JPS5828880B2 - 新しいオリゴ糖とその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新しいオリゴ糖である〇−α−Ｄグルコピラ
ノシル＝（１→３）−〇−α−Ｄ−グルコピラノシルー
（ｌ→４）−〇−α−Ｄ−グルコヒラノシルー（１→４
）−Ｄ−グルコース（以下、これを３−０−α−Ｄ−グ
ルコピラノシルマル））リオースと略称する）とその製
造方法に関するものであるう 従来、オリゴ糖は、その結合様式に応じて甘味剤、医薬
品、酵素の検定用基質、醗酵用培地、あるいは種々の薬
品中間体などの用途に、大量に使用されてきた。

しかしながら、現在、純度よく、かつ効率的に製造する
方法が知られているオリゴ糖は限られており、例えば砂
糖、乳糖、マルトース、マルトトリオースなどにすぎな
い。

本発明者等は、新しいオリゴ糖について検討を進めたと
ころ、３−０−α−Ｄ−グルコピラノシルマルトトリオ
ースとその製造方法を見いだし、本発明を完成した。

すなわち、マルトトリオース及び若干のマルトテトラオ
ースがα−１・３グルコシド結合で反復重合した構造を
有するエルシナン（例えば、特開昭５３−８５００号公
報参照）をα−アミラーゼ（Ｅ、Ｃ０３，２，１，１）
で加水分解することによって生成するオリゴ糖が新しい
四糖３−〇−α−Ｄ−グルコピラノシルマルトトリオー
スであることを見いだしたのである。

この３−０−α−Ｄ−グルコピラノシルマルトトリオー
スは、化学的方法によっても、生化学的方法によっても
製造することができる。

容易に製造するには生化学的方法、特にエルシナンをα
アミラーゼによって加水分解することにより３０−α−
Ｄ−グルコピラノシルマルトトリオースを生成して、こ
れを精製し、分画採取する方法が適している。

この際に使用するα−アミラーゼとしては、エルシナン
から３−０−α−Ｄ−グルコピラノシルマルトトリオー
スを生成するものであればよく、例えばアスペルギルス
属、リゾプス属、ペニシリウム属、オオスポラ属などに
属するカビなどの微生物由来のα−アミラーゼが適して
いる。

また、使用するアミラーゼ標品としては、粗酵素であっ
ても本発明の目的を達成することができるが、目的物で
ある３−０−α−Ｄ−グルコピラノシルマルトトリオー
スを分解するような酵素、例えばα−グルコシダーゼな
どを含まないものが好ましい。

本発明の３−０−α−Ｄ−グルコピラノシルマルトトリ
オースを含有するエルシナン加水分解物は、そのまま製
品として、例えば醗酵用培地に使用することができる。

また、本発明の３−０−α−Ｄ−グルコピラノシルマル
トトリオースは、これを含有するエルシナン加水分解物
を公知の精製方法、例えば活性炭による脱色法、イオン
交換樹脂による脱イオン法、アルコール、アセトンなど
の有機沈澱剤による分別沈澱法、カラムクロマトグラフ
ィーによる分画法など、各種の方法を単独で、または組
合せて使用することにより、容易に精製、採取すること
ができる。

このようにして得られる３−０−α−Ｄ−グルコピラノ
シルマルトトリオースは、原料エルシナンに対して、固
形物当り約１０〜５０％である。

本発明における新しいオリゴ糖３−０−α−り一グルコ
ピラノシルマルトトリオースの理化学的性質は、次の通
りである。

Ｏ元素分析： 実測値 Ｃ＝４３．１８％、Ｈ＝６．４１％、０＝５０
．４１％ 計算値 Ｃ＝４３．２４％、Ｈ＝６．３６％、０＝５０
．４０％ （化学式 Ｃ２４Ｈ４□０２１） Ｏ分子量：６６７、グルコース重合度−４０融点：結晶
化困難で測定できず Ｏ電気泳動移動度： ６００Ｖ定電圧、３４ｍＡで１．５時間通電したときの
電気泳動移動度は、Ｄ−グルコースの移動度を１．００
とした時、本品は０．２５でマルトースのそれにほぼ等
しい。

Ｏペーパークロマトグラフィー移動度： ｎ−ブタノール：ピリジン：水＝６ ： ４ ： ３の
展開溶媒を使用し、下降法で１日展開したところ、グル
コース移動度を１．００とした時、本品は０．３４でマ
ルトテトラオースのそれにほぼ等しい。

○比旋光度：〔α〕賃＋１８５° （Ｃ＝１．０、Ｈ２
Ｏ） Ｏ紫外線吸収スペクトル：特異的吸収を示さず。

○赤外線吸収スペクトル： α−結合に特異的な８４０ｃｒＩ′Ｌ−附近に吸収を示
す。

○溶解性： 水に易溶、エタノール、ブタノールに微溶、エーテル、
クロロホルムニ不溶 ○アントロン反応：陽性 ○銀鏡反応：陽性 Ｏ物性： 水溶液は無色であり、微酸性ないし中性、粉末は白色 Ｏ構成： （１）酸による加水分解 ＩＮ硫酸による部分加水分解物中には、Ｄ−グルコース
、マルトース、ニゲロース、マルトトリオース、３−０
−α−Ｄ−グルコピラノシルマルトースおよび供試糖を
含有していた。

