JPS5824860A - ヒト−ｐｔｈの測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト副甲状腺ホルモン（ヒト−ＰＴＨ）まｆ
’ＵそのＣ末端フラグメントのラジオ・イミュノ・アッ
セイ（ＲＩＡ　）に関する。 詳しぐは、下記一般式ＣＤ Ｒ２−Ａｈａ　−Ｇｌｙ　−Ｓｅｒ　　−Ｇｉｎ　　−
Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　　−Ｌｅｕ　−Ｖａｌ　　−Ｇｌｕ
　−Ｓｅｒ　−Ｔ−Ｉｉｓ　　　Ｇｌｕ　−Ｌｙｓ　−
８ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌ
ｙｓ　−Ａｌａ　−Ａｓｐ　−Ｖａｌ　　　　Ａｓｐ　
−Ｖａｌ　　−Ｌｅｕ　−Ｔｈｒ　　−（ただし式中、
馬はＨ寸たはＨ−Ｒ３−基、Ｒ３はＣｙｓ　ｉたＩ’；
ｊ：Ｔｙｒ基を示す）で表わさｎるペプチドを用いてな
るヒト−ｐＴｒ−ｒｔたはそのＣ末端フラグメントのＲ
ＴＡに関する。 ヒト−ＰＴＩＴは、８４個のアミノ酸よりなるペプチド
ホルモンであり、近年このＰＴＨのＣ末端側の血中濃度
を測定することがＰＴＨ関連疾患を診断するに重要であ
ると報告さｎている［　Ｆ、Ｐ、ＤｉＢｅｌｌａ　ｅｔ
ａｌ　；　Ｊ、Ｃ１ｎ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、Ｆｌ＋
Ｉ’ｅｔａｂ、　、　ＡＵ−（４Ｌ　６０４（１９７８
）］。 そとで、本発明者らは、ヒト−ＰＴＨのＣ末端側のフラ
グメントである３２残基〔°ｈ・−ＰＴＨ（５８−８４
）　］　、３４残基［ｈ−ＰＴＨ（５１−８４）　、］
、８９残基〔１＋−ＰＴＨ（４６ｇ４）　］、さらに［
Ｃｙｓ〕−ｈ−しく特願昭５５−１８７６８６号）、そ
のｈ　　ＰＴＴ（（４６−８４）、ＣＣｙｓ　］　−ｈ
−ＰＴＴＴ　（４６−８４）、〔Ｔｙｒ〕−ｈ−ｐＴ■
−ｒ　（４６−８４）により良好にヒＩ−−ＰＴＩｒの
Ｃ末端フラグメントに対する抗体を用いたＲＴＡに基い
て定量をなし得ることを見いＩｔ；　ｔ、た。ｒ　！ｔ
’！ｊ’　Ｉ／Ｃ好ましく　ｌ’ｊ：　ＣＣｙｓ　、］
　　ｈ　　ＰＴＩＩ　（４６−８４）１　ｆＡはその蛋
白質結合体、例えば牛血清アルブミン（Ｒ８Ａ　）との
結合体を抗原として得られる特穎的抗体を用い、かつ［
Ｔｙｒ　］　−ｈ−ＰＴＨ（４６−８４）Ｓ−ラジオ・
アイソトープにて標識せしめた標識化合物を用いること
により、ヒト−ＰＴＨ丑たはヒト−ＰＴｎ　ｃ末端フラ
グメントラ良好に定量し得ることを見い出した。 まず本発明に用いらｆる一般式〔Ｉ〕で表わされるペプ
チドは、その式〔ｌ’）で示されるアミノ酸順序に個々
のアミノ酸または低級ペプチドを縮合せしめ、縮合反応
の最終段階で１１１１１鎖の官能基の保護基を脱却する
ことにより得らｎる。縮合順序としては式〔１〕で示さ
ｎるアミノ酸配列であｎば、如何なる順序からでも合成
し得るが、Ｃ−末端側から合成するのが有利である。ま
た合成するに当っては、カルボジイミド法、アジド法事
活性エステル法や無水物法などの縮合方法を用いること
が好ましく、さらに縮合の各段階ではラセミ化が起らな
い方法またはラセミ化が最小になる方法を用いるのが望
ましく、好ましくはアジド法事活性エステル法、Ｗｉｉ
　ｎ　ｓ　ｅ　ｈ法捷たばＧｅ　ｉ　ｇｅ　ｒ法、とり
わけ縮合剤としてＮ−エチル−マー３−ジメチルアミノ
プロピル−カルポジイミド（ｗｓｃｒ　）　ｆ用いる変
法などが用いられる。また合成に当っては、ペプチド分
野の合成技術に基いて、適宜使用し得る保護基を用い、
縮合を順次行なうもので、ペプチド分野の合成技術がひ
ろく用いられる。なお合成の詳細に関しては、何んら限
定するものではないが、特願昭５５−１８７６８６号明
細書を参照さ扛たい。 このようにして本発明におけるｈ　−ＰＴＨ（４６−８
４）、［Ｃｙｓ　］　−ｈ　　ＰＴＨ（４６８４）、Ｃ
Ｔｈｙ　〕−ｈ　−１’ＴＨ（４６−８４）の一般式［
１）で表わされるペプチド、および対照としてのｈ　−
ＰＴＨ（ｓ８−　ｓ４）、ｈ　−ＰＴＨ（５１−８４）
を得ればよい。 このようにして一般式で表わされるペプチド（以下、ペ
プチド〔ｌ〕と略す）を用いてＲＴＡに基いてヒト−Ｐ
ＴＨまたはそのＣ末端・フラグメントを測定するもので
あるが、まずそのＰＴＴＩ測定のための用いるＲＴＡの
実施に必要な各試薬、例えば抗血清、または抗体やラジ
オ・アイソトープ標識体までを調整するのである。捷ず
ペプチド［ｎ　’に用いてその特異的抗体を得るに当っ
ては、ペプチド〔Ｉ′３をその捷ま、′＝またはＢＳＡ
捷たはそのアルカリ処理もしくはンジウムラウリルサル
フェートとメルカプトエタノール処理による分子内ジス
ルフィド基を開裂せしめた処理物などの蛋白質との結合
体として用いて、捗々の哺乳動物、例えばウサギ、ラッ
ト、モルモットやマウスなどに投与せしめて感作せしめ
ればよく、例えば上記のペプチドＣＩ］またはその蛋白
質結合体をフロイント・コンプリート・アジュバントに
乳化せしめ、これをモルモットに皮下注射せしめ、２週
間隔で４〜７回投与することにまり感作せしめ得るもの
で、次いでこの目的とする抗体を産生じた動物より採血
し、これを常法により遠心処理などを行なってその抗血
清を得ればよい。またこの抗血清は十分高濃度の特異的
抗体を含有してなるもので、適宜そのまま保存してもよ
く、またそのまま使用時に必要に応じて希釈して用いれ
ばよい。さらにとの抗血清は、塩析、等電点沈澱、透析
、クロマトグラフィー、ゲル沖渦手段などの常法により
その特異的抗体を得てもよい。 ？に、た上記の蛋白質との結合体を得るに当っては、多
官能性試薬、ｆｌｌえばスクシンアルデヒド、グルタル
アルデヒド、アジポアルデヒドなどのアルデヒド化合物
、ヘキサメチレンジインシアナート、２　、４−４ルエ
ンジインシアナートなどのジイソシアナート化合物や３
−　（２’−ベンゾチアゾリル−ジチオ）プロピオン酸
スクシンイミドエステル（特願昭５８−８５９００号参
照）６−Ｎ（：８−（２’　−ベンゾチアゾリル−ジチ
オ）グロビオニル〕カプロン酸スクシンイミドエステル
、マレイミド安息香酸スクシンイミドエステル、Ｎ、「
−エチレンビスマレイミド、ビスジアゾベンジジン、ジ
エチルマロンイミデートなどが用いられ、これらの多官
能性試薬は、用いるペプチド〔Ｉ〕および蛋白質の結合
に関−／、７するアミノ基、カルボキシル基やチオール
基などの官能基全考慮して選択使用すればよい。特に好
ましくは、ペプチド〔Ｉ〕として［：　Ｃｙｓ　］　−
ｈ　−ＰＴＩ（（４６８４）を用い、かつ多官能性試薬
として８−　（２’−ベンゾチアゾリル−ジチオ）プロ
ピオン酸スクシンイミドエステルなどのチオール基と良
好に反応する試薬を用いて蛋白質を結合せしめることに
より、そのＣｙｓの基のチオール基に基いて良好なペプ
チド〔Ｉ〕の蛋白質結合体が得られる。 また結合せしめるに当っては、本発明のペプチド［Ｉｌ
）と蛋白質、例えばＢＳＡとの使用部としてはＢＳＡ　
１モル当りペプチド［１：］］ｔ−１ｏモル程である。 さらに反応に当っては、例えばｐＴ（７〜８の水性媒体
にペプチド［：Ｉ：］　？必要量加え、次いでこれに多
官能性試薬を添加して通常冷却下〜室温下にて１〜５時
間反応せしめ、適宜と扛全ゲル濾過などの精製手段を用
いて精製した後、これにＢＳＡを加えて室温下１〜５時
間反応せしめ、反応後ゲル濾過、透析などの手段にて精
製してペプチド〔Ｉ〕とＢＳＡなどの蛋白質との結合体
を得ればよい。さらに前記の特異的抗体は、必要に応じ
て不溶性担体、例えばアルブミンやゼラチンなどの不溶
性蛋白質担体、アガロース、セルロースやデキストリン
などのエピクロルヒドリン処理や臭化シアン処理、さら
にこれらのアミノ基導入試薬処理してなる不溶性半合成
高分子系担体、アクリロニトリル、アクリル酸、アクリ
ル酸エステル、メタアクリル酸、メタアクリル酸エステ
ル、ビニルアルコール、酢酸ビニル、アミノスチレン、
アクリルアミド、性化合物にて結合せしめた不溶化抗体
として用いてもよい。 さらに−また測定に用いられるペプチド〔■〕のラジオ
・アイソトープ標識体を得るに当っては、常法によるラ
ジオ・アイソトープによる標識手段を用いればよく、例
えばペプチド〔Ｉ〕に　Ｉなとのラジオ・アイソトープ
を加え、これにクロラミンＴを加えて攪拌反応せしめ、
次いでピロ亜硫酸ソーダを加え、さらにヨウ化カリウム
を加えた後ゲル濾過などの精製手段により精製し、その
放射活性を有する目的の分画を回収すればよい。寸たべ
５ ブチド〔Ｉ〕としてＣＴｙｒ　］　　ｈ−ＰＴＨ［４６
Ｆ１４　］を用いれば、ラジオ・アイソトープによる標
識化が容易であり、かつ特に試験管などのガラス面への
吸着が著しく少なく、従って目的のＰＴＩ（の測定性媒
体ケ用いればよい。 次いで本発明を実施するに当っては、公知のＲＩＡの種
々の方法が使用できる。これらの方法としては、例えば
競争法やサンドインチ法などの簡便な手段が用いられる
。競争法に関して詳しく例示すｎば、まずヒト−ＰＴＨ
の含量全測定しＪ：つとする試料、ペプチド［１１のラ
ジオ・アイソトープ標識体およびペプチド［１］全用い
て得られた抗血清′−または抗体を免疫反応媒体、例え
ばリン酸緩衝液やベロナール緩衝液中にて４〜５℃程度
にて約１〜３日間インキュベイトし、次いで免疫結合し
た部分たる結合部（Ｂ）と結合していない遊離部（巧と
全分離するためのＢ−Ｆ分離を行なうもので、打首しく
は抗血清作成に用いた哺乳動物と同一動物の正常血清お
よびその動物に対する抗血清を加えて一夜インキュベイ
・トシ、その後８０００　ｒｐｍ　、　２０〜３０分程
