゼ連鎖反応（“ＬＣＲ”）その他の方法が当業者に自明であろう。ＲＡＧＥ−２、３および４特異性プライマーを同様に調製してもよい。本発明はＲＡＧＥ遺伝子がコードするものと同一のアミノ酸残基をコードする別個のコドンを含む核酸配列の使用も包含する。たとえば先に実施例７に記載したように、デカマーペプチドＳＰＳＳＮＲＩＲＮＴ（配列番号：４３）はＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原である。たとえばセリン残基（配列番号：４０のアミノ酸番号１、３および４）はそれぞれＴＣＡ、ＡＧＴおよびＴＣＡによりコードされる。セリンアミノ酸残基はＴＣＡおよびＡＧＴのほか、ＴＣＣ、ＴＣＧ、ＴＣＴおよびＡＧＣによってもコードできる。これら６種類のコドンの各々はセリン残基をコードする目的に関して均等である。したがって、セリン残基を取り込むようにインビトロまたはインビボでのタンパク質合成装置を指令するためにセリンコーディングヌクレオチドトリプレットのいずれも使用できることは、当業者に自明であろう。同様にＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原を含む他のアミノ酸残基をコードするヌクレオチド配列トリプレットには以下のものが含まれる：ＣＣＡ、ＣＣＣ、ＣＣＧおよびＣＣＴ（プロリンコドン）；ＣＧＡ、ＣＧＣ、ＣＧＧ、ＣＧＴ、ＡＧＡおよびＡＧＧ（アルギニンコドン）；ＡＣＡ、ＡＣＣ、ＡＣＧおよびＡＣＴ（トレオニンコドン）；ＡＡＣおよびＡＡＴ（アスパラギンコドン）；ならびにＡＴＡ、ＡＴＣおよびＡＴＴ（イソロイシンコドン）。他のアミノ酸残基も多数のヌクレオチド配列によりコードできる。したがって本発明は、遺伝子コードの縮重のためコドン配列が生物学的に単離された核酸と異なる縮重核酸を包含する。前記の各実施例はＲＡＧＥＴＲＡであるペプチドの単離も示す。これらの例示ペプチドは配列番号：１の核酸のプロセシングされた翻訳生成物である。したがってプロセシングされてＲＡＧＥＴＲＡが提示のための最終形態となる翻訳生成物はＲＡＧＥＴＲＡを含む限りいかなる長さまたは配列であってもよいことは、当業者に自明であろう。前記の各実施例に示したように、９、１０または１２アミノ酸ほどの小型のペプチドまたはタンパク質、およびＯＲＦ１がコードするほどの大型のアミノ酸配列が適切にプロセシングされ、ＨＬＡ−Ｂ７により提示され、そしてＣＴＬ２６３／１７により認識される。配列番号：２３のペプチドに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上のアミノ酸が一方または両方の末端に付加されてもよい。そのようなペプチドの抗原部分が生理学的条件下で開裂して、ＨＬＡクラスＩ分子により提示される。ＲＡＧＥＴＲＡをもたらすタンパク質およびペプチドのアミノ酸配列は、天然または非天然のいずれに由来するものであってもよい。すなわちそれらは天然ＲＡＧＥＴＲＡＰ分子であってもよく、または細胞表面に提示された場合にＣＴＬが認識する腫瘍拒絶抗原配列をアミノ酸配列が保持する限り、修飾配列を含んでもよい。たとえばこれに関連するＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原は、ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原と非関連アミノ酸配列との融合タンパク質、ＲＡＧＥ−１遺伝子のＯＲＦ２の翻訳ポリペプチド、配列番号：３９、４０および４３に示したアミノ酸配列の合成ペプチド、標識ペプチド、腎細胞癌患者から単離したペプチド、ＲＡＧＥ −１を発現する培養細胞から単離したペプチド、たとえば特定の薬物送達システムにおいて非ペプチド分子に結合したペプチド、ならびに配列番号：４０のアミノ酸配列を含む他の分子であってもよい。本発明が前記配列を発現ベクター中に、また宿主細胞および細胞系をトランスフェクションするために使用することを包含することも、実施例から認められるであろう。これらの細胞は原核細胞（たとえば大腸菌）、または真核細胞（たとえばＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、酵母発現系、および昆虫細胞中での組換えバキュロウイルス発現）のいずれであってもよい。発現ベクターは、関連配列、すなわち前記の配列がプロモーターに作動性結合していることを必要とする。ヒトＨＬＡ−Ｂ７がこれらの遺伝子に由来するＴＲＡを提示することが見出されたので、発現ベクターはＨＬＡ−Ｂ７をコードする核酸配列を含んでもよい。ベクターが両コード配列を含む場合、いずれか一方を正常には発現しない細胞をトランスフェクションするためにこれを使用できる。ＴＲＡＰまたはＴＲＡコード配列は、たとえば宿主細胞が既にＨＬＡ−Ｂ７を発現する場合には単独で使用できる。もちろん使用できる個々の宿主細胞に制限はない。上記の２コード配列を含むベクターを所望によりＨＬＡ−Ｂ７提示細胞に用いてもよく、ＨＬＡ−Ｂ７を発現しない宿主細胞中にＴＲＡＰまたはＴＲＡをコードする核酸を用いてもよい。本発明は、当業者が目的とする発現ベクターを調製できるいわゆる発現キットをも包含する。このような発現キットは、前記に述べた少なくとも２種類の物質の少なくとも別個の部分を含む。所望により他の成分を添加してもよい。本発明の核酸分子およびＴＲＡＰを従来記載されているＭＡＧＥ族、ＢＡＧＥ遺伝子およびＧＡＧＥ遺伝子と区別するために、本発明のものはＲＡＧＥ族の遺伝子およびＴＲＡＰと呼ぶべきである。したがって本明細書中で“ＲＡＧＥ”を用いる場合は常に、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥおよびＧＡＧＥ族の遺伝子、遺伝子生成物、ＴＲＡＰおよびＴＲＡは特に除外される。本明細書に記載する本発明は多数の用途をもち、そのうちの若干をここに記載する。