JPS58146285A - 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 - Google Patents
補酵素ｑ↓１↓０の製造法Info
- Publication number
- JPS58146285A JPS58146285A JP2607882A JP2607882A JPS58146285A JP S58146285 A JPS58146285 A JP S58146285A JP 2607882 A JP2607882 A JP 2607882A JP 2607882 A JP2607882 A JP 2607882A JP S58146285 A JPS58146285 A JP S58146285A
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- Japan
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- proline
- succinimide
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- salt
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、発酵法による補酵素Ｑ１゜（以下、Ｃ０ＱＩ
ｏと略す）の製造法に関する。
ｏと略す）の製造法に関する。
（１）
さらに詳しくは、ロドシーードモナス属に属し、ＣｏＱ
、。生産能を有する微生物をプロリンもしくはその塩、
コハク酸イミド、およびグルタミン酸もしくはその塩か
ら選ばれた少なくとも１種を添加した培地に培養し、培
養物中にＣｏＱｌ。
、。生産能を有する微生物をプロリンもしくはその塩、
コハク酸イミド、およびグルタミン酸もしくはその塩か
ら選ばれた少なくとも１種を添加した培地に培養し、培
養物中にＣｏＱｌ。
を高単位に生成蓄積させ、該培養物よりＣＯＱ＋。
を採取することを特徴とするＣｏＱ＋Ｏの製造法に関す
る。
る。
ＣｏＱ 、。は、広く生物界に分布し、末端呼吸系の電
子伝達系の構成成分として重要な機能を持つことが知ら
れているが、最近さらに本物質が各種疾病に対し、すぐ
れた薬理作用、生理作用を示すことが明らかにされてい
る。
子伝達系の構成成分として重要な機能を持つことが知ら
れているが、最近さらに本物質が各種疾病に対し、すぐ
れた薬理作用、生理作用を示すことが明らかにされてい
る。
従来、発酵法によるＣ０Ｑ１゜の製造法に関しては、各
種の細菌、酵母、および糸状菌を培養し、該培養物から
ＣｏＱ、ｏを採取する方法が報告され、ロドシュードモ
ナス属に属する微生物を用いる製造法もいくつか報告さ
れている（特公昭：５５−３９７３０、特公昭：５５−
６１７９７、特公昭５６−７２６９４）。
種の細菌、酵母、および糸状菌を培養し、該培養物から
ＣｏＱ、ｏを採取する方法が報告され、ロドシュードモ
ナス属に属する微生物を用いる製造法もいくつか報告さ
れている（特公昭：５５−３９７３０、特公昭：５５−
６１７９７、特公昭５６−７２６９４）。
（２）
Ｃ０Ｑ１ｏ生産能を有する微生物の培養培地は、一般に
、炭素源、窒素源、無機塩類、ビタミン類等を程よく含
有する培地が使用される。
、炭素源、窒素源、無機塩類、ビタミン類等を程よく含
有する培地が使用される。
本発明者らは、培地に添加して高単位にＣ０Ｑｔ。
を生成蓄積せしめる有機化合物の検索を行ない、プロリ
ンもしくはその塩、コハク酸イミド、またはグルタミン
酸もしくはその塩を姫加し、高濃度にした場合に、その
効果を認め、本発明を完成した。
ンもしくはその塩、コハク酸イミド、またはグルタミン
酸もしくはその塩を姫加し、高濃度にした場合に、その
効果を認め、本発明を完成した。
従来、発酵法によるＣ０Ｑ１ｏ製造において、高濃度の
プロリンもしくはその塩、コハク酸イミド、またはグル
タミン酸もしくはその塩がＣ０Ｑｔ。
プロリンもしくはその塩、コハク酸イミド、またはグル
