JPH1156377A - Ｇタンパク質共役型受容体ｈｆｉａｏ４１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 HFIAO41ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ド並びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法を
提供する。 【解決手段】 配列番号２のHFIAO41ポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８
０％同一であり、かつHFIAO41ポリペプチドの活性を有
するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、また
はこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド
配列を含んでなるポリヌクレオチドを単離する。 【効果】 HFIAO41ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは感染症、疼痛、癌、糖尿病、肥満、食欲不振、過
食、喘息、パーキンソン病、急性心不全、低血圧、高血
圧、閉尿、骨粗しょう症、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、ア
レルギー、良性の前立腺肥大、および精神及び神経障害
を含む機能障害または疾病の治療と、このような症状の
診断アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドはＧタンパク質共役型受容体ファミリー（以後HFIAO4
1と記す）に関する。本発明はまた、このようなポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドの作用を阻害または活性
化することに関する。

【０００２】

【従来の技術】多くの医学的に重要な生物学的プロセス
が、Ｇタンパク質を含めたシグナル伝達経路に関与して
いるタンパク質および／または第二メッセンジャー(例
えばｃＡＭＰにより媒介されるということはよく知られ
ている( Lefkowitz, Nature, 19 91,351：353−354)。
本明細書中では、これらのタンパク質はＧタンパク質ま
たはＰＰＧタンパク質を含む経路に関与しているタンパ
ク質と称される。これらのタンパク質のいくつかの例と
しては、アドレナリン作動薬およびドーパミンの受容体
( Kobil ka, B. K.,et al., Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1
987,84：46−50；Kobilka, B. K.,et al., Science,198
7，238：650−656；Bunzow, J.R.,et al.,Nature,1988,
336：783−787)、Ｇタンパク質それ自体、エフェクター
タンパク質(例えばホスホリパーゼＣ、アデニルシクラ
ーゼ、およびホスホジエステラーゼ)、アクチュエータ
ータンパク質(例えばプロテインキナーゼAおよびプロテ
インキナーC)( Simon, M.I.,et al.,Science,1991,25
2：802−8)の受容体のようなGPC受容体が挙げられる。

【０００３】例えば、シグナル伝達の一つの形態におい
ては、ホルモンが結合することにより細胞内で酵素アデ
ニル酸シクラーゼが活性化される。ホルモンによるこの
酵素の活性化はヌクレオチドGTPの存在に依存する。GTP
もまたホルモンの結合に影響を及ぼす。Ｇタンパク質は
ホルモン受容体をアデニル酸シクラーゼと結びつけてい
る。Ｇタンパク質はホルモン受容体により活性化される
と、結合していたＧＤＰをＧＴＰと交換することが示さ
れた。このＧＴＰ担持形態は次に活性化されたアデニル
酸シクラーゼに結合する。GTPからGDPへの加水分解はＧ
タンパク質自身によって触媒され、Ｇタンパク質はその
不活性な基礎状態に戻る。したがって、Ｇタンパク質は
シグナルを受容体からエフェクターへ引き継ぐ中間物質
として、およびシグナルの持続時間を制御する時計とし
て機能し、2つの役割を果たしている。

【０００４】Ｇタンパク質共役型受容体の膜タンパク質
遺伝子スーパーファミリーは７つの推定上の膜貫通ドメ
インを有すると特徴付けられた。これらのドメインは細
胞外、または細胞質ループにより接続された膜貫通α−
ヘリックスに相当すると考えられる。Ｇタンパク質共役
型受容体には、ホルモンやウイルス、増殖因子および神
経の受容体といった多くの生物学的に活性な受容体が含
まれる。

【０００５】Ｇタンパク質共役型受容体(他には７ＴＭ
受容体としても知られている)は、少なくとも８つの異
なる親水性ループをつなぐ、約20〜30アミノ酸からなる
７つの保存された疎水性の領域を含むと特徴付けられて
きた。Ｇタンパク質共役型受容体のファミリーには、精
神病および神経障害の治療に用いる神経弛緩薬と結合す
るドーパミン受容体を含む。このファミリーのメンバー
の他の例としてはカルシトニン、アドレナリン、エンド
セリン、ｃＡＭＰ、アデノシン、ムスカリン、アセチル
コリン、セロトニン、ヒスタミン、トロンビン、キニ
ン、濾胞刺激ホルモン、オプシン、内皮細胞分化遺伝子
−1、ロドプシン、におい物質、およびサイトメガロウ
イルス受容体が含まれるが、これらに限らない。

【０００６】大部分のＧタンパク質共役型受容体は、機
能性タンパク質の構造を安定化させていると考えられる
ジスルフィド結合を形成する保存されたシステイン残基
を、最初の２つの細胞外ループの各々において1個有す
る。７つの膜貫通領域はＴＭ1、ＴＭ2、ＴＭ3、ＴＭ4、
ＴＭ5、ＴＭ6、およびＴＭ7と称される。ＴＭ3はシグナ
ル伝達に関与している。

【０００７】システイン残基のリン酸化およびリピド化
(パルミトイル化またはファルネシル化)はいくつかのＧ
タンパク質共役型受容体のシグナル伝達に影響を及ぼす
ことができる。大部分のＧタンパク質共役型受容体はそ
の3番目の細胞質ループおよび／またはカルボキシ末端
内にリン酸化部位を含むことが多い。β−アドレナリン
受容体のような数種のＧタンパク質共役型受容体では、
プロテインキナーゼＡおよび／または特異的な受容体キ
ナーゼによるリン酸化が受容体の脱感作を媒介する。

【０００８】いくつかの受容体では、Ｇタンパク質共役
型受容体のリガンド結合部位は数個のＧタンパク質共役
型受容体膜貫通ドメインにより形成される親水性のソケ
ット(socket)を含み、このソケットはＧタンパク質共役
型受容体の疎水性残基に囲まれていると考えられてい
る。各々のＧタンパク質共役型受容体膜貫通ヘリックス
の親水性の側は内部に面し、極性を持つリガンド結合部
位を形成していると仮定されている。ＴＭ３はＴＭ３ア
スパラギン酸残基のようなリガンド結合部位を有するた
め、一部のＧタンパク質共役型受容体におけるリガンド
の結合に関与してきた。ＴＭ５のセリン、ＴＭ６のアス
パラギンおよびＴＭ６またはＴＭ７のフェニルアラニン
またはチロシンもまたリガンド結合に関与している。

【０００９】Ｇタンパク質共役型受容体は、ヘテロ三量
体Gタンパク質により種々の細胞内酵素、イオンチャン
ネルおよびトランスポーターに細胞内で結合し得る（ J
ohnson et al., Endoc.Rev., 1989,10:317−331参
照）。個々のGタンパク質のαサブユニットは特定のエ
フェクターを優先的に刺激して、細胞内の種々の生物学
的機能をモジュレートする。Gタンパク質共役型受容体
の細胞質側の残基のリン酸化は、一部のGタンパク質共
役型受容体のGタンパク質の共役を調節するために重要
な機構であるとして同定された。Gタンパク質共役型受
容体は、哺乳動物宿主の非常に多くの部位で見つかって
いる。

【００１０】過去15年に渡り、７回膜貫通（7ＴＭ）受
容体を標的とする350種類近くの治療薬が市場に出回り
成功してきた。こうしたことは、これらの受容体に治療
用ターゲットとしての確立され実証された歴史があるこ
とを示している。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、細菌感染、
真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染、特にHIV
−１またはHIV−２により引き起こされる感染といった
感染症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不振；過食；喘
息；パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉
尿；骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギ
ー；良性の前立腺肥大；および不安、精神分裂病、躁鬱
病、譫妄、痴呆、ハンチントン症またはジル・ド・ラ・ト
ゥーレット症候群のような深刻な精神薄弱およびジスキ
ネジアを含む精神及び神経障害を含むがこれらに限らな
い、機能障害または疾病を予防し、改善し、治療する上
で何らかの役割を果たす新たな受容体を同定して特徴付
ける必要性が存在している。本発明はこのような受容体
を提供するものである。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、HFIAO41ポリペプチドおよび組換え物質、並び
にその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様はHF
IAO41ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法
に関する。こうした使用には、とりわけ、細菌感染、真
菌感染、原生動物感染およびウイルス感染、特にHIV−
１またはHIV−２により引き起こされる感染といった感
染症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不振；過食；喘
息；パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉
尿；骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギ
ー；良性の前立腺肥大；および不安、精神分裂病、躁鬱
病、譫妄、痴呆、ハンチントン症またはジル・ド・ラ・ト
ゥーレット症候群のような深刻な精神薄弱およびジスキ
ネジアを含む精神及び神経障害の治療が含まれる。他の
態様では、本発明は、本発明により提供される物質を用
いてアゴニストおよびアンタゴニストを同定する方法、
並びに同定された化合物を用いてHFIAO41の不均衡と関
連した状態を治療することに関する。本発明のさらに他
の態様は、不適当なHFIAO41活性またはHFIAO41レベルと
関連した疾病を検出するための診断アッセイに関する。

【００１３】定義 下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。「HFIAO41」とは、
特に、一般的には配列番号２で表されるアミノ酸配列を
有するポリペプチドまたはそのアレリック変異体を意味
する。「受容体活性」または「受容体の生物学的活性」
とは、類似の活性、向上した活性、または望ましくない
副作用が低下したこれらの活性を含めて、HFIAO41の代
謝的または生理的機能を意味する。さらに、前記HFIAO4
1の抗原的および免疫原的活性も含まれる。「HFIAO41遺
伝子」とは、配列番号１で表されるヌクレオチド配列を
有するポリヌクレオチドまたはそのアレリック変異体お
よび／またはそれらの相補体を意味する。

【００１４】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリク
ローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本
鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロ
ブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメン
トが含まれる。「単離された」とは、天然の状態から
「人間の手によって」改変されたことを意味する。「単
離された」組成物または物質が天然に存在するのであれ
ば、それはそのもとの環境から変化しているか移動して
おり、またはその両方である。例えば、生存している動
物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然
状態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単
離された」ものである。