まず本発明は、当業者がＴＲＡＰの発現を特色とする障害を診断するのを可能にする。これらの方法は、ＴＲＡＰ遺伝子の発現、および／またはそれに由来するＴＲＡ、たとえばＨＬＡ−Ｂ７が提示するＴＲＡを測定することを含む。前者の場合、この測定はポリメラーゼ連鎖反応、または標識ハイブリダイゼーションプローブを用いるアッセイを含めたいずれかの標準核酸測定アッセイ法により実施できる。後者の場合、ＴＲＡと５ＨＬＡの複合体の結合相手、たとえば抗体を用いるアッセイ法が特に好ましい。測定のための別法は前記の種類のＴＮＦ放出アッセイである。ＴＲＡＰ遺伝子を単離すると、ＴＲＡＰ分子自体、および／またはそれに由来するＴＲＡ、特に配列番号：１または４がコードするアミノ酸配列を含むＴＲＡＰおよび／またはＴＲＡ分子を単離することができる。配列番号：１、１２、１３および１４がコードし、かつ他のＣＴＬクローンが認識し、および／または他のＨＬＡ分子が提示する他のＴＲＡＰまたはＴＲＡは、本明細書に詳述する方法で単離できる。（多数のＨＬＡ分子が当業者には知られており、これにはＨＬＡ −Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−ＦおよびＨＬＡ−Ｇ遺伝子がコードするものが含まれるが、これらに限定されない。）単離したＴＲＡＰ分子および／またはそれに由来するＴＲＡを得るためには、当業者に周知の多様な方法を用いることができる。タンパク質は天然にこのタンパク質を産生する細胞から精製できる。あるいは発現ベクターを細胞に導入して、そのタンパク質を産生させることもできる。他の方法では、ｍＲＮＡ転写物をマイクロインジェクションその他の方法で細胞に導入して、そのコードするタンパク質を産生させてもよい。無細胞抽出液、たとえば網状赤血球溶解液系中でのｍＲＮＡの翻訳もタンパク質の産生に使用できる。本発明のＴＲＡを含むペプチドはインビトロで合成することもできる。当業者は、単離したＴＲＡＰおよび／またはそれに由来するＴＲＡを得るために、タンパク質単離のための既知の方法を容易に実施できる。これには免疫クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィーおよび免疫アフィニティクロマトグラフィーが含まれるが、これらに限定されない。これらの単離した分子がプロセシングされてＴＲＡとして、またはＴＲＡとＨＬＡ、たとえばＨＬＡ−Ｂ７との複合体として提示されている場合、アジュバントなどの物質と合わせて、ＴＲＡＰ分子の発現を特色とする障害の処置に有用なワクチンを製造することができる。さらに、表面にＴＲＡ／ＨＬＡ複合体を提示する細胞、たとえば非増殖性癌細胞、非増殖性トランスフェクション体などからワクチンを製造することもできる。細胞をワクチンとして用いるすべての場合、これらはＣＴＬ応答を起こすのに必要な成分の一方もしくは両方をコードする配列でトランスフェクションした細胞、またはトランスフェクションの必要なしに既に両分子を発現する細胞であってもよい。ワクチンにはＲＡＧＥＴＲＡまたはその前駆体をコードする裸のＤＮＡまたはＲＮＡも包含され、これらをインビトロで製造し、注射、粒子衝撃、経鼻吸入その他の方法で投与してもよい。“裸の核酸”型のワクチンは、裸の核酸がコードするペプチドに特異的なＣＴＬの生成を含めた免疫応答を起こすことが証明されている（Science 259:1745-1748,1993）。ＴＲＡＰ分子、それに伴うＴＲＡ、およびＴＲＡとＨＬＡの複合体を当技術分野で周知の標準法により抗体の産生に用いることができる。抗体産生の一般原理につき述べた標準的参考文献には以下のものが含まれる：Catty,D.,Antibodies. A Practical Approach ,Vol.1,IRL プレス、ワシントン DC(1988);Klein,J.,Immu nology:The Science of Cell-Non-Cell Discrimination ,ジョン・ワイリー・アンド・サンズ、ニューヨーク(1982)；Kennett,R.et al.,Monoclonal Antibodies ,Hybridoma.A New Dimension In Biological Analyses ,プレナム・プレス、ニューヨーク(1980)；Campbell,A.,Monoclonal Antibody Technology，Laboratory T echniques and Biochemistry and Molecular Biology ,Vol.13(Burdon,Rら編)、エルゼビル、アムステルダム(1984)；Eisen,H.N.,Microbiology,3版,Davis,B.D. ら編(ハーパー・アンド・ローウェ、フィラデルフィア,1980)。したがって本発明の抗体は、タンパク質、タンパク質フラグメント、タンパク質またはそのフラグメントを発現する細胞などを動物に投与してポリクローナル抗体を誘導することを含めた多様な方法で製造される。モノクローナル抗体の製造は当技術分野で周知の方法による。本明細書に詳述したように、それらの抗体を用いて、たとえばタンパク質を発現する組織を確認し、またはタンパク質を精製することができる。抗体を画像形成のための特定の標識試薬または抗腫瘍薬に結合させてもよく、これにはメトトレキセート、放射性ヨウ素化合物、リシン（ｒｉｃｉｎ）などの毒素、または静細胞薬もしくは細胞溶解薬などが含まれるが、これらに限定されない。本発明により製造される抗体は、好ましくは本明細書に記載するＴＲＡ／ＨＬＡ複合体に特異的である。本明細書中で“障害”を用いる場合、それは腫瘍拒絶抗原前駆体を発現するいかなる病理的状態をも意味する。そのような障害の一例は癌、特に腎細胞癌である。本発明に基づく幾つかの療法は、ＴＲＡ提示細胞、たとえばＨＬＡ−Ｂ７細胞の溶解をもたらす対象の免疫系による応答を前提とする。