JPS59220646A - 凝集試験用水性溶媒 - Google Patents
凝集試験用水性溶媒Info
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- JPS59220646A JPS59220646A JP9529283A JP9529283A JPS59220646A JP S59220646 A JPS59220646 A JP S59220646A JP 9529283 A JP9529283 A JP 9529283A JP 9529283 A JP9529283 A JP 9529283A JP S59220646 A JPS59220646 A JP S59220646A
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- Japan
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- aqueous solvent
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
零発り」は、凝集試験用水性溶媒に関するものである。
抗原抗体反応や、ある種の１νＪ植物閉体、又はウィル
ス白米の鎌集物質と生体蛋白ａや赤血球との免疫反応に
基づく凝集反応を追跡することにより、それらの一方か
又は両者を定量的に測定する方法は、赤血球凝集反応（
ＰＨＡ法）、逆受甜赤血球凝集反応（ＲＰＨＡ法）、細
菌の凝集反応、又はラテックス凝集反応などとして広く
臨床検査の分野で利用されている。例えばＰＩ−１Ａ法
について説Ｆ３１：Ｈすれば、精製した１ｉＢｓ抗席を
凝集試験用担体としてヒツジ赤血球に感作せしめＨＢＳ
抗原感作ヒツジ赤血球を得、このものと血液検体とを混
合させた時に水性溶媒中で凝集反応がみられるか否かに
よって検体中にＨＢＳ抗体が存在していたか否かを判定
できる。
ス白米の鎌集物質と生体蛋白ａや赤血球との免疫反応に
基づく凝集反応を追跡することにより、それらの一方か
又は両者を定量的に測定する方法は、赤血球凝集反応（
ＰＨＡ法）、逆受甜赤血球凝集反応（ＲＰＨＡ法）、細
菌の凝集反応、又はラテックス凝集反応などとして広く
臨床検査の分野で利用されている。例えばＰＩ−１Ａ法
について説Ｆ３１：Ｈすれば、精製した１ｉＢｓ抗席を
凝集試験用担体としてヒツジ赤血球に感作せしめＨＢＳ
抗原感作ヒツジ赤血球を得、このものと血液検体とを混
合させた時に水性溶媒中で凝集反応がみられるか否かに
よって検体中にＨＢＳ抗体が存在していたか否かを判定
できる。
また凝集反応がみられた場合は、その検体を更に段階的
に希釈して凝集反応が観察できなくなるまでの希釈倍数
を求めることによりその検体中のＨＢｓ抗体を定量的に
測定することができる。
に希釈して凝集反応が観察できなくなるまでの希釈倍数
を求めることによりその検体中のＨＢｓ抗体を定量的に
測定することができる。
またＲＰＨＡ法では、精製したＨＢｓ抗体を凝集試験用
担体として哺乳動物の赤血球に感作してＨＢｓ抗体感作
赤血球を製し、このもの吉検体とを混合した時に水性溶
媒中で凝集反応がみられるか否かＫよって、検体中ＫＨ
Ｂｓ抗原が含まれているか否かを検知することができる
。
担体として哺乳動物の赤血球に感作してＨＢｓ抗体感作
赤血球を製し、このもの吉検体とを混合した時に水性溶
媒中で凝集反応がみられるか否かＫよって、検体中ＫＨ
Ｂｓ抗原が含まれているか否かを検知することができる
。
更にある種のウィルスと鳥類の赤血球とはウィルスの有
する凝集素の作用により赤血球を水性溶媒中で凝集する
。この水性溶媒中での凝集反応の有無、強弱によってウ
ィルスの濃度を定量的に測定することができる。これら
多くの水性酸媒中での凝集反応を利用した分析方法は、
簡便でかつ測定感度も高いので各種抗原や抗体の検査に
広く利用されていることは周知の通りである。
する凝集素の作用により赤血球を水性溶媒中で凝集する
。この水性溶媒中での凝集反応の有無、強弱によってウ
ィルスの濃度を定量的に測定することができる。これら
多くの水性酸媒中での凝集反応を利用した分析方法は、
簡便でかつ測定感度も高いので各種抗原や抗体の検査に
