JPS5931453A - 梅毒抗体の測定方法 - Google Patents
梅毒抗体の測定方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、梅毒の得意抗体を測定する方法に関する。
さらに詳しくはいわゆる受身凝集反応（Ｐａｓｓｉｖｅ
Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ、以下ＰＨＡと略す
）と逆受身凝集反応（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐａｓｓｉｖｅ
Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｒ、以下ＲＰＨＡと
いう）を組み合わせて特異免役グロブリンＩｇＭ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＧなどを測定する方法に関する。
Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ、以下ＰＨＡと略す
）と逆受身凝集反応（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐａｓｓｉｖｅ
Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｒ、以下ＲＰＨＡと
いう）を組み合わせて特異免役グロブリンＩｇＭ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＧなどを測定する方法に関する。
梅毒血清反の検査は、脂質抗原であるカルジオライピン
を抗原とする、いわゆるＳＴＳ（ＳｅｒｏｌｏｇｉｃＴ
ｅｓｔ ｆｏｒ Ｓｙｐｈｉｌｉｓ）と、トレポネーマ
・パリーダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌｌｉｄｕｍ
、以下ＴＰという）を抗原として行う方法とに大別され
る。
を抗原とする、いわゆるＳＴＳ（ＳｅｒｏｌｏｇｉｃＴ
ｅｓｔ ｆｏｒ Ｓｙｐｈｉｌｉｓ）と、トレポネーマ
・パリーダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌｌｉｄｕｍ
、以下ＴＰという）を抗原として行う方法とに大別され
る。
ＳＴＳとしては、ＶＤＲＬ法、ＲＰＲ（Ｒａｐｉｄ Ｐ
ｌａｓｍａＲｅａｇｉｎ Ｃａｒｄ ｔｅｓｔ）法、凝
集法、緒方法、Ｋｏｌｍｅｒ法などがあるが、抗原とし
てＴＰを用いていないためにいずれも生物学的偽陽性反
応（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＦａｌｓｅ Ｐｏｓｉｔｉｖ
ｅ以下ＢＦＰという）が少なくない。
ｌａｓｍａＲｅａｇｉｎ Ｃａｒｄ ｔｅｓｔ）法、凝
集法、緒方法、Ｋｏｌｍｅｒ法などがあるが、抗原とし
てＴＰを用いていないためにいずれも生物学的偽陽性反
応（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌＦａｌｓｅ Ｐｏｓｉｔｉｖ
ｅ以下ＢＦＰという）が少なくない。
ＴＰ抗原を用いる検査法としてはＴＰＩ（Ｔｒｅｐｏｎ
ｅｍａｐａｌｌｉｄｕｍ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏ
ｎ）法、ＦＴＡ−Ａｂｓ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｔ
ｒｅｐｏｎｅｍａｌ ａｎｔｉｌｏｄｙ ａｂｓｏｒｐ
ｔｉｏｎ）法、ＴＰＨＡ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌ
ｌｉｄｕｍ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ）法な
どがあり、特にＴＰＨＡ法はマイクロ法による自動化が
進み、代表的な梅毒の臨床検査法として普及している。
ｅｍａｐａｌｌｉｄｕｍ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏ
ｎ）法、ＦＴＡ−Ａｂｓ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｔ
ｒｅｐｏｎｅｍａｌ ａｎｔｉｌｏｄｙ ａｂｓｏｒｐ
ｔｉｏｎ）法、ＴＰＨＡ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａｌ
ｌｉｄｕｍ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ）法な
どがあり、特にＴＰＨＡ法はマイクロ法による自動化が
進み、代表的な梅毒の臨床検査法として普及している。
ＴＰＨＡ等のＴＰ抗原を用いる検査法は、ＳＴＳに比べ
て、ＢＦＰは少ないものの、ＴＰ抗体を測定する方法で
あるために、梅毒の治療後の経過観察および治癒判定に
は必ずしも適当ではない（たとえば福岡良男、日本臨床
、３８、１５０１（１９８０）参照）。
て、ＢＦＰは少ないものの、ＴＰ抗体を測定する方法で
あるために、梅毒の治療後の経過観察および治癒判定に
は必ずしも適当ではない（たとえば福岡良男、日本臨床
、３８、１５０１（１９８０）参照）。
これは従来のＴＰ抗原を用いる検査法が、梅毒感染初期
に産生される免疫グロブリンＩｇＭ、、後期に産生され
るＩｇＧやその他の免疫グロブリンを区別して測定でき
ないためであった。
に産生される免疫グロブリンＩｇＭ、、後期に産生され
るＩｇＧやその他の免疫グロブリンを区別して測定でき
ないためであった。
１９７９年Ｓｃｈｍｉｄｔは抗ヒトＩｇＭ抗体とＴＰ感
作血球とを用いるＳＰＨＡ（Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ
Ｈｅｍａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ）法によって梅毒ＩｇＭを
測定することにより、病期（ｓｔａｇｅ ）の判断、治
療の必要性に関する情報が得られると発表しだ（Ｂｒｕ
ｎｏ Ｓｃｈｍｉｄｔ 、 Ｓｅｘ。
作血球とを用いるＳＰＨＡ（Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ
Ｈｅｍａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ）法によって梅毒ＩｇＭを
測定することにより、病期（ｓｔａｇｅ ）の判断、治
療の必要性に関する情報が得られると発表しだ（Ｂｒｕ
ｎｏ Ｓｃｈｍｉｄｔ 、 Ｓｅｘ。
Ｔｒａｎｓ、Ｄｉｓ、、７．５３−５８（１９８０）。
この方法はこれより先行するＩｇＭ−ＦＴＡ −Ａｂｓ
（Ｐ．Ｏ’Ｎｅｉｌ、Ｂｒ．Ｊ．ｕｅｎｅｒ、Ｄｉｓ．
、４８、４６０−４６３（１９７２））よりも術式は簡
易であるが、初期梅毒に対する鋭敏性が低い、偽陰性（
ｆａｌｓｅ −ｎｅｇａｔｉｎｅ ）率が高いなどの理
由によって普及するにはいたっていない。
（Ｐ．Ｏ’Ｎｅｉｌ、Ｂｒ．Ｊ．ｕｅｎｅｒ、Ｄｉｓ．
、４８、４６０−４６３（１９７２））よりも術式は簡
易であるが、初期梅毒に対する鋭敏性が低い、偽陰性（
ｆａｌｓｅ −ｎｅｇａｔｉｎｅ ）率が高いなどの理
由によって普及するにはいたっていない。
これとモ行してＭｕｌｌｅｒらはゲル濾過法によって、
ＩｇＭとＩｇＧに血清を分画し、１９Ｓ（ＩｇＭ）−Ｔ
ＰＨＡと１９Ｓ（ＩｇＭ ） −ＦＴＡ −Ａｂｓを実
施することによって病期の判定を治癒判定に利用した（
以下「分画ＴＰＨＡ」と略す、Ｆ．Ｍｕｌｌｅｒ、ＷＨ
Ｏ／ＶＤＴ／ＲＥＳ、７９．３６１（１９７９））。ゲ
ル濾過法は特別の装置が必要でかつ長時間を要し、捷だ
検出試薬であるＴＰＨＡを多量に用いなければならない
。加えてＩｇＭとＩｇＧをその分子サイズの違いで分離
しているために自己免疫疾患症々とによく見られる低分
子（８Ｓ） ＩｇＭは見逃してし捷うことになる（Ｆ．
ｍｕｌｌｒｅ，ＫｌｉｎｉｓｃｈｅＷｏｃｈｅｎｓｃｈ
ｒｉｆｔ，５７、６６７−６７１、（１９７９））。
ＩｇＭとＩｇＧに血清を分画し、１９Ｓ（ＩｇＭ）−Ｔ
ＰＨＡと１９Ｓ（ＩｇＭ ） −ＦＴＡ −Ａｂｓを実
施することによって病期の判定を治癒判定に利用した（
以下「分画ＴＰＨＡ」と略す、Ｆ．Ｍｕｌｌｅｒ、ＷＨ
Ｏ／ＶＤＴ／ＲＥＳ、７９．３６１（１９７９））。ゲ
ル濾過法は特別の装置が必要でかつ長時間を要し、捷だ
検出試薬であるＴＰＨＡを多量に用いなければならない
。加えてＩｇＭとＩｇＧをその分子サイズの違いで分離
しているために自己免疫疾患症々とによく見られる低分
子（８Ｓ） ＩｇＭは見逃してし捷うことになる（Ｆ．
ｍｕｌｌｒｅ，ＫｌｉｎｉｓｃｈｅＷｏｃｈｅｎｓｃｈ
ｒｉｆｔ，５７、６６７−６７１、（１９７９））。
本発明者らは種々研究の結果、抗ヒト免疫グロブリン抗
体を用いるＲＰＨＡと梅毒抗原を用いるＰＨＡを組み合
