JPH11514328A

JPH11514328A - 疎水性調製物

Info

Publication number: JPH11514328A
Application number: JP7514287A
Authority: JP
Inventors: ニュー，ロジャー，ランダル，チャールズ; ジョンカービー，クリストファー
Original assignee: コーテックス（ユーケー）リミテッド
Priority date: 1993-11-16
Filing date: 1994-11-14
Publication date: 1999-12-07
Also published as: PT729350E; AU689509B2; ATE199494T1; EP0729350B1; EP0729350A1; WO1995013795A1; AU8149694A; US6368619B1; CN1137751A; SG48710A1; DE69426829D1; NZ276143A; GB9323588D0; ES2154719T3; GR3035757T3; ZA949109B; CA2176577A1; DK0729350T3; DE69426829T2

Abstract

(57)【要約】油糖の疎水性溶剤における親水性物質、特にタンパク質や糖タンパク質等の高分子化合物、の単相調製物が、両親媒性物質の親水性のヘッドグループが親水性物質の方に向く親水性物質／両親媒性物質のアレイを調製し、アレイを疎水性溶剤と接触させることによって得られる。本発明の調製物は、単独で用いても、または水相と組み合わせて親水性物質が疎水性相中に存在する乳濁液を形成してもよい。本発明の組成物は、多能であり、製薬、食品、化粧品、化学及び農業工業において適用できる。

Description

【発明の詳細な説明】疎水性調製物本発明は、一般的には溶解しない疎水性溶剤における物質の調製物およびこれらの調製物の製造方法に関するものである。特に、本発明は、油等の疎水性溶剤における親水性形態の調製物に関するものである。本発明は、油または他の疎水性溶剤には通常溶解しない親水性の高分子に特に適用される。製薬科学において、食品技術または化粧品工業において等、数多く使用するにあたって、タンパク質及び同様の高分子を用いた研究は、それらの親水性及び高い極性により脂質相と相互作用するまたは脂質相中に取り込まれることができる範囲が制限されるため、問題を有する。多くの自然界の機構は、脂質のバリアー（例えば、皮膚、細胞膜）を使用しており、内部のコンパートメントへの親水性分子の接近を阻害している；脂質媒介物中にタンパク質を分散することが可能になることによって、生物学的システムにこのような高分子を取り込むための新規なルートを開発でき、これにより、タンパク質を含む脂質媒質が、バリアーの疎水性成分を排除せずに、これらの成分と１つになることができる。油中にタンパク質を溶解することによる他の長所は、有機相中で酵素が使用できることである。酵素による合成は、かなりより低いエネルギーの必要性、より大きな基質や生成物の特異性、高い収率、及び化学的な手段によっては不可能である多くの反応を触媒するという事実により、化学的な方法に比べてますます重要になってきている。酵素は有機的な環境下で活性を維持できるという近年の発見によって、さらに多くの可能性が開かれた。これにより、親油性の基質及び生成物を伴う反応を効率的に触媒し、酵素の安定性は水性の環境下よりもかなり向上することが多く、これにより親油性の基質や生成物を高温等のより過酷な条件下で使用することが可能になる。リパーゼやペプチダーゼ等の加水分解酵素を伴う反応は水分の低い環境下では逆方向に優先的に進行するということは非常に重要な概念であり、これにより広範な工業的に重要な化合物の合成が可能になる。多数の触媒単位が相互にかなり近接して維持されなければならない反応の複合鎖(complex chain)を伴う際にも適用できる。このような反応としては光開始レドックス反応の場合が挙げられる。さらなる可能性としては、有機金属化合物の基質上で作用することによる無機質化(mineralization)を誘導する酵素を用いた、油相におけるナノ粒子(nanoparticulate)の制御された製造が挙げられる。油相において実施されたナノ粒子の安定した分散液の調製はまた、ある種の表面触媒反応の実施にあたって好ましい。水性の媒質ではなく油相における親水性物質の分散液には、温度が介在する変性、加水分解、光感受性等に関する安定性を増すという点でさらに長所を有する。水溶液より広範な温度範囲にわたって流動性を維持し、またはより高い粘性を有するため物理的なダメージに対してより大きな保護が得られる油が選ばれる。混合相のシステムにおいては、油中でタンパク質が分離することによって、水可溶性化合物との相互に有害な相互作用−例えば、酸化−が制限できる。高分子及び油双方を含む配合物の例はあり、その一例がＥＰ−Ａ−０３６６２７７号に開示されている。上記公報に開示されている配合物は、疎水性相が乳び脂粒または乳び脂粒形成脂質を含む、疎水性及び親水性相を有する乳濁液である。しかしながら、高分子は疎水性相ではなく親水性相に溶解してしまう。ＥＰ−Ａ−０５２１９９４号は、レシチンと会合する生物学的に活性のある材料またはインビボにおいてレシチンの前駆体として作用することができる化合物からなる高分子の経口投与に適した組成物に関するものである。例示されたすべての組成物は親水性及び親油性相からなる配合物である。再度繰り返すが、上記従来の文献では、高分子は親油性相ではなく親水性相に溶解してしまう。上述した配合物は高分子及び油を両方含むものであるにもかかわらず、全ての場合において、高分子は親油性相ではなく親水性相に溶解してしまう。油中に高分子を溶解した溶液を形成する試みは限られた範囲でしか成功していない。本発明は、親水性物質を特定の条件下で両親媒性物質(amphiphile)と混合すると、得られた組成物が油等の疎水性溶剤に容易に溶解するという驚くべき発見に関するものである。本発明の第一の概念によると、以下よりなる、疎水性溶剤において、親水性物質からなる単相の疎水性調製物の調製方法を提供するものである：（ｉ）液状媒質中では両親媒性物質と親水性物質との間で化学的な相互作用が生じないように液状媒質中で親水性物質と両親媒性物質とを会合する；（ｉｉ）液状媒質を除去し、親水性のヘッドグループ(head group)が親水性物質の方に向いた両親媒性分子のアレイ(array)を残す；および（ｉｉｉ）親水性物質／両親媒性物質のアレイの周りに疎水性溶剤を供給する。本発明においては、「化学的な相互作用」という言葉は、共有若しくはイオン結合または水素結合等の相互作用に関するものであり、ファンデルワールス力またはこのようなオーダーの大きさの他の相互作用を含むことを意図するものではない。調製物の成分を混合する順序が特に重要であることが分かった。分子の分散液を調製しようとする際に、我々は、高分子化合物（親水性物質の一例）を疎水性溶剤と混合した後に両親媒性物質を添加する一方、別に、高分子化合物を疎水性溶剤と両親媒性物質の混合物に加えた。しかしながら、上記方法では両方とも、目的とする分子の分散液ではなく溶剤中に高分子化合物が粒状に分散したものが得られる。両親媒性物質の親水性のヘッドグループ(head group)が高分子方向に向いたアレイが得られるように高分子化合物を両親媒性物質に加え、さらにアレイを疎水性溶剤に溶解することによってのみ、単相の調製物が製造できることが分かった。上述したように、親水性物質及び両親媒性物質は液状媒質中で会合して、多くの場合、液状媒質が除去される前にアレイが液状媒質中で形成される。このことは、両親媒性物質と液状媒質がアレイが親水性物質が存在しなくとも液状媒質中で形成されるようなものである際に起こる。本発明において、「親水性物質(hydrophilic species)」ということばは、通常、水性溶剤には可溶性であるが疎水性溶剤には不溶性である物質を意味するものである。本発明において使用される親水性物質の範囲は多用であるが、親水性高分子は使用できる物質の一例を表わすものである。広範な様々な高分子が本発明において好ましく使用される。油溶液中に疎水性高分子を可溶化させることは一般的にほとんど難しくないので、通常、高分子化合物は親水性であるまたは少なくとも親水性領域を有するものである。適当な高分子の例としては、タンパク質及び糖タンパク質、ＤＮＡやＲＮＡ等の、オリゴ −及びポリ核酸(oligo-or polynucleic acid)、多糖及び場合によっては、全細胞または細胞小器官を含むこれらのいずれかの超分子集合体(supermolecular as sembly)が挙げられる。