そのような方法のひとつは、前記複合体に特異的な自己由来ＣＴＬを、問題の表現型が異常な細胞を伴う対象に投与するものである。そのようなＣＴＬをインビトロで発現させるのは当業者が容易になしうる。一般に、対象から採取した細胞、たとえば血球の試料を、上記複合体を提示しかつＣＴＬを刺激して増殖させうる細胞と接触させる。標的細胞はトランスフェクション体、たとえば前記のタイプのＣＯＳ細胞であってもよい。これらのトランスフェクション体はその表面に目的複合体を提示し、当該ＣＴＬと結合するとその増殖を刺激する。本明細書中で用いるＣＯＳ細胞は、他の好適な宿主細胞と同様に広く入手できる。ＣＴＬクローンの特異的産生については前記に述べた。次いでクローンとして増殖させた自己由来ＣＴＬを対象に投与する。ＲＡＧＥ−１に特異的な他のＣＴＬ、およびＲＡＧＥ−２、３または４がコードするＲＡＧＥＴＲＡに特異的なＣＴＬを単離し、同様な方法で投与することができる。養子移入と呼ばれる療法につき詳述すると（Greenberg,J.Immunol.136(5):191 7(1986)；Riddle et al.,Science 257:238(7-10-92)；Lynch et al.,Eur.J.Immu nol.21:1403-1410(1991)；Kast et al.,Cell 59:603-614(11-17-89)）、目的複合体を提示する細胞をＣＴＬと混和し、それに特異的なＣＴＬを増殖させる。次いで増殖したＣＴＬを、特定の複合体を提示する一定の異常な細胞を特色とする細胞異常を伴う対象に投与する。次いでＣＴＬが異常細胞を溶解し、これにより希望する療法目標を達成する。上記の療法では、対象の異常細胞のうち少なくとも若干は関連のＨＬＡ／ＴＲＡ複合体を提示すると仮定する。特定のＨＬＡ分子を提示する細胞を同定する方法、および関連配列（この場合はＲＡＧＥ配列）のＤＮＡを発現する細胞を同定する方法は当技術分野で周知であるので、複合体は容易に測定できる。関連複合体を提示する細胞が上記スクリーニング法により同定されると、それらを患者から得た試料と混和するが、その際、試料はＣＴＬを含有している。複合体提示細胞が混合ＣＴＬ試料により溶解された場合にはＲＡＧＥ由来ＴＲＡが存在すると推定でき、その対象は上記の療法に適した候補である。養子移入法が本発明により利用できる唯一の療法形態ではない。ＣＴＬをインビボで、多数の方法により刺激することもできる。１方法、すなわち複合体を発現する非増殖性細胞の使用については前記に詳述した。この方法に用いる細胞は、複合体を正常に発現する細胞、たとえば照射した腫瘍細胞、または複合体の提示に必要な遺伝子の一方または両方でトランスフェクションした細胞であってもよい。Chen et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:110-114(1991年1月)にこの方法が例示され、ＨＰＶＥ７ペプチドを発現するトランスフェクション細胞を療法に使用することを示した。種々の細胞タイプを使用できる。当該遺伝子の一方または両方を保有するベクターも使用できる。ウイルス又は細菌のベクターが特に好ましい。たとえばＲＡＧＥＴＲＡをコードする核酸を、特定の組織または細胞タイプ中でＲＡＧＥＴＲＡの発現を指令するプロモーター配列およびエンハンサー配列に作動性結合させることができる。この核酸を発現ベクターに取り込ませる。発現ベクターは、修飾されていない染色体外核酸、外因性核酸、たとえばＲＡＧＥＴＲＡをコードするものを挿入しうるように構築または修飾したプラスミドまたはウイルスゲノムであってもよい。ＲＡＧＥＴＲＡをコードする核酸をレトロウイルスゲノムに挿入し、これにより標的組織または細胞タイプのゲノム中への核酸の組込みを促進することもできる。これらの系では、当該遺伝子を微生物、たとえばＶａｃｃｉｎｉａウイルス、レトロウイルスまたは細菌ＢＣＧに保有させ、これらの材料を実際に宿主細胞に“感染”させる。得られた細胞は当該複合体を提示し、自己由来ＣＴＬにより認識され、次いでこれが増殖する。ＴＲＡＰまたはその刺激性フラグメントをアジュバントと混和して、インビボでのＨＬＡ−Ｂ７提示細胞中への取込みを促進することにより、同様な効果を達成できる。ＴＲＡＰはプロセシングされてＨＬＡ分子の相手ペプチドを生成し、一方ＴＲＡはそれ以上のプロセシングの必要なしに提示される。一般に、対象に有効量のＲＡＧＥＴＲＡＰおよび／またはそれに由来するＴＲＡを皮内注入する。当技術分野で標準的な免疫化プロトコールに従って、初回量に続いて追加免疫量を投与できる。免疫化プロトコールの一部として、免疫応答を増強する物質を、癌ワクチンの核酸またはペプチド成分と共に投与してもよい。このような免疫応答増強化合物をアジュバントまたはサイトカインとして分類できる。アジュバントは抗原の溜めを提供し（細胞外、またはマクロファージ内に）、マクロファージを活性化し、一組の特異的リンパ球を刺激することにより、免疫応答を高めることができる。種々のアジュバントが当技術分野で周知であり、具体例にはＭＰＬ（スミスクライン・ビーチャム）、ＳａｌｍｏｎｅｌｌａｍｉｎｎｅｓｏｔａＲｅ５９５リポ多糖類の精製および酸加水分解後に得られる同族体、ＱＳ２１（スミスクライン・ビーチャム）、Ｑｕｉｌｌｊａｓａｐｏｎａｒｉａ抽出液から精製した純粋なＱＡ−２１サポニン、および生分解性油、たとえばスクアレンおよび／またはトコフェロールから調製した種々の油中水型エマルションが含まれる。サイトカインはリンパ球刺激性の結果として、ワクチン接種プロトコールにも有用である。この目的に有用な多数のサイトカインが当業者に周知であり、ワクチンの防御効果を高めることが示されたインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）が含まれる（Science 268:1432-1434,1995）。