わせることによって、簡便に梅毒特異ＩｇＭ、ＩｇＡ、
ＩｇＧなどを明確に区別して測定する方法を見い出した
。
体を用いるＲＰＨＡと梅毒抗原を用いるＰＨＡを組み合
わせることによって、簡便に梅毒特異ＩｇＭ、ＩｇＡ、
ＩｇＧなどを明確に区別して測定する方法を見い出した
。
本発明は抗ヒト免疫グロブリン抗体を感作した担体が対
応する免疫グロブリンによって反応する段階および、梅
毒抗原を感作した担体が対応する梅毒抗体の存在によっ
て反応する段階を含むことを特徴とする特許 本発明の方法においては第一段階として血清などの被検
液に抗免疫グロブリン抗体を感作した担体を通常のＲＰ
ＨＡの術式で行う。本発明において用いる抗免疫グロブ
リン抗体は通常知られている免疫グロブリンに対応する
抗体であれば何でもよいが、たとえは抗１ｇＭ抗体、抗
ＩｇＡ抗体、抗ＩｇＧ抗体などを用いることができる。
応する免疫グロブリンによって反応する段階および、梅
毒抗原を感作した担体が対応する梅毒抗体の存在によっ
て反応する段階を含むことを特徴とする特許 本発明の方法においては第一段階として血清などの被検
液に抗免疫グロブリン抗体を感作した担体を通常のＲＰ
ＨＡの術式で行う。本発明において用いる抗免疫グロブ
リン抗体は通常知られている免疫グロブリンに対応する
抗体であれば何でもよいが、たとえは抗１ｇＭ抗体、抗
ＩｇＡ抗体、抗ＩｇＧ抗体などを用いることができる。
次に第−７段階として、ＲＰＨＡ反応後反応体懸濁液か
ら遠心分所ｆなどの操作によって上澄を除き、再び担体
を緩衝液に懸濁する。懸濁する方法は通常用いられてい
る方法でよく、たとえば振動、かくはん、超音波などを
用いることかできる。
ら遠心分所ｆなどの操作によって上澄を除き、再び担体
を緩衝液に懸濁する。懸濁する方法は通常用いられてい
る方法でよく、たとえば振動、かくはん、超音波などを
用いることかできる。
さらに第三段階としてＴＰ抗原を感作した担体を、上記
の懸濁液に加え、通常のＰＨＡ反応の術式で反応を行な
い、一定時間ののちに判定を行なう。
の懸濁液に加え、通常のＰＨＡ反応の術式で反応を行な
い、一定時間ののちに判定を行なう。
本発明において用いられる担体は通常ＰＨＡまたはＲＰ
Ｉ−ＩＡに１目いられるものならば何でも用いることが
でき、たとえば動物赤血球（たとえばニワトリ）、ラテ
ノクス粒子その他の人工担体（たとえば、特願昭５６−
３７８５５に記載されている担体）を用いることができ
る。上記担体に対するＴＰ抗原または抗免疫グロブリン
抗体の感作は、通常用いられる方法で行なうことができ
る。
Ｉ−ＩＡに１目いられるものならば何でも用いることが
でき、たとえば動物赤血球（たとえばニワトリ）、ラテ
ノクス粒子その他の人工担体（たとえば、特願昭５６−
３７８５５に記載されている担体）を用いることができ
る。上記担体に対するＴＰ抗原または抗免疫グロブリン
抗体の感作は、通常用いられる方法で行なうことができ
る。
本発明の方法はＲＰＨＡとＰＨＡを組合わせた方法であ
る。すなわち、梅毒特異抗体を中心として、一方には抗
免疫グロブリン感作担体が、他方にはＴＰ抗原感作担体
が、それぞれ抗原−抗体反応によって結合することによ
り凝集反応が成立するものである。２種類の抗原−抗体
反応の組合わせによって、梅毒特異抗体をを識別するも
のであるから、特異性にすぐれた方法であることは明ら
かである。
る。すなわち、梅毒特異抗体を中心として、一方には抗
免疫グロブリン感作担体が、他方にはＴＰ抗原感作担体
が、それぞれ抗原−抗体反応によって結合することによ
り凝集反応が成立するものである。２種類の抗原−抗体
反応の組合わせによって、梅毒特異抗体をを識別するも
のであるから、特異性にすぐれた方法であることは明ら
かである。
本発明の方法は、その反応の原理からＰＨＡとＲＰＨＡ
いずれを先に行っても梅毒特異抗体の測定か可能である
ことはいうまでもない。すなわち梅毒抗原感作担体を用
いるＰＨＡ反応を第一段階として、抗免疫グロブリン抗
体感作担体を用いるＲＰＨＡを、その後に行っても本発
明の所定の効果を得ることかできる。
いずれを先に行っても梅毒特異抗体の測定か可能である
ことはいうまでもない。すなわち梅毒抗原感作担体を用
いるＰＨＡ反応を第一段階として、抗免疫グロブリン抗
体感作担体を用いるＲＰＨＡを、その後に行っても本発
明の所定の効果を得ることかできる。
また、本発明の方法はその反応の原理から梅毒に限定さ
れないことはもちろんであり、たとえば風疹、ヘル被ス
、サイトメガロなどのウィルス抗体、その他の抗体（た
とえばトキソプラズマ）に対しても適用することができ
る。
れないことはもちろんであり、たとえば風疹、ヘル被ス
、サイトメガロなどのウィルス抗体、その他の抗体（た
とえばトキソプラズマ）に対しても適用することができ
る。
本発明の方法によれば、特別の装置を用いることなく、
迅速かつ簡便に梅毒の特異抗体、たとえば梅毒ＩｇＭ、
梅毒ＴｇＡ、梅毒ＩｇＧなどを明確に識別して測定する
ことができるので、梅毒の病期の判定、治療後の経過観
察、および治療の要否の判定にきわめて有用な知見を容
易に得ることができる。
迅速かつ簡便に梅毒の特異抗体、たとえば梅毒ＩｇＭ、
梅毒ＴｇＡ、梅毒ＩｇＧなどを明確に識別して測定する
ことができるので、梅毒の病期の判定、治療後の経過観
察、および治療の要否の判定にきわめて有用な知見を容
易に得ることができる。
以下に実験例参考例および実施例を用いて本発明の方法
をさらに詳細に説明する。
をさらに詳細に説明する。
以下においては、本発明の方法をＨＩＡ（Ｈｅｍａｇｇ
ｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ）と
略すこととする。
ｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ）と
略すこととする。
実施例 ＨＩＡと従来法の比較
万代診療所より分与を受けた梅毒患者血清および日本赤
十字社より分与を受けた非梅毒者血清について、ＨＩＡ
、ＴＰＨＡ、ＦＴＡ−Ａｂｓ、分画ＴＰＨＡ，ＳＴＳ法
によって梅毒抗体の測定を行った。
十字社より分与を受けた非梅毒者血清について、ＨＩＡ
、ＴＰＨＡ、ＦＴＡ−Ａｂｓ、分画ＴＰＨＡ，ＳＴＳ法
によって梅毒抗体の測定を行った。
初期梅毒患者血清３例、早期梅毒患者血清３例、晩期潜
伏梅毒患者血清３例、および非梅毒者血清５例について
、本発明の方法によるＨＩＡ、従来のＴＰＨＡ（富士臓
器製薬（株）製）および新ＴＰＨＡ（特願昭５６−１６
８６４６）、ＰＴＡ−Ａｂｓ（Ｐｕｂ．Ｈｅａｌｔｈ
Ｒｅｐ、、７９．４１０−４１２（１９６４））、ＲＰ
Ｒ法（Ｐｉｂ、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｏｐ、７７、６４５−
６５２（１９６２））、オガタ法（日新医学、４７．６
７１ ６８９（１９６０））、分画ＴＰＨＡ法（日本医
事新報、Ｎｏ３００２、４３−４７（１９８１））によ
ってそれぞれ測定を行った。
伏梅毒患者血清３例、および非梅毒者血清５例について
、本発明の方法によるＨＩＡ、従来のＴＰＨＡ（富士臓
器製薬（株）製）および新ＴＰＨＡ（特願昭５６−１６
８６４６）、ＰＴＡ−Ａｂｓ（Ｐｕｂ．Ｈｅａｌｔｈ
Ｒｅｐ、、７９．４１０−４１２（１９６４））、ＲＰ
Ｒ法（Ｐｉｂ、Ｈｅａｌｔｈ Ｒｏｐ、７７、６４５−
６５２（１９６２））、オガタ法（日新医学、４７．６
７１ ６８９（１９６０））、分画ＴＰＨＡ法（日本医
事新報、Ｎｏ３００２、４３−４７（１９８１））によ
ってそれぞれ測定を行った。
ＨＩＡによる測定においては抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球
、抗ヒトＩｇＡ抗体感作血球、抗ヒトＩｇＧ抗体感作血
球を用いて行った。
、抗ヒトＩｇＡ抗体感作血球、抗ヒトＩｇＧ抗体感作血
球を用いて行った。
表１に結果を示す。抗体価は通常用いられる血清希釈倍
数で示した。抗体価８０倍以上を陽性とした。なお、分
画ＴＰＨＡ法については、ＩｇＭまたはＩｇＧのそれぞ
れの分画について、ピーク近傍の３本のフラクションの
抗体価の平均値で示した（日本医事新報Ｎｏ３００２，
４３−４７（１９８１）。
数で示した。抗体価８０倍以上を陽性とした。なお、分
画ＴＰＨＡ法については、ＩｇＭまたはＩｇＧのそれぞ
れの分画について、ピーク近傍の３本のフラクションの
抗体価の平均値で示した（日本医事新報Ｎｏ３００２，
４３−４７（１９８１）。
初期例：この３例はグル濾過分画によって測定したＴＰ
ＨＡ−ＩｇＭしか持たず、ＴＰＨＡ−ＩｇＧがまだ産生
されていない感染３〜４週間の血清である。
ＨＡ−ＩｇＭしか持たず、ＴＰＨＡ−ＩｇＧがまだ産生
されていない感染３〜４週間の血清である。
ＨＩＡ −ＩｇＭＸＨＩＡ −ＩｇＡは陽性であるが、
ＨＩＡ−ＩｇＧは陰性で分画ＴＰＨＡと良い相関を示し
だ。
ＨＩＡ−ＩｇＧは陰性で分画ＴＰＨＡと良い相関を示し