【００１５】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より一般的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【００１６】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の受容体コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝
した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天
然プロセスから生じることがあり、また、合成法によっ
て製造することもできる。修飾としては、アセチル化、
アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの
共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の
共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架
橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有
架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形
成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、
PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICAT
ION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic Press,
New York,1983中のWold, F., Posttranslational Prote
in Modifications: Perspectivesand Prospects, pgs.
1-12; Seifter ら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646; および Rattan ら, “Protein Synthe
sis: Posttranslational Modifications and Aging", A
nn NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと。

【００１７】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレリック変異体のように天然に存在す
るものでも、天然に存在することが知られていない変異
体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または
直接合成により調製することができる。

【００１８】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級の整合
（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」そ
れ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表され
た技法を使って計算することができる。例えば、COMPUT
ATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, OxfordUn
iversity Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: INFO
RMATICS AND GENOMEPROJECTS, Smith, D.W. 編, Academ
ic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF SEQ
UENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin, H.
G. 編, HumanaPress, New Jersey, 1994; SEQUENCE ANA
LYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, von Heinje, G., Academ
ic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIMER, G
ribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press,
New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多
数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者
には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J
Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の同一
性または類似性を決定するために汎用される方法として
は、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編,
Academic Press, San Diego, 1994 およびCarillo, H.
and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:1073
に記載される方法があるが、これらに限らない。同一
性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに
集成されている。２つの配列間の同一性および類似性を
決定するための好適なコンピュータプログラム法として
は、GCS プログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucl
eic Acids Research (1984) 12(1):387)、BLASTP、BLAS
TN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990) 21
5:403)があるが、これらに限らない。

【００１９】一例として、配列番号１の基準ヌクレオチ
ド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一
性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配
列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌク
レオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうること
を除けば、基準配列と同一であることを意図している。
言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを
欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または
基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド
数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突
然変異は、基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位
置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基
準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列
内に１以上の連続するグループとして配置することがで
きる。

【００２０】同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に
対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペ
プチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ
１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含み
うることを除けば、基準配列と同一であることを意図し
ている。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを
得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失
させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列
中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列
に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準ア
ミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、また
はこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中
のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして配置することができる。

【００２１】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド 一つの態様において、本発明はHFIAO41ポリペプチド
（またはHFIAO41タンパク質）に関する。このHFIAO41ポ
リペプチドには、配列番号２および４のポリペプチドだ
けでなく、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチ
ド、その全長において配列番号２のアミノ酸配列と少な
くとも８７％、好ましくは少なくとも９０％、より好ま
しくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む
ポリペプチドも含まれる。さらに、少なくとも９７〜９
９％同一であるものが非常に好適である。また、その全
長において配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドと少なくとも８７％、好ましくは少なくとも９０
％、より好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ
酸配列を有するポリペプチドもHFIAO41ポリペプチドに
含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一である
ものが非常に好適である。HFIAO41ポリペプチドはこの
受容体の少なくとも１つの生物学的活性を示すことが好
ましい。

【００２２】HFIAO41ポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形であっても、融合タンパク質のような、より大き
いタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加の
アミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなア
ミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ
配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、
または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配列な
どがある。

【００２３】また、HFIAO41ポリペプチドの断片も本発
明に含まれる。こうした断片は全体的に前記HFIAO41ポ
リペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、全部
とは同一でないアミノ酸配列を有するポリペプチドであ
る。HFIAO41ポリペプチドと同様に、断片は「フリース
タンディング」（それ自体で独立）していても、より大
きいポリペプチド内に含まれていてもよく、つまりその
大きいポリペプチドの一部または一領域、最も好ましく
は一つの連続領域、を断片が構成していてもよい。本発
明のポリペプチド断片の代表的な例として、およその見
当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４１−６０、
６１−８０、８１−１００、および１０１からHFIAO41
ポリペプチドの末端までの断片が挙げられる。ここで、
「およそ」とは、上記の範囲の一端または両端で数個、
５個、４個、３個、２個または１個のアミノ酸が増えた
り減ったりした範囲を含むものである。

【００２４】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除いた、HF
IAO41ポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケー
ション(truncation)ポリペプチドが含まれる。また、α
ヘリックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシー
ト形成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイル
形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、
β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質結合
領域、および高抗原指数領域を含む断片のような、構造
的または機能的特性により特徴づけられる断片も好適で
ある。その他の好適な断片は生物学的に活性な断片であ
る。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断片、
その活性が向上した断片、または望ましくない活性が減
少した断片を含めて、HFIAO41活性を媒介するものであ
る。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫
原性がある断片も含まれる。

【００２５】これらのポリペプチド断片はどれも、抗原
活性を含めたHFIAO41の生物学的活性を保持することが
好ましい。特定された配列および断片の変異型も本発明
の一部を構成する。好適な変異型は同類アミノ酸置換に
より対象物と異なるもの、すなわち、ある残基が同様の
性質の他の残基で置換されているものである。典型的な
こうした置換は、Ala, Val, Leu と Ileの間；Ser とTh
r の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；塩
基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個また
は１〜２個のアミノ酸が任意の組合せで置換、欠失また
は付加されている変異型が好適である。

【００２６】本発明のHFIAO41ポリペプチドは任意の適
当な方法で製造することができる。このようなポリペプ
チドには、単離された天然に存在するポリペプチド、組
換え的に生産されたポリペプチド、合成的に製造された
ポリペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製造
されたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチ
ドの製造のための手段は当業界でよく理解されている。

【００２７】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つの態様はHFIAO41ポリヌクレオチドに
関する。HFIAO41ポリヌクレオチドには、HFIAO41ポリペ
プチドおよび断片をコードする単離されたポリヌクレオ
チド、並びにこれらと密接に関連したポリヌクレオチド
が含まれる。さらに特定すると、本発明のHFIAO41ポリ
ヌクレオチドとしては、配列番号２のHFIAO41ポリペプ
チドをコードする配列番号１中に含まれるヌクレオチド
配列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１および
３の特定配列を有するポリヌクレオチドがある。さら
に、HFIAO41ポリヌクレオチドには、配列番号２のHFIAO
41ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とその全
長において少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配
列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１のヌクレ
オチド配列とその全長において少なくとも８０％同一で
あるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが含まれ
る。これに関連して、少なくとも９０％同一であるポリ
ヌクレオチドが好適であり、特に少なくとも９５％同一
であるものが好適である。さらに、少なくとも９７％同
一であるものがより好ましく、少なくとも９８〜９９％
同一であるものがより一層好ましく、少なくとも９９％
同一であるものが最も好ましい。また、増幅反応に使用
できる条件下、またはプローブやマーカーとして使用で
きる条件下でハイブリダイズするのに十分な、配列番号
１中に含まれるヌクレオチド配列との同一性を有するヌ
クレオチド配列もHFIAO41ポリヌクレオチドに含まれ
る。本発明はまた、このようなHFIAO41ポリヌクレオチ
ドと相補的なポリヌクレオチドを提供する。

【００２８】本発明のHFIAO41は、ヒトHFIAO41をコード
する表１のｃＤＮＡ（配列番号１）の配列決定の結果に
より示されるように、Ｇタンパク質共役型受容体ファミ
リーの他のタンパク質と構造的に関連している。配列番
号１のｃＤＮＡ配列は配列番号２の350個のアミノ酸か
らなるポリペプチドをコードするオープンリーディング
フレーム（ヌクレオチド番号249−1298）を含んでい
る。表２のアミノ酸配列（配列番号２）は350個のアミ
ノ酸残基においてウシ潜在的味覚受容体Ｂ型( Bovine P
ossible Gustatory Receptor TypeＢ)(Biochem.Biophy
s.Res. Commun.194(１)504−511,1993)と約86％同一で
ある( FASTA使用）。さらに、HFI AO41(配列番号2)はヒ
トEBV誘導Ｇタンパク質共役型受容体の332アミノ酸残基
において39％同一である( J.Virol.67 (4) 2209−2220,
1993)。表１のヌクレオチド配列（配列番号１）は2407
個のヌクレオチド残基においてウシ潜在的味覚受容体Ｂ
型( Biochem.Biophys.Res.Commun.194(１)504−511,199
3)と約64％同一である( FASTA使用）。したがって、本
発明のHFIAO41ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
は、とりわけ、それらの相同ポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドと同様の生物学的機能／特性をもつことが予
測され、それらの有用性は当業者には自明である。

