JPS5852251A - ジペプチドエステルとアミノ酸エステルとの付加化合物の処理方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ジペプチドエステルとアミノ酸エステルとの
付加化合物の処理方法に関するものである。更に許しく
けジペプチドエステルとアミノ酸エステルとの付加化合
物を含む水性懸濁液を有機溶媒で分離したのち酸で分解
゛して両成分を分離する方法に関するものである。

ジペプチドエステル、例えばＮ−ベンジルオキシカルボ
ニル−α−Ｌ−アスパルチル−し−７゜ニルアラニン低
級アミノ酸エステルとアミノ酸エステル、例えばフェニ
ルアラニン低級アルキルエステル、やバリン低級アルキ
ルエステルなどとの付加化合物は、甘味剤であるａ−Ｉ
、−アスパルチル−し−フェニルアラニン低級アルキル
エステルへの中間体として、あるいはラセミ体アミノ酸
エステルの光学分割の中間体などとして有用な化合物で
ある。

この様な付加化合物ＦｉＮ−保護アミノジカルボン酸と
アミノ酸エステルを水性媒体中、蛋白分解酵素の存在下
で反応させることによシ（％開昭５３−９２７２９．特
開昭５４−９２２６）％あるいはジペプチドエステルと
アミノ酸エステルとを水などの溶媒中で反応させること
（特開昭５５−１９２３４゜特開昭５５−７３６４４）
などによシ得られる。これらの反応では付加化合物は溶
媒中へ固相の形て析出する。従ってこの様な溶媒、特に
水性媒体からこの付加化合物をいかに効率よく回収し、
構成成分であるジペプチドエステルとアミノ酸エステル
処分解して両成分を分離するかは重要な諌題である。

前述した公知の方法ではこの付加化合物の分離をｆ過で
行ない、ジペプチドエステルへの分解及びアミノ酸エス
テルとの分離を酸水溶液による分解及びそれに引続くｆ
過又は有機溶媒による抽出によって行っている。また付
加化合物をト過によって分離後水と有機溶媒との混合溶
液に溶解し、Ｈ−型イオン交換樹脂で処理して分解分離
することも開示されている。

一方この付加化合物を溶媒抽出によシ、有機溶媒中への
均一溶液として分離することも知られている（％開昭５
４−１１２９５　）。

しかしながら抽出を効率よく行う丸めには、水と相分離
可能で付加化合動勢に対する溶解力の大きい有機溶媒を
使用する必要があるが、この様な有機溶媒は酢酸エチル
尋のエステル類やクロロホルム、二塩化エタン等のＩ・
ロゲン化アルキル類等比較的限られている。しかし、エ
ステル類につい食品原料となシ得る付加化合物の処理工
程での使用は極力避けるべきである。

一方付加化合物等圧対する溶解力の小さい有機溶媒を用
いるとすれば、溶解による抽出を前提とする限シ大量に
使用することが必要と々シ、経済上本問題がある。

本発明者らはこの様な問題点を解決するため、付加化合
物の分離、分解及び分解生成物の分離等について更に検
討した結果、水相と有機溶媒相の二相系において付加化
合物の結晶が同相状態で有機溶媒相に取シ込まれること
及びこの有機溶媒相を水相と分離後水及び酸で処理する
と分解生成するジペプチドエステルは有機溶媒相に残り
、アミノ酸エステルは水相に移ることを見出して本発明
を完成した。

即ち本発明は一般式 で表わされるジペプチドエステルとアミノ酸エステルと
の付加化合物（式中Ｒ，及びＲ４は低級アルキル基、Ｒ
２及びＲ３はアミノ酸の側鎖基、Ｘは核に置換基を有す
ることのあるベンジルオキシカルボニル基であシ、口は
１又は２である）を同相で含む水性混合液に水と二相を
形成することのできる有機溶媒を加えて混合し、この付
加化合物の実質的部分を固相で含む有機溶媒相と水相と
の二液相を形成させ、有機溶媒相を水相から分離し、有
機溶媒相に水及び酸を加えて混合接触させ、一般式 で表わされるジペプチドエステル（式中Ｒ３％　Ｒ４、
Ｘ及びｎは前記同様である）を含む有機溶媒相と、一般
式 で表わされるアミノ酸エステル（式中Ｒ１及びＲ。

