JPS5886087A - 新抗生物質sf−2132およびその製造法 - Google Patents

新抗生物質sf−2132およびその製造法

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JPS5886087A
JPS5886087A JP56184643A JP18464381A JPS5886087A JP S5886087 A JPS5886087 A JP S5886087A JP 56184643 A JP56184643 A JP 56184643A JP 18464381 A JP18464381 A JP 18464381A JP S5886087 A JPS5886087 A JP S5886087A
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antibiotic
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acetic acid
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Takashi Shomura
庄村 喬
Masaji Sezaki
瀬崎 正次
Norio Ezaki
江崎 紀夫
Tomizo Niwa
丹羽 富造
Michio Kojima
小嶋 道男
Tatsuo Ito
辰男 伊藤
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Meiji Seika Kaisha Ltd
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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新抗生物質及びその製造法に関するものであり
、さらに詳しくは抗生物質5F−2132及びノカルデ
ィオプシス(Nocar−diopsis)属に属する
5F−2132物質生産菌を培地に培養し、得られた培
養物から抗生物質5F−2132を採取することを特徴
とする新抗生物質5F−2132の製造法に関するもの
である。
本発明者らは、ある種の菌株の培養物中に細菌に対して
抗菌作用を示す物質が生産されていることを見出し、そ
の有効物質を培養物から純粋に単離し、その性状を調べ
た結果、既知の物質とは興なる新抗生物質であることを
確認し、この有効物質を抗生物質5F−2132と命名
した。
本発明の抗生物質5F−2132生産菌としては、その
培養物中に、採取するに充分な量の抗生物質5F−21
32を生産する能力を有するものであれば、いかなるも
のであってもよいが、このような菌株の一例としては、
本発明者らにより、奈良県橿原市の土壌より新たに分離
された5F−2132株がある。該菌株の菌学的性状は
下記の通りである。
なお、観察は主に5HIRLING、E、B。
とGOTTLIEB、D、により International  Journalof 
 SystmatLc  BacLeriol。
16、 313−340 (1966)に記載されてい
る方法に従って、行った。
■ 形態 基体菌糸は直径0.4〜0.6ミクロンで寒天培地にお
いては単純分枝して波状に伸長するが、液体培地におい
ては培養に従って不規則に分断する。
気菌糸は直径0.4〜0.6ミクロンで豊富に形成され
、単純分枝し菌糸全体が胞子の連鎖となる。胞子は通常
10胞子以上連鎖する。胞子は卵型〜円筒型で大きさは
1.0〜1.5X0.4〜0.6ミクロン、表面は平滑
で運動性は認められなかった。その他胞子のう、鞭毛胞
子、菌核等の特殊構造は認められなかった。
■ 各種培地上の生育状態 5F1132株の各種培地上の生育状態は次表に示す通
りである。色の記載について〔〕内に示す標準はコンテ
ナー・コーポレーシ霞ン・オプ・アメリカ (Cont
ainer  Corporationgy、of  
America)社製の[カラー・ハーモニー・?二、
フル(Color  HarmonyManual)J
に記載のものを用いな。観察は28℃で、14〜21日
培養後に行った。
■ 生理的性質 il+  生育温度範囲:スターチ寒天において15〜
40℃の温度範囲で生育し、25〜37℃で良好に生育
する。
(2)ゼラチンの液化:陽性 (3)  スターチの加水分解:陰性 (4)  硝酸塩の還元:陰性 (5)  脱脂乳の凝固:陽性 脱脂乳のペプトン化:陽性 (6)  メラニン様色素の生成:陽性(7)耐塩性ニ
ア、0%ではわずかに生育するが1080%以上では生
育しない。
■ 炭素源の利用性 炭素源        生育 D−グルコース    ++ D−キシロース    ++ D−フラクトース   ++ D−マンニトール    + L−アラビノース   ++ L−ラムノース     + i−イノシトール    + シュクロース     ++ ラフィノース       + 無添加   士 十十 良好1こ生育(利用性二十) 十 弱い生育(利用性ニー) 用いた基本培地 酵母エキス(Difco社製)5g 炭酸カルシウム       1g 寒天(Difco社製)15g 蒸留水          10100O!■ 細胞壁