【００２９】ヒトHFIAO41のヌクレオチド配列（配列番
号１）

【表１】 1 GAACCGAGAT TATACCATTA CAGTCCAGCC TGGGCAACAG AGCCAGAGAC 51 CCTGTCATAA ATAAATAAAT AAACAAACAA ACAAATAAAA ATGGTGGAGT 101 cTGAAAAAGG ACTGGGTCAG CAAGAATAAA AACACAAAAC AGCTGGAGGA 151 GCCAAGATGG CCGAATAGGA ACAGCTCCGG TcTACAGCTC CCAGCGTGAG 201 CGACGCAGAA GACGGGTGAT TTCTGCATTT CCATCTGAGA TTGGAGCCAT 251 GGCTTTGGAA CAGAACCAGT CAACAGATTA TTATTATGAG GAAAATGAAA 301 TGAATGGCAC TTATGACTAC AGTCAATATG AACTGATCTG TATCAAAGAA 351 GATGTCAGAG AATTTGCAAA AGTTTTCCTC CCTGTATTCC TCACAATAGT 401 TTTCGTCATT GGACTTGCAG GCAATTCCAT GGTAGTGGCA ATTTATGCCT 451 ATTACAAGAA ACAGAGAACC AAAACAGATG TGTACATCCT GAATTTGGCT 501 GTAGCAGATT TACTCCTTCT ATTCACTCTG CCTTTTTGGG CTGTTAATGC 551 AGTTCATGGG TGGGTTTTAG GGAAAATAAT GTGCAAAATA ACTTCAGCCT 601 TGTACACACT AAACTTTGTC TCTGGAATGC AGTTTCTGGC TTGTATCAGC 651 ATAGACAGAT ATGTGGCAGT AACTAAAGTC CCCAGCCAAT CAGGAGTGGG 701 AAAACCATGC TGGATCATCT GTTTCTGTGT CTGGATGGCT GCCATCTTGC 751 TGAGCATACC CCAGCTGGTT TTTTATACAG TAAATGACAA TGCTAGGTGC 801 ATTCCCATTT TCCCCCGCTA CCTAGGAACA TCAATGAAAG CATTGATTCA 851 AATGCTAGAG ATCTGCATTG GATTTGTAGT ACCCTTTCTT ATTATGGGGG 901 TGTGCTACTT TATCACAGCA AGGACACTCA TGAAGATGCC AAACATTAAA 951 ATATCTCGAC CCCTAAAAGT TCTGCTCACA GTCGTTATAG TTTTCATTGT 1001 CACTCAACTG CCTTATAACA TTGTCAAGTT CTGCCGAGCC ATAGACATCA 1051 TCTACTCCCT GATCACCAGC TGCAACATGA GCAAACGCAT GGACATCGCC 1101 ATCCAAGTCA CAGAAAGCAT CGCACTCTTT CACAGCTGCC TCAACCCAAT 1151 CCTTTATGTT TTTATGGGAG CATCTTTCAA AAACTACGTT ATGAAAGTGG 1201 CCAAGAAATA TGGGTCCTGG AGAAGACAGA GACAAAGTGT GGAGGAGTTT 1251 CCTTTTGATT CTGAGGGTCC TACAGAGCCA ACCAGTACTT TTAGCATTTA 1301 AAGGTAAAAC TGCTCTGCCT TTTGCTTGGA TACATATGAA TGATGCTTTC 1351 CCCTCAAATA AAACATCTGC ATTATTCTGA AACTCAAATC TCAGACGCCG 1401 TGGTTGCAAC TTATAATAAA GAATGGGTTG GGGGAAGGGG GAGAAATAAA 1451 AGCCAAGAAG AGGAAACAAG ATAATAAATG TACAAAACAT GAAAATTAAA 1501 ATGAACAATA TAGGAAAATA ATTGTAACAG GCATAAGTGA ATAACACTCT 1551 GCTGTAACGA AGAAGAGCTT TGTGGTGATA ATTTTGTATC TTGGTTGCAG 1601 TGGTGCTTAT ACAAATCTAC ACAAGTGATA AAATGACACA GAACTATATA 1651 CACACATTGT ACCAATTTCA ATTTCCTGGT TTTGACATTA TAGTATAATT 1701 ATGTAAGATG GAACCATTGG GGAAAACTGG GTGAAGGGTA CCCAGGACCA 1751 CTCTGTACCA TCTTTGTAAC TTCCTGTGAA TTTATAATAA TTTCAAAATA 1801 AAACAAGTTA AAAAAAAACC CACTATGCTA TAAGTTAGGC CATCTAAAAC 1851 AGATTATTAA AGAGGTTCAT GTTAAAAGGC ATTTATAATT ATTTTTAATT 1901 ATCTAAGTTT TAATACAAGA ACGATTTCCT GCATAATTTT AGTACTTGAA 1951 TAAGTATGCA GCAGAACTCC AACTATCTTT TTTCCTGTTT TTTTTAAATT 2001 TGTAAGTAAT TTTATAAAAT CCACCTCCTC CAAAAAAGCA ATAAAAAAAA 2051 AACAAACTAT AATAAGCTTT TCTGATTCTT TTCAAAACAT TCCTGGTAAG 2101 TTCCTAAAGA CATAATTTGC TTCTATGATG TCAACTTTCT TACTAATAAC 2151 TGGTTATCAT GACAAATGTT AGGTTTATCA TATATAGTCT AGGTGTAATC 2201 CTCAGACTAT CATTTTCATC TGGGTTCCAA TTTCTTAACT TCCTAAAGAA 2251 TTCATCTGTT TATACAAGTC TACCACTGCC GATTGACTAA AAAATACATT 2301 ATCCCATGCA TAAAATGTCC TATTTTCATT TAAACACTTT ATTTTTGAGT 2351 AATAAAAATA TGTACCACAA TAAATTATTG TTAATTAACA AAAAAAAAAA 2401 AAAAAAA

【００３０】ヒトHFIAO41のアミノ酸配列（配列番号
２）

【表２】 1 MALEQNQSTD YYYEENEMNG TYDYSQYELI CIKEDVREFA KVFLPVFLTI 51 VFVIGLAGNS MVVAIYAYYK KQRTKTDVYI LNLAVADLLL LFTLPFWAVN 101 AVHGWVLGKI MCKITSALYT LNFVSGMQFL ACISIDRYVA VTKVPSQSGV 151 GKPCWIICFC VWMAAILLSI PQLVFYTVND NARCIPIFPR YLGTSMKALI 201 QMLEICIGFV VPFLIMGVCY FITARTLMKM PNIKISRPLK VLLTVVIVFI 251 VTQLPYNIVK FCRAIDIIYS LITSCNMSKR MDIAIQVTES IALFHSCLNP 301 ILYVFMGASF KNYVMKVAKK YGSWRRQRQS VEEFPFDSEG PTEPTSTFSI

【００３１】HFIAO41をコードする本発明の一つのポリ
ヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリー
ニングにより、ヒト滑液繊維芽細胞、胎盤の細胞中のｍ
ＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、エク
スプレスド・シークエンス・タグ（expressed seque nc
e tag: EST)分析 (Adams, M.D. ら, Science (1991)25
2:1651-1656; Adams, M. D.ら, Nature (1992) 355:632
-634; Adams, M.D.ら,Nature (1995) 377 Supp:3-174)
を用いて得ることができる。また、本発明のポリヌクレ
オチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源から
得ることができ、商業的に入手可能な公知の技法を用い
て合成することもできる。

【００３２】配列番号２のHFIAO41ポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペプ
チドコード配列（配列番号１のヌクレオチド番号249−1
298）と同一であっても、受容体コードの重複性（縮
重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコード
する配列であってもよい。

【００３３】本発明のポリヌクレオチドをHFIAO41ポリ
ペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌ
クレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列または
その断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーもし
くは分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タン
パク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードする
もの）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペ
プチドのコード配列またはその断片が含まれる。例え
ば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列
がコードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例
として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, In
c.)により提供されかつGentz ら, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ
−ヒスチジンペプチド、またはＨＡタグである。また、
このポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例え
ば、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングお
よびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、お
よびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００３４】さらに好適な具体例は、数個、５〜１０
個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミ
ノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されて
いる、表２のHFIAO41ポリペプチドのアミノ酸配列（配
列番号２）を含むHFIAO41変異型をコードするポリヌク
レオチドである。中でも、本発明の好適なポリヌクレオ
チドは表４のアミノ酸配列（配列番号４）をコードする
表３のヌクレオチド配列（配列番号３）中に含まれるも
のである。

【００３５】ヒトHFIAO41の部分ヌクレオチド配列（配
列番号３）

【表３】 GCTTTGGAACAGAACCAGTCAACAGATTATTATTATGAGGAAAATGAAATGAATGGCACT TATGACTACAGTCAATATGAACTGATCTGTATCAAAGAAGATGTCAGAGAATTTGCAAAA GTTTTCCTCCCTGTATTCCTCACAATAGTTTTCGTCATTGGACTTGCAGGCAATTCCATG GTAGTGGCAATTTATGCCTATTACAAGAAACAGAGAACCAAAACAGATGTGTACATCCTG AATTTGGCTGTAGCAGATTTACTCCTTCTATTCACTCTGCCTTTTTGGGCTGTTAATGCA GTTCATGGGTGGGTTTTAGGGAAAATAATGTGCAAAATAACTTCAGCCTTGTACACACTA AACTTTGTCTCTGGAATGCAGTTTCTGGCTTGTATCAGCATAGACAGATATGTGGCAGTA ACTAAAGTCCCCAGCCAATCAGGAGTGGGAAAACCATGCTGGATCATCTGTTTCTGTGTC TGGATGGCTGCCATCTTGCTGAGCATACCCCAGCTGGTTTTTTATACAGTAAATGACAAT GCTAGGTGCATTCCCATTTTCCCCCGCTACCTAGGAACATCAATGAAAGCATTGATTCAA ATGCTAGAGATCTGCATTGGATTTGTAGTACCCTTTCTTATTATGGGGGTGTGCTACTTT ATCACAGCAAGGACACTCATGAAGATGCCAAACATTAAAATATCTCGACCCCTAAAAGTT CTGCTCACAGTCGTTATAGTTTTCATTGTCACTCAACTGCCTTATAACATTGTCAAGTTC TGCCGAGCCATAGACATCATCTACTCCCTGATCACCAGCTGCAACATGAGCAAACGCATG GACATCGCCATCCAAGTCACAGAAAGCATCGCACTCTTTCACAGCTGCCTCAACCCAATC CTTTATGTTTTTATGGGAGCATCTTTCAAAAACTACGTTATGAAAGTGGCCAAGAAATAT GGGTCCTGGAGAAGACAGAGACAAAGTGTGGAGGAGTTTCCTTTTGATTCTGAGGGTCCT ACAGAGCCAACCAGTACTTTTAGCATTTAAAGGTAAAACTGCTCTGCCTTTTGCTTGGAT ACATATGAATGATGCTTTCCCCTCAAATAAAACATCTGCATTATTCTGAAACTCAAATCT CAGACGCCGTGGTTGCAACTTATAATAAAGAATGGGTTGGGGGAAGGGGGAGAAATAAAA GCCAAGAAGAGGAAACAAGATAATAAATGTACAAAACATGAAAATTAAAATGAACAATAT AGGAAAATAATTGTAACAGGCATAAGTGAATAACACTCTGCTGTAACGAAGAAGAGCTTT GTGGTGATAATTTTGTATCTTGGTTGCAGTGGTGCTTATACAAATCTACACAAGTGATAA AATGACACAGAACTATATACACACATTGTACCAATTTCAATTTCCTGGTTTTGACATTAT AGTATAATTATGTAAGATGGAACCATTGGGGAAAACTGGGTGAAGGGTACCCAGGACCAC TCTGTACCATCTTTGTAACTTCCTGTGAATTTATAATAATTTCAAAATAAAACAAGTTAA AAAAAAACCCACTATGCTATAAGTTAGGCCATCTAAAACAGATTATTAAAGAGGTTCATG TTAAAAGGCATTTATAATTATTTTTAATTATCTAAGTTTTAATACAAGAACGATTTCCTG CATAATTTTAGTACTTGAATAAGTATGCAGCAGAACTCCAACTATCTTTTTTCCTGTTTT TTTTAAATTTGTAAGTAATTTTATAAAATCCACCTCCTCCAAAAAAGCAATAAAAAAAAA ACAAACTATAATAAGCTTTTCTGATTCTTTTCAAAACATTCCTGGTAAGTTCCTAAAGAC ATAATTTGCTTCTATGATGTCAACTTTCTTACTAATAACTGGTTATCATGACAAATGTTA GGTTTATCATATATAGTCTAGGTGTAATCCTCAGACTATCATTTTCATCTGGGTTCCAAT TTCTTAACTTCCTAAAGAATTCATCTGTTTATACAAGTCTACCACTGCCGATTGACTAAA AAATACATTATCCCATGCATAAAATGTCCTATTTTCATTTAAACACTTTATTTTTGAGTA ATAAAAATATGTACCACAATAAATTATTGTTAATTAACAAAAAAAAAAAAAAAAAA