だ。
早期例：いずれも分画ＴＰＨＡ −ＩｇＭ 、 ＴＰＨ
Ａ−ＩｇＧの両方を持つ感染後：３〜４ケ月の早期に移
行する頃の例であり、ＨＩＡ−ＩｇＭ、ＨＩＡ−ＩｇＡ
、ＨＩＡ−ＩｇＧはいずれも陽性である。
Ａ−ＩｇＧの両方を持つ感染後：３〜４ケ月の早期に移
行する頃の例であり、ＨＩＡ−ＩｇＭ、ＨＩＡ−ＩｇＡ
、ＨＩＡ−ＩｇＧはいずれも陽性である。
晩期潜伏例：いずれも分画ＴＰＨＡ−ＩｇＧだけしか持
たない、十分に治療された患者の例である。
たない、十分に治療された患者の例である。
ＨＩＡ−ＩｇＧだけが陽性である。
津上は（津上久弥１、本事新報Ｎｏ３００２．４３−４
７（１９８１）；皮膚、２４（１）、１１−１８（１９
８２））このような症例に治療を続ける必要がなく、ま
た潜伏という言葉も使用すべきでないとしている。
７（１９８１）；皮膚、２４（１）、１１−１８（１９
８２））このような症例に治療を続ける必要がなく、ま
た潜伏という言葉も使用すべきでないとしている。
非梅毒者例： ＨＩＡ −１ｇＭ 、 ＨＩＡ −Ｉｇ
Ａ 、 ＨＩＡ −ＩｇＧのいずれも陰性である。
Ａ 、 ＨＩＡ −ＩｇＧのいずれも陰性である。
参考例Ｉ ＴＰ抗原の調製
家兎睾丸１個あたり６．０×１０７条／ｍｌのＴＰ（Ｎ
ｉｃｈｏｌｓ株）を１ｍｌづつ接種し１２日間培養後Ｍ
ｉｌｌｅｒらの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、９６，４５
０（１９６６））に従って集菌し、２．Ｏ×１０９条／
ｍｌの濃度になるよう調製し、これをＴＰ原液とした。
ｉｃｈｏｌｓ株）を１ｍｌづつ接種し１２日間培養後Ｍ
ｉｌｌｅｒらの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、９６，４５
０（１９６６））に従って集菌し、２．Ｏ×１０９条／
ｍｌの濃度になるよう調製し、これをＴＰ原液とした。
ＴＰ原液はＪｏｅｌらの方法（Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕ
ｎ、１０、１０６２（１９７４））に準じて精製処理し
た。すなわち、１４ｍｌ容量の超遠心用セルロースチュ
ーブ内にＳｏｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ １７
％Ｗ／Ｖ液を１３ｍｌ入れ、上層にＴＰ原液１ｍｌを重
層した。分離用遠心機Ｂｅｃｋｍａｎ Ｌ８）を用いＳ
Ｗ４０Ｔｉ水平ローターで４℃において２３．５０Ｏｒ
ｐｍ（１００，０００ｘｇ）４５分間遠心した。底部に
ペレッティングされたＴＰはリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ
ｐＨ７．２）に全量８ｍｌに浮遊し（８倍希釈に相当
）ホモジナイザー（Ｔｏｍｙｓｅｉｋｏ ＵＲ−２００
Ｐ、Ｔｏｋｙｏ）で菌体を破壊しだ後−８０℃に保存し
た。
ｎ、１０、１０６２（１９７４））に準じて精製処理し
た。すなわち、１４ｍｌ容量の超遠心用セルロースチュ
ーブ内にＳｏｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ １７
％Ｗ／Ｖ液を１３ｍｌ入れ、上層にＴＰ原液１ｍｌを重
層した。分離用遠心機Ｂｅｃｋｍａｎ Ｌ８）を用いＳ
Ｗ４０Ｔｉ水平ローターで４℃において２３．５０Ｏｒ
ｐｍ（１００，０００ｘｇ）４５分間遠心した。底部に
ペレッティングされたＴＰはリン酸緩衝食塩液（ＰＢＳ
ｐＨ７．２）に全量８ｍｌに浮遊し（８倍希釈に相当
）ホモジナイザー（Ｔｏｍｙｓｅｉｋｏ ＵＲ−２００
Ｐ、Ｔｏｋｙｏ）で菌体を破壊しだ後−８０℃に保存し
た。
参考例２ ＴＰ抗原感作血球の調製
ＰＢＳ（ｐＨ７．２）２．５％Ｖ／Ｖに浮遊したポルマ
リン固定羊赤血球２０ｍｌと１０ｐｐｍタンニン酸ＰＢ
Ｓ（ｐＨ７．２ ）溶液２０ｍｌとを、３７℃、１０分
間インキ−ベートする。生理食塩液で１回洗浄した後、
ＰＢＳ（ｐＨ６．４）で全量２０ｍｌに浮遊する。原液
に対して８０倍に希釈したＴＰ抗原２０ｍ１とタンニン
酸処理血球ＰＢＳ（ｐＨ６．４）浮遊液２０ｍｌとを合
わせ３７℃で４０分間インキ−ベートする。この間、１
０分毎に静かに転倒かくはんする。１％健康家兎血清（
ＮＲ８）を含む生理食塩液で１回洗浄し、１％ＮＲＳを
含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で全量を１０ｍｌに浮遊する
。５ｍｌ容搦のバイアル瓶に０．５ｍｌずつ分注し、凍
結乾燥した後、４℃に保存しておく。
リン固定羊赤血球２０ｍｌと１０ｐｐｍタンニン酸ＰＢ
Ｓ（ｐＨ７．２ ）溶液２０ｍｌとを、３７℃、１０分
間インキ−ベートする。生理食塩液で１回洗浄した後、
ＰＢＳ（ｐＨ６．４）で全量２０ｍｌに浮遊する。原液
に対して８０倍に希釈したＴＰ抗原２０ｍ１とタンニン
酸処理血球ＰＢＳ（ｐＨ６．４）浮遊液２０ｍｌとを合
わせ３７℃で４０分間インキ−ベートする。この間、１
０分毎に静かに転倒かくはんする。１％健康家兎血清（
ＮＲ８）を含む生理食塩液で１回洗浄し、１％ＮＲＳを
含むＰＢＳ（ｐＨ７．２）で全量を１０ｍｌに浮遊する
。５ｍｌ容搦のバイアル瓶に０．５ｍｌずつ分注し、凍
結乾燥した後、４℃に保存しておく。
参考例３ 抗ヒト免疫グロブリン抗体感作血球の調製
参考例２と同様にタンニン酸処理した羊赤血Ｊに抗ヒト
免疫ダロブリンを感作する。
免疫ダロブリンを感作する。
４００倍に希釈したウサギ抗ヒトＩｇＭ抗体（μ−ｃｈ
ａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｄａｋｏ）２０ｍｌとタン
ニン酸処理ＰＢＳ（ｐＨ６．４）羊赤血球浮遊液２０ｍ
ｌを合わせ、以下参考例２と同様に処理して、抗ヒトＩ
ｇＭ抗体感作血球の凍結乾燥品を得た。
ａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｄａｋｏ）２０ｍｌとタン
ニン酸処理ＰＢＳ（ｐＨ６．４）羊赤血球浮遊液２０ｍ
ｌを合わせ、以下参考例２と同様に処理して、抗ヒトＩ
ｇＭ抗体感作血球の凍結乾燥品を得た。
ウザギ抗ヒトＩｇＡ抗体（α−ｃｈａｉｎ ｓｐｅｃｉ
ｆｉｃ ，Ｄａｋｏ）ウザギ抗ヒトＩｇＧ（γ−ｃｈａ
ｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ，Ｄａｋｏ）も同様に羊赤血
球に感作し、凍結乾燥品を得た。
ｆｉｃ ，Ｄａｋｏ）ウザギ抗ヒトＩｇＧ（γ−ｃｈａ
ｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ，Ｄａｋｏ）も同様に羊赤血
球に感作し、凍結乾燥品を得た。
実施例１ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ Ｉｍｍ
ｕｎｏａｓｓａｙ（Ｈ凍結乾燥しておいた抗ヒトＩｇＭ
抗体感作血球（ＡＭ−ＲＢＣ）、抗ヒトＩｇＡ抗体感作
血球（ＡＡ−ＲＢＣ）、抗ヒトＩｇＧ抗体感作血球（Ａ
Ｃ−ＲＢＣ）およびＴＰ抗原感作血球（ＴＰ−ＲＢＣ）
にそれぞれ１ｍｌの蒸留水を加えて復元しておく。
ｕｎｏａｓｓａｙ（Ｈ凍結乾燥しておいた抗ヒトＩｇＭ
抗体感作血球（ＡＭ−ＲＢＣ）、抗ヒトＩｇＡ抗体感作
血球（ＡＡ−ＲＢＣ）、抗ヒトＩｇＧ抗体感作血球（Ａ
Ｃ−ＲＢＣ）およびＴＰ抗原感作血球（ＴＰ−ＲＢＣ）
にそれぞれ１ｍｌの蒸留水を加えて復元しておく。
被検血清５μｌを、Ｕ字型マイクロトレーのウェルＮｏ
１（左端）にとる。血清希釈用液（富士臓器製薬（株）
製ＴＰＨＡキット中のＡｂｓｏｒｂｉｎｇ ｄｉｌｕｅ
ｎｔ 。
１（左端）にとる。血清希釈用液（富士臓器製薬（株）
製ＴＰＨＡキット中のＡｂｓｏｒｂｉｎｇ ｄｉｌｕｅ
ｎｔ 。
Ｂ液） ５０μｌをウェルＮｏ１（左端）にとった後、
ウェルＮｏ２からエンド（右端）壕で各２５μｌずつ滴
下する。本例で用いた術式は以下の通りである。下表に
おいて未感作羊赤血球を「ＲＢＣ」と略す。
ウェルＮｏ２からエンド（右端）壕で各２５μｌずつ滴
下する。本例で用いた術式は以下の通りである。下表に
おいて未感作羊赤血球を「ＲＢＣ」と略す。
ダイリューターでウェルＮｏ１からエンドまで倍倍希釈
を行なう。先に復元した抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球（Ａ
Ｍ−ＲＢＣ）液に７ｍｌずつの血清希釈用液（Ｂ液）を
加えたもの（２．５％血球浮遊液の８倍希釈相当）をウ
ェル茄３からエンドまで２５μｌずつ滴下する。ウェル
Ｎｏ２には未感作血球液２５μｌを加えておく。
を行なう。先に復元した抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球（Ａ
Ｍ−ＲＢＣ）液に７ｍｌずつの血清希釈用液（Ｂ液）を
加えたもの（２．５％血球浮遊液の８倍希釈相当）をウ
ェル茄３からエンドまで２５μｌずつ滴下する。ウェル
