JPS5848155B2 - 甘味物の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、甘味物の製造に際し、トリテルペンアルコー
ルβ−グリコシドとα−グリコシル糖化合物とを含有す
る水溶液に、α−グリコシル糖転移酵素を作用させて、
α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドを生成含有せしめることを特徴とした甘味物の製
造方法に関するものである。

また、本発明は、モモルデイカ・クロスベノリ・スウイ
ングル（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉ
Ｓｗｉｎｇｌｅ）から甘味物を製造するに際し、該
植物の果実または葉をα−グリコシル糖化合物を含有す
る水溶液で抽出し、この抽出液にα−グリコシル糖転移
酵素を作用させて、α−グリコシル化したトリテルペン
アルコールβ−グリコシドを生成含有せしめることを特
徴とした甘味物の製造方法に関するものである。

近年、ウリ科の多年生草本であるモモルデイかグロスベ
ノリ・スウイングルの果実または葉は、新しい甘味源と
して注目されている。

通常、この果実を加熱加工して得られる生薬羅漢果（Ｆ
ｒｕｃｔｕｓ Ｍｏｍｏｒｄｉｃａｅ ）を抽出し、濃
縮して黒褐色のエキス甘味料が製造されている。

このエキスには、特開昭５２−８３９８６号公報および
特開昭５３−３４９６６号公報などに開示されているよ
うに、甘味グリコシドとして、トリテルペンアルコール
β−テトラグルコシド（分子式 Ｃ，４Ｈ，２０２４・
２Ｈ２０、通称Ｓ−４糖体）、トリテルペンアルコール
β−ペンタグルコシド（分子式 Ｃ６ｏＨ１ｏ２０２９
・２Ｈ２０１通称Ｓ−５配糖体）、トリテルペンアルコ
ールβ−へキサグルコシド（分子式 ｃｅａ Ｈ１１２
０３４、通称Ｓ−６配糖体）などのトリテルペンアル
コールβ−グリコシドが含まれていることが知られてい
る。

本発明者は、トリテルペンアルコールβ−クリコシドの
味質について検討したところ、 （１）甘味以外に、刺すような刺激性の味と、薬品臭を
呈すること。

（２）甘味が砂糖よりも遅れて現われ、甘味以外に苦味
、渋味が残り味として長く尾を引き、不快感を与えるこ
と。

などの欠点を有していることを見いだした。

そこで、トリテルペンアルコールβ−グリコシドにおけ
るこれらの欠点を、生化学的手段で解消することを目的
に研究を続けた結果、トリテルペンアルコールβ−グリ
コシドと、例えばマルトース、マルトトリオース、マル
トテトラオースなどのマルトオリゴ糖、シクロデキスト
リン、Ｄ．Ｅ．１〜７０の澱粉部分分解物、澱粉、更に
は砂糖などのα−グリコシル基を有する糖化合物、即ち
α一グルコシル糖化合物とを含有する水溶液に、これら
α−グルコシル糖化合物からα−グルコシル基をトリテ
ルペンアルコールβ−グリコシドに転移しうるα−グル
コシル糖転移酵素、例えばα一グルコシダーゼ（ＥＣ
３．２．１．２０）、α−アミラーゼ（ＥＣ ３
．２．１．１）、シクロデキストリングルカノトランス
フエラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）、デキストラ
ンシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．５）などを作用さ
せて生成するα−グリコシル化したトリテルペンアルコ
ールβ−グリコシドを含有せしめて得た甘味物は、従来
のトリテルペンアルコールβ−グリコシド製品とは全く
違って、（１）まろやかな甘味を呈し、刺激性の味、薬
品臭を呈しないこと。

（２）甘味が尾を引かず、苦味、渋味が後に残らないこ
と。

などの甘味物として極めて優れた性質を有していること
を見いだし、本発明を完成した。

本発明で使用するトリテルペンアルコールβ−グリコシ
ドは、 で示されるトリテルペンアルコールにおいて、Ｒ１およ
びＲ２は、一方が水素を意味し、他方が１以上のβ一Ｄ
−グルコース残基を意味するか、または両方とも１以上
のβ−Ｄ−グルコース残基を意味する化合物である。