【００３６】ヒトHFIAO41の部分アミノ酸配列（配列番
号４）

【表４】 ALEQNQSTDYYYEENEMNGTYDYSQYELICIKEDVREFAKVFLPVFLTIVFVIGLAGNSM VVAIYAYYKKQRTKTDVYILNLAVADLLLLFTLPFWAVNAVHGWVLGKIMCKITSALYTL NFVSGMQFLACISIDRYVAVTKVPSQSGVGKPCWIICFCVWMAAILLSIPQLVFYTVNDN ARCIPIFPRYLGTSMKALIQMLEICIGFVVPFLIMGVCYFITARTLMKMPNIKISRPLKV LLTVVIVFIVTQLPYNIVKFCRAIDIIYSLITSCNMSKRMDIAIQVTESIALFHSCLNPI LYVFMGASFKNYVMKVAKKYGSWRRQRQSVEEFPFDSEGPTEPTSTFSI

【００３７】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好
ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだ
けハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。

【００３８】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発
明のポリヌクレオチドは、HFIAO41ポリペプチドをコー
ドする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するた
めに、また、HFIAO41遺伝子との配列類似性が高い他の
遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソロ
グ体(ortholog)をコードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡおよ
びゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとし
て用いることができる。このようなハイブリダイゼーシ
ョン技法は当業者には公知である。一般的に、これらの
ヌクレオチド配列は対象物のヌクレオチド配列と８０
％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％同一であ
る。プローブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含
み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレ
オチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３
０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００３９】一実施態様において、HFIAO41ポリペプチ
ド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体
を含む）をコードするポリヌクレオチドを得ることは、
配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片（配列番
号３の断片を含む）を有する標識プローブを用いて、ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で適当
なライブラリーをスクリーニングし、前記のポリヌクレ
オチド配列を含む全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを
単離する各工程を含んでなる。このようなハイブリダイ
ゼーション技法は当業者に公知である。ストリンジェン
トなハイブリダイゼーション条件は上で定義したとおり
であるか、または、50% ホルムアミド、５×SSC (150mM
NaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナト
リウム (pH7.6)、５×Denhardt溶液、10% デキストラン
硫酸および20μg/mlの変性し剪断したサケ精子ＤＮＡを
含有する溶液中で４２℃で一夜インキュベートし、次い
でフィルターを 0.1×SSC 中約６５℃で洗浄する条件で
ある。

【００４０】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診
断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利
用することができる。

【００４１】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００４２】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (198 6)およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUA L, 2nd Ed., Cold Spri
ng Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1 989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに
記載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフ
ェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェ
クション、トランスベクション(transvection)、マイク
ロインジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェ
クション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレ
ープローディング(scrape loading)、弾丸導入(ballist
ic introduction)または感染により行うことができる。

【００４３】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００４４】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００４５】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００４６】スクリーニングアッセイで使用するためHF
IAO41ポリペプチドを発現させようとする場合、そのポ
リペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先
立って細胞を回収する。HFIAO41ポリペプチドが培地に
分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製する
ために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、そ
の細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する
必要がある。

【００４７】組換え細胞培養物からHFIAO41ポリペプチ
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリ
ペプチドが単離および／または精製中に変性されるとき
は、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。

【００４８】診断アッセイ 本発明はまた、診断薬としてのHFIAO41ポリヌクレオチ
ドの使用に関する。機能障害と関連したHFIAO41遺伝子
の変異型の検出は、HFIAO41の過少発現、過剰発現また
は変化した発現により生ずる疾病またはその罹病性の診
断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断用ツー
ルを提供するだろう。HFIAO41遺伝子に変異がある個体
を、さまざまな技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すこ
とができる。

【００４９】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識HFIAO41
ヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定で
きる。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖とは
ＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により区
別できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用いる
もしくは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動
度の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によっても
検出できる（例えば、Myers ら, Science (1985) 230:1
242 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレア
ーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよ
びＳ１プロテクション）または化学的開裂法によっても
確認できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1
985) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施態様で
は、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを
行うため、HFIAO41ヌクレオチド配列またはその断片を
含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築するこ
とができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性
を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を
含めた分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために
用いられている（例えば、M. Chee ら, Science, Vol.2
74, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００５０】診断アッセイは、前記の方法によりHFIAO4
1遺伝子の変異を検出することで、細菌感染、真菌感
染、原生動物感染およびウイルス感染、特にHIV−１ま
たはHIV−２により引き起こされる感染といった感染
症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不振；過食；喘息；
パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉尿；
骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；
良性の前立腺肥大；および不安、精神分裂病、躁鬱病、
譫妄、痴呆、ハンチントン症またはジル・ド・ラ・トゥー
レット症候群のような深刻な精神薄弱およびジスキネジ
アを含む精神及び神経障害への罹りやすさを診断または
判定する方法を提供する。

【００５１】さらに、被験者から得られたサンプルから
HFIAO41ポリペプチドまたはHFIAO41ｍＲＮＡのレベルの
異常な低下または増加を測定する方法により、細菌感
染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染、特に
HIV−１またはHIV−２により引き起こされる感染といっ
た感染症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不振；過食；
喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；
閉尿；骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレル
ギー；良性の前立腺肥大；および不安、精神分裂病、躁
鬱病、譫妄、痴呆、ハンチントン症またはジル・ド・ラ・
トゥーレット症候群のような深刻な精神薄弱およびジス
キネジアを含む精神及び神経障害の診断を下すことがで
きる。発現の低下または増加は、当技術分野で公知のポ
リヌクレオチド定量法のいずれか、例えばＰＣＲ、ＲＴ
−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロッ
ト、その他のハイブリダイゼーション法によりＲＮＡレ
ベルで測定することができる。宿主から得られたサンプ
ル中のHFIAO41ポリペプチドのようなタンパク質のレベ
ルを測定するためのアッセイ法は当業者によく知られて
いる。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッセ
イ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬ
ＩＳＡアッセイなどがある。

【００５２】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、疾病（特に細菌感染、真菌感染、原生動物感染お
よびウイルス感染、特にHIV−１またはHIV−２により引
き起こされる感染といった感染症；疼痛；癌；糖尿病、
肥満；食欲不振；過食；喘息；パーキンソン病；急性心
不全；低血圧；高血圧；閉尿；骨粗しょう症；狭心症；
心筋梗塞；潰瘍；喘息；アレルギー；良性の前立腺肥
大；および不安、精神分裂病、躁鬱病、譫妄、痴呆、ハ
ンチントン症またはジル・ド・ラ・トゥーレット症候群の
ような深刻な精神薄弱およびジスキネジアを含む精神及
び神経障害）またはこのような疾病への罹りやすさを診
断するためのキットに関し、このキットは、(a) HFIAO4
1ポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１のヌクレ
オチド配列）もしくはその断片、(b) (a) のヌクレオチ
ド配列に相補的なヌクレオチド配列、(c) HFIAO41ポリ
ペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）も
しくはその断片、または(d) HFIAO41ポリペプチド（好
ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、
を含んでなる。このようなキットにおいて、(a) 、(b)
、(c) または (d)が実質的な構成成分であることが理
解されよう。

【００５３】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすること
ができる。本発明にしたがって関連配列の染色体地図を
作成することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相
関させる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正
確な染色体位置にマッピングされたら、その染色体上の
その配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させるこ
とができる。この種のデータは、例えば、V. McKusick,
Mendelian Inheritance in Man (Johns Hopkins Unive
rsity Welch Medical Library からオンラインで入手可
能) 中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッ
ピングされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的
に隣接した遺伝子の共遺伝）により同定する。

【００５４】患者と正常個体とのｃＤＮＡまたはゲノム
配列の差異も調べることができる。患者の一部または全
部に変異が観察されるが、どの正常個体にも観察されな
い場合は、その変異が疾病の原因である可能性がある。

【００５５】抗体 本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、HFIAO41ポリペプチド
に免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても使
用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が
従来技術における他の関連ポリペプチドに対するその親
和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高い
親和性を有することを意味する。

【００５６】HFIAO41ポリペプチドに対する抗体は、慣
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以
外）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノ
クローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により
産生される抗体をもたらす任意の技法を用いることがで
きる。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.
およびMilstein, C., Natu re (1975) 256:495-497)、
トリオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法( Kozb
orら, Immunology Today (1983) 4:72)およびＥＢＶ−
ハイブリドーマ技法 ( Co leら, MONOCLONAL ANTIBODIE
S AND CANCER THERAPY, pp.77-96, Ala nR. Liss, In
c., 1985)などがある。

