JPS60246399A - 新生理活性物質ホルオキシミチン、その製造法および用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアンジオテノ／ンエ変換酵素に対して酵素阻害
活性を示す新規生理活性物質ホルオキ７ミチン（Ｆｏｒ
ｏｘｙｍｌｔｈｌｎｅ　）　、その製造法お裏びそれを
有効成分とする降圧剤に関するものである。

本発明者らは、微生物化学研究所の構内の土壌より分離
された放＃ｊｍであってＭＧ、？ＪＰ−ＯＦ３６株と名
付け７を菌を培養し、得られる培養液中にアンジオテン
７ンＩ変換酵素阻讐活性を有する物質が存在すること全
見出した。その酵禦阻害物質の採取方法について検討し
、その物質の単Ｉｌｌ！に成功しかつ本物質が新規物質
であることを確認して本発明を完成し九。

本発明者らは、さらに医栗としてのホルオ午シミチンの
有用性について検討し、本物質が降圧作用を有すること
を見出し危。

アンジオテ／７／Ｉ変換＃５１Ｉ８によるヒゾリルーＬ
−ヒスチジル−し一ロイシンの分解を阻止する本物質の
効力について調べ九結果、後述の試験例に示されるごと
く２本物質は抗アンジオテン７／■変換酵素活性を有す
ることが確認された。

したがって、第一の本発明の要旨とするところは、次の
式 ％式％： ： で表わされる抗アンジオテン７ンエ変換酵素活性を有す
る新生理活性物質ホルオキシミテン又はその薬学的に許
容できる塩又はエステルにある。ホルオキＸ／ミテ／は
後記の実施例に示すごとく、ホルオキ７ミチン生産菌の
培養炉液ｔ１活性炭、ＤＢＡＩ！ｌ−セファデックス■
Ａ−Ｊｊのクロマ計グラフィー等で分画することにＬり
白色粉末として採取できる。

ホルオギシミチンの物性はつぎのとおりである。

すなわち、ホルオ午シミチン・コ水和物は融点１０Ｊ−
／、２０ＣＣ分解）、質量分析法で得られる分子量はｊ
７ｊである。元素分析値はＱ４ｔ、？、＆Ａ％、Ｈ６，
Ｊ／％、Ｎ　／　６．１−％であり、０１！ＨＩ７Ｎ７
０１１・ＪＨ，Ｏの分子式を得る。ｔｔ比旋光度は（ａ
）、ｊ　−ａ　ａ、ｊ＠（＜ｍ　／　、　１（ｔｏ　）
　”Ｃｈｈ。

ホルオ午りミチンの赤外線吸収スペクトル（臭化カリウ
ム錠）は添付図面に示すとおりでおｐ１３４１００．３
２！０．コ９ゲＱ、／６６０゜／３１７０．／１７４０
．ＩＪｔＯ，／３（７０゜／　Ｊ　ＩＩ　Ｏ、／　０６
０　、　ｌ　Ｉ　Ｏ（ｍ−’　）　Ｉｃ特異吸収帯を示
す。

ホルオキシミチンのプロトン核磁気共鳴スペクトル（重
水中、１００ＭＨｚ）はコ、Ｏ−，−λ、４’（ＯＨ宜
×６）、λ、ｊ　（ＯＨ，Ｘ　／　）　、　、？、Ｐ〜
軌コｊ（ＯＨ。

Ｘ、？）、１．コ　ｊ　〜　４１．蓼　（ＯＨ，Ｘ　／
　）　、１．ｊ　〜Ｌ７　ｊ（ＯＨＸ　Ｊ　）　、　４
１．７．ｔ　〜１．ｆ　（ＯＨＸ　／　）　、　４．４
１４〜Ｊ、４Ｊ　（ＯＨＸｌ　）、／、ｅＪ　（−０−
ＨＸｌ、！　）。

ｔ、７　ｔ　（−０−ＨＸ　Ｏ，ｊ　）　ｐｐｍ　Ｉ／
Ｃ吸収を示す。

また第二の本発明の要旨は、ストレプトミセスＪ！１ｌ
ＩＫＪｉｌＩするホルオキ７ミチン生産菌を培養して本
物質を培養物中に生産、蓄積させ、これを採取すること
ｔ−％徴とする新規生理活性物質ホルオキクイチンの製
造法にある。

本発明の方法ＩＣおいて、ホルオ中シミチン生産菌とは
、ホルオキ７ｉテン金生産する菌株を意味する。本発明
のホルオキ７ミチンの生産に使用される生産菌の例には
本発明者らｖｃよって微生物化学研究所の構内で採取さ
れた土壌より分離されたストレプトミセス・ニトロスポ
レウス（Ｓｔｒｓｐｔｏ−ｍｙｃａｓ　ｎｌｔｒｏｍｐ
ｏｒａｕｓ　）　Ｍ　Ｇ　Ｊコブ−０Ｆ３ｄ株と本発明
者らに１って京都市左京区ｗｃ馬田の±春より分離され
たストレプトミセス・ザオミセテイカス（８ｔｒｅｐｔ
ｏｒｎｙｃｅ魯ｇａｏｍｙｃａｔｉｒｕａ　）　Ｍ　Ｇ
　３　Ｊ　ｊ　−０Ｆ７株がある。

これらの菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に寄託
中鎖し、昭和ｊｒ学年２月７日付でそれぞれ微工研の寄
第７Ｊダダ号（Ｆ’ＢＲＭ　Ｐ−７，２ダ４Ｉ）及び畝
工研酬寄＠７Ｊ弘、７号（Ｆ’ＲＲＭ　Ｂ−７Ｊ１１と
して受託された。以下にこれらのｇ３株の菌学的注状に
ついて記述する。

（イ）　ＭＧＪＪｆ−ＯＦ４６株の菌学的性状４　形態 ＭＯ，？コ９−ＯＦ３６株ｉｆ題＊観下で、分枝し九基
中閑糸工９比較的長い、真直ぐな（Ｉ（ｅｃｔｌｆｌ　
−ｅｘｌｂｌｌａｍ）気菌糸を形成し、ｑ旋形成及び輪
生枝は認められない。成熟し７を胞子鎖ｔ′ｉｌＯ個以
上の胞子の連鎖を認め、ｌ＠子の大きさはＱ、ｑ〜０．
ＡＸＱ、ｌ〜ハムダイロ７位で、その表面は平滑である
。

