JPS59184128A - 多糖体ｔ２５ｇ２およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 １０発明の背景 技術分野 本発明は新規な多糖体Ｔ２５ＧＩＩおよびその製造法に
関する。

さらに詳しくは、本発明は、ツルナ全草の熱水抽出液か
ら単離精製された多糖体Ｔ２５Ｇ］ｌおよびその製造方
法に関するものである。本発明の多糖体は、低毒性の抗
炎症剤として有用である。

先行技術 ツルナは日本の民間薬で別名をハマジシャといい、胃癌
、胃潰瘍によいとされている。しかし、その成分および
薬理作用は未詳であシ、近年出版されている薬用植物関
係の書物には「胃癌に効ありというが疑わしい」とされ
ている〔難波恒雄著、原色和漢薬図鑑（下）、昭和５５
年４月１日発行、第２１頁〜第２２頁参照〕。

本発明者等は先にツルナの全草を熱水で抽出し、得られ
た抽出液をアルコール沈澱法または透析膜法によシ精製
して抗腫瘍作用を有するツルナ抽出物を得た（特開昭５
７−１９３４１６　）。本発明者等はこの抽出物をさら
に分子篩剤で精製した結果、抗腫瘍作用を有する多糖体
の他に抗炎症作用を有する多糖体を単離することに成功
し、本発明を完成した。

ツルナに抗炎症作用のある成分が含有されていることは
現在まで報告されていない。

■０発明の目的 従って本発明の目的は、抗炎症作用を有する新規な多糖
体を提供することにある。本発明の多糖体は後述するご
とく、カラゲニン浮腫に対して強い抑制作用を示し、毒
性は低い。

本発明の目的はさらに、上記多糖体を製造する方法を提
供することにある。本発明の方法によれば上記多糖体は
、ツルナ全草の熱水抽出液を分子篩処理、特にグルろ過
し、分子量約２４，０００の化合物を採取することによ
って製造される。

■３発明の詳細な説明 本発明は第１にツルナ全草よシ得られる下記特性を有す
る多糖体Ｔ２５ＧＩＩからなる。

（イ）　色と形状 白色粉末 （ロ）　溶解性 水ニ可溶、アルコール、ベンゼン、酢酸エチルなどの有
機溶媒に不溶 （／う　糖組成 主としてグルコースよシなシ、さらにアセチル化された
グルコース、アラビノースおよびガラクトースを含む。

に）分子量 分画分子量が１０，０００〜１００，０００の高速液体
クロマトグラフィーによシ単一のピークを与え、分子量
は約２４，０００である。

１　　　（ホ）　比旋光度 〔α’：ｌ、　−＋１４４．０°（Ｃ＝１．０　、、　
Ｈ２ｏ　）（へ）赤外線吸収スペクトル 第１図に示す通シである。

ＩＲｖＫＢ”ｃｎＬ−１：　３４００，２９３０，１７
５０．１６３０ａＸ （ト）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸収を示す。

本発明は第２に、ツルナ全草′の熱水抽出液を分子篩処
理し、分子量約２４，０００を有する化合物を採取して
なる上記多糖体Ｔ２５ＧＩＩの製造法からなる。

本発明は第３に、上記分子篩処理は、先ず分画分子量が
１，０００〜５０，０００乃至１，０００〜１００，０
００の範囲にある分子篩剤を用いて行ない、得られる多
糖体の２つの両分のうち、最初に溶出する糖両分をさら
に分画分子量が１，０００〜１００，０００乃至１，０
００〜２００．０００の範囲にある分子篩剤を用いて分
子篩処理を行ない、得られる多糖体の２つの両分のうち
２番目に溶出する糖両分から多糖体を採取してなる上記
多糖体Ｔ２５ＧＩ［の製造法からなる。

本発明は第４に、上記分子篩処理として、先ず分画分子
量が１，０００〜５０，０００乃至１，０００〜１００
，０００の範囲にある分子篩剤を用いて行ない、得られ
る多糖体の２つの両分のうち、２番目に溶出する糖両分
をさらに分画分子量が５００〜１０，０００乃至５００
〜５０，０００の範囲にある分子篩剤を用いて分子篩処
理を行ない、得られる多糖体の２つの両分のうち最初に
溶出する糖画分から多糖体を採取してなる上記多糖体Ｔ
２５ＧＩ［の製造法からなる。

本発明は第５に、上記分子篩処理がグルろ過であシ、上
記分子篩剤がグルろ過剤である上記多糖体Ｔ２５ＧＩＩ
の製造法からなる。

本発明は第６に、上記ゲルろ過剤がデキストラングル、
ポリアクリルアミドグル、親水性ポリビニル系ゲルまた
は多孔性ガラスピーズである上記多糖体Ｔ２５ＧＩＩの
製造法からなる。

