JPS5943361A - ビタミンｋ依存性骨タンパク質用部位−特異（特殊）測定 - Google Patents
ビタミンｋ依存性骨タンパク質用部位−特異（特殊）測定Info
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- JPS5943361A JPS5943361A JP58091634A JP9163483A JPS5943361A JP S5943361 A JPS5943361 A JP S5943361A JP 58091634 A JP58091634 A JP 58091634A JP 9163483 A JP9163483 A JP 9163483A JP S5943361 A JPS5943361 A JP S5943361A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
１）発明の分野
以下に骨Ｇｔａタンパク質（ ＢＧＰ ）土／ξはｒ−
カルｌＦキ／グルタミン酸を１′むタンノヤク点とし゛
℃蚕照するビタミンに依存性・けタンパク賀に関しで、
増加しつつある知見がわり、感度の良い、ｑ！ｆ異１−
１ミが増加した分析が要求される。すなわち抗体が用い
られる場合、興味あるタンノＲりＪＪｉｋＣ特異的であ
る抗体および興味必あタン・Ｐり貞および−ごの部位、
および他のタンパク質問の実質的に異／Ｉ：イ）結合荘
和力をもつ、特に限定されたタン・−？り翼領域が必要
である。結合親７十目力か大であ７Ｌば、あるほど、す
べでの池の物が同一であるとき、分析のＩ鰭吸は高くな
る。
カルｌＦキ／グルタミン酸を１′むタンノヤク点とし゛
℃蚕照するビタミンに依存性・けタンパク賀に関しで、
増加しつつある知見がわり、感度の良い、ｑ！ｆ異１−
１ミが増加した分析が要求される。すなわち抗体が用い
られる場合、興味あるタンノＲりＪＪｉｋＣ特異的であ
る抗体および興味必あタン・Ｐり貞および−ごの部位、
および他のタンパク質問の実質的に異／Ｉ：イ）結合荘
和力をもつ、特に限定されたタン・−？り翼領域が必要
である。結合親７十目力か大であ７Ｌば、あるほど、す
べでの池の物が同一であるとき、分析のＩ鰭吸は高くな
る。
２）従来技術
ノ０ライスらによって、文献の要約が米国′げおよびミ
ネラル研究学会１９７９年６月に報告された。プライス
およびニジモト、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
ネラル研究学会１９７９年６月に報告された。プライス
およびニジモト、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ。
Ｓｅｔ、 ＵＳＡ ７７巻：２２３４−２２３８ペ−ノ
（Ｊ ９８１ ）およびプ′ライスリ１１．Ｊ、Ｃｌ１
ｎ、 Ｉｎｖｅｓｔ、 ６６ 巻：８７８−８８３ペ−
ノ（１９８０）は、熱湯ＢＧＰ分子から誘導された標識
および抗体を・利用するラジオイムノアッセイを１己載
している。デ、ノトスらは０、（Ｃａ１ｃｉｆ、Ｔｉ５
ｓｕｅ Ｉｎｔ、、；３４巻：１２１−１２４ベーノ
（１９８２，））、骨疾患の治原中、ＢＧＰにおける変
化の臨床的＋＋ｉｌｌ定につい一〇報告し−Ｃいる。前
述の参巧文献において、引用した文献にも注目すべきで
ある。共同（１目互）係属中の出願ｊｌ旧７番号２４６
，９７２は、ＨＧＰに対するイムノアッセイにおける試