よ　各稽培地における生育状態 色の記載について〔〕内に示す操準はコンテイナー・コ
ーポレーション・オプ拳アメリカのカラー・ハーモニイ
＊　’ｖ　＝　ｘアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＯｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａの０ｏｌｏｒ　Ｈ
ａｒｍｏｎｙＭａｎｕａｌ　）を用いた。

（１）７ユクロース会硝酸塩寒天培地（，２７℃坏養） 無色の発育上に、茶入の気菌糸をうつすらと海生し、溶
解性色素は認められない。

（２）クルコース−アスパラギン寒天培地（１７℃培養
） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。

（３）　グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＦ−
培地３．Ｊ７℃培養） うす黄（／　／、　ｒｅ　、　Ｌｔ、　０ｌｌｖξ〕の
発育上に白〜明るい茶入〔コｆａ　、　０ｏｖａｒｔ　
Ｇｒａｙ　）　の気菌糸を着生し、溶解性色素はわずか
に黄味ｔおびる程度である。

（４１スターデーｌＩ！Ａｍ塩寒天培地（ｌ５Ｐ−培地
り。

コア℃培養） うす黄（／　／２　ｅａ　、　Ｌｔ、　Ｙｅｌｌｏｗ　
）の発育上に、白〜明るい茶入〔Ｊｄｃ、　Ｎａｔｕｒ
ａｌ　８ｔｒｌｎｇ　）の気菌糸を着生し、溶解性色素
はわずかに黄味をおびる程度である。

（５）　テロ７ノ寒天培地（ｌ５Ｆ−培地７．２７℃培
養） うす黄茶の発育上に、白〜明るい灰（Ｊｆｅ。

０ｏｖｅｒｔ　Ｇｒａｙ　）の気菌糸全着生し、かすか
に茶色の浴解注色′ｘ１に生産する。

（６）栄養寒天培地（１７℃培養） オリーブ灰（／　Ｉｇ　、　０１ｉｖｅ　Ｇｒａｙ　）
の発育上に、茶白（３ｂａ、　Ｐｅａｒｌ　５ｈｅｌｌ
　Ｔｉｎｔ−Ｊｄｃ、　Ｎａｔｕｒａｌ）の気菌糸全着
生し、溶解性色素は茶色金おびる。

（７）　イース）−麦芽寒天培地（ｌ５Ｆ−培地λ。

Ｊ７℃培養） うす黄茶の発育上に、白〜明るい茶入（Ｊｆａ。

０ｏｖｅｒｔ　Ｇｒａｙ　〜３　ｆｅ、　５ｉｌｖｅｒ
　Ｇｒａｙ　）の気菌糸全着生し、溶解性色素は認めら
れない。

（８）　オートイール寒天培地（ｌ８Ｐ−培地３、Ｊ７
℃培養） うす黄茶の発育上に、白〜明るい茶入（、？ｆｅ。

５ｉｌｖｅｒ　Ｇｒａｙ　）の気菌糸を着生し、溶解性
色素は閣められない。

（９）　グリセリン・硝酸塩寒天培地（，２７℃培養）
うす黄（／　／２　ｅｌＩ、　Ｌｔ、　Ｙｅｌｌｏｗ　
）の発育上に、白〜明るい茶入（Ｊｄｃ、　Ｎａｔｕｒ
ａｌ　Ｓｔｒｉｎｇ　）の気菌糸を着生し、溶解性色素
は黄味をおびる。

００　スターチ寒天培地（２７℃培養）うす黄の発育上
に、茶巾〜明るい茶入（Ｊｆｅ。

０ｏｖｅｒｔ　Ｇｒａｙ　〜３　ｆａ、　５ｉｌｖｅｒ
　Ｇｒａｙ　）の気菌糸を着生し、溶解性色素は認めら
れない。

ＯＢリンゴ酸石灰寒天培地（１７℃培養）うす黄（／　
ｃａ、　Ｐａ１ｅ　Ｙｅｌｌｏｗ　）の発育上に、白〜
明るい灰の気菌先金着生し、溶解性色素は認められない
。

０３　セルローン（コア℃培養） Ｊ／日間培養したが、発育は望められながった。

■　ゼラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（Ｊ□″ＣＩ＠養）では、うす黄の発
育上に、明るい灰〜明るい茶入の気菌糸を着生し、うす
茶色の溶解性色素を生産する。グルコース・ペプトンφ
ゼツチン培地（１７℃培養）では、うす茶の発育上に白
の気菌糸を着生し、茶色の溶解性色素を生産する。

Ｃ１４脱脂牛乳（３７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められ
ない。

３、生理的性質 （１）　生育温度範囲 イースト・スターチ寒天（可溶性殿粉／％、＃母エキス
（大豆栄養化学１１）０．−憾、紐寒天２．０憾ｓ　ｐ
Ｈ７，０を用い、コＯ℃、コ≠℃、コア℃、３０℃、３
７℃、ｊＯ℃の％温度で試験の結末、１０℃を除いてい
ずれの温度でも生育するが、最適ｍ度は２７℃〜３０℃
付近と思われる。

（２）　ゼラチンの液化（／ｊ％単純ゼラチン、コＯ′
ｃ培養及びグルコース・ペプトン争ゼ２チン、２７℃培
養ン いずれの培地においても培養後！日目頃から液化が始ｔ
ｂ、その作用は中等度〜強い方でおる。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、いずれも２７℃培養） 培養ｆ＆３日目日目ら氷解性が堅められ、その作用は強
い方である。

（４）　脱脂牛乳の凝固・ベゾトン化（脱脂牛乳、３７
℃培養） 培養後ケ日目頃から凝固が始まシ、ただちに凝固完了稜
ペプトン化が観察され、／ｌＩ日〜Ｊ１日目でほぼ完了
した。その作用は中郷度〜強い方である。

（５）　メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト
−ブロス、ｌ５Ｐ−培地ｌ；ペプトン・イースト−鉄寒
天、ｌ８Ｐ−培地６；チロシン寒天、ｌ８Ｐ−培地７、
いずれも２７℃培養） いずれの培地でも、メラニン様色素の生成は認められな
い。

