JPH11510147A

JPH11510147A - 成長ホルモンに対する阻害活性をもつソマトスタチン類似環状ペプチド

Info

Publication number: JPH11510147A
Application number: JP9507186A
Authority: JP
Inventors: デゲンギ，ロマノ
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1995-07-28
Filing date: 1996-07-17
Publication date: 1999-09-07
Also published as: AU6700996A; KR100321448B1; WO1997005167A1; ATE213742T1; PT842193E; IT1277391B1; HK1008225A1; ITMI951670A1; DE69619530D1; US5962409A; KR19990035961A; CA2227980A1; DE69619530T2; BR9609801A; EP0842193A1; ES2171704T3; ITMI951670A0; EP0842193B1; DK0842193T3

Abstract

(57)【要約】成長ホルモンに対する阻害活性を有する、一般式（Ｉ）の環状ペプチドであって、式中、基は開示に記述されるようである。式（Ｉ）のペプチドはまた抗癌活性も有する。

Description

【発明の詳細な説明】成長ホルモンに対する阻害活性をもつソマトスタチン類似環状ペプチド本発明は、ソマトスタチンに相同でありかつ成長ホルモンに対する阻害活性を有する環状ペプチドに関する。発明の背景ソマトスタチンすなわちソマトトロピン放出阻害因子は、成長ホルモン（ソマトトロピン）の放出を阻害する神経ペプチドである。多数のソマトスタチン合成類似物が既知であり、それらはヒトおよび動物の治療で使用される。とりわけ、オクトレオチド(octreotide)が長い間既知であり、これは、胃腸内膵内分泌腫瘍、末端巨大症による症候群の治療のための療法で、ならびに膵外科手術後の術後処置で使用されるソマトスタチン合成類似物である。オクトレオチドはまた、胃腺分泌を阻害する作用物質としても指摘される。この化合物はUS 4 ,395,403に（サンド社(Sandoz)の名称で）記述され、また、式：を有する。上に記述されるオクタペプチドは、芳香環の１位で場合によっては置換されるフェニルアラニン残基、２位のシステイン残基、インドール環の４位で場合によっては置換されるD-トリプトファン残基、位置εで場合によってはＮ-アルキル化される５位のリシン残基、６位のアミノ酸残基および７位のシステイン残基を含有し、２および７のシステイン残基の２個のイオウ原子は一緒に結合されておるヘキサペプチド残基を、ならびに８位のアミノ酸残基を含んで成る単環性ポリペプチドの一般式内にある。ランレオチド(Lanreotide)の名称で知られる別のソマトスタチン合成類似物が、最近、治療で使用されている。この化合物は式：を有する。発明の要約今や、式（Ｉ）式中、ＡはD-２AlkTrp、D-βNal、D-Pheであり、ＢはTyr、Pheであり、ＣはVal、Thrであり、ＲはThrＮＨ₂、２AlkTrpＮＨ₂であるが、但しＡがD-βNalである場合、ＢはTy rでなく、ＣはValでなくそしてＲはThrＮＨ₂でない、の化合物、ならびにこれらのペプチドの製薬学的に許容できる塩が、成長ホルモンの放出を阻害する活性を有し、そして従ってヒトおよび動物の薬物の有効成分として有用であることが見出されている。本発明は、US 4,395,403で不可欠と定義されていた一定の構造的特徴の変化が、ソマトスタチン様活性を保持するのみならず、特異性に関してさらなる利点も示すという最も驚くべき知見に基づく（例えば、下垂体腺腫（ミラー(G.M．Mill er)ら J.C.E.M．80、1386、1995）のおよび気管支類癌腫（ルファブル(H．Lefabre)ら J.C.E.M．80、1423、1995）のレセプターサブタイプの発現を参照）。