JPS5869854A - スクシニル−ビスデスアセチル−チモシンα↓１、その製法及び該化合物を含有する、免疫防御細胞を刺激する薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ビス−デモシンα１化合物、その製法及び該
化合物を有効物質として含有する、免疫防御細胞を刺激
する薬剤に関する・ チモシン゛α、は胸腺から単離されるペゾチドであり、
これは既に合成によっても製造された（西独国特許出願
公開第２９１９５９２　号明細書）０チモシンα、はＴ
　−ＩＪン・ぐ細胞の拡散及び増殖を刺激する。免疫防
御細胞の活性化は細胞表面の摂取体の付加により行なわ
れる。この特性に基づき、チモシンは免疫防御の刺激剤
として特に制癌においても極めて重量である〇 ところで、チモシンα１の作用効果は、単量体チモシン
α１の構造が実質的に変化せずに含有されている双子分
子の形で存在すれば著しく高められることが判明した。

従って、′本発明の対称はビスーチモシンα１であり、
該化合物はＮ末端位ｆｆ１１〜１０個６炭素原子を有す
る橋状結合によって結合されている２個のデスアセチル
ーチモシンα、単位カら成ルことを特徴とする。

ビスーチモシンα１の優れた作用効果は、本発明の誘導
体を使用すれはチモシンα１単位の作用位置ｆの濃度が
著しく高められることに起因すると見なされる。

本発明の化合物においては、一般式： 〔式中、Ｔはデスア七チルーチモシンα１基を表わしか
つＲは芳香族核、１個以上のＯＨ基、ＮＨ２基、ハロゲ
ン原子及び／又はオレフィン系二重結合を含有していて
もよい、２〜１０個の炭素原子を有するα、ω−ジ了シ
ル基、又はＣＯ基を表わす〕で示されるものが有利↑あ
る。

２個のチモシンα１基を結合する基Ｒは、有利にはホス
ゲン、ジカルゼン酸例えば修酸、マロン酸、コハク酸、
グルタル酸、アジピン酸、アスノξルキン酸、グルタミ
ン酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、テレ
フタル酸、フエニレンニ酢酸等から誘導される。有利に
はＲはホスゲン、修酸、コハク酸、アスパラギン酸、グ
ルタミン酸、マレイン酸又はフエニレンニ酢酸から誘導
される。特に有利なものは、シクシニルービスーデス了
セチルチモシンα１でアル。

この化合物は、天然形ではＮ　−アセチル化されて存在
するチモシンα、から、了セチル基のＣＨ。

基の水素原子を第２のチモシンα７分子を結合させて置
換することにより誘導される。

新規のビス−デモシンα１化合物は本発明により、Ｎ末
端位の７ミノ基を除いて、アミノ酸の全ての官能基１〜
２８個がペゾチド合成技術において通常の保護基によっ
てブロックされている合成デスアセチルーチモシンα１
を、ＮＨ２基と反応性の、１〜１０個の炭素原子を有す
る二官能性カップリング化合物と極性溶剤中〒反応させ
かつ引続き保護基９を自体公知方法で分離することによ
り得られる。

この場合、前工程から、全ての官能基がなおブロックさ
れているが、但しまだＮ末端アセチル基は保護されてい
ない合成によって製造されたチモシンα１から出発する
のが有利である。このＮ末端位の保護されていないチモ
シンα、誘導体を有利には二官能性カップリング化合物
０．５当量と反応させる、これによりビス−アミド化が
保証される。過剰のブロックされたデス了セチルーチモ
シンα、は、例えばアセチルクロリドによってアセチル
化によって容易に正常のチモシンα、に変換され、該チ
モシンα１は二重体からカラムクロマトグラフィーによ
り、例えばトリフルオルエ゛タノール中で分子量′差が
大きいことに基づき容易に分離されかつ最後に保護基分
割によって生物学的活性形に変換することがｆきる。

ブロックされた官能基を有する合成デスアセチルーチモ
シンα１誘導体としては、Ｄｄｘ　（１−２８）　０Ｂ
ｚｌ−チモシンα１又はＳｅｒ　（Ｂｚｌ）−Ａｓｐ（
ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）−９ｅｒ（Ｂｚｌ）−８ｅｒ
（Ｂｚｌ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−１１ｅ−Ｔｈｒ（Ｂ
ｚｌ）−Ｔｈｒ−（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ａｓｐ（
ＯＢｚｌ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ
）−Ｌｙｓ（Ｚ’）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ
）　−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌｕ（
ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｓｎ−Ｏ
Ｂｚｌを使用するのが有利である。この化合物は、西独
国特許出願公開第２９１９５９２　号明細書及び亀ザ・
ジャーナル・オブ・アメリーカン・ケミカル・ソサイエ
テイー（ＪＡＣ３）＃第１０１巻、２５３〜２５４頁（
１９７９）から公知である。