広く利用されていることは周知の通りである。
しかし、これら水性溶媒中での凝集反応は、感作する抗
原あるいは抗体の種類によっては、凝集試験用担体に十
分感作されているにもかかわらず、明瞭な凝集反応がみ
られなかったり、定量試験において低い希釈倍数（対応
する抗原あるいは抗体の高濃度のところ）で却って凝集
反応が弱くなり凝集反応がみられないと誤判する（プロ
ゾーン現象）こともある。
原あるいは抗体の種類によっては、凝集試験用担体に十
分感作されているにもかかわらず、明瞭な凝集反応がみ
られなかったり、定量試験において低い希釈倍数（対応
する抗原あるいは抗体の高濃度のところ）で却って凝集
反応が弱くなり凝集反応がみられないと誤判する（プロ
ゾーン現象）こともある。
水性溶媒中での凝集反応をより明瞭化したり、プロゾー
ン現象ζ解決する方法として汀、測定に用いる水性溶媒
のイオン強度を下げる方法が知られている。しかし、尚
十分でなく、更に優れた方法の出現が待望されている。
ン現象ζ解決する方法として汀、測定に用いる水性溶媒
のイオン強度を下げる方法が知られている。しかし、尚
十分でなく、更に優れた方法の出現が待望されている。
本発明の目的は、弱い凝集反応を増強せしめ凝集反応を
より明瞭に判別せしめると共にプロゾーン現象を解決し
、極めて検出感度の優れた凝集試験用水性溶媒を提供せ
んとするにある。
より明瞭に判別せしめると共にプロゾーン現象を解決し
、極めて検出感度の優れた凝集試験用水性溶媒を提供せ
んとするにある。
発明者等は、永年この凝集反応における弱い凝集反応お
よびプロゾーン現象を改良するため測定方法の改良研究
を続け、少量の多糖類を測定系に存在させることにより
、弱い凝集反応およびプロゾーン現象が顕著に改善され
、測定感度が良くなることを見出し、本発明を完成させ
た。
よびプロゾーン現象を改良するため測定方法の改良研究
を続け、少量の多糖類を測定系に存在させることにより
、弱い凝集反応およびプロゾーン現象が顕著に改善され
、測定感度が良くなることを見出し、本発明を完成させ
た。
すなわち本発明は、デキストランのような多糖類を０−
０５重量％〜５．０重量％の濃度において含むことを特
徴とする免疫反応に基つく凝集試験用水性溶媒を提供す
るものである。
０５重量％〜５．０重量％の濃度において含むことを特
徴とする免疫反応に基つく凝集試験用水性溶媒を提供す
るものである。
この水性溶媒を各種凝集反応試瞼用試薬の調整に用いる
ことにより上記測定感度の改善を達成することができる
。
ことにより上記測定感度の改善を達成することができる
。
本発明で使用される多糖類としてはデキストランが最適
であり、その平均分子量は好ましくは１０．０００〜５
００，０００、さらに好ましくはａｏ、ｏｏ。
であり、その平均分子量は好ましくは１０．０００〜５
００，０００、さらに好ましくはａｏ、ｏｏ。
〜１００．０００である。その添加量は、一般的には０
．０５〜５Ｎ量チ程度であるが、そρ好ましい添加量は
多糖類の分子量によって異なり、平均分子量８０．００
０〜ｉｏｏ、ｏｏｏのものでは０．５〜３重量％程度が
、平均分子量ｉｏ、ｏｏｏ〜３０．０００ のものでは
２〜５重量％捏度が、平均分子量１００，０００〜５０
０．０００のものでは、０．０５〜ｌｉ量係が好ましい
。下限は検出感度及びプロゾーン現象抑制効果の限界値
であり、上限は陰性値の増大による検出感度の低下の限
界値である。
．０５〜５Ｎ量チ程度であるが、そρ好ましい添加量は
多糖類の分子量によって異なり、平均分子量８０．００
０〜ｉｏｏ、ｏｏｏのものでは０．５〜３重量％程度が
、平均分子量ｉｏ、ｏｏｏ〜３０．０００ のものでは
２〜５重量％捏度が、平均分子量１００，０００〜５０
０．０００のものでは、０．０５〜ｌｉ量係が好ましい
。下限は検出感度及びプロゾーン現象抑制効果の限界値
であり、上限は陰性値の増大による検出感度の低下の限
界値である。
水性ｇ１ｓとしては、従来既知のあらゆる凝集試験用水
性溶媒が利用でき、例えば水、生理食塩水、各種緩衝液
（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グ
リシン緩衝液）、アルブミン溶液、正常ヒト及び動物血
