JPS58501637A - アレルギ−スクリ−ニング装置及びその製法及び使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 アレルギースクリーニング装置 及びその製法及び使用法 発明の背景 本発明は、液体標本の診断分析用結合測定法に関し、より詳細にはアレルギース クリーニングのためにＩｇＥクラス抗体の存在を検知することのできる診断装置 に関する。

哺乳動物その他の高等動物の一つの特徴は、常時或いは時々遭遇する侵入生物、 或いは外部物質の真の功撃に対して自らを保護する能力である。この保Ｓは、生 物或いは外部物質による動物内の免疫的応答の開始に始まる。この免疫応答の重 要な側面は、生物或いは外部物質上の抗原部位に対するイムノグロブリン、いわ ゆる抗体の生成である。

未だその理由は完全に理解されてはいないが、威る攬のアレルゲンとして知られ ている抗原性物質が、しばしばヒトに過敏性応答を誘発する。この過敏症、即ち アレルギーは数多くの容易に児分けられる徴候、即ち枯草熱、喘息、湿疹、ジン マ疹及び局所的腫脹などとして表われる。

伝統的に患者における過敏症の存在の分析は、皮膚試験或いは刺戟試験により行 われていた。刺戟試験においては、患者はエアロゾールの形態で疑わしいアレル ゲンを吸い込むのに対し、皮膚試験では、アレルゲンを患者の皮膚に塗布するこ とが必要とされる。これらの試験はいずれも患者についてアレルギー徴候の証拠 を追跡することを必要とし、適当な評価のためには相当量の訓練された専問家の 時間を必要とする。１Ｋ。

アレルゲンへの曝露は強いアレルギー性応答を誘発する場合があり、その結果患 者に不必要な不愉快さ或いは時には害を与え得る。

あるクラスのイムノグロブリン、特にＩｇＥクラスの抗体が大部分アレルギ一応 答の原因であることが発見された結果、診断医師九ちは血清上の標準的ラジオイ ムノアッセイ技術を利用したＩｇＥクラス抗体のためのｉｎマ１ｔｒｏ試験を開 発した。例えば、その様な試験の幾つかの盤は米国特許３，８７７．３０７号及 び４，２４３．６５１号各明細書に見られる。

又、異ったＩｇＥクラス抗体のスクリーニングの技術に関する研究も成功を収め 、例えばその様な技術は米国特許３，９４１．８７６号及び４，０３１，１９７ 号明細書に見られる。基本的には、これらの特許に記載される技術は、長いセル ロース体（例えば祇の側片ンを別々の判ったアレルゲンで被覆して互にアレルゲ ンのない領域によって分離された帯或いは島を形成することよりなるものである 。このアレルゲンで＊Ｓされたセルロース物質の長大帯が試験血清と接触される と、被覆アレルゲンに対して特異的な血清ＩＭＥクラス抗体が適当な場所に付着 する。セルロース体を洗浄後、引続きこれを付着したＩｇＥクツス抗体と反応性 のある標識化抗体でイン中ユペートさせることにより、帯及び島について標識化 抗体の存在の分析が行われる。この分析から集められ次情報は患者のアレルギー 傾向の表示を与える。

前記スクリーニング法の特許に＠連して説明される方法及び装置は許容可能なも のである。しかしながら、セルロース材料上への帯及び島の製造は、幾分骨が折 れ、時間を要し、典型的には適当なアレルゲン被覆の九めにジグの使用を必要と する。又、最良の結果を得るために、全てのアレルゲンがセルロース材料上に一 度被覆されるべきであり、このためにはアレルゲンの同時調製が必要となる。こ れらの束縛条件は製造方法を阻害し、又スクリーニングの柔軟性を制限するもの である。

従って、免疫検定技術及び関連した操作の開発及び使用に携わる者は、アレルギ ースクリーニング装置において更に改良が行われることが望ましいことを認識し ている。特に、その様なスクリーニングに有用な装置の改良された且つより経済 的な製造方法についての要望が存在する。本発明はその様な要求を満たすもので ある。

発明の概要 本発明は、結合測定法による液体試料の分析に使用する診断装置を提供するもの であり、鋏装置は液体試料との同時接触及び結合測定成分の同時測定のための異 った測定法からの結合測定成分で被覆された複数の糸を有するものである。更に 、本発明の装置構成は比較的製造が容易であり柔軟性があり且り製造及び使用す るのに安価である。