換言すれば、トリテルペンアルコールにβ一Ｄーグルコ
ースが等モル以上グルコシドに結合しておればよく、一
般にはモモルデイカ・グロスベノリ・スウイングルの果
実または葉から抽出されるトリテルペンアルコールβ−
テトラグルコシド、トリテルペンアルコールβ−ペンタ
グルコシド、トリテルペンアルコールβ−ヘキサグルコ
シドなどのトリテルペンアルコールβ−グリコシド混合
物が用いられる。

また、場合によっては、例えばシリカゲル力ラムクロマ
トグラフイーにて個々のグリコシドを単離して使用する
こともできるし、これらグリコシドの部分分解物である
トリテルペンアルコールβーモノグルコシド、トリテル
ペンアルコールβ一シクルコシド、トリテルペンアルコ
ールβ一トリグルコシドなどを用いることもできる。

本発明に用いるα−グルコシル糖化合物は、同時に用い
るα−グルコシル糖転移酵素によって、トリテルペンア
ルコールβ−グリコシドからα−グリコシル化したトリ
テルペンアルコールβ−グリコシドを生成するものであ
ればよい。

従って、α−クリコシル化したトリテルペンアルコール
βグリコシドの生成を容易にするためには、α一グルコ
シル糖転移酵素に好適な基質、即ち澱粉部分分解物や、
砂糖などのα−グルコシル糖化合物が選ばれる。

本発明に用いるα−グルコシル糖転移酵素は、その酵素
に好適な基質α−グルコシル糖化合物とトリテルペンア
ルコールβ−グリコシドとを含有する水溶液に作用させ
るとき、トリテルペンアルコールβ−グリコシドを分解
せずにα−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドを生成するものであれば、自由に用いるこ
とができる。

一般には、動物、植物、微生物由来のα−グルコシダー
ゼ（ＥＣ ３．２．１． ２０）、α−アミラーゼ（Ｅ
Ｃ ３．２．１．１）、シクロデサストリングルカノ
トランスフエラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）、デ
キストランシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．５）、
デキストリンデキストラナーゼ（ＥＣ ２．４．１．
２）、アミロシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．４）な
どがα一グルコシル糖転移酵素として有利に用いること
ができる。

これらのα−グルコシル糖転移酵素は、前記の条件を満
足しさえすれば、必ずしも精製して使用する必要はなく
、通常は粗製品で本発明の目的を達成することができる
。

また、固定化されたα−グルコシル糖転移酵素をバッチ
式で反応に繰返し利用することも、連続式で反応に利用
することも自由にできる。

本発明の反応条件は、トリテルペンアルコールβ−グリ
コシドとα−グルコシル糖化合物とを含有する水溶液に
α−グルコシル糖転移酵素を反応させることができれば
よい。

通常、トリテルペンアルコールβ−グリコシドは、水に
蓄解して反応液中の濃度を約０．１〜２０ｗ／ｗ％とし
、α−グルコシル糖化合物の濃度を約１〜５０ｗ／ｗ％
とすればよく、トリテルペンアルコールβ−グリコシド
に対するα−グルコシル糖化合物の比率は、固形物当り
約０．５〜５００倍の範囲が好ましい。

反応液のｐＨと温度は、α−グルコシル糖転移酵素が反
応してα−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドを生成できればよく、通常ｐＨ ３〜ｌＯ
、温度２０〜８０℃の範囲から選ばれる。

また、本発明者は、羅漢果からグリコシドを抽出する際
にα−グルコシル糖化合物を含有する水溶液で抽出すれ
ば、爽雑物の混入が比較的少ない状態で目的とするグリ
コシドが高収率で抽出でき、次いで、この抽出液に直接
、または濃縮した後にα−グルコシル糖転移酵素を作用
させれば容易にα−グリコシル化したトリテルペンアル
コールβ一グリコシドを生成することを見いだした。