度にて遠心分離してＢ−Ｆ分離し、次いで。 そのＢたる沈澱物の有するラジオ・アイソトープの放射
能測定捷たはそのＦたる液層部の放射能測定を行なえば
よい。−また固相法としては、上記競争法におけるペプ
チド［１）　？用いて得らｎる抗血清捷たは抗体の代わ
りにλ溶化抗体全相いて競争反応全行なわせ、反応後そ
のＢ−Ｆ分離を行ない、同様に放射能測定を行なえばよ
い。その他公知のサンドインチ法などの手段にて、適宜
必要な試薬を用いて測定してもよい。 このようにして、ペプチド［１）ｅ用いて得られる抗体
、およびペプチド〔Ｉ〕のラジオ・アイソトープに試料
中のヒ）　−ＰＴＨ−，４たはそのＣ末端−フラグメン
トの定′１１４−をなし得る優ｎｆｔ方法であるり、特
に［Ｔｙｒ　］　−ｈ　−ＰＴＨ（４６８４）のラジオ
・アイソトープ標識体は、その測定の際に、用いるガラ
ス器具などへの付着を生じ難いため、測定時のブランク
値が１％以下であり、／１）に好寸しいものであった。 次に本発明の実施例および参考例を挙げて詳しく述べる
が、本発明はこれらによって何んら限定されるものでは
ない。 実施例 （１）抗原について。 各参考例の如くして得られた、１１−１）ＴＩ　（５３
−８４）、ｈ−ＰＴＨ（５１−８４）、ｌ＋−ＰＴＩＩ
　（４ｆｉ　　８４）、および下記の如くして得られた
ｌｌ５Ａ　’−［Ｃｙｇ　］　−ｈ　−ＰＴＨ（４６−
８４）を抗原として用いた。 なお、ＢＳＡ−’−［Ｃｙｓ　］　−ｈ−ＰＴＨ（４６
−８４）の作成に、次の通りである。 ＢＳＡ　５０Ｔｑを０．１　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，
０）　１　ｍｅに溶かし、これにＥＤＴＡ・４ナトリウ
ム塩４■を加えた。 次いでこれに、５００μりの８−（２’−ベンゾチアゾ
リル−ジチオ）プロピオン酸スクシンイミドエステル含
有ジメチルホルムアミド溶液１５０μｔｆ加えて氷冷下
６０分間攪拌反応せしめ、反応後これに［Ｃｙｓ　］　
　ｈ　−ｒ’ＴＩ（（４６８４）　５０■を加えた。氷
冷下で３０分間反応した後、ｐＨ’ｉ　７．０に調整し
、セファデックスＧ　−７５〔０，１５Ｍ　Ｎａ％ｔｆ
含む０．ＯＩＭリシリン酸緩衝液ｐｌＩ　７２）にて充
填〕のカラム（径１ｃｒｎＸ　５０　ｃｍ　）でゲル濾
過して、１５　ｍｌから２０　ｍｌの流出分画を回収し
、ＢＳＡ　−［Ｃｙｓ　］　−ｈ　−ＰＴＨ（４６−８
４）含有区分を得た［：’　ＢＳＡ　Ｉ分子当ＤｚＣＣ
ｙ８１　　ｈ−ＰＴＩＩ　（４６−８４）は平均１１分
子結合〕。 （２）抗体について 上記各抗原を用いて、５００μ２／−の濃度の０，１５
ＭＮａＣｔ含有０．ＯＩＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）
を調整した。この溶液各々２．５　ｍｅづつ分取し、フ
ロイント・コンプリート・アジュバント２５献づつ加え
て乳化シ、各々５匹づつの雄モルモット背部に皮下注射
して免疫した（２週間毎に５回皮下注射）。次いでその
最終免疫から２週間目に、心臓より採血し、常法に従っ
て各抗原に対する抗血清を得た。 なお以下、ｈ　−ＰＴＴＩ　（５３−８４）に対する抗
血清は（Ａ）と略し、ｈ　−ＰＴＨ（５１−８４）に対
する抗血清は（Ｂ）と略し、ｈ　−ＰＴＨ（４６−８４
）に対する抗血清は（Ｃ）と略し、ＢＳＡ−［Ｃｙｓ　
）　−ｈ　−ＰＴＩＴ　（４６−８４）に対する抗血清
１ｄ　（Ｄ）と略す。 （３）標識抗原について Ｏ５Ｍリン酸緩衝液（ｐｌＩ　７５）２５７Ｌｔを・、
小試験管にとり、　　１１ｍＣ４ｆｆ加えた後、［Ｔｙ
ｒ’：ｌ　　ｔ＋　−ＰＴＨ（４６−８４）５μｆを加
えた。さらにクロラミンＴ　［２，５ｔｎｇ　／　ｍｌ
の０．０５　Ｍリン酸緩衝液（ｐＴ＋　７．５）　］　
１０μｔを加えて攪拌後、ピロ亜研酸ンーダ〔２，５■
／　ｍｅ水溶液〕２５μ　を加え、さらに１％ヨウ化カ
リウム水溶液１０ｔｔｌ　　加え、次いでこれを、セフ
ァデックスＧ−２５のカラム（径１　ｃｍ　Ｘ　２０ｍ
）〔あらかじめ２％ＢＳＡ含有０．１５　Ｍ　ＮａＣｔ
　含有０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）　ｌ　ｍ
ｌｆ流し、０．１５　Ｍ　ＮａＣｔ　　含有０．０１ｙ
１１Ｊン酸緩衝液（Ｈ−ｒ　７．２　）で洗浄した〕で
ゲル濾過した。各分画の放射能を測定し、５５から７．
５　ｔｎｅの流出分画を集めて、１２５■にて標識した
〔Ｔｙｓ４５］　　ｈ　−ＰＴＨ（４ｆｉ　　８４）含
有区分を得た。本区分は、０．５チｒｌｓＡ含有０．０
５　Ｍベロナール緩衝液（ｐＨ７，５）を希釈液として
１分析当り約０．Ｏ１μＣｉ使用する。 （４）　ｆＩｌ１１定法について 試料液１００μｔ、　　ｏ、ｏｔμＣｉ　　の放射活性
を有する標識抗原１００７ｚ／−、免疫反応媒体２００
μｔおよび適宜希釈した抗血？ｔ’？　１００　ｌｔｌ
　ｆ　５℃で２日間インキュベイトし、次いで２００倍
希釈したモルモット正常血清１００μｔおよび抗モルモ
ットγ−グロブリンウサギ血清（１０倍希釈）ＬＯＯｔ
ｔＬｆ加えて一度反応せしめ、遠心分離（３０００ｒｐ
ｍ　、　２０分）して沈澱を得、その沈澱物をγ−カウ
ンターによる放射能測定を行なった。なお、免疫反応媒
体としてハ０．５％ＢＳＡ含有測定法（４）における試
料液の代りに、免疫反応媒体１００μｔを用い、抗血清
として各Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄの希釈液を用いて、以下測定法
（４）と同様に行なって、用いた標準抗原の放射活性値
（Ｔ）に対する沈澱物の放射活性値（ｎ）による抗体力
価（ｎ／’ｒ　）ｘ　ｔｏ。 チを求めた。 （ただし、＊は５００倍希釈の抗血清、＊＊は１６００
倍希釈の抗血清、＊＊＊は２０００倍希釈の抗血清の場
合を示す） （６）各抗血清の標準曲線について 上記抗血清において、Ａ−４、Ｂ−５、Ｃ−３およびＤ
−２の各抗血清を用いて、その標準曲線を求めた。 またＡ−４における標準曲線に関して、その抗血清たる
Ａ−４は最終希釈８０００倍で使用し、また標準物質と
してｈ　−ｐｒｎ　（ｓｓ　−８４）　（第１図中、〇
−〇）、ｈ　−ＰＴＨ（５１−８４）　（第１図中、△
−△）　、ｈ　−ＰＴＨ（４６−８４）　（第１図中、
×−×）を用い、　　■にて標識したＣ　Ｔｙｒ　〕−
ｈ　−ＰＴＨ（４６−８４）を用いて、測定法（４）に
従って、その標準曲線を求めた。その結果、第１図に示
す通りであった。 さらにＢ−５における標準曲線に関して、その抗血清た
るＢ−５［最終希釈２０００倍で使用し、また標準物質
としてｈ　−ＰＴＨ（５１１１−８４）　（第２図中、
０−０）、ｈ　−ＰＴＨ（５１−８４）　（第２図中、
Δ−Δ）　、ｈ　−ＰＴ■Ｉ　（４６−８４）　（第２
図中、ｘ　−ｘ　）を用い、以下、上記と同様にして測
定してその標準曲線を求めた。その結果は第２図に示す
通りであった。 さらに捷たＣ−１１における標準曲線に関して、その抗
血清たるＣ−８は最終希釈３０００倍で使用し、また標
準物質として）ｌ　−Ｉ）ＴＨ（５ｓ　−８４）（第３
図中、〇−〇）、ｈ−ＰＴＨ（５１−８４）（第３図中
、八−へ）、ｈ　−ｐＴｙｔ　（４６−８４）（第３図
中、×−×）を用い、以下」二記七回様にして測定し、
その標準曲線を求めた。その結果は第３図に示す通りで
あった。 さらにＤ−２における標準曲線に関して、その抗血清た
るＤ−２は最終希釈１ｏｏｏｏ倍で使用し、標準物質と
してｈ　−ＰＴＨ（５ｇ　−８４）（第４図中、○−Ｏ
）？用い、以下」１記と同様にして測定し、その標準曲
線を求めた０その結果は第４図に示す通りであった。 さらにまたｃ−３において、その抗血清たるＣ−３は最
終希釈８０００倍の場合のもの全用い、また標準物質と
してヒト−ｐＴｏ　（１−８４）　（第５図中、ム二ム
）′ｆ用い、以下上記と同様にして測定し、その標準曲
線を求めた。その結果は第５図に示す通りであった。 以」二の各結果より明らかな通り、各抗血清中、ｈ　−
ｐＴｎ　（４６−８４）、ＵＳＡ　−［Ｃｙｓ　］　−
ｈ　−ＰＴＨ’（４６−８４）を抗原として得られた抗
血清は極めて良好な標準曲線を与える良好なものであっ
た。 （７）標準曲線と慢性賃不全患者血清との比較について 抗血清としてｃ−２の最終希釈４０００倍を用い、標準
物質としてｈ　−ＰＴ）Ｉ　（５Ｂ　−８４）全周いて
、前記と同様に測定して、その標準曲線（第６図の○−
０：１００係値は一４８５係である）ｆ得た。 ！、た慢性覧不全患者血清の希釈液を試料液とし、同一
抗血清を用いて、測定法（４）に従って反応せしめ、そ
の反応によって生じる沈澱物を回収し、その放射活性を
求め、各試料液に対する−を求め、Ｂ。 各位を第６図のムにてプロットし、曲線を求めた。 その結果、試料液と標準曲線とは極めて良好なパラレル
関係を示すものであった。 （８）各血清における測定について 正常者血清、および甲状腺機能亢進症（続発性甲状腺機
能亢進症、原発性甲状腺機能ブＣ進症）患者血清を試料
液として測定法（４）に従って測定した。 なお用いた抗血清としてはＤ−２の最終希釈１００００
倍のものを用いた。 その結果、第７図に示す通りで、正常者血清濃度を甲状
腺機能ブＣ進症患者面清濃度とにおいて、明うカに差異
が認められたものであった。 参考例１ ｈ　−ＰＴＴ（（５３−８４）　；　ＴＴ−Ｌｙｓ−Ｌ
ｙ＊−Ｇｌｎ　−Ａａｐ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖ
ａｌ　−Ｇｌｕ−８ｅｒ　−Ｈ４ｓ−Ｇｌｕ−Ｔｒｙｓ
−８ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌ　ａ　　Ａｓ