Ｎｏ２には未感作血球液２５μｌを加えておく。
トレーに振動を与えることによってウェル内の液をよく
混合し、トレー表面にフタをして、３７℃のフラン器内
で１５分間インキュベートした後室温に戻し、２，００
０ｒｐｍ（６００Ｘｇ）で５分間遠心した後、上澄をア
スピレータ−で吸引する。
混合し、トレー表面にフタをして、３７℃のフラン器内
で１５分間インキュベートした後室温に戻し、２，００
０ｒｐｍ（６００Ｘｇ）で５分間遠心した後、上澄をア
スピレータ−で吸引する。
各ウェルにＢ液を２５μｌずつ加え、トレーを震動させ
て、血球を懸濁した後、ＴＰ抗原感作血球液２，０００
ｒｐｍ（６００Ｘｇ）で５分間遠心し、上澄をアスピレ
ータ−で吸引する。
て、血球を懸濁した後、ＴＰ抗原感作血球液２，０００
ｒｐｍ（６００Ｘｇ）で５分間遠心し、上澄をアスピレ
ータ−で吸引する。
各ウェルにＢ液を２５１ｔＡずつ加えトレーを振動させ
て、血球を懸濁した後、ＴＰ抗原感作血球液（ＴＰ−Ｒ
ＢＣ）をウェルＮｏ３からエンドまで２５μｌずつ加え
、ウェルＮｏ２には未感作血球液を２５μｌ加えてウェ
ル内をよくかくはんした後、室温に静置し、２時間後寸
たは翌日判定した。抗体価（８０倍）以上を陽性とした
。
て、血球を懸濁した後、ＴＰ抗原感作血球液（ＴＰ−Ｒ
ＢＣ）をウェルＮｏ３からエンドまで２５μｌずつ加え
、ウェルＮｏ２には未感作血球液を２５μｌ加えてウェ
ル内をよくかくはんした後、室温に静置し、２時間後寸
たは翌日判定した。抗体価（８０倍）以上を陽性とした
。
抗ヒトＩｇＡ抗体感作血球（ＡＡ−ＲＢＣ）、抗ヒトＩ
ｇＧ抗体感作血球（ＡＣ−ＲＢＣ）を用いるＨＩＡも上
記と同様に行った。
ｇＧ抗体感作血球（ＡＣ−ＲＢＣ）を用いるＨＩＡも上
記と同様に行った。
実施例２
ＡＭ−ＲＢＣとＴＰ−ＲＢＣを用い、初期梅毒患者血清
（Ｎｏ４）および晩期梅毒患者血清（Ｎｏ４）について
ＨＩＡによるＴＰ−ＩｇＭの測定を行った。
（Ｎｏ４）および晩期梅毒患者血清（Ｎｏ４）について
ＨＩＡによるＴＰ−ＩｇＭの測定を行った。
ＲＰＨＡ反応とＰＨＡ反応の中間における生理食塩液に
よる洗浄は１回又は２回とし、その他は実施例１と同様
に行った。結果を以下に示す。洗浄による抗体価の低下
は見られない。
よる洗浄は１回又は２回とし、その他は実施例１と同様
に行った。結果を以下に示す。洗浄による抗体価の低下
は見られない。
実施例３
ＨＩＡにおけるＲＰＨＡ反応とＰＨ１反応の順序を変え
て実施例２と同じ血清について測定を行った。すなわち
被検血清にまずＴＰ−ＲＢＣを加えて反応させ、生理食
塩液による洗浄後ＡＭ−ＲＢＣを反応させた。
て実施例２と同じ血清について測定を行った。すなわち
被検血清にまずＴＰ−ＲＢＣを加えて反応させ、生理食
塩液による洗浄後ＡＭ−ＲＢＣを反応させた。
ＴＰ−ＲＢＣとＡＭ−ＲＢＣを加える順序を実施例２と
逆にした他は実施例２と同様に則定を行った。結果を以
下に示す。
逆にした他は実施例２と同様に則定を行った。結果を以
下に示す。
本例の術式では生理食塩液による洗浄を２回以上行うと
ＴＰ−ＩｇＧによるｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅは避
けられる。
ＴＰ−ＩｇＧによるｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅは避
けられる。
手続補正書（自発）
５７年７月２８日
特許庁長官 若杉和男殿
１、事件の表示
昭和５７年７月１４日提出の特許願
２、発明の名称
梅毒抗体の測定方法
３．補正をする者
事件との関係 特許出願人
住所 東京都新宿区下落合４丁目６番７号名称 富士臓
器製薬株式会社 代表者 藤田光一郎 ０３−３４８−０６９１ ４．補正により増加する発明の数 ０ ５．補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 明細書の記載を以下のとおりに補正する。
器製薬株式会社 代表者 藤田光一郎 ０３−３４８−０６９１ ４．補正により増加する発明の数 ０ ５．補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 明細書の記載を以下のとおりに補正する。
手続補正書（自発）
昭和５７年９月１３日
特許庁長官 若 杉 和 夫 殿１、事件の
表示 昭和５７年特許願第１２１２４４号 ２、発明の名称 梅毒抗体の測定方法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 〒１６１東京都新宿区下落合１丁目６番７号名
称 富士臓器製薬株式会社 代表者 藤田光一郎 電話 ０３−３４８−０６９１ ４、補正により増加する発明の数 ０５、補正の対
象 明細書の発明の詳細な説明 ６、補正の内容 （１〉明細書第３ページ第１９行目、 「判定を」を［判定と」に訂正する。
表示 昭和５７年特許願第１２１２４４号 ２、発明の名称 梅毒抗体の測定方法 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 〒１６１東京都新宿区下落合１丁目６番７号名
称 富士臓器製薬株式会社 代表者 藤田光一郎 電話 ０３−３４８−０６９１ ４、補正により増加する発明の数 ０５、補正の対
象 明細書の発明の詳細な説明 ６、補正の内容 （１〉明細書第３ページ第１９行目、 「判定を」を［判定と」に訂正する。
（２）同第５ページ第５行の後に次の記載を加入する。
「もちろん、細胞融合の手法によって得られる融合細胞
（ハイブリドーマ）などで産生される、いわゆるモノク
ローナル抗体を用いることができる。
（ハイブリドーマ）などで産生される、いわゆるモノク
ローナル抗体を用いることができる。
（３）同第７ページ第１４行目、
「実施例」を「実験例１」訂正する。
以上
手続補正書（方式）
昭和５７年１１月８日
特許庁長官 若杉和男殿
１、事件の表示
昭和５７年度特許願第１２１２４４号
２、発明の名称
梅毒抗体の測定方法
３．補正をする者
事件との関係 特許出願人
住所 〒１６１ 東京都新宿区下落合４丁目６番７号名
称 富士臓器製薬株式会社 代表者 藤田光一郎 電話 ０３−３４８−０６９１ ５．補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６．補正の内容 明細書の第１０ページ第１４ページ第１６ページおよび
第１７ページの記載を別紙記載のとおりに訂正する。
称 富士臓器製薬株式会社 代表者 藤田光一郎 電話 ０３−３４８−０６９１ ５．補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６．補正の内容 明細書の第１０ページ第１４ページ第１６ページおよび
第１７ページの記載を別紙記載のとおりに訂正する。
７．添付書類の目録
明細書の第１０ページ、第１４ページ 各１通第１６ペ
ージ、および第１７ページ 以上 Ｂ液）５０μｌをウェルＮｏ１（左端）にとった後、ウ
ェルＮｏ２からエンド（右端）まで各２５μｌずつ滴下
する。本例で用いた術式は以下の通りである。上表にお
いて未感作羊赤血球を「ＲＢＣ」と略す。
ージ、および第１７ページ 以上 Ｂ液）５０μｌをウェルＮｏ１（左端）にとった後、ウ
ェルＮｏ２からエンド（右端）まで各２５μｌずつ滴下
する。本例で用いた術式は以下の通りである。上表にお
いて未感作羊赤血球を「ＲＢＣ」と略す。
ダイリューターでウェルＮｏ１からエンドまで倍倍希釈
を行なう。先に復元した抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球（Ａ
Ｍ−ＲＢＣ）液に７ｍｌずつの血清希釈用液（Ｂ液）を
加えたもの（２．５％血球浮遊液の８倍ＩｇＧ抗体感作
血球（ＡＧ−ＲＢＣ）を用いるＨＩＡも上記と同様に行
った。
を行なう。先に復元した抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球（Ａ
Ｍ−ＲＢＣ）液に７ｍｌずつの血清希釈用液（Ｂ液）を
加えたもの（２．５％血球浮遊液の８倍ＩｇＧ抗体感作
血球（ＡＧ−ＲＢＣ）を用いるＨＩＡも上記と同様に行
った。
実施例２
ＡＭ−ＲＢＣとＴＰ−ＲＢＣを用い、初期桁毎患者血清
（Ｎｏ４）および晩期梅毒患者血清（Ｎｏ４）について
ＨＩＡによるＴＰ−ＩｇＭの測定を行った。
（Ｎｏ４）および晩期梅毒患者血清（Ｎｏ４）について
ＨＩＡによるＴＰ−ＩｇＭの測定を行った。
ＲＰＨＡ反応とＰＨＡ反応の中間における生理食塩液に
よる洗浄は１回又は２回とし、その他は実施例１と同様
に行った。結果を以下に示す。洗沖による抗体価の低下
は見られない。
よる洗浄は１回又は２回とし、その他は実施例１と同様
に行った。結果を以下に示す。洗沖による抗体価の低下
は見られない。
実施例３
ＨＩＡにおけるＲＰＨＡ反応とＰＨＡ反応の順序を変え
て実施例２と同じ血清について測定を行った。すなわち
被検血清にまずＴＰ−ＲＢＣを加えて反応させ、生理食