高分子、特にシクロデキストリン等の多糖、と共にビタミン等の小分子を一緒に可溶化(co-solubilise)することも簡便である。ビタミンＢ₁₂等の小分子もまた、高分子と化学的に共役するため、本組成物中に含まれてもよい。本発明の方法によって好ましく可溶化されるタンパク質の例としては、インスリン、カルシトニン、ヘモグロビン、シトクロムＣ、西洋ワサビのペルオキシダーゼ、アプロチニン、マッシュルームのチロシナーゼ、エリトロポエチン、ソマトトロピン、成長ホルモン、成長ホルモン放出因子、ガラニン(galanin)、ウロキナーゼ、因子ＩＸ、組織プラスミノーゲン活性化因子、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、フェリチン、インターフェロン、因子ＶＩＩＩ及びこれらの断片（上記タンパク質はすべて適当な源由来である）が挙げられる。他の使用できる高分子としては、ＦＩＴＣ−標識デキストラン(F ITC-labelled dextran)及びトルラ属の酵母(Torulla yeast)からのＲＮＡ抽出物がある。約１，０００，０００の分子量を有するデキストランは本発明の方法によって容易に可溶化できるので、高分子化合物の分子量の上限は存在しないと考えられる。高分子に加えて、本発明の方法はより小さい有機分子を可溶化するのにも使用できる。小さな有機分子の例としては、グルコース、カルボキシフルオレシン(c arboxyfluorescin)及び抗癌剤等の数多くの薬剤が挙げられるが、本方法は他の小さな有機分子、例えば、ビタミン類または製薬上若しくは生物学的に活性を有する物質、にも同様にして使用できることはいうまでもない。さらに、塩化カルシウムやリン酸ナトリウム等の化合物もまた本方法を用いて可溶化できる。本発明は、非水溶液の使用によって分子が体内に入り変化する、例えば、生物学的利用能を向上するようなルートが可能になるので、製薬上若しくは生物学的に活性を有する物質に対して特に好ましい。本発明の疎水性組成物に含まれる他の型の物質は、小さな無機分子等の無機材料またはコロイド金属等のコロイド物質である。本発明の方法は、コロイド金、パラジウム、白金若しくはロジウム等のある種の性質を有するコロイド金属を、粒子が一般的な環境下では凝集してしまう疎水性溶剤中でさえ保持することが可能である。このことは有機溶剤中で行われる反応の触媒に特に有用である。本発明の方法とある程度類似する方法がオカハタ(Okahata)ら［ジェーケムソクケムコミュン(J．Chem．Soc．Chem．Commun.)、１９８８年、頁１３９２〜１３９４］に開示されている。しかしながら、上記文献の著者等によって製造された両親媒性分子に囲まれたタンパク質のアレイは本発明の方法によって製造されたものとかなり異なると考えられる。特に、著者等は、両親媒性分子は水素結合によってまたは静電的な相互作用を経て液状媒質中でタンパク質と反応して固体の沈殿物を形成すると述べていた。これに対して、本発明では、親水性物質は液状媒質において両親媒性分子と化学的に相互作用しないと考えられる。本発明において使用される両親媒性物質は数多く存在し、リン脂質等の双性イオンの両親媒性物質は特に好ましいことが知られているものに含まれる。ホスファチジルコリンのヘッドグループを有するリン脂質は特に好ましく用いられ、このようなリン脂質の例としては、ホスファチジルコリン（ＰＣ）それ自身、リゾ −ホスファチジルコリン（ｌｙｓｏ−ＰＣ）、スフィンゴミエリン、ヘキサデシルホスホコリン等のこれらの誘導体またはホスホリルコリンを含む両親媒性ポリマーが挙げられる。本願において、「ホスファチジルコリン（ＰＣ）」及び「レシチン」という言葉は交互に使用される。適当な天然のレシチンは、例えば、卵、及び特に大豆等の簡便な源由来である。ほとんどの場合、使用する疎水性溶剤と化学的に類似の両親媒性物質を選ぶことが好ましく、この件に関しては以下により詳細に説明する。本発明者らがリン脂質等の双性イオンの両親媒性物質が本方法において特に好ましく使用されることを発見したという事実は、本発明とオカハタ(Okahata)らの方法の有為な差をさらに示すものである。さらに、従来の文献の著者等は、陰イオンの及び双性イオンの脂質は著者等の方法に使用するには全く適当でないと結論付けており、これらの脂質を用いると複合体の収率はゼロであったと述べていた。使用される疎水性溶剤は、組成物が使用される目的、可溶化される物質の型、及び両親媒性物質によって異なる。適当な溶剤としては、長鎖の脂肪酸（オレイン酸やリノレン酸等の不飽和脂肪酸が好ましい）、アルコール類、特にオクタノール等の中鎖のアルコール類やフィトール等の枝分れ長鎖アルコール類、グリセロールモノオレエート（ＧＭＯ）等のモノグリセリド、ジグリセリド及びトリグリセリド、特に中鎖のトリグリセリド及びこれらの混合物が挙げられる。最適な結果は、通常、疎水性溶剤及び両親媒性物質を適当に使用する際に得られる。例えば、オレイン酸等の溶剤には、ｌｙｓｏ−ＰＣがＰＣよりも好ましく選ばれた両親媒性物質であり、疎水性溶剤がトリグリセリドである際には逆が好ましい。さらに、場合によっては、親水性物質／両親媒性物質のアレイと接触させる前に大量の両親媒性物質を疎水性溶剤に添加することが好ましいことが分かった。このことは、疎水性溶剤に対する両親媒性物質の高い親和性により、両親媒性分子が親水性物質周辺の位置から除かれないことを示すものである。本発明の調製物は、肉眼では透明で、さらに、可視波長での濁度を測定することにより、及び場合によってはある一定の期間沈降を調べることにより検出できることが非常に好ましい。両親媒性物質の親水性のヘッドグループが親水性物質の方に向いている親水性物質／両親媒性物質のアレイは以前にも製造されていたが、このようなタイプの組成物が親油性溶剤に可溶であることは全く示唆されていなかった。カービー(Kirby)らは、バイオ／テクノロジー(Bio/Technology)、１９８４年１１月、頁９７９〜９８４において及びリポソームテクノロジー(Liposome Te chnology)、Ｉ巻、頁１９〜２７、グレゴリアディス著、シーアールシープレス，インコーポレイテッド、ボカレイトン、フロリダ、ユーエスエー(Gregori adis，Ed.，CRC Press，Inc.，Boca Raton，Florida，USA)において、リン脂質を蒸留水に懸濁して小さい単層の小胞または多層の小胞を形成し、包埋する材料と混合し凍結乾燥するリポソームの調製方法を記載している。さらに、この混合物を再含水させてリポソームを得る。上記文献が公表された時期には、リポソームの調製には世界中でかなりの興味があったものの、高分子の単相の疎水性調製物を製造する考えは全く考えられていなかったかまたは不可能である若しくはほとんど価値がないと考えられていた。確かに、中間アレイをリポソームの調製以外に使用するという示唆は従来技術のどこにもない。たとえ単相の疎水性調製物が望ましい目的であったとしても、親水性ではなく疎水性溶剤を加えるという考えは、親水性分子の疎水性調製物に対して当該分野において強い偏見があったため、重要とは考えられていなかった。親水性のヘッドグループが親水性物質部分に面するアレイ中への両親媒性分子の向きは多様に得られ、特に適当な方法の例は以下により詳細に記載する。上記、カービー(Kirby)らによって記載された方法と同様の出発点を有する、第一の方法では、親水性物質を両親媒性物質の親水性溶剤の分散液と混合することにより、両親媒性分子は親水性のヘッドグループが親水性物質を含む親水性相に向かって外側に面する集合体を形成する。次に、親水性溶剤を除去して、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質に向かう乾燥組成物を残す。オカハタ(Okahata)らによる方法においても、タンパク質溶液は両親媒性物質の水の分散液と混合した。しかしながら、上記文献の著者等は、さらに疎水性溶剤に可溶性となる沈殿物を得ることが必要であると信じていた。本発明の多くの好ましい両親媒性物質はこのような沈殿物を形成しないので、オカハタ(Okahata )らはこれらは使用できないと結論付けた。本発明の方法によると、沈殿物は必要とせず、むしろ、目的となる生成物の収率が減少するので沈殿物を形成させることは望ましくないと一般的に考えられている。第一の方法によると、親水性溶剤は水であることが好ましいが、他の極性溶剤を使用してもよい。