JPS5852632B2 - 新規なグリセロ−ルキナ−ゼおよびその製造法 - Google Patents
新規なグリセロ−ルキナ−ゼおよびその製造法Info
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- JPS5852632B2 JPS5852632B2 JP54071459A JP7145979A JPS5852632B2 JP S5852632 B2 JPS5852632 B2 JP S5852632B2 JP 54071459 A JP54071459 A JP 54071459A JP 7145979 A JP7145979 A JP 7145979A JP S5852632 B2 JPS5852632 B2 JP S5852632B2
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- glycerol
- buffer
- glycerol kinase
- enzyme
- ions
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
-
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規なグリセロールキナーゼ（Ｇｌｙｃｅ−ｒ
ｏｌ Ｋｉｎａｓｅ ）およびその製造法に関する。
ｏｌ Ｋｉｎａｓｅ ）およびその製造法に関する。
従来より、グリセロールキナーゼとしては下記の反応を
触媒する酵素として知られている。
触媒する酵素として知られている。
反応
ＡＴＰ＋グリセリン→ＡＤＰ＋Ｌ−α−グリセロリン酸
（酵素番号２．７．１．３０ Ａ Ｔ Ｐ ： ｇｌｙ
ｃｅｒ。
（酵素番号２．７．１．３０ Ａ Ｔ Ｐ ： ｇｌｙ
ｃｅｒ。
Ｉ ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ 、常用
名Ｇｌｙｃｅｒｏｌ Ｋｉｎａ−５ｅ：以下、ＧＫと称
す） また公知のＧＫとしては、キャンシダ・ミコデルマ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ｍｙｃｏｄｅｒｍａ ）由来の酵素（Ｂ
ｉｏｃｈ−ｅｍ、Ｚ、３２９，３２０（１９５７）、同
３３３゜４７１（１９７６））、エシェリヒア・コリー
（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ）由来の酵素（
Ｊ、 Ｂｉｏｌ。
名Ｇｌｙｃｅｒｏｌ Ｋｉｎａ−５ｅ：以下、ＧＫと称
す） また公知のＧＫとしては、キャンシダ・ミコデルマ（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ｍｙｃｏｄｅｒｍａ ）由来の酵素（Ｂ
ｉｏｃｈ−ｅｍ、Ｚ、３２９，３２０（１９５７）、同
３３３゜４７１（１９７６））、エシェリヒア・コリー
（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ）由来の酵素（
Ｊ、 Ｂｉｏｌ。
Ｃｈｅｍ、、２４２．１０３０（１９６７）：］、やハ
トなどの肝臓由来の酵素（Ｍｅｔｈ ｄｓ ｉｎ Ｅ
ｎｚｙｍ。
トなどの肝臓由来の酵素（Ｍｅｔｈ ｄｓ ｉｎ Ｅ
ｎｚｙｍ。
１ｏｇｙ、５，４７６（１９６，２）、Ｂ ｉｏｃｈｅ
ｍ 、 ｚ 、＋３２９．３２０（１９５７）、Ｊ、Ｂ
ｉｏｌ、 ｃｈｅｍ、。
ｍ 、 ｚ 、＋３２９．３２０（１９５７）、Ｊ、Ｂ
ｉｏｌ、 ｃｈｅｍ、。
２１１．９５１（１９５４））が知られていた。
本発明者らは、静岡県掛用市の大豆畑土壌より分離した
放線菌Ａ２４０８株がその菌体内に、グＪセリンおよび
ＡＴＰからＡＤＰとＬ−α−グリセ０１Ｊン酸を生成す
る反応を触媒する酵素を生産することを見い出し、該酵
素を電気泳動的に単一ｒこまで精製した。
放線菌Ａ２４０８株がその菌体内に、グＪセリンおよび
ＡＴＰからＡＤＰとＬ−α−グリセ０１Ｊン酸を生成す
る反応を触媒する酵素を生産することを見い出し、該酵
素を電気泳動的に単一ｒこまで精製した。
その結果該酵素はＧＫに分類される酵素であるが、その
物理化学的性質より公知のＧＫとは異なる性質のもりで
、新規なＧＫであることを知った。
物理化学的性質より公知のＧＫとは異なる性質のもりで
、新規なＧＫであることを知った。
まず、上記の放線菌Ａ２４０８株の菌学的性状は次の通
りであった。
りであった。
■ 形態的性状
肉眼的観察の結果、熟成した胞子を着生した気菌子は褐
灰色ないし灰褐色を呈し基生菌糸は黄褐色で、黄褐色の
可溶性色素を生成する。
灰色ないし灰褐色を呈し基生菌糸は黄褐色で、黄褐色の
可溶性色素を生成する。
スターチ・無機塩寒天培地上で３０℃、１０日間培養し
観察した所見は次の通りで、またオートミール寒天培地
およびグリセリン・アスパラギン寒天培地上でもほぼ同
様な形態が観察された。
観察した所見は次の通りで、またオートミール寒天培地
およびグリセリン・アスパラギン寒天培地上でもほぼ同
様な形態が観察された。
気菌糸は直径０．６〜０．８μ、直状ないし波状で、単
純分岐をなして伸長し、多数の連鎖した胞子を形成する
。
純分岐をなして伸長し、多数の連鎖した胞子を形成する
。
胞子の連鎖は螺旋を形成し、ゆるく３〜５回まいたもの
が多く、鉤状あるいはループ状、屈曲状のものもみられ
る。
が多く、鉤状あるいはループ状、屈曲状のものもみられ
る。
胞子は球形あるいは卵形で、０．８〜１．ＯＸｌ、０〜
１５μで、その表面（ことば状の突起を有する。
１５μで、その表面（ことば状の突起を有する。
基生菌糸は分枝を有し、波状ないし屈曲状に伸長し、直
径０．５〜０．６μで、通常菌糸の分裂や胞子の着生は
みられない。
径０．５〜０．６μで、通常菌糸の分裂や胞子の着生は
みられない。
鞭毛胞子や胞子のうは形成しない。
■ ジアミノピメリン酸組成
Ｌ−ジアミノピメリン酸が検出された。
■ 培養性状