（６）炭素源の利用性（プＩＪ　ｆ　）ｓムーゴトリー
ゾ寒天培地、ＩＭＦ−培地デ、２７℃培養）グルコース
、Ｌ−アラビノースを利用して発育し、Ｄ−キシ０−ス
、Ｌ−ラムノースはおそらく利用していると判定される
。Ｄ−フルクトースはおそらく利用していないと判定さ
れ、７：Ｌクロース、イノシトール、ラフィノース、Ｄ
−マンニトールは利用しない。

（７）　リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天、コア
℃培養） 培養ｌｊ日日目から発育周辺のリンゴ酸石灰を溶解し、
その作用は中等度である。

（８）　硝酸塩の還元反応（０，／％硝硝酸カリ含有シ
イノンＩＭＰ−培地ｔ、２’）′ｃｔ＠養）陽性である
。

以上の性状全要約すると、ＭＧ３．２９−ＯＦ！；６株
はその形態上から１輪生状及び螺旋形成を堅めず、胞子
の表面は平滑である。

種々の培地で無色〜うす黄、あるいはうす黄茶の発育上
に白〜明るい茶入の気菌先金着生し、溶解性色素は黄色
〜茶色味を呈する。メラニン様色素は陰性であシ、蛋白
分解力は中等度〜強い方、スターチの氷解性も強い方で
ある。なお、この薗株の細胞壇に含まれるコ、６−ジア
ミノピメリン酸はＬＬ−型であＴ）％ストレプトミセス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）　ｍｌ　Ｉｃ属するこ
とは明らかである。

これらの性状工りＭＯ３２９−ＯＦｓ６株に近縁の既知
菌種を検索すると、ストレプトミセス書ニドロス２レウ
ス（Ｓ、　ｎ１ｔｒｏｓｐｏｒｅｕｓ　、文献のＩｎｔ
ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓ
ｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｒｔｅｒｌ−ｏｌｏｇｙ　、　／
　１巻、１！、：Ｚｉ４、／ｆＡ＃；文献■Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｌｂｉｏ目ｃｓ　、　５ｅｒｉｅｓ
　Ａ　、　ｊ巻。

＜’７７頁、ｉｔｓ、ｚ：文献■ワックスマン著Ｔｈｅ
Ａｃｌｌｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　、コ　巻　、　コ　９　
ｌ　頁　、／７　６　／）　及びストレプトミセス・グ
リゼオルス（Ｓ、ｇｒｌｓｅ−ｏｌｕｓ　、文献■Ｔｎ
ｔｅｒｎａｔｌｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＳｙｌ
ｔｅｍａｔｌｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　、　ｔ　
１巻、／ＪＪ頁。

／１６ｔ：文献＠ワックスマン著Ｔｈｅ　Ａｃ目ｎ　ｏ
ｍｙ　−ｒｅｌｅｓ　、　Ｊ巻、、２！コ頁、ｉｑ６／
）があげられる。ストレプトミセスφグリゼオルスはゼ
ラチンの液化がゆるやかであり、ミルクの凝固がおそ（
、スターチの氷解性も弱い。又、Ｄ−フルク訃−スを炭
素源として利用すること等からへ４Ｇ、？Ｊデー０Ｆｊ
６株とは明らかに区別される。

ストレプトミセス・ニトロスプレウスとの注状の比較を
表にして示した。

ＭＧ３Ｊ？−０ＦｊＡ株とストレゾトミセス拳ニトロス
ポレウスの最も大きな相異点はセルロースの分解である
。その他わずかな違いけみられるが５両者は極めて近縁
な性質を示し、電子顕微鏡写真での胞子の形態も酷似し
てｈる。

これらの点から、ＭＧ、？Ｊｑ−ＯＦ４６株金ストレッ
トミセス・ニトロスポレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ−ｙｃ
ｅｓ口目ｒｏ＊ｐｏｒｅｕｓ　）　Ｍ　Ｇ　Ｌｔ　Ｊデ
ー０Ｆ３６と同定した。

（口ｌ　ＭＧ、？コｊ−ＯＦ７株の菌学的性状４　形態 ＭＯ，？２ｊ−ＯＦ７株は、顕微鏡下で分岐した基中菌
糸エフ比較的長いまっすぐな気菌糸あるい１Ｏ１１１以
上の胞子の連鎖金縁め、胞子の大きさは０、ＩＩ〜ＯＪ
　Ｘ　Ｏ，Ｉ　Ｎ／、０ミクロ７位でその表面は平滑で
ある。

、２　谷梼培地における生育状態 色の記載について〔〕内に示す標準は、コンテイナー・
ツー２レーシヨンｅオシ・アメリカのカラー・ハーモニ
イ拳マニュアル（０ｏｎｔｓｌｎｅｒＯｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ　ｏ（ＡｍｅｒＩ＋ａの０ｏｌｏｒ　Ｈａｒｍｏ
ｎｙＭａｎｕａｌ　）　’に用いた。

（１）７ユクロース・硝酸塩寒天培地（１７℃培養） うす黄〔２ｃｍ、　Ｌｔ、Ｉｖｏｒｙ　＋−２１ｅ、　
Ｍｕｓｔａｒｄ　）の発育上に白色の気菌糸をうつすら
と着生し、爵解性色累Ｆｉ認められない。

１２１　ｆＡ、コース・アスパラギン寒天培地（Ｊ　７
℃培養） うす黄（／　／２　ｅｓ、　Ｌｔ、　Ｙｅｌｌｏｗ　）
の発育上に、白〜灰白色（＜、Ｌｔ、　Ｇｒａｙ）の気
菌糸をわずかに着生し％溶解性色票Ｖｉ認められない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天培地（１８Ｐ−培
地３％１７℃培養） うす黄〜うす黄茶の発育上に白〜灰白色の気菌糸を着生
し、溶解性色素は認められない。

（４）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＭＰ−培地ｑ１Ｊ
７℃培養） うす黄（，２ｇｃ、　Ｂａｍｂｏｏ　）の発育上に白〜
黄味灰〔）ｅａ　、　Ｌｔ、　Ｗｈｅａｔ）あるいは明
るい灰（、？ｆｅ。