両親媒性物質の集合体によって取られる形態は、ミセル、単層の小胞、好ましくは約２５ｍｍの著系を有すると通常考えられる小さな単層の小胞、多層の小胞または管状構造物、例えば渦巻形のシリンダー、六角形相(hexagonal phase)、立方形相(cubic phase)またはミエリン型構造物(myelin type structure)がある。使用される形態は使用する両親媒性物質によって異なり、例えば、ホスファチジルコリン（ＰＣ）等の両親媒性物質は小さな単層の小胞を形成する傾向にあるが、リゾ−ホスファチジルコリンはミセルを形成する。しかしながら、これらのすべての構造物において、両親媒性分子の疎水性のテールは構造物の中心に向かって内側に面しているが、親水性のヘッドグループは親水性物質が分散する溶剤に向かって外側に面している。両親媒性物質：親水性物質の重量比は、通常、１：１〜１００：１、好ましくは２：１〜２０：１の範囲内であり、最も好ましくは、ＰＣで約８：１であり、ｌｙｓｏ−ＰＣでは４：１である。これらの割合は好ましい割合であるのみであり、特に、上限は最小限の可能な量の両親媒性物質を用いることが好ましいという経済的な考慮によって設定されていることを指摘するべきである。より低い限度はより臨界的であり、２：１またはそれより低い割合のみが親水性物質がかなり疎水性部分を有するまたは非常に大きい場合に用いられると考えられる。溶剤を速やかに除去すると良好に実施でき、溶剤の簡便な除去方法は凍結乾燥法でありが、他の方法を用いてもよい。場合によっては、特に、親水性物質が大きなタンパク質等の高分子化合物である際には、親水性溶液中に塩を含ませることが有用である。しかしながら、大量の無機塩の存在によって結晶が形成したり、曇った溶液になりやすくなるため、有機塩が塩化ナトリウム等の無機塩より使用されるのが好ましい。酢酸アンモニウムが、凍結乾燥によって容易に除去できるというさらなる長所があるため、このように目的には特に好ましい。ヘッドグループが親水性物質部分方向に向いている両親媒性物質のアレイを含む組成物の第二の調製方法は、共有の溶剤に親水性物質及び両親媒性物質を一緒に可溶化し(co-solubilise)た後溶剤を除去することである。アレイの第二の形成方法は新規であり、それ自体本発明の一部を成すものである。したがって、本発明の第二の概念によると、共有の溶剤に親水性物質及び両親媒性物質を一緒に可溶化した後この共通溶剤を除去することからなる、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質の方向に向かう親水性物質／両親媒性物質のアレイの形成方法を提供するものである。本方法を使用する際には、両親媒性物質：親水性物質の重量比は約１：１〜５０：１、好ましくは２：１〜１０：１、最も好ましくは約４：１であることが好ましい。共通溶剤は、当然、両親媒性物質及び親水性物質の両方を溶解する必要があり、好ましくは、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、まはた最も適当には、氷酢酸等の極性有機溶剤である。上記方法では、第一の方法に対して、アレイを、共通溶剤を除去する前に形成することが異なっている。溶剤を除去すると、両親媒性分子はそれ自体がシート中に並ぶ傾向にあり、この際、ヘッドグループは親水性物質の方に向かい親油性のテールグループ(tail group)は親水性物質から離れた方向に向くと考えられる。しかしながら、本発明の有効性は上記所見の正確さ等によるものではない。両親媒性分子が再度並ぶための時間がより多くとれると考えられるので、例えば、窒素気流下で乾燥することによって、溶剤をゆっくり除去すると、良好な結果が得られることが観察された。親水性物質／両親媒性物質のアレイの第三の形成方法は、親水性溶剤中に溶解した親水性物質の溶液を用いて疎水性溶剤中で両親媒性物質の溶液を乳化して乳濁液を得、さらに疎水性溶剤を除去することからなる。上記乳濁液は、油中水滴形または水中油滴形のいずれであってもよいが、高分子ではなく小さな親水性物質を用いる際には、油中水滴形乳濁液がより好ましい。両親媒性物質に対してはどのような疎水性溶剤を用いてもよいが、小さな親水性物質を用いる際に好ましい油中水滴形乳濁液に対しては、疎水性溶剤を蒸発等の緩やかな方法によってゆっくり除去すると最良の結果が得られることが知られているので、ジエチルエーテル等の低沸点の溶剤が好ましく、明らかに、低沸点の溶剤を用いることが最も有効である。低沸点の溶剤はまた油中水滴形乳濁液に対しても好ましいが、このような乳濁液に関しては、凍結乾燥がより好ましい溶剤除去方法である。親水性溶剤は水性であることが好ましい。両親媒性物質：親水性物質の重量比は約１：１〜５０：１、好ましくは２：１〜１０：１、最も好ましくは約４：１である。疎水性溶液に対する親水性溶液の割合は重要ではないが、小さな親水性物質を用いる際には、水中油滴形乳濁液ではなく油中水滴形乳濁液を形成させることが好ましい。油中水滴形乳濁液を形成する場合には、第三の方法がどのような型の親水性物質と共に用いる際にも適当であるが、第一及び第二の方法は第三の方法に比べると小さい分子と共に用いるには適さないことが分かった。小さな親水性物質と共に使用するのに特に適する、別のアレイの形成方法としては、親水性溶剤中に分散した小さな単層の小胞（ＳＵＶ）等の密閉脂質小胞中に親水性物質を包埋した後、溶剤を除去することが挙げられる。本発明の方法の生成物は、疎水性溶剤中では一般的には溶解しない親水性物質からなる単相の疎水性調製物の製造が可能になるので、新規である。したがって、本発明の第三の概念によると、本発明の方法によって得られる疎水性溶剤における親水性物質からなる単相の疎水性調製物を提供するものである。さらに、本発明はまた、親水性物質部分が両親媒性分子に囲まれ、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質の方に向いていることを特徴とする、疎水性溶剤における親水性物質及び両親媒性物質からなる単相の疎水性調製物をも提供するものである。好ましい親水性物質、両親媒性物質及び疎水性溶剤は先に説明した方法に関して記載したのと同様である。親水性物質に加えて単相の疎水性調製物中に他の成分を含ませることも望ましい。このことは、親水性物質が高分子である際に、しばしば特に好ましく、この場合には、調製物は、例えば、胆汁酸塩、ビタミン類または高分子に結合する若しくは高分子と会合する他の小さい分子を含んでいてもよい。高分子／両親媒性物質のアレイによっては上記したカービー(Kirby)らによって開示されているが、開示されているアレイはすべてリポソームの形成における中間体であり、上述したように、このような型のものからなる非リポソームのまたは疎水性の組成物には従来は何等興味がなかった。したがって、両親媒性物質が小さな単相の小胞を形成しないためリポソームを形成するとは考えられないものである本発明のアレイは新規である。本発明のさらなる概念によると、両親媒性物質が水をアレイに添加した際にリポソームを形成できないものである際に、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質の方を向き、両親媒性物質と親水性物質との間には化学的な相互作用が存在しないことを特徴とする、両親媒性分子及び親水性物質からなるアレイを提供するものである。リポソームを形成できない両親媒性物質の一例にリゾーレシチン(lyso-lecith in)がある。最も水性の環境下では、このような両親媒性物質は、小さな単層の小胞ではなくミセルを形成するため、リポソームの調製に用いるには不適切である。しかしながら、本発明の方法には、特にオレイン酸等の相溶性の疎水性溶剤と共に使用する際には、非常に有用である。本発明の調製物の一つの長所としては、本質的に無水であるため加水分解に対して安定であることが挙げられる。本調製物はまた、タンパク質が開いて(unfol d)変性するには水が存在していなければならないと考えられるため、凍結融解に安定であり、高温でより大きな安定性を有する。このことは、親水性物質の水性の調製物に比べると非常により長い寿命を有すると考えられることを意味する。本発明の溶液は非常に多能であり多くの用途がある。これらはまた、単独で使用してもまたは水相と組み合わせて使用して乳濁液または同様の２相組成物を形成してもよく、このことは本発明のさらなる概念を形成するものである。本発明の上記概念によると、親水性相および疎水性相からなる２相組成物であって、該疎水性相が上記方法によって得られる親油性溶剤における親水性物質の調製物からなるものである２相組成物を提供するものである。