各種培地上で、３０℃、２０日間培養し、観察した所見
は第１表に示す通りである（色の表示はｃｏｌｏｒ Ｈ
ａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ第４版１９５８年、 Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍ
ｅｒｉｃａによる色の分類に従った。
は第１表に示す通りである（色の表示はｃｏｌｏｒ Ｈ
ａｒｍｏｎｙ Ｍａｎｕａｌ第４版１９５８年、 Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍ
ｅｒｉｃａによる色の分類に従った。
）■ 生理的性状
１）生育温度範囲＝１２〜４５℃
２）ゼラチンの液化：陽性
３）スターチの加水分解：陽性
４）脱脂牛乳：ペプトン化；陽性、凝固；陰性５）メラ
ニン様色素の生成：陰性 ６）炭素源の利用：Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトー
ス、Ｄ−グルコース、ｉ−イノシトール、Ｄ−マンニト
ール、ラフィノース、Ｌ−ラムノース、シュクロースお
よびＤ−キシロースの全てを利用する。
ニン様色素の生成：陰性 ６）炭素源の利用：Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトー
ス、Ｄ−グルコース、ｉ−イノシトール、Ｄ−マンニト
ール、ラフィノース、Ｌ−ラムノース、シュクロースお
よびＤ−キシロースの全てを利用する。
上記の通り本菌Ａ２４０８株は、分裂を生じない真生の
基生菌糸より多数の胞子の連鎖を有する気菌糸を生じ、
また菌糸の直径お−よび胞子の大きさ、さらにはジアミ
ノピメリン酸がＬ型であることなどより、ストレプトマ
イセス属（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙ−ｃｅｓ））こ属する
ものである。
基生菌糸より多数の胞子の連鎖を有する気菌糸を生じ、
また菌糸の直径お−よび胞子の大きさ、さらにはジアミ
ノピメリン酸がＬ型であることなどより、ストレプトマ
イセス属（Ｓ ｔｒｅｐｔｏｍｙ−ｃｅｓ））こ属する
ものである。
また本菌Ａ２４０８株は次の通りの特徴を有する。
即ち、気菌糸が褐灰色ないし灰褐色を呈し、胞子の連鎖
はゆるく３〜５回まいた螺旋を形威し、胞子の表面にと
げ状の突起を有し、基生菌糸は黄褐色で、黄褐色の可溶
性色素を生成し、糖の利用性が広く、メラニン様色素を
生成しない、などの特徴を有する。
はゆるく３〜５回まいた螺旋を形威し、胞子の表面にと
げ状の突起を有し、基生菌糸は黄褐色で、黄褐色の可溶
性色素を生成し、糖の利用性が広く、メラニン様色素を
生成しない、などの特徴を有する。
そこで、上記のような特徴を有する菌種を種々の文献よ
り検索すると、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅ−ｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ （ＴＳＰ） 〔
Ｉｎｔｅｒ、 Ｊ、 Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｃｔ−ｅｒｉ
ｏｌ、、１８．（２）、９５（１９６８））の記載中に
、ストレプトマイセス・キャナス（ハイネマン等） （
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｎｕｓ （Ｈｅｉｎｅ
ｍａｎｅｔ ａｔ、） ） （Ａｎｔｉｂｉｏｔ、
ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、 、 ３ 。
り検索すると、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅ−ｓ Ｐｒｏｊｅｃｔ （ＴＳＰ） 〔
Ｉｎｔｅｒ、 Ｊ、 Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｃｔ−ｅｒｉ
ｏｌ、、１８．（２）、９５（１９６８））の記載中に
、ストレプトマイセス・キャナス（ハイネマン等） （
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｎｕｓ （Ｈｅｉｎｅ
ｍａｎｅｔ ａｔ、） ） （Ａｎｔｉｂｉｏｔ、
ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、 、 ３ 。
１２３９〜１２４２（１９５３））が類似菌として見い
出されたもので、ストレプトマイセス・キャナスーＴＳ
Ｐ５０１７株（Ｓｔｒｏｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｎｕｓ
Ｉ ＳＦ３０１７ ）との比較実験を行ナツタ結果、形
態的、培養的および生理的諸性状において本菌Ａ２４０
８株とよく一致した。
出されたもので、ストレプトマイセス・キャナスーＴＳ
Ｐ５０１７株（Ｓｔｒｏｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｎｕｓ
Ｉ ＳＦ３０１７ ）との比較実験を行ナツタ結果、形
態的、培養的および生理的諸性状において本菌Ａ２４０
８株とよく一致した。
よって本菌Ａ２４０８株はストレプトマイセス属（こ属
するストレプトマイセス・キャナスに属スるものと同定
し、ストレプトマイセス・キャナスＡ２４０８ （Ｓｔ
ｒｅｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｎｕｓ Ａ ２４０８ ）と
称することとした（工業技術院微生物工業技術研究所、
微生物受託番号通知書「微工研菌寄第４９７７号、ＦＥ
ＲＭ−Ｐ Ａ ４９７７」）本発明者らは、放線菌
ストレプトマイセス属に属するストレプトマイセス・キ
ャナスＡ２４０８より得られるＧＫは後述する通りの理