薬としで２少なくても２０アミノ酸のＢＧＰの断片の使
用を示１反する。
（Ｊ ９８１ ）およびプ′ライスリ１１．Ｊ、Ｃｌ１
ｎ、 Ｉｎｖｅｓｔ、 ６６ 巻：８７８−８８３ペ−
ノ（１９８０）は、熱湯ＢＧＰ分子から誘導された標識
および抗体を・利用するラジオイムノアッセイを１己載
している。デ、ノトスらは０、（Ｃａ１ｃｉｆ、Ｔｉ５
ｓｕｅ Ｉｎｔ、、；３４巻：１２１−１２４ベーノ
（１９８２，））、骨疾患の治原中、ＢＧＰにおける変
化の臨床的＋＋ｉｌｌ定につい一〇報告し−Ｃいる。前
述の参巧文献において、引用した文献にも注目すべきで
ある。共同（１目互）係属中の出願ｊｌ旧７番号２４６
，９７２は、ＨＧＰに対するイムノアッセイにおける試
薬としで２少なくても２０アミノ酸のＢＧＰの断片の使
用を示１反する。
発明の要約
提供された小さいオリゴ−ぐノチドは、ＢＧＰ ｉ’Ｃ
ｋ’Ｊして重度に特異抗体の調製用バッテンとして用い
ることができる。特に、オリゴベグチドなよ、約１０１
６’アミノ醒からなり、天然に起こるＢＧＰのような実
質的に同じアミンはもしくは同じアミノ酸配列金もつ。
ｋ’Ｊして重度に特異抗体の調製用バッテンとして用い
ることができる。特に、オリゴベグチドなよ、約１０１
６’アミノ醒からなり、天然に起こるＢＧＰのような実
質的に同じアミンはもしくは同じアミノ酸配列金もつ。
それらは、抗体調製の／こめに用いられ、感良の良いイ
ムノアッセイｅＣおいて、標識化試薬として用いし扛る
。
ムノアッセイｅＣおいて、標識化試薬として用いし扛る
。
特別な実力出側の説明
新規メリゴペグチドは、生理学的液、特に血液における
骨Ｇｔａ夕ンりぞり質の検出（前にビタミン■（依存性
タン・七り質としてｄ己載孕〕した、１３ＧＰ ）につ
いての試薬の調製および試薬としての使用に提供きれる
。
骨Ｇｔａ夕ンりぞり質の検出（前にビタミン■（依存性
タン・七り質としてｄ己載孕〕した、１３ＧＰ ）につ
いての試薬の調製および試薬としての使用に提供きれる
。
８Ｇ））の市血液レベルは、篩骨転換によ−）−Ｃ特徴
づけられる疾患金示しうる。従って、皿ｇ Ｋ Ｌ−け
るＢＧＰの量およびＪＩＪ］間中ＢＧＰの濃度変化、特
に骨疾患に対する治僚ＡｉＪおよび後、全検出でき４）
ように、定−４１的方法でＢＧＰ ’ｉ検出すること？
＜ ｉｊＪ能にせしめるのはＵ（要である。
づけられる疾患金示しうる。従って、皿ｇ Ｋ Ｌ−け
るＢＧＰの量およびＪＩＪ］間中ＢＧＰの濃度変化、特
に骨疾患に対する治僚ＡｉＪおよび後、全検出でき４）
ように、定−４１的方法でＢＧＰ ’ｉ検出すること？
＜ ｉｊＪ能にせしめるのはＵ（要である。
この発明の化合物ケよ、ＢＧＰの域として実質的に同じ
または同じアミノ酸配列盆もつオリゴベン０チドである
。ＢＧＰの部分にのみ良く似でいるオリゴ波ノチドを得
ることによって、抗体か得られ、ＢＧＰおよび父差−反
応性に似ておυその域、に非常にｌ侍異的であり、高い
結合）月１１０ケ提供する。
または同じアミノ酸配列盆もつオリゴベン０チドである
。ＢＧＰの部分にのみ良く似でいるオリゴ波ノチドを得
ることによって、抗体か得られ、ＢＧＰおよび父差−反
応性に似ておυその域、に非常にｌ侍異的であり、高い
結合）月１１０ケ提供する。
参考ｌ」的のために、ヒトＢＧＰ （ｈＢＧＰ ）の構
造を示す、なせならオリｊ′ベノチドは、この分子の断
・き 片に引用される。次に１３ＵＰのアミノ１披配列を示−