一般的には、このようなタイプの組成物では、疎水性相は親水性相中に分散している。親水性物質は疎水性相には残らずに親水性相中に通ると考えられていたので、このような安定した２相組成物が形成できることは驚くべきことである。しかしながら、多くの場合、このようなことは起こらず、親水性物質は分散した疎水性相と会合したままで遊離した溶液(free solution)中には存在しないことが示された。これは残った水または両親媒性分子の親水性のヘッドグループに結合したままの他の親水性物質の結果であると考えられる。このことの一つの長所としては、親水性物質の浸透圧による漏れが、既知のシステム、特にリポソームのシステムによる場合のように、本発明の組成物では問題とならないことである。２相組成物は、必要とされる目的によっては、一時的であるまたは安定である乳濁液である。乳濁液粒子の平均的な大きさは疎水性相および水相両方の性質によって異なる。しかしながら、２μｍ程度の範囲内である。水相における疎水性調製物の分散液は、混合によって、例えば、約１０〜６０秒、一般的には約１５秒間等の短期間激しくボルテックスする(vortexing)、または例えばオービタルシェーカー(orbital shaker)を用いて数時間緩やかに混合することによって、得られる。本発明の疎水性調製物を含む乳濁液はまたマイクロカプセルの調製に使用できる。乳濁液をゼラチンを含む水相から形成すると、ゼラチンは既知の方法によるコアセルベート化(coacervation)によって溶液から沈殿でき、親水性物質含有疎水性相の液滴の周辺に膜を形成する。親水性相を除くと、マイクロカプセルが残る。この技術は公知であるが、本発明の調製物と組み合わせると特に有用であることが分かった。本発明の組成物を使用する一方法としては、通常の環境下では親油性の溶剤に溶解しない物質の、ヒトを含む、哺乳動物への経口投与を目的とするものがある。これは、ビタミン等の食事の補助剤の投与用にまたは生物学的な活性物質、特にインスリンや成長ホルモン等のタンパク質及び糖タンパク質の投与用に使用される。さらなる用途としては、ヒトの食事の補助剤としてのみでなく農業や水産養殖において、使用できるビタミン等の栄養物を、例えば上記した方法によって、カプセルに入れるまたはマイクロカプセルに入れることも可能である。後者の一例としてえびの幼虫の培養用の飼料の製造が挙げられる。さらに、本組成物は、非経口投与用の薬剤または他の配合物、さらには局所的な若しくは眼への使用のための配合物の調製に使用されてもよい。このような利用に関しては、上記したような油溶液の乳濁液及び水相を使用することが好ましいことが多い。多くの治療及び予防用の処置は、一定の若しくは遅延した放出を目的としてなされる、または例えば、即座に放出することを目的とした成分を遅延した若しくは一定の放出を目的とした成分と共に含む等、２成分システムを伴うものである。本発明の調製物は、その高い安定性によって、一定のまたは遅延した放出を目的とした高分子の配合に特に有用である。本発明の組成物のより長い寿命は製薬領域では特に好ましい。油中親水性物質形の調製物は、フレーバーのマスキング(flavor masking)を目的とした製薬または同様の工業において適用できる。このようなことは、多くの薬剤は不快なフレーバーを有しており、患者、特に小児に不人気であるため、特に問題となっている。化粧品工業でもさらに使用することができ、この際、再度繰り返すが、親水性化合物の疎水性調製物を化粧品配合物中に非常に容易に加えることができる。このようにして使用される高分子の例としては、ある種の湿分を与えるまたは酵素の作用によるものが挙げられる。本発明はまた、皮膚科用のクリームやローション中にコラーゲン等のタンパク質を取り込むためにも使用できる。最後に、本発明は、例えば、非水の酵素による合成等、化学的なおよび生物学的な合成分野において数多くの利用可能性を有するものである。本発明を以下の実施例を参照しながらさらに説明する。実施例１以下のようにしてサケのカルシトニンを油相中に可溶化した。本実施例及び他の実施例で使用されたすべての薬品は分析用または化学用であった。クロロホルム／メタノール［２：１（v／v）］に溶解した精製した卵のホスファチジルコリンをロータリーエバポレートして(rotary evaporate)乾燥フィルムを形成し、蒸留水を加えて脂質濃度を１００ｍｇ／ｍｌにした。窒素で完全にフラッシした後、小さな単層の小胞（ＳＵＶ）の乳白色の分散液が得られるまで、脂質を激しくボルテックスしさらに全体で５分間プローブソニケーション(probe sonication)することによって分散した。音波処理（ソニケーション(sonicatio n)）段階中、容器を氷冷のスラリーバス(ice slurry bath)中に漬けて音波処理を３０秒バースト(burst)で行い、３０秒の冷却間隔をあけた。ＳＵＶの懸濁液を１０００×ｇで１０分間遠心し、凝集脂質をペレット化し、上清をデカンテーションし、蒸留水で２倍希釈することによって、１ｍｌ当たり５０ｍｇ濃度の脂質を得た。サケのカルシトニンの溶液を、５ｍｇのタンパク質を１ｍｌの蒸留水に溶解することによって調製し、澄んだ溶液を得た。等量（０．５ｍｌ）のタンパク質溶液及び脂質分散液を一緒に１０ｍｌ容の丸底の試験管中に加え、よく混ぜた。得られた混合物を液体窒素中でシェルフリーズ(shell-freeze)して０．１ｍｂａｒ未満の真空下でかつ−４５℃の冷却器温度で一晩凍結乾燥した。翌日、３００ｍｇのオレイン酸ＢＰを凍結乾燥物に加え、緩やかに混合してすべての乾燥固体を油と接触させた。この混合物を、時々混合しながら、約１〜２時間室温で放置し、その間にすべての固体は油中に取り込まれ、目視では透明な澄んだ脂質の単相を形成した。実施例２１００ｍｇ／ｍｌ濃度の大豆のホスファチジルコリンのＳＵＶを、蒸留水中で乾燥脂質をボルテックスし、実施例１と同様にして音波処理することによって調製した。サケのカルシトニンの水溶液を１０ｍｇ／ｍｌで調製して０．８ｇのアリコートを試験管に移した。１ｇのＳＵＶを加え、内容物をシェルフリーズ(shell-freeze)し、一晩凍結乾燥した。１．２ｇの９５％オレイン酸を凍結乾燥物に加え、実施例１と同様にして分散を行った。６．７ｍｇタンパク質／ｇオレイン酸を含む、カルシトニン調製物は完全に透明であった。実施例３アプロチニン含有凍結乾燥物を上記実施例２におけるサケのカルシトニンに関して記載したのと同様の条件下で調製した後、実質的にすべての水は、結合していても遊離していても、除去されたと考えられる条件下で、五酸化リンの入ったデシケーター内で、４℃で５日間貯蔵した。３００ｍｇのオレイン酸を加えることによって目視では明るい油相が得られたので、次のオレイン酸への分散は損なわれなかった。実施例４蒸留水に溶解した１００ｍｇ／ｍｌの大豆のホスファチジルコリンのＳＵＶを実施例２と同様にして調製した。２０ｍｇ／ｍｌのサケのカルシトニン溶液を、３１．８ｍｇを１．５９ｇの蒸留水に溶解することによって調製し、０．６７ｇの澄んだ溶液（１３．４ｍｇのタンパク質）を１．０ｇのＳＵＶ（１００ｍｇのＰＣ）と試験管内で混合した。この混合物をシェルフリーズ(shell-freeze)し、凍結乾燥した後、２００ｍｇのオレイン酸を用いる以外は実施例１と同様にしてオレイン酸中に分散した。得られた澄んだ油相は１ｇ当たり４２．７ｍｇのカルシトニンを含んでいた。実施例５１００ｍｇＰＣ／ｍｌ濃度の卵のＰＣのＳＵＶを実施例１と同様にして調製した。１０ｍｇ／ｍｌのインスリン溶液を、やや高い濃度で水性の懸濁液を調製し、使用するインスリン１ｇ当たり２０ｍｇの割合で氷酢酸を加えた後、十分量の水を加えて目的とするインスリン濃度を得ることによって作製した。１５分間混合、放置した後、澄んだ溶液が形成された。試験管内の１．２５ｍｌのＳＵＶに対して、１．２５ｍｌのインスリン溶液を添加し、この混合物をシェルフリーズし、一晩凍結乾燥した。翌日、０．２５２ｇのオレイン酸を加え、試験管をボルテックスして凍結乾燥物を完全に「湿潤させた(wet)」。この調製物を一晩放置して完全に分散させると、強く乳白光を発する、黄色の目視では澄んだ分散液の外観を呈した。密閉チューブ内で窒素下室温で７週間貯蔵した後も、ＤＰＬＣ調製物の外観の明白な変化（沈降等）はなかった。実施例６ＳＵＶを、１ｇ当たり１００ｍｇの大豆のホスファチジルコリンを用いて実施例２と同様にして調製し、インスリン溶液を実施例２と同様にして調製した。５０ｍｇのＳＵＶ（５ｍｇのＰＣ）及び４７ｍｇのインスリン溶液（０．４７ｍｇタンパク質）を小さなガラス製のバイアルに入れ、凍結し、凍結乾燥し、１００ｍｇのジオレイン(diolein)に分散した。