Ｓ目ｖｅｒ　Ｇｒａｙ　）の気菌糸を豊富に着生し、溶
解性色素は黄色味をおびる。

（５）　テロノン寒天培地（１８Ｐ−培地７，２７℃培
養） うす茶（３ｎｇ、　Ｙｅｌｌｏｗ　Ｍａｐｌｅ　）　〜
灰味黄茶Ｃ、？ｐｌ、　Ｄｅｅｐ　Ｂｒｏｗｎ　）の発
育上に灰味白〜茶白（３ｃｍ、　Ｐｅａｒｌ　Ｐｉｎｋ
　）の気菌糸を豊富に着生し、溶解性色素は茶色味をお
びる。

（６ン　栄養寒天培地（４７℃培養） 明るい茶入（Ｊ　Ｉｅ、　Ｃｌｎｎａｍｏｎ　）の発育
上に灰味白〜明るい灰の気菌糸を着生し、茶の溶解性色
素を産生ずる。

（７）　イースト・麦芽寒天培地（ｌ５Ｐ−培地λ、コ
ア℃培養〕 うす黄（Ｊ　ｎｅ、　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｇｏｌｄ　）の
発育上に白〜灰味白、黄味灰の気菌糸を着生し、溶解性
色素は認められない。

（８）オートγ匙−寒天培地（ｌ５Ｐ−培地３、コア℃
培養〕 うす黄（／　ｆｂ、　Ｐａ５ｔｅｌ　Ｙｅｌｌｏｗ　）
の発育上に白〜明るい灰の気菌糸を着生し、黄色の溶解
性色素を産生ずる。

（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地（，２７℃培養）う
す黄（，７，ｅａ、　Ｌｔ、　Ｗｈｅａｔ　）の発育上
に白色の気菌糸をわずかに着生し、溶解性色素は聴めら
れない。

００　スターチ寒天培地（１７℃培養）発育は無色〜う
す黄（／　’／、　ｅａ、　Ｌｔ、　Ｙｅｌｌｏｗ　）
、気菌糸は着生せず、溶解性色素も認められない。

（Ｉｌｌ　ＩＪンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）無色
〜うす黄の発育上に白色の気菌糸をわずかに着生し、溶
解性色素は認められない。

０２　セルロース（Ｐ紙片添加合成液、Ｊ７℃培養） コ１日間培養したが、発育は認められなかつ九、□□□
ゼラチ／穿刺培養 単純ゼラチン培地（−０℃培養）では無色〜うす黄の発
育上に白色の気菌糸をわずかに着生し、茶の溶解性色Ｘ
を産生ずる。グルコース会４プトン・ゼラチン培地（１
７℃培養）では発育は無色〜うす黄、気菌糸は着生せず
、溶解性色素は暗い茶色を呈する。

０４　脱脂牛乳（３７℃培養） 発育は無色、気菌糸は着生せず、溶解性色素は茶色味會
おびる。

３　生理的性質 （１）生育温隨範囲 スターチ拳イー゛スト寒天（町溶注澱粉ｉ、ｏ％イース
トエキス（大豆栄養化学製）０．Ｊ％、紐寒天、？、０
９６．　ＰＨｑ、ｏ）＠用いて、２０℃、２１４℃。

Ｊ７℃ｌＪＯ℃、３７℃、８０℃の各温度で試験の結果
、１０℃、Ｊ弘℃、２７℃、８０℃で良く発育し、８７
℃ではわずかに発育、−ｔＯ℃では発育は認められなか
つ九。最適温姪ｌ−ｔλ７Ｃ〜ＪＯ℃付近と思われる。

（２）　ゼラチンの液化（１３％単純ゼラチン１．２０
℃ｍ養；グルゴースｅペプトン・ゼラチン、１７℃培養
） 単純ゼラチン、グルコース・ペプｔ／−ゼラチンとも、
培養後７日目頃から液化が始まったが、その作用は中等
度〜弱い方である。

（３）スターチの加水分解（スターチ・無機塩寒天培地
及びスターチ寒天培地、何れも１７℃培養） スターチ・無機塩寒天培地では培養後３日目頃から、ま
たスターチ寒天培地では培養ｉｊ日日目からともに氷解
性が認められ、その作用は中等度〜強い方である。

（４）　脱脂牛乳の凝固・ペプトン化（脱脂牛乳、３７
℃培養） 培養後７日目頃から凝固が始まり、直ちに完了後、ペプ
トン化が始まる。その作用は中等度である。

（５）　メラニン色素の生成（トリプトン−イースト・
ゾロス、ｌ８Ｐ−培地ｌ：ペプトン−イースト・鉄寒天
、ＩＭＰ−培地６：チロ７ン寒天、ｌ５Ｐ−培地７、い
ずれもコア℃培養）いずれの培地でも認められるが、チ
ロ７ン寒天の場合Ｆｉ弱い方である。

（６）　炭素源の利用性（ゾＩＪ　ｐハム拳ゴ）　ＩＪ
−ゾ寒天培地、ｌ５Ｐ−培地２．２７℃培養）グルコー
ス、Ｄ−キノロースを利用して発育し、シュクロース、
イノジット、Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マン
ニットは利用しない。Ｌ−アラビノース、Ｄ−７ラクト
ースはおそらく利用しないと思われる。

（７）　リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天。

）７℃培養） 培養後ＩＱ日日目から発育周辺のリンゴ酸石灰の溶解が
認められ、その作用は中等度である。

（８）硝酸塩の還元反応（０，１％硝酸カリ含有ペプト
ン水、ｌ５Ｐ−培地ざ、コツ℃培養）陽性である。

以上の性状を要約すると、ＭＧＪＪｊ−ＯＦ？株はその
形態上から胞子のうｔ−認めず、気菌糸にらせん形成及
び輪生枝を形成しない。また胞子の表面は平滑である。

塊々の培地で無色〜うす黄あるいは黄茶の発育上に白〜
明るい灰あるいは黄味灰の気菌糸を着生し、溶解性色素
は黄色または茶色味會おびる。メラニン様色累は陽性、
蛋白質の分解力は中等度、スターチの氷解性は中等度〜
強い方である。なお、この菌株の細胞壁に含まれる２、
ｂ−ジアミノピメリン酸はＬＬ−型であり、ストレプト
ミセス（Ｓｔｒｅｐｔｃｐｍｙｃｅｓ　）　ＩｊＡｔｆ
ＣＩＡすることは明らかである。