投与する際、薬剤学的に許容しうる製剤の形態で本発明の療法用組成物を投与する。このような製剤は一般に薬剤学的に許容しうる濃度の塩類、緩衝剤、防腐剤、相容性キャリヤー、補助免疫増強剤、たとえばアジュバントおよびサイトカイン、ならびに所望により他の療法薬を含有してもよい。本発明の製剤を有効量投与する。有効量は、単独で、または他の投与物質と一緒に、目的とする応答を刺激する医薬製剤量である。癌の治療の場合、目的とする応答は癌進行の阻止である。これは疾病の進行速度を一時的に低下させるものであってもよいが、より好ましくは疾病の進行を永久的に停止するものである。これは常用される方法で監視するか、または本明細書に述べた本発明の診断法により監視できる。本発明の療法用組成物を用いて免疫応答を刺激することを目的とする場合、これは体液性抗体反応を刺激し、その結果、血清中の抗体力価の上昇、細胞毒性リンパ球のクローン増加、その他の望ましい免疫応答をもたらすことを含む。投与様式に応じて１ｎｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇまでの量の免疫原の投与量が有効であると考えられる。好ましい範囲は５００ｎｇ〜５００μｇ／ｋｇであると考えられる。絶対量は多様な要因に依存し、投与のために選択する物質、投与が１回量または多数回量のいずれであるか、ならびに年齢、身体的条件、体格、体重、および疾病の段階を含めた個々の患者のパラメーターがこれに含まれるであろう。これらの要因は当業者に周知であり、常用試験以上のものを行わずに対処できる。本発明の他の態様は当業者に自明であり、ここで繰返す必要はないであろう。用いた用語および表現は説明のためのものであり、限定ではなく、それらの用語および表現を用いる際に図示もしくは記載したものの均等物またはその一部を除外することはなく、本発明の範囲内で種々の変更が可能であると解される。参考文献 1） Gleser,L.,and Swaroop,A.,1992．サブトラクトした網膜色素上皮ライブラリー由来のcDNAクローンの配列タグの発現および染色体内局在． Genomics 13. 873-876. 2） Mager,D.,and Freeman,J.D.1987．ヒトＴ細胞リンパ親和性ウイルス関連のタイプＣ pol配列およびgag配列を含むヒト内因性レトロウイルス様ゲノム． J.Virol.61.4060-4066. 3） Hirose,Y.,Takamatsu,M.,Harada,F..1993． RTLV-H族の員子中におけるヒト内因性レトロウイルス様要素のenv遺伝子の存在． Virology 192.52-61.

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年３月２３日【補正内容】請求の範囲１．配列番号：４０のアミノ酸配列またはその機能的変異体を含む単離したポリペプチド。２．単離したポリペプチドが配列番号：４３のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の単離したポリペプチド。３．単離したポリペプチドが配列番号：４０および配列番号：４３よりなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１記載の単離したポリペプチド。４．単離したポリペプチドが配列番号：４０および配列番号：４３よりなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の単離したポリペプチド。５．請求項１記載のポリペプチド、請求項２記載のポリペプチド、請求項３記載のポリペプチド、および請求項４記載のポリペプチドよりなる群から選択されるポリペプチドをコードする、単離した核酸。６．核酸が配列番号：４４を含む、請求項５記載の単離した核酸。７．プロモーターに作動性結合した請求項５記載の単離した核酸を含む発現ベクター。８．核酸が配列番号：４４を含む、請求項７記載の発現ベクター。９．さらに、ＨＬＡ−Ｂ７をコードする核酸を含む、請求項７または８記載の発現ベクター。１０．請求項７記載の発現ベクター、請求項８記載の発現ベクターおよび請求項９記載の発現ベクターよりなる群から選択される発現ベクターでトランスフェクションまたは形質転換した宿主細胞。１１．請求項７記載の発現ベクターおよび請求項８記載の発現ベクターよりなる群から選択される発現ベクターでトランスフェクションまたは形質転換した宿主細胞であって、ＨＬＡ−Ｂ７を発現する宿主細胞。１２．配列番号：５０〜５７のいずれか１つからなる核酸よりなる群から選択される第１プライマー、およびＲＡＧＥ１遺伝子のみに特徴的なＯＲＦ２の部分を第１プライマーと一緒に選択的に増幅すべく構築および調整した第２プライマーを含む、腫瘍拒絶抗原前駆体の発現の存在を検出するためのキット。１３．Ｔ細胞集団を、ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原に特異的な細胞溶解性Ｔ細胞で選択的に富化する方法であって、単離したＴ細胞集団を、この単離したＴ細胞集団を細胞溶解性Ｔ細胞で選択的に富化するのに十分な量の、ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原とＨＬＡ提示分子の複合体を提示する物質と接触させることを含む方法。１４．ＨＬＡ提示分子がＨＬＡ−Ｂ７であり、かつＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原が配列番号：４０のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸配列からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１３記載の方法。１５．