JPS6153329B2

JPS6153329B2 -

Info

Publication number: JPS6153329B2
Application number: JP58058003A
Authority: JP
Inventors: Masaki Shimizu; Takeo Nomura; Yutaka Tomita; Tadami Fujiwara; Masami Kato; Tadahiro Takeda; Yukio Ogiwara
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1983-04-04
Filing date: 1983-04-04
Publication date: 1986-11-17
Also published as: JPS59184128A

Description

【発明の詳細な説明】発明の背景技術分野本発明は新規な多糖体T25Gおよびその製造
法に関する。さらに詳しくは、本発明は、ツルナ全草の熱水
抽出液から単離精製された多糖体T25Gおよび
その製造方法に関するものである。本発明の多糖
体は、低毒性の抗炎症剤として有用である。先行技術ツルナは日本の民間薬で別名をハマジシヤとい
い、胃癌、胃潰瘍によいとされている。しかし、
その成分および薬理作用は未詳であり、近年出版
されている薬用植物関係の書物には「胃癌に効あ
りというが疑わしい」とされている〔難波恒雄
著、原色和漢薬図鑑（下）、昭和55年４月１日発
行、第21頁〜第22頁参照〕。本発明者等は先にツルナの全草を熱水で抽出
し、得られた抽出液をアルコール沈澱法または透
析膜法により精製して抗腫瘍作用を有するツルナ
抽出物を得た（特開昭57−193416）。本発明者等
はこの抽出物をさらに分子篩剤で精製した結果、
抗腫瘍作用を有する多糖体の他に抗炎症作用を有
する多糖体を単離することに成功し、本発明を完
成した。ツルナに抗炎症作用のある成分が含有されてい
ることは現在まで報告されていない。発明の目的従つて本発明の目的は、抗炎症作用を有する新
規な多糖体を提供することにある。本発明の多糖
体は後述するごとく、カラゲニン浮腫に対して強
い抑制作用を示し、毒性は低い。本発明の目的はさらに、上記多糖体を製造する
方法を提供することにある。本発明の方法によれ
ば上記多糖体は、ツルナ全草の熱水抽出液を分子
篩処理、特にゲルろ過し、分子量約24000の化合
物を採取することによつて製造される。発明の具体的説明本発明は第１にツルナ全草より得られる下記特
性を有する多糖体T25Gからなる。 (イ) 色と形状白色粉末 (ロ) 溶解性水に可溶、アルコール、ベンゼン、酢酸エチ
ルなどの有機溶媒に不溶 (ハ) 糖組成主としてグルコースよりなり、さらにアセチ
ル化されたグルコース、アラビノースおよびガ
ラクトースを含む。 (ニ) 分子量分画分子量が10000〜100000の高速液体クロ
マトグラフイーにより単一のピークを与え、分
子量は約24000である。 (ホ) 比旋光度〔α〕^２２ _Ｄ＝＋144.0゜（Ｃ＝1.0、H₂O） (ヘ) 赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。 IRν^ＫＢｒ _ｎａｘcm^-1：3400、2930、1750、1630 (ト) 紫外線吸収スペクトル水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸
収を示す。本発明は第２に、ツルナ全草の熱水抽出液を分
子篩処理し、分子量約24000を有する化合物を採
取してなる上記多糖体T25Gの製造法からな
る。本発明は第３に、上記分子篩処理は、先ず分画
分子量が1000〜50000乃至1000〜100000の範囲に
ある分子篩剤を用いて行ない、得られる多糖体の
２つの画分のうち、最初に溶出する糖画分をさら
に分画分子量が1000〜100000乃至1000〜200000の
範囲にある分子篩剤を用いて分子篩処理を行な
い、得られる多糖体の２つの画分のうち２番目に
溶出する糖画分から多糖体を採取してなる上記多