初期の粒状の分散液は２時間後に透明になった。実施例７乾燥形態を有する、９５％純度の卵のホスファチジルコリンを、ボルテックスすることによって直接蒸留水中に分散させて、１００ｍｇ／ｇのリン脂質濃度の多層の小胞の懸濁液を得た。この材料を、製造社の支持に従って、エマルシフレックス（商標）(EmulsiFlex^TM)装置で２０，０００ｐｓｉの圧力で３回押し出した。得られた乳白色の分散液を蒸留水で５０ｍｇ／ｍｌにまで希釈し、窒素でフラッシし、必要になるまで４℃で貯蔵した。３０ｍｇのサケのカルシトニンを、３０ｍｇのアプロチニンと共に、６ｍｌの蒸留中に一緒に溶かし、３９．６ｍｇの上記で調製したリン脂質の分散液と混合した。この混合物を適当な大きさのアリコートに分け、シェルフリーズし、凍結乾燥した後、全量で４７．５２ｇのグリセロールモノオレエートＢＰ(glycerol mono-oleate BP)（４０℃に加温することによって溶融する）を加え、実施例１と同様にして混合することによって、ＤＰＬＣの目視では澄んだ乳白色の分散液を得た。実施例８合成ジパルミチルホスファチジルコリン(dipalmityl phosphatidyl choline) をクロロホルム／メタノール［２：１（v／v）］の混合溶剤中に溶解し、ロータリーエバポレートして(rotary evaporate)、薄膜を形成した。乾燥脂質を３０ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留水中に分散し、音波処理することによってＳＵＶの乳白色の分散液を形成した。この方法は、温度を約４５℃、即ち脂質の転移温度を超えた温度、に維持すること以外は通常実施例１と同様であった。１０ｍｇ／ｍｌのインスリン溶液を実施例４と同様にして調製し、０．１４ｍｌのアリコート（１．４ｍｇのタンパク質）を０．５ｇのＳＵＶのアリコート（１５ｍｇのＤＰＰＣ）と共に小さなチューブに移した。この混合物をシェルフリーズし、凍結乾燥し、得られた凍結乾燥物を３００ｍｇのオレイン酸中に分散することによって、タンパク質の澄んだ「溶液」を得た。比較実験では、凍結乾燥物を分散する際に転移温度を超えて作業する必要はなかったことが示された。実施例９水に溶かした卵のリゾホスファチジルコリンのミセル溶液を３６ｍｇ／ｍｌの濃度で調製し、０．１３７ｍｌを小さなチューブに移した。１０ｍｇ／ｍｌのインスリン溶液を実施例４と同様にして調製し、０．１３７ｍｌを上記チューブに移した。このチューブの内容物をシェルフリーズし、凍結乾燥した後、０．３ｇのオレイン酸と混合して、１ｇのオレイン酸当たり４．６ｍｇインスリンを含み、６００ｎｍの吸光度が０．０２３である透明な分散液を製造した。実施例１０１００ｍｇ／ｍｌの大豆のホスファチジルコリンのＳＵＶを実施例２と同様にして調製し、１０ｍｇ／ｍｌのインスリン溶液を実施例４と同様にして調製した。５本のチューブのそれぞれに、０．１ｍｌのインスリン（１ｍｇのタンパク質）、さらには０．３ｍｇのＳＵＶ（３０ｍｇのＰＣ）を添加し、この混合物をシェルフリーズし、一晩凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を、３００ｍｇの一連の分画ヤシ油、即ち、ミグリオール(Miglyol)８１０、８１２、８１８、８２９及び８４０の一つ中にそれぞれ分散した。（「ミグリオール(Miglyol)」という言葉は商標である。）ミグリオール(Miglyol)８２９を加えた調製物以外のすべての調製物は素早く分散して乳白色の「溶液」を形成したが、ミグリオール(Mig lyol)８２９を加えた調製物は濃厚で不透明なゲルを形成した。この分散液は放置すると徐々に澄んできて、翌日にはミグリオール８１２、８１８及び８４０は完全に透明になり、ミグリオール８１０はやや乳白色になった。ミグリオール８２９は濁ったゲルのままであった。実施例１１大豆のホスファチジルコリンのＳＵＶを実施例２と同様にして調製し、サケのカルシトニン溶液を１０ｍｇ／ｍｌで調製した。１００μｌのカルシトニン溶液（１ｍｇのタンパク質）及び３００ｍｇのＳＵＶ（３０ｍｇのＰＣ）を６本の小試験管の各々に加え、内容物をシェルフリーズし、凍結乾燥した。５個の凍結乾燥物の各々に、３００ｍｇのミグリオール８１０、８１２、８１８、８２９または８４０を加え、３００ｍｇの中鎖のトリグリセリド（ＭＣＴ）油を６番目の試験管に加えた。混合後は、すべての調製物は乳白色または濁っていたが、放置すると徐々に透明になった。翌朝、ミグリオール８１０及び８４０の分散液は濁っており、ＭＣＴ油及びミグリオール８１２の分散液は乳白色であり、ミグリオール８１８及び８２９の分散液は完全に透明であった。緩やかに加温すると、乳白色及び濁った分散液は透明になったが、室温に一晩放置すると元の形態に戻った。実施例１２１０ｍｇ／ｍｌのカンジダシリンデリカエ(Candida cylindericae)のリパーゼ水溶液を調製すると共に、１００ｍｇ／ｍｌの大豆のホスファチジルコリンのＳＵＶを調製した（実施例２を参照）。リパーゼー溶液の５０μｌのアリコート（０．５ｍｇのタンパク質）を数個の小試験管に加え、さらに１００μｌのＳＵＶ（１０ｍｇのＰＣ）を各々に添加した。この混合物を素早く凍結し、凍結乾燥し、窒素でフラッシした後、パラフィルムで密閉した後フリーザーで貯蔵した。これらの凍結乾燥物の一つを融解し、０．４４ｇのリノレン酸と混合したところ、３０分後に完全に透明なＤＰＬＣの分散液を形成した。０．１ｇのコレステロールを油に溶解し、チューブを窒素でフラッシし、パラフィルムで密閉し、３７ ℃の恒温器に移した。２日後、この混合物を逆相薄層クロマトグラフィーで分析したところ、初期の反応体に加えて、コレステロールリノレエート(cholesterol linoleate)の標準物と一致するＲｆ値のスポットを示した。これより、油相内で可溶化した酵素は触媒上活性を有することが示される。この合成エステル化反応は、リパーゼ作用に一般的に関連した通常の加水分解プロセスとは反対である。実施例１３１００ｍｇ／ｍｌの大豆のホスファチジルコリンのＳＵＶを実施例２と同様にして調製した。２個の０．１５ｍｌのアリコート（１５ｍｇのＰＣ）を小試験管に分散し、３ｍｇ／ｍｌのマッシュルームのチロシナーゼの水溶液０．３３ｇを各試験管に添加した。この内容物をシェルフリーズし、凍結乾燥した。１つの凍結乾燥物には０．３ｇのオレイン酸を加え、他方には０．３ｇのＭＣＴ油を加えた。その後、これらの試験管をボルテックスにより混合した。ＭＣＴ調製物は４５分後に透明な茶色の分散液を形成したが、オレイン酸調製物は２時間かかった。これらの分散液を、２つの別の酵素用基質、即ち、カテコール及びチロシンに対して試験し、結果を何も含まないフリーの酵素水溶液で得られた結果と比較した。各反応をプロリンの存在かで行った。フリーの酵素を用いた場合には、各基質は徐々に濃く着色した顔料になっていった。しかしながら、ＤＰＬＣ分散液の存在下では、カテコールを用いた場合には顔料の形成が起こったが、チロシンでは起こらなかった。色の純度はＭＣＴ油よりもオレイン酸調製物を用いた方が少なかったが、これは酵素活性の低いｐＨの効果によるものであると考えられる。同様のパターンの基質の変換が、油相がボルテックスによって一時的に水相内で乳化した際に見られた。しかしながら、乳化がトリトンＸ１００（商標）(Trito n X100^TM)の存在下で行われた際には、顔料の形成が両方の基質で起こった。観察された挙動に関する説明としては、カテコールは油中で分配してカプセルに入れられた酵素に接近しやすくなれるが、チロシンは水相に閉じ込められることが挙げられる。カテコールへの酵素作用によるキノン生成物は水相に分配されプロリンと相互作用して着色生成物を形成する。本実験によって、酵素は油内で活性形態でカプセル内に入れられ、分散中には水相中に放出しないことが示される。しかしながら、トリトンＸ１００（商標）（Triton X100^TM）等の界面活性剤を加えると、酵素は放出され、どちらの基質にも作用しない。実施例１４平均粒子径が３０ｎｍのコロイド金を調製し、ウシのアルブミンを０．００１％加えることによって安定化した。０．２ｇのワインレッドの金ゾルを、実施例１と同様にして調製された、１００ｍｇ／ｍｌの濃度の０．２ｇの卵のホスファチジルコリンのＳＵＶと共に小さな管に秤量した。この混合物をシェルフリーズし、凍結乾燥した後、０．３ｇのオレイン酸と混合した。時々振盪しながら約２時間たった後、分散液は完全に透明になり、元の水性金ゾルによく似た赤色に着色した油相を形成した。