Ｄｄｚ−保護基ブロックされた誘導体を使用する場合に
は、保護基の分離は極性の゛有機溶剤中で酸で処理する
ことにより行なう。酸としては。

トリアルキル酢酸例えばトリクロル酢酸又はトリフルオ
ル酢酸を使用するのが有利である。

カップリング化合物としては、１〜１．０個の炭素原子
を有する二官能性の反応性化合物が適当ｆある。特に反
応性のジカルメン酸誘導体例えば２活性エステルハロゲ
ン化物、殊に塩化物、及びアジＰ、ホズゲン及びジエポ
キシドが有利に使用される。この種の反応性ジカルぜン
醸化合物の典型的な例は、修酸−ジクロリＰ、マレイン
酸−ジクロリド、コノ１り酸−ジクロリド又は−無水物
、グルタル酸−ジクロリド、アジピン酸−ジクロリド、
アスパラギン酸−ジクロリｒ、グルタルミン酸−ジクロ
リド、マレイン酸−又はフタル酸−ジクロリド、リンゴ
酸−ジクロリド、酒石酸−ジクロリド、フタル酸−ジク
ロリド、フエニレン二酢酸−ジクロリド並びにクロルコ
ハク酸、チミジン酸、コルク酸、アゼライン酸、七ノ々
シン酸、オキシグルタミン酸、イタコン酸及びブドウ酸
から誘導される相応する化合物である。ジカルゼン酸は
、その活性エステルの形で、例えばｐ−ニトロフェニル
−、トリクロルフェニル−、ペンタクロルフェニル−又
ハペンタフルオルフェニルエステルとして使用すること
がｆきる。更に、遊離カルはン酸を直接的に ａ）カルＩジイミド例えばシクロヘキシルカルセシイミ
ド、又はカルゼニルビスイミダゾール及び ｂ）ベンゾトリアゾール と−緒に使用することも可能゛である。

更に、ジカルゼン酸から誘導される２ジアルデヒドを使
用することもｆきる。この場合形成されるシップ塩基は
、次い〒第二級アミンに水素添加する。有利なカップリ
ング化合物はグルタルジアルデヒド〒ある。２官性橋状
結合化合物と、デスアセチルチモシンα１の７ミノ基と
の間の反応のためには、このために公知の反応条件を適
用する。適当な溶剤の例は、ジメチルスルホキシド、ジ
メチルホルムアミド、ホルムアミド及び同種のもの並び
にそれらの混合物である。

この反応は、当量の塩基例えば哀−メチルモルホリノの
存在下に実施するのが有利ｆある。

有利な出発物質の製造は、−アンゲ・々ンＰテ・ケミ−
（Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍｉｅ）”第９１巻、４２２〜
４２３頁（１９７９年）及びもＪＡＣ８〃第１０１巻、
２５３〜２５４頁（’１９７９年）に記載されている。

以下の第１表は、本発明によるビスーチモシンα１（Ｎ
α−スクシノイルービスーチモシンα１）及びチモシン
α１による亀混合リンパ細胞培養（ＭＬＣ）＃における
末梢のヒトのＴ−リンノミ細胞の刺激をチｆ示す。

第　　１　　表 表は、ビスーチモシンα、０．５μｓを添加することに
より作用物質を用いない正常刺激（＝１００％）並び出
発物質チモシンα、による刺激に比較して高い過剰刺激
（１６２％）が惹起されることを示す。

第２表には、試験作用物質の添加後α−アマニチン０．
２μｇ／培養による前抑制を伴うＥ−ロゼツ）試験にお
ける末梢のヒトのＴ−リン・ξ細胞の刺激を示す（添加
しない正常−Ｅ−ロゼツト値＝１　ｏｏｓ　；α＝アマ
ニチンで前抑制した後のＥ−ロゼツト値＝０％）。α−
アマニチン抑制培養において、正常−Ｅ−ロゼツト値を
Ｔ＋　ＩＪン・ξ細胞の刺激によって活性化する作用物
質の能力が測定される。