糖体T25Gの製造法からなる。本発明は第４に、上記分子篩処理として、先ず
分画分子量が1000〜50000乃至1000〜100000の範
囲にある分子篩剤を用いて行ない、得られる多糖
体の２つの画分のうち、２番目に溶出する糖画分
をさらに分画分子量が500〜10000乃至500〜50000
の範囲にある分子篩剤を用いて分子篩処理を行な
い、得られる多糖体の２つの画分のうち最初に溶
出する糖画分から多糖体を採取してなる上記多糖
体T25Gの製造法からなる。本発明は第５に、上記分子篩処理がゲルろ過で
あり、上記分子篩剤がゲルろ過剤である上記多糖
体T25Gの製造法からなる。本発明は第６に、上記ゲルろ過剤がデキストラ
ンゲル、ポリアクリルアミドゲル、親水性ポリビ
ニル系ゲルまたは多孔性ガラスビーズである上記
多糖体T25Gの製造法からなる。本発明の多糖体を製造するに際してはツルナ全
草の熱水抽出液を分子篩処理、特にゲルろ過し、
分子量約24000を有する化合物を採取する。ツルナはツルナ科（ザクロソウ科、
Aizoaceae）に属し、学名はTetragonia
tetragonoides（PALL.）O.Kuntzeである。本発
明では、その全草の抽出液を原料として使用す
る。ツルナの採集時期には特に制限はない。ツル
ナの全草を熱水で抽出処理する操作は、ツルナの
全草に、80℃以上の熱水を加えるかあるいはツル
ナ全草に水を加え、その混合物を加熱沸騰させる
ことによつて実施される。加熱は沸騰水浴中また
は直火で行うことができる。抽出時間は原料の品質等に従つて適宜決定され
るが、通常１乃至48時間である。抽出処理終了
後、抽出混合物をろ過することによつて抽出液を
得る。かくして得られた抽出液には多量の不純物
が含まれているので本発明の分子篩処理工程に供
する前に、アルコール沈澱法または透析膜法によ
り、該抽出液を精製するのが望ましい。例えば、
アルコール沈澱法で精製する場合には、上記抽出
液にメタノール、エタノールのようなアルコール
を加え、生成した沈澱を常法により、例えば遠心
分離により採取し、所望の抽出物を得る。透析膜
法により精製する場合は、該抽出液を透析膜に入
れ、水につけて透析し、透析内液を所望により濃
縮乾固するかまたは凍結乾燥して所望の抽出物を
得る。透析膜としては再生セルロース、例えばス
ペクトラ・ポア（スペクトラム・メデイカル・イ
ンダストリーズ社製品）またはビスキング・チユ
ーブ（ユニオンカーバイト社製品）が使用され
る。アルコール沈澱法または透析膜法で精製して
得られた抽出物を水に溶解して本発明方法の原料
であるツルナ全草熱水抽出液とする。さらに、ツ
ルナ全草の熱水抽出処理に先立つて、ツルナ全草
を有機溶媒および（または）常温の水で抽出処理
することにより、不要成分を予め除去しておくこ
とものぞましい。抽出前処理に使用する溶媒とし
てはメタノール、エタノール、プロパノール、ピ
リジン、アセトンのような極性有機溶媒、ベンゼ
ン、トルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン、クロロ
ホルム、四塩化炭素、酢酸エチルのような非極性
有機溶媒があげられる。本発明の多糖体を単離するための分子篩処理
は、望ましくはゲルろ過剤を用いたゲルろ過によ
つて行なわれる。ゲルろ過は、分画分子量の異なつたゲルろ過剤
を用いて２度実施するのが望ましい。即ち、ツルナ全草熱水抽出液を先ず分画分子量
が1000〜50000乃至1000〜100000の範囲にあるゲ
ルろ過剤を充填したカラムに通し、蒸留水で溶離
する。溶出液中の糖を常法に従つてフエノール硫
酸法で定量し、糖の溶出曲線をえがくと、２つの
ピークを有する曲線が得られる。最初に溶出する
糖画分を分取する。次に、かくして得られた糖画分をさらに分画分
子量が1000〜100000乃至1000〜200000の範囲にあ
るゲルろ過剤を充填したカラムに通し、蒸留水で
溶離する。溶出液中の糖を上記と同様にして定量
し、溶出曲線をえがくと２つのピークを有する曲
線が得られる。２番目に溶出する糖画分を集め、