よりＡ体的には、本発明−の現在好ましい実施態様は、液体試験試料と同時接触 するように一定の間隔で施水された複数の木綿糸を有する支持体を含む診断中ク トである。糸の少なくとも二本は、スクリーニング目的の異った！ｇＥ抗体に特 異的なアレルゲン組成物で被覆されている。これらの糸は、好ましくは、高分子 量多糖類である綿から作られているので、アレルゲンはハロゲン化シアン誘導結 合により共有結合されることができる。この好ましい中クトは更に糸に結合した ＩｇＥラス抗体と反応性の抗体）を含むものである。この第二の抗体は例えば１ １２５のような放射性トレーサーの標識を付されるのが好ましいが、又螢光トレ ーサー、酵素、酵素基質或いは助酵素などの標識を付することもできる。

本発明のもう一つの側面は、結合測定法を使用して液体試料啼の生物学的試薬の 存在の検゛出方法である。

この方法は液体試験試料なく止も二本の糸が異った測定法からの結合ＩＩ定酸成 分被遺されて１いる一定の関謁で支持されている複数の糸でイン中エベートさせ る工程、及び糸を分析して糸罠被橿された結合測定成分と相互作用する複数の生 物学的試薬の量を同時に決定する工程を含むものである。この結合一定法は好ま しくはイムノアセイで６９、分析はオートラジオダツフイにより達成されるのが 好ましい。

液体試料中の複数アレルゲン−特異性のＩｇＥククス抗体の存在をスクリーニン グする際には、この方法は試験試料を一定の間隔に配置されて支持され、開−と なるＩｇＥクラス抗体に％異的なアレルゲンで被覆された複数の糸でイン中ユベ ートさせる工程、試験試料から糸を除去する工程、糸をＩｇＥクッス抗体に対す る標識化された第二の抗体を含有する溶液でイン中ユペートさせる工程及び糸を 溶液から除去する工程及び糸を分析して第二の抗体の存在を決定する工程を含む ものである。

第二の抗体が例えば！１２５などで放射活性の標識を付されている場合には、分 析はガンマカウンターを用いて達成することができる。別の分析方法としては、 糸を曝露用フィルムの近くに置き、次いでフィルムの曝露をヒトの肉眼、濃度計 或いは走査濃度計によｐ分析する方法がある。フィルムと糸に′間にリン光体を 置く仁と゛によ゛り、シばしばフィルムの曝露性が高められる。

第二の抗体が螢光トレーサーにより標識される場合には、分析は螢光計を用いて 達成することができる。′。同１１ＫＩＩｌＩｌ＄壽゛累又は酵、素基質である 場合に框分光凭、度肝を利用することが′″Ｔ：含る。

不発・明の更にもう一つの側面・は、曽舎ｌＩ定法による液体試料の分析におい て有用な装置を作る方法である。

この方法は、一本の糸をある結合測定法の一つの成分で被覆する工程、及びこれ らの糸の複数を間隔を開けて支持体に付着する工程を含むものである。少なくと も二本の糸が異った結合決定法からの成分で被覆されている。糸が綿糸で作られ 、支持体がプクステックで作られている場合には、支持体を一定の大き、さの複 数の長尺片に容易に切断することができる。更に、支持体の糸よシ背後の部分を 切断することにより背景を減少させることができる。

よシ＾体的には、液体試験試料内の複数アレルゲン−特異性ＩＫＥクラス抗体の 存在を同時に決定する九めに使用する、小型装置の製造方法が提供される。この 方法は、糸を該ＩｇＥクラス抗体の少なくとも一つに特異的なアレルゲン組成物 を被覆する工程及びこれらの複数の糸を支持体に付着する工程を含むものである 。

支持体に付着される少なくとも二本の糸は異ったアレルゲン組成物で被覆される 。又、この支持体は一定の大きさの複数の長尺片に容易に切断することができる 。

アレルゲン組成物は関連アレルゲンの混合物、例えば雑草ミックス、ヨモギミッ クス、オリーブミックス、ブタクサイククス、クルミミックス、アルテルナリア （ＡｉＫ＊ｒｎａｒｔａ　）　ミックス、デマテアシア（Ｄ＠ｍａｔｌ酊ｍａ＊ 　）　ミックス、或い、にペニシリウムミックスなどから構成することができる 。更に、アレルゲン組成物は脱脂及び抽出アレルゲンより構成することができる 。

前記より本発明の装置の製造は、その様に簡単かつ経済的であることを主たる理 由として、従来利用可能であったアレルギー検出のためのスクリーニング俟置に 比較して本発明が有意義な進歩を示すことが了解されるであろう。本発明゛のそ の他の側面及び利点は以下付属の図面を参照して行われる以下のよシ詳細な説明 よシ明らかとなるであろう。　′ 図面の簡単な説明 第１図は、本発明を異体化する装置の斜視図で６９、製造中の長尺支持体に付着 された複数の糸を示すものである。