化学的性質を有する新規な酵素であることを見い出した
。
するストレプトマイセス・キャナスに属スるものと同定
し、ストレプトマイセス・キャナスＡ２４０８ （Ｓｔ
ｒｅｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｎｕｓ Ａ ２４０８ ）と
称することとした（工業技術院微生物工業技術研究所、
微生物受託番号通知書「微工研菌寄第４９７７号、ＦＥ
ＲＭ−Ｐ Ａ ４９７７」）本発明者らは、放線菌
ストレプトマイセス属に属するストレプトマイセス・キ
ャナスＡ２４０８より得られるＧＫは後述する通りの理
化学的性質を有する新規な酵素であることを見い出した
。
またＧＫは脂質成分、例えば血清などの生体体液中のト
リグリセライドの代謝に関連する研究用試薬診断用試薬
などとして利用されるものである。
リグリセライドの代謝に関連する研究用試薬診断用試薬
などとして利用されるものである。
本発明は、上記の知見（こ基いて完成されたもので、新
規なＧＫおよびその製造法を提供することである。
規なＧＫおよびその製造法を提供することである。
本発明における使用菌としては、例えば上記の菌が挙げ
られるが、本菌だけ番こ限らず、本発明のＧＫを生産す
る菌はすべて本発明において使用することができるもの
で、また人工変異などを行なったものであってもよい。
られるが、本菌だけ番こ限らず、本発明のＧＫを生産す
る菌はすべて本発明において使用することができるもの
で、また人工変異などを行なったものであってもよい。
本発明を実施するに当っては、ＧＫ生産菌、例えばスト
レプトマイセス属に属するＧＫ生産菌を、酵素を生産す
る通常の方法で培養する。
レプトマイセス属に属するＧＫ生産菌を、酵素を生産す
る通常の方法で培養する。
培養の形態は通常液体培養で行なうが、工業的Ｏこは深
部通気攪拌培養を行なうのが有利である。
部通気攪拌培養を行なうのが有利である。
培地の栄養源としては、微生物の培養ｌこ通常用いられ
るものが広く使用され得る。
るものが広く使用され得る。
炭毒源とじては同化可能な炭素化合物であればよく、特
（こＧＫの生産性を良好となすに当ってはグリセロール
をその炭素源とすればよく、その他グルコース、シュク
ロース、ラクトース、スクーチ、モラツセツスなどを併
用してもよい。
（こＧＫの生産性を良好となすに当ってはグリセロール
をその炭素源とすればよく、その他グルコース、シュク
ロース、ラクトース、スクーチ、モラツセツスなどを併
用してもよい。
窒素源としては、利用可能な窒素化合物であればよく、
例えばコーン・スチーブ・リカー、大豆粉、綿実粉、乾
燥酵母、カゼイン加水分解物、酵母エキス、魚肉エキス
、ペプトンなどが使用される。
例えばコーン・スチーブ・リカー、大豆粉、綿実粉、乾
燥酵母、カゼイン加水分解物、酵母エキス、魚肉エキス
、ペプトンなどが使用される。
その他、リン酸塩、硫酸塩、マグネシウム、カルシウム
、カリウム、鉄、マンガン、亜鉛などの無機塩類が必要
（こ応して使用される。
、カリウム、鉄、マンガン、亜鉛などの無機塩類が必要
（こ応して使用される。
培養温度は菌が発育し、ＧＫを生産する範囲内で適宜変
更し得るが、特に好ましくは２５〜３０°Ｃである。
更し得るが、特に好ましくは２５〜３０°Ｃである。
培養時間は条件によって多少異なるが、ＧＫが最高収量
に達する時期をみはからって適当な時期に培養を終了す
ればよく、通常１〜３日程度である。
に達する時期をみはからって適当な時期に培養を終了す
ればよく、通常１〜３日程度である。
このようにして得られた培養物からＧＫを採取するので
あるが、本酵素を良好に採取するＧこはその菌体より回
収することがよい。
あるが、本酵素を良好に採取するＧこはその菌体より回
収することがよい。
例えばまずその培養物を遠心分離してその培養菌体を集
め、次いでこの菌体を超音波処理し、さらｌここれを遠
心分離してその上清液を回収し、これを可溶性塩類例え
ば硫安、硫酸す） ＩＪウムなどを用いて不純物を塩析
除去し、さらに得られた上清液を塩析し、遠心分離して
より精製されたＧＫを含有する沈澱物を回収する。
め、次いでこの菌体を超音波処理し、さらｌここれを遠
心分離してその上清液を回収し、これを可溶性塩類例え
ば硫安、硫酸す） ＩＪウムなどを用いて不純物を塩析
除去し、さらに得られた上清液を塩析し、遠心分離して
より精製されたＧＫを含有する沈澱物を回収する。
さら【ここのＧＫを精製するために、まずこのＧＫを例
えばセファデックスＧ−２５（ファルマシア社製）、バ
イオゲルＰ−２（バイオラド社製）、その他透析膜、中
空糸などを用いて脱塩処理し、次いでＤＥＡＥ−セルロ
ースなどのイオン交換体を用いるイオン交換クロマトグ
ラフィーを行なって精製すれば良い。
えばセファデックスＧ−２５（ファルマシア社製）、バ
イオゲルＰ−２（バイオラド社製）、その他透析膜、中
空糸などを用いて脱塩処理し、次いでＤＥＡＥ−セルロ
ースなどのイオン交換体を用いるイオン交換クロマトグ
ラフィーを行なって精製すれば良い。
このようにして得られたＧＫ画分は、限外濾過膜、例え
ばアミコンＸＭ−５０（アミコン社製）を用いて脱塩濃
縮せしめ、さらにこれを吸着クロマトグラフィー例えば
リン酸カルシウムゲル充填カラムにチャージして不純物
を溶出除去後、リン酸バッファーによる直線濃度勾配に
て溶出せしめてＧＫ含有画分を得、またこれを脱塩、濃
縮を行なうために限外濾過膜、例えばアミコンＸＭ−５
０にて処理し、次いでこの濃縮液を例えばバイオゲルＰ
−２００（バイオラド社製）、セファデックスＧ−１５
０（ファルマシア社製）などを用いたゲルＰＡＩＣよる
クロマトグラフィーを行なって、そのＫＧ含有画分を得
、これを凍結乾燥すればよい。
ばアミコンＸＭ−５０（アミコン社製）を用いて脱塩濃
縮せしめ、さらにこれを吸着クロマトグラフィー例えば
リン酸カルシウムゲル充填カラムにチャージして不純物