本発明の多糖体を製造するに際してはツルナ全草の熱水
抽出液を分子篩処理、特にグルろ過し、分子量約２４，
０００を有する化合物を採取する。

ツルナはツルナ科（ザクロソウ科、Ａｉｚｏａｃｅａｅ
）に属し、学名はＴｅｔｒａｇｏｎｉａ　ｔｅｔｒａｇ
ｇｎｏｉｄｅｓ（ＰＡＬＬ、）０、Ｋｕｎｔｚｅである
。本発明では、その全草の抽出液を原料として使用する
。ツルナの採集時期には特に制限はない。ツルナの全草
を熱水で抽出処理する操作は、ツルナの全草に、８０℃
以上の熱水を加えるかあるいはツルナ全草に水を加え、
その混合物を加熱沸騰させることによって実施される。

加熱は沸騰水浴中または直火で行うことができる。

抽出時間は原料の品質等に従って適宜決定されるが、通
常１乃至４８時間である。抽出処理終了後、抽出混合物
をろ過することによって抽出液を得る。かくして得られ
た抽出液には多量の不純物が含まれているので本発明の
分子篩処理工程に供する前に、アルコール沈澱法または
透析膜法によシ、該抽出液を精製するのが望ましい。例
えば、アルコール沈澱法で精製する場合には、上記抽出
液にメタノール、エタノールのようなアルコールを加え
、生成した沈澱を常法によシ、例えば遠心分離により採
取し、所望の抽出物を得る。透析膜法によシ精製する場
合は、該抽出液を透析膜に入れ、水につけて透析し、透
析内液を所望によシ濃縮乾固するかまたは凍結乾燥して
所望の抽出物を得る。透析膜としては再生セルロース、
例えばスペクトラ・ボア（スにクトラム・メディカル・
インダストリーズ社製品）またはビスキング・チューブ
（ユニオンカーバイト社製品）が使用される。

アルコール沈澱法または透析膜法で精製して得られた抽
出物を水に溶解して本発明方法の原料であるツルナ全草
熱水抽出液とする。さらに、ツルナ全草の熱水抽出処理
に先立って、ツルナ全草を有機溶媒および（または）常
温の水で抽出処理することにより、不要成分を予め除去
しておくことものぞましい。抽出前処理に使用する溶媒
としてはメタノール、エタノール、ゾロノぐノール、ピ
リジン、アセトンのような極性有機溶媒、ベンゼン、ト
ルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、四塩
化炭素、酢酸エチルのような非極性有機溶媒があげられ
る。

本発明の多糖体を単離するための分子篩処理は、望まし
くはグルろ通則を用いたグルろ過によって行なわれる。

グルろ過は、分画分子量の異なったグルろ通則を用いて
２度実施するのが望ましい。

即ち、ツルナ全草熱水抽出液を先ず分画分子量が１，０
００〜５０，０００乃至１，０００〜１００，０００の
範囲にあるグルろ通則を充填したカラムに通し、蒸留水
で溶離する。溶出液中の糖を常法に従ってフェノール硫
酸法で定量し、糖の溶出曲線をえかくと、２つのピーク
を有する曲線が得られる。最初に溶出する糖両分を分取
する。

次に、かくして得られた糖画分をさらに分画分子量が１
，０００〜１００，０００乃至１，０００〜２００，０
００の範囲にあるゲルろ通則を充填したカラムに通し、
蒸留水で溶離する。溶出液中の糖を上記と同様にして定
量し、溶出曲線をえかくと２つのピークを有する曲線が
得られる。２番目に溶出する糖両分を集め、蒸発乾固ま
たは凍結乾燥のような適当な手段によシ所望の多糖体を
採取する。

本発明の多糖体は、上記方法の第１回目のケ°ルろ過処
理、即ち分画分子量が１，０００〜５０，０００乃至１
．０００〜１００，０００の範囲にあるグルろ通則によ
るグルろ過処理において、２番目に溶出する糖画分をさ
らに分画分子量が５００〜１０，０００乃至５００〜５
０，０００の範囲にあるゲルろ通則を用いてグルろ過し
、得られる多糖体の２つの両分のうち、最初に溶出する
糖画分から多糖体を採取することによっても得ることが
できる。