蒸発乾固または凍結乾燥のような適当な手段によ
り所望の多糖体を採取する。本発明の多糖体は、上記方法の第１回目のゲル
ろ過処理、即ち分画分子量が1000〜50000乃至
1000〜100000の範囲にあるゲルろ過剤によるゲル
ろ過処理において、２番目に溶出する糖画分をさ
らに分画分子量が500〜10000乃至500〜50000の範
囲にあるゲルろ過剤を用いてゲルろ過し、得らえ
る多糖体の２つの画分のうち、最初に溶出する糖
画分から多糖体を採取することによつても得るこ
とができる。上記ゲルろ過で使用されるゲルろ過剤として
は、デキストランゲル、ポリアクリルアミドゲ
ル、ポリビニル系ポリマーゲル、多孔性ガラスビ
ーズ等が好適に使用される。分画分子量が1000〜
50000乃至1000〜100000の範囲にあるゲルろ過剤
の例としてはデキストランゲルであるセフアデツ
クスＧ−75、Ｇ−100（フアルマシア社製品、ス
エーデン）、ポリアクリルアミドゲルであるバイ
オゲルＰ−100、Ｐ−150（バイオラツド社製品、
米国）、ポリビニル系ポリマーゲルであるトヨパ
ールHW−50（東洋曹達工業社製品、日本）多孔
ビーズであるCPG−10（エレクトロ・ヌクレオ
ニツクス社製品、米国）等が好適に使用される。また、分画分子量が1000〜10000乃至1000〜
200000の範囲にあるゲルろ過剤の例としては、セ
フアデツクスＧ−100、Ｇ−150、バイオゲルＰ−
150、トヨパールHW−50、CPG−10等が好適に
使用される。かくして得られる本発明の多糖体T25Gは、
次の特性を有する。 (イ) 色と形状白色粉末 (ロ) 溶解性水に可溶、アルコール、ベンゼン、酢酸エチ
ルなどの有機溶媒に不溶 (ハ) 糖組成主としてグルコースよりなり、さらにアセチ
ル化されたグルコース、アラビノースおよびガ
ラクトースを含む。 (ニ) 分子量分画分子量が10000〜100000の高速液体クロ
マトグラフイーにより単一のピークを与え、分
子量はパークジヨンソン法（Park＆Johnson：
J.Biol.Chem.181、149（1949））により測定し
た結果、約24000である。 (ホ) 比旋光度〔α〕^２２ _Ｄ＝＋144.0゜（Ｃ＝1.0、H₂O） (ヘ) 赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。 IRν^ＫＢｒ _ｎａｘcm^-1：3400、2930、1750、1630 (ト) 紫外線吸収スペクトル水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸
収を示す。本発明の多糖体は顕著な抗炎症作用を有し、毒
性は極めて低いので、抗炎症剤として優れた性質
を有する。本発明の多糖体は、各種の炎症疾患に
対して有効であり、投与量は、症状、年令、体重
などによつて異なるが、通常は成人に対して１日
50〜500mgであり、１〜４回に分けて投与するこ
とができる。本発明の多糖体は任意所要の製剤用担体または
賦形剤を用いて経口または非経口投与用に製剤化
される。経口投与用の錠剤、散剤、カプセル剤、顆粒剤
等は慣用の賦形剤例えば炭酸カルシウム、リン酸
カルシウム、とうもろこしでんぷん、馬鈴薯でん
ぷん、砂糖、ラクトース、タルク、ステアリン酸
マグネシウム、アラビアゴム等を含有していても
よい。経口投与用液体製剤は水性または油性懸濁
液、溶液、シロツプ、エリキシル剤その他であつ
てもよい。注射用製剤は溶液または懸濁液の形態であり、
懸濁化剤、安定剤または分散剤のような処方剤を
含んでいてもよく、滅菌蒸留水、精油たとえばピ
ーナツツ油、とうもろこし油あるいは非水溶媒、
ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコ
ール等を含有していてもよい。直腸内投与のためには坐剤用組成物の形で提供
され、周知の製剤担体たとえばポリエチレングリ
コール、ラノリン、ココナツト油等を含有してい
てもよい。さらに、軟膏、外用クリーム、ローシヨン、パ
スタ等の通常の外用製剤の形で投与することもで