ｐ　−Ｌｙｓ　−Ａｌａ−Ａｓｐ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ
　−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ
−３ｅｒ−Ｇ　ｌ　ｎ−ＯＨの製造例。 （１）　　ＢＯＣ−Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ１）　　Ｌｙｓ　
（Ｚ−Ｃｔ）−Ｇｌｎ　（ＯＨ７，ｌ　’４　　Ａｓｐ
　（０１ｌｚ＋　）−Ａｓｎ−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ−Ｖａ
ｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ　）−８ｅｒ　（１３ｚＩ　）　
−Ｈｌｓ−Ｇｌｕ　（０Ｂｚｌ　）、−Ｌｙｓ　（Ｚ−
ＣＬ　）　−３ｅｒ（Ｂｚｌ　）−Ｌｅｕ−ＧＩｙ７Ｇ
ｌｕ−（０Ｉ１７．Ｉ　）−Ａｌａ−Ａｓｐ　　（０Ｂ
ｚｌ　　）　−Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃｔ）　　−Ａｌａ　
−Ａｓｐ　（ＯＢｚ、ｌ　）−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　（０
Ｂｚｒ　）　　　Ｖａｌ　−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ　　（Ｂｚ
ｌ　　）−Ｌｙｓ　　（Ｚ−ＣＬ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ　
　（Ｚ−ＣＬ　）−８ｅｒ　　（Ｂｚｌ　　）　　Ｇｉ
ｎ　−０ＢＺＩ　［ａ５］　Ｃアミノ酸分析：　Ｔｈｒ
　Ｏ，９２（１）　５ｅｒ１．６０（３）、Ｇｌｕ　４
．０６　（５）、Ｇ、１ｙ　ｏ、ｓｓ　（ｔ）、Ａｌａ
　３．００　（３）、Ｖ、ａｌ　　３．８３　（４）、
Ｌｅｕ　２．４８　（３）、Ｌｙｓ　５．４１　（６）
、ＨｌｓＯ，７０（１）　］　３．４９　ｆ　（０，６
ｍＭ　）およびアニソール３−を無水弗化水素（ＨＦ　
）　２５　ｍｌに０℃に冷却下加え、７５分間攪拌した
。反応後、ＨＦを減圧下留去し、残渣にエーテルを加え
た。生じた沈澱物を回収し、０．Ｉ　Ｎ酢酸５０ｍ１に
溶かし、ダウエックス×１のカラム（２，７Ｘ　８５　
ｃｍ　）に通した。流出液を凍結乾燥して粗生成物２，
１８２を得た。これを８Ｍ尿素水溶液５０ｍ１に溶かし
、アンモニア水でｐＨ９５に調節した後、５０分間放置
した。次いでこの溶液（ｉ−８Ｍ尿素水溶液で充填した
ＣＭ−セルロースのカラム（４，４Ｘ　１２　ｃａｒ　
）にチャージし、０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（
ＰＨ４，５）約１００ｍｊ！で流出した後、０．０１Ｍ
酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ４，５）７００　ｍｅ　
〜０．１　Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ＩＩＴ−Ｔ　４
．５　）７００ｍｌの直線型濃度勾配に」：る溶出を行
い、次いで０．２Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐＴＩ　
４．５　）　８００ゴで溶出した。溶出液ハ１．１３．
５　ｍｅづつ分画し、各分画はＦｏｌ　ｉｎ　−Ｌｏｗ
ｒｙ法（５００ｎｍ）により測定して３０〜５０本目の
区分Ｃ１，５６〜１１９本目の区分Ｃ２および１２０〜
１５０本目の区分Ｃ３の溶出液を得た。 各区分をセファデックスＬＨ−２０のカラムに通して脱
塩した。流出液は８５　ｍｅづつ分画し、各分画は上記
と同じ方法で測定した。区分Ｃ１は３，４×１１３ｃｒ
ｎのカラムに通し、３１〜４０本目の区分Ｌｌ、４１〜
４４本目の区分恥および４５〜５４本目の区分し３を得
た。区分Ｃ２ｎ　３．４　Ｘ　１２０　ｔｙｎのカラム
に通し、３５〜４５本目の区分Ｌ１．４６〜５２本目の
区分しおよび５３〜６０本目の区分Ｌ３を得た。区分Ｃ
３は３．４　Ｘ　１２０αのカラムに通し、３１〜４４
本目の区分し１および４５〜５２本目の区分Ｌ２ヲ得た
。各区分を凍結乾燥して、次の各成分を得た。 前記の０２Ｔ、２５６５■′？１−０１Ｎ酢酸５　ｍｅ
に溶かし、ＣＭ−セルロースのカラム（４，４Ｘ　７０
α）にチャージし、００１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（
ｐＨ４，５）５００　ｍｅ　〜０．１　Ｍ酢酸アンモニ
ウム水溶液（ｐＴ（４，５）５００ｍＡの直線型濃度勾
配による溶出を行った。 溶出液は６．Ｏｍｅづつ分画し、各分画ばＦｏｌｉｎ　
−Ｌ　ｏ　ｗ　ｒ　ｙ法により測定して１１３〜１３６
本目の区分０２■や−Ｃ１，１３７〜１５１本目の区分
Ｃ２ＴＪ２−Ｃ２および１５２〜１９０本目の区分Ｃ２
Ｔ、　−Ｃ，召−得た。 各区分全セファデックスＬ■■−２０のカラムに通して
脱塩した。流出液は５．２ｒｎｅづつ分画し、各分画は
上記と同じ方法で測定した。区分Ｃ２■、２−Ｃ４は３
．４　Ｘ　１２０　ｃｍのカラムに通し、５５〜７２本
目の区分Ｃ２’２　　ｃ、　ｔ、、および７３〜８０本
目の区分Ｃ２Ｔ、、、　−ＣＩＴ、ｌ得た。区分Ｃ２Ｉ
、　−Ｃ２ば３．４Ｘ１１０ｚのカラムに通し、５０〜
５９本目の区分Ｃ２Ｔ−２’Ｃ２ＴＪＩおよび６０〜６
７本［１の区分Ｃ２Ｉ４　　Ｃ２Ｌ２を得た。区分Ｃ２
恥−ｃ、は３，４ｘ１１０ｒ１ｎのカラムに通し、４５
−６０本口の区分のＣ２Ｌ、　−Ｃ，３Ｌ、および６１
〜７２本日の区分Ｃ２ＩＪ２　　Ｃｓ　Ｌ２を得た。各
区分を凍結乾燥して、次の各成分を得た。 Ｃ２Ｌ２−　Ｃ，！、、　　　　　１０８．７■Ｃ２Ｌ
２−　ｃ、Ｌ２９５．９　ｍｇ Ｃ，、Ｌ２−　Ｃ２Ｔ、、　　　　　５３．６■ｃ２　
Ｌ２ｃ２　ＴＪ２　　　　４４．ｔ■Ｃ２Ｌ２　　”３
Ｌ＋　　　　　’９７．０１ｎｆｊＣ２Ｌ２−　Ｃ３Ｌ
２９５．Ｉ　ＷＰｇ（８）　　Ｃ２Ｌ２．−Ｃ，Ｌ、’
、の！精製前記のＣ２Ｌ２−Ｃ１Ｌ＋を０．Ｉ　Ｎ酢酸
１イに溶かし、ＣＭ−セルロースのカラム（２，ＯＸ　
１５　ｃｍ　）にチャージし、０．０１Ｍ酢酸アンモニ
ウム水溶液（ｐＨ４，５）８００　ｍ７！〜Ｏ，Ｉ　Ｍ
酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ４，５）８００ｍｅの直
線型濃度勾配による溶出を行った。 溶出液は７．４−づつ分画し、各分画はＦｏｌｉｎ　−
Ｌｏｗｒｙ法（５００ｎｍ　）により測定して４６〜５
６本目の区分Ｃ２Ｌ２−Ｃ１Ｉ、Ｉ−Ｃを得た。これを
減圧濃縮し、セファデックスＬＨ−２０のカラム（３，
０Ｘ９０ｃｒｎ）にチャージし、０．ＩＮ酢酸で溶出し
た。溶出液は６、Ｏｍｅづつ分画し、上記と同じ方法で
測定して２５〜３５本目の区分Ｃ２Ｉ、！−Ｃ，Ｌ、　
−ＣＬ　を得た。これｖ　凍結乾燥（、テｈ　−ＰＴＨ
（５Ｂ−８４）、　９０．０　ｍｇ　ｆ得た。 ＴＬＣ？馬＝０．７６１スポット アミノ酸分析；　Ａｓｐ　４．４５　（５）、Ｔｈｒ　
Ｏ，９２（１）、５ｅｔ２．１６（３）、Ｇ　ｌ　ｕ　
４．９４　（５）、Ｇｌｙ　Ｏ，９６’（１）、Ａｌａ
　３、Ｖａｌ　　３．９６　（４＞、　Ｌ−ｅｕ　２．
９２　（８）、Ｔ、ｙｌｌ　　６．２２　（６）、Ｔｌ
１ｓｉ、ｏｌ（ｘ） 参考例２ ｈ’　　ＰＴＨ（５１８４）　　：　ＨＰｒｏ　−Ａｒ
ｇ　　　Ｌｙｓ−Ｌｙｓ　−Ｇｌｕ　　Ａｓｐ　−Ａｓ
ｎ　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｍａｌ−Ｇｌｕ−８ｅｒ゛
−旧ｓ　−Ｇ’ｌｕ　−Ｌｙｓ　−Ｓｅｒ　−Ｌｅｕ　
−Ｇｌｙ−Ｇ’ｌｕ　”　Ａｌａ　−Ａ’ｓｐ　−Ｌｙ
ｓ　−’Ａｌａ　−Ａｓｐ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ−Ｖａ
ｌ−Ｌｅｕ　−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｔ、ｙｓ　−
８ｅｒ　−Ｇｌｎ　−ＯＨの製造例。 （１）　　Ｐ　（５２５４）　：　ＡＯＣ−Ａ’ｒｇ　
（Ｔｏｓ　）−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃ１）−Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ
ｔ）　−ＰＡＣ（８６］について。 ＢＯＣ−Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃｔ）−Ｌｙｓ　　（Ｚ　　
　Ｃ１１−ＰＡＣ〔３３〕（融点７２〜７５℃、元素分
析値〔Ｃ１゜Ｈ１ｏｏ１ｏＮ４Ｃｔ２として、Ｃ＝　５
９．２２％、ｕ　＝　５．９８　％、Ｎ　＝　６．８１
　％　）１４．６５２（１８ｍＭ　）にＴＦＡ５０ｍｇ
’１ｍ加え、室温で３０分間攪拌した。反応後、ＴＦＡ
’ｉ減圧下留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈
澱物を集め、ＤＭＦｌＯｍ／に溶かし、これにＡＯＣＡ
ｒｇ　（Ｔｏｓ　）　　ＯＨ９，１９ｆ　（１，２倍Ｍ
）−ＩＩｏｎＴ２．９２　ｆ　（１，２倍Ｍ）およびＷ
ＳＣＩ　３．９５　ｍｌ（１，２倍Ｍ）を加え、室温で
一夜攪拌した。反応後、ＤＭＦ？減圧下減圧上留去渣を
酢酸エチル８００ｍ１に溶かした後、５係重曹水、ＩＮ
塩酸、水の順に各々３回づつ洗浄した。酢酸エチル層を