【００５７】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離・同定したり、アフィニティークロマト
グラフィーでそのポリペプチドを精製することもでき
る。HFIAO41ポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、
細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感
染、特にHIV−１またはHIV−２により引き起こされる感
染といった感染症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不
振；過食；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血
圧；高血圧；閉尿；骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；
潰瘍；アレルギー；良性の前立腺肥大；および不安、精
神分裂病、躁鬱病、譫妄、痴呆、ハンチントン症または
ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群のような深刻な精神薄
弱およびジスキネジアを含む精神及び神経障害の治療に
使用できる可能性がある。

【００５８】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を
引き出す方法に関し、この方法は、特に細菌感染、真菌
感染、原生動物感染およびウイルス感染、特にHIV−１
またはHIV−２により引き起こされる感染といった感染
症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不振；過食；喘息；
パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉尿；
骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；アレルギー；
良性の前立腺肥大；および不安、精神分裂病、躁鬱病、
譫妄、痴呆、ハンチントン症またはジル・ド・ラ・トゥー
レット症候群のような深刻な精神薄弱およびジスキネジ
アを含む精神及び神経障害から前記動物を防御するため
の抗体および／またはＴ細胞免疫応答を生ずるのに十分
なHFIAO41ポリペプチドまたはその断片を哺乳動物に接
種することを含んでなる。本発明のさらに別の態様は、
哺乳動物を疾病から防御する抗体を産生させるような免
疫学的応答を引き出すために、in vivo でHFIAO41ポリ
ヌクレオチドの発現を指令するベクターを介してHFIAO4
1ポリペプチドを供給することを含んでなる、哺乳動物
において免疫学的応答を引き出す方法に関する。

【００５９】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてHFIAO41ポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物はHFIAO41ポリペプ
チドまたはHFIAO41遺伝子を含有する。ワクチン製剤は
適当な担体をさらに含んでいてもよい。HFIAO41ポリペ
プチドは胃の中で分解されうるので、非経口的（皮下、
筋肉内、静脈内、皮内などへの注射を含む）に投与する
ことが好ましい。非経口投与に適した製剤としては、酸
化防止剤、緩衝液、静菌剤およびこの製剤を受容者の血
液となど張にする溶質を含みうる水性および非水性の無
菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含みうる水性
および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回
量容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルおよび
バイアル）で提供することができ、また、使用直前に無
菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で保管
することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性
を増強するためのアジュバント系、例えば水中油型のア
ジュバント系や当技術分野で公知の他のアジュバント系
を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性で変化
し、ルーチンな実験操作により簡単に決定できる。

【００６０】スクリーニングアッセイ 本発明のHFIAO41ポリペプチドは、このポリペプチドを
活性化する化合物（アゴニスト）またはその活性を阻害
する化合物（アンタゴニスト、または阻害剤ともいう）
のスクリーニング法において使用することができる。こ
うして、本発明のポリペプチドは、例えば、細胞、無細
胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産物の混合
物中の小分子基質およびリガンドの結合を評価するため
にも用いられる。これらの基質およびリガンドは天然の
基質またはリガンドであっても、構造的または機能的な
模擬物であってもよい（Coligan ら, Current Protocol
sin Immunology 1(2): Chapter 5 (1991)を参照のこ
と）。

【００６１】HFIAO41ポリペプチドは多くの病理を含め
て多数の生物学的機能に関与している。したがって、一
方ではHFIAO41ポリペプチドを刺激し、他方ではHFIAO41
ポリペプチドの機能を阻害し得る化合物および薬物を見
つけ出すことが望まれる。一般的に、アゴニストは細菌
感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感染、特
にHIV−１またはHIV−２により引き起こされる感染とい
った感染症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不振；過
食；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血
圧；閉尿；骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；ア
レルギー；良性の前立腺肥大；および不安、精神分裂
病、躁鬱病、譫妄、痴呆、ハンチントン症またはジル・
ド・ラ・トゥーレット症候群のような深刻な精神薄弱お
よびジスキネジアを含む精神及び神経障害のような症状
の治療および予防目的で用いられる。アンタゴニストは
細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイルス感
染、特にHIV−１またはHIV−２により引き起こされる感
染といった感染症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食欲不
振；過食；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血
圧；高血圧；閉尿；骨粗しょう症；狭心症；心筋梗塞；
潰瘍；アレルギー；良性の前立腺肥大；および不安、精
神分裂病、躁鬱病、譫妄、痴呆、ハンチントン症または
ジル・ド・ラ・トゥーレット症候群のような深刻な精神薄
弱およびジスキネジアを含む精神及び神経障害のような
症状のさまざまな治療および予防目的で使用しうる。

【００６２】一般に、こうしたスクリーニング法は本発
明の受容体ポリペプチドをその表面に発現する適当な細
胞を用いるものである。この種の細胞には哺乳動物、酵
母、ショウジョウバエ由来の細胞または大腸菌細胞が含
まれる。次いで、この受容体を発現する細胞（もしくは
発現された受容体を含む細胞膜）を試験化合物と接触さ
せて、その結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を
観察する。

【００６３】あるスクリーニング技術では、受容体の活
性化により生じる細胞外のｐH変化や細胞内カルシウム
の変化を測定する系で、本発明の受容体を発現する細胞
(例えば、トランスフェクトされたCHO細胞)を使用する
ことを含む。この技法では、化合物を本発明の受容体ポ
リペプチドを発現する細胞に接触させることができる。
次に、第二メッセンジャーの応答(例えば、シグナル伝
達、ｐH変化、またはカルシウムレベルの変化)を測定
し、候補化合物が受容体を活性化するかまたは阻害する
かどうかを決定する。

【００６４】他の方法は、受容体−媒介ｃＡＭＰおよび
／またはアデニル酸シクラーゼの蓄積の阻害または刺激
を測定することにより受容体インヒビターのスクリーニ
ングするものである。こうした方法では、本発明の受容
体を用いて真核細胞をトランスフェクトして、その細胞
表面に受容体を発現させることを含む。次いでこの細胞
を本発明の受容体の存在下で候補アンタゴニストにさら
し、ｃＡＭＰの蓄積量を測定する。候補アンタゴニスト
が該受容体に結合し、これにより受容体の結合を阻害す
る場合は、受容体−媒介ｃＡＭＰ、またはアデニル酸シ
クラーゼの活性レベルは低下するかまたは増加するだろ
う。

【００６５】本発明の受容体に対するアゴニストまたは
アンタゴニストを検出するための別の方法では、米国特
許第5,482,835 号に記載の酵母ベースの技術がある。こ
れらのアッセイでは候補化合物の結合を簡単に試験する
ことができ、そこでは候補化合物と直接または間接に結
合された標識により、または標識した競合物質との競合
を用いるアッセイにより、該受容体を担持する細胞への
付着が検出される。さらに、これらのアッセイでは、該
受容体をその表面に担持する細胞に適した検出系を用い
て、候補化合物が該受容体の活性化により生ずるシグナ
ルを結果的にもたらすか否かを試験することができる。
一般的に、活性化の阻害剤は既知のアゴニストの存在下
でアッセイされ、そして候補化合物の存在がアゴニスト
による活性化に与える影響が調べられる。

【００６６】さらに、これらのアッセイは、候補化合物
とHFIAO41ポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混
合物をつくり、この混合物中のHFIAO41活性を測定し、
そしてこの混合物のHFIAO41活性を標準と比較する各ス
テップを単に含むだけでよい。

【００６７】また、HFIAO41のｃＤＮＡ、タンパク質ま
たはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内での
HFIAO41ｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす添加
化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立てるこ
とができる。例えば、当技術分野で公知の標準方法によ
りモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用いて、
HFIAO41タンパク質の分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡを構築することができ、こ
れは適切に操作された細胞または組織からのHFIAO41の
生産を抑制または増強する物質（それぞれアンタゴニス
トまたはアゴニストともいう）の探索に用いることがで
きる。スクリーニングアッセイを行うための標準的な方
法は当技術分野でよく理解されている。

【００６８】HFIAO41の潜在的なアンタゴニストの例と
しては、抗体、ある場合には、HFIAO41のリガンドと密
接な関係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質
（例えば、リガンドの断片）、または該受容体と結合す
るが応答を誘導しない（それゆえ該受容体の活性を妨げ
る）小分子などがある。

【００６９】かくして、他の態様において、本発明は、
HFIAO41ポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはHFIAO41ポ
リペプチドの生産を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、(a) HFIAO41ポリペプチド（好ましくは、配列番号
２のポリペプチド）(b) HFIAO41ポリペプチド（好まし
くは、配列番号２のポリペプチド）を発現する組換え細
胞、(c) HFIAO41ポリペプチド（好ましくは、配列番号
２のポリペプチド）を発現する細胞膜、または(d) HFIA
O41ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプ
チド）に対する抗体、を含んでなる。このようなキット
において、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成
成分であることが理解されよう。

【００７０】予防および治療法 本発明は、HFIAO41活性の過剰量と不足量のどちらにも
関係した細菌感染、真菌感染、原生動物感染およびウイ
ルス感染、特にHIV−１またはHIV−２により引き起こさ
れる感染といった感染症；疼痛；癌；糖尿病、肥満；食
欲不振；過食；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低
血圧；高血圧；閉尿；骨粗しょう症；狭心症；心筋梗
塞；潰瘍；アレルギー；良性の前立腺肥大；および不
安、精神分裂病、躁鬱病、譫妄、痴呆、ハンチントン症
またはジル・ド・ラ・トゥーレット症候群のような深刻な
精神薄弱およびジスキネジアを含む精神及び神経障害な
どの異常な状態の治療法を提供する。HFIAO41の活性が
過剰である場合は、いくつかのアプローチが利用可能で
ある。一つのアプローチは、HFIAO41に対するリガンド
の結合をブロックすることにより、または第２のシグナ
ルを抑制することで異常な状態を軽減することにより、
活性を阻害するのに有効な量で、前記の阻害剤化合物
（アンタゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに
患者に投与することを含んでなる。もう一つのアプロー
チでは、内因性のHFIAO41との競合状態でリガンドと結
合する能力がまだある可溶性形態のHFIAO41ポリペプチ
ドを投与することができる。このような競合物質の典型
的な例はHFIAO41ポリペプチドの断片である。