廖液による洗浄後ＡＭ−ＲＢＣを反応させたＴＰ−ＲＢ
ＣとＡＭ−ＲＢＣを加える順序を実施例２と逆にした他
は実施例２と同様に測定を行った。結果を以下に示す。
て実施例２と同じ血清について測定を行った。すなわち
被検血清にまずＴＰ−ＲＢＣを加えて反応させ、生理食
廖液による洗浄後ＡＭ−ＲＢＣを反応させたＴＰ−ＲＢ
ＣとＡＭ−ＲＢＣを加える順序を実施例２と逆にした他
は実施例２と同様に測定を行った。結果を以下に示す。
本例の術式では整理食塩液による洗浄を２回以上行うと
ＴＰ−ＩｇＧによるｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅは避
けられる。
ＴＰ−ＩｇＧによるｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅは避
けられる。
特許出願人 富士臓器製薬株式会社
鉄拭き補正書（自発）
昭和５８年９月１９日
特許庁長官 若杉和男殿
１．事件の表示
昭和５７年特許願第１２２４４号
２．発明の名称
特異抗体の測定方法（本手続補正書により補正）３．補
正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 〒１６１東京都新宿区下落合４丁目６番７号名称
富士レビオ株式会社 代表者 藤田光一郎 電話 ０３−３４８−０６９１ ４、補正により増加する発明の数 ０５、補正の対
象 願書の発明の名称の欄および明細書全文６．補正の内容 （１）願書の発明の名称を「特異抗体の測定方法」に補
正する。
正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 〒１６１東京都新宿区下落合４丁目６番７号名称
富士レビオ株式会社 代表者 藤田光一郎 電話 ０３−３４８−０６９１ ４、補正により増加する発明の数 ０５、補正の対
象 願書の発明の名称の欄および明細書全文６．補正の内容 （１）願書の発明の名称を「特異抗体の測定方法」に補
正する。
（２）明細書全文を別紙記載のとおりに補正する。
７、添付書類の目録
別紙 １通
明細書
１発明の名称
特異抗体の測定方法
２、特許請求の範囲
（１）抗免疫グロブリン抗体を感作した担体が対応する
免疫グロブリンの存在によって反応する段階および抗原
を感作した相体が対応する抗体の存在によって反応する
段階を含むことを特徴とする特異抗体の測定力法。
免疫グロブリンの存在によって反応する段階および抗原
を感作した相体が対応する抗体の存在によって反応する
段階を含むことを特徴とする特異抗体の測定力法。
（２）抗体が梅毒抗原である特許請求の範囲第１項記載
の方法 （３）抗原がウイルス抗原である特許請求の範囲第１項
記載の方法 （４）抗原が風疹抗体である特許請求の範囲第３項記載
の方法 ３、発明の詳細な説明 本発明は、梅毒、ウィルス等の特異抗体を測定する方法
に関する。
の方法 （３）抗原がウイルス抗原である特許請求の範囲第１項
記載の方法 （４）抗原が風疹抗体である特許請求の範囲第３項記載
の方法 ３、発明の詳細な説明 本発明は、梅毒、ウィルス等の特異抗体を測定する方法
に関する。
さらに詳しくはいわゆる受身凝集反応（Ｐａｓｓｉｖｅ
Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ、以下
ＰＰＡと略す）と逆受身凝集反応（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐ
ａｓｓｉｖｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｇｇｌｕｔｉｎａ
ｔｉｏｎ、以下ＲＰＰＡという）を組み合わせて特異免
疫グロプリンＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧなどを測定する方
法に関する。
Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ、以下
ＰＰＡと略す）と逆受身凝集反応（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐ
ａｓｓｉｖｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｇｇｌｕｔｉｎａ
ｔｉｏｎ、以下ＲＰＰＡという）を組み合わせて特異免
疫グロプリンＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧなどを測定する方
法に関する。
以下、本発明の方法を梅毒特異抗体の測定を例に用いて
詳細に説明する。
詳細に説明する。
トレポネーマ・バリーダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ Ｐａ
ｌＨｄｕｍ、以下ＴＰという）を抗原として用いる梅毒
血清反応検査法のうち、ＴＰＨＡ法（Ｔｒｅｐｏｎｅｍ
ａ ＰａｌｌｊｄｕｍＨｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏ
ｎ ）法は代表的な梅毒の臨床検査法として普及してい
る。
ｌＨｄｕｍ、以下ＴＰという）を抗原として用いる梅毒
血清反応検査法のうち、ＴＰＨＡ法（Ｔｒｅｐｏｎｅｍ
ａ ＰａｌｌｊｄｕｍＨｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏ
ｎ ）法は代表的な梅毒の臨床検査法として普及してい
る。
ＴＰＨＡ等のＴＰ抗原を用いる検査法は、ＴＰ抗体を測
定する方法であるために、悔青の治療後の経過観察およ
び治癒判定には必ずしも適当ではない（たとえば福岡良
男２日本臨床、３８．１５０１（１９８０）参照）。
定する方法であるために、悔青の治療後の経過観察およ
び治癒判定には必ずしも適当ではない（たとえば福岡良
男２日本臨床、３８．１５０１（１９８０）参照）。
これは従来のＴＰ抗原を用いる検査法が、梅毒感染初期
に産生さねる免疫グロブリンＩｇＭ、後期に産生される
ＩｇＧやその他の免疫グロブリンを区別して測定できな
いだめであった。
に産生さねる免疫グロブリンＩｇＭ、後期に産生される
ＩｇＧやその他の免疫グロブリンを区別して測定できな
いだめであった。
１９７９年、Ｍｕｌｌｅｒらはゲル濾過法によって、Ｉ
ｇＭとＩｇＧに血清を分画し、１９Ｓ（ＩｇＭ）−ＴＰ
ＨＡと１９Ｓ（ＩｇＭ）−ＦＴＡ−Ａｂｓを実施するこ
とによって病期の判定と治癒判定に利用した（以下「分
画ＴＰＨＡ」と略す、Ｆ．Ｍｕｌｌｅｒ、ＷＴＯ／ＶＤ
Ｔ／ＲＥＳ．，７９，３６１（１９７９））。ゲル瀘過
法は特別の装置が必要でかつ長時間を要し、まだ検出試
薬であるＴＰＨＡを多量に用いなければならない。加え
て１ｇＭとＩｇＧをその分子サイズの違いで分離してい
るために自己免疫疾恵症などによく児らねる低分子（８
Ｓ）ＩｇＭは見逃してしまうことになる（Ｆ．Ｍｕｌｌ
ｅｒ，Ｋｌｉｎｉｓｃｈｅ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒｉ
ｆｔ、５７，６６７−６７１，（１９７９））。
ｇＭとＩｇＧに血清を分画し、１９Ｓ（ＩｇＭ）−ＴＰ
ＨＡと１９Ｓ（ＩｇＭ）−ＦＴＡ−Ａｂｓを実施するこ
とによって病期の判定と治癒判定に利用した（以下「分
画ＴＰＨＡ」と略す、Ｆ．Ｍｕｌｌｅｒ、ＷＴＯ／ＶＤ
Ｔ／ＲＥＳ．，７９，３６１（１９７９））。ゲル瀘過
法は特別の装置が必要でかつ長時間を要し、まだ検出試
薬であるＴＰＨＡを多量に用いなければならない。加え
て１ｇＭとＩｇＧをその分子サイズの違いで分離してい
るために自己免疫疾恵症などによく児らねる低分子（８
Ｓ）ＩｇＭは見逃してしまうことになる（Ｆ．Ｍｕｌｌ
ｅｒ，Ｋｌｉｎｉｓｃｈｅ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒｉ
ｆｔ、５７，６６７−６７１，（１９７９））。
本発明者らは種々研究の結果、抗ヒト免疫グロブリン抗
体を用いるＲＰＰＡと梅毒等の抗原を用いるＰＰＡを組
み合わせることによって、簡便に梅毒等の特異ＩｇＭ、
ＩｇＡ、ＩｇＧなどを明確に区別して測定する方法を見
い出した。
体を用いるＲＰＰＡと梅毒等の抗原を用いるＰＰＡを組
み合わせることによって、簡便に梅毒等の特異ＩｇＭ、
ＩｇＡ、ＩｇＧなどを明確に区別して測定する方法を見
い出した。
本発明は抗ヒト免役グロブリン抗体を感作した担体が対
応する免疫グロブリンによって反応する段階および、悔
み等の抗原を感作した担体が対応する抗体の介在によっ
て反応する段階を沈むことを特徴とする特異抗体の測定
方法でちる。
応する免疫グロブリンによって反応する段階および、悔
み等の抗原を感作した担体が対応する抗体の介在によっ
て反応する段階を沈むことを特徴とする特異抗体の測定
方法でちる。
本発明の方法においては第一段階として血清などの被検
液に抗免疫グロブリン抗体を感作した担体を通常のＲＰ