上記グルろ過で使用されるグルろ通則としては、デキス
トランゲル、ポリアクリルアミドゲル、ポリビニル系ポ
リマーゲル、多孔性ガラスヒース等が好適に使用される
。分画分子量が１，０００〜５０，０００乃至１．（！
　ＯＯ〜１００，０００の範囲にあるグルろ通則の例と
してはデキストラングルであるセファデックスＧ−７５
、Ｇ−１００（ファルマシア社製品、スエーデン）、ポ
リアクリルアミドゲルであるバイオグルＰ−１００、Ｐ
−１５０（バイオラッド社製品、米国）、ホリビニル系
ポリマーケゞルであるトヨパール副−５０（東洋曹達工
業社製品、日本）多孔ビーズで４ルＣＰＧ　−１０（エ
レクトロ・ヌクレオニックス社製品、米国）等が好適に
使用される。

また、分画分子量が１，０００〜１０，０００乃至１，
０００〜２００．０００の範囲にあるグルろ通則の例と
しては、セファデックスＧ−１００、Ｇ−１５０、バイ
オグルＰ−１５０、トヨノや−ルＨＷ−５０、ＣＰＧ　
−１０等が好適に使用される。

かくして得られる本発明の多糖体Ｔ２５ＧＩＩは、次の
特性を有する。

（イ）色と形状 白色粉末 ←）溶解性 水ニ可溶、アルコール、ベンゼン、酢酸エチルなどの有
機溶媒に不溶 （ハ）糖組成 主としてグルコースよシなシ、さらにアセチル化された
グルコース、アラビノースおよびガラクトースを含む。

に）分子量 分画分子量が１０，０００〜１００，０００の高速液体
クロマトグラフィーにより単一のピークを与え、分子量
は／ぐ一りジョンソン法（Ｐａｒｋ　＆　Ｊｏｈｎｓｏ
ｎ　：　Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　１８１　＋　１
４９（１９４９））により測定した結果、約２４，００
０である。

（ホ）比旋光度 〔α）、　−＋　１４４．０°（Ｃ＝　１．０　、　Ｈ
２Ｏ）（へ）赤外線吸収スペクトル 第１図に示す通シである。

ＩＲｖＫＢ”　ｃｍ−’　：　３４００　、２９３０　
、１７５０　、１６３０ａＸ （ト）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端板、収を示す
。

本発明の多糖体は顕著な抗炎症作用を有し、毒性は極め
て低いので、抗炎症剤として優れた性質を有する。本発
明の多糖体は、各種の炎症疾患に対して有効であシ、投
与量は、症状、年令、体重などによって異なるが、通常
は成人に対して１日５０〜５００■であり、１〜４回に
分けて投与することができる。

本発明の多糖体は任意所要の製剤用担体または賦形剤を
用いて経口または非経口投与用に製剤化される。

経口投与用の錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤等は慣用
の賦形剤例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、と
うもろこしでんぷん、馬鈴薯でんぷん、砂糖、ラクトー
ス、タルク、ステアリン酸マグネシウム、アラビアゴム
等を含有していてもよい。経口投与用液体製剤は水性ま
たは油性懸濁液、溶液、シロップ、エリキシル剤その他
であってもよい。

注射用製剤は溶液または懸濁液の形態であｐ１懸濁化剤
、安定剤または分散剤のような処方剤を含んでいてもよ
く、滅菌蒸留水、精油たとえばビーナツツ油、とうもろ
こし油あるいは非水溶媒、ポリエチレングリコール、ポ
リプロピレングリコール等を含有していてもよい。

直腸内投与のためには坐剤用組成物の形で提供され、周
知の製剤担体たとえばポリエチレングリコール、ラノリ
ン、ココナツト油等を含有していてもよい。

さらに、軟膏、外用クリーム、ローション、ノクスタ等
の通常の外用製剤の形で投与することもできる。

次に参考例、実施例、製剤例および試験例を示して本発
明をさらに説明する。

参考例 （１）　　ツルナ全草乾燥品２　ｋｇをメタノール−（
２０に×３）を用いて室温で２４時間抽出前処理し、得
られた抽出残渣を熱水２０！で３回抽出処理した。得ら
れた抽出液を合し、ロータリーエバポレーターで濃縮乾
固し、１３０．３ｆＰの粉末を得た。

（２）　　上記（１）で得られた粉末１０．０Ｐを水５
００ｒｎｌに溶かし、この水溶液に９９チエタノールを
ゆつくシと加え、該水溶液中のエタノール濃度が８０チ
になったときに添加をやめ、しばらく攪拌した。

生成した沈澱を遠心分離によシ採取し、褐色粉末のツル
ナを全草抽出物７．２２ｐを得た。

（３）上記（１）で得られた粉末１０．０Ｐを水５００
ｍ７！に溶かし、この水溶液をビスキングチューブに入
れ水に対して透析した。透析内液を濃縮乾固し、褐色粉
末のツルナ全草抽出物ａ　３７７を得た。