第２図は第１図の実質的に２−２９に沿ってとられた拡大部分末端図である。

第３図は本発明を具体化する装置の分解斜視図であり、増強スクリーン及びフィ ルムと共に示されたものでおる。

＃！４図は、増強スクリーン及びフィルムと共に組豆てられた装置の末熾図であ る。

第５図は、部分的に曝露されたフィルムの頂部平面図である。

第６図は、支持体の一部を切ｐ取った装置の代替的形態の斜視図である。

第７図は、第６図の＠７−７に実質的に沿った断面図である。

好ましい実施態様の説明 図面、特に第１図及び第３図を参照すると、本発明の特徴を示している新しい改 良された診断装置が示されている。この装置は、液体試料中の複数のアレルゲン を同時に測定する九めにイムノアッセイを利用するものである。

本発明に従えば、液体試験試料と同時に接触するために支持体１０が一定の間隔 で支持され次複数の糸１２と組合わされている。本発明のこの装置の構成は、比 較的製造が容易であシ、及び、柔軟であり、且つ使用するのが安価である。支持 体１ｏはゲラステック或いは容易に切断されて細片として利用可能なその他の水 不溶性材料から作ることができる。糸１２はハロゲン化シアン誘導結合によりア レルゲン結合を可能にするために、高分子量多糖頌である綿から作られるのが好 ましい。糸１２の少なくとも二本は異ったＩｇＥクラス抗体と反応させるための アレルゲン組成物で被覆されている。

各県１２は臭化シアンにより以下のように活性化される。標準的綿しつけ糸、ガ えばｊｌｒｏｏｋａＤ−９６ＮＩＩ被覆ポリエステル或いはマーセル加工綿〔全 てＣｏａｔｓ　＆　Ｃｌａｒｋ社（ジョーシア州、アト２ン夕）より市販〕をス ピンドルに巻きつけ、約３ｆを約１８℃に維持された新鮮な蒸留本釣１００−を 含有するビーカーに入れる。数滴のｌ　ＮＮａＯＨを水に添加後、１０〇−蒸留 水中の臭化シアン５ｔを添加し、全混合物のｐＨを標準ｐＨ計で追跡し、ｐＨを ｌ　Ｎ　ＮａＯＨで約１０及び１１０間に維持する。

約１時間後、糸を約１ｔのＯ−００５Ｍ　ＮａＨＣＯ２やに入れ、全混合物を次 いで焼結ガラスロート上に注ぐ。ロートに保持された糸を５回２５０ｍのア七ト ンで洗浄し、７−ド中で約１時間風乾する。この活性化された糸を一紙で覆われ たベトリ皿内に乾燥剤と共に２日以上約４℃の温度において保存した後、カップ リングを行う。

広範囲のアレルゲンを活性化糸に結合することが出来るが、具体的には下記の表 に幾つかの好ましいものが挙げられている。同表は、交差反応についての情報と して、慣用名及び科学的名称の両者と共に科名も含むものである。

カバノ牛（Ｂｉｒｃｈ　：　Ｂｅｔｕｌａ　ａｌｂｍ　）科名二カバン中科猫（ ５０％グリセロール中１：１０環境嵩高猫毛）オナモミ（Ｃｏｃｋｌ＠ｂｕｒｒ 、　５ｐｉｎｙ　：　Ｘａｕｔｈｌｕｍ　ｓｐｉｎｏｓｍ　）科名：キク科 ギシギシ（Ｃｕｒｌｙ　ｄｏｅｋ　：　Ｒｕｎｔｎｘ　＠ｒｉｓｐｕａ　）科名 ：タデ科イギリスオオバ＝ｒ　（ＥＨ１１５ｈ　ｐｌａｎｔａｌｎ　：　Ｐｌａ ｎｔａｇｏ　１ａｎ＠＊ｏｌａｔ。