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドの発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料をＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドに特異的な物質と接触させ、そして該物質とＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドの相互作用をその障害の決定因子として測定することを含む方法。１６．ペプチドが配列番号：４０のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸配列からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１５記載の方法。１７．ＨＬＡ−Ｂ７分子との複合体を形成するＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドの発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料を、前記複合体を結合する物質と接触させ、そして前記の複合体と物質の結合をその障害の決定因子として測定することを含む方法。１８．ペプチドが配列番号：４０のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸配列からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１７記載の方法。１９．医薬の製造における、ＨＬＡ−Ｂ７とＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原の複合体の存在を対象において選択的に高める物質の使用。２０．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原が配列番号：４０のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸配列からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１９記載の使用。２１．医薬の製造における、ＨＬＡ−Ｂ７分子とＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原の複合体に特異的な自己由来の細胞溶解性Ｔ細胞を含む組成物の使用。２２．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原が配列番号：４０のアミノ酸からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項２１記載の使用。２３．（ａ）配列番号：１；配列番号：４；配列番号：６；配列番号：１０；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１５；配列番号：１７；配列番号：２３および／または配列番号：３５よりなる群から選択される核酸配列からなる分子に緊縮条件下でハイブリダイズし、かつ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする単離した核酸分子であって、ただしＭＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＢＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードしない単離した核酸分子；（ｂ）遺伝子コードの縮重のためコドン配列が（ａ）の核酸分子と異なる核酸分子；並びに（ｃ）（ａ）および（ｂ）の相補体。２４．単離した核酸分子がｃＤＮＡ分子またはｍＲＮＡ分子である、請求項２３記載の単離した核酸分子。２５．単離した核酸分子が、配列番号：１、配列番号：１２、配列番号：１３および／または配列番号：１４よりなる群から選択される配列を有する分子によりコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする、請求項２３記載の単離した核酸分子。２６．単離した核酸分子が、配列番号：１のヌクレオチド２０４〜３２６、配列番号：１のヌクレオチド３１３〜３９９、配列番号：１のヌクレオチド４４４〜６６５、配列番号：１２のヌクレオチド２７３〜４４９、配列番号：１２のヌクレオチド２１７〜２７６、配列番号：１３のヌクレオチド１８５〜２４７、および／または配列番号：１４のヌクレオチド２６９〜８３２よりなる群から選択される核酸分子に相補的である核酸分子を含む、請求項２３記載の単離した核酸分子。２７．配列番号：１、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：２３、配列番号：３５、および／または配列番号：４５よりなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる、単離した核酸分子。２８．プロモーターに作動性結合した、請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の単離した核酸分子を含む発現ベクター。２９．請求項２８記載の発現ベクターでトランスフェクションまたは形質転換した宿主細胞。３０．配列番号：１；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１の相補体；配列番号：１２の相補体；配列番号：１３の相補体；および／または配列番号：１４の相補体よりなる群から選択される配列のユニークフラグメントからなる単離した核酸であって、ユニークフラグメントが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１および／または３２のヌクレオチドの長さであり、但し、上記の単離した核酸がＥＭＢＬデータベースアクセッション番号Ｍ９１４００からなる配列を除外する、上記の単離した核酸。