実施例１ 上記参考例（２）または（３）で得られたツルナ全草熱
水抽出物１．０９２ｐを２０ｆｎｌの蒸留水に溶解し、
セファデックスＧ−７５（分画分子量１．０００〜５０
，０００）を充填したカラ人（直径７０α、長さ３ｓ、
ＯｃｗＬ）に注ぎ、蒸留水を用いてダルろ過を行なった
。フェノール硫酸法で溶出液中の糖含量を定量しつつグ
ルろ過を行うと、多糖体は２つの両分に分かれる。

最初に溶出する糖両分から多糖体１４５■が得られた。

かくして得られた多糖体をセファデックスＧ−１００（
分画分子量１，０００〜１００，０００）を用いてさら
にグルろ過を行うと多糖体は２つの両分に分れる。２番
目に溶出する糖両分から所望の多糖体Ｔ２５ＧＩｒ　３
５ｍｇが得られた。

実施例２ 実施例１におけるセファデックスＧ−７５によるダルろ
過の２番目の糖画分をセファデックスＧ−５０を用いて
さらにゲルろ過を行うと多糖体は２つの画分に分れる。

最初に溶出する糖両分から所望の多糖体Ｔ２９ＧＩＩ　
１８９■が得られた。

製剤例１ 多糖体Ｔ２９ＧＩ［１０００１ｎ９を無菌５％注射用ブ
ドウ糖溶液５００−に溶解し、この溶液を５ｔｎｌずつ
バイアルに無菌的に分注し、凍結乾燥した。このように
してＩバイアル中１０■の多糖体Ｔ２５ＧＩＩを含む製
剤を得た。用時、注射用蒸留水に溶解して使用する。

製剤例２ 上記製剤例１と同様にしてバイアル製剤をつくった。た
だし、無菌５％注射用ブドウ糖溶液５００ゴの代シに生
理食塩水５００　＋ｎｌを使用した。用時、注射用蒸留
水に溶解して使用する。

試験例１ カラゲニン浮腫に対する抑制作用 実施例で得られた本発明の多糖体および対照としてプレ
ドニゾロンを用いてカラゲニン浮腫の抑制効果を測定し
た。ｄｄＹマウスまたはウィスターラットにサンプルを
経口投与し、投与１時間目にその右後肢足跳に１％カラ
ゲニンを０．０５ｍｇ注入し、同足踪の浮腫容積を経時
的に測定した。サンプルを投与しなかった場合の浮腫容
積との比から浮腫抑制率を求めた。結果を表１に示す。

表１から、本発明の多糖体がカラゲニンによる炎症を顕
著に抑制することが明らかである。

表　　１ カラゲニン浮腫に対する抑制率（％ｉ）試験例２ 本発明の多糖体を体重２０±１１のＩＣＲ雄性マウスに
投与して急性毒性試験を行なった結果、ＬＤ５ｏ値は腹
腔内投与で２５０ｍ９／１（ｇ以上であった。

■１発明の具体的効果 上に詳述したように、本発明によれば第１に、多糖体Ｔ
２５Ｇｎが提供される。本多糖体は文献未載の新規化合
物であって、試験例で示したように、カラゲニン浮腫に
対して強い抑制作用を示し、毒性は非常に低いので抗炎
症剤として有用である。

本発明によれば、第２に、上記多糖体の製造法が提供さ
れる。即ち、該多糖体は、ツルナ全草の熱水抽出液を分
子篩処理し、分子量約２４，０００を有する多糖体を採
取することによって得られる。

本発明によれば、第３に、上記多糖体の有利な製造法が
提供される。即ち、該多糖体は、上記分子篩処理を分画
分子量が１．ｏ　ｏ　ｏ〜５０，０００乃至１，０００
〜１００，０００の範囲にある分子篩剤と分画分子量が
１．０００〜１００，０００乃至１，０００〜２００，
０００の範囲にある分子篩剤と組合せて行なうかまたは
１，０００〜５０，０００乃至１，０００〜１００，０
００の範囲にある分子篩剤と分画分子量が５００〜１０
，０００乃至５００〜５０，０００の範囲にある分子篩
剤と組合せて行なうことによって高純度で得られる。

本発明によれば、第４に、上記多糖体のさらに有利な製
造法が提供される。即ち、該多糖体は、上記分子篩処理
としてゲルろ過剤を用いたグルろ　過を行うことによっ
てよシ容易に得られる。