す 。
造を示す、なせならオリｊ′ベノチドは、この分子の断
・き 片に引用される。次に１３ＵＰのアミノ１披配列を示−
す 。
Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｇ／＝ｎ Ｔｒｊ Ｌｅｕ
Ｇ／ｉｙ Ａｔａ Ｐｒ。
Ｇ／ｉｙ Ａｔａ Ｐｒ。
０
Ｖａ／Ｓ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ｇｔｕ Ｐｒ。
Ｌｅｕ Ｇｔｕ Ｐｒ。
Ａｒｇ Ａｒｇ ＧｔａＶａＡ Ｃｙｓ ＧＡａ Ｌｅ
ｕ Ａｓｎ Ｐｒ。
ｕ Ａｓｎ Ｐｒ。
Ｔｙｒ ＧＩＪ Ｐｒｏ Ｖａｔ
大部分、１丈用に見られるオリゴペグチドは、アミノｒ
俊１０１固から１６１向であり、もつと通常では、アミ
ノ酸１０個から１５個でｆりり、好ましくは約１２４固
から１５１固のアミノ酸である。それらの断片をつない
だオリゴペゾチド全用いることが窒ましいのであるが、
配列は５通常アミノ酸析片１−１５；１５−３０；およ
び３５−４９内にある。
俊１０１固から１６１向であり、もつと通常では、アミ
ノ酸１０個から１５個でｆりり、好ましくは約１２４固
から１５１固のアミノ酸である。それらの断片をつない
だオリゴペゾチド全用いることが窒ましいのであるが、
配列は５通常アミノ酸析片１−１５；１５−３０；およ
び３５−４９内にある。
大部分、オリゴペノチドは、ｈＢＧＰの同一なアミノ酸
配列をもち、しかし特別な状況では、１つもしくはそれ
以上のアミノ酸が置換される。／ｉ−、とえば、芳香族
アミノ酸が変化させられ、すｌわらチロシンがフェニル
アラニンにより−Ｃまたはその逆で、置換される。グル
タミン酸もｒ−カル４？・■シグルタミン酸で置換され
うる。１つのアミノ酸は、オリゴベン０チドの性質金変
えるために異なったアミノ酸によって置換されうる。た
とえは、チロシンは、酸化感受性または、特別な連結グ
ループ、特に活性なアゾ作用性（官能性）をもつグルー
プ、との接合全促進するための逆置侯金減少するために
ノエニルアラニンによって置換さ７’Ｌる。
配列をもち、しかし特別な状況では、１つもしくはそれ
以上のアミノ酸が置換される。／ｉ−、とえば、芳香族
アミノ酸が変化させられ、すｌわらチロシンがフェニル
アラニンにより−Ｃまたはその逆で、置換される。グル
タミン酸もｒ−カル４？・■シグルタミン酸で置換され
うる。１つのアミノ酸は、オリゴベン０チドの性質金変
えるために異なったアミノ酸によって置換されうる。た
とえは、チロシンは、酸化感受性または、特別な連結グ
ループ、特に活性なアゾ作用性（官能性）をもつグルー
プ、との接合全促進するための逆置侯金減少するために
ノエニルアラニンによって置換さ７’Ｌる。
特に興味のあるのは、５個のオリゴベノチドｈＢＧＰ”
’せは １２ ； ｂ ＢＧＰ １５または１６−３０
およびｈＢＧＰ５７−４９であり、最後のメリコ゛ベ
ア°チドは、勃に興味がある。
’せは １２ ； ｂ ＢＧＰ １５または１６−３０
およびｈＢＧＰ５７−４９であり、最後のメリコ゛ベ
ア°チドは、勃に興味がある。
不発明の第１，１ ：Ｉ″ベグチド、合成、メリフィー
ルド法を用いること、手動でま／ζは市販で手に入る器
械のようないろいろの方法で、合成される。
ルド法を用いること、手動でま／ζは市販で手に入る器
械のようないろいろの方法で、合成される。
調製されるオリゴ−２′：ｆチドの方法は、本発明に重