３１．配列番号：１；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１の相補体；配列番号：１２の相補体；配列番号：１３の相補体；および／または配列番号：１４の相補体よりなる群から選択される配列のユニークフラグメントからなる単離した核酸であって、フラグメントが２００から２０５０のヌクレオチドの長さである、上記の単離した核酸。３２．ユニークフラグメントが２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１および／または３２ヌクレオチドの長さである、請求項３０記載の単離した核酸。３３．請求項２３記載の単離した核酸分子を選択的に増幅すべく構築および調整した一対の単離した核酸分子を含む、腫瘍拒絶抗原前駆体の発現の存在を検出するためのキット。３４．一対の単離した核酸分子がＰＣＲプライマーである、請求項３３記載のキット。３５．請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の核酸分子によりコードされる、単離した腫瘍拒絶抗原前駆体。３６．プロセシングされてＨＬＡ分子と複合体を形成するＲＡＧＥ由来の腫瘍拒絶抗原になるＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体の発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料を、前記複合体を結合する物質と接触させ、そして前記の複合体と物質の結合をその障害の決定因子として測定することを含む方法。３７．核酸によりコードされるＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体の発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料を前記の核酸またはその発現生成物に特異的な物質と接触させ、その際、核酸は請求項２３に記載の核酸であり、そして前記の物質と核酸またはその発現生成物との相互作用をその障害の決定因子として測定することを含む方法。３８．物質が、配列番号：１；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１のユニークフラグメント；配列番号：１２のユニークフラグメント；配列番号：１３のユニークフラグメント；および配列番号：１４のユニークフラグメントよりなる分子の群から選択される核酸分子を含み、ユニークフラグメントが、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１および／または３２のヌクレオチドの長さである、請求項３７記載の方法。３９．医薬の製造における、ＨＬＡと請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の分子によりコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体に由来する腫瘍拒絶抗原との複合体の存在を対象において選択的に高める物質の使用。４０．医薬の製造における、自己由来の細胞溶解性Ｔ細胞を含む組成物の使用であって、上記細胞溶解性Ｔ細胞が、ＨＬＡ分子と請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の分子によりコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体に由来する腫瘍拒絶抗原との複合体に特異的である、上記の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＹＣ１２Ｐ 21/02 ＤＧ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＪＰ，ＮＯ，ＮＺ (72)発明者ゴーグレ，ベアトリッスベルギー王国ベー−1200 ブリュッセル, ユセーエル 7459，アヴニュ・イポクラット 74，アンスティテュ・ルートヴィヒ・プール・ルシェルシュ・スュール・ル・カンセール (72)発明者ヴェン・デン・エインデ，ブノアベルギー王国ベー−1200 ブリュッセル, ユセーエル 7459，アヴニュ・イポクラット 74，アンスティテュ・ルートヴィヒ・プール・ルシェルシュ・スュール・ル・カンセール (72)発明者シュリール，ペーターオランダ国エヌエル−2312 アーヴェーライデン，スターションズヴェーク 46 (72)発明者ブロアーンストリン，ナタリーオランダ国エヌエル−2312 アーヴェーライデン，スターションズヴェーク 46 (72)発明者ブン−ファレール，ティエリーオランダ国エヌエル−1200 ブリュッセル，ユセーエル 7459，アヴニュ・イポクラット 74，アンスティテュ・ルートヴィヒ・プール・ルシェルシュ・スュール・ル・カンセール