発明の詳細な記述本明細書で使用されるアミノ酸残基の略語は、ペプチドの標準的な命名法に従い、その結果、上で報告される式（Ｉ）で、 Cys ＝システイン、 D-Typ ＝D-トリプトファン、 Lys ＝L-リシン、 D-AlkTtp ＝D-２-アルキルトリプトファン、 D-β-Nal ＝D-β-ナフチルアラニン、 D-Phe ＝D-フェニルアラニン、 Tyr ＝L-チロシン、 Phe ＝L-フェニルアラニン、 Val ＝L-バリン、 Thr ＝L-トレオニン、 ThrＮＨ₂ ＝L-トレオニンアミド AlkTrpＮＨ₂＝L-２-アルキルトリプトファンアミド。本発明に従えば、トリプトファン残基の位置２のアルキルについては、１から３個までの炭素原子を含んで成る低級アルキルが意図されている。低級アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルである。それらのうち、メチル基が最も好ましく、また、略語MeTrpは２-メチルトリプトファンを示すのに使用される。「D」により先行されるアミノ酸の全ての３文字略語はそのアミノ酸残基のD配置を指摘する。本発明の好ましい化合物は、式中、MeTrpは2-メチルトリプトファンである、である。化合物式中、MeTrpは２-メチルトリプトファンである、が最も好ましい。本発明のポリペプチド化合物は、固相および溶液の双方のペプチド化学の常法により、もしくは当該技術分野で既知の古典的方法によって、合成され得る。固相合成はペプチドのＣ末端から開始する。適する出発原料が、例えば、必要とされる保護されたαアミノ酸を、クロロメチル化樹脂、ヒドロキシメチル化樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）に、もしくはパラメチルベンズヒドリルアミン樹脂（ｐ-Me-ＢＨＡ）に付着させて調製され得る。例として、クロロメチル化樹脂は、バイオラッドラボラトリーズ(BioRad Laboratories)、カリフォルニア州リッチモンド、により商標バイオビーズ［BIOBEADS］（商標）ＳＸ１で販売される。ヒドロキシメチル樹脂の調製はボダンスキ(Bodansky)ら、Chem．Ind．（ロンドン）38、15997、(1966)により記述される。ＢＨＡ樹脂はピエッタ(Pietta)とマーシャル(Marshall)、Chem．Comm.、650(1970)により記述され、また、ペニンシュララボラトリーズインク(Peninsula Laboratories Inc.)、カリフォルニア州ベルモント、により商業的に入手可能である。開始する付着の後、αアミノ酸の保護基は、室温で有機溶媒に溶解されたトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）もしくは塩酸（ＨＣｌ）を含んで成る多様な酸試薬によって除去され得る。αアミノ酸の保護基の除去の後、残りの保護されたアミノ酸が所望の順序で段々と結合され得る。それぞれの保護されたアミノ酸は、一般に、例えばジクロロメタン（ＣＨ₂Ｃｌ₂）もしくはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびそれらの混合物に溶解されたジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）もしくはジイソプロピルカルボキシイミド（ＤＩＣ）のような適するカルボキシル活性化基を使用して約３倍の過剰で反応され得る。所望のアミノ酸配列が完成された後、所望のペプチドがフッ化水素（ＨＦ）のような試薬での処理により支持する樹脂から切断され得る。フッ化水素は、ペプチドのみならず側鎖のより普遍的な保護基も樹脂から切断する。クロロメチル化樹脂もしくはヒドロキシメチル化樹脂が使用される場合、ＨＦでの処理は遊離の形態の酸ペプチドの形成をもたらす。ＢＨＡもしくはｐ-Me-ＢＨＡ樹脂が使用される場合、ＨＦでの処理は直接、遊離の形態のアミドペプチドの形成をもたらす。上述の固相方法は当該技術分野で既知であり、また、エイタートン (Atherton)とシェパード(Sheppard)、Solid Phase Peptide Synthesis（ＩＲＬプレス(IRL Press)、オックスフォード、1989）により記述された。