ＰＡの術式で行う。本発明において用いる抗免疫グロブ
リン抗体は通常知られている免疫グロブリンに対応する
抗体であれば何でもよいが、例えば抗ＩｇＭ抗体、抗Ｉ
ｇＡ抗体、抗ＩｇＧ抗体、抗ＩｇＤ抗体、抗ＩｇＥ抗体
などを用いることができる。
液に抗免疫グロブリン抗体を感作した担体を通常のＲＰ
ＰＡの術式で行う。本発明において用いる抗免疫グロブ
リン抗体は通常知られている免疫グロブリンに対応する
抗体であれば何でもよいが、例えば抗ＩｇＭ抗体、抗Ｉ
ｇＡ抗体、抗ＩｇＧ抗体、抗ＩｇＤ抗体、抗ＩｇＥ抗体
などを用いることができる。
もちろん、細胞融合の手法によって得られる融合細胞（
ハイブリドーマ）などで産生される、いわゆるモノクロ
ーナル抗体をも用いることができる。
ハイブリドーマ）などで産生される、いわゆるモノクロ
ーナル抗体をも用いることができる。
次に第二段階として、ＲＰＰＡ反応後反応体忠濁液から
遠心分離などの操作によって上澄を除き、再び担体を緩
衝妓に懸濁する。懸濁する方法は通常用いられている方
法でよく、たとえば振動、かくはん、超音波などを用い
ることができる。
遠心分離などの操作によって上澄を除き、再び担体を緩
衝妓に懸濁する。懸濁する方法は通常用いられている方
法でよく、たとえば振動、かくはん、超音波などを用い
ることができる。
さらに第三段階としてＴＰ等の抗原を感作した担体を、
上記の嚢濁液に加え、通常のＰＰＡ反応の組人で反応を
行ない、一定時間ののちに判定を行なう。
上記の嚢濁液に加え、通常のＰＰＡ反応の組人で反応を
行ない、一定時間ののちに判定を行なう。
本発明において用いられる担体は通常ＰＰＡまたはＲＰ
ＰＡに用いらねるものならば何でも用いることができ、
たとえば動物赤血球（たとえばニワトリ）、ラテックス
粒子その他の人工担体（たとえば、特願昭５６−３７８
５５に記載されている担体）を用いることができる。上
記担体に対するＴＰ等の抗原または抗免疫グロブリン抗
体の感作は、通常用いられる方法で行なうことができる
。
ＰＡに用いらねるものならば何でも用いることができ、
たとえば動物赤血球（たとえばニワトリ）、ラテックス
粒子その他の人工担体（たとえば、特願昭５６−３７８
５５に記載されている担体）を用いることができる。上
記担体に対するＴＰ等の抗原または抗免疫グロブリン抗
体の感作は、通常用いられる方法で行なうことができる
。
本発明の方法けＲＰＰＡとＰＰＡを組合わせた方法であ
る、すなわち、梅毒等の特異抗体を中心として、一方に
は抗免疫グロプリン抗体感作担体が、他方にはＴＰ等の
抗原感作担体が、それぞれ抗原〜抗体反応によって結合
することによシ凝集反応が成立するものである。２種類
の抗原−抗体反応の組合わせによって、梅毒等の特異抗
体を識別するものであるから、特異性にすぐれた方法で
あることは明らかである。
る、すなわち、梅毒等の特異抗体を中心として、一方に
は抗免疫グロプリン抗体感作担体が、他方にはＴＰ等の
抗原感作担体が、それぞれ抗原〜抗体反応によって結合
することによシ凝集反応が成立するものである。２種類
の抗原−抗体反応の組合わせによって、梅毒等の特異抗
体を識別するものであるから、特異性にすぐれた方法で
あることは明らかである。
本発明の方法は、その反応の原理からＰＰＡとＲＰＰＡ
いずれを先に行っても特異抗体の測定が可能であること
はいうまでもない。すなわち抗原感作担体を用いるＰＰ
Ａを第一段階として、抗免疫グロブリン抗体感作担体を
用いるＲＰＰＡを、その後に行っても本発明の所定の効
果を得ることができる。
いずれを先に行っても特異抗体の測定が可能であること
はいうまでもない。すなわち抗原感作担体を用いるＰＰ
Ａを第一段階として、抗免疫グロブリン抗体感作担体を
用いるＲＰＰＡを、その後に行っても本発明の所定の効
果を得ることができる。
また、本発明の方法はその反応の原理から、梅毒特異抗
体の測定に限定されないことはもちろんであり、従来の
同周凝集反応によって測定できるものであれは何でも本
発明の方法によりそれぞれの特異抗体を測定することが
できる。すなわち、。
体の測定に限定されないことはもちろんであり、従来の
同周凝集反応によって測定できるものであれは何でも本
発明の方法によりそれぞれの特異抗体を測定することが
できる。すなわち、。
現在、間接凝集反応による測定が一般的である風疹、ヘ
ルペス、サイトメガロ等のウイルスの特異抗体、その他
のもの（例えばトキソプラズマ、溶連菌、リウマチ因子
等）の特異抗体をも本発明の方法により測定することが
できる。
ルペス、サイトメガロ等のウイルスの特異抗体、その他
のもの（例えばトキソプラズマ、溶連菌、リウマチ因子
等）の特異抗体をも本発明の方法により測定することが
できる。
本発明の方法によれば、特別の装置を用いることなく、
迅速かつ簡便に梅毒等の特異抗体、たとえば梅毒ＩｇＭ
、梅毒ＩｇＡ、梅毒ＩｇＧなどを明確に識別して測定す
ることができるので、梅毒等の病期の判定、治療後の経
過観察、および治療の要否の判定にきわめて有用な知見
を容易に得ることができる。
迅速かつ簡便に梅毒等の特異抗体、たとえば梅毒ＩｇＭ
、梅毒ＩｇＡ、梅毒ＩｇＧなどを明確に識別して測定す
ることができるので、梅毒等の病期の判定、治療後の経
過観察、および治療の要否の判定にきわめて有用な知見
を容易に得ることができる。
以下に実験例、参考例および実施例を用いて本発明の方
法をさらに詳細に説明する。
法をさらに詳細に説明する。
以下においては、本発明の方法をＰＩＡ（Ｐａｒｔｉｃ
ｌｅＡｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓ
ａｙ ）と略すこととする。
ｌｅＡｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓ
ａｙ ）と略すこととする。
実験例 ＰＩＡと従来法の比較
万代診療所より分与を受けた梅毒患者血清および日本赤
十字社より分与を受けた非梅毒者血清について、ＰＩＡ
、ＴＰＨＡ、ＦＴＡ−Ａｂｓ、分画ＴＰＨＡ、ＳＴＳ法
によって梅毒抗体の測定を行った。
十字社より分与を受けた非梅毒者血清について、ＰＩＡ
、ＴＰＨＡ、ＦＴＡ−Ａｂｓ、分画ＴＰＨＡ、ＳＴＳ法
によって梅毒抗体の測定を行った。
初期梅毒切者血清３例、早期梅毒患者血清３例、晩期潜
伏梅毒患者血清３例、および非梅毒者血清５例について
、本発明の方法によるＰＩＡ、従来のＴＰＨＡ（富士レ
ビオ■製）および新ＴＰＨＡ（特願昭５６−１６８６７
１６）、ＦＴＡ −Ａｂｓ （Ｐｕｂ、 Ｈｅａｌｔｈ
Ｒｅｐ、、７９，４１０−４１２（１９６４））、ＲＰ
Ｒ法（Ｐｕｂ 。
伏梅毒患者血清３例、および非梅毒者血清５例について
、本発明の方法によるＰＩＡ、従来のＴＰＨＡ（富士レ
ビオ■製）および新ＴＰＨＡ（特願昭５６−１６８６７
１６）、ＦＴＡ −Ａｂｓ （Ｐｕｂ、 Ｈｅａｌｔｈ
Ｒｅｐ、、７９，４１０−４１２（１９６４））、ＲＰ
Ｒ法（Ｐｕｂ 。
ＨｅａｌｔｈＲｅｐ、、７７．６４５−６５２（１９６
２））、オガタ法（日新医学、４７，６７１−６８９（
１９６０））、分画ＴＰＨＡ法（日本医事新報、ＮＯ３
００２，４３−４７（１９８１））によってそれぞれ測
定を行った。
２））、オガタ法（日新医学、４７，６７１−６８９（
１９６０））、分画ＴＰＨＡ法（日本医事新報、ＮＯ３
００２，４３−４７（１９８１））によってそれぞれ測
定を行った。
ＰＩＡによる測定においては抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球
、抗ヒトＩｇＡ抗体感作血球、抗ヒトＩｇＧ抗体感作血
球を用いて行った。
、抗ヒトＩｇＡ抗体感作血球、抗ヒトＩｇＧ抗体感作血
球を用いて行った。
表１に結果を示す。抗体価は通常用いられる血清希釈倍
数で示しだ。抗体価８０倍以上を陽性とした。なお、分
画ＴＰＨＡ法については、ＩｇＭまたはＩｇＧのそれぞ
れの分画について、ピーク近傍の３本のフラクションの
抗体価の平均値で示した（日本医事新報Ｎｏ３００２，
４３−４７（１９８１））。
数で示しだ。抗体価８０倍以上を陽性とした。なお、分
画ＴＰＨＡ法については、ＩｇＭまたはＩｇＧのそれぞ
れの分画について、ピーク近傍の３本のフラクションの
抗体価の平均値で示した（日本医事新報Ｎｏ３００２，
４３−４７（１９８１））。
初期例：この３例はゲル濾過分画によって測定したＴＰ
ＨＡ−ＩｇＭしか持たず、ＴＰＨＡ−ＩｇＧがまだ産生
されていない感染３〜４週間の血清である。ＰＩＡ−Ｉ
ｇＭ、ＰＩＡ−Ｉｇａは陽性であるが、ＰＩＡ−ＩｇＧ
は陰性で分画ＴＰＨＡと良い相関を示した。
ＨＡ−ＩｇＭしか持たず、ＴＰＨＡ−ＩｇＧがまだ産生
されていない感染３〜４週間の血清である。ＰＩＡ−Ｉ
ｇＭ、ＰＩＡ−Ｉｇａは陽性であるが、ＰＩＡ−ＩｇＧ
は陰性で分画ＴＰＨＡと良い相関を示した。
早期例：いずねも分画ＴＰＨＡ−ＩｇＭ、ＴＰＨＡ−Ｉ
ｇＧの両方を持つ感染後３〜４ケ月の早期に移行する頃