この際、抽出時にα−グルコシド糖転移酵素を共存させ
、抽出と酵素反応とを平行して行ない抽出の促進と、抽
出、反応に要する時間の短縮を計ることもできる。

これらの方法によれば、比較的爽雑物の混入の少ない状
態でα−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−
グリコシドを含有する甘味物が生薬羅漢果から直接製造
することができるので極めて有効である。

本発明では、目的によっては反応液をそのままでも甘味
物として使用できるが、必要に応じて、反応後に酵素を
加熱失活させ、例えば本発明者らが先きに出願した特願
昭５５−１９７４１号の明細書に示したケイ酸アルミン
酸マグネシウム、また特願昭５５−６０５０２号の明細
書に示したマグネシア系吸着剤で有色夾雑物を吸着除去
し、その非吸着部分を採取して甘味物とするか、更には
イオン交換樹脂（例えば、Ｈ型強酸性イオン交換樹脂、
ＯＨ型弱塩基性イオン交換樹脂）を用いて脱塩し、これ
を濃縮してシラツプ状の甘味物とするか、更には乾燥粉
末化して粉末状の甘味物とすることもできる。

また、この甘味物から糖類とグリコシドとを分離する必
要がある場合には、合成吸着剤、例えばＨＰ−１０（三
菱化成工業株式会社製）、アンバーライトＸＡＩ）−２
（ローム＆ハース社製）などを充填したカラムに通液す
れば、α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドは吸着され、糖類は吸着されずに流出する
。

吸着されたグリコシドは、該カラムに低級アルコール水
溶液、例えば５ ０ ｖ ／ ｖ％メタノール水溶液を
通液することによって容易に溶出され、この溶出液を濃
縮してシラツプ状甘味物とするか、更に乾燥、粉末化し
て粉末状の甘味物とすることができる。

このようにして得られる本発明の甘味物における甘味度
は、一般には、反応に用いたトリテルペンアルコールβ
−グリコシドの固形物重量に見合う甘味度とほぼ同程度
か、やや低い程度である。

また、その甘味の質は、粉末状のものをそのまま口に含
んでも薬品臭、刺激味、苦味、渋味などの嫌味を呈する
ことなく、まろやかな甘味を呈し、残り味の切れもよい
。

また、本発明のα−グリコシル化したトリテルペンアル
コールβ−グリコシドを含有するシラツプ状甘味物は、
低温下で長期保存してもα−グリコシル化シタトリテル
ペンアルコールβ−クリコシド、および未反応のトリテ
ルペンアルコールβグリコシドの析出が見られなかった
。

また、本発明のα−グリコシル化したトリテルペンアル
コールβ−グリコシドを含有する粉末状甘味物は、それ
に含まれる各グリコシド化合物が互いに溶け合ったいわ
ゆる固溶体の粉末である。

従って、この粉末の水に対する溶解速度は、瞬時に溶解
できる程犬き＜、シかもその溶解度には際限がないので
シラツプ状からペースト状になる程の高濃度にも自由に
溶解することができる。

本発明の甘味物は、そのまま甘味付のための調味料とし
て使用することは勿論、必要に応じて他の甘味物、例え
ば水飴、ブドウ糖、麦芽糖、カップリングシュガー（登
録商標、林原株式会社）、乳糖、異性化糖、砂糖、ソル
ビトール、マルチトール、ステビオシド、ジヒドロカル
コン、グリチルリチン、Ｌ−アスパラチルフエニルアラ
ニンメチルエステル、グリシン、アラニンなどと混合し
て使用することもできる。

また、本発明の甘味物は、虫歯原因菌などによって醗酵
されにくいことから虫歯を起しにくい甘味剤として、さ
らには代謝されにくいことから低カロリー甘味剤として
も利用できる。

また、本発明の甘味物は、塩から味、渋味、旨味、苦味
などの他の呈味を有する各種の物質とよく調和し、耐酸
性、耐熱性も大きいので飲食物、嗜好物、菓子類などへ
の甘味付に、また呈味の改良に利用することもできる。