無水芒硝で乾燥後、減圧乾固し、酢酸エチル−エーテル
より再結晶して［３６］　１４．４６　ｆ　（収率６９
．６％）を得た。 融点；７９〜８２℃ ＴＬＣ：　Ｒｆ、　＝　０．７６ 元素分析（Ｃ，、Ｈ７ｏＯ，３Ｎ８Ｓ　Ｃ１として〕０
％　　　１（チ　　８％ 測定値　　５７．０６　　６．２６　　９．８２計算値
　　５７．２８　　６．１１　　９．７１Ｔ、ｙｓ　　
（Ｚ　　　Ｃ１）　　　Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃ１）−ＰＡ
Ｃ〔３７〕について。 ［３６］　１４．４３　ｆｌ　（１２，５ｍＭ　）にＴ
ＦＡ　４０　ｍｅ　ｆ加え、室温で２０分間攪拌した。 反応後、ＴＦＡ’ｉ減圧下留去し、残渣にエーテルを加
え、生じた沈澱物を集め、ＤＭＦ　８０　ｍｅに溶しｆ
ｌ　ｏこｎにＴｌ０ＩＩＴ２．０８　Ｓ’　（１，２倍
Ｍ　）　、ＢＯＣＰｒｏ　　ＯＨ３，２３ｆ　（１，２
倍Ｍ）およびＷＳＣＴ　２．７５　ｍ７！　（１，２倍
Ｍ）？加え、室温で一夜攪拌した。反応後、ＤＭＦを減
圧上留去し、残渣全酢酸エチル８００−に溶かした後、
５％重曹水、ｌＮ塩酸水の順に洗浄した。酢酸エチル層
全無水芒硝で乾燥後、減圧乾固し、残渣を酢酸エチル−
エーテルより２回再結晶して［８７’Ｊ　１４．７１　
ｙ　（収率９５，１係）をイ０た。 融点：９０〜９３℃ ＴＬＣ；　Ｒｆ７−０．６４ 元素分析〔Ｃｉｏ”４’０＋４Ｎｏ　ｓｃ４　として〕
Ｃ係　　　Ｈチ　　Ｎチ 測定値　　５７，８８　　６．２０　　９．７９計算値
　　５７．２７　　６．１１　　１０．１９（８）　　
Ｐ　（５１５４）　：　ＢＯＣ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ　（Ｔ
ｏｍ　３−Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ１）　　　Ｌｙｓ　（Ｚ−
Ｃ１）−ＯＨ〔３８〕について。 亜鉛末２ｏ２／酢酸３ｏ−に［８７］　６．１９　Ｆ　
（５ｍＭ　）を酢酸４０ｎｔｔに溶がした溶液を加え、
室温で２時間攪拌した。反応後、亜鉛末ｆＦ別し、Ｆ液
を減圧濃縮し、残渣に５係重曹水とエーテル゛を加えて
抽出し、分離した水層？ＩＮ塩酸でｐＨ２に調節した後
、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を水で３回洗浄
し、無水芒硝で乾燥後、減圧乾固し、残渣を酢酸エチル
−エーテルより再結晶して〔３８〕５．４ｏ２（収率９
６．５チ）を得た。 融点；１１Ｏ〜１１３℃ ＴＬＣ：　　Ｒｆ４＝　　０．４８ 元素分析（ｃｉｌ’％９ｏ１３Ｎｌｌｓｃ４とシテ〕Ｃ
チ　　　Ｈチ　　　８％ 測定値　　５４．５６　　６．４６　　１１．２２計算
値　　５４，７３　　６．２１　　１１．２７（４）　
　　Ｐ　　（５１８４）　　：　　ＢＯＣ−Ｐｒｏ　　
　Ａｒｇ　（Ｔｏｍ　　）　−Ｌｙｓ　　（Ｚ　　　Ｃ
１）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃ１）−Ｇｌｕ（０Ｂｚｌ　
　）−Ａｓｐ　　（０Ｉｌｚ＋　　）−Ａｓｎ　−Ｖａ
ｔ　−Ｌｅｕ−Ｖａｔ　−Ｇｌｕ　　（０Ｂｚｌ　　）
−８ｅｒ　　（Ｂｙ、１　　））１ｉｓ　　　Ｇｌｕ　
　（０１ｌｚｌ　　）−Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃ１）　　−
８ｅｒ　　（Ｂｚｌ　　）−Ｌｅｕ　　　Ｇｌｙ　　　
Ｇｌｕ　　（０Ｂｚｌ　　）−Ａｌａ−Ａｓｐ　　（０
Ｒｚｌ　　）−Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃ１）　　−Ａｌａ−
Ａｓｐ　（０Ｂｚｌ　　）　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　　（
ＯＨ７，１）−Ｖａｌ−Ｌｅｕ　　　Ｔｈｒ　　（ＩＩ
Ｆ、ｌ　　）−Ｌｙ８　（Ｚ　−Ｃｔ）−Ａｌａ−Ｌｙ
ｓ　　（Ｚ−Ｃ１）−８ｅｔ　　（ＢｚＩ）−Ｇｌｎ　
−０１１ｚ＋　［３９］について。 ＢＯＣ−Ｇｌｕ　　（０Ｂｚｌ　　）−Ａｓｐ　　（０
Ｒｚｌ　　）−Ａｓｎ−Ｖａｌ　　−Ｌｅｕ−Ｖａｌ　
　−Ｇｌｕ　　　（０１ｌｚｌ　　　）　　　−５ｅｔ
（Ｂｉｔ　　）−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ　　（０１ｌｚｌ　　
）−ＬｙＩＩ（Ｚ　−ＣＬ　）　　　Ｓｅｔ　　（Ｂｚ
ｌ　　）　　　Ｌｅｕ　　　Ｇｌｙ　　　Ｇｌｕ　　（
Ｏｌｌｚｌ）−Ａｌａ−Ａｓｐ　　（０Ｂｚｌ　　）−
Ｌｙｓ　　（Ｚ　−Ｃ１）−Ａｌａ−Ａｓｐ　（ＯＨ２
，ｌ　　）　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　（０Ｂｚｌ　　）　
−Ｖａｔ−Ｌｅｕ　−Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ　　）−Ｌｙ
ＩＩ　（Ｚ　　　ＣＬ　）　　　Ａｌａ−Ｌｙｅ　　（
Ｚ−Ｃ１，）　−８ｅｔ　　（Ｂｚｌ　　）　−〇ｉｎ
−０Ｔ３Ｚｌ　［３２］　［アミノ酸分析；　ｈｓｐ　
４．１１　（５）、Ｔｈｒ　　Ｏ，９２（１）、Ｓｅｒ
　　１．５９　（３）、Ｇｔｕ　　３．９９　（５）、
Ｇｌｙ　Ｏ，８３（１）、Ａｌａ　３、Ｖａｌ　　３．
２８　（４）、Ｔ、ｅｕ　　２．４９　（８）、Ｌｙｓ
　　４．０ｇ（４）、旧ｓ　Ｏ，７１（１）　）　７．
８３　ｆｌ　（１，５ｍＭ　）にＴＦＡ　５０　ｍｌ全
加え、室温で６０分間攪拌し、反応後、ＴＥＡを減圧下
留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を集め
、ＤＭＦ　１２０　ｍｅとＮＭＰ　１２０−を加えて溶
しｆｌ　ｏこれにＴ（ＯＢＴ　Ｏ，８ＯＳ’　（１，５
倍Ｍ）、［８８：１２．５２９　（１，５倍Ｍ）および
ＷＳＣＩ　０．４１ｍ！。 （１，５倍Ｍ）を加え、室温で２日間攪拌し、反応液を
氷水に加え、生じた沈澱物を水洗後、メタノールを加え
て加熱処理した。冷却後不溶物を集め、上記の加熱処理
全２回繰り返した後、エーテルで洗浄して［Ｉ８９　］
　８．２０　ｔ　（収率８７．９係）を得た。 アミノ酸分析：　Ａｓｐ　４．０９　（５）　、Ｔｈｒ
　１．０５　（１）　、５ｅｔ２．８０（８）、Ｇｌｕ
　４．０８　（５）、Ｐｒｏ　０．５２　（１）、ａｌ
ｙｏ、ｓｓ　（ｔ）、Ａｌａ　３、Ｖａｌ　３．４２　
（４）、Ｌ　ｅ　ｕ　２．５　Ｂ’　（８＞、Ｌｙｓ　
５．１１　（６）、Ｔ（ｉｓ　０．６９　（１）、Ａｒ
ｇ　Ｏ，５１（１）（４１）　ｈ　−ＰＴＨ（５１−８
４）無水ＨＦ　４０　ｍｅに０℃に冷却下［３９，：ｌ
　３．７３　ｙ（０，６ｍＭ　）およびアニソール４　
ｍｌ　を加え、６０分間攪拌した。反応後、ＨＦを減圧
下留去し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め
、０．ＩＮ酢酸５０　ｍＡに溶かし、ダウエックス×１
のカラ１２（アセテート型−２，７Ｘ　３３　ｃａｒ　
）に通じ、流出液を凍結乾燥して粗生成物２．４１９　
ｆ−得た。 とｎを８Ｍ尿素水溶液５０ｍｅに溶かし、アンモニア水
でｐＨ１０，０に調節した後、３０分間放置した。次い
でこの溶液ｆ８Ｍ尿素水溶液で充填したＣＭ−セルロー
スのカラム（４，２Ｘ　１１．５α）にチャージし、０
．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐＴ１４．５）で尿
素を流出した後、０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（
ｐＨ４，５）　７００　ｍｅ　〜０．１　Ｍ酢酸アンモ
ニウム水溶液（ｐＨ４，５）　７００−の直線型濃度勾
配による溶出を行い、次いで０．２Ｍ酢酸アンモニウム
水溶液（ｐＨ４，５）　２５０　ｒｕｅで溶出した。溶
出液は８．５　ｍｅづつ分画し、各分画ｆｉ　Ｆｏ　ｌ
　ｉｎ　−Ｌｏｗｒｙ法（５００ｎｍ　）により測定し
て３０〜６３本目の区分Ｃ１，１０５〜１５０木目の区
分ｑおよび１５１〜１９５木目の区分Ｃ３の溶出液を得
た。区分４および区分Ｃ３ヲセフアデツクスＬｌ（−２
０のカラムに通して脱塩した。流出液は５．２　ｍ７！
づつ分画し、区分Ｃ２は３．４Ｘ１１０ｃｒｎのカラム
に通し、５１〜６３本目の区分ｃ２−および６４〜８０
本目の区分Ｃ２Ｌ２を得た。 区分Ｃ３は３．４　Ｘ　１２０　ｃｎｒに適し、５０〜
６９本目の区分Ｃ３Ｌｌおよび７０〜７８本目の区分Ｃ
，Ｌ２を得た。各区分を凍結乾燥して次の各成分を得た
。 前記のＣ２Ｉ２区分８７５　ｍｇ　ｆ　０．ＩＮ酢酸４
Ｔｎｌに溶がし、ＣＭ−セルロースのカラム（２，ＯＸ
８１Ｃｒｎ）にチャージし、０．０１Ｍ酢酸アンモニウ
ム水溶液（ｐＨ４，５）５００　ｍｌ、〜０．２Ｍ酢酸
アンモニウム水溶液（ｐＴＩ　４．５　）　５００　ｍ
ｌの直線型濃度勾配による溶出を行った。溶出液ハフ５
−づつ分画し、８５〜１０８本目の区分Ｃ２Ｌ２−ｃ’
＞得た。この区分をセファデックスＬＴ（−２０のカラ
ム（３，Ｏｘ　１２８　ｃｍ　）に通して脱塩した。流
出液は６　ｍｌづつ分画し、３４〜４２本目の区分Ｃ２
Ｌ、−ＣＬ、および４３〜５０本目の区分ｑＬ２ＣＬ！
？得た。各区分を凍結乾燥して次の各成分を得た。 Ｃ２Ｌ２−＝ＣＬ、８０、ｇｍｇ アミノ酸分析；　Ａ３１１４．９５　（ｓ）、Ｔｈｒ　
Ｏ，９８（１）、５ｅｒ２．４７　（３）　、Ｇｌ　ｕ
　５．１４　（５）、Ｇｌｙ　１．０１　（１）、Ａｌ
ａ　５（３）、Ｖａｌ４．０５　（４）、Ｌｅｕ、　３