組成 全細胞加水分解物中のジアミノピメリン酸は主にメン型
で、キシロース、マジニロース、アラビノースは認めら
れなかった。
以上の諸性状を総合し、基体菌糸が分断し、気菌糸全体
が胞子の連鎖を形成する形態的な特徴を有し、かつ全細
胞加水分解物中にメン型のジアミノヒメリン酸を持ち、
キシロース、マジ二ロース。
アラビノースを持たないものは放線菌の中でノカルディ
オプシス(Nocardiopsis)属に属する。(
InternationalJournal  of 
 SystematicBac ter i o Io
gy、 26. 487〜493.1976)従って、
本発明者等は5F−2132株をノカルディオプシス・
エスピー・5F−2132(Nocardiopsis
  sp、5F−2132)と命名した。5F−213
2株は、微生物工業技術研究所に機工研菌寄第6131
号として受託されている。
本発明は、上記の知見に基いて完成されたもので、ノカ
ルディオプシス属に属する抗生物質SF−2132生産
菌を培養し、その培養物より抗生物質5F−2132を
採取することを特徴とする抗生物質5F−2132の製
造法並びに耐抗生物質5F−2132である。
ノカルディオプシス・エスピー・5F2132Nは他の
放線菌の場合にみられるように、その性状が変化しやす
く、例えば、紫外線、エックス線、放射線、薬品等を用
いる人工的変興牟段で変興しうるものであり、このよう
な変異株であっても抗生物質5F−2132の生産能を
有するノカルディオプシス属の菌はすべて本発明の方法
に使用することができる。
本発明の方法では、5F−2132株を通常、微生物が
利用しうる栄養物を含有する培地で培養する。
例えば、炭素源としてグルコース、シュクロース、デキ
ストリン、殿粉、水あめ、糖みっ、大豆油等を使用しう
み。
又窒素源として大豆粉、小麦胚芽、ペプトン。
肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリカー。
硝酸ソーダ、硫酸アンモニウム等を使用しうる。
ソノ他、必要に応じて炭酸カルシウム、塩化カリウム、
燐酸塩等の無機塩類を添加するほか菌の発育を助け、抗
生物質5F−2132(以後、5F−2132物質と称
する)の生産を促進するごとき有機物及び無機物を適当
に添加することができる。
培養法としては、一般抗生物質生産の方法と同じく、好
気的条件下での培養法であれば、いがなる方法を適用し
てもよいが、P4部培養法が量も適している。培養に適
した温度は20〜35℃であるが、多くの場合部〜羽℃
付近で培養を行うのが好ましい。5F−2132物質の
生産は振盪培養法、タンク培養法共に2〜7日で蓄積が
最高に達する。
5F−2132物質の検定に当っては、スタヒロコソカ
ス・アウレウス(Staphylococcusaur
eus)209pを検定菌とするペーノマーディスク・
平板法を用いる。この検定法では、5F−2132物質
が500mc g/m1〜62.5mc g/mlの濃
度範囲ではその対数と阻止円径との間は直線関係を示し
、それぞれ21鶴〜12鶴の阻止円を与える。
5F−2132物質は、後記する理化学性状を有するの
で、その性状に従って抽出、精製することが可能である
が、以下の方法により効率的に抽出、精製できる。すな
わち、有効成分は主として培養濾液に含まれており、こ
れをダイヤイオンHP−20(三菱化成製)等の多孔性
吸着樹脂に吸着させ、アセトン、メタノール等の水に可
溶性である溶剤と水との混合溶剤で有効成分を溶出する
。この溶出液を減圧濃縮し、これをさらにCM−セファ
デックス(ファルマシア製)、ダイヤイオンHP−20
のカラムクロマトグラフィー等を適宜組み合わせること
によって5F−2132物質を白色無定形粉末として単
離することができる。5F−2132物質は塩基性物質
であるので、遊離塩基あるいは酸付加塩として単離でき
る。5F−2132物質の酸付加塩の例としては、塩酸
、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸等のごとき無機酸と
の塩、並びに酢酸。
クエン酸、酒石酸、安息香酸、アスコルビン酸等のごと
き有機酸との塩が可能であるが、実用として容認される
塩が好ましい。
このようにして得られる抗生物質5F−2132の理化
学性状は次の通りである。
(11物質の色と形状:白色粉末 (2)融点:180℃から発泡分解が始まる(3)比旋
光度: 〔α〕グ =−44° (C1,水)(4)分
子量: 400以上1000以下(ゲル濾過法による) (5)  元素分析: 実測値(%)  i C49,
00,H7,21゜N21.09  塩酸塩としての実
測値(%)C42,96,H6,93,N20.1. 