（２）酵素による加水分解 グルコアミラーゼ、β−アミラーゼによっては分解され
なかった。

（３）メチル化分析 テトラデカメチル誘導体を酸で加水分解し、得られた混
合物をガスクロマトグラフィーで分析した。

その結果、２・３・４・６−チトラーＯ−メチルグルコ
ース、２・４・６−トＩＪ−Ｑ−メチルグルコース、２
・３・６−ト！Ｊ−０−、、ｌルグルコースのモル比は
ｉ、ｏｏ：０．９６ ： １．９６であった。

また、水素化ホウ素ナトリウムで還元した後にメチル化
し、得られたテトラデカメチル誘導体を酸で加水分解し
て、得られた混合物を同様にガスクロマトグラフィーで
分析した。

その結果、■・２・３・５・６−ペンタ−〇−メチルグ
ルコース、２・３・４・６−テトラ−０−メチルグルコ
ース、２・４・６−トリー〇−メチルグルコース、２・
３・６−トＩＪ −０−、、’−ＩＦ−ルグルコースの
モル比は０．８３：１．００ ： ０．９７ ： １．
０６であった。

何れの場合も、ジーＯ−メチルグルコースが検出されな
かったことより分枝糖ではない。

以上の結果から、本品は３−０−α−Ｄ−グルコピラノ
シルマルトトリオースであり、その構造は次の通りであ
る。

次に、本発明の３−０−α−Ｄ−グルコピラノシルマル
トトリオースを製造する実施の１例について述べる。

実施例 エルシナン２０′ｉ！を熱水１．５１に溶解した後、４
０℃に冷却し、これにα−アミラーゼ（三共製薬株式会
社製造、結晶タカアミラーゼＡ）５ｍ９及び１０−２Ｍ
塩化カルシウムを含有する０、 ５ Ｍ酢酸塩緩衝液（
ｐＨ５，３） １００ｒｒＬｌを加え、４５℃で２４時
間反応させた。

この反応液を１００℃に５分間保った後、室温まで冷却
し、遠心分離して上清を採取した。

この上清に２倍容量のエタノールを加え、遠心分離して
得たその上清を１００ｍｌに濃縮した。

この濃縮液を、活性炭を充填したカラムに加えて糖を吸
着させ、次いで常法に従ってエタノール濃度勾配法で溶
出し、３−０−α−Ｄグルコピラノシルマルトトリオー
ス画分を採取して、イオン交換樹脂（Ｈ型、ＯＨ型）で
脱塩し、濃縮、乾燥することにより白色粉末状の３−〇
−α−Ｄ−グリコピラノシルマルトトリオースを約５．
６１採取した。

このようにして得られた３−０−α−Ｄ−グルコピラノ
シルマルトトリオースは、例えばα−１゜３−グルコシ
ダーゼの定量用基質、醗酵用培地、酵素誘導剤などとし
て有利に利用できる。

なお、活性炭カラムからの溶出に際して、３−〇−α−
Ｄ−グルコピラノシルマルトトリオース画分の後に、新
しい七糖両分が溶出され、同様に精製、濃縮、乾燥して
約４．０′？の粉末を得た。

この新しい七糖の構造は、〇−α−Ｄ−グルコピラノシ
ルー（１→３）−〇−α−Ｄ−グルコピラノシルー（１
→４）−〇−α−Ｄ−グルコピラノシルー（１→４）−
〇−α−Ｄ−グルコピラノシル＝（１→３）−〇−α−
Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−〇−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル（１→４）−Ｄ−グルコースであると推定さ
れる。

この新七糖は、血液、唾液などの生体由来のアミラーゼ
の活性測定用基質として好適である。

すなわち、新七糖は、これらアミラーゼによって容易に
分解され、新七糖１モルから２モルの３−０−α−Ｄ−
グルコピラノシルマルトースと１モルのグルコースを生
じるので、このグルコースを定量すればよい。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １０−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）〇−α−
   Ｄ−グルコピラノシルー（１→４）−〇−α−Ｄ−グル
   コピラノシルー（１→４）−Ｄグルコースからなるオリ
   ゴ糖。 ２ エルシナンをα−アミラーゼで加水分解して、Ｏ−
   α−Ｄ−グリコピラノシル−（１→３）−〇−α−Ｄ−
   グルコピラノシルー（１→４）−〇α−Ｄ−グルコピラ
   ノシル−（１→４）−Ｄ−グルコースを生成せしめこれ
   を採取することを特徴とするオリゴ糖の製造方法。