苔名：オオバコ科 ニセブタクサ（Ｆａｌｓ＠Ｒａｇｗ＊ｓｄ　：　Ｆｒａｎｓ＊ｒｉａ　ａａａｎ ｔｈｉｅａｒｐａ　）科名：ｄＰり科 雑草ｉ７りｘ　（Ｇｒａｓｓ　Ｍｉｘ　）ａ、スズメノカタビラ（Ａｎａｔｌａ ｌ　ｂｌｕｅ　ｇｒａｓｓ　：　Ｐｏｔ　ａｍｕａ　）ｂ、ギ田つギシパ（Ｂ＠ １ムｇｒａｓｓ　：　Ｃｙｎｏｄｅｎ　ｄａ＠ｔｙｌｏｍ　）・、ホンムギ（Ｅ ａｇｌｌｓｈ　ｒｙｅ　Ｇｒａｓｓ　：　Ｌｏｌｉｕｍ　ｐ＊ｒ＊ｎｎ＊　）４ 、ウシノケグサ属植物背高牧草（Ｆ・―・ｎ・、ｔａｌ１ｍ軸ｄｅｗｇｒａｓｓ 　：　Ｆ＠５ｔｕｅａ　＠１ａｔｉｏｒ　）・、ナガハグサ（Ｋｓｎｔｕｅｋｙ 　ｂｌｕｅｇｒａｍｓ　：　Ｐｏｔ　ｐｒａｔ＠ｎ５１ｍ　）ｆ、カモガヤ（０ ｒｅｈａｒｄ　ｇｒａｓｓ　：　Ｄａ＊ｔｙｌｉｓ　ｇｌｏｍ＠ｒａｔ＊　）ｇ 、＝ｒヌカグｔ　（Ｒａｄｔｏｐ　：　Ａｇｒｏｓｔｉｍ　ａｌｂｍ　）ｈ、シ オクサ（８ａｌｔ　ｇｒａｓｓ　：　Ｄｉｓｔｌ＠ｈｌｉｓ　５ｐ１ａａｔｓ　 ）量、ハルガヤ（Ｓｗ＠＠ｔ　ｖ＊ｒ＋ｓａｌ　ｇｒａｓｓ　：　Ａｎｔｈｏｘ ａａｔｈｗａ　ｏｄ＊ｒａｔｍａ　）ｊ、ｉｔアワガエリ（Ｔｉｍｏｔｈｙ　： 　Ｐｈｌ＠ｗ！Ｉｐｒｅｔｅｎｓｅ　）家はこＦ）　（２，０００ｐａｗ／ｓｄ 　Ａｌｂａｙ　Ａ、　Ｐ、、　５０−グリセロール容積−） 家庭昆虫（Ｈａｕｓ＠ｈｏｌｄ　１ｎｔｅｎｔｓ　）西洋ビヤクシン（Ｊｕｎｉ ｐ＠ｒ、　ｗｅｓｔ＠ｒｎ　：　Ｊｕｎｉｐ＠ｒｎｓ　ｏｅｅｉｄ＠ｎｔａｌｉ ＊　）シロザ（Ｌａｍｂｓ　ｑｕａｒｔｅｒ　：　Ｃｈ＠＋ｓｏｐｏｄｉｕｍ　 ａｌｂｕｎｓ　）科名：アカザ科 す；７　（Ｌｉｖｅ　Ｏａｋ　：　Ｑｕ＠ｒｅｕｓ　ａｇｒｉｆｏｌｌｍ　）ダ ニ（Ｍｉｔ・、５０％グリセリン中　１：１００ダニ容積） ＤＩｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄ＊ｓ　ｆａｒｉａｍｓヨモギミックス　科名：中 り科 ａ、＝イタカツモギ（Ａｒｔ＠ｍ＠ｓｉａ　＠ａａ＋ｐ＠５ｔｒｌｓ　ｐａｅｉ ｆｌｅａ　）ｂ、カリフォルニアヨモギ（Ｃａｌｉｆ、　Ｍｏｇｗｏｒｔ　：　 Ａｒｔ＠ｍｅｓ１ｍｖｕ１ｇａｒｉｓ　ｈ＠ｔ＠ｒｏｐｈｙｌ１ｍ　）＠、コー ｘトセージ（Ｃｏａｓｔ　ｓａｇ＠：　Ａｒｔ＠ｍ＊ｍ１ａ　Ｃａ１ｉｆｏｒｎ ｉｅａ）ｄ、ジャイアントセージプツシ（Ｇｌａａｔ　ｓａｇ＠ｂｒｕｓｈ　： ムｒｔ＠ｍ＊ｍｉａ　１ｒｉｄ＠ｎｔａｔ＊　）・、サンドセージプツシ（５ａ ｎｄ　ｓａｇ＠ｂｒｕｓｈ　：　Ａｒｔ＠ｍｅｓｉａｆｉｌｉｆｏｌｉｍ　