大ではなく、とのよりな好都合な方法を用いてもよい。
大ではなく、とのよりな好都合な方法を用いてもよい。
オリゴペノチドの目的に１へイ子し−し、４１１司まで
のアミノ酸ｅよ、通常３以上で・ｒくしかし１以上でな
く変化させられ、ノエニルアラニンより他のチロジノに
または反対に、−またはｒ−カル＋ｌ？ギシハについて
のグルタミン酸に変化する。二つの同４きりの構造の芳
Ｈ族アミノ酸は、置換され、そし°ｆいくつかの例では
、ｔｒｊ換は全体的に異なるアミノ酸が７ｚよノＬうる
。実例となる変更にｔ、１、（、Ｔｙｒ ）ｈＢＧＰ
１５−３０、（Ｐｈｅ ’ −３） ｈＢＧＰ ’−１
２＋および（Ｔｙｒ３７ 。
のアミノ酸ｅよ、通常３以上で・ｒくしかし１以上でな
く変化させられ、ノエニルアラニンより他のチロジノに
または反対に、−またはｒ−カル＋ｌ？ギシハについて
のグルタミン酸に変化する。二つの同４きりの構造の芳
Ｈ族アミノ酸は、置換され、そし°ｆいくつかの例では
、ｔｒｊ換は全体的に異なるアミノ酸が７ｚよノＬうる
。実例となる変更にｔ、１、（、Ｔｙｒ ）ｈＢＧＰ
１５−３０、（Ｐｈｅ ’ −３） ｈＢＧＰ ’−１
２＋および（Ｔｙｒ３７ 。
Ｐ ｈ ｅ ４２”６） ｈ Ｂ（ＪＰ ｒおよび
（、Ｔｙｒ １５．Ｇｌｕ２１１２’ ）７−４９ ＩＩＢ（ｚＰ が含まれる。
（、Ｔｙｒ １５．Ｇｌｕ２１１２’ ）７−４９ ＩＩＢ（ｚＰ が含まれる。
なぜならば、本発明のオＩＪ ｊ’ペグチドは、天然に
存在するタン・ゼク質よりも非常に小さく、容易に合成
方法によって合成される。このようにし−７Ｔ、非常に
尚状景の生成物が得られ、生理学的液体におけるＢＧＰ
を測定するだめの方法の展開でバッテンとして用いられ
る。更に、鎖における１つもしくはそれ以上のアミノ酸
は、置換さ）′１５、望ましいエビトーゾ位特異性は、
保たれ、−万オリコ゛ベゾチドは、安定性、接合の容易
、父系反応性における減少および類似物のような変化し
た性質全提供する。
存在するタン・ゼク質よりも非常に小さく、容易に合成
方法によって合成される。このようにし−７Ｔ、非常に
尚状景の生成物が得られ、生理学的液体におけるＢＧＰ
を測定するだめの方法の展開でバッテンとして用いられ
る。更に、鎖における１つもしくはそれ以上のアミノ酸
は、置換さ）′１５、望ましいエビトーゾ位特異性は、
保たれ、−万オリコ゛ベゾチドは、安定性、接合の容易
、父系反応性における減少および類似物のような変化し
た性質全提供する。
本発明のオリゴペゾチド（よハフ０テンとしての使用が
見られる。ハシテンは、抗体の産生のための接合を提供
する免疫原と接合しつるかニー１：たｄ、／・ブテンは
、適当な標識で標識され、ＢＧＰに対する分析における
ハシテンの分析の検出’ｔｉｒ能（′こせしめる。
見られる。ハシテンは、抗体の産生のための接合を提供
する免疫原と接合しつるかニー１：たｄ、／・ブテンは
、適当な標識で標識され、ＢＧＰに対する分析における
ハシテンの分析の検出’ｔｉｒ能（′こせしめる。
免投涼皮合体金調製するにおいで、広範囲にわグζる方
法が用いられる。免疫原およびオリコ゛ペノ。
法が用いられる。免疫原およびオリコ゛ペノ。
ルブルγヒトの工′）ｌ携化嗜失試楽を用いる。１Ｌ意
にもっと特異な連結基として、カルボギシペンビンノア
ゾスルノオネート、ノぐラーマレイミド安、け杏酸、ま
たＱ」、池の１ｙ表例上連結基のようなものが用いられ