．０２　（３）、Ｌｙｓ　６．１６　（６）　、Ｈｉ　
ｓ　Ｏ，９６（１）、Ａｒｇ　Ｏ，９７（１）、Ｐｒｏ
　１．０６（１）Ｃ２Ｌ２−　ＣＬ、　　１９７．６■ アミノ酸分析；　Ａ＋＋ｐ　５．００　（５）、Ｔｈｒ
　Ｏ，９８（１）、５ｅｒ２．３０（３）、Ｇｌｕ　５
．１７　（ｓ）、Ｇｌｙ　１．０１　（１）、Ａｌａ３
（３）、ｖａｌＡ　ｒｇ　　１．０１　（１）、Ｐ　ｒ
　ｏ　　１．０４　（１）前記のＣ２Ｔ、２−ＣＴ、２
区分１９５　ｍｆｌ　ｆ　Ｏ，Ｉ　Ｎ酢酸２　ｍｅに溶
かし、ＣＭ−セルロースのカラム（２，０Ｘ１５ｃｒｎ
）にチャージし、０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（
ｐＨ４，５）８００７ｎｅ　〜０．２Ｍ酢酸アンモニウ
ム水溶液（ｐＴＩ　４．５　）３００　ｔｎｅの直線型
濃度勾配による溶出を行った。溶出液（ｄ　６．４　ｍ
ｅづつ分画し、５５〜６４本目の区分Ｃ２Ｔ、、−ＣＩ
、２−Ｃ７おＪ：び５６〜７２本口の区分ｃ２ｒ、　−
ｃｒ、、　、−ｃ、を得た。各区分をセファデックスＴ
、Ｉ−Ｉ　−２０のカラムに通して脱塩した。 区分０２Ｎ、２−ＣＩ、！−Ｃ１は３．ＯＸ　１２８ｍ
のカラムに通し、流出液は７．４　ｍｅづつ分画し、３
１〜３８本目の区分Ｃ２Ｉ、２−　ＣＴ、−Ｃ，Ｌ、　
　と３９〜４３本目の区分Ｃ２１，−ＣＩ、２−　Ｃ，
ｌ−２ｉ得た。区分Ｃ２Ｌ、。 −ｃＬ２−　ｃ、　ｒ、、を凍結乾燥してｈ　−ＰＴＨ
（５３−８４）７７．２ｍｆｌを得た。 ＴＬＣ：　Ｒ，ｏ＝　０．８９　１スポット参考例３ ｈ−ＰＴＨ（４６−，８４）　：　Ｈ−ＡＩａ７ＧＩｙ
−８ｅｔ　−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ　　　Ａｒｇ　　
　　Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ　　−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｖ
ａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−８ｅｒ　　−Ｈｌｓ　
　−Ｇｌｕ　−Ｌｙｓ　　　　Ｓｅｒ　　　　Ｌｅｕ　
　　Ｇｌｙ　　　Ｇｌｕ　−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−
Ａｌａ−Ａｓｐ−＋−Ｖａｔ　　−Ａｓｐ　−Ｖａｌ　
　−Ｌｅｕ　　−Ｔｈｒ　　−Ｌｙｓ−Ａｌａ　　＝　
　Ｌｙｓ　　−Ｓｅｒ　　−Ｇｌ　ｎ　−ＯＴＩの製造
例。 （１）　　　Ｐ　　（４９−５０）：　　ｎ０ｃ−Ｇｉ
ｎ　　　Ａｒｇ　　（Ｔｏｓ　　）　　−ＯＭｅ　［４
０］について。 Ｈ−Ａｒｇ　　（Ｔｏｓ　　）　　　ＯＭｅ　　−ＨＣ
ｌ　１１．３７　　タ　（８０％Ｍ　）とＢＯＣ−Ｇｉ
ｎ　−ＯＮＰ　１３．２１　ｆ　（１，２倍Ｍ）ｆ　Ｄ
ＭＦ　２００１ｎ！、に溶かし、０℃に冷却下ＮＭＭで
ｐＨ７に調節した後、−夜攪拌した。反応後、ＤＭＦを
減圧上留去し、残渣をクロロホルムに溶かした後、５チ
重曹水で３回、ＩＮ塩酸で２回、水で３回洗浄した。ク
ロロホルム層を無水芒硝で乾燥し、クロロホルムで充填
したシリカゲルのカラムでクロマトグラフィーを行い、
クロロホルム−エタノール−酢酸エチルで流し、目的物
が溶出し始めるとクロロホルム−エタノール−酢酸エチ
ル（ｉ：ｔ：ｔ）で溶出した。相当する区分を集めて減
圧濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、０℃に冷却下
へキサンを加えて結晶化させて〔４０〕を得た。収量１
］、８６ｆ、　　融点；１ｏ３〜１０７℃ （２）　　Ｐ　（４８−５０）　：　ＢＯＣ−８ｅｒ　
（Ｂｚｌ、）　　Ｇｉｎ　＝Ａｒｇ　（ＴｏｌＩ）　−
ＯＭｅ　［４１］について。 ［４０）　９．８９　ｆ　（１６，５ｍＭ　）にＴＦＡ
　５０ｍ１！を加え室温で２０分間攪拌した後、ＴＦＡ
ｆ減圧下留去した。 残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物をＦ取し、ＤＭＦ
　５０　ｍｅに溶かした。この溶液にＴ（ＯＢＴ　３．
２４１ｉ’（１，４５倍Ｍ）、ＢＯＣ−Ｓｅｒ　（Ｉｌ
ｚ＋　）　−（ＨＩ　７．０７２（１，４５倍Ｍ）およ
びＷＳＣＩ　４．８９　ｍｌ　（１，４５倍Ｍ）を加え
、室温で一夜攪拌した。反応後、ＤＭＦ’ｉ減圧下留去
し、残渣を酢酸エチル８００ｍＡに溶かした後、５φ重
曹、ＩＮ塩酸、水の順に洗浄した。酢酸エチル層を無水
芒硝で乾燥後、減圧濃縮し、残渣を酢酸エチル−エーテ
ルから結晶化を２回行い、［４１］　１０．０　？　（
収率８１．０％）を得之。 融点；９７〜１０２℃ 元素分析ＣＣ３４１ＬｏＯ＋ｏＫｒ　Ｓ”　１　／　２
　Ｈ２Ｏとして〕Ｃ係　　　　Ｈ係　　　　　Ｎチ 測定値　　５４，０７　　６．９０　　１３．２９計算
値　　５３．９５　　６．６６　　１３．００（３）　
　　Ｐ　（４６５０）　　：　　ＢＯＣ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｙ−８ｅｒ　　（Ｂｚ；１）−Ｇｌｎ　−Ａｒｇ　（Ｔ
ｏｓ　）　−０Ｍｅ　［４２］について。 ［４１］　９．７２　ｆ／　（１３ｍＭ）にＴＦＡ　５
０　ｍｅを加え、室温で３０分間攪拌した。反応後、Ｔ
ＦＡ？減圧下減圧表し、残渣にエーテルを加えた。生じ
た沈澱物を戸数し、ＤＭＦ　１００−に溶かし、この溶
液にＢＯＣ−Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−ＯＨ３，８４？　（
１，２倍Ｍ）、ＨＯＢＴ　２．１１　ＳＦ　（１，２倍
Ｍ）およびＷ３ＣＩ　２．８５　ｔｍ（１，２倍Ｍ）を
加え、室温で２日間攪拌した。 反応後、ＤＭＦを減圧上留去し、残渣を酢酸エチル２０
０−に溶かした後、水洗した。無水芒硝で乾燥し、減圧
濃縮した後、残渣をエタノール−エーテルで２回結晶化
して［４２］　ｒｏ、４６ｙ　（収率９１．９％）′ｆ
ｒ得た。 融点：　１５４−１５７℃ 元素分析ＣＣ３９Ｈ５７０１２ＮＯＳとして〕Ｃ％　　
　　Ｉ（％　　　　　Ｎ多 側定値　　５３．２１　　６．９０　　１４．３８計算
値　　５３．４７　　６．５６　　１４．３９（４）　
　　Ｐ　　（４６５０）：　　］（］ＱＣ−Ａｌａ−Ｇ
ｌｙ−８ｅｔ　　Ｂｚｌ　　）　　　　Ｇｉｎ　　　Ａ
ｒｇ　　（Ｔｏｓ　　）　　ＮＨＮＨ，。 〔４３〕について。 ［４２］　９．６４９　（１１ｍＭ　）　ｆエタノール
５０ｍｅに溶かし、これに５０　％　ＮＴ（２ＮＴＴ２
６．４　ｍｅ　’３−加え室温で一夜攪拌した。反応液
にエタノール１００ｍ１！全加え、不溶物不−Ｆ取した
。こｆＬヲエタノール１００−に懸濁し、加熱し、冷却
後、濾過して［４８：］　９．０２２（収率９３．６係
）不・得た。 融点；１７８〜１８０℃ 元素分析ＣＣ３：ｌＴ１５７０１１　ＮＩ　Ｉ　Ｓとし
て〕Ｃ係　　Ｈ係　　　Ｎチ 測定値　　５２．１３　　６．８６　　１６．６５計算
値　　５２，１０　　６．５６　　１７．５９（５）　
　Ｐ　（４６−５４）　：　ＢＯＣ−Ａｌａ−Ｇｌｙ＝
Ｓｅｒ（Ｂｚｌ　）−Ｇｌｎ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ　）−
Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ１）−
Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃｔ）−ＰＡＣＣ４４：）について。 参考例２に記載の［８７］　＆０４　ｆ／　（６，６ｍ
Ｍ　）にＴＦＡ　４０　ｍｅ　ｆ加え、室温で２０分間
攪拌した後、ＴＦＡを減圧上留去した。残渣にエーテル
を加え、生じた沈澱物を戸数して粗製のＨＰｒｏ−Ａｒ
ｇ（Ｔｏｓ）−Ｔ、ｙｓ（Ｚ　　Ｃｔ）　　Ｌｙｓ（Ｚ
　　Ｃ２）−ＰＡＣ−ＴＦＡを得た。　　　 一方、［：４８　］　６．８８９　（７，８ｍＭ　）　
ｆ　ＤＭＦ　８０　ｍｌに溶かし、これに−５０℃に冷
却下４．８２　Ｎ塩化水素のジオキサン溶液５．４２　
ｍ／！　（２３，４ｍＭ　）とインアミルニトリル１．
１０　ｍｌ　（＆０９　ｍＭ　）を加えた後、−２０℃
で２０分間攪拌した。次いで上記Ｈ−Ｐｒ　。 −Ａｒｇ　（Ｔｏｓ　）　　Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ１）−Ｐ
ＡＣ＠ＴＦＡを加え、−３５℃でＢｔｓ　Ｎ　５−４６
　ｔｎｌ　（８９ｍＭ　）を加えた後、０〜５℃で２日
間攪拌した。反応後、ＤＭＦ　ｆ減圧下留去し、残渣を
クロロホルム３ｏ。 −に溶かした後、５係１重曹水、ＩＮ塩酸、水の順で洗
浄した。クロロホルム層を無水芒硝で乾燥し、減圧濃縮
し、エタノール−エーテルおよびクロロホルム−エーテ
ルにより精製して〔４４〕１３．４２　ｆ／　ｆ得た。 ＴＬＣ：　ｎｔ　＝　０．６４　Ｃクロロポル１１−メ
タノール−酢酸（８３：　１８　：　３．５　）　］元
素分析［Ｃｎｖ■■ｌ２ｏＯ２２Ｎ１ｓＣ１ｔ　Ｓ・３
Ｈ２０として〕Ｃチ　　Ｈ係　　　Ｎチ 測定値　　５４．６８　　６．２１　　１２．７２計算
値　　５４，７２　　６．２９　　１２．４９アミノ酸
分析：　Ｓｅｒ　０．６５　（１）、Ｇｌｕ　１．１０
　（１）、Ｉ’ｒ。 １　（１）　、Ｇｌｙ　１．０２　（１）　、Ａｌａ　
１．００　（１）、■、ｙｓ　１．８９　（２）、Ａｒ
ｇ２．０２　（２） （６）　　Ｐ−（４６−５４）：ＢＯＣ−Ａｌａ−Ｇｌ
ｙ　　５ｅｒ（Ｂｚｌ　　）−Ｇｌｎ−Ａｒｇ　　（Ｔ