【００７１】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性HFIAO41ポリペプチドをコードする遺伝子
の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、
体内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス配列
の使用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleotides
as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CRCPre
ss, Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neurochem
(1991)56:560を参照のこと。あるいはまた、この遺伝
子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを供
給することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic Acids
Res (1979) 6:3073; Cooney ら, Science (1988) 241:4
56; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照のこ
と。これらのオリゴマーはそれ自体を投与することもで
きるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させることも
できる。

【００７２】HFIAO41およびその活性の過少発現に関係
した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロー
チを取ることができる。一つのアプローチは、治療上有
効な量のHFIAO41を活性化する化合物（すなわち、前記
のアゴニスト）を製剤学上許容される担体とともに患者
に投与して、異常な状態を緩和することを含んでなる。
別法として、患者の関連細胞においてHFIAO41を内因的
に産生させるために遺伝子治療を用いることができる。
例えば、上で述べたような複製欠損レトロウイルスベク
ターによる発現のために本発明のポリヌクレオチドを遺
伝子操作する。次にレトロウイルス発現構築物を単離
し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有す
るレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入された
パッケージング細胞に導入する。その結果、パッケージ
ング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性のウイルス粒
子を産生するようになる。in vivo での細胞処理および
in vivo でのポリペプチド発現のために、これらの産生
細胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関しては、
Human Molecular Genetics, T Strachanand A P Read,
BIOS Scientific Publishers Ltd (1996) 中のChapter
20, Gene Therapy andother Molecular Genetic-based
Therapeutic Approaches(およびその中の引用文献) を
参照のこと。もう一つのアプローチは治療量のHFIAO41
ポリペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与する
ことである。

【００７３】製剤および投与 可溶性形態のHFIAO41ポリペプチドのようなペプチド、
アゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または小分
子は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化するこ
とができる。このような製剤は治療上有効な量のポリペ
プチドまたは化合物と、製剤学上許容される担体または
賦形剤を含有する。この種の担体としては、食塩水、生
理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノ
ール、およびこれらの組合せがあるが、これらに限らな
い。製剤は投与様式に適合させるべきであり、これは当
技術分野の技量の範囲内である。本発明はさらに、前記
の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容器
を含んでなる医薬用パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００７４】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、一般的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００７５】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００７６】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００７７】実施例１；哺乳動物細胞における発現 本発明の受容体を、ヒト胚腎293（HEK293）細胞または
付着性dhfr CHO細胞のいずれかにおいて発現させた。受
容体の発現を最大にするために、ｐCDNまたはｐCDNA3ベ
クターへ挿入する前に、一般的には全ての５'および３'
非翻訳領域（UTRs）を受容体ｃＤＮＡから取り除いた。
これらの細胞をリポフェクチンを用いて個々の受容体ｃ
ＤＮＡによりトランスフェクトし、400 mg／mlのＧ418
の存在下で選択した。3週間の選択後に、個々のクロー
ンを拾い、さらなる分析のために増殖させた。ベクター
のみでトランスフェクトしたHEK293またはCHO細胞を陰
性対照として使用した。個々の受容体を安定して発現し
ている細胞系を単離するために、一般的に約24個のクロ
ーンを選択し、ノーザンブロット分析により分析した。
受容体ｍＲＮＡは、通常、分析したＧ418耐性クローン
の約50％において検出可能であった。

【００７８】実施例２：結合アッセイおよび機能アッセ
イ用のリガンドバンク(bank) 200を越える推定上の受容体リガンドのバンクがスクリ
ーニングのために集成された。このバンクには以下のも
のが含まれる。すなわち、ヒトの７回膜貫通(7TM)受容
体を介して作用することが知られている伝達物質、ホル
モンおよびケモカイン；ヒト7ＴＭ受容体の推定上のア
ゴニストでありうる、天然に存在する化合物；非哺乳動
物の生理活性ペプチド(哺乳動物の対応物は未だ同定さ
れていない)；および天然には見出せないが未知の天然
リガンドと共に７ＴＭ受容体を活性化する化合物であ
る。このバンクは結合アッセイと機能(すなわち、カル
シウム、ｃＡＭＰ、ミクロフィジオメーター( microphy
siometer )、卵母細胞電気生理学など、以下を参照)ア
ッセイの両方を用いて、既知のリガンドに対する該受容
体を最初にスクリーニングするために使用された。

【００７９】実施例３：リガンド結合アッセイ リガンド結合アッセイは受容体薬理学をつきとめるため
の直接的な方法を提供し、また高処理量方式にも適用が
可能である。受容体の精製リガンドを結合実験のために
高い比活性( 50−2000 Ci／mmol )で放射性標識した。
次に、放射性標識化のプロセスがその受容体に対するリ
ガンドの活性を低下させないことを確かめた。緩衝液、
イオン、ｐHおよびヌクレオチドのような他のモジュレ
ーターについてのアッセイ条件を最適化し、膜および全
細胞の両受容体源についての実施可能な生じうるシグナ
ル対ノイズ比を確立した。これらのアッセイのために、
特異的受容体結合を、全結合放射能から、過剰の未標識
競合リガンドの存在下で測定した放射能を差し引いた値
として定義した。可能であれば、２以上の競合リガンド
を用いて残留する非特異的な結合を確定する。

【００８０】実施例４：アフリカツメガエル卵母細胞に
おける機能アッセイ 本発明の受容体ｃＤＮＡをコードする線状化プラスミド
の鋳型からのキャップしたＲＮＡ転写物を、標準的な手
法に従い、in vitroでＲＮＡポリメラーゼを使用して合
成した。in vitroでの転写物を最終濃度0.2 mg／mlで水
中に懸濁した。卵巣葉(ovarian lobes)を成熟雌カエル
から取り出し、ステージVの脱濾胞化卵母細胞を得て、
ＲＮＡ転写物(10ng／卵母細胞)を微量注入装置を用いて
50nlで単回注入した。２つの電極電位クランプを用い
て、アゴニストへの暴露に応答した個々のアフリカツメ
ガエルの卵母細胞からの電流を測定した。室温でCa²⁺を
含まないバース(Barth's)培地中で記録を行なった。こ
のアフリカツメガエル系を使用して、活性化用リガンド
についての既知のリガンドおよび組織／細胞抽出物をス
クリーニングすることができる。

【００８１】実施例５：ミクロフィジオメトリックアッ
セイ 多様な第二メッセンジャー系の活性化により、細胞から
少量の酸が放出される。この酸は主として細胞内のシグ
ナル伝達プロセスを活気づけるために必要な代謝活性が
増強した結果として産出される。この細胞を取り巻く培
地におけるｐＨの変化は非常に小さいが、サイトセンサ
ー( CYTOSENSOR )ミクロフィジオメーター（ Mole cula
r Devices Ltd., Menlo Park,CA ）により検出できる。
したがって、このサイトセンサーは本発明のＧタンパク
質共役型受容体のような、細胞内シグナル伝達経路を利
用するエネルギーに共役する受容体の活性化を検出する
ことができる。

【００８２】実施例６：抽出物／細胞上清スクリーニン
グ 多くの哺乳動物受容体が存在するが、今のところ同一動
物種(cognate)の活性化用リガンド(アゴニスト)は見つ
かっていない。したがって、これらの受容体を活性化す
るリガンドは、今日までに同定されたリガンドバンクに
は含まれていない可能性がある。よって、本発明の７Ｔ
Ｍ受容体もまた、天然のリガンドを同定するために組織
抽出物に対して機能的に(カルシウム、ｃＡＭＰ、ミク
ロフィジオメーター、卵母細胞電気生理学などの機能ス
クリーンを使用して)スクリーニングされた。陽性の機
能的な応答を示す抽出物を、活性化用リガンドが単離さ
れ同定されるまで順次サブ分画することができる。

【００８３】実施例７：カルシウムおよびｃＡＭＰ機能
アッセイ HEK293細胞で発現された7ＴＭ受容体は、ＰＬＣおよび
カルシウムの動員活性化および／またはｃＡＭＰの刺激
または阻害と機能的に共役することが示された。受容体
トランスフェクト細胞またはベクター対照細胞における
HEK293細胞中の基礎カルシウムレベルは、正常な100nM
〜200nMの範囲で観察された。組換え受容体を発現して
いるHEK293細胞を、fura２を添加し、一日で＞150個の
選択したリガンドまたは組織／細胞抽出物をアゴニスト
誘導カルシウム動員について評価した。同様に、組換え
受容体を発現しているHEK293細胞を標準的なｃＡＭＰ定
量アッセイを用いて、ｃＡＭＰ産生の刺激または阻害に
ついて評価した。一時的にカルシウムを動員する、また
はｃＡＭＰの変動を示すアゴニストをベクター対照細胞
で試験し、このときの応答が受容体を発現しているトラ
ンスフェクト細胞に特有なものであるかどうかを決定し
た。