また、家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のため
に、餌料、飼料の嗜好性を向上させる目的で使用するこ
ともできる。

その他、本発明の甘味物は、タバコ、練歯みがき、口紅
、リップクリーム、内服薬、トローチ、肝油ドロップ、
口中清涼剤、口中香錠、うがい薬などの各種固形状、ペ
ースト状、液状嗜好物、化粧品、医薬品などへの甘味剤
、呈味改良剤、矯味剤としても利用できる。

さらに、本発明の甘味物を生薬羅漢果と同じ薬効用途、
すなわち情熱、潤肺、怯痰、咳止めなどの用途にも使用
することができ、例えば咳止めシロップ、ぜんそくの発
作をおさえる錠剤などとして使用できる。

次に、本発明の甘味物を実験に基づいて説明する。

実験 １ 甘味物の調製 １−１ グルコシル転移酵素の調製 バチルス ステアロサーモフイラス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）ＦＥＲＭ Ｐ
／１６２ ２ ２ ２をソリュブルスターチ２ｗ／
ｖ％、硝酸アンモニウムＩｗ／ｖ％、リン酸２カリウム
０．１ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム・７水塩０．０５ｗ
／ｖ％、コーンステイープリカー０．５ｗ／ｖ％、炭酸
カルシウム１ ｗ ／ ｖ％からなる殺菌した液体培地
１０ｌに植菌し、５００Ｃで３日間通気撹拌培養した。

得られた培養液を遠心分離して、その上清を硫安０．７
飽和で塩析し、シクロデキストリングルカノトランスフ
エラーゼ（Ｅｃ ２．４．１．１９）の活性約８ ０
，０ ０ ０単位を有する粗酵素標品を得た。

ここでいう活性１単位とＣマ、ｐＨ５．５ ， ０．０
２Ｍの酢酸緩衝液及び２Ｘ１０ −３Ｍの塩化カルシ
ウムを含む０．３ｗ／ｗ，％のソリュブルスターチ溶液
５Ｍに、適当に希釈した酵素液０．２ｒＩＬｌを加え４
０℃で１０分間反応させた後、その反応液０．５ｒｆＬ
ｌをとり、０．０２Ｎ−硫酸水溶液１５ｍｌに混合して
反応を停止させ、さらにこの反応停止液に０．ＩＮヨウ
素ヨウ化カリウム溶液０．２ｒｒＬｌを加えて発色させ
、ついで６６０ｎｍにおける吸光度を測定して、４０℃
で１０分間反応させることによりソリュブルスターチ１
５■のヨウ素の呈色を完全に消失させる酵素量をいう。

１−２ 酵素反応 シリカゲルカラムクロマトグラフイーにて単離したトリ
テルペンアルコールβ−ペンタグルコシド（Ｓ−５配糖
体）３１とマルトデキストリン（Ｄ．Ｅ． １ ８ ）
９ １とを水１００Ｍに加熱溶解した後、６０℃に冷
却し、ついで前述の粗シクロデキストリングルカノトラ
ンスフエラーゼ標品の６００単位を加え、ｐＨ６．０と
し、６０℃で４時間反応させた。

この反応液を９５℃に１０分間保って酵素を加熱失活さ
せた（この標品は、第１表の試料涜３に相当する。

）後、済過して得たＰ液をマグネシア系吸着剤で脱色し
、ついでイオン交換樹脂、アンバーライトＩＲ−２００
Ｃ（Ｈ型）およひアンバーライト ＩＲＡ−９３（ＯＨ
型）を通して脱塩した。