を溶出除去後、リン酸バッファーによる直線濃度勾配に
て溶出せしめてＧＫ含有画分を得、またこれを脱塩、濃
縮を行なうために限外濾過膜、例えばアミコンＸＭ−５
０にて処理し、次いでこの濃縮液を例えばバイオゲルＰ
−２００（バイオラド社製）、セファデックスＧ−１５
０（ファルマシア社製）などを用いたゲルＰＡＩＣよる
クロマトグラフィーを行なって、そのＫＧ含有画分を得
、これを凍結乾燥すればよい。
上記の如くシ、精製して得られた本発明のＧＫの酵素活
性測定法および理化学性状は次の通りである。
性測定法および理化学性状は次の通りである。
Ａ 酵素活性測定法
０．２Ｍ１−リス−塩酸緩衝液（［）Ｈ９，Ｏ） ｏ
、４ｒｎｌＯ，ＩＭグリセロ／’ ０．
０５ｍ１１０ｍＭＡＴＰ ０
．１ｍＡ１０ ｍ Ｍ ＭｇＣｌ２０．１ ｍ１ Ｏ１２５％ニトロテトラゾリウムブルー ０．１ ｍ１
１％牛血清アルブミン ０．１４ｍ１１０
ｍＭＮＡＤ ０．１ｍ１０．０
５％フェナジンメトサルフェート０．０１ｍ１グリセロ
リン酸デヒドロゲナーゼ（ベーリンガー社製： ２ｍ９
／ｍｌ、 ６５ Ｕ／ｍ９） ５ μｍ１上記各
組成を有する反応液１ｍｌを、３７℃で５分間予加温し
、これｋこＧＫ含有液５０μｌ（１０ｍＭグリセロール
含有１０ｍＭ’Ｊン酸緩衝液、ｐＨ７，５：以下ＧＬバ
ッファーと称す、にて適宜希釈）を加えて３７℃、１０
分間反応せしめ、次いで０．１ＮＨＣ１を加えて反応を
停止せしめた後、その呈色を波長５５０ｎｍ）（ｍて測
定＼て、その吸光度（Ａ３５６ ｎｍ）を求める。
、４ｒｎｌＯ，ＩＭグリセロ／’ ０．
０５ｍ１１０ｍＭＡＴＰ ０
．１ｍＡ１０ ｍ Ｍ ＭｇＣｌ２０．１ ｍ１ Ｏ１２５％ニトロテトラゾリウムブルー ０．１ ｍ１
１％牛血清アルブミン ０．１４ｍ１１０
ｍＭＮＡＤ ０．１ｍ１０．０
５％フェナジンメトサルフェート０．０１ｍ１グリセロ
リン酸デヒドロゲナーゼ（ベーリンガー社製： ２ｍ９
／ｍｌ、 ６５ Ｕ／ｍ９） ５ μｍ１上記各
組成を有する反応液１ｍｌを、３７℃で５分間予加温し
、これｋこＧＫ含有液５０μｌ（１０ｍＭグリセロール
含有１０ｍＭ’Ｊン酸緩衝液、ｐＨ７，５：以下ＧＬバ
ッファーと称す、にて適宜希釈）を加えて３７℃、１０
分間反応せしめ、次いで０．１ＮＨＣ１を加えて反応を
停止せしめた後、その呈色を波長５５０ｎｍ）（ｍて測
定＼て、その吸光度（Ａ３５６ ｎｍ）を求める。
ＧＫ１単位は、１分間１μｍｏｌｅのグリセロ−３ノン
酸を生成する活性とした。
酸を生成する活性とした。
なお活性の計算式は次の如である。
分子量ニア２０００±７２００
７２０００ （５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−１００による測
定値） ６５０００ （ＳＤＳ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄ
ｅによる測定値） 等電点＝４５ Ｋｍ値：グリセロール ４．８ Ｘ １０−５Ｍ
ジヒドロキシアセトン ６．６ Ｘ １０−’ＭＤ−グ
リセロアルデヒド３５Ｘ１０−４ＭＡＴＰ
２Ｘ１０’Ｍ基質特異性 （［） グリセリン、ジヒドロキシアセトン、Ｄ−グ
リセロアルデヒドに対する特異性 （測定方法） ０．２Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ９，０） ０．４ｍｌ
。
定値） ６５０００ （ＳＤＳ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄ
ｅによる測定値） 等電点＝４５ Ｋｍ値：グリセロール ４．８ Ｘ １０−５Ｍ
ジヒドロキシアセトン ６．６ Ｘ １０−’ＭＤ−グ
リセロアルデヒド３５Ｘ１０−４ＭＡＴＰ
２Ｘ１０’Ｍ基質特異性 （［） グリセリン、ジヒドロキシアセトン、Ｄ−グ
リセロアルデヒドに対する特異性 （測定方法） ０．２Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ９，０） ０．４ｍｌ
。
０．１Ｍグリセリン、ジヒドロキシアセトンまたはＤ−
グリセロアルデヒド０．０５ｍｌ、 １０ｍＭＡＴ
Ｐ ０．１０ｒｒｌｌ、 １０ ｍＭＭｇｃｌ。
グリセロアルデヒド０．０５ｍｌ、 １０ｍＭＡＴ
Ｐ ０．１０ｒｒｌｌ、 １０ ｍＭＭｇｃｌ。
０．１ ｒｕ１１蒸留水０．３ ｒｎｌから成る反応液
０．９５ｒｒｌｌを３７℃、３分間予加温し、これ０こ
酵素液（１０ｍＭ’Ｊン酸緩衝液、ｐＨ７，５）０．０
５ｍ１を加えて３７℃、１０分間インキュベイト後３分
間煮沸せしめて反応を停止し、３７℃に冷却後生成した
ＡＤＰを定量した。
０．９５ｒｒｌｌを３７℃、３分間予加温し、これ０こ
酵素液（１０ｍＭ’Ｊン酸緩衝液、ｐＨ７，５）０．０
５ｍ１を加えて３７℃、１０分間インキュベイト後３分
間煮沸せしめて反応を停止し、３７℃に冷却後生成した
ＡＤＰを定量した。
ＡＤＰの定量に当って、０．１ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ
７，５） ｏ、 １ ｒＩＬ４０．２ Ｍジメチルグル
タル酸−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７，５） ０．１ ｍｌ
。
７，５） ｏ、 １ ｒＩＬ４０．２ Ｍジメチルグル
タル酸−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ７，５） ０．１ ｍｌ
。
パーオキシダーゼ（０，５ｍ９／ｒｎ００．１ｍｌ、
０．２％フェノール０．１ ｍ１１０．３％４−アミノ
アンチピリン０．１ｍｌ、 １０ｍＭＭｎＣ１２０，０
５ｍｌ。
０．２％フェノール０．１ ｍ１１０．３％４−アミノ
アンチピリン０．１ｍｌ、 １０ｍＭＭｎＣ１２０，０
５ｍｌ。
１０ｍＭチアミンピロホスフェート０．０３ ｍｌ。
１ｍＭＦＡＤ０．０１ｍｌ、１０ｍＭホスホエノールピ
ルビン酸０．１ ｍｌ、ピルビン酸オキシダーゼ（１０