これらの性状エフ既知菌種を検索すると、ストレプトミ
セスーザオミセテイカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ／
） ｚａｏｍｙｃｅｔｔｃｕｓ　、文献　Ｉｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉ
ｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　、　２４巻、３７ｑ、
２） 頁、／９７Ｊ、文献　Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｉ　
Ａｎｌｌｂｉ　−ｏｔｉｃｓ　８ｅｒｌｅｓ　Ａ　７巻
、ｉ、ｙａ頁、７　ｙｓ＜ｔ　）が最も近縁の種として
あげられる。

ＭＧ、？コｊ−ＯＦ７株とストレフトミセス・ザオミセ
テイカスＩＭＯＳ−０６６３（１８Ｐｓ１９４）株とを
実際に比較倹約し、その成績の大要を次表に示す。

表にみられるように、ＭＯ，？ｚｊ−ＯＦ７株とストレ
プトミセス・ザオミセテイカスはＬ−アラビノースの利
用を除いて、は／よ一致した性状を示し、両者は極めて
近縁の種と考えられる。工っで。

ＭＧ、？コｊ−ＯＦ７株をストレプｔミセスｅザオミセ
テイカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｚａｏｍｙｃｅ
ｔｉｃｕｓ　）ＭＧ、？コｊ−ＯＦ７と同定した。

次に、本発明のホルオキ／ミチ／の製造法全具体的に説
明する。本発明の方法を実施するに当って、ホルオ午り
ミチン生産菌を培養するのに用いる栄養源としては、通
常の微生物が利用し得る公知の栄養Ｒを適宜使用できる
、例えは、市販されているグリセリン、グルコース、ラ
クトース、デンプン、糖蜜などの炭水化物、油脂類など
を炭素源として、市販されているペプトン、肉エキス、
コーン・ステイープ・リカー、綿実粉、落花生粉、大豆
粉、コーン・グルテンミール、魚粉、酵母エキス、Ｎ−
Ｚアミン、カゼイン、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウムなどを室紫源として、食塩、リン
ｆＩＲ塩、炭酸カルシウム、硫酸マグネ７ウムなどを無
機の栄養源として、それぞれ使用できる。特に好ましい
培地成分としては、炭素源としてグリセリンなど、窒素
源として綿実粉などがある。グリセリン八ｊ％、綿実粉
／、Ｓ％、食塩Ｏ９，？％、Ｌ−アス／ぞラギン・ｌ水
和物Ｏ，コ％を含む培地などを用いるのが好ましい。

ホルオキ７だチンの大量生産には、液体培養が好ましり
、培養温度としては、ホルオキ／ミチン生産菌が発育し
、ホルオキシミチンを生産する範囲の任意の＠ｆｅ適用
し得るが、特に好ましい温度はコｊ−，，？ｊＣである
。培養は通常本物質が培養物中に生産され、充分に蓄積
するまで＃１続される。例えば、ホルオキシミチン生産
菌ストレプトミセスニトロスポレウスＭＧ、？、２デー
０Ｐｊ６ｉの場合には、！００−の坂０フラスコにグリ
セリｙ　ｔ　、ｊ　Ｘ　ｓ綿実粉”’Ｘｂ　食ｔｘｏ、
ａ％、Ｌ−７スパラギン・ｌ水利物Ｏ，コ％を含む培地
（ｐＨ７，４’に１ｌｌＩ！１Ｉ）１．２０ｊＩ／金入
れ、滅菌した鏝、これにホルオキシミチン生産菌ストレ
プトミセスニトロスポレウスＭＧｉＪＰ−ＯＦｊ６株の
斜面培養物の−白金耳ｔｔ−接椙し１，２７℃で好気的
に振とぅ培養を行なったところ、培養後ａｔｒ時間〜１
２λ時間の間にホルオキ／ミテンの蓄積が認められ友。

ホルオＩ？７ミチンはジャー培養法でも振゛とぅ培養と
同様ＶＣよく生産される。例えは、３ｏ！の醗酵槽にｌ
ｊｋの培地を入れて滅菌し、あらかじめ培養した種ｔ＠
養液をＯ，Ｓｔ接種し、コア℃で毎分ｉ３Ｂの無菌空気
１に通気し、毎分ＪＯＯ回転で攪拌した。仁の条件で本
物質の生産は６１時間で最高に達した。ホルオキシミチ
ンの培養工程ならびに精製工程中での追跡は５次の方法
による抗アンジオテンンンＩ変換＃素活性測定に基づい
て行なった。抗アンジオテンシンＩ変換＃素活性の測定
は、Ｍ　、ＨＡＹＡＫＡＲＩ　ら、Ａｎａｌｙｔｌｃａ
ｌ　Ｂｌｏｃｈｅｍｌｓ　−ｔｒｙ　ｇ　ｕ巻、３４１
〜Ｊ６Ｐ頁（ｌり７ｇ年）記載のアンジオテンシン変換
酵素活性測定法を改良して行なった。すなわち、食塩０
．３　Ｍ　ｉ含むトリｘ−ｔｉｒＲ緩衝液（０，にＭ　
、　ｐＨｔ、ｏ　）Ｋ基質ヒプリルーし一ヒスチジルー
Ｌ−０イシン１ｋｊキ／ｄのｌｊｋ度で溶解し、この溶
液ｏ、ｏ、３ｍ１Ｋ−検体を含む溶液ｏａｏｗを加えた
混合溶液を、？７Ｃ，，？分間加温した鏝、牛肺臓より
部分精製したアンジオテンシ／Ｉ変換１５Ｆ累溶液ｔ−
０，０！；−加えて、３７℃１．７０分間反応させた。

／Ｎ苛性ソーダｊｆ０．０３ｍ１加えて反応を停止し、
ｌｊ分分波Ｃ０，０６Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ
７，Ｊ）ｆ：Ｊｄ加え、次いで７％塩化シアヌルのメチ
ルセロソルブ溶液を２−加えて発色させ、室温にｉｓ分
間放置後、３ざコｎｍ　における吸光度（ａ）　’ｆｃ
測定した。同時に検体を含まない混合ｍ液を同様１ｃ詞
製し、同様に反応させた対照の吸光［ｆｂｌ　を測定し
、アンジオテン７ンエ変換酵素阻害率を式：　（（ｂ−
ａ）／ｂ）Ｘ１００　Ｋ工り計算した。この定量法で純
粋なホルオキシミチン会１水和物は７μ？／−のｅｌｆ
でアンジオテン７ンエ変換酵素ｆ：３０％阻害し几。（
ＩＯしｏ−７μＶ／−） ホルオキシミチン生産菌の培養Ｐ液中および菌体中に存
在するホルオキシミチン全培養物から採取するに当って
は、培養Ｐ液から吸着剤に吸着おＬび脱離させる方法で
好収率で採取できる。吸着剤としては、活性炭、イオン
交換樹脂などが使用できる０例えば、示ルオキクミチ／
は活性炭に吸着され、５０％アセトン水で溶出される。