ついで、これを７０℃以下で減圧濃縮し、乾燥粉末化し
て粉末甘味物（この標品は、第１表の試料Ａ６４に相当
する。

）を得た。

対照品は、同様に加熱、溶解した後、反応工程、加熱失
活工程までを経たもので、その配合組成は第１表に示す
。

実験 ２ 甘味の質の比較テスト 予備テストで求めた甘味度から算出して、各試料を１５
％の砂糖水溶液に相当する甘味度の水溶ネ傘液を調製し
た。

そして最も劣っているものと、最も優れているものを各
１つずつ選出させ、かつ味質について意見を求めた。

その結果は、第２表に示す通りであった。

第２表の結果から、試料，％１．４２の対照品は、甘味
の質が劣っており、これに対し試料Ａ３，Ａ４の本発明
品は、甘味の質が優れている。

従って、本発明のα−グリコシル化したトリテルペンア
ルコールβ−グリコシドは、従来のトリテルペンアルコ
ールβ−グリコシド、またはトリテルペンアルコールβ
−グリコシドと他の甘味物との単なる混合物などとは違
って、嫌味がなく、まろやかで砂糖に近い甘味を有して
おり、しかも残り味の切れもよいことから、そのまま口
にふくんで甘味を味わうことのできる極めて優れた甘味
物である。

実験 ３ α−クリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドの確認 実験１−２で調製した試料Ａ６．４の１０ｇを水１００
ｒＩｌｌに溶解して得られる溶液を合成吸着剤（三菱化
成株式会社製の商品名ＨＰ−２０）１００ｍｌのカラム
に通液した後、充分水洗して糖類を除去した。

次いで、このカラムに５０ｖ／ｖ％エタノール３００ｍ
ｌを通過してグリコシドを溶出し、濃縮、乾燥して約２
．６ｇの粉末（試料４５）を得た。

この試料Ａ６．５は、水に極めてよく溶け、まろやかな
甘味を有する無臭、無色中性の物質である。

また、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールなどの
低級アルコールには一部溶け、クロロホルムやエチルエ
ーテルには難溶性の物質である。

試料，４６５のＢＫｒ錠剤法による赤外線吸収スペクト
ルを図に示した。

試料／１６５の一部を少量の水に溶解した溶液に市販の
結晶グルコアミラーゼ（ＥＣ ３．２．１．３）を０
．１Ｍ酢酸緩衝溶液（ ｐＨ ４．８ ）に溶解した溶
液を加え、５０℃で作用させて経時的にサンプリングし
、シリカゲル６０薄層（メルク社製）にスポットし、展
開溶媒、酢酸エチル：メタノール：水一５：３：１の混
合溶媒で上昇法で展開した。

これを乾燥した後、４０ｗ／ｖ％ケイタングステン酸エ
タノールを噴霧して加熱し発色させた。

また、試料４１，４５およびＤ−グルコースとをスポッ
トして比較して見た。

その結果、試料５には、試料／ｌ６１のトリテルペンア
ルコールβ−ペンタグリコシドに相当するＲｆＯ．６５
のかすかなスポット以外にＲｆ０．４７，Ｒｆ Ｏ．３
３ ， Ｒｆ Ｏ．１ ５および原点近くに新しいス
ポットが確認できた。

これらの新しいスポットは、トリテルペンアルコールβ
−ペンタグルコシドと同様に紫紅色であった。

また、試料Ａ５にグルコアミラーゼを作用させ、経時的
にサンプリングしたものは、反応時間とともに新しいス
ポットが徐々に分解を受けて最終的には紫江色を呈する
トリテルペンアルコールβペンタグルコシド（Ｒｆ０．
６５）と褐色を呈するＤ−グルコース（ＲｆＯ．６０）
とに分解されることが判明した。

以上の事実から、Ｒｆ Ｏ．４７ ， Ｒｆ Ｏ．３３
，ＲｆＯ．１５などを示す新しい物質はトリテルペン
アルコールβ−ペンタグルコシドにＤ−グルコースが等
モル以上α−グルコシド結合しているものと判断される
。

従って、試料／ｌ６５は、α−グルコシル糖転移酵素に
よって新らたに生じたＲｆＯ．４７，Ｒｆ Ｏ．３ ３
， Ｒｆ Ｏ．１ ５および原点近くのスポツトを示
す物質と少量の未反応のトリテルペンアルコールβ−ペ
ンタグルコシドとの混合物である。