清溶液、合成高分子物ｔ１のｋＩ液、界面活性剤合有水
沿液、およびこれらの組み合せからなる溶液が例示さハ
る。本発明水性溶媒のｐＨは、約６．５〜９．０が好ま
しく、その調整は緩衝液でおこなわれることが好ましい
。木兄り１１水性溶媒中に含まれる塩の濃度は、比較的
低濃度であることが好ましく、より好ましくは、生理的
等張な俗７仮である。
性溶媒が利用でき、例えば水、生理食塩水、各種緩衝液
（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、グ
リシン緩衝液）、アルブミン溶液、正常ヒト及び動物血
清溶液、合成高分子物ｔ１のｋＩ液、界面活性剤合有水
沿液、およびこれらの組み合せからなる溶液が例示さハ
る。本発明水性溶媒のｐＨは、約６．５〜９．０が好ま
しく、その調整は緩衝液でおこなわれることが好ましい
。木兄り１１水性溶媒中に含まれる塩の濃度は、比較的
低濃度であることが好ましく、より好ましくは、生理的
等張な俗７仮である。
本発明からなる溶媒が利用される凝集試験用担体は、自
体公知のものを用いればよく、たとえばラテックス樹脂
類、ゴム類、無機吸着剤及び動物（例えばヒツジ、モル
モット、０型の人、ニワトリなど）の赤血球をホルマリ
ン、グルグルアルデヒドなどで固定したものを用いても
よい。このような担体は約２０μ以下、特に５〜１５μ
程度の粒状のものを使用するのが有利である。このよう
な粒状担体に抗体又は抗原を感作させる処理は自体公知
の方法に準じて行うことができる。
体公知のものを用いればよく、たとえばラテックス樹脂
類、ゴム類、無機吸着剤及び動物（例えばヒツジ、モル
モット、０型の人、ニワトリなど）の赤血球をホルマリ
ン、グルグルアルデヒドなどで固定したものを用いても
よい。このような担体は約２０μ以下、特に５〜１５μ
程度の粒状のものを使用するのが有利である。このよう
な粒状担体に抗体又は抗原を感作させる処理は自体公知
の方法に準じて行うことができる。
かくして提供される本発明からなる水性溶媒を使用した
凝集試験における効果を証明するための天険を行こなっ
た。
凝集試験における効果を証明するための天険を行こなっ
た。
ＨＢｅ抗原陽性の人血清を硫安分画とアフイニイテイー
クロマトグラフイー法とで処理し精製ＨＢｅ抗原を得、
この精製ＨＢｅ抗原をグルタルアルデヒドにより固定さ
れたヒツジ赤血球に感作してＨＢｅ抗原感作ヒツジ赤血
球を得た。
クロマトグラフイー法とで処理し精製ＨＢｅ抗原を得、
この精製ＨＢｅ抗原をグルタルアルデヒドにより固定さ
れたヒツジ赤血球に感作してＨＢｅ抗原感作ヒツジ赤血
球を得た。
他方、本発明からなる水性溶媒として０．１Ｍ リン酸
緩＠液（ｐＨ７，５）に正常動物血清およびヒツジ赤血
球膜成分とを加えたＰＨＡ法用の既知溶媒を調整した。
緩＠液（ｐＨ７，５）に正常動物血清およびヒツジ赤血
球膜成分とを加えたＰＨＡ法用の既知溶媒を調整した。
この溶媒にデキストラン（平均分子量５０，０００−７
０．ＤＯＯ）’ｆｒ：第１ＲＫ示しｆｃａＫ加え、コン
トロールとして無添加のものを川魚した。オフクロニー
法（二元免疫拡散法）で測定しＨＢｅ抗体陽性であった
クエン酸塩用人血漿の３検体（表中１，２及び３）を、
ＰＨＡ＠Ｅ従いこの３柿類の溶媒を用いてマイクロプレ
ート上でそれぞれ２倍希釈を行い、この希釈列へ上記で
得たＨＢｅ抗原感作ヒツジ赤血球を混合した。別にＨＢ
ｅ抗体が陰性の検体（４）につき同様に処理、試ＷＡシ
た。
０．ＤＯＯ）’ｆｒ：第１ＲＫ示しｆｃａＫ加え、コン
トロールとして無添加のものを川魚した。オフクロニー
法（二元免疫拡散法）で測定しＨＢｅ抗体陽性であった
クエン酸塩用人血漿の３検体（表中１，２及び３）を、
ＰＨＡ＠Ｅ従いこの３柿類の溶媒を用いてマイクロプレ
ート上でそれぞれ２倍希釈を行い、この希釈列へ上記で
得たＨＢｅ抗原感作ヒツジ赤血球を混合した。別にＨＢ
ｅ抗体が陰性の検体（４）につき同様に処理、試ＷＡシ
た。
なお混合敢量は検体希釈液２５μｔ、ＨＢｓ抗体感作ヒ
ツジ赤皿球２５μｔであり室温で２時間後の凝集の強さ
く凝集度）を４．３．２、■の評価とし、非凝集を評ｆ
ｉｆｌｌ Ｏとして表現した時第１表の成績ｆ：得た。
ツジ赤皿球２５μｔであり室温で２時間後の凝集の強さ