培養Ｆ液にこれのコアｉ％の活性炭を入れて攪拌し、水
洗後培養Ｆ液の一奮の５０％アセトン水で溶出すると活
性分画が得られる。これを減圧下Ｆｃｆ！に縮するこト
ＩＣよりホルオキシミチンの粗濃縮液が得られる。これ
を水でうすめ、培養Ｐ液に換算して／／６０の体積のＤ
ＢＡＦｆ−七ファデツクスＡコｊ（ＯＨ型）のカラムに
吸着させ、水洗後０．／Ｍの食塩水で溶出できる。これ
を塩酸で中和した後、減圧下ＶＣ濃縮することに工り粗
粉末を得ることがテキる。また逆相高速液体クロマトグ
ラフィーも精製に用いられる。特にヌクレオシル（Ｎｕ
ｃ　Ｉｅｏａ　ｌ　ｌ　）ｊ　Ｏ／　ｔ　（Ｍａｃｈｅ
ｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ　社！ｌりのりｏｖトゲラフイーが
有効であり、メタノール：ｏ、ａに酢酸ｗ＝ｌｏ：ｔｏ
の溶出液でホルオ牛りミチンを精製することができる。

本発明のホルオキシミチ／の生物活性についてその薬理
作用を検討した。その結果、本物質が降圧作用ｔ−有し
ていることが見出された。本発明のホルオキシミチ／の
降圧作用について試験例を挙げて１兄明する。

試験例 本例は、自然発症高血圧ラント（８ＨラツＦ）における
ホルオキ７ミチ／の血圧に及ばず効果を示す。

体＠、３２０〜ａＳざＶのＳ　Ｈ−ラットにホルオキシ
ミチン・コ水和物′１ｉ−ｌコ、ｊｑ／に４．コＳ〜／
呻、ｊＯ岬／呻の投与量で、水浴液として経口投与した
。投与後、経時的に血圧測定を行ない、ネルオキシミチ
ン投与群と蒸溜水のみを経口投与した対照動物の血圧変
化を比較した。

試験結果を第１表に示す。

以上の結果↓り、ホルオキシミチンは自然発症高血圧ラ
ツｉ（＋３）（−ラット）の血圧を降下させる物質であ
ると認められた。したがって、本発明によって得られた
ホルオヤシミテンは降圧剤として有用である。

マウスに対する急性毒性試験では、ホルオギシミチン・
コ水和物のざＯＯキ／ｋｆの投与量でマウスに静脈内投
与しても死亡Ｆｌは認められない。したがってホルオキ
シミチンは毒性の低い物質であると認められる。

Ｌ、７ｊがって第三の本発明によれば、次式０式％ で表わされる新生理活性物質ホルオキシミチン金有効成
分とする降圧剤が提供される。

本発明に従う降圧剤としては、ホルオ′＃７はチンまた
はその薬学的に許容される塩またはエステルのいずれか
を常用の担体と配合して製剤でき、享らには各種の化学
療法剤を配合することもできる。

ホルオキシミチンの塩の例としては、ホルオキシミチン
のヒＰロキサム基における。薬学的に許容できる陽イオ
ン、例えばアルカリ金属イオン。

アルカリ土類金属イオン、その他の適当な金属イオンの
塩がある。また、ホルオキシミチンのエステルの例とし
ては水酸基におけるギ酸、酢酸などの有機酸又はその他
の適当な酸とのエステルがある。

本発明の化合物ないし薬剤の投与形態は、経口、注射、
直腸坐剤のいずれでも工い。注射剤を調製する場合は、
上記有効成分化合物にｐＨ８１１整剤、緩衝剤、安定化
剤、賦形剤等を添加し、常法により凍結乾燥を行ない、
凍結乾燥注射剤を作ることができ、ま７を有効成分化合
物ＩＣ％　ｐｉ−１調整剤、緩衝剤、安定化剤１等張剤
、局麻剤等全添加し、常法ＶＣより皮下、筋肉内、静脈
内注射剤を作ることもできる。経口用固形製剤ｔｖ４製
する場合、有効成分化合物に、賦形剤、更に必要に応じ
て結合剤、崩壊剤、滑沢剤５着色剤、矯味剤、矯臭剤等
を加えた後、常法ＩＣＸ９錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散
剤、カプセル剤等を作ることができる。経口液状製剤ｔ
ｇｉｉ製する場合には、有効成分化合物に、矯味剤、緩
衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて、常法にエリシロッ
プ剤お工びＰライシロップ剤を作ることができる。直腸
坐某製剤を調製する場合には、有効成分化合物ＶＣ％賦
形剤、更に必要に応じて界面活性剤を加えた後、常法Ｖ
ＣＬｆ）坐削とすることができる。

ホルオキシミチンの投与量は症状にエフ異なるが、成人
ではホルオキ７ミチンとしてＩ（６Ｊｏ、０２〜２００
０岬を７日３回投与するのが工い。

次に本発明のホルオキ７ミチンの製造法に関して実施例
を示すが、本物質の理化学的性状ならびに生産方法、そ
の精製法が本発明者らＶｃ工って明らかにされたので、
本明細書に示された方法を修飾することは容易であり、
本発明は以下に記敞する実施例のみに限定されるもので
はない。

実施例／ ホルオキシミデン生産菌ストレプトミセス・ニトロスポ
レウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｎ口ｒｏｓｐｏｒ
ｅｕｓ　）ＭＧｊコ？−０Ｆｊル株（微工研閑寄７お１
号）の斜面培養物から一白金耳量を、あらかじめ／ＪＯ
℃、コＯ分間滅菌し次培地（ｓｏｏｗｔの坂ロフラスコ
＃Ｃ／ＪＯ−ずつ分注したグリセリフ１Ａ；％、綿実粉
１．３％、食塩０．３％、Ｌ　アスノぐラギン・ｌ水和
物Ｏ，コ％を含み、　ｐＨ７，弘に調製し滅菌し几培地
１に’ｉ＆攬した。１７℃、毎分１３０往復で好気的に
培養し、経時的にホルオキシミチン生産量を検討した。