０Ｕ／ｍＡ；東洋醸造社製）０．０５ｍ４ ピルビン酸
キナーゼ（４４００Ｕ／ｍｌ；シグマ社製）１μ１１蒸
留水１．２６ＴＬｌからなるＡＤＰ定量用発色液０．２
ｍｌを上記ＡＤＰ生成反応終了液に加え、３７℃、１５
分間反応せしめて発色せしめ、これを５００ｎｍの波長
にてその吸光度を測定し、各基質に対する本酵素の特異
性を求めた。
ルビン酸０．１ ｍｌ、ピルビン酸オキシダーゼ（１０
０Ｕ／ｍＡ；東洋醸造社製）０．０５ｍ４ ピルビン酸
キナーゼ（４４００Ｕ／ｍｌ；シグマ社製）１μ１１蒸
留水１．２６ＴＬｌからなるＡＤＰ定量用発色液０．２
ｍｌを上記ＡＤＰ生成反応終了液に加え、３７℃、１５
分間反応せしめて発色せしめ、これを５００ｎｍの波長
にてその吸光度を測定し、各基質に対する本酵素の特異
性を求めた。
その結果は次の通りであった。基 質 相対
活性 グリセロール １００％ ジヒドロキシアセトン ７４％ Ｄ−グリセロアルデヒド ２０％ 以上の結果より、上記の基質に対して作用した。
活性 グリセロール １００％ ジヒドロキシアセトン ７４％ Ｄ−グリセロアルデヒド ２０％ 以上の結果より、上記の基質に対して作用した。
（１［）ヌクレオチドに対する特異性：ＡＴＰ＞ＣＴＰ
＞ＩＴＰ＞＞ＧＴＰ、ＵＴＰ （測定方法） 前記の酵素活性測定法における反応液中の、１０ ｍＭ
Ａ Ｔ Ｐ ０．１ ｍｌの代りに、同一濃度、同一量
のＣＴＰ、ＴＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴＰの溶液を用い、以下
同様に行なって、生成されるグリセロ−３−リン酸を定
量した。
＞ＩＴＰ＞＞ＧＴＰ、ＵＴＰ （測定方法） 前記の酵素活性測定法における反応液中の、１０ ｍＭ
Ａ Ｔ Ｐ ０．１ ｍｌの代りに、同一濃度、同一量
のＣＴＰ、ＴＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴＰの溶液を用い、以下
同様に行なって、生成されるグリセロ−３−リン酸を定
量した。
その結果は、下記の通り、すべてのヌクレオチドが基質
になり得るが、なかでもＡＴＰ 、ＣＴＰに対して特異
性が高かった。
になり得るが、なかでもＡＴＰ 、ＣＴＰに対して特異
性が高かった。
基 質 相対活性
ＡＴＰ １００％
ＣＴＰ ９２％
ＩＴＰ ４７％
ＧＴＰ １９％
ＵＴＰ １８％
至適ｐＨ：種々のｐＨ）こ対するＧＫの活性を求めた結
果、第１図に示す通りで、その至適ｐＨは９〜１０であ
った。
果、第１図に示す通りで、その至適ｐＨは９〜１０であ
った。
また、第１図中、○−○はジメルグルタル酸−ＮａＯＨ
緩衝液（ｐＨ６〜７．５）、・−・はトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７〜９）、△−△はリン酸緩衝液（ｐＨ６〜８）
、ムームはグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９〜１０．
５）を示す。
緩衝液（ｐＨ６〜７．５）、・−・はトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７〜９）、△−△はリン酸緩衝液（ｐＨ６〜８）
、ムームはグリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ９〜１０．
５）を示す。
ｐＨ安定性二種々のｐＨに対するＧＫのｐＨ安定性を求
めた結果、第２図に示す通りで、そのｐＨ安定性はｐＨ
５，５〜１０であった。
めた結果、第２図に示す通りで、そのｐＨ安定性はｐＨ
５，５〜１０であった。
またその測定法としては、１０ｍＭグリセロール含有の
ｐＨ４〜７のジメチルグルタル酸緩衝液、ｐＨ８〜９の
トリス塩酸緩衝液、ｐＨ１０〜１０．５のグリシン−Ｎ
ａＯＨ緩衝液にて３７℃、６０分間処理した後、この一
定量を用いて上記の酵素活性測定法により測定したもの
である。
ｐＨ４〜７のジメチルグルタル酸緩衝液、ｐＨ８〜９の
トリス塩酸緩衝液、ｐＨ１０〜１０．５のグリシン−Ｎ
ａＯＨ緩衝液にて３７℃、６０分間処理した後、この一
定量を用いて上記の酵素活性測定法により測定したもの
である。
二価金属イオンおよびパラ塩化水銀安息香酸（ＰＣＭＢ
）の影響 この結果より、本発明のＧＫはＭ ｇ ２＋により活性
増強され、Ｃａ２＋およびＭｎ”＃こより活性阻害され
るものである。
）の影響 この結果より、本発明のＧＫはＭ ｇ ２＋により活性
増強され、Ｃａ２＋およびＭｎ”＃こより活性阻害され
るものである。
また本酵素ＧＫは７．５Ｘ１０−６ＭのＰＣＭＢにて完
全（こ阻害された。
全（こ阻害された。
熱安定性：１０ｍＭグリセロール含有１０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７，８）の条件下、４５〜７５℃の各温度に
て１０分間処理した場合の残存活性を求めた結果は、第
３図に示す通りであって、４５℃まで安定であった。
衝液（ｐＨ７，８）の条件下、４５〜７５℃の各温度に
て１０分間処理した場合の残存活性を求めた結果は、第
３図に示す通りであって、４５℃まで安定であった。
以上の様（こ酵素化学的、理化学的性状より、本発明の
ＧＫは、公知のグリセロールおよびＡＴＰよりＡＤＰと
Ｌ−α−グリセロリン酸を生成する反応を触媒する酵素
に属するものと認められる。
ＧＫは、公知のグリセロールおよびＡＴＰよりＡＤＰと
Ｌ−α−グリセロリン酸を生成する反応を触媒する酵素
に属するものと認められる。
また、公知のＧＫとしては、前記した通り、キャンシダ
・ミコデルマ由来のＧＫ（以下Ｃ，Ｍｙ、−ＧＫと称す
）、エシェリヒア・コリー由来のＧＫ（以下Ｅ、Ｃｏ−
ＧＫと称す）、ハトなどの臓器由来のＧＫ（以下ｐｉｇ
、 −ＧＫと称す）が挙げられるが、本発明のＧＫと公
知の種々のＧＫとを比較すれば次の通りである。
・ミコデルマ由来のＧＫ（以下Ｃ，Ｍｙ、−ＧＫと称す