の例であり、ＰＩＡ−ＩｇＭ、ＰＩＡ −ＩｇＡ、ＰＩ
Ａ−ＩｇＧはいずれも陽性である。
ｇＧの両方を持つ感染後３〜４ケ月の早期に移行する頃
の例であり、ＰＩＡ−ＩｇＭ、ＰＩＡ −ＩｇＡ、ＰＩ
Ａ−ＩｇＧはいずれも陽性である。
晩期潜伏例：いずれも分画ＴＰＨＡ−ＩｇＧだけしか持
たない、十分に治療された患者の例である。
たない、十分に治療された患者の例である。
ＰＩＡ−ＩｇＧだけが陽性である。
津上は（津上久弥，日本医事新報Ｎｏ３００２，４３−
４７（１９８１）；皮膚、２４（１）、１１−１８（１
９８２））このような症例は治療を続ける必要がなく、
また潜伏という言葉も使用すべきでないとしている。
４７（１９８１）；皮膚、２４（１）、１１−１８（１
９８２））このような症例は治療を続ける必要がなく、
また潜伏という言葉も使用すべきでないとしている。
非梅毒者例： ＰＩＡ −１ｇＭ、 ＰＩＡ −ｒｇＡ
、 ＰＩＡ −ＩｇＧのいずれも陰性である。
、 ＰＩＡ −ＩｇＧのいずれも陰性である。
参考例１ ＴＰ抗原の調製
家兎睾丸１個あたり６．０Ｘ１０７条／ｍｌのＴＰ（Ｎ
ｌｃｈｏｌｓ株）を１ｍｌづつ接種し１２日間培養後Ｍ
ｉｌｌｅｒらの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９６，４
５０（１９６６））に従って集菌し、２０×１０９条／
ｍｌの濃度になるよう調製し、これをＴＰ原液とした。
ｌｃｈｏｌｓ株）を１ｍｌづつ接種し１２日間培養後Ｍ
ｉｌｌｅｒらの方法（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９６，４
５０（１９６６））に従って集菌し、２０×１０９条／
ｍｌの濃度になるよう調製し、これをＴＰ原液とした。
ＴＰ原液はＪｏｅｌらの方法（Ｉｎｆｅｃｔ、 Ｔｍｍ
ｕｎ、、１０ 、１０６２（１９７４））に準じて精製
処理した。すなわち、１４ｍｌ容量の超遠心用セルロー
スチューブ内にＳｏｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ
１７％Ｗ／Ｖ液を１３ｍｌ入れ、上層にＴＰ原液１ｍｌ
を重層した。分離用遠心機ＢｅｃｋｍａｎＬ８）を用い
ＳＷ４０Ｔｉ水平ローターで４℃において２３，５００
ｒｐｍ（１００，０００ｇ）４５分間遠心した。
ｕｎ、、１０ 、１０６２（１９７４））に準じて精製
処理した。すなわち、１４ｍｌ容量の超遠心用セルロー
スチューブ内にＳｏｄｉｕｍ ｄｉａｔｒｉｚｏａｔｅ
１７％Ｗ／Ｖ液を１３ｍｌ入れ、上層にＴＰ原液１ｍｌ
を重層した。分離用遠心機ＢｅｃｋｍａｎＬ８）を用い
ＳＷ４０Ｔｉ水平ローターで４℃において２３，５００
ｒｐｍ（１００，０００ｇ）４５分間遠心した。
底部にペレッティングされだＴＰはリン酸緩衝食塩液（
ＰＢＳ ｐＨ７，２）に全量８ｍｌに浮遊し（８倍希釈
に相当）ホモジナイザー（Ｔｏｍｙ ｓｅｉｋｏ ＵＲ
−２００Ｐ、Ｔｏｋｙｏ）で菌体を破壊しだ後−８０℃
に保存した。
ＰＢＳ ｐＨ７，２）に全量８ｍｌに浮遊し（８倍希釈
に相当）ホモジナイザー（Ｔｏｍｙ ｓｅｉｋｏ ＵＲ
−２００Ｐ、Ｔｏｋｙｏ）で菌体を破壊しだ後−８０℃
に保存した。
参考例２ ＴＰ抗原感作血球の調製
ＰＢＳ（ｐＨ７．２）２５％Ｖ／Ｖに浮遊したホルマリ
ン固定羊赤血球２０ｍｌと１０ｐｐｍタンニン酸ＰＢＳ
（ｐＨ７．２）溶液２０ｍ１ｌを、３７℃、１０分間イ
ンキュベートする。生理食塩液で１回洗浄した後、ＰＢ
Ｓ（ｐＨ６．４）で全量２０ｍｌに浮遊する。原液に対
して８０倍に希釈したＴＰ抗原２０ｍｌとタンニン酸処
理血球ＰＢＳ（ｐＨ６．４）浮遊液２０ｍｌとを合わせ
３７℃で４０分間インキュベートする。この間、１０分
毎に静かに転倒かくはんする。１回健康家兎血清（ＮＲ
Ｓ）を含む生理食塩液で１回洗浄し、１％ＮＲｓを含む
ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で全量を１０ｍｌに浮遊する。５
ｍｌ容量のバイアル瓶に０．５ｍｌずつ分注し、凍結乾
燥した後、４℃に保存しておく。
ン固定羊赤血球２０ｍｌと１０ｐｐｍタンニン酸ＰＢＳ
（ｐＨ７．２）溶液２０ｍ１ｌを、３７℃、１０分間イ
ンキュベートする。生理食塩液で１回洗浄した後、ＰＢ
Ｓ（ｐＨ６．４）で全量２０ｍｌに浮遊する。原液に対
して８０倍に希釈したＴＰ抗原２０ｍｌとタンニン酸処
理血球ＰＢＳ（ｐＨ６．４）浮遊液２０ｍｌとを合わせ
３７℃で４０分間インキュベートする。この間、１０分
毎に静かに転倒かくはんする。１回健康家兎血清（ＮＲ
Ｓ）を含む生理食塩液で１回洗浄し、１％ＮＲｓを含む
ＰＢＳ（ｐＨ７．２）で全量を１０ｍｌに浮遊する。５
ｍｌ容量のバイアル瓶に０．５ｍｌずつ分注し、凍結乾
燥した後、４℃に保存しておく。
参考例３ 抗ヒト免疫グロブリン抗体感作血球の調製
参考例２と同様にタンニン酸処理した羊赤血球に抗ヒト
免疫グロブリンを感作する。
免疫グロブリンを感作する。
４００倍に希釈したウザギ抗ヒトＩｇＭ抗体（μ−ｃｈ
ａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｄａｋｏ）２０ｍｌとタン
ニン酸処理ＰＢＳ（ｐＨ６．４）羊赤血球浮遊液２０ｍ
ｌを合わせ、け下参考例２と同様に処理して、抗ヒトＩ
ｇＭ抗体感作血球の凍結乾燥品を得た。
ａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｄａｋｏ）２０ｍｌとタン
ニン酸処理ＰＢＳ（ｐＨ６．４）羊赤血球浮遊液２０ｍ
ｌを合わせ、け下参考例２と同様に処理して、抗ヒトＩ
ｇＭ抗体感作血球の凍結乾燥品を得た。
ウサギ抗ヒトＩｇＡ抗体（α−ｃｈａｉｎ ｓｐｅｃｉ
ｆｉｃ，Ｄａｋｏ）ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体（γ−ｃｈ
ａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｄａｋｏ）も同様に羊赤血
球に感作し、凍結乾燥品を得た。
ｆｉｃ，Ｄａｋｏ）ウサギ抗ヒトＩｇＧ抗体（γ−ｃｈ
ａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ，Ｄａｋｏ）も同様に羊赤血
球に感作し、凍結乾燥品を得た。
実施例１ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉ
ｏｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＰＩＡ）凍結乾燥して
おいた抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球（ＡＭ−ＲＢＣ）、抗
ヒトＩｇＡ抗体感作血球（ＡＡ−ＲＢＣ） 、抗ヒトＩ
ｇＧ抗体感作血球（ＡＧ−ＲＢＣ）およびＴＰ抗原感作
血球（ＴＰ−ＲＢＣ）にそれぞれ１ｍｌの蒸留水を加え
て復元しておく。
ｏｎ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＰＩＡ）凍結乾燥して
おいた抗ヒトＩｇＭ抗体感作血球（ＡＭ−ＲＢＣ）、抗
ヒトＩｇＡ抗体感作血球（ＡＡ−ＲＢＣ） 、抗ヒトＩ
ｇＧ抗体感作血球（ＡＧ−ＲＢＣ）およびＴＰ抗原感作
血球（ＴＰ−ＲＢＣ）にそれぞれ１ｍｌの蒸留水を加え
て復元しておく。
被検血清５μｌを、Ｕ字型マイクロトレーのウェルＮｏ
１（左端）にとる。血清希釈用液（富士レビオ（株）製
ＴＰＨＡキット中のＡｂｓｏｒｂｉｎｇ ｄｉｌｕｅｎ
ｔ、Ｂ液）５０μｌをウェルＮｏ１（左端）にとった後
、ウウェルＮｏ２からエンド（右端）まで各２５μｌず
つ滴下する。本例で用いた組成は以下の通りである。
１（左端）にとる。血清希釈用液（富士レビオ（株）製
ＴＰＨＡキット中のＡｂｓｏｒｂｉｎｇ ｄｉｌｕｅｎ
ｔ、Ｂ液）５０μｌをウェルＮｏ１（左端）にとった後
、ウウェルＮｏ２からエンド（右端）まで各２５μｌず
つ滴下する。本例で用いた組成は以下の通りである。
下表において未感作羊赤血球を「ＲＢＣ」と略す。
ダイリューターでウェルＮｏ１からエンドまで倍倍希釈
を行なう。先に復元した抗ヒトＩｇＭ抗体感作血珠（Ａ
Ｍ−ＲＢＣ）液に７ｍｌずつの血清希釈用液（Ｂ液）を
加えたもの（２．５％血球浮遊液の８倍希釈相当）をウ
ェルＮｏ３からエンドまで２５μｌずつ滴下する。ウェ
ルＮｏ２には未感作血球液２５μｌを加えておく。
を行なう。先に復元した抗ヒトＩｇＭ抗体感作血珠（Ａ
Ｍ−ＲＢＣ）液に７ｍｌずつの血清希釈用液（Ｂ液）を
加えたもの（２．５％血球浮遊液の８倍希釈相当）をウ
ェルＮｏ３からエンドまで２５μｌずつ滴下する。ウェ
ルＮｏ２には未感作血球液２５μｌを加えておく。
トレーに振動を与えることによってウェル内の液をよく
混合し、トレー表面にフタをして、３７℃のフラン器内
で１５分間インキュベートした後、室温に戻し、２，０
００ｒｐｍ（６００×ｇ）で５分間遠心した後、上澄を