実施例１５１ｍｇのペプチド抗生物質である、ナイシン(Nisin)を０．２ｇの実施例１４で使用したのと同様の卵のホスファチジルコリンのＳＵＶと混合し、同様にして処理した。透明な結晶分散液が２時間以内に形成された。実施例１６チロシナーゼを実施例１３と同様にしてオレイン酸に加えた。この分散液１（重量）部を、５０℃に加温された４部の２０％ゼラチン水溶液に添加し、ボルテックスにより素早く混合した後、小さなビーカーに移しマグネチックスターラーを用いて混合し続けた。２部の２０％硫酸ナトリウム水溶液を均一に滴下し、さらに混合物を１５℃で４０部の７％ゼラチン水溶液中に注ぎ、後者はマグネチックスターラーで攪拌した。さらに１分間混合し続けた後、得られたゼラチンマイクロカプセルの一部について、基質としてカテコール及びチロシンを用いて酵素活性を調べた。実施例１３と同様、カテコールでは色素の形成が起こったがチロシンでは起こらなかったことから、酵素／脂質複合体は油のマイクロカプセル化(microencapsulation)中油相内にそのまま残っていたことが示された。実施例１７１０ｍｇのシトクロムＣ、ヘモグロビン及びＦＩＴＣ−デキストランをそれぞれ１ｍｌの蒸留水に溶かした。４．４ｍｇのＲＮＡ（トルラ属の(Torula)酵母から抽出）を１ｍｌのリン酸緩衝溶液中に溶解した。２×５０μｌの各々の溶液を新しいガラス製のチューブ中に分散し、上記溶液のうち一つに、４０ｍｇ／ｍｌの卵黄のレシチン（ＰＣ）濃度で実施例１と同様にして調製されたＳＵＶを２５０μｌ添加した。２本のチューブを、上記と同様にして、シェルフリーズし、一晩凍結乾燥した。翌日、３００μｌのオレイン酸を各チューブに加えた。これらのサンプルを、完全な分散液が得られるまで、１時間時々ボルテックスしながら室温で放置し続けた。油を一晩放置した。ＰＣを含まないで調製されたサンプルの濁度はＰＣを含むものより大きかった。翌日、沈殿物がＰＣを含まないで調製されたサンプル中に生じた。サンプルをかきまぜずに、各サンプルの上澄１５０μｌを抜き、抜かれたサンプル、および混合した後の、残ったサンプルの吸光度を測定した；これらの２つの読取結果の比較を、ＰＣを含む及び含まないサンプルの沈降度（％）を算出して行った（測定誤差は±５％）。以下の値が得られた。実施例１８タンパク質溶液が酢酸アンモニウム（１０ｍｇ／ｍｌ）に溶かした１０ｍｇ／ｍｌ濃度のフェリチンまたは西洋ワサビのペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）から構成され、ＳＵＶが酢酸アンモニウム（１０ｍｇ／ｍｌ）に溶かした５０ｍｇ／ｍｌ濃度の卵黄のホスファチジルコリンから構成されること以外は実施例１と同様にして行った。凍結乾燥しオレイン酸中に分散した後、目視では透明な溶液が得られた（しかしながら、フェリチン溶液はやや乳白色を呈し、強く着色していた）。ＨＲＰＯ溶液を２つに等しく分け、一方を、繰り返し＋４℃にまで冷却してその度にオレイン酸を固化した後室温に戻すことによる凍結融解を５回行った。目視による透明度は、凍結融解したサンプルと何もしなかったサンプルとの間で相違はなかった。実施例１９以下のような上記したのとは異なる方法を用いて、油相にインスリンを可溶化した。調製を、様々な量のホスファチジルコリン（ＰＣ）を用いて数回平行して行った。１００ｍｇのインスリンをボルテックスしながら２ｍｌの氷酢酸に溶解した。５００ｍｇのＰＣをボルテックスしながら５ｍｌの氷酢酸に溶解した。５個のガラス製の２ｍｌ容のスクリューキャップ付きのバイアルの各々に、１００μｌのインスリン溶液を分散した。様々な量（１００、２００、３００、４００、５００μｌ）のＰＣ溶液を各バイアルに分散して内容物をよく混合した。これらの溶液をボルテックスしながら窒素気流下で蒸発乾固させた後、残った溶剤を一晩凍結乾燥器で真空中（８×１０^-2ｍｂａｒ）で室温で除去した。次に日、３００μｌのオレイン酸を各バイアルに加え、バイアルの内容物をさらに２４時間オービタルシェーカーで緩やかに混合した。自動プレートリーダ(automated plate reader)を用いて、各溶液１５０μｌの吸光度を４５０ｎｍで測定した。結果は以下の通りであった：＃５が濁っていて光を強く散乱する以外は、得られた溶液はすべて目視では透明に見えた。実施例２０インスリン／スフィンゴミエリン／オレイン酸の重量比を５／５０／２００になるようにしてウシ脳のスフィンゴミエリンをホスファチジルコリンの代わりに用いる以外は実施例１９と同様の方法を用いた。１時間油と乾燥固体を混合すると完全に透明な溶液が得られた。室温で数日間放置し続けると、固体状の不透明なゲルが形成され、これを３７℃に加温すると再度透明な溶液になった。実施例２１タンパク質溶液が蒸留水に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で西洋ワサビのペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）から構成され、ＳＵＶが卵黄のホスファチジルコリンから構成され５０ｍｇ／ｍｌの濃度で実施例７で記載されたエマルシフレックス（商標）（Emulsiflex^TM）法を用いて調製された以外は、実施例１と同様の操作を行った。凍結乾燥後、固体材料をフィトールまたはグリセロールモノオレエートのいずれかに分散した。どの場合においても目視では透明な溶液が得られた。実施例２２小麦胚ｔＲＮＡを５ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留水中に溶かし、この溶液の５０μ ｌのアリコートを、蒸留水中に５０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解した大豆のＰＣからなるＳＵＶ１００μｌまたは５０μｌと混合した。ｔＲＮＡに対するＰＣの割合はそれぞれ２０：１及び１０：１であった。この混合物を−２０℃で凍結し、凍結乾燥して、乾燥白色ケークを得た。１００μｌのオレイン酸を加えた後、オービタルシェーカーで緩やかに混合することによって、６５０ｎｍにおけるＯＤの読取により示されるように、２０：１のＰＣ：ＲＮＡの割合では肉眼では透明な溶液が得られたが、１０：１のＰＣ：ＲＮＡの割合、またはＰＣが存在しないｔＲＮＡでは、肉眼では不透明な濁った懸濁液が得られた。実施例２３アプロチニンを１０ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留水に溶解した。ヘキサデシルホスホコリン（ＨＤＰｏＣ）を１００ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留水に溶解した。１００μｌのアプロチニン溶液のアリコートに、０から１０、２０、３０、４０から５０μｌの範囲の容積のＨＤＰｏＣを加えた。この混合物を−２０℃で凍結し、一晩凍結乾燥した。翌日、１００μｌのオレイン酸を各サンプルに加え、オービタルシェーカーで室温で１時間振盪した。６５０ｎｍにおけるＯＤの読取により示されるように、脂質：タンパク質の割合が４：１及び５：１では肉眼では透明な溶液が得られた。実施例２４４ｍｇのペルオキシダーゼを４ｍｌの蒸留水に溶解し、１００μｌのアリコートをガラス製のスクリューキャップ付きの２ｍｌ容のバイアルに分散した。１００μｌの音波処理したＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン、蒸留水において１００ｍｇ／ｍｌ）を各バイアルに加え、よく混合して凍結乾燥した。この混合物を完全に乾燥した際に、１００μｌのｔ−ブタノール単独であるいは３ｍｇ／１０ｍｌの濃度で溶液中にＯＰＤ（オルトフェニレンジアミン）を含む１００μｌのｔ−ブタノールを各バイアルに加えることによって、タンパク質／脂質の複合体を分散した。コントロールは、ｔ−ブタノール±ＯＰＤを空のあるいは酵素の不存在下でＤＭＰＣを含むチューブに加えることによって調製した。２連の各組合わせを作製し、片方のチューブには１０μｌのクメンヒドロペルオキシド基質を混合しながら加えた。３０分間室温で放置した後、各サンプルの光学濃度をマイクロプレートリーダー(microplate reader)で４５０ｎｍで読み取った。バックグラウンドを引いた後に得られた結果を表に示す。有機溶剤中のクメンヒドロペルオキシドの存在下でのＯＰＤに関するペルオキシダーゼの作用実施例２５オクチルグリコシド(octyl glycoside)を蒸留水に溶解し、マイクロプレートのウェル中に分散することによって、１ウェル当たり以下の量の両親媒性物質を得た：０、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、５、７．