本発明のペプチド部分を合成するのに使用され得る溶液でのいくつかの方法は、ボダンスキ(Bodansky)ら、Peptide Synthesis、第２版、ジョンウィレイアンドサンズ(John Wiley & Sons)、ニューヨーク州ニューヨーク、1976に、および、ジョーンズ(Jones)、The Chemical Synthesis of Peptides、（クラレンドンプレス(Clarendon Press)、オックスフォード、1994）に詳述される。これらの化合物は、当該分野の専門家により容易に決定され得そして治療される対象の種、年齢、性および体重に従って変化し得る有効量で動物およびヒトに投与され得る。例えば、ヒトでは、静脈内に投与される場合、好ましい用量は、体重１kgあたり総ペプチド約0.1μgから10μgまでの範囲にある。経口で投与される場合は典型的により高い用量が必要である。例えば、ヒトでの経口投与には、投薬量レベルは典型的に体重１kgあたりポリペプチド約30μgから約1000μgまでである。正確なレベルは上の開示に基づき経験的に容易に決定され得る。有効成分として上に記述されるポリペプチドの有機および無機の付加塩、ならびに場合によってはベヒクル、希釈剤、マトリックスもしくは徐放性コーティングとの混合剤中のそれらの組み合わせ剤を含んで成る組成物もまた、本発明の範囲に含まれる。皮下埋込物に適する生物侵食性(bioerosible)マトリックスを含んで成る徐放性の製薬学的形態はとりわけ興味深い。これらのマトリックスの例はWO9222600およびWO9512629に記述される。本発明のペプチドの生物学的活性はインビトロおよびインビボで評価されている。ソマトスタチンレセプターへの当該ペプチドの結合の研究は、変性ポリアクリルアミドゲルでの電気泳動分析の前にレセプターから放射リガンド（11-Tyr放射ヨウ化ソマトスタチン-14）を置き換えることに存する置換法により実施されている（プレヴォ(Prevost)ら European J．Cancer、11、1589-1592、1993）。生物学的活性を、ラットおよびヒトの細胞株、すなわち、２個の70および57kD aのレセプターをもつ下垂体腫瘍から開始して樹立されたＧＨ３ラット細胞株、２個の主要な57および42kDaのレセプターをもつ乳癌の胸膜滲出液から開始して樹立されたＭＣＦ７ヒト細胞株、および57kDaのレセプターをもつ肺の小細胞癌から開始して樹立されたヒト細胞株で試験した。試験は、それぞれ文字ｂ、ｃ、ｄ、ｅで指摘される、下に列挙される本発明の以下の化合物すなわち式中、MeTrpは２-メチルトリプトファンである、で遂げた。比較として、既知のペプチド、ランレオチド（マーフィ(W.A．Murphy)ら Lif e Sci．40、2515、1987）、アンタレリックス(Antarelix)（デゲンギ(R．Deghen ghi)ら、Biomed．& Pharmacother．47、107、1993）、およびソマトスタチン-14 を使用した。放射ラベルされたソマトスタチンとレセプターとの間の結合の試験されるペプチドによる置換の薬理学的研究は、70kDaの複合体が１もしくは４のサブタイプのレセプターに対応し、57kDaの複合体がサブタイプ２に対応し、そして42kDaの複合体がサブタイプ３もしくは５に対応することを示した。試験されるペプチドは10mMの最終濃度で0.1％酢酸に懸濁し、そして４℃で保存した。試験は10^-6Mの濃度で実施した。電気泳動でのオートラジオグラフィーは、70kDaの複合体がソマトスタチン-14 によりのみ抑制される一方、57kDaの複合体は本発明のペプチドにより、ランレオチドにより置換されるが、しかしアンタレリックスにより置換されないことを示している。42kDaの複合体は本発明のペプチドのｃ、ｄ、ｅにより抑制され、これはかように活性特異性を証明する。減少する濃度すなわち10^-6、10^-7、10^-8Mでの試験は、本発明の化合物が既知の化合物およびソマトスタチンに比較してとりわけ活性であることを示している。