） ｆ、ウェスタンセージ（Ｗｅｓｔ＠ｒｎ　ｇａｇｅ　：　Ａｒｔ＠ｍ＠５１ｍ５ ｕｋｓｄｏｒｆ１１　） カラン（Ｍｕｓｔａｒｄ　：　ｂｒａａｓｉｅａ　）科名ニアプラナ科オリーブ イツクス（Ｏ１ｉマ・ｍ１ｘ　）ａ、オレガナ（Ａｓｈ、　Ｏｒ＠ｇａｎａ　： 　Ｆｒａｘｌｎｕｓ　Ｏｒ＠ｇａｍ　）ｂ、オリーブ（Ｏｌｉｖｅ　：　０１ｅ ａ　Ｅｕｒｏｐｉｍ　）Ｃ，ヨウシュイボタハ？　（Ｐｒ１ｖ＊ｔ　：　Ｌｉｇ ｕｓｔｒｕｍ　ｖｕｌｇａｒｅ　）ビックルウイード（Ｐｉｃｋｌｅｗ＊ｅｄ　 ：　５ａｌｉｅｏｒｎｉａ　ａｍｂｉｇｕｍ　）科名：アカザ科 ヒ：ｚ　（Ｐｒ１ｖ＊ｔ、　Ｃａｒ＠ｌ＠ｓｓ　ｗｅ＠ｄ　：　Ａｍａｒａｎｔ ｈｕｓ　ｐａｌｍｅｒｉ　）科名：ヒュ科 ブタフサミックス（Ｒａｇｗｅｅｄ　ｍｉｘ　）科名：キク科ａ、短い或いは晋 哨のブタフサ （Ａｍｂｒｏｓｉａ　ｇｌａｚｉｏｒ　）ｂ、西洋ブタフサ（Ｗｅｓｔｅｒｎ　 Ｒａｇｗｅｅｄ　論ｂｒｏｓｉａ　ｐｍｉｌａｓｔａａｈｌｍ）ロシアアザミ（ Ｒｕ５ｓｉａｎ　ｔｈｉｓｔｌｅ　：　５ａｌｓｏｌａ　ｋａｌｌ　）科名：ア カザ科 ヒメスイバ（Ｓｈｅｅｐ　５ｏｒｒ＠ｌ　ａ　Ｒｕｍｅｘ　ａｅ＠ｔｏａ＠ｌ１ ｍ　）科名：タデ科 スピアスケ−＃　（Ｓｐ＠ａｒｍｃａｌ＊　：　Ａｔｒｉｐｌｅｘ　ｐａｔｕｌ ｍ　）科名−アカザ科 クルミミックス（Ｗａｌｎｕｔ　ｍｌｘ　）１、カリフォルニアブラック（Ｃａ ｌｉｆｏｒｎｉｍ　ｂ１ｍ＠ｋ　：Ｊｔｓｇｌａａｓ　Ｃａｔ　ｉｆ　、）ｂ、 イギリスクルミ（Ｅｎｇｌｉｓｈ　ｖａｌｎｔＩｔ　：　Ｊｕｇｌａｍ＠ｒ嘲ｇ ｉｍ　）アスペルギルス（Ａｓｐ＠ｒｇｉｌｌｕｓ　）アルテルナリアンツタｘ 　（Ａｌｔ＠ｒｎａｒｉａ　Ｍｌｘ　）１、アルテルナリア（Ａｌｉ＠ｒｎａｒ ｉｍ）１）、ヘルｆン°トスボリクム（Ｈｓｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｌｕｍ　） Ｃ，ホルモプントラム（Ｈｏｒｍｏｄ＠ＩＭ１ｒｕｍ　）デマチアセアミックス （Ｄ＠ｍｔｉａ軸軸Ｍｌｘ　）イヌ毛及び７ケ（Ｄｏｇ　ｈａｉｒ　ａｎｄ　ｄ ａｎｄ＠ｒ　）七ｇリアアルビカンス（Ｍｏａｉｌｌａ　ａｌｂｉ＊ｓａａ　） ペニシリウムミックス（Ｐ＠ａｉａｉｌｌｉｕｍＭ１ｘ）多くのアレルゲンは、 シャープ−アンド・シャープ（Ｂｈａｒｐ　＆　５ｈａｒｐ　（ワシントン州、 エヘレット）〕或イハ抽出物としてホリスター・ステア（Ｈｏ１ｌｉｓｔ＠ｒ　 Ｓｔ＠ｉｒ　（ワシントン州、スポーカン）〕より購入することができる。