る。
にもっと特異な連結基として、カルボギシペンビンノア
ゾスルノオネート、ノぐラーマレイミド安、け杏酸、ま
たＱ」、池の１ｙ表例上連結基のようなものが用いられ
る。
１１ケ別な免疫ノち−と同じく免役ハ、（、に接合する
オリゴペノチドの特別な方法は、不発明にとって本些で
ない。いろいろの慣例的免疫原が用いられ、免疫原は、
注入された特別のポストに依存する。ありふれている免
疫原としでは、牛血清アルブミン、牛刀゛ンマグ１」プ
リン、ウサギ皿（ｆｉアルブミン、キ、イホールリンペ
ソトヘモシアニンなどが；キまれる。
オリゴペノチドの特別な方法は、不発明にとって本些で
ない。いろいろの慣例的免疫原が用いられ、免疫原は、
注入された特別のポストに依存する。ありふれている免
疫原としでは、牛血清アルブミン、牛刀゛ンマグ１」プ
リン、ウサギ皿（ｆｉアルブミン、キ、イホールリンペ
ソトヘモシアニンなどが；キまれる。
望椋しいポリクロナルもＬ＜はモノクロナルのいずｉＬ
かに１ぺ存して、異なるポストが注入される。
かに１ぺ存して、異なるポストが注入される。
モノクロツール抗体の調製のために、乙（ケに米国Ｑヶ
訂ｌｆｉ号４，１９６，２６５および４，１７２，１２
４ ：コーラーおよびミ／ｌ／スタイン、Ｎａｔｕｒｅ
（１９７５）、３６５巻： ４９５−４９７ページお
上ひクネット編央、”モノクロナル抗体−ノ・イブリド
ーマ：生物学的分析におけるやｆしい安素、ノ°レナム
ノ°レスＮ、Ｙ、１９８０全参照する。
訂ｌｆｉ号４，１９６，２６５および４，１７２，１２
４ ：コーラーおよびミ／ｌ／スタイン、Ｎａｔｕｒｅ
（１９７５）、３６５巻： ４９５−４９７ページお
上ひクネット編央、”モノクロナル抗体−ノ・イブリド
ーマ：生物学的分析におけるやｆしい安素、ノ°レナム
ノ°レスＮ、Ｙ、１９８０全参照する。
抗体に関連して、標識化バッテンは、イムノアラ（ζイ
に用いられる。広範囲にわたる標識として、放射能核種
酵素、螢光体、磁気粒子、安定な遊翻ラジカル、化学ル
ミネッセンス体などが用い１りれる。実例の標識には、
＋２５Ｉ 、 ３ｋｌ ＋ノルオレセイン。
に用いられる。広範囲にわたる標識として、放射能核種
酵素、螢光体、磁気粒子、安定な遊翻ラジカル、化学ル
ミネッセンス体などが用い１りれる。実例の標識には、
＋２５Ｉ 、 ３ｋｌ ＋ノルオレセイン。
ダンシル、ロダミン、アクリノン、ポースラデッシーパ
ーオキシダーゼ、アミラーゼ、−）イソヂイム、グルコ
ースー６−ホスフェ洋−トデヒ１″Ｉコダナーセ゛、β
−ガンクトシダーゼ、などが含ま７１．る。
ーオキシダーゼ、アミラーゼ、−）イソヂイム、グルコ
ースー６−ホスフェ洋−トデヒ１″Ｉコダナーセ゛、β
−ガンクトシダーゼ、などが含ま７１．る。
これ１りのいろいろの標ｍ１ｉｌ！に用いる方法は、米
国特許４刀、Ｒｅ２９．１６９ ； Ｒｅ ２９．９
５５ ；３．６５４，０９０ ；３，６９０，８３４
；：３，８１／、８３７；３．８６７．５１７ ：３，
９３５，０７４ ；３，９７５，５１１；３．９９６，
３４５；および４，０２０，１５１．に見しれる。これ
らの参照は、特ｄ「文献において報告されたイムノアッ
セイの広範囲の多様性の例証のみである。
国特許４刀、Ｒｅ２９．１６９ ； Ｒｅ ２９．９
５５ ；３．６５４，０９０ ；３，６９０，８３４
；：３，８１／、８３７；３．８６７．５１７ ：３，
９３５，０７４ ；３，９７５，５１１；３．９９６，