は前記同様である）を含む水相との二液相を形成させ、
有機溶媒相と水相を分離することを特徴とするジペプチ
ドエステルとアミノ酸エステルとの付加化合物の処理方
法を提供するものである。

負が１のときアスパラギン酸の−が２のときプルタミノ
酸の骨格を含むものである。

Ｒ２およびＲ４はそれぞれ互に共通又は別異のメチル基
、エチル基、プロピル基、ブチル基等の低級アルキル基
である。

Ｒ２およびＲｓ　　ｕそれぞれメチル基、イソプロピル
基、イソブチル基、インアミル基、ベンジル基、ｐ−ヒ
ドロキシベンジル基尋のアミノ酸の側鎖基であシ、互に
共通のときと別異のときを含む。

Ｒ３としてはベンジル基が’１ＩｆＫｔＦＦ−＆　Ｌい
。

ｘＦｉベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベン
ジルオキシカルボニル基の様な核に置換基を有すること
のあるベンジルオキシカルボニル基である。

一般式（１片表わされる付加化合物を固相で含む水性混
合液は一般式 ％式％ で表わされるアミノ酸エステルと一般式で表わされるＮ
−保護アミノジカルボン酸（式中Ｘ及びｎは前記同様の
意味を表わす）を水性媒体中、蛋白分解酵素の存在下で
反応させて、水性媒体中に一般式（１）で表わされる付
加化合物を析出させることによ如調製することができる
。仁の場合Ｒ，はａＸとＲ４ＦｉＲ４と共面である。ま
た仁の場合、一般式（２）で表わされるアミノ酸エステ
ル及び一般式（転）で表わされるＮ−保農アミノジカル
ボン酸として、各々のＬ一体を用いてもラセミ体を用い
ても得られる一般式（１）で表わされる付加化合物のジ
ペプチド部分は常にＬＬ−型である。゛アミノ酸エステ
ル部分は用いる一般式（２）で表わされるアミノ酸エス
テルがＬ一体のときはこれに従うが、ラセミ体のときＦ
ｉｌ”ｌとんどＤ−型である。

なお以下一般式（１）で表わされる付加化合一、同（Ｉ
Ｉ）で表わされるジペプチドエステル、同（至）で表わ
されるアミノ酸エステル及び同（財）で表わされるＮ−
保護アミノジカルボン酸はそれぞれ付加化合物、ジペプ
チドエステル、アミノ酸エステル及びＮ−保護アミノジ
カルボン酸と云う。

上述の方法による付加化合物の調製は特開昭５３−９２
７２９号公報等に記載されている公知の条報及び同５５
−７３６４４号公報岬に開示されている様ニシヘフテド
エステルを水性溶媒中てアミノ酸エステルと反応させる
仁とによっても調製できる。

この場合、ジペプチドエステルのＬＬ一体を用いてラセ
ミ体のアミノ寿Ｘ＊＊酸エステルと反応させると主にＤ
一体のアミノ酸エステルと付加化合物を形成する。この
ようにして得られ良付加化合物を含む水性混合液を本発
明に従って処理すれは、とができる。

本発明で用いる水性混合液中の付加化合物に対する水の
量は付加化合物１重量部に対して約０．３ないし、約２
０重量部、好ましくは約０．５ないし約１５重量部、最
も好ましくは約１ないし約１０重量部である。

本発明の方法において使用される有機溶媒としては、ト
ルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類ｎ−ヘキサン、
ｎ−へブタン、シクロヘキサン勢手 の脂肪族系炭化水素類、ジーｔルエーテル、シイラブル
ビルエーテル等のエーテル類、メチルイソブチルケトン
、ジブチルケトン等の水と二相を形成することのできる
ケトン類、又は、これらの混合液を好適な例として挙け
ることができる。これら以外の有機溶媒についても二相
の形成を妨げない程度であれば、これら有機溶媒と混合
して使用してもさしつかえない。