また、Ｒｆ Ｏ．４７，Ｒｆ Ｏ．３３ ，Ｒｆ Ｏ．
１５などを示す新物質は、豚の肝蔵を抽出し、部分精製
されたα−グルコシダーゼの作用によっても同様ＩｔＣ
｝ ＩＪ−ｒルペンアルコールβ−ペンタグルコシド
とＤ−グルコースとに分解されることが判明した。

このことから、これら新物質は、人や動物が摂取すると
き、体内でトリテルペンアルコールβ−ペンタグルコシ
ドとＤ−グルコースとに容易に分解されることを示唆し
ている。

また、試料／Ｉ６５は、実験２で使用した試料涜３およ
び試料Ａ６．４と同様に優れた甘味を有していること、
残り味の切れのよいことから、本発明のαークリコシル
化したトリテルペンアルコールβ一グリコシド甘味物と
して好適である。

従って、本発明のトリテルペンアルコールβグリコシド
の欠点を解消するという目的は、トリテルペンアルコー
ルβ−クリコシドとα−グルコシル糖化合物とを含有す
る水溶液にα−グルコシル糖転移酵素を反応させてα−
グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−ペンタク
リコシドを生成せしめることによって達成されるものと
判断される。

次に、２〜３の実施例について述べる。

実施例 １ バチルス・メガテリウムＦＥＲＭ−ＰＡ９３５を実験１
−１の培地５ｌｌに植菌し、２８℃で３日間通気攪拌培
養した。

培養終了後、遠心分離して得た上清に硫安を０．７飽和
にし、更に遠心分離して沈澱を採取した。

この沈澱は、実験１−１に記載する活性測定方法でシク
ロデキストリングルカノトランスフエラーゼ（ＥＣ ２
．４．１．１９）を３０万単位含んでいた。

羅漢果の破砕物５００ｇをデキストリン（Ｄ．Ｅ．２０
）の５ｗ／ｗ％温水溶液１．５ｌで１時間抽出した。

抽出液を分離し、その残査をさらに同溶液で抽出した後
、最後に温水で洗浄抽出し、全抽出液を合せて済過した
後、固形物濃度約３０％まで濃縮し、この濃縮液に前記
シクロデキストリングルカノトランスフエラーゼ３，０
０ ０単位を加え、ｐＨ５．５、温度５０℃で１６時
間作用させた。

反応終了後、酵素を加熱失活させて戸過し、次いでケイ
酸アルミン酸マグネシウム（富士化学工業株式会社製、
商品名 ノイシリン）を充填したカラムを通液して有色
爽雑物を吸着除去し、その非吸着部分を濃縮してα−グ
リコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリコシド
を含有するシラツプ状甘味物約２７０ｇを得た。

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２倍であっ
て、甘味の質もまろやかであり、残り味の切れもよい。

従って、本甘味物は、各種飲食物、嗜好物など多方面へ
の甘味付けに利用することができる。

特に、虫歯原因菌によって水不溶性のグルカンが生産さ
れないことにより、虫歯を予防する甘味物として効果的
に利用できる。

また、このシロップ状甘味物は、そのままで情熱、潤肺
、怯痰、咳止め用に好適である。

実施例 ２ 羅漢果の破砕物５００ｇにβ−シクロデキストリン２．
５ ｗ ／ ｗ％および実験１−１で得たシクロデキ
ストリングルカノトランスフエラーゼ５，０ ０ ０単
位を加えた水溶液２ｌをｐＨ５．５、温度６０℃に５時
間保って抽出と酵素反応とを行った。

反応終了後、済過して得られるｐ液にマグネシア系吸着
剤（北海道曹達株式会社製、商品名 Ｍ−５１１）３０
ｇを加え、徐々に攪拌しつつ３０分間保った後済過し、
得られるＦ液をイオン交換樹脂アンバーライトＩＲ−１
２０Ｂ（Ｈ型）およひアンバライトＩＲＡ−９４（ＯＨ
型）のカラムに通液して脱塩し、更に濃縮してα−グリ
コシル化したトリテルペンアルコールβ−グリコシドを
含有スるシラツプ状甘味物約２００１を得た。