く凝集度）を４．３．２、■の評価とし、非凝集を評ｆ
ｉｆｌｌ Ｏとして表現した時第１表の成績ｆ：得た。
以下余白
氷
味
第１表より、デキストランを添加することにより、凝集
度１〜２程度の弱いａ集が凝集に３〜４の強い凝集とな
っており、血漿検体Ｎｕ ｌおよび３で認められるプロ
ゾーン現象も改善されている。
度１〜２程度の弱いａ集が凝集に３〜４の強い凝集とな
っており、血漿検体Ｎｕ ｌおよび３で認められるプロ
ゾーン現象も改善されている。
さらに感度も１段階上昇している。また陰性検体では、
いずれを添加した場合も無添加と同じ１：４以下であり
、陰性検体への影響はないことが判る。デキストラ／の
添加量は、分子量によってその効果が異なるか、本実験
では０，５〜３％がより好直な添加量と判断できる。
いずれを添加した場合も無添加と同じ１：４以下であり
、陰性検体への影響はないことが判る。デキストラ／の
添加量は、分子量によってその効果が異なるか、本実験
では０，５〜３％がより好直な添加量と判断できる。
かくして本発明からなる凝集試験用水性溶媒は、著るし
く凝集反応を増強せしめると共に感度を上昇させるもの
であって、すぐルた凝集試験法を可七とするものである
。
く凝集反応を増強せしめると共に感度を上昇させるもの
であって、すぐルた凝集試験法を可七とするものである
。
以下に本発明を天施例によって示′ｉ。
実施例
デキストラン（平均分子量５０，０００〜７０．０００
）２．０１および２０ ｗ／ｖ％ウシアルフ゛ミンメ液
１０ｄに対して、ｐ Ｈ７，６，１０，１Ｍリン酸緩衝
液を加え験をおこなったがプロシー／現象Ｆｉなく、検
出感度は良好であった。
）２．０１および２０ ｗ／ｖ％ウシアルフ゛ミンメ液
１０ｄに対して、ｐ Ｈ７，６，１０，１Ｍリン酸緩衝
液を加え験をおこなったがプロシー／現象Ｆｉなく、検
出感度は良好であった。
実施例２
デキストラン（平均分子ちよ２０，０００）をｌＯｒ又
はデキストラン（平均分子量１５０，０００）を０．１
７用いる以外は実施例１と同様の操作を行い水性溶媒を
得た。本溶媒を明相して同様の実験をおこなったところ
同様の効果を得た。
はデキストラン（平均分子量１５０，０００）を０．１
７用いる以外は実施例１と同様の操作を行い水性溶媒を
得た。本溶媒を明相して同様の実験をおこなったところ
同様の効果を得た。
実施例３
デキストラ／（＋均分子量２５０，０００＞全０．１１
用いること以外は実施例１と同様の操作を行い水性溶媒
を得た。本溶媒を使用して同様の天＠をおこなったとこ
ろ同様の効果ケ得た。
用いること以外は実施例１と同様の操作を行い水性溶媒
を得た。本溶媒を使用して同様の天＠をおこなったとこ
ろ同様の効果ケ得た。
特許出願人 株式会社ミドリ十字
手続補正書（角Ｖ
昭和彊年７月２１日
昭和５８年 特許 願第０９５２９２号２ 発明の名称
凝集試験用水性溶媒 ３、 補正をする者 ｙ）１イ１１との関係特許出願人 住 所 氏 名（油、）株式会社 ミ トリ十字７ 補正の対象 （１）明細書、第６頁第１行の「及び」の次に「特に好
ましい担体として」ケ加入″ｒな。
凝集試験用水性溶媒 ３、 補正をする者 ｙ）１イ１１との関係特許出願人 住 所 氏 名（油、）株式会社 ミ トリ十字７ 補正の対象 （１）明細書、第６頁第１行の「及び」の次に「特に好
ましい担体として」ケ加入″ｒな。
（２）同書、第７頁第１０行ｌ／）［）ＬＢｓ抗体Ｊ
２ ｒ ＲＢｅ抗原」に訂正丁０゜ （３）同書、第１０頁下刃）ら２行のｒｌｏ、ＩＭＪ盆
［０，１Ｍ Ｊに訂正′Ｔな。
２ ｒ ＲＢｅ抗原」に訂正丁０゜ （３）同書、第１０頁下刃）ら２行のｒｌｏ、ＩＭＪ盆
［０，１Ｍ Ｊに訂正′Ｔな。
Claims (1)
- 平均分子量１０，０００〜５００，０００程度の多糖類
を、００５重量％〜５重量多程度の濃度において含むこ
とを特徴とする免疫反応に基つく凝集試験用水性溶媒。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9529283A JPS59220646A (ja) | 1983-05-30 | 1983-05-30 | 凝集試験用水性溶媒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9529283A JPS59220646A (ja) | 1983-05-30 | 1983-05-30 | 凝集試験用水性溶媒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59220646A true JPS59220646A (ja) | 1984-12-12 |