）、エシェリヒア・コリー由来のＧＫ（以下Ｅ、Ｃｏ−
ＧＫと称す）、ハトなどの臓器由来のＧＫ（以下ｐｉｇ
、 −ＧＫと称す）が挙げられるが、本発明のＧＫと公
知の種々のＧＫとを比較すれば次の通りである。
即ち、分子量に関しては、Ｅ、Ｃｏ−ＧＫが３０万、Ｃ
，ＭＶ、−ＧＫが２５万（分子量６万の４量体）である
ことが報告されている。
，ＭＶ、−ＧＫが２５万（分子量６万の４量体）である
ことが報告されている。
ところが本発明によって得られるＧＫは分子量が約７万
の単量体として存在しており、他の起源のＧＫと明らか
に異なる。
の単量体として存在しており、他の起源のＧＫと明らか
に異なる。
またｐＨ安定性についてはＥ、Ｃｏ−ＧＫがｐＨ６，５
〜７ 、 ｐｉｇ、 ＧＫｆＪｉｐＨ４，５〜５．５
、 Ｃ。
〜７ 、 ｐｉｇ、 ＧＫｆＪｉｐＨ４，５〜５．５
、 Ｃ。
ＭＹ、−ＧＫがｐＨ５，７で最も安定であるが、本酵素
はｐＨ５，５〜１０の広範囲にわたり安定であった。
はｐＨ５，５〜１０の広範囲にわたり安定であった。
一般にＡＴＰの関与する反応はＭｇ２＋等の二価の金属
イオンを必要とする。
イオンを必要とする。
上記したすべての起源のＧＫ共にＭｇ２＋を必要とする
が、Ｅ、Ｃ０−ＧＫおよびｐｉｇ、−ＧＫはＭｎ２＋イ
オンでも代用できる。
が、Ｅ、Ｃ０−ＧＫおよびｐｉｇ、−ＧＫはＭｎ２＋イ
オンでも代用できる。
しかし本酵素はＭｎ２＋イオンよりむしろ強い阻害をう
けた。
けた。
また基質特異性も他の起源のＧＫと異なる。
すなわち、Ｅ、Ｃｏ−ＧＫはグリセロールよりもジヒド
ロキシアセトン（こ対して２倍近くの活性を示すが、本
酵素はジヒドロキシアセトンよりもグリセロールに対し
ての特異性が高い。
ロキシアセトン（こ対して２倍近くの活性を示すが、本
酵素はジヒドロキシアセトンよりもグリセロールに対し
ての特異性が高い。
また、ヌクレオチド（こ対してはＥ、 Ｃｏ −ＧＫが
ＡＴＰのみ（こ作用するの（こくらべ、本酵素はＡＴＰ
、ＣＴＰに最もよく作用し他のＴＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴ
Ｐのヌクレオチド（こも作用した。
ＡＴＰのみ（こ作用するの（こくらべ、本酵素はＡＴＰ
、ＣＴＰに最もよく作用し他のＴＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴ
Ｐのヌクレオチド（こも作用した。
以上述べた分子量、ｐＨ安定性、二価の金属イオンの要
求性、および基質特異性等の酵素の理化学的性質のちが
いから明らかに公知のＧＫとは異なる新規なＧＫである
といえる。
求性、および基質特異性等の酵素の理化学的性質のちが
いから明らかに公知のＧＫとは異なる新規なＧＫである
といえる。
なお、本発明によって得られるＧＫは診断用酵素等に有
用に利用されるものである。
用に利用されるものである。
次いで本発明の実施例を挙げて具体的に述べるが、本発
明はこれによって伺んら限定されるものではない。
明はこれによって伺んら限定されるものではない。
実施例 １
ペプトン１．０％、グリセロール１．５％、Ｋ２ＨＰＯ
４０，１％、ＭｇＳＯ４０，０５％、ＫＣｌ０．２％か
らなる培地（ｐＨ７，０） １００ｄを５００ｍ７容三
角フラスコに分注し、１２０℃、２０分間加圧滅菌後、
ストレプトマイセス・キャナスＡ２４０８を接種し、２
６℃、３日間前培養し、これを、上記と同一組成からな
る培地２０１（滅菌後）を有する３０７容ジャーファー
メンタ−に移植して２６℃、４０時間、３００ ｒｐｍ
、通気量２０１７分の条件にて通気攪拌培養した。
４０，１％、ＭｇＳＯ４０，０５％、ＫＣｌ０．２％か
らなる培地（ｐＨ７，０） １００ｄを５００ｍ７容三
角フラスコに分注し、１２０℃、２０分間加圧滅菌後、
ストレプトマイセス・キャナスＡ２４０８を接種し、２
６℃、３日間前培養し、これを、上記と同一組成からな
る培地２０１（滅菌後）を有する３０７容ジャーファー
メンタ−に移植して２６℃、４０時間、３００ ｒｐｍ
、通気量２０１７分の条件にて通気攪拌培養した。
次いで培養後、その培養物２１を分取し、これを４℃に
て遠心分離（１５０００ｒｐｍ、１０分間）してその菌
体を回収し、この菌体をＧＬバッファー８００ｍ１に懸
濁せしめた後Ｏ℃、５分間超音波処理（装置： ＫＵＢ
ＯＴＡＩＮＳＯＮＡＴＯＲ２００Ｍ使用）して可溶化せ
しめた。
て遠心分離（１５０００ｒｐｍ、１０分間）してその菌
体を回収し、この菌体をＧＬバッファー８００ｍ１に懸
濁せしめた後Ｏ℃、５分間超音波処理（装置： ＫＵＢ
ＯＴＡＩＮＳＯＮＡＴＯＲ２００Ｍ使用）して可溶化せ
しめた。
さらにこれを遠心分離（４°ＣＪこて、１５０００ｒｐ
ｍ、１０分間）してその上清液的７６０ｒｒＬｌを得、
これ（こ５％プロタミン水溶液２３．０ｍｌを加えた後
遠心分離（４℃にて、５０００ｒｐｍ、１０分間）して
不純物を除去し、次いでその上清液的７５０−に飽和硫
安（＋）Ｈ７，５） １１２５ｍｌを加えて塩析せしめ
、これを遠心分離（４℃、１５０００ｒｐｍ。
ｍ、１０分間）してその上清液的７６０ｒｒＬｌを得、
これ（こ５％プロタミン水溶液２３．０ｍｌを加えた後
遠心分離（４℃にて、５０００ｒｐｍ、１０分間）して
不純物を除去し、次いでその上清液的７５０−に飽和硫
安（＋）Ｈ７，５） １１２５ｍｌを加えて塩析せしめ
、これを遠心分離（４℃、１５０００ｒｐｍ。
１０分間）して、その沈澱物を回収した。
さらにこの沈澱物をＧＬバッファー６２ｍ１Ｈこ溶解し
た後飽和硫安（ｐＨ７，５） ３７．２ｍｌを加えて不
純物を塩析せしめて遠心分離（４℃、１５０００ｒｐｍ
。
た後飽和硫安（ｐＨ７，５） ３７．２ｍｌを加えて不
純物を塩析せしめて遠心分離（４℃、１５０００ｒｐｍ
。
１０分間）シ、その上清液的８２ｒＩｌｌを得、さらに
これに飽和硫安（ｐＨ７，５） ２０．５ｒｒＬｌを加
え、遠心分離（４°Ｇ、 １５０００ ｒｐｍ、 １
０分間）してその沈澱物を得た。