本発明では付加化合物を有機溶媒中へのスラリーとして
分離して処理するものであるから、有機溶媒は付加化合
物の実質的部分を溶解する程多量に用いるものでなく、
その添加量は付加化合物１重量部に対して約１ないし約
２０重量部、好ましくは約２ないし約１５重量部、最も
好ましくは約３ないし約１０重量部である。

本発明の方法において、ジペプチドエステルのＸがベン
ジルオキシカルボニル基の場合には有機溶媒としてトル
エンを用いると後述の様に容易に回収１反復使用ができ
るので特に有利である。

本発明で付加化合物の実質的部分を同相で含む有機溶媒
相として分離した有機溶媒相に添加する水の量は付加化
合物１重量部に対して後述する酸から由来する水と合せ
て約０．５ないし約１５重量部好まじくは約１ないし約
１０重量部である。

酸を水溶液として用いるときｌｌ１１必要な水を酸の水
溶液の形で添加してもよい。そのときは水を別個に添加
しなくてもよい。

本発明の方法において付加化合物と反応させるために水
とともに添加する酸としては、無機又は有機のブロンス
テ、ド酸を用いる。無機のブロンステッド酸の例として
は塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸尋を挙けることがで
きる。有機のブロンステ、ド酸の例としてはギ酸、酢酸
、クエン酸、トルエンスルホン酸等をｉけることができ
る。これらの酸は水溶液の形で用いることができる。そ
の濃度には格別の限定はないので、水の添加量が前述し
た範囲となる様他律的に定めてよい。

またＨ−型陽イオン交換樹脂等の固体の酸も使用するこ
とができる。この場合、この様な固体酸は金物に対する
酸の使用量は本発明が本質的に付加（ただし固体酸を用
いるときはアミノ酸エステルへ は固体酸の水素イオンとイオン交換さ畳て液相系外へ出
る。）から、化学量論量又はそれ以上即ち付加化合物１
モルに対して約１ないし約１００当量、好ましくは約１
ないし約２０当量、最も好ま必要としない場合もあシ得
るので、その様な場合は化学量論以下の量を用いること
を妨げるものでない。

本発明では付加化合物の分解後のジペプチドエステルの
分離は通常有機溶媒中へのスラリーの形で行われる。し
かし有機溶媒として水と二相を形成することのできるケ
トン類を用いる場合はそれらの溶液の形で行なうことが
できる。

本発明の方法において付加化合物を処理するときの温度
は通常的０ないし約１００℃、好ましくは約５ないし約
８０℃である。付加化合物の分解反応は攪拌が十分であ
れに、通常１０分以内以内程度で終結する１、 但し、保護基Ｘが比較的加水分解され易い基、例えばｐ
−メトキシベンジルオキシカルボニル基の様な場合は、
＊極的にこれらの基の離脱を同時に行なう場合及びその
離脱を許しても支障のない場合を除き、これらの基の離
脱を起さない様１反応時間及び反応温度に注意する必要
がある。

付加化合物は、同体であるが酸との接触によって分解さ
れて、ジペプチドエステル及びアミノ酸エステルと酸と
の塩となる。ジペプチドエステル＃−ｉ、酸性水溶液に
対する溶解度が小さいので、その実質的部分がスラリー
又は溶質として有機相に存在する。一方アミノ酸エステ
ルの塩は酸性水溶液によく溶解するので、液相中に溶は
込む。

固体酸を用いたときはその塩として沈殿する。

こうして反応系は付加化合物をスラリー又は溶質として
含む有機相と通常アミノ酸エステルの塩のアミノ酸エス
テル固体酸塩からの回収吃慣用の手段で容易にできる。

有機スラリー相からは慣用の方法、例えば濾過。

遠心沈降もしくは有機溶媒を留去すること＠−によル、
ジペプチドエステルを回収することができる。

また、有機スラリー相Ｆ！、そのまま次工程において脱
係―基反応尋を行うことができる。特にジペプチドエス
テルの一般式（１）中のＸがベンジルオキ力 シ兇ルボニル基で有機溶媒がトルエンの場合にはが水相
に移るので効果的ＫＮ−保膜基の離脱を行なうことがで
きると同時に、離脱した保饅基はトルエンとなり、これ
は溶媒のトルエンと共通であるので、この離脱反応で溶
媒を汚染することがなこの方法は付加化合物の一般式（
１）中のａｔ及びＲ４がメチル基、　ｎが１の場合に適
用して低カロリー甘味剤であるアスパルテームを製造す
る工業的方法として特に有効である。