その結果、アンジオテン７ｙＩ変換酸素阻害活性より定
量したホルオキシミチンの濃度は培養３日後に最高に達
し、培養７２日Ｖｋまで安定に維持され九。

実施例コ 実施例／に示した培養条件で、ホルオキクミチン生産菌
ストレフトミセス・ニトロスポレウスＭＧ３ａ９−ＯＦ
３６抹ｔ−７％時間培養し九撞培養液を実ｌ１ｌＩ例１
と同様の培地１ｃｊ−接種し、同様に７％時間培養した
。得られ九培養液ＪＪｋ廿礫土ｔ−濾過助剤に用いて一
過し、水泳し、Ｓ、ＪＪｌのＰ液を得た。このＦ液のア
ノジオテンシンＩ　変ｌｌ！１９素阻害活性（ＩＯ，、
）は１０μＪ／ｒｄ　であった、得られた培養炉液ｓ、
ｓｔに、クロマト用活性員（和光紬薬製）１００ｆを加
えて攪拌し、ホルオキクミデンを吸着させた。戸遇して
活性炭を集め、水コ！で洗滌後、この活性炭１ｒＪ、Ｑ
　Ｊの５０％アセトン水中で３０分間攪拌し、ホルオ＝
？７ミデンを浴離した。これｆ：濾過し、Ｐａを減圧下
に濃縮乾固して、粗粉末／　Ｊ、ｒ　ｒ　會得＊　（Ｉ
Ｏ，、−ｕ／６μ９／−）。得られた粗粉末を５ＯＯ−
の脱イオン水に溶解し、ＤｌｉｔＡＢ−セファデックス
Ａ　、２　！　（ＯＨ−型）コＳＯ−のカラムに吸着さ
せ、脱イオン水で洗滌後、０．１Ｍの食塩水ｌ！で溶出
した。静出液を塩酸で中和し、減圧下ＶＣ＠縮乾固して
／／、λＶの粗粉末を得た（Ｉ（１，１ｏ−、？Ｊμｒ
／ｙｎｌ　）。この粗粉末を脱イオン水１００ｙｄＫ溶
解し、逆相シリカゲル（Ｋｌｅｓｅｌｇｅｌ　Ａ　Ｏ、
５ｉｌａｎｌｘｅｄ　、　メルク社製）ｔ−ＡＯＯ一つ
めたカラムに吸着させ、脱イオン水で展開した。活性分
画を集め、減圧下ＶＣ＠縮乾固して、？、ＪＰｒの粗粉
末を得７’ｊ　（工０＠６＝　／　Ｊ、４’　１１９／
ｄ）。これｆｔ９．３％エタノールコｏｏｔａｔとぶｊ
％アンモニア水ｊＱ−の混液に溶解し、これｌあらかじ
め２Ｆ、ｊ　％エタノールニーＳ％アンモニア水＝Ｕ：
ｔの混液で平衡化したシリカゲルカラム（コｊＯｍ）Ｖ
Ｃ吸着させ、同醇媒混液で展開した。

活性分画を集めて減圧下ＶＣ＠縮乾固し、ハタ６Ｖの粗
粉末を得た＊　（Ｉ　Ｏｇｏ−／　／　Ａｔ／ｄ　）。

この粗粉末を０．４１％酢酸水、？０ｔｄＶＣ溶解し、
これを１０−ずつ８回に分けて、あらかじめメタノール
：０．９％酢酸水−１０：Ｆ（ＩＴの混液で平衡化し九
分取用高速液体りロマトカラム：ヌクレオンルｊＯ／ｒ
　コＱ目（直径）　Ｘ　ｊ　００　ｗａｇ　（長さ）（
Ｍａｃｈｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ　社製）Ｋ吸着させ、同混
液で毎分６−の流速で浴出した。≦−ずつ分画し、活性
分画を集めて濃縮乾固し、それ會ｉｏｏｗｔの蒸溜水に
溶解して凍結乾燥することにより白色粉末へコ３ｆを得
友、こうして得られたホルオキ７ｉチンーコ水和物のア
ンジオテン７ンエ変換酵素阻害活性（ＩＯＩ・）は７μ
ｆ／−であった。

実施例Ｊ ホルオキシずチ／生産薗ストレプトミセス・ザオミテイ
カス（ｌｌｌｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｚａｏｍｙｔｉ
ｃｕｓ　）　Ｍ　Ｇ３コｊ−ＯＦ７株（微工研菌寄７コ
ｔ３号）の斜面培養物からｌ白金耳量ｔｓあらかじめ７
１０℃、１０分間滅菌した培地（に００ｍの坂ロフラス
コＩｃ／コＱ−ずつ分注したグリセＩ）：／／、！ｉ％
、綿実粉７．３％１食塩０．３％、Ｌ−グルタミン酸・
ｌナトリウム塩０，４％を含む滅菌前１ｃｐＨ７，４１
に調製し几培地）に接種した。１７℃で毎分／ＪＯ往復
で好気的に振とり培養し、培養３日後の培養液全上記の
滅菌した培地／ＪＪを含む３０！のジャー培養１１１４
’ｆｉ［％それぞれｏ、ｓｔ、ずツｆＩ：、ｍ　Ｌ、、
２７℃で毎分／ｊＪの無菌空気を通気し、毎分２３０回
転で攪拌、培養し九、培９４３日後、得られた培養液を
戸遇し、水洗液を合せて６７）のＦ液を得た。これに活
性炭／ｋｆを加えて攪拌し、ホルオキシミチン金吸着さ
せた。Ｆ遇して活性炭を集め、水で充分洗滌後、この活
性炭をｉｓｉの３０％アセトン水中で楡拌することにＬ
り、ホルオキシミチンを俗離した。これをＦ遇し、Ｆ液
を減圧下に濃縮して、７．ＡＪの濃縮液を得た。この濃
縮液７．６！をＤＥＡＦ！−セファデックスＡＪｊ　（
ＯＨ−型：／、１Ｊｌｋのカラムに吸着させ、脱イオン
水で洗滌後、０．ＩＮ食塩水ｑ！で浴出した。ｘＮＨｃ
ｌ＃でｐＨ７，０に中和ｆ浴出液を減圧下に濃縮乾固し
てＡＩＪＶの粗粉末を得た。この粗粉末を脱イオン水３
００ｔｄＫ溶解し、６Ｎ塩酸でｐＨ３，０とし、あらか
じめＱ、＜ｔ％酢酸水で平衡化した逆相シリカゲル（Ｋ
ｌｅｓｅｌｇｅｌ　６０　、ｍ１ｌａｎｌｚｅｄ　、メ
ルク社製）／Ａ；　４％のカラムに吸着嘔せｏ、４！％
酢酸水で展開した。活性分画を集め、ダ７０−の粗分画
を得た。