これに飽和硫安（ｐＨ７，５） ２０．５ｒｒＬｌを加
え、遠心分離（４°Ｇ、 １５０００ ｒｐｍ、 １
０分間）してその沈澱物を得た。
次いでこの沈澱物をＧＬバッファー１１．０ｍｌに溶解
し、これを、ＧＬバッファーで充填したセファデックス
Ｇ−２５のカラム（径３×３０ｃｆｆＬ）にチャージし
、ＧＬバッファーにて溶出（２５℃、流速４０ｒｎｌ／
時間）せしめ、２８０ｎｍの吸光度を示す画分を回収し
く約２１ｍの、さらにこれを、ＧＬバッファーで充填し
たＤＥＡＥ−セルロースのカラム（径２．２Ｘ１７ｃＩ
ｒｔ）にチャージし、まずＧＬバッファー８０ＴＩｌｌ
を加えて洗浄しく流速２５ｒｄ／時間、１フラクシヨン
５８ｍの、次いで０．１ＭＫＣｌ含有ＧＬバッファー１
００ｍ１を加えて不純物を溶出せしめ（流速２５ｍ１／
時間、１フラクション５．８ ｍｏ、その後２００ｍ１
の０．１ＭＫＣｌ含有ＧＬバッファー〜２００ｍ１の０
．４ＭＫＣｌ含有ＧＬバッファーによる直線濃度勾配【
こよる溶出（流速２５ｍ１／時間、１画分５．８ ｍｌ
！ ）を行なって、そのフラクションＡ６３〜７９を回
収、併合して、溶出液９８ｍ１を得た。
し、これを、ＧＬバッファーで充填したセファデックス
Ｇ−２５のカラム（径３×３０ｃｆｆＬ）にチャージし
、ＧＬバッファーにて溶出（２５℃、流速４０ｒｎｌ／
時間）せしめ、２８０ｎｍの吸光度を示す画分を回収し
く約２１ｍの、さらにこれを、ＧＬバッファーで充填し
たＤＥＡＥ−セルロースのカラム（径２．２Ｘ１７ｃＩ
ｒｔ）にチャージし、まずＧＬバッファー８０ＴＩｌｌ
を加えて洗浄しく流速２５ｒｄ／時間、１フラクシヨン
５８ｍの、次いで０．１ＭＫＣｌ含有ＧＬバッファー１
００ｍ１を加えて不純物を溶出せしめ（流速２５ｍ１／
時間、１フラクション５．８ ｍｏ、その後２００ｍ１
の０．１ＭＫＣｌ含有ＧＬバッファー〜２００ｍ１の０
．４ＭＫＣｌ含有ＧＬバッファーによる直線濃度勾配【
こよる溶出（流速２５ｍ１／時間、１画分５．８ ｍｌ
！ ）を行なって、そのフラクションＡ６３〜７９を回
収、併合して、溶出液９８ｍ１を得た。
次いで、この溶出液を、アミコンＸＭ−５０４こて４℃
、４時間脱塩濃縮せしめて、濃縮液１０ｍ１を得、これ
を、ＧＬバッファー【こて充填したリン酸カルシウムゲ
ルのカラム（径２．ＯＸ １７．２ＣＩｒＬ）ｌこチャ
ージし、まず１００ｍ１のＧＬバッファーで洗浄後２０
０１１１１のＧＬバッファー〜２００ｍ１の１０ｍＭグ
リセロール含有１００ｍＭ’）ン酸緩衝液による直線濃
度勾配による溶出（流速２５ｒ１１１／時間、１画分６
ｍ１）を行ない、そのフラクション嵐４８〜５８（６５
ｒｕｌ）を得、さら（ここれを、アミコンＸＭ−５０に
て濃縮せしめて、濃縮液２ｒｒＬｌを得、次いでこれを
、ＧＬバッファーにて充填したバイオゲルｐ−２００の
カラム（径３Ｘ６０ｃＩＩＬ）Ｉこチャージして、ＯＬ
バッファーにて溶出（流速２５ｍ１／時間、１画分６Ｔ
Ｌｌ）せしめ、そのフラクションＡ１７〜２０を回収し
、併合し、次いでこれを凍結乾燥して精製されたＧＫ（
比活性５７．６ Ｕ／Ｔｎ９． １６．９ｍ９蛋白）を
得た。
、４時間脱塩濃縮せしめて、濃縮液１０ｍ１を得、これ
を、ＧＬバッファー【こて充填したリン酸カルシウムゲ
ルのカラム（径２．ＯＸ １７．２ＣＩｒＬ）ｌこチャ
ージし、まず１００ｍ１のＧＬバッファーで洗浄後２０
０１１１１のＧＬバッファー〜２００ｍ１の１０ｍＭグ
リセロール含有１００ｍＭ’）ン酸緩衝液による直線濃
度勾配による溶出（流速２５ｒ１１１／時間、１画分６
ｍ１）を行ない、そのフラクション嵐４８〜５８（６５
ｒｕｌ）を得、さら（ここれを、アミコンＸＭ−５０に
て濃縮せしめて、濃縮液２ｒｒＬｌを得、次いでこれを
、ＧＬバッファーにて充填したバイオゲルｐ−２００の
カラム（径３Ｘ６０ｃＩＩＬ）Ｉこチャージして、ＯＬ
バッファーにて溶出（流速２５ｍ１／時間、１画分６Ｔ
Ｌｌ）せしめ、そのフラクションＡ１７〜２０を回収し
、併合し、次いでこれを凍結乾燥して精製されたＧＫ（
比活性５７．６ Ｕ／Ｔｎ９． １６．９ｍ９蛋白）を
得た。
第１図は本発明のＧＫの至適ｐＨを示す細線を示し、第
２図は本発明のＧＫのｐＨ安定性を示す曲線を示し、第
３図は本発明のＧＫの熱安定性を示す曲線を示す。
２図は本発明のＧＫのｐＨ安定性を示す曲線を示し、第
３図は本発明のＧＫの熱安定性を示す曲線を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記の理化学性状を有する新規なグリセロールキナ
ーゼ゛ 酵素作用：少なくとも下記の反応を示す。 分子量ニア２０００±７２００ 等電点：４５ ｋｍ値：グリセロ−／ｌ／ ４．８Ｘ１０−５
Ｍジヒドロキシアセトン６．６ Ｘ １０”−４ＭＤ−
グリセロアルデ゛ヒト３．５ Ｘ １０−４ＭＡＴＰ
２Ｘ１０−’Ｍヌクレオチドに
対する特異性：ＡＴＰ＞ＣＴＰ＞ＴＴＰ＞＞ＧＴＰ 、
ＵＴＰ。 至適ｐＨ： ｐＨ９〜１０ ｐＨ安定性： ｐＨ５，５〜１０ 金属イオンの影響：マグネシウムイオンにより増強され
、カルシウムイオンおよびマンガンイオンより阻害され
る。 熱安定性：４５℃まで安定である。 ２ 炭素源、窒素源および無機塩を含有してなる培地に
ストレプトマイセス属に属するグリセロキナーゼ生産菌
を接種して培養し、次いでその培養物よりグリセロール
キナーゼを採取することを特徴とするグリセロールキナ
ーゼの製造法。 ３ グリセロールキナーゼ生産菌が、ストレプトマイセ
ス・キャナスＡ２４０８株である特許請求の範囲第２項
記載の製造法。 ４ 炭素源が、グリセロールである特許請求の範囲第２
項または第３項記載の製造法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54071459A JPS5852632B2 (ja) | 1979-06-06 | 1979-06-06 | 新規なグリセロ−ルキナ−ゼおよびその製造法 |