ａ２　）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）−Ｌｙｓ　（Ｚ
−Ｃｔ）−Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃｔ）−ＯＨ［４５］につい
て。 亜鉛末１５２／酢酸Ｓｏｍｅに［：４４　］　ｓ、ａｘ
　ｙの酢酸４０コ溶液を加え、室温で２時間攪拌した。 反応後、亜鉛末を戸別し、Ｐ液を減圧濃縮した。 残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物をエタノール−エ
ーテルで１回、エタノール−酢酸エチルで２回精製して
［４５）　４．４１　ｙ　（収率８７．７チ）を得た。 ＴＬＣ：　　Ｒｆ４＝　　０．２２ 元素分析〔Ｃ３４Ｈ７，４０２２Ｎ１８Ｓ２Ｃ４・２Ｈ
２０として〕Ｃ係　　　　Ｈ係　　　　Ｎチ 測定値　　５２，８９　　６．１６　　１３．２２計算
値　　５３．１２　　６．２６　　１３．２８アミノ酸
分析：　Ｓｅｒ　Ｏ，８８（１）、Ｇｉｎ　１．１１　
（１）、Ｐｒ。 １、ｏ２（１）　、ＧＬｙ　１．０２　（１）、Ａｌａ
　１（１）、Ｌｙｓ　　２．００　（２）、Ａｒｇ２．
０９　（２） （６）　　　Ｐ　（４６８４）　　；　　ＢＯＣ−Ａｈ
ａ−Ｇｌｙ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｇｌｎ−Ａｒｇ　　（
Ｔｏｓ　　）　−Ｐｒｏ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ　　）Ｌｙ
ｓ　　（Ｚ　　　Ｃ１’）−Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃ７）−
Ｇｌｕ（０Ｉｌｚｌ　　）−Ａｓｐ　　（０Ｂｚｌ）−
Ａｓｎ　−Ｖａｔ−Ｌｅｕ−Ｖａｔ　　−Ｇｌｕ　　（
０Ｔｌｚ＋　　）−８ｅｒ　　（Ｂｚｌ　　）　　　Ｈ
４ｓ　　−Ｇｌｕ　（０Ｂｚｌ　　）−Ｌｙｓ　　（Ｚ
−Ｔｅ３）−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ　　　
Ｇｌｕ　　（０Ｂｚｌ　　）−Ａｌａ−−Ａｓｐ（０Ｂ
ｚｌ　　）　−Ｌｙｓ　　（Ｚ　−ＣＬ、、’ｊ−Ａｌ
ａ−Ａｓｐ（ＯＩ＋７．１　　）　　−Ｖａｌ　　　Ａ
ｓｐ　　（０Ｂｚｌ　　）　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ−Ｔｈ
ｒ　　（Ｂｚｌ　　）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ　　　ＣＬ　
）−Ａｌａ−Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃｔ）−８ｅｒ　　（Ｂ
ｚｌ　　）−Ｇｉｎ　−０Ｂｚｌ　［１４ら］１；つぃ
マ。 ＴＦＡ　８０　ｍｌを加え、室温で６０分間投押した後
、ＴＦＡ　ｆ減圧上留去した。残渣にエーテルを加え、
生じた沈澱物ｆ　ＤＭＦ　１６０　ｍｅとＮＭＰ　１６
０　ｍｅの混液に溶かし、これに０℃に冷却下Ｃ４５：
］　４．２８　ｙ（１，１５倍Ｍ　）、ｌｌ０Ｉ３Ｔ　
Ｏ，８２ｆ　（１，２倍Ｍ）およびＷＳＣＩ　０．４４
　ｍｌ、（１，２倍Ｍ）？加えた後、室温で２日間攪拌
した。反応後ＤＭＦ　ｉ減圧上留去し、残渣に氷水を加
えた後、生じた沈澱物を沖取した。 これにメタノール２００ｍ／ヲ加えて加熱し、冷却後不
溶物全戸数する操作を２回繰り返して〔４６〕１２．１
７　？　（収率８７．４係）を得た。 （７）　　ｈ　−ＰＴ）（（４６−８４）無水Ｔ（Ｆ　
６０　ｍｌ　１２０℃に冷却下［４６］　４．１８　ｙ
（０，６ｍＭ　）とアニソール１０ｍ１ｆｆ加え、６０
分間攪拌した。反応後、ＨＦ　ｉ減圧上留去し、残渣に
エーテルを加えた。生じた沈澱物を集め、ｔｏ％酢酸５
０−に溶かし、ダウエックス×１のカラム（アセテート
型、２．５　Ｘ　２４　ｃｍ　’）に通じ、流出液を凍
結乾燥して粗生成物２．８２５’　ｉ得た。 これｉ８Ｍ尿素水溶液（ｐＨ９，０）　５０　ｍｌに溶
がし、６０分間室温で放置した。次いでこの溶液を８Ｍ
尿素水溶液で充填したＣＭ−セルロースの力濃度勾配に
よる溶出を行った。溶出液ハフ、５−づつ分画し、各分
画ｉｊ　Ｆｏｌｉｎ　−Ｌｏｗｒｙ法（５００ｎｍ　）
により測定して１〜２２本目の区分ｃ０．２３〜４５本
目の区分Ｃ２，４６〜８０本目の区分ｃ３、および８１
〜１２０本目の区分Ｃ４の溶出液を得た。各区分をセフ
ァデックスＬＨ−２０のカラムに通して脱塩した。区分
Ｃ０ば３．ＯＸ　１２０　ｃｍＯカラムに適し、流出液
を７゜５−づつ分画し、２８〜４２本目の区分Ｃ，Ｌ’
ｉ得た。区分ｃ２は３．４　Ｘ　１２０　ｃｍに達し、
流出液ｆ　７．６　ｍｅづつ分画し、３３〜４０本目の
区分Ｃ２Ｌ、および４１〜６２本目の区分Ｃ２Ｌ２を得
た。区分Ｃ３ｆｌ　３．ＯＸ　１２０　ｔｍのカラムに
通し、流出液を６、Ｏｒｎｌ、づつ分画し、３１〜４０
本目の区分Ｃ３Ｌ、および４１〜５１本目の区分Ｃ３Ｌ
２に得た。区分ｃ４は、３．４　Ｘ　１２０　ｔ：ｍの
カラムに通し、流出液を７５−づつ分画し、３５〜４８
本目の区分Ｃ，Ｔ、を得た。各区分を凍結乾燥してＣ，
Ｔ、区分３１２ｍグ、ｃ２ｔ、区分１４２．３７＃ｇ、
”２℃２区分１３８０７Ｖ、Ｃ３Ｉ、１区分１０４７１
９、Ｃ３Ｉ２区分５１０＋＋ｙおよびＣ４Ｉ区分１３０
７９ｉ得た。 前記のＣ２℃２区分１８８０７ｑ　ｉ　Ｏ，Ｉ　Ｎ酢酸
１′３ｔｎｅに溶かし、ＣＭ−セルロースのカラム（４
，３Ｘ　（ｉ、０ｃｔｎ）にチャージし、０．０１　Ｍ
酢酸アンモニウム水溶液（、ｐＪ７４．５　）　５００
　ｍＩ！、−０，８Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ４
，５）　５００　ｍｌ！の直線型濃度勾配による溶出を
行った。溶出液ｆｉ　７．６　ｍｅづつ分画し、４０〜
５０本目の区分Ｃ２Ｌ２　　ＣＩおよび５３〜７７本目
の区分Ｃ２Ｉ−！−Ｃ２に得た。各区分をセファデック
スＬＨ−２０のカラムに通して脱塩しまた。区分Ｃ２Ｌ
２　　Ｃｕ；Ｊ：２．９　Ｘ−１２０ｃｍのカラムに通
し、流出液を８．０ゴづつ分画し、２６〜３０本目の区
分ｃ２１．！−Ｃ，Ｌ、オ、１：び８１〜８９本目０区
分Ｃ２Ｌ２　　ＣＩ　Ｌ！全得た。区分Ｃ２Ｌ２Ｃ２は
３．４　Ｘ　１２０　ｃｍのカラムに通し、流出液ｆ　
８．Ｏｍｌづつ分画し、３４〜４４本目の区分”２　Ｉ
Ｊ２　　Ｃ２Ｌ＋および４５〜５３本目の区分Ｃ２Ｌ２
−Ｃ２Ｌ２ヲ得た。各゛区分を凍結乾燥して−ｒ、２−
　ｃ、　ｒ、１区分７９．０ｑ、Ｃ，、Ｌ２−　Ｃ，Ｌ
２区分４５５■、Ｃ２ＴＪ２−Ｃ２ＬＩ区分１５７．３
ＷおよびＣ２Ｌ２　　”２５２区分５５１、．７ｍｇを
得た。 Ｃ２Ｌ２−Ｃ２４区分のアミノ酸分析；　Ａｓｐ　４．
６５　（ｓ）、Ｔｈｒ　０．９７　（ｔ）、Ｓｅｒ　３
．４７　（４）、Ｑｌｕ　５．９９　（６）、Ｐｒｏ　
Ｏ，９，３（１）、Ｇｌｙ　１．９６　（２）、Ａｌａ
　４（４）、ｖａｌ　３．９７　（４）、Ｌｅｕ　３．
０１　（８）、Ｌｙｅ　６．１３　（６）、Ｈｉｓ　Ｏ
，！Ｊａ　（１）、Ａｒｇ　ｔ、９６　（２）前記の”
２　’ｉ　　”２　Ｌ２区分’（ｚ　Ｏ，Ｉ　Ｎ酢酸５
　ｍｌ、に溶かし、ＣＭ−セルロースのカラム（４，２
Ｘ　７．Ｏｃｍ　）にチャージし、０．０１Ｍ酢酸アン
モニウム水溶液（ｐＨ４，５）　３００　ｍｅ　−０，
３Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ４，５）の直線型濃
度包配による溶出を行った。 溶出液は８．Ｏｍｅづつ分画し、３９〜４５本目の区分
Ｃ２１，２−Ｃ２Ｉ、！−ｃを得た。この区分をセファ
デックスＬＨ−２０のカラム（２，９Ｘ　１２０　ｃｍ
　）のカラムに通して脱塩した。流出液ｆ８０　ｍｌづ
つ分画し、２４〜３０本目の区分ｃ２Ｌ２〒ｃ２Ｌ２−
ｃＬ１１．３１〜３５本目の区分”２　Ｌ２　　Ｃ２Ｌ
２＝’ｃＩ、！　および３６〜３９本目の区分ｃ２Ｉ、
２”２Ｌ２　　”Ｌ３に得た。 各区分を凍結乾燥しくてＣ２Ｉう−ｃ！Ｌ２ＣＬ２区分
２００＋＋ｙおよびＣ２Ｌ２−Ｃ２Ｌ２−ＣＬ１区分［
ｈ　−ＰＴＨ（４６−８４）　１９４．９　ｍｇを得た
。 ＴＬＣ；　　ＲｆＱ＝　　０．７６ アミノ酸分析：　Ａｓｐ　４．８６　（５）、Ｔｈｒ　
Ｏ，９９（１）、５ｅｔ３．５　（４）、Ｇａｌ＋　　
６．１７　（６）　、Ｐｒｏ　０．９６　（１）　、Ｇ
１７１．９７　（２）、Ａｌａ４　　Ｖａｔ　　４．０
２　（４）、Ｌｅｕ　　２．９８　（３）、Ｌｙｓ　６
．０５　（６）、Ｔｈ１ｓＯ，９０（１）、Ａｒｇ　　
１．８７　（２）参考例４ ［Ｔｙｒ　］　］ｈ−ＰＴＩ−Ｉ（４６８４’）　：　
Ｔ−Ｔ−Ｔｙｒ−ＡｌａＧａｙ　−５ｅｒ−Ｇｌｎ　−
Ａｒｇ−ｐＰｒｏ　−Ａｒｇ−Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ−Ｇｌ
ｕ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ　−Ｇｌ
ｕ　　Ｓｅｒ　　Ｔ（ｉｓ　−Ｇｌｏ−ＬｙｌＩ−Ｓｅ
ｒ　−Ｌｅｕ　−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｌ
ｙｅ−Ａｌａ−Ａｓｐ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ　−Ｍａｌ
−Ｌｅｕ　−Ｔｈｒ　−Ｌｙａ　−Ａｌａ　−Ｌｙｓ　
−Ｓｅｔ　−Ｇｌｎ　−ＯＩＴの製造例。 （１）　　Ｐ　（４５−８４）　；　ＢＯｃ−Ｔｙｒ　
（Ｂｙ、１−　Ｃ４’）　−Ａｌａ　−Ｇｌｙ　　Ｓｅ