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号：４０のアミノ酸配列を含む単離したポリペプチド。２．単離したポリペプチドが配列番号：４３のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の単離したポリペプチド。３．単離したポリペプチドが本質的に配列番号：４０および配列番号：４３よりなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の単離したポリペプチド。４．単離したポリペプチドが配列番号：４０および配列番号：４３よりなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１記載の単離したポリペプチド。５．請求項１記載のポリペプチド、請求項２記載のポリペプチド、請求項３記載のポリペプチド、および請求項４記載のポリペプチドよりなる群から選択されるポリペプチドをコードする、単離した核酸。６．核酸が配列番号：４４を含む、請求項５記載の単離した核酸。７．プロモーターに作動性結合した請求項５記載の単離した核酸を含む発現ベクター。８．核酸が配列番号：４４を含む、請求項７記載の発現ベクター。９．さらに、ＨＬＡ−Ｂ７をコードする核酸を含む、請求項７または８記載の発現ベクター。１０．請求項７記載の発現ベクター、請求項８記載の発現ベクターおよび請求項９記載の発現ベクターよりなる群から選択される発現ベクターでトランスフェクションまたは形質転換した宿主細胞。１１．請求項７記載の発現ベクターおよび請求項８記載の発現ベクターよりなる群から選択される発現ベクターでトランスフェクションまたは形質転換した宿主細胞であって、ＨＬＡ−Ｂ７を発現する宿主細胞。１２．本質的に配列番号：５０〜５７のいずれか１つからなる核酸よりなる群から選択される第１プライマー、およびＲＡＧＥ１遺伝子のみに特徴的なＯＲＦ２の部分を第１プライマーと一緒に選択的に増幅すべく構築および調整した第２プライマーを含む、腫瘍拒絶抗原前駆体の発現の存在を検出するためのキット。１３．Ｔ細胞集団を、ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原に特異的な細胞溶解性Ｔ細胞で選択的に富化する方法であって、単離したＴ細胞集団を、この単離したＴ細胞集団を細胞溶解性Ｔ細胞で選択的に富化するのに十分な量の、ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原とＨＬＡ提示分子の複合体を提示する物質と接触させることを含む方法。１４．ＨＬＡ提示分子がＨＬＡ−Ｂ７であり、かつＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原が配列番号：４０のアミノ酸からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１３記載の方法。１５．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドの発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料をＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドに特異的な物質と接触させ、そして該物質とＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドの相互作用をその障害の決定因子として測定することを含む方法。１６．ペプチドが配列番号：４０のアミノ酸からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１５記載の方法。１７．ＨＬＡ−Ｂ７分子との複合体を形成するＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原ペプチドの発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料を、前記複合体を結合する物質と接触させ、そして前記の複合体と物質の結合をその障害の決定因子として測定することを含む方法。１８．ペプチドが配列番号：４０のアミノ酸からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１７記載の方法。１９．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原の発現を特色とする障害を伴う対象を処置する方法であって、該対象に、対象においてＨＬＡ−Ｂ７とＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原の複合体の存在を選択的に高める物質を、障害の軽減に十分な量投与することを含む方法。２０．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原が配列番号：４０のアミノ酸からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項１９記載の方法。２１．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原の発現を特色とする障害を伴う対象を処置する方法であって、該対象に、ＨＬＡ−Ｂ７分子とＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原の複合体に特異的な自己由来の細胞溶解性Ｔ細胞を、障害の軽減に十分な量投与することを含む方法。２２．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原が配列番号：４０のアミノ酸からなるペプチドおよび配列番号：４３のアミノ酸からなるペプチドよりなる群から選択される、請求項２１記載の方法。２３．(ａ)配列番号：１；配列番号：４；配列番号：６；配列番号：１０；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１５；配列番号：１７；配列番号：２３および／または配列番号：３５よりなる群から選択される核酸配列からなる分子に緊縮条件下でハイブリダイズし、かつ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする単離した核酸分子であって、ただしＭＡＧＥ、ＧＡＧＥまたはＢＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードしない単離した核酸分子；ならびに（ｂ）遺伝子コードの縮重のためコドン配列が（ａ）の核酸分子と異なる核酸分子。