本発明の方法において有機相から分離した酸性水相から
Ｉ／ｉ、慣用の方法、例えばこれを濃縮してアミノ酸エ
ステルを塩の形で晶出させるとか、或は液性をアルカリ
性とした後、適当な有機溶媒で抽出する等の方法により
てアミノ酸エステルを回収することができる。固体酸塩
からのアミノ酸エステルの回収も慣用の手法で容易にで
きる。

なお、本発明で用いる原料の成分である付加化合物［有
］を前述したｑ！ｊＷ１昭５３−９２７２９号の方法で
得た場合には、そのジペプチドエステル部分はＬＬ−型
であるが、アミノ酸エステル部分けＬ−型の場合、Ｄ−
型の場合及び両者の混合型の場合があシ得る。本発明の
方法はこのいずれの場合にも適用可能である。またジペ
プチドエステル部分がＤＤ−型、ＤＬ−型、又はＬＤ−
型の場合にも適用可能である。

本発明で得られるジペプチドエステルは、ペプチド合成
での中間体として、それ自体有用であるが、そのアミノ
基の保糎基Ｘを離脱させて得られるジペプチドエステル
も亦有用な化合物である。

例えば、すでに述べた様にα−Ｌ−アスパルチル−し一
フェニルアラニンメチルエステルは甘味剤として有用で
ある。ｔ＋ジペプチドエステル、とラセミ体アミノ＠＠
ｄ９＠＆エステルとを混合して形成した付加化合物から
は、光学公理を受けたアミノ・尋＠［相］酸エステルを
得ることができｂので、光物を溶解する必費がないので
、少量の有機溶媒を用いて効果的に付加化合物の処理を
行うことができるので、工業的に有利なことは明らかで
ある。

実施例Ｉ Ｎ　−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−７スパラギン酸
５３．４５ｆとＤＬ−フェニルアラニンメチルエステル
塩酸塩１０７．８４　Ｆを２１の７′）スコにとり蒸留
水４００　Ｒ４，・５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液ｉ　ｏ
　ｏ　ｍｔおよび粗製サーモライシン（サーモアーゼＰ
Ｓ−１６０，商標、大和化成■製）　７．２ｆ、酢酸カ
ルシウム・−水塩１．３ｆを加え、４０℃で攪拌しなが
ら反応させた。８時間抜反応混合液は反応生成物を懸濁
状で含む水性混合液となった。この水性混合液にトルエ
ン７００４を加え％　４０℃で２０分間攪拌混合した。

攪拌を止めると固形物を懸濁状で含有するトルエン相と
均一透明な水相とに分離した。固形物は、一部サンプリ
ングして酢５３−９２７２９号に開示されたデーターと
一致することから、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル費α
−Ｌ−アスパルチル−し−フェニルアラニンメチルエス
テル（以下Ｚ−ＡＰＭと云う）と主に■）一体のフェニ
ルアラニンメチルエステル（以下Ｄ−ＰＭという）との
１：１付加化合物であることを確認した。

トルエン相は水相から分離したのち、ＩＮ−塩酸水溶液
５００　ｗｔｌを加え６０℃で１時間攪拌混合した。約
２０分間静置したのち、固形分を含むトルエン相を均一
透明水相から分離した。

トルエン相は２００４の蒸留水で６０℃で２回洗浄後、
室温まで冷却し、トルエン相の結晶をガラスフィルター
により減圧下に戸取し、乾燥後Ｚ−ＡＰＭ７３．４２ｆ
（原料からの総合収率８５．２％、純度９９．４１）を
得た。