| US06/154,029 US4347323A (en) | 1979-06-06 | 1980-05-28 | Glycerol kinase from Streptomyces canus |
| DE19803020646 DE3020646A1 (de) | 1979-06-06 | 1980-05-30 | Glycerinkinase und verfahren zu ihrer herstellung |
| NL8003236A NL8003236A (nl) | 1979-06-06 | 1980-06-03 | Glycerolkinase en de bereiding daarvan. |
| FR8012407A FR2458583B1 (fr) | 1979-06-06 | 1980-06-04 | Nouvelle glycerol kinase et sa production |
| GB8018202A GB2051079B (en) | 1979-06-06 | 1980-06-04 | Glycerol kinase |
| CA000353432A CA1159779A (en) | 1979-06-06 | 1980-06-05 | Glycerol kinase and a method for its production |
| IT22627/80A IT1148837B (it) | 1979-06-06 | 1980-06-06 | Glicerol chinasi e procedimento per la sua preparazione |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54071459A JPS5852632B2 (ja) | 1979-06-06 | 1979-06-06 | 新規なグリセロ−ルキナ−ゼおよびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55162987A JPS55162987A (en) | 1980-12-18 |
| JPS5852632B2 true JPS5852632B2 (ja) | 1983-11-24 |
Family
ID=13461178
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP54071459A Expired JPS5852632B2 (ja) | 1979-06-06 | 1979-06-06 | 新規なグリセロ−ルキナ−ゼおよびその製造法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JPS5852632B2 (ja) |
| CA (1) | CA1159779A (ja) |
| DE (1) | DE3020646A1 (ja) |
| FR (1) | FR2458583B1 (ja) |
| GB (1) | GB2051079B (ja) |
| IT (1) | IT1148837B (ja) |
| NL (1) | NL8003236A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6218109B1 (en) * | 1997-09-05 | 2001-04-17 | Baylor College Of Medicine | Mammalian checkpoint genes and proteins |
| EP1538211B1 (en) * | 2002-09-10 | 2009-03-04 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Novel glycerol kinase, gene thereof and process for producing the glycerol kinase by using the gene |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1238422B (de) * | 1960-12-22 | 1967-04-13 | Boehringer & Soehne Gmbh | Verfahren zur Herstellung und Gewinnung von Glycerokinase |
| DE1946137C3 (de) * | 1969-09-11 | 1975-01-02 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Gewinnung von Glycerinkinase aus Mikroorganismen |
| US4152209A (en) * | 1974-03-29 | 1979-05-01 | Sanraku-Ocean Co., Ltd. | Nucleotide pyrophosphotransferase and method of preparation |
| GB1567606A (en) * | 1976-08-24 | 1980-05-21 | Secr Defence | Glycerokinases |
-
1979
- 1979-06-06 JP JP54071459A patent/JPS5852632B2/ja not_active Expired
-
1980
- 1980-05-28 US US06/154,029 patent/US4347323A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-05-30 DE DE19803020646 patent/DE3020646A1/de active Granted
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