第　　２　　表 上記表は、ビスーチモシンα、の分子量は２倍ｆあるに
もかかわらず、全ての作用物質が細胞に同じ量で加えら
れた場合には、摂取体に対する本発明のビスーチモシン
α１のより大きな作用密度が既に明らかに表われること
示す。

第１表及び第２表の試験は、Ｃ，Ｂｉｒｒ他著亀ＰＥＰ
ＴＩＤＥＳ、　　５ｙｎｔｈｅｓ１ｓ−８ｔｒｕｃｔｕ
ｒｅ　　ＦｕｎＣｊｌＯｎ＋Ｐｒｏｃ、７　ｔｈ、　Ａ
ｍｅｒ、　　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｓｙｍｐ、　”　（Ｄ、
　Ｈ。

Ｒｉｃｈ　及びＥ、Ｇｒｏｓｓ、　Ｅｄｓ、　）　Ｐｉ
ｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｐ、。

米国ロックフォード在、１９８１年、５４５〜５４８頁
記載に基づいて実施した。

次に実施例ｆ本発明の詳細な説明する。

実施例 ’　Ａｎｇｅｗ、　Ｃｈｅｍｉｅ　’第９１巻、４２２
〜４２３頁（１９７９年）記載に基づいて製造した、チ
モシンα１の完全に保護された合成前駆物質、Ｄｄｚ−
（１−２８）ＯＢｚ１５０１１１９（１０，ｃｉモル；
分子量５０４０）にジクロルメタン５　ｙｎｌｎｌ中低
磁気攪拌下リフルオル酢酸３７μ１（４７５μモル）を
加えかつ２０℃で１時間湿気遮断下に放置する。トリク
ロルメタン／メタノール（９：１）中の薄層クロマトグ
ラフィー制御により、移行するＤｄｚ−分離片について
Ｄｄｚ−保護基分備が判明する。このノ々ツチをＮ−メ
チルモルホリン５５μ１（４８０μモル）で中和しかつ
真空中４０℃で蒸発濃縮する。不溶性物質からベンジン
（４０℃の留分）で浸出させることによりＤｄｚ−分離
生成物を取出しかつその残分を真空中４０℃で短時間乾
燥する。次いで、水５　ｔｔｒｌを加えかつ鱗屑状で浮
遊する。Ｎ−末端位の遊離８２Ｎ　−（１−２８）　０
ＢＺＩを遠心分離により得る。

こうして分離したベゾチｒを真空中〒Ｐ２０５７ＫＯＨ
上で乾燥しかつ更に使用するために保管する。

Ｈ２Ｎ−（１−２８）ＯＢＺＩＩＯμモルを４０℃でジ
メチルスルホキシドｌ　ｍｌに溶かしかつ０℃に冷却し
かつＮ−メチルモルホリン１．１１μ１（１０μモル）
を加える。この中に超音波浴中９℃でジメチルホルムア
ミド（Ｑｔ？、）１００μｌ中のスクシノイルジクロリ
ド０．２８３μｌ　（２，５μモル；０．５当量）の溶
液を滴加しかつ超音波浴中０１１１．ｆｆ１１時間並び
に４０℃〒５時間反応させる。引続き、０℃に冷却し、
Ｎ−メチルモルホリン２．２２μｌを加えかつ了セチル
クロリＰ１．４３μ１（２０μモル）で超音波浴中０′
ｃｆｆｉ１時間、２０〜３０℃で５時間アセチル化する
。

後処理のために、−ト記・ぐツチを磁気攪拌下に水１５
０　ｍｌに０℃で装入する、この際に生成物が沈殿する
。この沈殿物を２時間後Ｇ４−フリットを吸引濾過しか
つ氷水で洗浄する。これにより塩及び酸塩化物不含の濾
過ケーキをＰ２Ｏ，上で乾燥しかつセパデツクス（５ｅ
ｐｈａｄｅｘ　）ＬＨ２０／ト　リ　フルオルエタノー
ルカラム（１ｘ２００ｃｒＩＬ）を介シてクロマトグラ
フィーする。保護基の分離は２．２．２−）リフルオル
エタノール中でＰｄ／Ｃで水ｍ分解しくベンジルオキシ
カルＩニル基及びＣ−末端位ベンジルエステル基）、次
イ↑了二ソール１０容量チを含有するトリフルオル酢酸
／ジクロルメタン（１：ｌ）を３０分間作用させ（ｔ−
ブチルエステル基）、真空中ｆ濃縮しかつ最後に室温〒
約２時間純粋なトリフルオル酢醗・を作用させる（　４
　、４’−ジメトキシインズヒｒリル基及びｔ−ジチル
基）ことにより行なう。遊離の二量体Ｎ　−スクシノイ
ルーピスーチモシンα１（分子量６２１２）のクロマト
グラフィー的確認及び単離は、同様に前記文献記載に基
づいて酸化されたインシュリンＢ−鎖の分子量（分子量
３４９５）に合わせられかつチモシンα１（分子量３１
０７）で試験されるＡイｔゲルＰ６−カ５ム（０，６Ｘ
２４０ｃｍ）　で水（トリフルオルエタノール１０％、
酢酸１チ）中１行なう。