本発明の化合物は成長ホルモンの放出に対する阻害活性を有し、従ってそれらは成長ホルモンの不均衡により特徴づけられる疾患の治療のための薬物の調製のための有効成分として有用である。とりわけそれらは内分泌腫瘍、末端巨大症の、および既知のソマトスタチン類似物が使用される疾患での治療に有用である。別の局面により、本発明は、上に示される式（Ｉ）の環状ペプチドを、ソマトスタチンレセプターの存在により特徴づけられる腫瘍の診断薬として有用な放射活性マーカー例えば¹²⁵ヨウ素もしくは¹¹¹インジウムもしくは^99mテクネチウムの支持体として提供する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年７月２９日【補正内容】ランレオチド(Lanreotide)の名称で知られる別のソマトスタチン合成類似物が、最近、治療で使用されている。この化合物は式：を有する。 EP 0203031、Proc．Natl．Acad．Sci(1987)、pp.2502-2506およびEP 0214872 は、ソマトスタチン類似物でありかつリシンを含有するオクタペプチドを記述する。このオクタペプチドは有効なＧＨ阻害剤であるが、しかし、異なるＧＨレセプターに対する選択性の指摘は存在しない。 EP 0505680は、位置１に強力に疎水性の置換基をもつ、強力なソマトスタチン様活性を有するオクタペプチドを記述する。 WO 91118016は、酸化的分解に対する生物学的に活性なペプチドの抵抗性を強めるための、それらのD-TrpのD-２-アルキル-Trpでの置換を記述する。発明の要約今や、式（Ｉ）式中、ＡはD-２AlkTrp、D-βNal、D-Pheであり、ＢはTyr、Pheであり、ＣはVal、Thrであり、ＲはThrＮＨ₂、２AlkTrpＮＨ₂であり、ＡもしくはＲの最低１個がそれぞれD-AlkTrpもしくはAlkTrpであるが、但し、ＡがD-βNalである場合、ＢはT yrでなく、ＣはValでなくそしてＲはThrＮＨ₂でない、の化合物、および、これらのペプチドの製薬学的に許容できる塩が、成長ホルモンの放出を阻害する活性を有し、そして従ってヒトおよび動物の薬物の主薬として有用であることが見出されている。本発明は、US 4,395,403で不可欠と定義されていた若干の構造的特徴の変化が、ソマトスタチン様活性を保持するのみならず、特異性に関してさらなる利点も示すという最も驚くべき知見に基づく（例えば、下垂体腺腫（ミラー(G.M．Mill er)ら J.C.E.M．80、1386、1995）のおよび気管支類癌腫（ルファブル(H．Lefa bre)ら J.C.E.M．80、1423、1995）のレセプターサブタイプの発現を参照）。発明の詳細な説明（本明細書で使用される）アミノ酸残基の略語式中、MeTrpは２-メチルトリプトファンである、である。化合物式中、MeTrpは２-メチルトリプトファンである、が最も好ましい。本発明のポリペプチド化合物は、固相および溶液の双方のペプチド化学の常法により、もしくは当該技術分野で既知の古典的方法によって、合成され得る。固相合成はペプチドのＣ末端から開始する。適する開始材料が、例えば、必要とされる保護されたαアミノ酸を、クロロメチル化樹脂、ヒドロキシメチル化樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂（ＢＨＡ）に、もしくはパラメチルベンズヒドリルアミン樹脂（ｐ-Me-ＢＨＡ）に付着させて調製され得る。例として、クロロメチル化樹脂は、バイオラッドラボラトリーズ(BioRad Laboratories)、カリフォルニア州リッチモンド、により商標バイオビーズ［BIOBEADS］（商標）ＳＸ１で販売される。ヒドロキシメチル樹脂の調製はボダンスキ(Bodansky)ら、Chem．Ind ．（ロンドン）38、15997、(1966)により記述される。ＢＨＡ樹脂はピエッタ(Pi etta)とマーシャル(Marshall)、Chem．Comm.、650(1970)により記述され、また、ペニンシュララボラトリーズインク(Peninsula Laboratories Inc.)、カリフォルニア州ベルモント、により商業的に入手可能である。