タミン酸もしくはその塩がＣ０Ｑｔ。
生成蓄積量を増大せしめることについては全く知られて
おらず、本発明者らによシはじめて見い出されたもので
ある。
おらず、本発明者らによシはじめて見い出されたもので
ある。
以下、本発明の詳細な説明する。
使用する微生物としては、ロドシュードモナス属に属し
、Ｃ０Ｑ１ｏ生産能を有する微生物であれば、いずれも
使用可能であるが、具体的な例としては、ロドシュード
モナス・スフェロイデス（３） （Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｈ、ｅｒｏ
ｉｄｅｓ ） Ｃｏ ２２−１１（微工研菌寄第６００
８号）があげられる。
、Ｃ０Ｑ１ｏ生産能を有する微生物であれば、いずれも
使用可能であるが、具体的な例としては、ロドシュード
モナス・スフェロイデス（３） （Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｈ、ｅｒｏ
ｉｄｅｓ ） Ｃｏ ２２−１１（微工研菌寄第６００
８号）があげられる。
本発酵に使用する微生物の培養培地としては、炭素源、
窒素源、無機物その他の栄養物を程よく含有する培地で
あれば、合成培地、天然培地のいずれも使用できる。炭
素源としては、グルコース、サッカロース、廃糖蜜、殿
粉等の炭水化物、グリセリン等の糖アルコール類、メタ
ノール等のアルコール類、その他、利用可能なものであ
ればいずれの種類を用いてもよい。窒素源としては硫酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸アンモニウム等
の無機、有機窒素化合物、および酵母エキス、コーンス
チープリカー等の窒素含有天然物を適宜使用することが
できる。その他、無機塩としては、微生物一般の培養に
用いるリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、カリ
ウム塩などを使用する。もちろん天然栄養源を用いたと
きなどに天然物中に含有する無機塩のみで満足させるこ
とが可能なこともある。
窒素源、無機物その他の栄養物を程よく含有する培地で
あれば、合成培地、天然培地のいずれも使用できる。炭
素源としては、グルコース、サッカロース、廃糖蜜、殿
粉等の炭水化物、グリセリン等の糖アルコール類、メタ
ノール等のアルコール類、その他、利用可能なものであ
ればいずれの種類を用いてもよい。窒素源としては硫酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、酢酸アンモニウム等
の無機、有機窒素化合物、および酵母エキス、コーンス
チープリカー等の窒素含有天然物を適宜使用することが
できる。その他、無機塩としては、微生物一般の培養に
用いるリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、カリ
ウム塩などを使用する。もちろん天然栄養源を用いたと
きなどに天然物中に含有する無機塩のみで満足させるこ
とが可能なこともある。
（４）
本発酵で使用するプロリンもしくはその塩、コハク酸イ
ミド、またはグルタミン酸もしくはその塩の添加方法、
時期などは任意であり、たとえば、培養初め、あるいは
培養途中で一度に添加するか、または、発酵状態に応じ
て、分割して添加する。これらの物質は合計濃度として
、通常０．０５ ｆ／ｄｉ以上、好適には０．５ ｙ／
ｄ１以上となるように各々単独にまたは混合で添加する
。
ミド、またはグルタミン酸もしくはその塩の添加方法、
時期などは任意であり、たとえば、培養初め、あるいは
培養途中で一度に添加するか、または、発酵状態に応じ
て、分割して添加する。これらの物質は合計濃度として
、通常０．０５ ｆ／ｄｉ以上、好適には０．５ ｙ／
ｄ１以上となるように各々単独にまたは混合で添加する
。
上記でプロリンの塩としては塩酸塩などが、ま培養は、
振盪培養、通気攪拌培養などの好気的条件下で行なう。