(ff19.76上記の元素の他酸素元素(測定せず)
は含まれるが、その他の元素はない。
(6)  紫外部吸収スペクトル:第1図に示す通りで
ある。2g (E :F、) = 227 n m (
232) 。
λ’By”(E :F、) = 227 n m (2
44) 。
LINNmllN λttrx (E:五) = 230Im □l)  
(198)。
(7)赤外部吸収スペクトル:第2図に示す通り335
0、1700 (肩) 、 1640.1530.14
60.1410. 1340゜1240、11?0.1
050.1010. 960. 900.及び860 
cm−1に吸収を示す。
(8)核磁気共鳴スペクトル:第3図に示す通りである
。
(9)  薄層クロマトグラフィー:下記に示す通りη
ある。
シリカゲル60F−254(メルク社製)n−ブタノー
ル−酢酸−水(2: 1 : 1) Rf  O,14
n−プロパノ−ルーピリジン−酢酸−水(15:10:
 3 :12) Rf  O,59クロロホルム−メタ
ノール−4%アンモニア(2:111  上層)Rfo
、35 セルローズF254(メルク社製) n−ブタノール−酢酸−水(2: 1 : 1) Rf
  O,64n−プロパノ−ルーピリジン−酢酸−水(
15:10: 3 :12) Rf  O,710I 
 高圧濾紙電気泳動:高圧濾紙電気泳動装置(サーパン
ト・インスッルメント社製、高圧電源HV5000A、
泳動槽−r−デルLT48A)を用い、東洋濾紙Na5
1(東洋濾紙社製)上で下記の緩衝液を用い、定電圧3
500Vで15分泳動を実施するとき、本物質は陰極に
移動し、アラニンの移動度を1とするとき本物質の移動
度は2.5である。
緩衝液:ピリジン2QQm#と酢酸8mlを全容1I3
Itになるように精製水に溶解したもので、この時の−
は6.4であった。
(11)アミノ酸組成二本物質を6N  Hαで、10
5℃に於て18時間分解f′るとき、ロイシン、セリン
、α、β−ジアミノ酪酸及びβ−アルギニンがそれぞれ
等モル生成する。
(12)呈色反応:陽性;坂口、ニンヒドリン及びレミ
ニー。
(13)溶解性:水に易溶、低級アルコール類に難溶、
クロロホルム、n−ヘキサンに不溶。
5F1132物質の抗菌スペクトルは次表に示す通りで
ある。またマウスを用いた急性毒性試験の結果、200
mg/kg静脈内投与で全鋼生存した。
表S F−2132物質の抗菌スペクトル*β−ラクタ
ム抗生物質高感受性株 (方法) a :アガーごダイリューシ日ン法すニゲロ
ス・グイリューシ日ン法 (培地)l:ハートインヒュージーン寒天培地2ニゲル
コース、どペプトン培地。
3:ハートインヒュージ日ンプロス培地4:グリセロー
ル・ブイヨン培地 、前記した5F−2132物質の理化学性状、および生
物学的性状と一致する既知抗生物質はなく、本発明の抗
生物質5F−2132物質は新規物質と認め″られた。
5F−2132物質は抗菌活性以外に感染防御作用を有
し、以下に実験結果を示す。
方法 供試動物;JCL−ICR雄性マウス、4週令。
平均体重21.0 g 、  1群6匹供ge株;シェ
ードモナス・エルギノーザ(Pseudomonas 
 aeruginosa)E2接種菌液;上記菌株をハ
ート・インヒュージ日ン寒天(Dlf’co社製)平板
に塗抹し、37 ”c 。
20時間培養後、該菌を集菌し生理食塩水にて所要菌濃
度に希釈し、等量の5%ムチン(Difc。
社製)溶液と混合し接種菌液とした。尚接種容量は0.
5mJ/マウスとした。
試験方法;実施例2で純品として得られたSF−213
2物質を滅菌蒸留水に一定濃度に溶解し、そ(7)0.