５及び１０ｍｇ。アプロチニンを５ｍｇ／ｍｌの濃度で蒸留水に溶かし、０．５ｍｇのタンパク質を含む、１００μｌを上記した各ウェル中に分散した。プレートをよく混合し、−２０℃で凍結し、一晩凍結乾燥した。翌日、１００μｌのオレイン酸を各ウェルに加えた。このプレートを室温で振盪し、プレートリーダーを用いて間隔をあけて５５０ｎｍでの光学濃度を測定した。低い吸光度の値によって、散乱は低いレベルであることが示され、これは油中にタンパク質が効率的に分散していることに相当するものである。上記した方法を用いることによって、オクチルグルコシドの添加によるオレイン酸によるアプロチニンの分散液を補助する両親媒性物質としての作用効果が示される。結果を、オレイン酸添加後の様々な時間におけるオクチルグルコシド濃度（一定のタンパク質濃度における）の機能としての光学濃度として表わすが、表及び添付図面に示す。実施例２６１０ｍｇのメラニンを１ｍｌの蒸留水に加え、水酸化アンモニウム溶液でｐＨを上げた後溶解した。５０μｌの上記濃縮溶液を、９５０μｌの蒸留水に加えることによって２０倍に希釈した。マイクロプレートの７ウェル２列に、０、１２．５、２５、３７．５、及び５０μｌの希釈溶液、さらには、１２．５及び２５μｌの濃縮溶液を加えた。１列目の各ウェル中に、１００ｍｇ／ｍｌの濃度で冷却しながら１０分間音波処理することによって調製された大豆のホスファチジルコリン分散液１００μｌを添加した。他方の列は何等操作を行わなかった。このプレートをよく混合し、−２０℃で凍結して一晩凍結乾燥した。翌日、メラニン／脂質の複合体を含む列のウェルには１００μｌのＭ８１８を加え、メラニンのみを含む列のウェルには１００μｌの蒸留水を加えた。すべての溶液が、これらは赤茶色に着色したが、完全に透明になった後、６００ｎｍにおける光学濃度を全濃度のメラニンに関して測定した。表及び添付図面より、上記濃度範囲はベール−ランバートの法則に従い（即ち、応答曲線が直線である）、メラニンの挙動は油及び水溶液両方に関して一致することが示される。ホスファチジルコリンの不存在下で音波処理によってＭ８１８中に分散されたメラニンは黒い分散液となり、これは遠心によって沈降させると透明な上清が得られる。このような変化は、Ｍ８１８に分散したメラニン／脂質の複合体を遠心した後には、観察されなかった。６００ｎｍにおける測定実施例２７大豆のホスファチジルコリンの分散液を、冷却しながら蒸留水中で１００ｍｇ／ｍｌの濃度で１０分間プローブソニケーション(probe sonication)によって調製した。１ｍｌの上記懸濁液をガラス製の容器に分散し、６６０μｌの硫酸ネオマイシンの溶液（蒸留水において５ｍｇ／ｍｌ）を加えた。混合後、チューブの内容物を液体窒素でシェルフリーズし、一晩凍結乾燥した。翌日、１ｇのミグリオール８１８を加え、容器を窒素でフラッシし、よく密閉し、室温で一晩放置した。肉眼では透明な溶液を得た。実施例２８バソプレシンを硫酸ネオマイシンの代わりに使用する以外は、実施例２７と同様の操作を用いた。実施例２９５−フルオロウラシルを硫酸ネオマイシンの代わりに使用する以外は、実施例２７と同様の操作を用いた。実施例３０５−フルオロデオキシウリジン(5-Fluoro deoxyuridine)を硫酸ネオマイシンの代わりに使用する以外は、実施例２７と同様の操作を用いた。実施例３１０．５５ｍｌのリボヌクレアーゼ溶液（１０ｍｇのＲＮＡａｓｅ／ｍｌを含む）を実施例２と同様にして調製された大豆のＰＣのＳＵＶ１．６ｍｌと混合し、液体窒素中でシェルフリーズし、一晩凍結乾燥した。凍結乾燥物を１．６ｇのミグリオール８１８と混合し、ボルテックスし、放置した。数時間後、透明な分散液が形成された。実施例３２４０μｌの水溶液に溶かした３２μｇのプラスミドＤＮＡに、４０μｌの０．２ｍＭのスペルミン溶液を加えた；この調製物を混合し、１５分間放置し、ＤＮＡを濃縮した。大豆のＰＣのＳＵＶを、５０ｍｇのＰＣ／ｇを含む以外は実施例２と同様して調製し、４０μｌをＤＮＡ／スペルミン混合物に添加した。この調製物を凍結し、一晩凍結乾燥し、１００μｌのミグリオール８１８を得られた凍結乾燥物に添加した。この調製物を１時間かけて分散すると、透明な分散液が得られた。実施例３３３本の小試験管を２列並べた。第一列の各試験管には、実施例５と同様にして調製した、５７μｌの１０ｍｇインスリン／ｍｌを含む溶液を加えた。第二列の各試験管には、０．２ｍｌの０．２６７ｍＭのカルボキシフルオレセイン(carbo xyfluorescein)（ＣＦ）を加えた。１００ｍｇＰＣ／ｍｌを含む大豆のＰＣのＳＵＶを実施例２と同様にして調製し、０．２ｍｌを各試験管に加えた。これらの試験管の内容物を混合し、シェルフリーズし、一晩凍結乾燥した。各々が２％（ｗｔ／ｗｔ）のオレイン酸を含む、高融点のトリグリセリドであるトリパルミチン（ＴＰ）、トリヘプタデカノイン(triheptadecanoin)（ＴＨ）及びトリステアリン（ＴＳ）の溶融液を、適当な成分を一緒に加え、液化が起こるまで７８℃ に加熱した後短期間ボルテックスすることによって調製した。凍結乾燥物をオーブンの中で同温度に加熱した。インスリン含有凍結乾燥物の試験管番号１、２及び３に１５０ｍｇのＴＰ、ＴＨ及びＴＳ−含有溶融液をそれぞれ加えた。ＣＦ含有凍結乾燥物の試験管番号１、２及び３に１００ｍｇの溶融液を同様の順で加えた。それぞれを添加した後、試験管にキャップをして短期間ボルテックスした後、オーブン中に戻した。数分後、すべてのＣＦ分散液は完全に透明であった。インスリン調製物は１から２時間で透明になり、ほとんど透明な分散液を形成した。実施例３４０．３ｍｇのグルコース（１．５ｍｇ／ｍｌを含む溶液由来）及び６ｍｇの大豆のＰＣ（実施例２と同様にして調製されたＳＵＶ由来）を各々含む、一連の凍結乾燥物を調製した。３個の凍結乾燥物に、３００ｍｇのオクタノール、オレイン酸及びミグリオール８１８をそれぞれ添加した。オクタノール調製物は数分間で分散し、オレイン酸及びミグリオール調製物は２から３時間で分散し、透明な分散液を形成した。実施例３５０．８ｍｌの２５ｍＭの塩化カルシウム及び０．８ｍｌの大豆のＰＣのＳＵＶ（実施例２と同様にして調製）由来の凍結乾燥物を調製した。１つの凍結乾燥物には、５００ｍｇのミグリオール８１８を加え、他方には、５００ｍｇのオレイン酸を加えた。オレイン酸調製物は数時間後に完全に透明な分散液を形成し、ミグリオール調製物は一晩放置後に完全に透明な分散液を形成した。実施例３６別個の小さなガラス製のバイアルに、それぞれ１０ｍｇ／ｍｌを含む溶液１００μｌの形態を有する、１ｍｇのアプロチニン及び１ｍｇのインスリンを添加した。インスリン溶液は実施例５と同様にして調製した。次に、各バイアルに、０．２ｍｌのＡＯＴ（１０％（ｗ／ｖ）水溶液として供給）を加えた。この混合物をシェルフリーズし、一晩凍結乾燥し、２００ｍｇのオクタノールを各々に添加した。アプロチニン調製物は直ぐに透明になったが、２４時間後には乳白色の分散液を形成した。インスリン調製物はより遅く分散したが、一晩放置した後は透明であった。実施例３７０．８ｍｇのムコールメヒイ(Mucor mehii)のリパーゼを含む２０μｌのリパーゼ溶液を２本のガラス製の小バイアルに各々添加した。一つのバイアルには３６ｍｇのリゾＰＣ／ｍｌを含むミセル溶液８９μｌを加え、他方には実施例２と同様にして調製した大豆のＰＣのＳＵＶ９６μｌを加えた。各バイアルの内容物を混合し、液体窒素中で凍結し、一晩凍結乾燥した。各凍結乾燥物に、８８ｍｇのコレステロール／ｇ及び１ｍｇのα−トコフェノール／ｇを含む５００ｍｇのリノレン酸を添加した。これらのバイアルを窒素でフラッシし、密閉し、２時間ローラーミキサーに移すと、それまでにはそれぞれ透明な分散液を形成した。次に、バイアルを加熱ブロック(heating block)中で５０℃で一晩インキュベートした。これらの混合物を、適当なコントロールと共に、薄層クロマトグラフィーによって分析したところ、コレステロールリノレエート(cholesterol linolea te)が各調製物中で生合成されていたことが分かった。これより、本発明は、親油性の溶液中に親水性物質を導入する方法および様々な多くの用途のある多能な生成物を提供するものであることが分かる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年１１月２９日【補正内容】２５．