或いは又、公知の技術を用いてそれらを単離することもできる。一般的に抽出物 として利用可能でない場合には、アレルゲンは糸に最終的に結合する前に脱脂さ れ、水溶液中に抽出されなければならない。

例えば、花粉を脱脂及び抽出する九めには、３−のジエチルエーテルをｌｔの花 粉粉宋に添加する。予備抽出が約１時間行われ、その後エーテルを吸引器を用い て除去する。これを少なくとも二回繰返し、脱脂物質を一昼夜乾燥させる。約ｉ Ｆの脱脂アレルゲンを０．９重量嘩のＮ暴Ｃｔ及び０．１重量−〇ＮａＮ３を含 有するｐｕ７．ｓの０．１Ｍリン酸緩衝置数Ｏｍｔに入れる。この溶液を約２分 間超音波処理してアレルゲンを適当に緩衝液中に懸濁させ、約２４時間低、温室 に貯麓し、次いで沈澱を約１時間遠心分離により除去する。上澄液を２紙及び約 ０．４５５ミフロンＯミリボワフイルター通して注ぐ。

必要に応じて、上澄液は公知のＬｏｗｙ法によシ蛋白質濃度を測定することがで きる。同様に、存在するアレルゲンの量は標準的ラジオイムノアッセイ技術によ り確認することができる。

アレルゲンを活性化糸にカッグリンするためには、各アレルゲンを先ず順次０． ９重量％ＮａＣ１及び０．１重量％ＮａＮ３を有するｐＨ７，５の０−　Ｉ　Ｍ 　Ｎａ２ＰＯｑ緩衝液（稀釈緩衝液）中に約１−１Ｏ′Ｍｖ′−の濃度範囲まで 稀釈する。

約１０１１Ｐの活性化糸を各稀釈液ｌ−に添加し、約２４時間４℃においてゆる やかに揺動する。アレルゲ／稀釈液を次いで、吸引除去し、糸を二旦０−　Ｉ　 Ｍ　ＮａＨＣＯ３で洗浄する。その後糸を０．　Ｉ　Ｍ　ＮａＨＣＯ３中の１ｍ の０．０５Ｍエタノールアミンと混合する。約３時間イン中ユベート後、エタノ ールアミンを吸引除去し、糸を次のものによシ各々二回ずつ繰返し洗浄を行う： ０．５ＭＮａＨＣＯ３：　０．　ｌ　Ｍ　ＣＨ３ＣＯＯＮａ　（ｐＨ４，０）　 ：及び０．２−ヒト血清アルブミン含有稀釈緩衝液。

アレルゲンの最適カップリング濃度を決定するために１陽性血清（即ち特異的ア レルゲン帯と反応性であるＩｇＥクラス抗体を含有する血清）のプールを用いて 試料試験を稀釈液を用いて行った。約２．５１長の被覆糸を約５０μｔの集めら れた血清を有するフェルに添加し、フェルをＨ２Ｏ及び０．１重１量−のＮａＮ うをＭするＨ２Ｏを含有する湿潤室においた。約１８〜２４時間インキュベート 後、液体を退引除去し、糸を稀釈緩衝液で５回洗浄した。

糸を次いで同室において、約１８〜２４時間食容量、好ましくは約５０μｔのヒ トＩｇＥクラス抗体と反応性である放射標識を付した第二の抗体とイン中ユペー トさせた。周知の如く、適当な第二の抗体は、ヒトＩｇＥを注射したヤギ或いに ウサギの血清或いはハイブリチック（）Ｉｙｂｒｌｔｅｃｈ　）社（カリ７オに ３ア州、Ｌａ　Ｊｏｌｌｍ　）から販売されているネズｉ　ＩｇＨのようなモノ クロナール源から得ることができる。第二の抗体はノ・ンター（Ｈｔｕ１ｔ＠ｒ 　）及びグリーンウッド（Ｇｒ＠＠ｎｙｏｏｄ　）、（Ｎａｔｕｒ＠１９４　： 　４９５　（す！１２・５で標識化されており、必要に応じて公知の方法で精製 されている。

イｙｄＰユベニション後、第二の抗体溶液を吸引除去する。糸を再び５倍容量の 稀釈−置数で洗浄し、久いで通常のガンマカラ／ターによりカウント数を数え、 その放射活性を定量する。一連の稀釈液から得られた最高のカウント数水準にほ ぼ等しい力９ント数水準を有する最も低い稀釈率が最適カップリング濃度である 。