３４５；および４，０２０，１５１．に見しれる。これ
らの参照は、特ｄ「文献において報告されたイムノアッ
セイの広範囲の多様性の例証のみである。
いろいろの標識への接合の方法は、局別の標識の性質に
依存する。いくつかの例においで、λジ−１フ″ペプチ
ドまたは標識のどちらかが他のものと反応するため（・
こ、活性化するように、標識は、却７作用性である。他
の例においで、オリゴ゛にプチドを活性化するにもっと
好％ＶＳ合であるように、憚繊は４（作用性、たとえは
酵素である。これしの１０の多くによ・・いて先にｉ己
述したように、特殊化試薬を用いることが望ましい。放
射性核柚を連鯉目−るためζ′（、チロシン（ｆ」、放
射活性ヨー化物のようｌヨー化剤およびラクト・Ｐ−オ
キシダービ？用いて標識化される。
依存する。いくつかの例においで、λジ−１フ″ペプチ
ドまたは標識のどちらかが他のものと反応するため（・
こ、活性化するように、標識は、却７作用性である。他
の例においで、オリゴ゛にプチドを活性化するにもっと
好％ＶＳ合であるように、憚繊は４（作用性、たとえは
酵素である。これしの１０の多くによ・・いて先にｉ己
述したように、特殊化試薬を用いることが望ましい。放
射性核柚を連鯉目−るためζ′（、チロシン（ｆ」、放
射活性ヨー化物のようｌヨー化剤およびラクト・Ｐ−オ
キシダービ？用いて標識化される。
標８ｉ＆の性質に１へ存する既り、１」の方法に基づい
て、分析は行なわれる。いろいろの方法は、係、ｉ哉化
オリゴ−（ノチドと１３ＧＰが測定括れく試料における
机−ＢＧＰｋ（ｉ結合するための１３ＧＰ分析物との間
の競争が含まれる。ＢＧＰが分析され９４１興味めるい
ろいろ生理学的液体にＱよ、皿清、皿泉、尿、ＪＩｔ４
付髄液、羊水および唾液がｉ−ま！しる。ＡｉＪ述の生
物＃’ ［ｊ’Ｊ Ｖｌｉ Ｐこ那えて、抽出欣、符に
骨、１；ｉｔｌ 、ｓよび病理学的石灰化（変位石灰化
または動脈硬化９のようなヒト組１、ｌ＆からの岐ゴ由
出′１勿もＳ味める。
て、分析は行なわれる。いろいろの方法は、係、ｉ哉化
オリゴ−（ノチドと１３ＧＰが測定括れく試料における
机−ＢＧＰｋ（ｉ結合するための１３ＧＰ分析物との間
の競争が含まれる。ＢＧＰが分析され９４１興味めるい
ろいろ生理学的液体にＱよ、皿清、皿泉、尿、ＪＩｔ４
付髄液、羊水および唾液がｉ−ま！しる。ＡｉＪ述の生
物＃’ ［ｊ’Ｊ Ｖｌｉ Ｐこ那えて、抽出欣、符に
骨、１；ｉｔｌ 、ｓよび病理学的石灰化（変位石灰化
または動脈硬化９のようなヒト組１、ｌ＆からの岐ゴ由
出′１勿もＳ味める。
分析を実施する揚汀、分伯物憚ｉＲに化オリゴペノベプ
チド）を含む試料を、水性緩伺化媒質、辿常はＣ」の範
囲約６〜９で、いりしょにし、測定される分析媒質と抗
体との間に標識化オリゴペグナトの分配化金させる。
チド）を含む試料を、水性緩伺化媒質、辿常はＣ」の範
囲約６〜９で、いりしょにし、測定される分析媒質と抗
体との間に標識化オリゴペグナトの分配化金させる。
分析ゾロトコール↓・よび試薬の性質に１コＸ存して、
分離（”異質＃）′ｉたは非分鴨）シ（”回置″）段階
が含まれる。相違は、標識化試薬への抗体Ｑ）結合が試
薬から得し扛たシグナルに影響するかどうかに依存する
。たとえば、放射性核イ追は、粘合と未結合標識との分
別を必要とし、一方螢元標識は、分別段階を必要とする
かもしくは必要としない。
分離（”異質＃）′ｉたは非分鴨）シ（”回置″）段階