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約４倍であっ
て、甘味の質もまろやかであり、残り味の切れもよい。

本甘味物は、各種の飲食物、嗜好物等への甘味源として
利用することができるが、中でも虫歯を予防する甘味料
、低カロリー甘味料として好適である。

実施例 ３ マルトース ４ｗ／ｖ％、燐酸１カリウム ０．１ｗ／
ｖ％、硝酸アンモニウム ０． １ ｗ ／ ｖ％、硝
酸ナトリウム ０． １ ｗ ／ ｖ％、硫酸マグネシ
ウム・７水塩 ０．０５ｗ／ｖ％、塩化カリウム ０．
０５ｗ／ｖ％、ポリペプトン ０． ２ ｗ ／ ｖ％
、炭酸カルシウムｌｗ／ｖ％（別に乾熱滅菌し、植菌時
に無菌的に添加した。

）からなる培地５ｌにムコール・ヤバニカス（Ｍｕｃｏ
ｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ）を植菌して１３０℃で４４時
間通気攪拌培養した。

この培養液から得られた湿菌体４８１ｇにＭ／２酢酸緩
衝液（ ｐＨ ５．３ ）に溶解した４Ｍ尿素液５ｌを
加え、３０℃で４０時間静置した。

この上清を流水中で一夜透析した後、硫安０．９飽和と
して４℃で一夜放置し、次いで遠心分離して沈澱を採取
した。

この沈澱を酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１００膨に懸濁し
た後、遠心分離し、上清をα−グルコシターゼ（ＥＣ
３．２．１．２０）液とした。

羅漢果軟エキス（日本商事株式会社製）１５０ｇとＤ．
Ｅ．４０のマルトデキストリン３００ｇとを水５００ｄ
に溶解し、前記のα−グルコシダーゼ液を加え、ｐＨ６
．０、温度５０℃で２４時間反応させた。

反応終了後、酵素を加熱失活させ、次いで実施１と同様
に爽雑物を吸着除去し、済液を濃縮、乾燥、粉末化して
α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドを含有する粉末甘味物を固形物収率約９７％で得
た。

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２倍であっ
て、甘味の質もまろやかで残り味の切れもよく、実施例
１と同様に、飲食物、嗜好物だけでなく、薬効用途にも
有利に利用できる。

実施例 ４ 水１ｌにバレイショ澱粉３００ｇと羅漢果軟エキス３０
０９とを加え、これに細菌糖化型α−アミラーゼ（ＥＣ
３．２．１。

１）（生化学工業株式会社製）を実験１−１の方法によ
る活性測定方法で澱粉ダラム当り１０単位加え、８０℃
になるまで攪拌しながら加熱し、澱粉の液化が終ったと
ころで６０℃に冷却し２日間反応を続けた。

この反応液を加熱してα−アミラーゼを失活させた後、
実施例３と同様に精製し、減圧濃縮した後、粉末化して
α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリ
コシドを含有する粉末状甘味物を固形物収率９５％で得
た。

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２倍であり
、甘味の質もまろやかで、残り味の切れもよく、実施例
ｌと同様に飲食物、嗜好物だけでなく、薬効用途へも有
利に利用できる。

実施例 ５ 羅漢果１ｋｇを破砕し、これに３ｌｌの熱水を加えて４
回抽出し、得られた抽出液を合わせて実施例２に準じて
マグネシア系吸着剤で爽雑物を吸着除去した後、非吸着
部を合成吸着剤（アンバーライトＸＡＤ−７ ） ４
０ ０ｒＩＬｌのカラムに通液し、溶液中に含まれるグ
リコシドを吸着させ、糖類溶液を流出させた。

次いで、このカラムを水洗した後、５ ０ ｖ ／ ｖ
％メタノール水溶液１ｌを通液してグリコシドを溶出し
、濃縮、乾燥してトリテルペンアルコールβ−グリコシ
ドの白色粉末約４．６ｇを得た。