振盪培養、通気攪拌培養などの好気的条件下で行なう。
培養温度は、２０〜４０℃の範囲が適当であシ、ｐＨは
５〜９程度が適当である。中和剤としては、アンモニア
水、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カルシウ
ム等が用いられる。
５〜９程度が適当である。中和剤としては、アンモニア
水、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カルシウ
ム等が用いられる。
培養期間は通常３〜７日間でＣ０Ｑ１ｏが培養液中およ
び菌体中の両方に蓄積するが、大部分は菌体中に蓄積す
る。
び菌体中の両方に蓄積するが、大部分は菌体中に蓄積す
る。
（５）
培養物からのＣｏＱｌ。の採取は、常法により溶媒抽出
、その他の操作によって行なうことができる。
、その他の操作によって行なうことができる。
以下に実施例を示す。
実施例１
０ドシユードモナス・スフェロイデスＣｏ ２２−１１
を２１容三角フラスコ中のグルコース２ ｙ／ｄｉ。
を２１容三角フラスコ中のグルコース２ ｙ／ｄｉ。
ペプトン１ ｙ／ｄｌ、酵母エキス１ｙ／ｄｉ、食塩０
、５ ｙ／ｄｌノ組成からナルｐ Ｈ７，２（０種培地
３００ｄに接種し、３０℃で２４時間振盪培養する。
、５ ｙ／ｄｌノ組成からナルｐ Ｈ７，２（０種培地
３００ｄに接種し、３０℃で２４時間振盪培養する。
この種培養液３ｄを２５〇−容三角フラスコ中の下記の
組成の発酵培地３９ｄに加え、３０℃で９６時間振盪培
養する。培養にあたっては、２４時間目および４８時間
目にそれぞれ廃糖蜜４ｆ／ｄｌ（糖濃度換算）をフィー
ドする。
組成の発酵培地３９ｄに加え、３０℃で９６時間振盪培
養する。培養にあたっては、２４時間目および４８時間
目にそれぞれ廃糖蜜４ｆ／ｄｌ（糖濃度換算）をフィー
ドする。
（発酵培地の組成）；廃糖蜜５ｔ／＃（糖濃度換算）、
酵母エキス２ｙ／ｄｉ、硫酸アンモニウム０、５ ｆ／
＃、リン酸−カリウム０．０５ｆ／ｄｉ。
酵母エキス２ｙ／ｄｉ、硫酸アンモニウム０、５ ｆ／
＃、リン酸−カリウム０．０５ｆ／ｄｉ。
リン酸二カリウム０．０５ ｆ／ｄ１．硫酸マグネシウ
ム・７水塩ｏ、 ０２ ｓ ｙ／ｄｌ、炭酸カルシウム
（６） ２ ｆｌａｔ 、ビタミ７ Ｂ、 ｓ ｍｇ／ｌ、ニ
コチン酸８ ｍｆｉ／ｌ 。
ム・７水塩ｏ、 ０２ ｓ ｙ／ｄｌ、炭酸カルシウム
（６） ２ ｆｌａｔ 、ビタミ７ Ｂ、 ｓ ｍｇ／ｌ、ニ
コチン酸８ ｍｆｉ／ｌ 。
および種々の濃度のプロリン、コハク酸イミドまたはグ
ルタミン酸（ｐＨは殺菌前にアンモニア水で７．２に調
整する） プロリン、コハク酸イミドまたはグルタミン酸濃度とＣ
ｏＱ１ｏ生成蓄積量との関係を第１図に示す。
ルタミン酸（ｐＨは殺菌前にアンモニア水で７．２に調
整する） プロリン、コハク酸イミドまたはグルタミン酸濃度とＣ
ｏＱ１ｏ生成蓄積量との関係を第１図に示す。
第１図から明らかなごとく、プロリン単独添加の場合、
ｏ、 ｏ ｓ ｙ／ｄｉ以上で効果は顕著となり、無添
加でＣｏＱ 、。１２０γ／＋ｔｊであるのに対し、１
〜５ ｆＡｌｌの範囲でＣｏＱ、。は１８０γ肩以上を
示 □し、特に３ ｆｌａｔでは最高１９８１曾のＣｏ
Ｑｌ。が生成蓄積する。コハク酸イミド単独添加の場合
も、０．０５シＵ以上で効果は顕著となり、０．３〜１
． Ｏｆｌａｔの範囲でＣｏＱｌｏ １４０γ肩以上を
示し、特に０．５かりでは最高１４９ル匂のＣｏＱｔ。
ｏ、 ｏ ｓ ｙ／ｄｉ以上で効果は顕著となり、無添
加でＣｏＱ 、。１２０γ／＋ｔｊであるのに対し、１
〜５ ｆＡｌｌの範囲でＣｏＱ、。は１８０γ肩以上を
示 □し、特に３ ｆｌａｔでは最高１９８１曾のＣｏ
Ｑｌ。が生成蓄積する。コハク酸イミド単独添加の場合
も、０．０５シＵ以上で効果は顕著となり、０．３〜１
． Ｏｆｌａｔの範囲でＣｏＱｌｏ １４０γ肩以上を
示し、特に０．５かりでは最高１４９ル匂のＣｏＱｔ。
が生成蓄積する。またグルタミン酸単独添加の場合も０
．０５ ｆ’／都以上で効果は顕著となり、０．５〜３