きる。次に参考例、実施例、製剤例および試験例を示
して本発明をさらに説明する。参考例ツルナ全草熱水抽出液の製造 (1) ツルナ全草乾燥品２Kgをメタノール（20×
３）を用いて室温で24時間抽出前処理し、得ら
れた抽出残渣を熱水20で３回抽出処理した。
得られた抽出液を合し、ロータリーエバポレー
ターで濃縮乾固し、130.3ｇの粉末を得た。 (2) 上記(1)で得られた粉末10.0ｇを水500mlに溶
かし、この水溶液に99％エタノールをゆつくり
と加え、該水溶液中のエタノール濃度が80％に
なつたときに添加をやめ、しばらく撹拌した。
生成した沈澱を遠心分離により採取し、褐色粉
末のツルナの全草抽出物7.22ｇを得た。 (3) 上記(1)で得られた粉末10.0ｇを水500mlに溶
かし、この水溶液をビスキングチユーブに入れ
水に対して透析した。透析内液を濃縮乾固し、
褐色粉末のツルナ全草抽出物6.37ｇを得た。実施例１上記参考例(2)または(3)で得られたツルナ全草熱
水抽出物1.092ｇを20mlの蒸留水に溶解し、セフ
アデツクスＧ−75（分画分子量1000〜50000）を
充填したカラム（直径7.0cm、長さ35.0cm）に注
ぎ、蒸留水を用いてゲルろ過を行なつた。フエノ
ール硫酸法で溶出液中の糖含量を定量しつつゲル
ろ過を行うと、多糖体は２つの画分に分かれる。
最初に溶出する糖画分から多糖体145mgが得られ
た。かくして得られた多糖体をセフアデツクスＧ
−100（分画分子量1000〜100000）を用いてさら
にゲルろ過を行うと多糖体は２つの画分に分れ
る。２番目に溶出する糖画分から所望の多糖体
T25G35mgが得られた。実施例２実施例１におけるセフアデツクスＧ−75による
ゲルろ過の２番目の糖画分をセフアデツクスＧ−
50を用いてさらにゲルろ過を行うと多糖体は２つ
の画分に分れる。最初に溶出する糖画分から所望
の多糖体T29G189mgが得られた。製剤例１多糖体T29G1000mgを無菌５％注射用ブドウ
糖溶液500mlに溶解し、この溶液を５mlずつバイ
アルに無菌的に分注し、凍結乾燥した。このよう
にして１バイアル中10mgの多糖体T25Gを含む
製剤を得た。用時、注射用蒸留水に溶解して使用
する。製剤例２上記製剤例１と同様にしてバイアル製剤をつく
つた。ただし、無菌５％注射用ブドウ糖溶液500
mlの代りに生理食塩水500mlを使用した。同時、
注射用蒸留水に溶解して使用する。試験例１カラゲニン浮腫に対する抑制作用実施例で得られた本発明の多糖体および対照と
してプレドニゾロンを用いてカラゲニン浮腫の抑
制効果を測定した。ddYマウスまたはウイスター
ラツトにサンプルを経口投与し、投与１時間目に
その右後肢足蹠に１％カラゲニンを0.05ml注入
し、同足蹠の浮腫容積を経時的に測定した。サン
プルを投与しなかつた場合の浮腫容積との比から
浮腫抑制率を求めた。結果を表１に示す。表１から、本発明の多糖体がカラゲニンによる
炎症を顕著に抑制することが明らかである。

【表】試験例２本発明の多糖体を体重20±１ｇのICR雄性マウ
スに投与して急性毒性試験を行なつた結果、
LD₅₀値は腹腔内投与で250mg/Kg以上であつた。発明の具体的効果上に詳述したように、本発明によれば第１に、
多糖体T25Gが提供される。本多糖体は文献未
載の新規化合物であつて、試験例で示したよう
に、カラゲニン浮腫に対して強い抑制作用を示
し、毒性は非常に低いので抗炎症剤として有用で
ある。本発明によれば、第２に、上記多糖体の製造法
が提供される。即ち、該多糖体は、ツルナ全草の
熱水抽出液を分子篩処理し、分子量約24000を有
する多糖体を採取することによつて得られる。本発明によれば、第３に、上記多糖体の有利な
製造法が提供される。即ち、該多糖体は、上記分
子篩処理を分画分子量が1000〜50000乃至1000〜
100000の範囲にある分子篩剤と分画分子量が1000
〜100000乃至1000〜200000の範囲にある分子篩剤
と組合せて行なうかまたは1000〜50000乃至1000
〜100000の範囲にある分子篩剤と分画分子量が