【００８４】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００８５】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：２４０７ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GAACCGAGAT TATACCATTA CAGTCCAGCC TGGGCAACAG AGCCAGAGAC CCTGTCATAA 60 ATAAATAAAT AAACAAACAA ACAAATAAAA ATGGTGGAGT CTGAAAAAGG ACTGGGTCAG 120 CAAGAATAAA AACACAAAAC AGCTGGAGGA GCCAAGATGG CCGAATAGGA ACAGCTCCGG 180 TCTACAGCTC CCAGCGTGAG CGACGCAGAA GACGGGTGAT TTCTGCATTT CCATCTGAGA 240 TTGGAGCCAT GGCTTTGGAA CAGAACCAGT CAACAGATTA TTATTATGAG GAAAATGAAA 300 TGAATGGCAC TTATGACTAC AGTCAATATG AACTGATCTG TATCAAAGAA GATGTCAGAG 360 AATTTGCAAA AGTTTTCCTC CCTGTATTCC TCACAATAGT TTTCGTCATT GGACTTGCAG 420 GCAATTCCAT GGTAGTGGCA ATTTATGCCT ATTACAAGAA ACAGAGAACC AAAACAGATG 480 TGTACATCCT GAATTTGGCT GTAGCAGATT TACTCCTTCT ATTCACTCTG CCTTTTTGGG 540 CTGTTAATGC AGTTCATGGG TGGGTTTTAG GGAAAATAAT GTGCAAAATA ACTTCAGCCT 600 TGTACACACT AAACTTTGTC TCTGGAATGC AGTTTCTGGC TTGTATCAGC ATAGACAGAT 660 ATGTGGCAGT AACTAAAGTC CCCAGCCAAT CAGGAGTGGG AAAACCATGC TGGATCATCT 720 GTTTCTGTGT CTGGATGGCT GCCATCTTGC TGAGCATACC CCAGCTGGTT TTTTATACAG 780 TAAATGACAA TGCTAGGTGC ATTCCCATTT TCCCCCGCTA CCTAGGAACA TCAATGAAAG 840 CATTGATTCA AATGCTAGAG ATCTGCATTG GATTTGTAGT ACCCTTTCTT ATTATGGGGG 900 TGTGCTACTT TATCACAGCA AGGACACTCA TGAAGATGCC AAACATTAAA ATATCTCGAC 960 CCCTAAAAGT TCTGCTCACA GTCGTTATAG TTTTCATTGT CACTCAACTG CCTTATAACA 1020 TTGTCAAGTT CTGCCGAGCC ATAGACATCA TCTACTCCCT GATCACCAGC TGCAACATGA 1080 GCAAACGCAT GGACATCGCC ATCCAAGTCA CAGAAAGCAT CGCACTCTTT CACAGCTGCC 1140 TCAACCCAAT CCTTTATGTT TTTATGGGAG CATCTTTCAA AAACTACGTT ATGAAAGTGG 1200 CCAAGAAATA TGGGTCCTGG AGAAGACAGA GACAAAGTGT GGAGGAGTTT CCTTTTGATT 1260 CTGAGGGTCC TACAGAGCCA ACCAGTACTT TTAGCATTTA AAGGTAAAAC TGCTCTGCCT 1320 TTTGCTTGGA TACATATGAA TGATGCTTTC CCCTCAAATA AAACATCTGC ATTATTCTGA 1380 AACTCAAATC TCAGACGCCG TGGTTGCAAC TTATAATAAA GAATGGGTTG GGGGAAGGGG 1440 GAGAAATAAA AGCCAAGAAG AGGAAACAAG ATAATAAATG TACAAAACAT GAAAATTAAA 1500 ATGAACAATA TAGGAAAATA ATTGTAACAG GCATAAGTGA ATAACACTCT GCTGTAACGA 1560 AGAAGAGCTT TGTGGTGATA ATTTTGTATC TTGGTTGCAG TGGTGCTTAT ACAAATCTAC 1620 ACAAGTGATA AAATGACACA GAACTATATA CACACATTGT ACCAATTTCA ATTTCCTGGT 1680 TTTGACATTA TAGTATAATT ATGTAAGATG GAACCATTGG GGAAAACTGG GTGAAGGGTA 1740 CCCAGGACCA CTCTGTACCA TCTTTGTAAC TTCCTGTGAA TTTATAATAA TTTCAAAATA 1800 AAACAAGTTA AAAAAAAACC CACTATGCTA TAAGTTAGGC CATCTAAAAC AGATTATTAA 1860 AGAGGTTCAT GTTAAAAGGC ATTTATAATT ATTTTTAATT ATCTAAGTTT TAATACAAGA 1920 ACGATTTCCT GCATAATTTT AGTACTTGAA TAAGTATGCA GCAGAACTCC AACTATCTTT 1980 TTTCCTGTTT TTTTTAAATT TGTAAGTAAT TTTATAAAAT CCACCTCCTC CAAAAAAGCA 2040 ATAAAAAAAA AACAAACTAT AATAAGCTTT TCTGATTCTT TTCAAAACAT TCCTGGTAAG 2100 TTCCTAAAGA CATAATTTGC TTCTATGATG TCAACTTTCT TACTAATAAC TGGTTATCAT 2160 GACAAATGTT AGGTTTATCA TATATAGTCT AGGTGTAATC CTCAGACTAT CATTTTCATC 2220 TGGGTTCCAA TTTCTTAACT TCCTAAAGAA TTCATCTGTT TATACAAGTC TACCACTGCC 2280 GATTGACTAA AAAATACATT ATCCCATGCA TAAAATGTCC TATTTTCATT TAAACACTTT 2340 ATTTTTGAGT AATAAAAATA TGTACCACAA TAAATTATTG TTAATTAACA AAAAAAAAAA 2400 AAAAAAA 2407

【００８６】配列番号：２ 配列の長さ：３５０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Ala Leu Glu Gln Asn Gln Ser Thr Asp Tyr Tyr Tyr Glu Glu Asn 1 5 10 15 Glu Met Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Ser Gln Tyr Glu Leu Ile Cys Ile 20 25 30 Lys Glu Asp Val Arg Glu Phe Ala Lys Val Phe Leu Pro Val Phe Leu 35 40 45 Thr Ile Val Phe Val Ile Gly Leu Ala Gly Asn Ser Met Val Val Ala 50 55 60 Ile Tyr Ala Tyr Tyr Lys Lys Gln Arg Thr Lys Thr Asp Val Tyr Ile 65 70 75 80 Leu Asn Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu Leu Leu Phe Thr Leu Pro Phe 85 90 95 Trp Ala Val Asn Ala Val His Gly Trp Val Leu Gly Lys Ile Met Cys 100 105 110 Lys Ile Thr Ser Ala Leu Tyr Thr Leu Asn Phe Val Ser Gly Met Gln 115 120 125 Phe Leu Ala Cys Ile Ser Ile Asp Arg Tyr Val Ala Val Thr Lys Val 130 135 140 Pro Ser Gln Ser Gly Val Gly Lys Pro Cys Trp Ile Ile Cys Phe Cys 145 150 155 160 Val Trp Met Ala Ala Ile Leu Leu Ser Ile Pro Gln Leu Val Phe Tyr 165 170 175 Thr Val Asn Asp Asn Ala Arg Cys Ile Pro Ile Phe Pro Arg Tyr Leu 180 185 190 Gly Thr Ser Met Lys Ala Leu Ile Gln Met Leu Glu Ile Cys Ile Gly 195 200 205 Phe Val Val Pro Phe Leu Ile Met Gly Val Cys Tyr Phe Ile Thr Ala 210 215 220 Arg Thr Leu Met Lys Met Pro Asn Ile Lys Ile Ser Arg Pro Leu Lys 225 230 235 240 Val Leu Leu Thr Val Val Ile Val Phe Ile Val Thr Gln Leu Pro Tyr 245 250 255 Asn Ile Val Lys Phe Cys Arg Ala Ile Asp Ile Ile Tyr Ser Leu Ile 260 265 270 Thr Ser Cys Asn Met Ser Lys Arg Met Asp Ile Ala Ile Gln Val Thr 275 280 285 Glu Ser Ile Ala Leu Phe His Ser Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Val 290 295 300 Phe Met Gly Ala Ser Phe Lys Asn Tyr Val Met Lys Val Ala Lys Lys 305 310 315 320 Tyr Gly Ser Trp Arg Arg Gln Arg Gln Ser Val Glu Glu Phe Pro Phe 325 330 335 Asp Ser Glu Gly Pro Thr Glu Pro Thr Ser Thr Phe Ser Ile 340 345 350

【００８７】配列番号：３ 配列の長さ：２１５６ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GCTTTGGAAC AGAACCAGTC AACAGATTAT TATTATGAGG AAAATGAAAT GAATGGCACT 60 TATGACTACA GTCAATATGA ACTGATCTGT ATCAAAGAAG ATGTCAGAGA ATTTGCAAAA 120 GTTTTCCTCC CTGTATTCCT CACAATAGTT TTCGTCATTG GACTTGCAGG CAATTCCATG 180 GTAGTGGCAA TTTATGCCTA TTACAAGAAA CAGAGAACCA AAACAGATGT GTACATCCTG 240 AATTTGGCTG TAGCAGATTT ACTCCTTCTA TTCACTCTGC CTTTTTGGGC TGTTAATGCA 300 GTTCATGGGT GGGTTTTAGG GAAAATAATG TGCAAAATAA CTTCAGCCTT GTACACACTA 360 AACTTTGTCT CTGGAATGCA GTTTCTGGCT TGTATCAGCA TAGACAGATA TGTGGCAGTA 420 ACTAAAGTCC CCAGCCAATC AGGAGTGGGA AAACCATGCT GGATCATCTG TTTCTGTGTC 480 TGGATGGCTG CCATCTTGCT GAGCATACCC CAGCTGGTTT TTTATACAGT AAATGACAAT 540 GCTAGGTGCA TTCCCATTTT CCCCCGCTAC CTAGGAACAT CAATGAAAGC ATTGATTCAA 600 ATGCTAGAGA TCTGCATTGG ATTTGTAGTA CCCTTTCTTA TTATGGGGGT GTGCTACTTT 660 ATCACAGCAA GGACACTCAT GAAGATGCCA AACATTAAAA TATCTCGACC CCTAAAAGTT 720 CTGCTCACAG TCGTTATAGT TTTCATTGTC ACTCAACTGC CTTATAACAT TGTCAAGTTC 780 TGCCGAGCCA TAGACATCAT CTACTCCCTG ATCACCAGCT GCAACATGAG CAAACGCATG 840 GACATCGCCA TCCAAGTCAC AGAAAGCATC GCACTCTTTC ACAGCTGCCT CAACCCAATC 900 CTTTATGTTT TTATGGGAGC ATCTTTCAAA AACTACGTTA TGAAAGTGGC CAAGAAATAT 960 GGGTCCTGGA GAAGACAGAG ACAAAGTGTG GAGGAGTTTC CTTTTGATTC TGAGGGTCCT 1020 ACAGAGCCAA CCAGTACTTT TAGCATTTAA AGGTAAAACT GCTCTGCCTT TTGCTTGGAT 1080 ACATATGAAT GATGCTTTCC CCTCAAATAA AACATCTGCA TTATTCTGAA ACTCAAATCT 1140 CAGACGCCGT GGTTGCAACT TATAATAAAG AATGGGTTGG GGGAAGGGGG AGAAATAAAA 1200 GCCAAGAAGA GGAAACAAGA TAATAAATGT ACAAAACATG AAAATTAAAA TGAACAATAT 1260 AGGAAAATAA TTGTAACAGG CATAAGTGAA TAACACTCTG CTGTAACGAA GAAGAGCTTT 1320 GTGGTGATAA TTTTGTATCT TGGTTGCAGT GGTGCTTATA CAAATCTACA CAAGTGATAA 1380 AATGACACAG AACTATATAC ACACATTGTA CCAATTTCAA TTTCCTGGTT TTGACATTAT 1440 AGTATAATTA TGTAAGATGG AACCATTGGG GAAAACTGGG TGAAGGGTAC CCAGGACCAC 1500 TCTGTACCAT CTTTGTAACT TCCTGTGAAT TTATAATAAT TTCAAAATAA AACAAGTTAA 1560 AAAAAAACCC ACTATGCTAT AAGTTAGGCC ATCTAAAACA GATTATTAAA GAGGTTCATG 1620 TTAAAAGGCA TTTATAATTA TTTTTAATTA TCTAAGTTTT AATACAAGAA CGATTTCCTG 1680 CATAATTTTA GTACTTGAAT AAGTATGCAG CAGAACTCCA ACTATCTTTT TTCCTGTTTT 1740 TTTTAAATTT GTAAGTAATT TTATAAAATC CACCTCCTCC AAAAAAGCAA TAAAAAAAAA 1800 ACAAACTATA ATAAGCTTTT CTGATTCTTT TCAAAACATT CCTGGTAAGT TCCTAAAGAC 1860 ATAATTTGCT TCTATGATGT CAACTTTCTT ACTAATAACT GGTTATCATG ACAAATGTTA 1920 GGTTTATCAT ATATAGTCTA GGTGTAATCC TCAGACTATC ATTTTCATCT GGGTTCCAAT 1980 TTCTTAACTT CCTAAAGAAT TCATCTGTTT ATACAAGTCT ACCACTGCCG ATTGACTAAA 2040 AAATACATTA TCCCATGCAT AAAATGTCCT ATTTTCATTT AAACACTTTA TTTTTGAGTA 2100 ATAAAAATAT GTACCACAAT AAATTATTGT TAATTAACAA AAAAAAAAAA AAAAAA 2156