開始する付着の後、αアミノ酸の保護基は、（室温で）有機（溶媒）に溶解されたトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）もしくは塩酸（ＨＣｌ）を含んで成る多様な酸試薬によって除去され得る。 J．Cancer、11、1589-1592、1993）。生物学的活性を、ラットおよびヒトの細胞株、すなわち、２個の70および57kD aのレセプターをもつ下垂体腫瘍から開始して樹立されたＧＨ３ラット細胞株、２個の主要な57および42kDaのレセプターをもつ乳癌の胸膜滲出液から開始して樹立されたＭＣＦ７ヒト細胞株、および57kDaのレセプターをもつ肺の小細胞癌から開始して樹立されたヒト細胞株で試験した。試験は、それぞれ文字ｂ、ｃ、ｄで指摘される、下に列挙される本発明の以下の化合物すなわち式中、MeTrpは２-メチルトリプトファンである、で遂げた。比較として、既知のペプチド、ランレオチド（マーフィ(W.A．Murphy)ら Lif e Sci．40、2515、1987）、アンタレリックス(Antarelix)（デゲンギ(R．Deghen ghi)ら、Biomed．& Pharmacother．47、107、1993）、およびソマトスタチン-14 を使用した。放射ラベルされたソマトスタチンとレセプターとの間の結合の試験されたペプチドによる置換の薬理学的研究は、70kDaの複合体が１もしくは４のサブタイプのレセブターに対応し、57kDaの複合体がサブタイプ２に対応し、そして42kDaの複合体がサブタイプ３もしくは５に対応することを示した。試験されたペプチドは10mMの最終濃度で0.1％酢酸に懸濁し、そして４℃で保存した。試験は10^-6Mの濃度で実施した。請求の範囲１．式（Ｉ）式中、ＡはD-AlkTrp、D-β-Nal、D-Pheであり、ＢはTyr、Pheであり、ＣはVal、Thrであり、ＲはThrＮＨ₂、AlkTrpＮＨ₂であり、ＡもしくはＲの最低１個がそれぞれD-AlkTrpもしくはAlkTrpであるが、但し、ＡがD-β-Nalである場合、ＢはTyrでなく、ＣはValでなくそしてＲはThr-ＮＨ₂でない、の化合物、および、前述の化合物の製薬学的に許容できる塩。式中、MeTrpは２-メチルトリプトファンである、から成る群から選択される、請求の範囲１の化合物。３．式の請求の範囲の１の化合物。４．成長ホルモンに対する阻害活性をもつ薬物の調製のための請求の範囲１−２の化合物の使用。５．阻害性の抗腫瘍活性をもつ薬物の調製のための請求の範囲１−２の化合物の使用。６．担体および／もしくは製薬学的に許容できる賦形剤との混合剤の主薬としての請求の範囲１−２の化合物の治療上有効な量を含有する製薬学的組成物。７．放射活性マーカーのリガンドとしての請求の範囲１−２の化合物。８．腫瘍の検出のための診断薬の調製のための請求の範囲６の化合物の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ // Ｃ０７Ｋ 105:00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．式（Ｉ）式中、ＡはD-AlkTrp、D-βNal、D-Pheであり、ＢはTyr、Pheであり、ＣはVal、Thrであり、ＲはThrＮＨ₂、AlkTrpＮＨ₂であるが、但し、ＡがD-βNalである場合、ＢはTy rでなく、ＣはValでなくそしてＲはThrＮＨ₂でない、の化合物、および、前述の化合物の製薬学的に許容できる塩。式中、MeTrpは２-メチルトリプトファンである、から成る群から選択される、請求の範囲１の化合物。３．成長ホルモンに対する阻害活性をもつ薬物の調製のための請求の範囲１−２の化合物の使用。４．抗腫瘍活性をもつ薬物の調製のための請求の範囲１−２の化合物の使用。５．担体および／もしくは製薬学的に許容できる賦形剤との混合剤の主薬としての請求の範囲１−２の化合物の治療上有効な量を含有する製薬学的組成物。６．放射活性マーカーのリガンドとしての請求の範囲１−２の化合物。７．腫瘍の検出のための診断薬の調製のための請求の範囲６の化合物の使用。