2mj!をマウス大腿部皮下に1回投与し、5日後に上
記接種菌液を腹腔内に接種し、4日間マウスの生存を観
察した。
結果を下表に示す通りであった。
表(値は1群6匹中の生存数を示す) □ 対照は5F−2132の代りに蒸留水のみを投与した。
以上の如<5F−2132物質は明らかに感染防御活性
を示した。
本発明の抗菌性並びに感染防御性を有するSF−213
2物質は注射用蒸留水、生理食塩水等に懸濁して投与す
る。投与形態は皮下注射、静脈、筋肉内注射等の非経口
投与法、又はカプセル等の経口投与法により投与される
。投与量は、動物試験の結果及び種々の状況を勘案して
、総投与量が一定量を越えない範囲で連続的又は間けつ
的に投与する。しかし、その投与量1は、投与方法、患
者の状況、例えば年令2体重、性別、感受性、投与時間
。
併用する薬剤、患者又はその病気の程度に応じて適宜に
変えて投与することは勿論であり、一定の条件の下にお
ける適量と投与回数は上記の指針を基として専門家の適
量決定試験によって決定される。
しかし、一般には1日200〜3000mgの範囲、例
えば、500mgを1〜5回に分けて投与する。
以下に5F−2132物質の製造法の実施中を示すが、
ここに例示しない多くの変形、修飾手段を用い得ること
はもちろんである。
実施例1 (培養) 種菌用培地(グルコース1.0%、殿粉1.0%。
ポリペプトン0.5%、肉エキズ0.2%、酵母エキス
0.3%、大豆粉0.2%、炭酸カルシウム0.2%。
pH7,0) 20m 12を100mj?容三角フラ
スコニ分注滅劃り斜面培養から得たノカルディオプシス
・エスピー・5F−2132株(機工研菌寄第6131
号)の菌体を3〜4白金耳接種し、28℃で2日間振盪
培養する。
コノ種菌5 m /を上記培地80mj!を500 m
 1N容三角フラスコに分注滅菌したものに接種し、2
8℃で24時間振盪培養する。この種培養80mj!を
さらに上記培地eoomItを51容三角フラスコに分
注滅菌したもの2本に40m1ずつ接種し、2B’cで
20時間振盪培養する。
得られた種培養600mJを20Jの生産培地を含む3
01容ジャーファーメンタ−に接種し、28℃において
通気攪拌(通気20J/min、攪拌350rpm)し
て65時間培養した(ジャーファーメンタ7−2基使用
)。
生産培地の組成は下記の通りである。
水あめ              4.0%炭酸カル
シウム          0.2%大豆油     
         0.3%シリコンKM68−2F 
       0.01%(消泡剤、信越化学製) 大豆粉              2.0%サングレ
イン(サントリー製)0.5%ファーマメディア   
       1.0%(Traders  Oi l
  M、i l l製)塩化ニッケル        
  0.0001%塩化コバルト          
0.000f%硫酸第1鉄            0
.001%(pH7,Q滅菌前) 培養終了後、濾過助剤を加え、6N塩酸でpH5に調整
後濾過し、濾液24I!、を得た。
実施例2 (抽出・精製) 実施例1で得られた培養濾液24ItをダイヤイオンH
P−20(三菱化成製)のカラム2.51に通し、有効
成分を吸着させた。このカラムを水3Itで洗った後、
団%アセトン水で有効成分を溶出した。
活性区分を合併しく31)、減圧下で濃縮して、アセト
ンを除去し、得ちれた水溶液的21をCM−セファデッ
クスC−25(N、’型)〔ファルマシァ製〕のカラム
150m#に通し、有効成分を吸着させた。このカラム
を水750m1次いで0.05Mの塩化ナトリウム溶液
1500ml!、で洗った後、0.2Mの塩化ナトリウ
ム溶液で溶出し、100mjlずつ分取した。
活性区分(フラクシ日ン隘3〜フラクシ剥ン磁15)を
合併しく1300mjり、これをダイヤイオンHP−2
0のカラム(250m、’)を通して、有効成分を樹脂
に吸着させた。
カラムを水\150mJで洗った後、6%アセトン水で
溶出した。活性1区分を減圧下に濃縮乾固し、−3F−
2132物質の粗粉末、(淡褐色> 1.76g (純
度:約60%)を得た。
5F−2132物質の純品を得るため、次に上記粗粉末
のうち、800mgを少量の水に溶解し、これをCM−
セラファデックスC−25(Nt型)のカラム(60m
Iりにのせる。ついで水300mJ、0.05Mの塩化
ナトリウム溶液600mA!でカラムを洗った後、0.