例えば、以下に現在好ましいカップリング濃度を示す。

アレルゲンカップリング濃度 カバン＃　（Ｂｉｒｃｈ　）　２．０ ネ　コ　（Ｃａｔ　）　０．０５ オナモき（Ｃｏｃｋｌ＠ｂｕｒｒ　）　６＊５ギシギシ（Ｃｕｒｌｙ　ｄｏａｋ 　）　５．３イギリスオオパ＝ｔ　（Ｅｎｇｌｉｓｈ　ｐｌａｎｔａｉｎ　）　 ２．０ニセブタクサ（Ｆａｌｓｅ　Ｒａｇｖｅ＠ｄ　）　５．２雑草ミツクス（ Ｇｒａｓｓ　Ｍｉｘ　）　０．０５家はこり（Ｈｏｕｓ＠ｄｕｓｔ　）　３．０ 家庭昆虫（Ｈｏｕａ＠ｋｏｌｄ　１ａｓｓｅｔｓ　）　３．７セイヨウビヤクシ ン（Ｊｕｎｉｐｅｒ　）　４．９シロザ（Ｉａｒｍｓ　ｑｕａｒｔ＠ｒ　）　３ ．０す　ラ　（Ｌｌｖ＠ｏａｋ　）　０．５ダ　ニ（Ｍ口・）０６１ ヨモギミックス（＆ｇｗｏｒｔ　ｍｉｘ　）　１．０カラシ（Ｍｕｓｔａｒｄ　 ）　、　１．０オリーブミックｙ、　（Ｏｌｉｖｅ　ｍｉｘ　）　、’　０．１ ヒエ（Ｒ１−・ｄ　）　１．。

ブタフサミックス（−匣・ｄＭｉｘ）　５．４ａシアアザ（（Ｒｕｍ−量ａａ　 ｔｈｉｓｔｌｅ　）　１．０スピアスケール（８ｐ＠ａｒｓ＠ａｌ＊）　、　’ 　１．０　＝アスペルギルス（Ａｓｐ＠ｒｇｉｌｌｕｓ　）　５４６　、。

デマテアセアばツクｘ、　（、Ｄ＠ｍａｔｉｍ＋＠ｇｅ　ｍｆｘ□）、・４Ｂ、 ’９て支持体１０例えば感熱被覆を有するゲラステックに沿って置かれる。一般 的に番号３６によって示される切断線に沿って支持体を切断する熱ナイフを利用 することにより、糸１２は感熱被接溶融物として支持体１゜に結合することがで きる。この様に、各々異ったアレルゲンで被覆された多くの糸を有する各極長さ の細片が容易に調製される。

第３図に示されるように、全て異ったアレルゲンで被覆された糸１Ｂと組合わさ れた支持体１６を有する装置１４はスクリーニング目的に遍したｔのである。

装置１４は先ず液体サンプル中に入れられ、液体サンプル中に存在する任意のＩ ｇｊＣクツス抗体が糸状のアレクゲンに結合するに十分な時間イアｄＰエペート される。

装置１４を液体試料から取り出し、洗浄した後、ヒトＩｇＥクラス抗体と反応性 を有する前記放射性標識を付された第二〇抗体を含む溶液とイン中エペートされ る。

に、内部部分を切シｌｌ１Ｌシ、糸２１の背後に開放領域を与えることができる 。これＫより、背景Ｏ不存在によ〕改良された感度が与えられる。例えば、支持 体２０が放射活性第二抗体溶液にインｌＩＰ、Ｓベートされた際に、保持するこ とができる。糸２４の背部に、切）抜き部分２６を利用することにより、支持体 ２０により吸収された放射活性は引続く糸の分析を余り妨害することがない。

好ましい実施態様によって、放射活性の量はオートラジオ−グラフによ請求めら れる。第３図及び第４図に示される如く、装置１４は標準Ｘ＠フィル＾２８ｆｉ えば一ムに社の０ｒｔｈｏ　ＨＸ　＠フィルムの近くに糸１８が７吸収性光子発 生リン光スクリーン３０ｆＭＩえばＥＫＬ錦ｅｘ（Ｐｌｃｋｓ、ｒ　Ｃｏｒｐｏ ｒａｔｉｏｎ社製）或いはプ中ヤナン（Ｂｕ＠ｍｏｙｓ　）等の「稀土類オ中シ 硫化物増強スクリーンを用いたＸ−Ｒａｙ　露出減少」〔（′″Ｘ−Ｒａｙ　Ｅ ｇｏｓｕｒｓ　Ｒ＠ｄｕ＠ｔｌｏｎ　Ｕｓｌａｇ　Ｂａｒｅ　−Ｅａｒｔｈ　０ ｘ）ｒｓｕｌｆｉｄｓ　Ｉｎｔ＠ｎｓｉｆｙｉｎｇ　Ｓｔｒｅａｍｓ　’、Ｂｕ ａｈａａａｎ　ａｔ　ａｌ。

Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ　１０５　：　１８５−９０（１９７２））を次いで装置１ ４とフィルム２８の間に置く。或いは又、二つのりン光スクリーンでフィルム２ ８及び装置１４を挾んでもよい（図示せず）。この組立て物３２を暗室において フィルムを糸状の任意の放射活性に曝露するに十分な時間保持し九後現象を行う 。糸上の放射活性が２０．０００　＠ｐｍを超える場合には、１時間の曝露時間 で十分である。