親水性物質部分が両親媒性分子に囲まれ、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質の方に向いており、かつ両親媒性分子と親水性物質との間には化学的な相互作用が存在しないことを特徴とする、疎水性溶剤における親水性物質及び両親媒性物質からなる単相の疎水性調製物。２６．親水性物質と会合する、胆汁酸塩、薬剤またはビタミン類等の小さい分子からさらになる、請求の範囲第２４または２５項に記載の調製物。２７．アレイが水をアレイに添加した際にリポソームを形成できないものである際に、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質部分の方を向き、かつ両親媒性物質と親水性物質との間には化学的な相互作用が存在しないことを特徴とする、両親媒性分子及び親水性物質からなるアレイ。２８．疎水性相が請求の範囲第２４から２７項のいずれかに記載の調製物からなる、親水性相及び疎水性相らなる２相組成物。２９．該疎水性相が連続した親水性相中に分散する、請求の範囲第２８項に記載の組成物。３０．乳濁液である、請求の範囲第２８または２９項に記載の組成物。【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９６年１１月２３日【補正内容】１１．親水性溶剤が水である、請求の範囲第１０項に記載の方法。１２．両親媒性物質の集合体がミセル、単層の小胞、例えば単層の小胞、多層の小胞または渦巻形のシリンダー等の管状構造物、六角形相、立方形相またはミエリン型構造物からなる、請求の範囲第１０または１１項に記載の方法。１３．親水性物質に対する両親媒性物質の重量比が１：１〜１００：１である、請求の範囲第１０から１２項のいずれかに記載の方法。１４．該親水性溶剤は凍結乾燥によって除去される、請求の範囲第１０から１３項のいずれかに記載の方法。１５．親水性物質／両親媒性物質のアレイが、共通の溶剤に高分子化合物及び両親媒性物質を一緒に可溶化し、さらに該共通の溶剤を除去することによって形成される、請求の範囲第１から１０項のいずれかに記載の方法。１６．液状媒質中で親水性物質及び両親媒性物質を会合し、さらに該液状媒質を除去することからなる、親水性物質／両親媒性物質のアレイの調製方法。１７．該共通の溶剤がジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、または氷酢酸である、請求の範囲第１５または１６項に記載の方法。１８．該溶剤が窒素気流下で乾燥することによって除去される、

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者カービー，クリストファージョンイギリス国，バークシャイアーアールジー11 ２ワイエル，ウォーキングハム，オックスフォードロード 95

Claims

【特許請求の範囲】１．以下よりなる、疎水性溶剤において、親水性物質からなる単相の疎水性調製物の調製方法：（ｉ）液状媒質中で親水性物質と両親媒性物質とを会合する；（ｉｉ）液状媒質を除去し、両親媒性物質と親水性物質との間には化学的な相互作用は存在せずに、親水性のヘッドグループが親水性物質の方に向いた両親媒性分子のアレイを残す；および（ｉｉｉ）親水性物質／両親媒性物質のアレイの周りに疎水性溶剤を供給する。２．該親水性物質が高分子、小さな有機若しくは無機分子またはコロイド物質である、請求の範囲第１項に記載の方法。３．該高分子がタンパク質、糖タンパク質、オリゴ−若しくはポリ核酸、多糖またはこれらの超分子集合体である、請求の範囲第２項に記載の方法。４．該タンパク質がインスリン、カルシトニン、ヘモグロビン、シトクロムＣ、西洋ワサビのペルオキシダーゼ、アプロチニン、マッシュルームのチロシナーゼ、エリトロポエチン、ソマトトロピン、成長ホルモン、成長ホルモン放出因子、ガラニン、ウロキナーゼ、因子ＩＸ、組織プラスミノーゲン活性化因子、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、フェリチン、インターフェロン、因子ＶＩＩＩまたはこれらの断片である、請求の範囲第３項に記載の方法。５．該両親媒性物質がリン脂質である、請求の範囲第１から４項のいずれかに記載の方法。６．該リン脂質がホスファチジルコリンのヘッドグループを有する、請求の範囲第５項に記載の方法。７．該リン脂質がホスファチジルコリン（ＰＣ）、リゾ−ホスファチジルコリン（ｌｙｓｏ−ＰＣ）、スフィンゴミエリン、ヘキサデシルホスホコリン等の上記いずれかの誘導体またはホスホリルコリンを含む両親媒性ポリマーである、請求の範囲第６項に記載の方法。８．該疎水性溶剤が長鎖の脂肪酸、中鎖のアルコール、枝分れ長鎖アルコール、モノグリセリド、ジグリセリドまたは中鎖のトリグリセリドからなる、請求の範囲第１から７項のいずれかに記載の方法。９．該両親媒性物質がＰＣからなり該疎水性溶剤がトリグリセリドからなるまたは該両親媒性物質がｌｙｓｏ−ＰＣからなり該疎水性溶剤がオレイン酸からなる、請求の範囲第１から８項のいずれかに記載の方法。１０．親水性物質／両親媒性物質のアレイが、親水性溶剤中で高分子または化合物を両親媒性物質の分散液と混合し、親水性溶剤を除去することによって形成される、請求の範囲第１から９項のいずれかに記載の方法。１１．親水性溶剤が水である、請求の範囲第１０項に記載の方法。１２．両親媒性物質の集合体がミセル、単層の小胞、例えば単層の小胞、多層の小胞または渦巻形のシリンダー等の管状構造物、六角形相、立方形相またはミエリン型構造物からなる、請求の範囲第１０または１１項に記載の方法。１３．親水性物質に対する両親媒性物質の重量比が１：１〜１００：１である、請求の範囲第１０から１２項のいずれかに記載の方法。１４．該親水性溶剤は凍結乾燥によって除去される、請求の範囲第１０から１３項のいずれかに記載の方法。１５．親水性物質／両親媒性物質のアレイが、共通の溶剤に高分子化合物及び両親媒性物質を一緒に可溶化し、さらに該共通の溶剤を除去することによって形成される、請求の範囲第１から１０項のいずれかに記載の方法。１６．共通の溶剤中に親水性物質及び両親媒性物質を一緒に可溶化し、さらに該共通の溶剤を除去することからなる、親水性物質／両親媒性物質のアレイの調製方法。１７．該共通の溶剤がジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、まはた氷酢酸である、請求の範囲第１５または１６項に記載の方法。１８．該溶剤が窒素気流下で乾燥することによって除去される、請求の範囲第１５から１７項のいずれかに記載の方法。１９．親水性物質／両親媒性物質のアレイが、疎水性溶剤中に溶解した両親媒性物質の溶液を親水性溶剤中に溶解した親水性物質の溶液を用いて乳化して乳濁液を得、さらに該疎水性溶剤を除去することによって形成される、請求の範囲第１から９項のいずれかに記載の方法。２０．疎水性溶剤中に溶解した両親媒性物質の溶液を親水性溶剤中に溶解した親水性物質の溶液を用いて乳化して乳濁液を得、さらに該疎水性溶剤を除去することからなる、親水性物質／両親媒性物質のアレイの調製方法。２１．親水性物質に対する両親媒性物質の重量比が約１：１〜５０：１である、請求の範囲第１５から２０項のいずれかに記載の方法。２２．該乳濁液が油中水滴形乳濁液である、請求の範囲第２０または２１項に記載の方法。２３．該疎水性溶剤がジエチルエーテル等の低沸点の有機溶剤である、請求の範囲第２０または２１項に記載の方法。２４．請求の範囲第１から２３項のいずれかに記載の方法によって得られる、疎水性溶剤における親水性物質の単相の疎水性調製物。２５．親水性物質部分が両親媒性分子に囲まれ、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質の方に向いており、かつ両親媒性分子と親水性物質との間には化学的な相互作用が存在しないことを特徴とする、疎水性溶剤における親水性物質及び両親媒性物質からなる単相の疎水性調製物。２６．親水性物質と会合する、胆汁酸塩、薬剤またはビタミン類等の小さい分子からさらになる、請求の範囲第２４または２５項に記載の調製物。２７．両親媒性物質が水をアレイに添加した際にリポソームを形成できないものである際に、両親媒性分子の親水性のヘッドグループが親水性物質部分の方を向き、かつ両親媒性物質と親水性物質との間には化学的な相互作用が存在しないことを特徴とする、両親媒性分子及び親水性物質からなるアレイ。２８．疎水性相が請求の範囲第２４から２７項のいずれかに記載の調製物からなる、親水性相及び疎水性相らなる２相組成物。２９．該疎水性相が連続した親水性相中に分散する、請求の範囲第２８項に記載の組成物。３０．乳濁液である、請求の範囲第２８または２９項に記載の組成物。