ｒ　（Ｂｚｌ　）　−Ｇｌｎ　−Ａｒｇ（Ｔｏｓ　）　
　Ｐｒｄ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ　）−Ｌｙｓ　（Ｚ　−Ｃ
１）　−Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ１）−Ｇｌｕ　（０ｆｌｚｌ
　）　−Ａｓｐ　（０Ｂｚｌ　）　　Ａｓｎ−Ｖａｌ　
−Ｔ、ｅｕ−Ｖａｌ　−ＣＬ　）　−Ａｌａ　−Ａｓｐ
　（０Ｂｚｌ　　）　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ（０Ｔ３ｚｌ
　　）−Ｖａｔ　　　Ｌｅｕ　　　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ
　　）　　−Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃ１’）　　　Ａｌａ−Ｌｙ
ｌＩ（Ｚ−Ｃ１）−８ｅｒ（Ｔｌｚｌ　）　−Ｇｌｎ　
　０Ｂｚｌ　［４７）について。 参考例３に記載の［４６］　６．２７　？　（０，９ｍ
Ｍ　’）にＴＦＡ　６０　ｍｅを加え、室温で６０分間
攪拌した。反応後、ＴＦＡｆｆ減圧下留去し、残渣にエ
ーテルを加える。生じた沈澱物音戸数して脱ＢＯＣ化物
６．８０７を得た。 」二記脱ＢＯＣ化物２１０グ（０，８ｍＭ　）をＤＭＦ
８５ｄとＮＭＰ　８５　ｍｅの混液に溶かし、これに０
℃に冷却下ＢＯｃ　−Ｔｙｒ　（Ｂｙ、１−　Ｃ４’）
　−〇ＨＯ，１６ｆｉｌ’　（１，２倍Ｍ　）　、Ｔｌ
０ＢＴ　Ｏ，０５１７’　（，１，２倍Ｍ）およびｗｓ
ｃｒｏ、０７　ｍｅ　（１，２倍Ｍ）Ｔｈ加えた後、室
温で一夜攪拌した。反応後、ＤＭＦ、ｉ減圧上留去し、
残渣に氷水を加え、生じた沈澱物を戸数して〔４７〕２
．００　ｙを得た。 （２）　　［Ｔｙｒ　］　　ｈ　−ＰＴＨ（４６８４）
無水Ｔ（Ｆ　２０　ｍｅに０℃に冷却下［４７：］　２
．００７（０，２７ｍＭ　）およびアニソール１．Ｏｍ
ｌ　全加え、６０分間攪拌した。反応後、Ｉ（Ｆを減圧
上留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱物を集
め、０、Ｉ　Ｎ酢酸２０ｍｅに溶かし、ダウエックス×
１のカラム（アセテート型、２．５　ｘ　１５　ｃｍ　
”）に通じ、流出液を凍結乾燥して粗生成物１．３７５
’　ｆ、ｆ得た。 こｆ＋、全８Ｍ尿素水溶液（ｐＨ９，５）５０　ｍｅに
溶かし、室温で６０分間放置した。次いでこの溶液を８
Ｍ尿素水溶液で充填したＣＭ−セルロースのカラム（４
，Ｂ　ｘ　８．Ｏｃｔｎ）にチャージし、０．０１　Ｍ
ｆ！＋：酸アンモニウム水溶液（ｐＴＴ４．５　）　４
００　ｍｅ　〜０．８　Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐ
ＴＴ　４．５　）　４００　ｍｅのＷｆ線型濃度勾配に
よる溶出を行った。溶出液は６５イづつ分画し、各分画
はＦｏｌｉｎ　−Ｌｏｗｒｙ法（５００ｎｍ）により？
１１１１定して３０−４３本口の区分Ｃ４，５１〜６８
本目の区分Ｃ２，６９〜８３本目の区分Ｃ３および８４
〜１００木目の区分Ｃ４を得た。各区分をセファデック
スＴ、ＴＩ　−２０のカラムに通して脱塩した。区分Ｃ
８は３．４　Ｘ　１２０　ｎｎのカラムに通し、流出液
ｆ　７．５　ｍｌづつ分画し、２５〜４１本目の区分Ｃ
，Ｌを得る区分Ｃ２ば３．ＯＸ　１２０　ｃｍのカラム
に通し、流出液を７．５　ｍｌづつ分画し、２５〜３６
本目の区分Ｃ２Ｌを得た。区分Ｃ３は２．９　Ｘ　１２
０　ｃｔｒ＋のカラムに通し、流出液’ｚ８．０ｍ１．
づつ分画し、２４〜２７本目の区分Ｃ３ＬＩおよび２８
〜３８本目の区分Ｃ５ＸＪ２を得た。区分Ｃ１は２，９
　Ｘ　９５　ｃｒｎのカラムに通し、流出液ｆ　７．６
　ｍｅづつ分１面し、２０〜２５本目の区分Ｃ４Ｌ＋お
よび２６〜３０本目の区分Ｃ４Ｌ２を得た。 各区分全凍結乾燥してＣ，Ｌ区分５２１．６■、ｃ２Ｌ
区分２８０２　ｆｆ、０３Ｉ、１区分４１．８　ｗＩ％
　Ｃ３”２区分２２２．４■、Ｃ４Ｌ＋区分７４．３■
およびＣ４ＴＪ２区分４８９ｑを得た。 前記のＣ３ｂ区分子　Ｏ，Ｉ　Ｎ酢酸８　ｍｅに溶かし
、ＣＭ−セルロースのカラム（２，Ｉ　Ｘ　２５　ｃｍ
　）にチャージし、０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液
（ｐＨ４，５）　３００１ｎ！、〜０．８　Ｍ酢酸アン
モニウム水溶液（ｐＨ４，５）　ｇｏｏ　ｍｅの直線型
濃度勾配による溶出を行った。溶出液は８．０　ｍｌ！
づつ分画し、３０〜３６本目の区分Ｃ２Ｌ−Ｃを得た。 この区分をセファラムに通して脱塩した。流出液ｆ　８
．Ｏｔｎｌづつ分画し、２０〜２９本目の区分を凍結乾
燥して［Ｔｙｒ　］−ｈ　　−ＰＴＨ（４６−８４）　
　　１６３．　３　７１１１／　　ｆ、Ｈイ４！　　ｆ
ｃ　　。 ＴＬＣ；　Ｒｆ、＝　０．７５ アミノ酸分析；　Ａｓｐ　４．８６　（５）、ＴＩ＋ｒ
　１．０２　（１）、５ｅｒ３．５１　（４）、Ｇｌｕ
　６．０５　（６）、Ｐｒｏ　０．９３　（１）、Ｇｌ
ｙ　１．９０　（２）、Ａｌａ　４　（４）、Ｖａｌ　
１１．ｏｏ　（ＩＩ）、Ｌｅｕ　２．９８　（３）、Ｔ
ｙｒ　Ｏ，８８（１）、Ｌｙｓ　６．０２　（６）、旧
ｓ　Ｏ，８６（１）、Ａｒｇ　１．８１　（２）参考例
５ ［Ｃｙｓ（Ａｃｍ）　〕−ｈ　　ＰＴＨ（４６８４）　
；　］（−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）　−Ａｌａ　−Ｇｌｙ　−
Ｓｅｒ　−Ｇｌｎ　−Ａｒｇ　−Ｐｒｏ　−Ａｒｇ　−
Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｕ　−Ａａｐ　−Ａｓｎ　−
Ｖａｔ−Ｌｅｕ　　−Ｖａｌ　　−Ｇｌｕ　　−Ｓｅｒ
　　−１（ｉｓ　　−Ｇｌｕ　　　　Ｌｙｓ　　−８ｅ
ｒ　−Ｌｅｕ　−Ｇａｙ　−Ｇｌｕ　−Ａｈａ−Ａｓｐ
　−Ｌｙｓ　−Ａｌａ　−Ａｓｐ　−Ｖａｌ　−Ａｓｐ
　−Ｖａｌ−Ｌｅａ　　Ｔｈｒ　−Ｌｙｓ−Ａｌａ　−
Ｌｙｓ−８ｅｒ　−Ｇｉｎ　−ＯＨの製造例。 （１）　　Ｐ　（４５８４）　；　ＢＯＣＣｙｓ（Ａｃ
ｍ）　−Ａａ　−Ｇｌｙ−８ｅｒ　（Ｂｚｌ　）　　Ｇ
ｌｎ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ　）−Ｐｒ。 −Ａｒｇ　（Ｔｏｓ　）　　Ｌｙｓ　（Ｚ−Ｃ４）−Ｌ
ｙｓ（Ｚ−Ｃ１）−Ｇｌｕ　　（０Ｂｚｌ　　）−Ａｓ
ｐ　　（０Ｂｚｌ　　’）−Ａｓｎ−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ
−Ｖａｔ−Ｇｌｕ　　（０ＢＺＩ　　）　　−８ｅｒ　
　（Ｂｚｌ　　）−Ｈ４ｓ−Ｇｌｕ　　（０Ｂｚｌ　　
）−Ｌｙｇ（Ｚ−Ｃｔ）−８ｅｔ　　（Ｂｚｌ　　）−
Ｌｅｕ−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｆｆｉａ−
Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）　　　Ｌｙｓ（Ｚ−Ｃ１）−Ａｌａ
−Ａｓｐ　　（０Ｂｚｌ　　）−ｖａｌ　−Ａｓｐ　　
（０Ｂｚｌ　　）−Ｖａｔ　−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ　　（Ｂ
ｚｌ　　）−Ｌｙｓ　　（Ｚ−Ｃｔ）−Ａｌａ　　　Ｌ
ｙｓ　（Ｚ−Ｃ２）−８ｅｒ　（Ｂｚｌ　）−Ｇｉｎ−
ＯＢＺＩ　［４８］について０ 参考例４で得た残りの脱ＢＯＣ化物４．２０　！　（０
，６ｍＭ　）　ｆ　ＤＭＦ　７０−とＮＭＰ　７０１ｎ
Ｉ！の混液に溶かし、これに０℃に冷却下ＨＯＢＴ　０
１１０　ｆ　（１２倍Ｍ）、ＢＯＣＣｙｓ　（Ａｃｍ　
）　−ＯＨＯ，２０Ｖ　（１，２倍Ｍ）およびＷＳＣＩ
　０．１８　ｔｄ　（１，２倍Ｍ）を加えた後、室温で
一夜攪拌した。反応後、ＤＭＦ’ｉｉ−減圧上留去し、
残渣に氷水を加え、生じた沈殿物全集めた。こｎｆエタ
ノールに懸濁して加熱し、冷却した後、不溶物をＦ取し
た。この操作を２回繰り返して［４ｇ］　４．０７９　
（収率９５．０チ）全得た。 （２）　　（Ｃｙｓ　（Ａｃｍ　）　］　　ｈ　　ＰＴ
Ｔ（（４６−８４）無水ＨＦ　６０−に０℃に冷却下［
４８）　４．０Ｏｆ　（０，５７ｍＭ）およびアニンー
ル１０ｍｅｋ加え、６０分間攪拌した。反応後、ＩＩＦ
を減圧上留去し、残渣にエーテルを加えた。生じた沈澱
物を集め、２０チ酢酸４０ｍｅに溶かし、ダウエックス
×１のカラム（アセテート型、２．８　Ｘ　３５　ｃｍ
　”）に通じ、流出液を凍結乾燥した。これを８Ｍ尿素
水溶液５０　ｍｌに溶かし、アンモニア水でｐＨ９，０
に調節した後、８０分間放置した。次いでこの溶液’（
ｉ−８Ｍ尿素水溶液で充填したＣＭ−セルロース（３，
４Ｘ　３５　ｔｙｎ　）　　にチャージし、０．０１Ｍ
酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ４，５’）　７００　ｍ
ｌ　−０，８Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（ｐＨ４，５）
７００−の濃度勾配による溶出を行った。溶出液は８．
Ｏｍｅづつ分画し、各分画はＦｏｌｉｎ　−Ｌｏｗｒｙ
法（５００ｎｍ　）にエリ測定して２５〜３５本目の区
分ＣＩ、３６〜４５本目の区分Ｃ２および４６〜８４本
目の区分Ｃｓｋ得た。各区分をセファデックスＬＨ，−
２０のカラムに通して脱塩した。区分Ｃ２は３．ＯＸ　
１２０　ｃｍのカラムに通し、流出液ｆ　８．Ｏｍｅづ
つ分画し、２７〜３３本目の区分Ｃ２■、１および３４