実施例２ Ｎ−ヘンシルオキシカルボニル−α−Ｌ−アスパラギン
酸５３．４５　ｆとＬ−７エラルアラニンメチルエステ
ル塩酸塩８６．２７　Ｆを２１のフラスコにとり、蒸留
水３５０ｙ＋ａ／、５Ｎ−水酸化す）　ＩＪウム水溶Ｗ
１９（１−／および、粗製サーモライシン（サー七ア−
七Ｐｇ−１６０，商標、大和化成ｔｍ製）　４．８ｆ。

酢酸カルシウム−水塩ｏ、９ｐを加え４０℃で攪拌しな
がら反応させた。５時間後に反応混合液にトルエン６０
０４を加え４０℃で２０分間攪拌混合した。攪拌を止め
ると固形物を懸濁状で含有するトルエン相と均一透明な
水相とに分離した。固形物は、一部サンプリングして酢
酸エチル−ｎ−ヘキサンよシ再結晶後分析を行い１元素
分析、ＮＭＲ。

旋 ＩＲおよび埠光度が特開昭５３−９２７２９号に開示さ
れたデーターと一致することから、Ｎ−ベンジルオキシ
カルボニル−α−Ｌ−アスパルチル−し一フェニルアラ
ニンメチルエステル（Ｚ−ＡＰＭ　）とＬ−７エニルア
ラニンメチルエステル（以下Ｌ−ＰＭ　と云う）との１
＝１付加付加物であることを確認した。

た。約２０分間静置したのち固形分を含むトルエン相と
均一透明水相とを分離した。室温まで冷却彼トルエン相
の結晶をガラスフィルターにｌ）、減圧下にＶ取し乾燥
ｉＺ−ＡＰＭ　７３．２７ｆ（原料かう（ｉＤｉｉｌ１
軍８５．３％、純ｆｆ　９９．７％）ｔ−得り。

実施例３ Ｚ−ＡＰＭとＤ−ＰＭとの１：１付加化合物４．２５１
をトルエン３５ｄＫｌ！濁させた液にＩＮ−塩酸水溶液
ｌＯ−および蒸留水２０−を加え６０℃で３０分間攪拌
した。約２０分間靜置後、固形分を含むトルエン相を均
一透明な水相から分離した。

トルエン相は２０−の蒸留水で２回洗浄後、ロータリー
エバポレーターで溶媒を留出させＺ−ＡＰＭ２．９２ｆ
（純度９９．７哄）を得た。

実施例４ トルエンのかわｐＫジインプロヒルエーテルを用いた以
外は、実施例３と同様にして操作を行った。固形分を含
むイソプロピルエーテル相は、ロータリーエバポレータ
ーで溶媒を留去させＺ　−ＡＰＭ２．９６　Ｆ　（純度
９８０チ）を得た。

実施例５ 付加化合物のトルエン懸濁液と塩酸水溶液との攪拌混合
の温度および時間を２５℃および６０分実施例６ 実施例３において塩酸のかわシに９５％硫酸０．７１５
ｍを用い、蒸留水２０ｍ１　のかわシに同２６．３ｍを
使用した以外Ｆｉ：＊施例３と同様にして操作を行った
。Ｚ−ＡＰＭ　２．９６Ｆ（純度９９．６　％　）を得
た。

実施例７ ９５チ硫酸のかわりに酢酸０．７３３ｍ／を用いた以外
は実施例６と同様にして操作を行った。２−ＡＰＭ　３
．０６Ｆ（純度９１゜７１りを得た。

実施例８ トルエンのかわＪ）Ｋｎ−へブタンを用いた以外は、実
施例３と同様にして操作を行った。

Ｚ−ＡＰＭ　３．１２Ｎ（純度８９．６　％　）を得た
。

実施例９ Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−α−Ｌ−アスパチルー
Ｌ−フェニルアラニンメチルエステルのナトリウム塩５
．Ｏｆを２０−の水に溶解し、この液をＤＬ−バリンメ
チルエステルの塩酸塩５．Ｏｆを含む２０−の水溶液中
に攪拌しながら滴加した良 ところ１反応生成物が析出し反応混合液はを錠なうた。