薄層クロマトグラフィーで、Ｎ（Ｘ−スクシノイルーピ
スーチモシンα、は移行しない（Ｒｆ＝０）が、これに
対して単量体のチモシンα。

はＲｆ＝０．１６を示す〔展開剤：ｎ−ブタノール／ピ
リジン／氷酢酸／水　５：５：ｌ　：４（ｖ／ｖ）〕。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ、　　Ｎ末端位が１〜１０個の炭素原子を有する橋状
   結合によって結合されている２個のデスアセチルーチモ
   シンα、単位から成るビスーチモシンα、化合物。 ２、一般式： 〔式中、・Ｔはデスアセチル−デモシンα１基ヲ表わし
   かつＲは芳香族核、１個以上のＯＨ基、ＮＨ，基、ハロ
   ゲン原子及び／又はオレフィン系二重結合を含有してい
   てもよい、２〜１０個の炭素原子を有するα、ω−ジア
   シル基、又はＣＯ基を表わす〕〒示される、特許請求の
   範囲第１項記載の化合物＠ ３、　　Ｒがホスゲン、修酸、コハク酸、アスノξラギ
   ン酸、グルタミン酸、マレイン酸又はフエニレンニ酢酸
   から誘導される、特許請求の範囲第２項記載の化合物。 先　スクシニルービスデスアセチルーチモシンαＩ′１
   ％ある、特許請求の範囲第１項記載の化合物０ ５、　　Ｎ末端位が１〜１０個の炭素原子を有する橋状
   結合によって結合されている２個のデスアセチルーチモ
   シンα１単位から成るビスーチモシンαｌ化合物を製造
   する方法において、Ｎ末端位のアミン基を除いて、アミ
   ノ酸の全ての官能基１〜２８個がペプチ１合成技術にお
   いて通常の保護基によってブロックされている合成デス
   アセチルーチモシンα＋ヲ、ＮＨ２基と反応性の、１〜
   １０個の炭素原子を有する二官能性カップリング化合物
   と極性溶剤中で反応させかつ引続き保護基を常法で分離
   することを特徴とする、ビス−デモシンα１化合物の製
   法。 ６、　ブロックされた官能基を有する合成ジアセチルー
   チモシンα１誘導体として、Ｄｄｚ　（１−２８）　０
   Ｂｚｌ−チモシンα、又は５ｅｔ（Ｂｚｌ）−Ａｓｐ（
   ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
   ｌ）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−８ｅｒ（
   Ｂｚｌ）−（）ｉｕ（ＯＢｚｌ）−１１ｅ−Ｔｈｒ（Ｂ
   ｚｌ）−Ｔｈｒ　−（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ａｓｐ
   （ＯＢｚｌ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
   ｌ　）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｇｌｕ（ＯＢｚ
   ｌ　）−Ｖａｌ−Ｖａｌ　−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｇｌ
   ｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ａｓｎ
   −ＯＢｚｌ　　を特徴する特許請求の範囲第５項記載の
   方法。 ７、　カップリング化合物として、ホスゲン、活性化さ
   れたジカルはン酸誘導体又はジエポキシドを特徴する特
   許請求の範囲第５項又は第６項記載の方法・ ８、　カップリング化合物としてジアルデヒドを使用し
   かつ形成されたシェフ塩基を水素添加して第二級アミン
   を形成させる、特許請求の範囲第５項又は第６項記載の
   方法。 ９　有効物質としての、Ｎ末端位が１〜１０個の炭素原
   子を有する橋状結合によって結合されている２個のデス
   アセチルーチモシンα１単位から成るビス−デモシンα
   １化合物を、慣用の製薬学的賦形剤、希釈剤及び／又は
   補薬と一緒に含有する、免疫防御細胞を刺激する薬剤。