【００８８】配列番号：４ 配列の長さ：３４９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Ala Leu Glu Gln Asn Gln Ser Thr Asp Tyr Tyr Tyr Glu Glu Asn Glu 1 5 10 15 Met Asn Gly Thr Tyr Asp Tyr Ser Gln Tyr Glu Leu Ile Cys Ile Lys 20 25 30 Glu Asp Val Arg Glu Phe Ala Lys Val Phe Leu Pro Val Phe Leu Thr 35 40 45 Ile Val Phe Val Ile Gly Leu Ala Gly Asn Ser Met Val Val Ala Ile 50 55 60 Tyr Ala Tyr Tyr Lys Lys Gln Arg Thr Lys Thr Asp Val Tyr Ile Leu 65 70 75 80 Asn Leu Ala Val Ala Asp Leu Leu Leu Leu Phe Thr Leu Pro Phe Trp 85 90 95 Ala Val Asn Ala Val His Gly Trp Val Leu Gly Lys Ile Met Cys Lys 100 105 110 Ile Thr Ser Ala Leu Tyr Thr Leu Asn Phe Val Ser Gly Met Gln Phe 115 120 125 Leu Ala Cys Ile Ser Ile Asp Arg Tyr Val Ala Val Thr Lys Val Pro 130 135 140 Ser Gln Ser Gly Val Gly Lys Pro Cys Trp Ile Ile Cys Phe Cys Val 145 150 155 160 Trp Met Ala Ala Ile Leu Leu Ser Ile Pro Gln Leu Val Phe Tyr Thr 165 170 175 Val Asn Asp Asn Ala Arg Cys Ile Pro Ile Phe Pro Arg Tyr Leu Gly 180 185 190 Thr Ser Met Lys Ala Leu Ile Gln Met Leu Glu Ile Cys Ile Gly Phe 195 200 205 Val Val Pro Phe Leu Ile Met Gly Val Cys Tyr Phe Ile Thr Ala Arg 210 215 220 Thr Leu Met Lys Met Pro Asn Ile Lys Ile Ser Arg Pro Leu Lys Val 225 230 235 240 Leu Leu Thr Val Val Ile Val Phe Ile Val Thr Gln Leu Pro Tyr Asn 245 250 255 Ile Val Lys Phe Cys Arg Ala Ile Asp Ile Ile Tyr Ser Leu Ile Thr 260 265 270 Ser Cys Asn Met Ser Lys Arg Met Asp Ile Ala Ile Gln Val Thr Glu 275 280 285 Ser Ile Ala Leu Phe His Ser Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Val Phe 290 295 300 Met Gly Ala Ser Phe Lys Asn Tyr Val Met Lys Val Ala Lys Lys Tyr 305 310 315 320 Gly Ser Trp Arg Arg Gln Arg Gln Ser Val Glu Glu Phe Pro Phe Asp 325 330 335 Ser Glu Gly Pro Thr Glu Pro Thr Ser Thr Phe Ser Ile 340 345

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＡＭ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ ＡＡＮ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＢ ＡＢＦ ＡＡＥ ＡＢＪ ＡＡＨ ＡＢＮ ＡＡＫ ＡＢＳ ＡＡＭ ＡＢＵ ＡＡＮ ＡＢＶ ＡＢＦ ＡＣＤ ＡＢＪ ＡＣＮ ＡＢＮ ＡＣＶ ＡＢＳ ＡＤＰ ＡＢＵ ＡＤＵ ＡＢＶ ＡＤＹ ＡＣＤ ＡＤＺ ＡＣＮ 39/395 ＡＣＶ 48/00 ＡＤＰ Ｃ１２Ｎ 5/10 ＡＤＵ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＤＹ Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＤＺ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のHFIAO41ポリペプチドをコ
   ードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８
   ０％同一であり、かつHFIAO41ポリペプチドの活性を有
   するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、また
   はこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド
   配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 前記のポリヌクレオチドが、配列番号２
   のHFIAO41ポリペプチドをコードする配列番号１中に含
   まれるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記載
   のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 前記のポリヌクレオチドが、その全長に
   おいて配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも８０
   ％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１
   に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１のポリヌクレオチドである、
   請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
   記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のHFIAO41ポリペプチドのア
   ミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付加、
   欠失または置換されており、かつHFIAO41ポリペプチド
   の活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド
   配列を含んでなるポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
   するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも８７％
   同一であるアミノ酸配列を含むHFIAO41ポリペプチドを
   産生することができる発現系を含んでなるＤＮＡまたは
   ＲＮＡ分子。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の発現系を含有する宿主
   細胞。
9. 【請求項９】 HFIAO41ポリペプチドを産生させるのに
   十分な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、こ
   の培養物から前記ポリペプチドを回収することを含んで
   なる、HFIAO41ポリペプチドの産生方法。
10. 【請求項１０】 宿主細胞が適当な培養条件下でHFIAO4
    1ポリペプチドを産生するように、請求項７に記載の発
    現系を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェク
    ションすることを含んでなる、HFIAO41ポリペプチドを
    産生する細胞の作製方法。
11. 【請求項１１】 全長において配列番号２のアミノ酸配
    列と少なくとも８７％同一であるアミノ酸配列を含んで
    なるHFIAO41ポリペプチド。
12. 【請求項１２】 配列番号２のアミノ酸配列を含む、請
    求項１１に記載のポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載のHFIAO41ポリペプ
    チドに免疫特異的な抗体。
14. 【請求項１４】 請求項１１に記載のHFIAO41ポリペプ
    チドの増大した活性または発現を必要としている患者を
    治療するための医薬組成物であって、治療上有効な量
    の、 (a) 前記受容体に対するアゴニスト、および／または
    (b) 前記ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたらす形
    の、配列番号２のHFIAO41ポリペプチドをコードするヌ
    クレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一で
    あるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド配列に
    対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離され
    たポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
15. 【請求項１５】 請求項１１に記載のHFIAO41ポリペプ
    チドの活性または発現を抑制する必要がある患者を治療
    するための医薬組成物であって、治療上有効な量の、 (a) 前記受容体に対するアンタゴニスト、および／また
    は(b) 前記受容体をコードするヌクレオチド配列の発現
    を抑制する核酸分子、および／または(c) 前記受容体と
    そのリガンドについて競合するポリペプチド、を含んで
    なる医薬組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１１に記載のHFIAO41ポリペプ
    チドの発現または活性と関連した被験者の疾病またはそ
    の罹病性の検出方法であって、 (a) 前記被験者由来のゲノム中のHFIAO41ポリペプチド
    をコードするヌクレオチド配列に突然変異があるかどう
    かを調べる、および／または(b) 前記被験者から得られ
    たサンプル中のHFIAO41ポリペプチド発現の存在または
    量を分析する、ことを含んでなる方法。
17. 【請求項１７】 請求項１１に記載のHFIAO41ポリペプ
    チドに対するアゴニストの同定方法であって、 (a) HFIAO41ポリペプチドを発現している細胞と候補化
    合物とを接触させ、そして(b) その候補化合物がHFIAO4
    1ポリペプチドの活性化によりシグナルを発生させるか
    否かを調べる、ことを含んでなる方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法により同定さ
    れたアゴニスト。
19. 【請求項１９】 請求項１１に記載のHFIAO41ポリペプ
    チドに対するアンタゴニストの同定方法であって、 (a) HFIAO41ポリペプチドを発現している細胞とアゴニ
    ストとを接触させ、そして(b) 前記アゴニストにより発
    生したシグナルが候補化合物の存在下で減少するか否か
    を調べる、ことを含んでなる方法。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法により同定さ
    れたアンタゴニスト。
21. 【請求項２１】 請求項１０に記載の方法により作製さ
    れた組換え宿主細胞またはHFIAO41ポリペプチドを発現
    しているその膜。