ｖ肩の添加で１５０γ肩以上のＣｏＱ、。
．０５ ｆ’／都以上で効果は顕著となり、０．５〜３
ｖ肩の添加で１５０γ肩以上のＣｏＱ、。
が生成蓄積する。
（７）
さらに、プロリンおよびコハク酸イミドの混合添加（コ
ハク酸イミドｏ、 ｓ ｙ／ｄｉでのプロリン濃度）の
場合、コハク酸イミド濃度０．５ ｆｙ勺およびプロリ
ン０．５ ｆ／ｄｉ混合で、プロリン単独硲加濃度１ｙ
ｅｌ１以上の効果と同程度となる１８６１膚のＣｏＱｌ
ｏを生成蓄積する。
ハク酸イミドｏ、 ｓ ｙ／ｄｉでのプロリン濃度）の
場合、コハク酸イミド濃度０．５ ｆｙ勺およびプロリ
ン０．５ ｆ／ｄｉ混合で、プロリン単独硲加濃度１ｙ
ｅｌ１以上の効果と同程度となる１８６１膚のＣｏＱｌ
ｏを生成蓄積する。
実施例２
実施例１で用いたものと同じＣｏＱ、。生産菌を２１容
三角フラスコ中の実施例１で用いた種培地３００ｄに接
種し、３０℃で２４時間振盪培養する。該培養液３００
ｄを実施例１に示す発酵培地にプロリン３ ｆＡｌｌを
添加した改良培地３１を含む５１容ジヤ一発酵槽に移し
、温度３０℃、通気１ｉ／分、攪拌数３５０回転／分の
条件下で９６時間培養する。培養にあたっては、２４時
時間表４８時間目にそれぞれ廃糖蜜５ ｆｌａｔ（糖濃
度換算）をフィードする。ＣｏＱ、。生成蓄積量は８４
時間で最高に達し、２０１γ廓生成している（プロリン
を添加しない培地で同様に培養した場合は１３３γ肩で
ある）。
三角フラスコ中の実施例１で用いた種培地３００ｄに接
種し、３０℃で２４時間振盪培養する。該培養液３００
ｄを実施例１に示す発酵培地にプロリン３ ｆＡｌｌを
添加した改良培地３１を含む５１容ジヤ一発酵槽に移し
、温度３０℃、通気１ｉ／分、攪拌数３５０回転／分の
条件下で９６時間培養する。培養にあたっては、２４時
時間表４８時間目にそれぞれ廃糖蜜５ ｆｌａｔ（糖濃
度換算）をフィードする。ＣｏＱ、。生成蓄積量は８４
時間で最高に達し、２０１γ廓生成している（プロリン
を添加しない培地で同様に培養した場合は１３３γ肩で
ある）。
（８）
培養終了後の培養液２ノを遠心分離し、乾燥重量として
４４Ｆに相当する湿菌体を得る。これを２００−の水に
懸濁し、メタノール４００ｄ１水酸化ナトリウム８０ｖ
１ピロガロール１５ｆを加え、８５℃で４５分間還流ケ
ン化後放冷し、１ノずつのｎ−ヘキサンを加え、２回抽
出を行なう。ｎ−へキサン層を集めてこれに無水芒硝を
加えて脱水後、減圧下で濃縮する。
４４Ｆに相当する湿菌体を得る。これを２００−の水に
懸濁し、メタノール４００ｄ１水酸化ナトリウム８０ｖ
１ピロガロール１５ｆを加え、８５℃で４５分間還流ケ
ン化後放冷し、１ノずつのｎ−ヘキサンを加え、２回抽
出を行なう。ｎ−へキサン層を集めてこれに無水芒硝を
加えて脱水後、減圧下で濃縮する。
残渣を４０−のアセトンに溶解して不溶物を炉別除去し
た後、再び濃縮する。残渣を１０４のアセトンに溶解後
、シリカゲルカラムに流して、ベンゼンにて溶出する。
た後、再び濃縮する。残渣を１０４のアセトンに溶解後
、シリカゲルカラムに流して、ベンゼンにて溶出する。
ＣｏＱｌｏを含む両分を集めて濃縮し、残渣を５−のエ
タノールに溶解後冷却することによシ、黄色の粗結晶２
０５噌を得る（また、同様に無添加の発酵培地からは１
３６ｍｇを得た）。
タノールに溶解後冷却することによシ、黄色の粗結晶２
０５噌を得る（また、同様に無添加の発酵培地からは１
３６ｍｇを得た）。
本品は、逆相薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマ
トグラフィーなどによ’） Ｃ０Ｑ１ｏであることを確
認した。
トグラフィーなどによ’） Ｃ０Ｑ１ｏであることを確
認した。
（９）
第１図は、培地に添加したプロリン、コノ・り酸イ２ド
またはグルタミン酸濃度と培養液中に蓄積したＣｏＱｌ
。濃度との関係を示す。 Ｏ−○ニブロリン濃度 ・−・：コハク酸イミド濃度 △−△：グルタミン酸濃度 ローロ：コハク酸イミド濃度０．５ ｆ、／ｄｉ条件下