500〜10000乃至500〜50000の範囲にある分子篩剤
と組合せて行なうことによつて高純度で得られ
る。本発明によれば、第４に、上記多糖体のさらに
有利な製造法が提供される。即ち、該多糖体は、
上記分子篩処理としてゲルろ過剤を用いたゲルろ
過を行うことによつてより容易に得られる。本発明によれば、第５に、上記多糖体のさらに
有利な製造法が提供される。即ち、該多糖体は、
ゲルろ過剤としてデキストランゲル、ポリアクリ
ルアミドゲル、親水性ポリビニル系ゲルまたは多
孔性ガラスビーズを使用することによつて容易に
高純度で得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の多糖体T25Gの赤外線吸収
スペクトルを示す。

Claims

【特許請求の範囲】１ツルナ全草より得られる下記特性を有する多
糖体T25G。 (イ) 色と形状白色粉末 (ロ) 溶解性水に可溶、アルコール、ベンゼン、酢酸エチ
ルなどの有機溶媒に不溶 (ハ) 糖組成主としてグルコースよりなり、さらにアセチ
ル化されたグルコース、アラビノースおよびガ
ラクトースを含む。 (ニ) 分子量分画分子量が10000〜100000の高速液体クロ
マトグラフイーにより単一のピークを与え、分
子量は約24000である。 (ホ) 比旋光度〔α〕^２２ _Ｄ＝＋144.0゜（Ｃ＝1.0、H₂O） (ヘ) 赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。 IRν^ＫＢｒ _ｎａｘcm^-1：3400、2930、1750、1630 (ト) 紫外線吸収スペクトル水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸
収を示す。２ツルナ全草の熱水抽出液を分子篩処理し、分
子量約24000を有する多糖体を採取することを特
徴とする下記特性を有する多糖体T25Gの製造
法。 (イ) 色と形状白色粉末 (ロ) 溶解性水に可溶、アルコール、ベンゼン、酢酸エチ
ルなどの有機溶媒に不溶 (ハ) 糖組成主としてグルコースよりなり、さらにアセチ
ル化されたグルコース、アラビノースおよびガ
ラクトースを含む。 (ニ) 分子量分画分子量が10000〜100000の高速液体クロ
マトグラフイーにより単一のピークを与え、分
子量は約24000である。 (ホ) 比旋光度〔α〕^２２ _Ｄ＝＋144.0゜（Ｃ＝1.0、H₂O） (ヘ) 赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。 IRν^ＫＢｒ _ｎａｘcm^-1：3400、2930、1750、1630 (ト) 紫外線吸収スペクトル水溶液中の測定で吸収極大を示さず、末端吸
収を示す。３上記分子篩処理は、先ず分画分子量が1000〜
50000乃至1000〜100000の範囲にある分子篩剤を
用いて行ない、得られる多糖体の２つの画分のう
ち、最初に溶出する糖画分をさらに分画分子量が
1000〜100000乃至1000〜200000の範囲にある分子
篩剤を用いて分子篩処理を行ない、得られる多糖
体の２つのの画分のうち２番目に溶出する糖画分
から多糖体を採取することを特徴とする特許請求
の範囲第２項記載の多糖体T25Gの製造法。４上記分子篩処理は、先ず分画分子量が1000〜
50000乃至1000〜100000の範囲にある分子篩剤を
用いて行ない、得られる多糖体の２つの画分のう
ち、２番目に溶出する糖画分をさらに分画分子量
が500〜10000乃至500〜50000の範囲にある分子篩
剤を用いて分子篩処理を行ない、得られる多糖体
の２つの画分のうち最初に溶出する糖画分から多
糖体を採取することを特徴とする特許請求の範囲
第２項記載の多糖体T25Gの製造法。５上記分子篩処理がゲルろ過であり、上記分子
篩剤がゲルろ過剤である特許請求の範囲第２項乃
至第４項のいずれかの項に記載の多糖体T25G
の製造法。６上記ゲルろ過剤がデキストランゲル、ポリア
クリルアミドゲル、親水性ポリビニル系ゲルまた
は多孔性ガラスビーズである特許請求の範囲第５
項記載の多糖体T25Gの製造法。