本発明によれば、第５に、上記多糖体のさらに有利な製
造法が提供される。即ち、該多糖体は、グルろ過剤とし
てデキストランヶゞル、ポリアクリルアミドゲル、親水
性ポリビニル系グルまたは多孔性ガラスピーズを使用す
ることによって容易に高純度で得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の多糖体Ｔ２５］１の赤外線吸収スペク
トルを示す。 第１頁の続き ０発　明　者　荻原幸夫 名古屋市瑞穂区東栄町５丁目１２ 番２号

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　ツルナ全草よシ得られる下記特性を有する多
   糖体Ｔ２５Ｇｌ。 （イ）　色と形状 白色粉末 （ロ）　溶解性 水ニ可溶、アルコール、ベンゼン）酢 酸エチルなどの有機溶媒に不溶 （ハ）糖組成 主としてグルコースよりなり、さらに アセチル化されたグルコース、アラビ ノースおよびガラクトースを含む。 に）　分子量 分画分子量がｉ　ｏ、ｏ　ｏ　ｏ〜１００，０００の高
   速液体クロマトグラフィーによυ単一の ピークを与え、分子量は約２４，０００である。 （ホ）比旋光度 〔α冗２＝＋１４４．０°（ｃ＝１．ｏ　、　Ｈ２ｏ　
   ）（へ）赤外線吸収スペクトル 第１図に示す通シである。 ＩＲｖＫＢｒｃｒｎ’　：３４００．２９３０．１７５
   ０　。 ａＸ ６３０ （ト）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、 末端吸収を示す。
2. （２）　　ツルナ全草の熱水抽出液を分子篩処理し、分
   子量約２４．．０００を有する多糖体を採取することを
   特徴とする特許 ２５ＧＩｌの製造法。 （イ）　色と形状 白色粉末 （ロ）溶解性 水ニ可溶、アルコール、ベンゼン、酢 酸エチルなどの有機溶媒に不溶 （ハ）糖組成 主としてグルコースよシなシ、さらに アセチル化されたグルコース、アラビ ノースおよびガラクトースを含む。 に）　分子量 分画分子量が１０．００　Ｑ〜１００，０００の高速液
   体クロマトグラフィーによシ単一の ピークを与え、分子量は約２４，０００である。 （ホ）比旋光度 〔α几２＝＋１４４．０°（Ｃ＝　１．０　、　Ｈ２Ｏ
   ）（へ）赤外線吸収ス波りトル 第１図に示す通シである。 ＩＲｖ　ＫＢ”ｃｍ−’　　＝　３４００　　ｐ　　２
   ９３０　　、　１７５０　　。 ａｘ ６３０ （ト）紫外線吸収スペクトル 水溶液中の測定で吸収極大を示さず、 末端吸収を示す。
3. （３）上記分子篩処理は、先ず分画分子量が１．０００
   〜５０，０００乃至１，０００〜１００，０００の範囲
   にある分子篩剤を用いて行ない、得られる多糖体の２つ
   の両分のうち、最初に溶出する糖画分をさらに分画分子
   量が１，０００〜１００，０００乃至１．０００〜２’
   ＯＯ；０００の範囲にある分子篩剤を用いて分子篩処理
   を行ない、得られる多糖体の２つの画分のうち２番目に
   溶出する糖画分から多糖体を採取することを特徴とする
   特許請求の範囲第２項記載の多糖体Ｔ２５ＧＩＩの製造
   法。
4. （４）上記分子篩処理は、先ず分画分子量が１．０００
   〜５０，０００乃至１．．０００〜１００，０００の範
   囲にある分子篩剤を用いて行ない、得られる多糖体の２
   つの画分のうち、２番目に溶出する糖両分をさらに分画
   分子量が５００〜ｌ　Ｑ、ＯＯＯ乃至５００〜５０，０
   ００の範囲にある分子篩剤を用いて分子篩処理を行ない
   、得られる多糖体の２つの両分のうち最初に溶出する糖
   画分から多糖体を採取することを特徴とする特許請求の
   範囲第２項記載の多糖体Ｔ２５Ｇ］Ｉの製造法。
5. （５）上記分子篩処理がグルろ過であり、上記分子篩剤
   がグルろ通則である特許請求の範囲第２項乃至第４項の
   いずれかの項に記載の多糖体Ｔ２５ＧＩ［の製造法。
6. （６）上記グルろ通則がデキストラングル、ポリアクリ
   ルアミドグ９ル、親水性ポリビニル系グルまたは多孔性
   ガラスピーズである特許請求の範囲第５項記載の多糖体
   Ｔ２５ＧＩＩの製造法。