２４．単離した核酸分子がｃＤＮＡ分子またはｍＲＮＡ分子である、請求項２３記載の単離した核酸分子。２５．単離した核酸分子が、配列番号：１、配列番号：１２、配列番号：１３および／または配列番号：１４よりなる群から選択される配列を有する分子によりコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体をコードする、請求項２３記載の単離した核酸分子。２６．単離した核酸分子が、配列番号：１の２０４〜３２６、配列番号：１の３１３〜３９９、配列番号：１の４４４〜６６５、配列番号：１２の２７３〜４４９、配列番号：１２の２１７〜２７６、配列番号：１３の１８５〜２４７、および／または配列番号：１４の２６９〜８３２よりなる群から選択されるヌクレオチドに相補的である核酸分子を含む、請求項２３記載の単離した核酸分子。２７．本質的に配列番号：１、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：１０、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１７、配列番号：２３、配列番号：３５、および／または配列番号：４５よりなる群から選択されるヌクレオチド配列からなる、単離した核酸分子。２８．プロモーターに作動性結合した、請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の単離した核酸分子を含む発現ベクター。２９．請求項２８記載の発現ベクターでトランスフェクションまたは形質転換した宿主細胞。３０．本質的に、配列番号：１；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１の相補体；配列番号：１２の相補体；配列番号：１３の相補体；および／または配列番号：１４の相補体よりなる群から選択される配列のユニークフラグメントからなる、単離した核酸。３１．フラグメントが２００〜２０５０ヌクレオチドの長さである、請求項３０記載の単離した核酸。３２．フラグメントが１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１および／または３２ヌクレオチドの長さである、請求項３０記載の単離した核酸。３３．請求項２３記載の単離した核酸分子を選択的に増幅すべく構築および調整した一対の単離した核酸分子を含む、腫瘍拒絶抗原前駆体の発現の存在を検出するためのキット。３４．一対の単離した核酸分子がＰＣＲプライマーである、請求項３３記載のキット。３５．請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の核酸分子によりコードされる、単離した腫瘍拒絶抗原前駆体。３６．プロセシングされてＨＬＡ分子と複合体を形成するＲＡＧＥ由来の腫瘍拒絶抗原になるＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体の発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料を、前記複合体を結合する物質と接触させ、そして前記の複合体と物質の結合をその障害の決定因子として測定することを含む方法。３７．核酸によりコードされるＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体の発現を特色とする障害の診断方法であって、対象から単離した生物学的試料を前記の核酸またはその発現生成物に特異的な物質と接触させ、その際、核酸は配列番号：１；配列番号：４；配列番号：６；配列番号：１０；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１５；配列番号：１７；配列番号：２３および／または配列番号：３５よりなる群から選択される核酸配列からなる分子に緊縮条件下でハイブリダイズし、かつ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードし、ただし単離した核酸分子はＭＡＧＥ、ＧＡＧＥまたはＢＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体をコードせず、そして前記の物質と核酸またはその発現生成物との相互作用をその障害の決定因子として測定することを含む方法。３８．物質が、配列番号：１；配列番号：１２；配列番号：１３；配列番号：１４；配列番号：１のユニークフラグメント；配列番号：１２のユニークフラグメント；配列番号：１３のユニークフラグメント；および配列番号：１４のユニークフラグメントよりなる分子の群から選択される核酸分子を含む、請求項３７記載の方法。３９．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体の発現を特色とする障害を伴う対象を処置する方法であって、該対象に、対象においてＨＬＡと請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の分子によりコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体に由来する腫瘍拒絶抗原との複合体の存在を選択的に高める物質を、障害の軽減に十分な量投与することを含む方法。４０．ＲＡＧＥ腫瘍拒絶抗原前駆体の発現を特色とする障害を伴う対象を処置する方法であって、該対象に、ＨＬＡ分子と請求項２３、２４、２５、２６または２７記載の分子によりコードされる腫瘍拒絶抗原前駆体に由来する腫瘍拒絶抗原との複合体に特異的な自己由来の細胞溶解性Ｔ細胞を、障害の軽減に十分な量投与することを含む方法。