| JPH0456258B2 JPH0456258B2 (ja) | 1992-09-07 |
Family
ID=14133696
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9529283A Granted JPS59220646A (ja) | 1983-05-30 | 1983-05-30 | 凝集試験用水性溶媒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59220646A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH021554A (ja) * | 1987-11-18 | 1990-01-05 | Internatl Reagents Corp | 杭ｄ血液型判定用試薬 |
| WO2010001619A1 (ja) | 2008-07-04 | 2010-01-07 | 積水メディカル株式会社 | 免疫学的測定における感度増強方法又はヘモグロビンの影響回避方法 |
| CN101957363A (zh) * | 2010-09-13 | 2011-01-26 | 南京卡博生物科技有限公司 | 胶乳免疫比浊检测用样本处理液 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS502007A (ja) * | 1973-05-09 | 1975-01-10 |
-
1983
- 1983-05-30 JP JP9529283A patent/JPS59220646A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS502007A (ja) * | 1973-05-09 | 1975-01-10 |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH021554A (ja) * | 1987-11-18 | 1990-01-05 | Internatl Reagents Corp | 杭ｄ血液型判定用試薬 |
| WO2010001619A1 (ja) | 2008-07-04 | 2010-01-07 | 積水メディカル株式会社 | 免疫学的測定における感度増強方法又はヘモグロビンの影響回避方法 |
| US8722342B2 (en) | 2008-07-04 | 2014-05-13 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for enhancing sensitivity or method for avoiding influence of hemoglobin in immunological measurement |
| EP3062104A1 (en) | 2008-07-04 | 2016-08-31 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method for enhancing sensitivity or method for avoiding influence of hemoglobin in immunological measurement |
| CN101957363A (zh) * | 2010-09-13 | 2011-01-26 | 南京卡博生物科技有限公司 | 胶乳免疫比浊检测用样本处理液 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0456258B2 (ja) | 1992-09-07 |
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