同様１１ｃ　、　５，０００〜２０，０００　ａｐｒｍに対しては、８時間の曝 露時間が好ましく、１．０００〜５．０００＊Ｐｍ　Ｋ対してｔ！、２１時間を 使用することができる。曝露時間の長さは勿論フィルムの種類、リン元スクリー ンその他のパラメーターに応じて勿論異る。

第５図は、組立て物３２に配置する際の曝露からの３本の曝ｊ！１１３Ｇを有す るフィルム２Ｂを示す。これらの線３４は液体試料が各々の相補的糸１８上に被 覆されたアレルゲンに特異的なＩｇＥ　／クス抗体を含有していたことを示す。

上記説明より、本発明の診断装置が液体試料中の多数のアレルゲンの同時測定を 可能にすることによｐ有効なアレルギースクリーニング装置を提供することが理 解されるであろう。更に、この装置は展造が簡単であるのみならず、分析が容易 且つ安価である点にかいて極めて経済的である。

本発明の特別の形態について例示し、説ｔＩＩＡ管行ったが、各種修正を本発明 の趣旨及び範囲から離れることなく行われることが明らかであろう。

国際調査報告

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １．　液体試料の結合測定法によ為診断分析用診断装置において、該診断装置は 鋏液体試料と同時接触するための間隔を開けられて支持された複数の糸よシなり 、鎖糸の少なくとも二本は該測定法の複数、−同時測定のために臭った測定法の 結合測定成分で被覆されていることを特徴とする診断装置。 ２、　糸が、多糖撃を必須成分としてなる請求の範囲第１項記載の診断装置。 ３、該液体試料が、複数のアレルゲン−特異性ＩｇＥ゛り２ス抗体について分析 され、且つ該結合測定成分が異ったＩｇｌＣり２ス抗体に対して特異的なアレル ゲン組成物を含んでなる請求の範囲第１項記載の診断装置。 ４、各アレルゲン組成物が、共有結合により糸に結合している請求の範囲第３項 記載の診断装置。 ５、該共有結合が、ハロゲン化シアンにより形成さ６、鎖糸に結合したＩｇＥク ラス抗体の検出及び測定のために更に該ＩｇＥと反応性の標識化抗体を含んでな る請求の範囲第３項記載の診断装置。 ７、液体試料中の生物学的試薬の存在を検出する方法において、鋏方法が該液体 −試料をその少なくとも２本の糸が異った測定法からの結合測定成分で被覆され ている一定の間隔を置いて支持された複数の糸とイン中エペートさせる工程、及 び−系を分析して、何れの　。 生物学的試薬が鎖糸状に被覆さ、れた該結合測定成分と相互作用するかを同時に 決定する工程を含むことを待合測定成分が抗原である請求の範囲第７項記載の方 法或いは請求の範囲第１項記載の診断装置。 ９、液体試験試料中に複数のアレルゲン−特異性ＩｇＥクラス抗体の存在をスク リーニングする方法において、鋏方法は、鋏試験試料を一定の間隔を置かれて支 持体上に支持され、ａ　ＩｇＥり２ス抗体に特異的なアルルゲンで被覆された複 数の糸とイン中ユベートさせる工程、鎖糸を試験試料から取り出す工程、鎖糸を 該ＩｇＥクツス抗体と反応性のある標識化抗体を含有する溶液とイン中ユベート させる工程、鎖糸を該溶液から取９出す工程、及び鎖糸を分析して該標識化抗体 の存在を測定する工程を含み、鎖糸の少なくとも２本が異ったアレルゲンで被覆 されていることを特徴とする方法。 １０、鋏１ｇＥクラス抗体と反応性をＭする標識化抗体が放射活性標識、螢光標 識或いは＃累標識を用いて標識化されている請求の範囲第９項記載の方法或いは 請求の範囲第６項記載の装置。 １１　＠脆化抗体の存在についての糸の分析が糸を該標識化抗体により該フィル ムを照射するために糸を７イルムの近くに置くことによって行う請求の範囲第７ 項又は第９項記載の方法。 １２、結合測定方法により液体試料の診断分析ＫＶ用な装置を作成する方法にお いて、咳方法が結合測定の成分で糸を被覆する工程及び複数の糸を支持体に離し て付着する工穫よｐな夕、鎖糸の少なくとも２本が異った測定法の成分で被覆さ れていることを特徴とする方法。 １３、該液体試料が複数のアレルゲン−特異性ＩｇＥクツス抗体について分析さ れる請求の範囲第１２項記載の方法において、該結合測定法の成分が該１ｔＥ／ クス抗体の少なくとも−クに対して特異的なアレルゲン組成物を含んでなシ、咳 アレルゲン組成物が鎖糸に＃ｃ−１ｒ的に結合している方法。