でのプロリン濃度 （１０）
またはグルタミン酸濃度と培養液中に蓄積したＣｏＱｌ
。濃度との関係を示す。 Ｏ−○ニブロリン濃度 ・−・：コハク酸イミド濃度 △−△：グルタミン酸濃度 ローロ：コハク酸イミド濃度０．５ ｆ、／ｄｉ条件下
でのプロリン濃度 （１０）
Claims (2)
- （１） ロドシュードモナス属に属し、補酵素ＱＩＯ
生産能を有する微生物をプロリンもしくはその塩、コハ
ク酸イミド、およびグルタミン酸もしくはその塩から選
ばれた少なくとも１種を添加した培地に培養し、培養物
中に補酵素Ｑ１゜を生成蓄積させ、骸培養物よシ補酵素
ＱＩＯを採取することを特徴とする補酵素ＱＩＧの製造
法。 - （２） プロリンもしくはその塩、コハク酸イミド、
およびグルタミン酸もしくはその塩から選ばれた少なく
とも１種を０．０５ｆ／ｄ１以上培地に硝加する特許請
求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2607882A JPS58146285A (ja) | 1982-02-22 | 1982-02-22 | 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2607882A JPS58146285A (ja) | 1982-02-22 | 1982-02-22 | 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58146285A true JPS58146285A (ja) | 1983-08-31 |
| JPH0369517B2 JPH0369517B2 (ja) | 1991-11-01 |
Family
ID=12183601
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2607882A Granted JPS58146285A (ja) | 1982-02-22 | 1982-02-22 | 補酵素ｑ↓１↓０の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58146285A (ja) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5247990A (en) * | 1975-10-13 | 1977-04-16 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Manufacture of co-enzyme q10 |
| JPS5489086A (en) * | 1977-12-27 | 1979-07-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Preparation of coenzyme q10 |
-
1982
- 1982-02-22 JP JP2607882A patent/JPS58146285A/ja active Granted
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5247990A (en) * | 1975-10-13 | 1977-04-16 | Nisshin Flour Milling Co Ltd | Manufacture of co-enzyme q10 |
| JPS5489086A (en) * | 1977-12-27 | 1979-07-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Preparation of coenzyme q10 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0369517B2 (ja) | 1991-11-01 |
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