〜４０本目の区分”２Ｌ２ｆ得た。 区分Ｃ３げ３．４　Ｘ　１２ＯＬ−ｒｎＯカラムに通し
、流出波音８．Ｏｍｅづつ分画し、３５〜４７本目の区
分Ｃ３Ｌ。 および４８〜５３本目の区分Ｃ５Ｌ２に得た。各区分を
凍結乾燥してＣ２Ｌ、区分１４８Ｔｎｇ、Ｃ２Ｌ２区分
６２０■、Ｃ３Ｌ１区分２１２７＃ｇおよびＣ３Ｌ２区
分６０５ｍ＠全得た。 前記のＣ２Ｌ２区分を０．Ｉ　Ｎ酢酸６献に溶かし、こ
れ呑−ＣＭ−セルロースのカラム（５，０×１２ｃｒｎ
）にチャージし、０．０１Ｍ酢酸アンモニウム水溶液（
ｐＨ４，５）　４００　ｍｌ　〜ＯＪ　Ｍ酢酸アンモニ
ウム水溶液（ｐＴ（４，５）４００　ｍｌの直線型濃度
勾配による溶出を行い、溶出液は６．０ｒｎｌづつ分画
し、１１０〜１２６本目の区分Ｃ２Ｌ２−Ｃを得た。こ
れをセファデックスＬＨ−２０のカラム（４，Ｏｘ　１
２０　ｃｍ　）に通して脱塩した。流出液は８．０コづ
つ分画し、３８〜５４木目の区分ｃ２Ｌ２−’ｃｒ、’
＞得た。この区分を凍結乾燥して（Ｃｙｓ　（Ａｃｍ　
）　）　−ｈ−ＰｒＨ（４６−８４）　２４６．８■を
得た。 ＴＬＣ；　　Ｒｆ９＝　０．７４ アミノ酸分析：　Ａｓｐ　４．９１　（５）、Ｔｈｒ　
Ｏ，９８（１）、５ｃｒ３．５０　（１）、Ｇｌｕ　６
旧（６）　、Ｐｒｏ　０．９８　（１）、Ｇｌｙｌ、９
８　（２）、Ａｌａ　４　（４）、ｖａｔ　４．０４　
（４）、ｃｙｓ　Ｏ，４２（ｏ、５）、Ｌｅｕ　２．！
１３０（３）、Ｌｙｓ　５．９９　（６）、Ｈｉｓ　Ｏ
，８７（１）、Ａｒｇ　１．８７　（２）参考例６ 〔Ｃｙｓ　］　　ｈ　　ＰＴ■Ｔ　（４６８４）；　Ｈ
Ｃｙｓ　−Ａｌａ　　Ｇｌｙ−８ｅｒ−Ｇｌｎ　　Ａｒ
ｇ　　Ｐｒｏ　−Ａｒｇ　−Ｌｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌ
ｕ　−Ａｓｐ　−Ａｓｎ　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｖａ
ｌ−Ｇｌｕ　　Ｓｅｒ　　１１ｉｓ、　Ｇｌｕ　　Ｌｙ
ｓ　　５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓ
ｐ−Ｔ、ｙｓ−ＡｌａムＡｓｐ　−Ｖａｌ　　Ａｓｐ　
−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｔｈｒ　−Ｌｙｇ−Ａｌａ　−
Ｌｙｇ−８ｅｒ　−Ｇｌｎ−ＯＨの製造ｆｉｌ。 参考例５で得’ＩＩ　［Ｃｙｓ　（Ａｃｍ　）ゞ］　−
ｈ　−ＰＴＨ（４６−８４）８８ｑ（０，０２ｍＭ）　
ｆｆ５０％酢７１２２　ｍｅに溶カシ、コｎ　Ｋ　酢酸
ｍ　工水銀５７．２４　ｍＶ　Ｃ０，１８ｍＭ　）を加
えた後、室温で７０分間攪拌した。次いで、β−メルカ
プトエタノール３．４　ｍｌ！　’（ｔ７加え、室温で
２４時間攪拌した。反応液を遠心分離し、」二澄液をセ
ファデックスＬＨ−２０のカラム（３，２Ｘ　４２　ｃ
ｍ　）にチャージし、０．１Ｍ酢酸で溶出した。溶出液
は５−づつ分画し、ニンヒドリン反応陽性の９〜１４本
目の区分金集め、これを凍結乾燥して［Ｃｙｓ　］　−
ｈ−ＰＴＨ（４６−８４）　７６．１■を得た。 ＴＬＣ：　Ｒｆ、＝　０．７３ 尚、本明細書中に記載の略記号は次の意味を有する。 Ｇｌｎ　；　Ｌ−グルタミン Ｓｅｒ；Ｌ−セリン Ｌｙｓ　：　Ｌ−リジン Ａｈａ　：　Ｌ−アラニン Ｔｈｒ　：　Ｌ−スレオニン Ｌｅｕ　：　Ｌ−ロイシン Ｖａｌ　：　Ｌ−バリン Ａｓｐ　：　Ｌ−アスパラギン酸 Ｇｌｕ　：　Ｌ−グルタミン酸 Ｇｌｙ；グリシン Ｈｉｓ；Ｌ−ヒスチジン Ａｓｎ　：　Ｌ−アスパラギン Ａｒｇ　；　Ｌ−アルギニン ｐｒｏ　；　Ｌ−プロリン Ｔｙｒ　；　Ｌ−チロシン Ｃｙｓ　；　Ｌ−システィン ＢＯＣ：ｔ−ブチルオキシカルボニル ＡＯＣ；　ｔ−アミルオキシカルボニルＺ−Ｃ１：ｏ−
クロロベンジルオキシカルボニルＢｚｌ　：ベンジル ＴＯｓ；トシル ＯＭｅ　；メチルエステル ＯＥｔ　：エチルエステル ０Ｂｚｌ　：ベンジルエステル Ｏ８Ｕ　：　Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステルＯ
ＮＰ　；　ｐ−二トロフェニルエステルＰＡＣ：フエナ
シルエステル Ａｃｍ　；アセトアミドメチル ＴｏｓｏＨ；　Ｐ　　ｌ’ルエンスルホン酸ＴＦＡ；ト
リフルオロ酢酸 Ｅｔ３Ｎ；トリエチルアミン ＴＢＡ　：　）リベンジルアミン ＮＭＭ　：　Ｎ−メチルモルホリン １１０ＢＴ　；　１１ヒドロキシベンゾトリアゾール。 ＤＭＦ　；ジメチルホルムアミド ＴＨＦ　；テトラヒドロフラン ＮＭＰ　：　Ｎ−メチル−２−ピロリドンＭｅＯＨ；メ
タノール ＥｔＯＨ：エタノール ＢｕＯＨ；ブタノール エーテル；ジエチルエーテル ＷＳＣＩ　；　Ｎ−エチル、に−３−ジメチルアミンプ
ロピル−カルボジイミド ｒｔｏｎ’ｒ　；　ｔ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
寸た使用した薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）の担体
および展開溶媒は次の通りである。 担体：メルク社製シリカゲルＧ 展開溶媒； １　：　ＣｕＯ２−ＭｅＯＴ（−酢酸　　　（９５：　
ｓ　：　８　）２：　　　　　　　　　　　　　　（８
５：１５：５）３；　　　　　　　　　　　　　（８５
：１０：５）４；（８０：２５：２） ５；ベンゼン−酢酸エチル　　（１：１）６；ベンゼン
−酢酸エチル　　（２：　ｒ）７　：　ＣｕＯ４１−Ｅ
ｔＯＩ−ｒ−酢酸エチル（５：２：５）ｓ；　　　　　
　　　　　　　　　（ＩＯ：１：５）担体；メルク社製
セルロース 展開溶媒： ９　；　ＢｕＯＨ−ピリジン−酢酸−水（２：２：２：
８）ＩＱ　；　ＢｕＯＴ（−ピリジン−酢酸−水（１：
１：１：１

【図面の簡単な説明】

第１図はｈ−ＰＴＨ（５３’　−８４）を抗原として得
ら′ｔ″した抗血清を用いてなる標準曲線、第２図はｈ
　−ＰＴＨ（５１−８４）を抗原としてイｎられた抗１
（１清な用いてなる標準曲線、第３図はｈ　−ＰＴＩＴ
　（４６８４’）を抗原として得られた抗血清を用いて
なる標準曲線、第４図はｎｓＡ　、−［Ｃｙｓ　］　−
ｈ　−ＰＴＨ（４６−８４）全抗原として得られた抗血
清を用いてなる標準曲線、第５図ばｈ−ｐＴｎ　（４６
−８４）を抗原として得うれた抗血清、およびヒト−Ｐ
ＴＨ（１−８４）全周いてなる標準曲線、ｍ６図はｈ　
　ＰＴＩＩ　（４６−８４）全抗原として得られた抗血
清の標準曲線と慢性嘴不全患者血清を試料として同一抗
血清を用いてなる定量曲線、第７図はＢＳＡ−［Ｃｙｓ
　］−ｈ　−ｐＴｎ　（４６−８４）を抗原として得ら
几た抗血清による各種血清の定量結果を示す。 特許出願人　東洋醸造株式会社 代表者　　伊　東　富　士馬 第　　ｉｒＰ１

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　ヒト−ＰＴＨｔ　ｆＣはそのＣ末端フラグメ
   ントのラジオ・イミュノ・アッセイにおいて、抗体とし
   て下記一般式〔Ｉ〕 Ｒ２−Ａｌａ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−Ｇｉｎ−Ａｒｇ−Ｐｒ
   ｏ　−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｙ８−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｓ
   ｎ−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ−Ｍａｌ　　Ｇｌｕ　　５ｅｒ−
   Ｈ４ｓ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ　−８ｅｒ−Ｌｅｕ　　Ｇｌｙ
   　　Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｓｐ−ＬｙＢ−Ａｌａ−Ａｓｐ
   −Ｖａｌ　−Ａｓｐ−Ｍａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ　−Ｌｙ
   ｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−８ｅｔ−Ｇｉｎ−ＯＨ’［１］（
   ただし式中、Ｒ２はＨまたはＨ−Ｒ３−基、Ｒ３はＣｙ
   ｓまたはＴｙｒ基を示す）で表わされるペプチドを用い
   て得らｎる抗体を用いることを特徴とするヒト−ＰＴＨ
   の測定法。
2. （２）抗体が、−がＨ−Ｒ３−基であり、Ｒ３がＣｙｓ
   基である一般式ＣＤで表わさ几るペプチドを用いて得ら
   ｎる抗体である特許請求の範囲第１項記載のヒト−ＰＴ
   Ｈの測定法。
3. （３）　　抗体が、馬がＨ−Ｒ３−基であり、川がＣｙ
   ｓ基である一般式〔Ｉ〕で表わされるペプチド−蛋白質
   結合体を用いて得られる抗体である特許請求の範囲第一
   項または第２項記載のヒｌ−−ＰＴＨの測定法。
4. （４）　　ラジオ・アイソトープ標識体が、一般式〔Ｉ
   〕で表わさｎるペプチドのラジオ・アイソトープ標識体
   である特許請求の範囲ｉ１項・第２項または第３項記載
   のヒ）　−ＰＴＩＩの測定法。
5. （５）　　ラジオ・アイソトープ標識体が、Ｒ２が１（
   −１３基であり、馬がＴｙｒ基である一般式〔Ｉ〕で表
   わされるペプチドのラジオ・アイソトープ標識体である
   特許請求の範囲第１項・第２項・第３項または第４項記
   載のヒ）　−ＰＴＨの測定法。