2Mの塩化ナトリウム溶液で溶出し、15gずつ分取し
た。フラクシ日ン磁20からフラクシ日ン磁(資)に有
効成分の大部分がまとまるので、この部分を合併し、こ
れをダイヤイオンHP −20のカラム(150m#)
に通し、有効成分を吸着させる。水600mI!、次い
で25%アセトン水] 5Q m j!で展開し15g
ずつ分取する。フラクシ日ン1kllからフラクション
階24(水展開区分)を減圧下に濃縮乾固し、5F−2
132物質の純品を塩酸塩として115mg得た。また
フラクシ日ン隘41からフラクシ日ン11h45(25
%アセトン水展開区分)を減圧下に濃縮乾固し、5F−
2132物質の純品を遊離塩基として247mg得た。
【図面の簡単な説明】
第1図は抗生物質5F−2132の水溶液(実線)。 0、IN塩酸(破線)及び0.IN水酸化ナトリウム溶
液(一点破線)中の紫外部吸収スペクトル、第2図は同
KBr錠での赤外部吸収スペクトル、第■ 3図は同D20中、TMSを外部標準としたプロトン核
磁気共鳴スペクトルを示す。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、遊離塩基として次の特性を有する水溶性塩基性新抗
    生物質5F−2132およびその塩(11物質の色と形
    状:白色粉末 (2)融点:180℃から発泡分解が始まる(3)比旋
    光度: 〔α):’  =−44° (CI、水)(4
    )分子量:400以上1000以下(ゲル濾過法による
    ) (5)元素分析:実測値(%)  i C49,00,
    H7,21N21.09  塩酸塩としての実測値(%
    )C42,96,H6,93,N20.1.α9.76
    上記の元素の他酸素元素(測定せず)は含まれるが、そ
    の他の元素はない。 (6)紫外部吸収スペクトル:第1図に示す通りである
    。λ”: (E :凡) −227n m (232)
     。 λ居(Ei?、) = 227 n m (244) 
    。 λ’;”’(E :t’m> = 230 n m (
    肩)(198)。 (7)赤外部吸収スペクトル:第2図に示す通り335
    0、1700 (屑) 、 1640.1530.14
    60.1410.1340゜1240、1170.10
    50.1010. 960. 900.及び860ロー
    1に吸収を示す。 (8)核磁気共鳴スペクトル:第3図に示す通りである
    。。 (9)  薄層クロマトグラフィー:下記に示す通りで
    ある。 シリカゲル60F−254(メルク社製)n−ブタノー
    ル−酢酸−水(2: 1 : 1) Rf  O,14
    n−プロパノ−ルーピリジン−酢酸−水(15:10:
     3 :12) Rf  O,59クロロホルム−メタ
    ノール−4%アンモニア(2: 1 : 1  上層)
    RfO,35セルローズF 254 (メルク社製)n
    −ブタノール−酢酸−水(2: 1 : 1) Rf 
     O,64n−プロパノ−ルーピリジン−酢酸−水(1
    5:10: 3712) Rf  O,71Ql  高
    圧濾紙電気泳動:高圧濾紙電気泳動装置(サーバント・
    インスッルメント社製、高圧電源HV500QA、泳動
    槽モデルLT48A)を用い、東洋濾紙階51(東洋濾
    紙社製)上で下記の緩衝液を用い、定電圧3500Vで
    15分泳動を実施するとき、本物質は陰極に移動し、ア
    ラニンの移動度を1とするとき本物質の移動度は2.5
    である。 緩衝液:ピリジン200mj!と酢酸8mlを全容量3
    1になるように精製水に溶解したもので、この時の−は
    6.4であった。 (11)アミノ酸組成:本物質を6N  Hαで、10
    5℃に於て18時間分解するとき、ロイシン。 セリン、α、β−ジアミノMillびβ−アルギニンが
    それぞれ等モル生成する。 (12)呈色反応:陽性;坂口、ニンヒドリン及びレミ
    ュー。 (13)溶解性:水に5溶、低級アルコール類に難溶、
    クロロホルム、n−ヘキサンニ不溶。 2、7カルデイオプシス属に属する抗生物質5F−21
    32生産菌を培地中に培養し、培養物に抗生物質5F−
    2132を生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴
    とする新抗生物質5F−2132の製造法。 3、抗生物質5F−2132生産菌がノカルディオプシ
    ス・エスピー(Nocardiopsis。 sp、 ) SF  2132である特許請求の範囲第
    2項記載の製造法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110172415A (zh) * 2019-04-23 2019-08-27 中国极地研究中心 一种北极拟诺卡氏菌及其发酵产物优化方法

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