アスピレータ−で吸引する。
混合し、トレー表面にフタをして、３７℃のフラン器内
で１５分間インキュベートした後、室温に戻し、２，０
００ｒｐｍ（６００×ｇ）で５分間遠心した後、上澄を
アスピレータ−で吸引する。
各ウェルに生理食塩液を２５μｌずつ加え、トレーを振
動させてウェル内の血球を懸濁した後、再び２．０００
ｒｐｍ（６００Ｘ９）で５分間遠心し、上澄をアスピレ
ータ−で吸引する。
動させてウェル内の血球を懸濁した後、再び２．０００
ｒｐｍ（６００Ｘ９）で５分間遠心し、上澄をアスピレ
ータ−で吸引する。
各ウェルにＢ液を２５μｌずつ加えトレーを振動させて
、血球を懸濁した後、ＴＰ抗原感作血球液（ＴＰ−ＲＢ
Ｃ）をウェルＮｏ３からエンドまで２５μｌずつ加え、
ウェルＮｏ２には未感作血球を２５μｌ加えてウェル内
をよくかくはんした後、室温に静置し、２時間後または
翌日判定した。抗体価（８０倍）以上を陽性とした。
、血球を懸濁した後、ＴＰ抗原感作血球液（ＴＰ−ＲＢ
Ｃ）をウェルＮｏ３からエンドまで２５μｌずつ加え、
ウェルＮｏ２には未感作血球を２５μｌ加えてウェル内
をよくかくはんした後、室温に静置し、２時間後または
翌日判定した。抗体価（８０倍）以上を陽性とした。
抗ヒトＩｇＡ抗体感作血球（ＡＡ−ＲＢＣ）、抗ヒトＩ
ｇＧ抗体感作血球（ＡＧ−ＲＢＣ）を用いるＰＩＡも上
記と同様に行った。
ｇＧ抗体感作血球（ＡＧ−ＲＢＣ）を用いるＰＩＡも上
記と同様に行った。
実施例２
ＡＭ−ＲＢＣとＴＰ −ＲＢＣを用い、初期梅毒患者血
清（Ｎｏ４）および晩期梅毒患者血清（Ｎｏ４）につい
てＰＩＡによるＴＰ−ＩｇＭの測定を行った。
清（Ｎｏ４）および晩期梅毒患者血清（Ｎｏ４）につい
てＰＩＡによるＴＰ−ＩｇＭの測定を行った。
ＲＰＰＡ反応とＰＰＡ反応の中間における生理食塩液に
よる洗浄は１回又は２回とし、その他は実施例１と同様
に行った。結果を以下に示す。洗浄による抗体価の低下
は見られない。
よる洗浄は１回又は２回とし、その他は実施例１と同様
に行った。結果を以下に示す。洗浄による抗体価の低下
は見られない。
実施例３
ＰＩＡにおけるＲＰＰＡ反応とＰＰＡ反応の順序を変え
て実施例２と同じ血清について測定を行った。すなわち
被検血清にまずＴＰ−ＲＢＣを加えて反応させ、生理食
塩液による洗浄後ＡＭ−ＲＢＣを反応させた。
て実施例２と同じ血清について測定を行った。すなわち
被検血清にまずＴＰ−ＲＢＣを加えて反応させ、生理食
塩液による洗浄後ＡＭ−ＲＢＣを反応させた。
ＴＰ−ＲＢＣとＡＭ−ＲＢＣを加える順序を実施例２と
逆にした他は実施例２と同様に測定を行った。結果を以
下に示す。
逆にした他は実施例２と同様に測定を行った。結果を以
下に示す。
本例の術式では生理食塩液による洗浄を２回以上行うと
ＴＰ−ＩｇＧによるｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅは避
けられる。
ＴＰ−ＩｇＧによるｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅは避
けられる。
Claims (1)
- 抗免疫グロブリン抗体を感作した担体が対応する免疫グ
ロプリンの存在によって反応する段階および梅毒抗原を
感作した担体が対応する梅毒抗体の存在によって反応す
る段階を含むことを特徴とする梅毒抗体の測定方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57121244A JPS5931453A (ja) | 1982-07-14 | 1982-07-14 | 梅毒抗体の測定方法 |
| EP83303601A EP0101166B1 (en) | 1982-07-14 | 1983-06-22 | Method of measuring infectious disease antibodies |
| DE8383303601T DE3373214D1 (en) | 1982-07-14 | 1983-06-22 | Method of measuring infectious disease antibodies |
| US06/833,666 US4716108A (en) | 1982-07-14 | 1986-02-24 | Assaying anti-TP IgM antibodies for syphilis diagnosis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57121244A JPS5931453A (ja) | 1982-07-14 | 1982-07-14 | 梅毒抗体の測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5931453A true JPS5931453A (ja) | 1984-02-20 |
| JPH0239746B2 JPH0239746B2 (ja) | 1990-09-06 |
Family
ID=14806461
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57121244A Granted JPS5931453A (ja) | 1982-07-14 | 1982-07-14 | 梅毒抗体の測定方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4716108A (ja) |
| EP (1) | EP0101166B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5931453A (ja) |
| DE (1) | DE3373214D1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6270764A (ja) * | 1985-03-08 | 1987-04-01 | Sanko Junyaku Kk | 血清中の免疫抗体測定方法 |
| JPH0259667A (ja) * | 1988-08-25 | 1990-02-28 | Mitsumasa Furuya | 酵素抗体法を利用した梅毒抗体検査法 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6044870A (ja) * | 1983-08-22 | 1985-03-11 | Fujirebio Inc | 成人ｔ細胞白血病ウイルス抗体検出用試薬 |
| DE3662730D1 (en) * | 1985-01-24 | 1989-05-11 | Inst Int Pathologie Cellulaire | Immunoassay method for antibodies of different classes in a liquid sample |
| FR2577048B1 (fr) * | 1985-02-05 | 1988-05-06 | Pasteur Institut | Reactif pour le dosage par hemagglutination des anticorps contre les toxines bacteriennes, procede de preparation et son application |
| IT1214642B (it) * | 1985-11-21 | 1990-01-18 | Technogenetics Spa | Procedimento migliorato per la diagnosi in laboratorio di infezioni in particolare d avirushtlv iii. |
| FR2595826B1 (fr) * | 1986-03-13 | 1990-09-07 | Lurhuma Zirimwabagabo | Produit d'immuno-essai, son procede de preparation, son utilisation, complexe immunogene le comportant et utilisation de ce complexe |
| US4863869A (en) * | 1986-11-21 | 1989-09-05 | Imre Cororation | Anti-human IGM immunoadsorbent and process for producing said immunoadsorbent |
| GB8707839D0 (en) * | 1987-04-02 | 1987-05-07 | Secr Social Service Brit | Immunoglobulin assay method |
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