この懸濁液を室温に２時間静置したのち、これに５０４
のメチルイソブチルケトンを加えて攪拌静定したとζろ
、反応生成物を含むメチルイソブチルケトン懸濁相と均
一透明な水相とに分離した。メチルイソブチルケトン懸
濁相を水相から分離し、これにＩＮ−塩酸水、溶液１０
４および水２０＋ａ／を加え６０℃で３０分間攪拌した
のち静定したところ、均一なメチルイソブチルケトン相
と均一な水相とに分離した。

メチルイソブチルケトン相からロータリーエバポレータ
ーでメチルイソブチルケトンを留去し。

Ｚ−ＡＰＭ　４．５ｆ　（純度９９．５　％　＞を得た
。

一方水相Ｆｉ、炭酸ナトリウムを加えてｐＨ８としたの
ち、ジクロルメタンで抽出した。ジクロルメタン相は無
水硫酸マグネシウムを添加して乾燥、塩化水素ガスを吹
込んだのち濃縮した。更にこれｋＣジエチルエーテルを
加えて結晶を析出させ、これを戸数した。Ｄ−バリンメ
チルエステル塩酸塩の結晶１．６Ｆ（光学純度６９チ）
を得た。

実施例１０〜１３ Ｚ−ＡＰＭとＤ−ＰＭ＋７）１　：　１付加化合物のか
わシにＺ−ＡＰＭと７エニルアラニンメチルエステル以
外の他のアミノ酸エステルとの１：１付加化合物５．０
　Ｏｆを用いて実施例３と同様の操作を行り九。

その結果を下表に示した。

実施例　　　付加化合物　　　瞭Ｚ−ＡｐＭ（純度）１
０　　　Ｄ−バリンメチルエステル　　　３．７６　ｙ
　（９８，３嗟）１１　　　Ｌ−アラニンエチルエステ
ル　３．８２＃（９９，４％）１２　　　Ｄ−９イシン
メチルエステル　　３．７１　ｆ　（９９，１チ）実施
例　　付加化合物　　［２−ＡＰＭ（純度）１３　　　
Ｌ−ｆａシン工ｆルエステル　３．１１ｊＦ（９８，４
９６）実施例１４ チルーＬ−７エニルアラニノエチルエステル（２−ムｐ
ｇ）とＤ−Ｊ？Ｍの１：ｌ付加化合物５ｏ・０＋ｆを用
いた以外は、実施例３と同様にして操作を行った。Ｚ−
ＡＰＩを３．４２Ｆ（純度９８．８９Ｇ）得た。

実施例１５ Ｚ−ＡＰＭとＤ−ＰＭの１：ｌ付加化合物のかわりエス
テ＃（ＰＭＺ−ＡＰＭ）とＤ−ＰＭの１：ｌ付加化合物
５．０Ｏｆ　　を用いトルエン懸濁液と塩酸水溶液との
接融温度を２０℃にした以外は実施例３と同様にして操
作を行った。