この活性分画ｔ１７０ｄのうちの１ｏｏ−を減圧下Ｉｃ
ＪＯｆ！Ｉ！に濃縮した。これをあらかじめ１９（酢酸
水で平衡化した大量分取用逆相ＨＰ　Ｌ　Ｏ力クム（Ｐ
ｒｅｐＰＡＫ−ｊｏｏｌｏＩＢ　）　ＶＣウォーターズ
社製ＰｒｅｐＬＯ／Ｓｙｓｔｅｍ　、５００　ｆｔ用い
て吸着させ、同）（ＰＩ、Ｏシステムに工りｌ′９６ｆ
ｎ酸水で毎分ＳＯ−の流速で展開した。活性分画を集め
、減圧下に濃縮乾固することＶＣより６．３　Ｊ　Ｐの
粗粉末を得た。

この粗粉末を０９９％酢酸水に溶解し、７０回に分けて
、あらかじめメタノール二〇、ｌＩ％酢酸水−１０：ｙ
ｏの混液で平衡化し九分取用ＨＰＬＣＩカラム：ヌクレ
オシルｊＣＨ（前出）Ｋ吸着させ、同混液で毎分６ＩＩ
！／の流速で溶出した。６−ずつ分画し、それぞれの活
性分画金集めて濃縮し、水を加えて凍結乾燥することに
より白色粉末ｊ、Ａ　Ａ　Ｐ　ｆｔ得た（１０ｓｏ＝７
μＶ／−）。こうして得られた物質は理化学的性状がス
トレプトミセス・ニトロスポレウスＭＧ３Ｊ、ｊ−ＯＦ
ｊ６株の生産する。ホルオキシミチン・λ水和物の理化
学的性状と完全に一致した。ストレプトミセス・ザオミ
テイカスＭＧ３コｊ−ＯＦ７株の場合は収量は、培養Ｆ
液ｌコＪ　Ａ工りホルオギ７きチン・２水和物が３．６
６２得られたことになる。これよりストレプトミセスＩ
／ｒ４ＶＣはニトロスポレウスＶｃｒａらずザオミテイ
カスにもホルオキシミチノを生産する株が存在すること
が明らかとなつ九。

【図面の簡単な説明】

図面は臭化カリウム錠で測定（九ホルオキ７ミチンーコ
水和物の赤外線吸収スベクｉｘ’を示す。 手続補正書（自発） 昭和５９年６月１９日 特許庁長官殿 ■、小事件表示 昭和５９　年特許願第１００４４１、 発明の名称 新生理活性物質ホルオキシミチン、 その製造法３よび用途 ３、補正をする者 事件との間係　特コ出願人 住　所　東京部品用区上大崎３丁目１４番２３号名　称
　財団法人　微生物化学研究会 ４、代理人 〒１０５　住所　東京都港区西新橋１丁目１番１５号物
産ビル別館　電話（５９１）　０２６１５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の械 ６、補正の内容 （１１明細書、第１１頁第６行及び第７行の１−（ＯＨ
〆１）」をｒ（Ｃ）ｌｘｌ）Ｊと補正する。 （２）同、第１４頁第２行のｒ　２ｄｃ、　Ｊをｒ　２
ｄｃ、　Ｊと補正する。 （３：　同、第１４頁第１１行のｒ　１　ｉｆ、Ｊｆ：
ｒ　１　ｉｓ’、　Ｊと補正する。 （４）　同、第１４頁第１２行のｒ　３ｂａ、　Ｊをｒ
　３ｈａ、　Ｊと、またｒ　３ｄｃ、　Ｊをｒ　３ｄｃ
、　Ｊと補正する。 （５）同、第１４頁第１６行のｒ２ｆｅ、Ｊをｒ２ｆｅ
、ｊと補正する。 （６１同、第１４頁第１１行のｒ　３ｆｅ、　Ｊをｒ　
５ｆｅ、　Ｊと補正する。 （７）同、第１５頁第１行のｒ３ｆｅ、Ｊをｒ３ｆｅ、
、Ｊと補正する。 １８）　同、第１５頁第１６行の［セルローン−１を「
セルロース」と補正する。 （９）同、第２２ｗ第２行の「分岐」を「分枝」と補正
する。 （１（ｊ　同、第３３頁第１６行の「アンジオテンシン
」のつぎ［ｒＩＪを挿入する。 ０υ　同、第３４頁第１行のｒ０４０ｗ／Ｊを「０４０
ゴ」と補正する。 ｔｌＥ　同、第３５頁第９行、第４３頁第１７行及び第
４６頁第８行のｒ　Ａ　２５　ＪをｒＡ−２５Ｊと補正
する。 ０階　同、第４４頁第１８行の「１８」のつぎに「、」
を挿入する。 （１４同、第４４頁第１９行の［Ｍａｃｈｅｒｙ　Ｊを
「Ｍａｃｈｅｒｅｙ　Ｊと補正する。 ０！１９　同、第４７頁第１５行の「生産する。ホル」
ｔｌ−「生産するホル」と補正する。 Ｏｅ　同、第４８頁第１行〜第２行の［ザオミテイカス
Ｊを「ザオミセテイカス」と補正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ％式％ で表わされる抗アンジオテン７７Ｉ変換酵素活性ｔ−有
   する新生理活性物質ホルオキシミチン、またはその薬学
   的に許容できる塩またはエステル。 ２　ストレフ”トミセス属に属するホルオキシミチン生
   産菌を培養して、式 ％式％ で表わされる新生理活性物質ホルオキシミチンを培養液
   中に生産、蓄積せしめ、これを採取することを特徴とす
   る新生理活性物質ホルオ中７ずチンの製造法。 ３、式 ％式％ で表わされる新生理活性物質ホルオキシミチンを有効成
   分として含有する降圧剤。