砂糖 ５ｗ／ｖ％、酵母エキス ０． ５ ｗ ／ ｖ
％、リン酸１カリウム ０． ８ ｗ／ ｖ％、リン酸
２カリウム２．４ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム・７水塩
０．０ ２ｗ／ｖ％、硫酸マンガン ０．００２ｗ／ｖ
％、前記トリテルペンアルコールβ−グリコシド１ｗ／
ｖ％を含有する培地２００ｒｒＬｌにロイコノストック
・センテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎ
ｔｅｒｏｉｄｅｓ ） ＩＡＭ １ １ ５ １の種
培養液を植菌し、２５℃で２４時間培養した。

本培養液を遠心分離して得た上清を、実施例１の反応液
と同様に精製してα−グリコシル化したトリテルペンβ
−グリコシドを含有するシラツプ状甘味物約１５ｇを得
た。

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約２０倍であ
り、甘味の質もまろやかで、残り味の切れもよい。

本甘味物は、嗜好物、嗜好物への甘味付けだけでなく、
低カロリー甘味物として、さらには他の甘味物、例えば
麦芽糖、マルチトール、カップリングシュガー（登録商
標 林原株式会社製）などの甘味度の強化に利用できる
。

また、情熱、潤肺、怯痰、咳止めなどの用途に、そのま
まで、または他の薬剤と併用して粉剤、顆粒剤、錠剤と
して利用できる。

なお、本実施例の前記培地からトリテルペンアルコール
β−グリコシドを除いた培地に、ロイコノストック・メ
センテロイテ゛ス ＩＡＭ１１５１を同様に培養して得
た培養液を遠心分離し、得られた上清にリン酸カルシウ
ムゲルを加えて透析し、次いで遠心分離してリン酸カル
シウムゲルを採取した。

このゲルを硫安０．３５飽和の０． ２ Ｍ ＩＪン酸
モノナトリウム溶液に懸濁して溶出し、濃縮して得たデ
キストランシュクラーゼ（ＥＣ ２．４．１．５）溶
液１０ｒＩＬｌを、砂糖４ｗ／ｖ％と先きに調製したト
リテルペンアルコールβ−グリコシド １ ｗ ／ ｖ
％とを含有する溶液２００ＴＬｌに加えて、ｐＨ５．３
、温度３０℃で１０時間作用させた。

反応終了後、マグネシア系吸着剤で爽雑物を吸着除去し
、得られる非吸着部を実験１−３に準じて合成吸着剤（
アンバーライトＸＡＤ−７ ）のカラムに通液し、該カ
ラムを水洗し、次いで５０ｖ／ｖ％エタノール水溶液で
グリコシドを溶出回収し、これを濃縮、乾燥してα−グ
リコシル化したトリテルペンアルコールβ−グリコシド
を含有する粉末状甘味物約２．５ｇを得た。

本甘味物は、固形物当りの甘味度が砂糖の約８０倍であ
り、甘味の質もまろやかで、残り味の切れもよい。

本甘味物は前記と同様に各種の用途に利用できる。

本甘味物に含有するα−グリコシル化したトリテルペン
アルコールβ−グリコシドハ、イソマルトデキストラー
ゼ（ＥＣ ３．２．１．９４）によって分解され、ト
リテルペンアルコールβ−グリコシド、α−グルコシル
化したトリテルペンアルコールβ一グリコシドなどとと
もにイソマルトースを生じたことから、トリテルペンア
ルコールβ−グリコシドにＤ−グルコースが等モル以上
α−グルコシド結合している混合物であると判断される
。

【図面の簡単な説明】

図は、α−グリコシル化したトリテルペンアルコールβ
−グリコシドの赤外線吸収スペクトルである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ トＩＪテルペンアルコールβ−グリコシドとα
   グリコシル糖化合物とを含有する水溶液に、αグルコシ
   ル糖転移酵素を作用させて、α−グリコシル化したトリ
   テルペンアルコールβ−グリコシドを生成含有せしめる
   ことを特徴とした甘味物の製造方法。