ＰＭＺ−ＡＰＭを３．４！Ｍ（純度９７．２ｓ）得た。

特許出願人　　東洋曹達工業株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　一般式 で表わされるジペプチドエステルとアミノ酸エステルと
   の付加化合物（式中式及びＲａ　Ｆｉ低級アルキル基、
   Ｒ−及びＲ３けアミノ酸の側鎖基＊　ＸＦｉ核に置換基
   を有するこ七のあるペンジルオ中ジカルボニル基であ！
   ＩＦ、　ａｔｆｌ又は２である）を同相で含む水性混合
   液に水と二相を形成するととのできる有機溶媒を加えて
   混合し、この付加化合物の実質的部分を固相で含む有機
   溶媒相と水相との二液相を形成させ、有機溶媒相を水相
   から分離し、有機溶媒相に水及び酸を加えて混合接触さ
   せ、一般式 で表わされるジペプチドエステル（式中ＲｈＲ４，Ｘ及
   びｎ＃′ｉ′前記同様である）を含む有機溶媒相と、一
   般式 ％式％ で表わされるアミノ酸エステル（式中Ｒ，及びＲ言ハ前
   記同様である）を含む水相との二液相を形成させ、有機
   溶媒相と水相を分離することを特徴とするジペプチドエ
   ステルとアミノ酸エステルとの付加化合物の処理方法。 （２）水と二相を形成することのできる有機溶媒が水と
   二相を形成することのできるケトン類。 脂肪族系もしくけ芳香族系の炭化水素類、工（３）水と
   二相を形成することのできる有機溶媒としてトルエンを
   用いる特許請求の範囲第１項記載の処理方法。 で用いる特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれか
   の項記載の処理方法。 （５）水と二相を形成することのできる有機溶媒を付加
   化合物１重量部に対して約１ないし約２０重量部の量加
   える特許請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかの項
   記載の処理方法。 （６）水性混合物中の水の童が付加化合物１重量部に対
   して約１ないし１０重量部である特許請求の範囲第１項
   ないし第５３３１のいずれかの項記載の処理方法。　　
   　− （７）　　酸として無機のブロンステッド酸を用いる特
   許請求の範囲第１項ないし第６項のいずれかの項記載の
   処理方法。 （８）酸として有機のブロンステッド酸を用いる特許請
   求の範囲第１項ないし第７項のいずれかの項記載の処理
   方法。 （９）酸の使用量が付加化合物１モル当シ約１ないし約
   １０当量である特許請求の範囲第１項ないし第８項のい
   ずれかの項記載の処理方法。 叫　酸とともに添加する水の量が付加化合物１重量部当
   シ約１重量部ないし約１０重量部である特許請求の範囲
   第１項ないし第９項記載の処理方法。 ａυ　付加化合物のジペプチド部分がＬＬ−１である特
   許請求の範囲第１項ないし第１Ｏ項のいずれかの項記載
   の処理方法。 Ｑａ　　Ｒｔ　　及びＲ４がメチル基Ｔｈ　Ｒ，がベン
   ジル基ｂ　Ｒ３がメチル基、イソプロピル基、イソブチ
   ル基、ベンジル基又Ｆｉｐ−ヒドロキシベンジル基、Ｘ
   がベンジルオキシカルボニル基又Ｆｉｐ−メトキシベン
   ジルオキシカルボニル基であり、ｎが１である特許請求
   の範囲第１項ないし第１１項のいずれかの項記載の処理
   方法。 斡　水性混合液が一般式 ％式％ で表わされるアミノ酸エステル（式中Ｒ１ｔｉ低級アル
   キル基ｓ　Ｒ１はアミノ酸の側鎖基である）と一般式 で表わされるＮ−保護アミノジカルボン酸（式中ＸＦｉ
   核に置換基を有することのあるベンジルオキシカルボニ
   ル基であ）ｎはｌ又は２である）を水性媒体中、蛋白分
   解酵素の存在下で反応させて一般式 で表わされるジペプチドエステルとアミノ酸エステルと
   の付加化合物（式中Ｒ１ｅ　Ｒ意、　Ｘ及びｎは前記同
   様でありｓＲｓ及びＲ４はそれぞれＲ，及びＲ１と同一
   の基である）を生成させα◆　付加化合物、ジペプチド
   エステル、アミノ酸エステル及びＮ−保護アミノカルボ
   ン酸の一般式中のＲ１及びＲ４がメチル基又はエチル基
   ％　Ｒ，及びＲ３がベンジル基、Ｘがベンジルオキシカ
   ルボニル基又１ｌｔｐ−メトキシベンジルオキシカルボ
   ニル基であシ、ｎが１である特許請求の範囲第１３項記
   載の処理方法。 （至）用いるアきノ酸エステル及びＮ−保護アミノジカ
   ルボン酸が５それぞれ←立にＬ−、型又はＬ−型とＤ−
   型の混合物である特許請求の範囲第１３項又は第１４項
   記−の処理衷竺・いし第１５項のいずれかの項記載の処
   理方法。 ａカ　　分離した水相からアミノ酸エステルを回収する
   特許請求の範囲第１項ないし第１６項のいずれかの項記
   載の処理方法。