が含まれる。相違は、標識化試薬への抗体Ｑ）結合が試
薬から得し扛たシグナルに影響するかどうかに依存する
。たとえば、放射性核イ追は、粘合と未結合標識との分
別を必要とし、一方螢元標識は、分別段階を必要とする
かもしくは必要としない。
分析を実施するに、化付物の研加のｊ県庁Ｑよ、異なｐ
うる。すべての物質を同時にいっしょＶ（−するかまた
は試料′？ｒ：まず初めに抗−オリゴベグチト°と結合
させ、次いで標識化メリゴー支グチドを力日える。
うる。すべての物質を同時にいっしょＶ（−するかまた
は試料′？ｒ：まず初めに抗−オリゴベグチト°と結合
させ、次いで標識化メリゴー支グチドを力日える。
培養段階は、いろいろの姫加間に含まれ１．ｊｆ！當は
５分間より少なくなく約７日間以上であることはない。
５分間より少なくなく約７日間以上であることはない。
４．−ま足は平衡測定のどらしかがＳま７Ｌうる。
試料および試薬全結合δせた後、標識化オリゴ′くゾチ
ドに結合した抗−オリコ゛ペノチドは、未結合標識化オ
リコ″ペプチドから分離し、異質（不均一）分析が含ま
れ、シグナルは標識の性質にもとづいて標識から測定さ
れる。分別が要求さオｔない）場合、シグナルは分析媒
質から直接に測定される。
ドに結合した抗−オリコ゛ペノチドは、未結合標識化オ
リコ″ペプチドから分離し、異質（不均一）分析が含ま
れ、シグナルは標識の性質にもとづいて標識から測定さ
れる。分別が要求さオｔない）場合、シグナルは分析媒
質から直接に測定される。
測定さ扛る放射線に１ぺ存しで、ガンマカウンター、シ
ンチレーションカウンター、分光測定器、螢光測定器ま
たｔ、１類似物が用いられる。
ンチレーションカウンター、分光測定器、螢光測定器ま
たｔ、１類似物が用いられる。
７ＸＶこ′４Ｉ：施例は、本発明を例示１〜でおυ、本
発明ｋ ’＋ｔｆｌＪ限するものではない。
発明ｋ ’＋ｔｆｌＪ限するものではない。
実験
■趨すゴベグＴドの調製
本発明の１３アミノ醒オ呻゛ペノチｒは、ノ々ラニイお
よびメリフィールドに１尼載された同体４目方法（″ペ
ゾチド、分析、合成、生物学”における固体用−くグチ
ド合成、ペグ０チド合成６ｃおける特別な方ｌ去、・＃
−トＡ、２巻、グ（］スおよびメレンｊ−−ツアー編集
、アカテミ、クフ０レス、ニューヨーク、１９８０．１
−２８４ページ）を用いて合成する。
よびメリフィールドに１尼載された同体４目方法（″ペ
ゾチド、分析、合成、生物学”における固体用−くグチ
ド合成、ペグ０チド合成６ｃおける特別な方ｌ去、・＃
−トＡ、２巻、グ（］スおよびメレンｊ−−ツアー編集
、アカテミ、クフ０レス、ニューヨーク、１９８０．１
−２８４ページ）を用いて合成する。
２、オリゴペゾチドに対する抗体の肖製７−４９
オリゴ−（！ゾチドｈＢＧＰ （１，５ＤＩ（ｉ
）は、室温で、ｌ−エチルツメチル−アミノゾロピルカ
ルｓｒノイミド（２５０μ９）の２添加を用いて、リン
酸緩悔化塩化ナトリウムにおいてキイホールリンペット
ヘモシアニン（１，８ｍｙ ）と接合させる。２４時間
後、物質を水に対して透析する。ウサギは不完全フロイ
ンドアツユパントにおける精製した免疫原（５０μｇ）
の毎月の多位皮内注射によっで免疫化する。抗体は中心
耳動脈から採血した血欣試料から得られる。
）は、室温で、ｌ−エチルツメチル−アミノゾロピルカ
ルｓｒノイミド（２５０μ９）の２添加を用いて、リン
酸緩悔化塩化ナトリウムにおいてキイホールリンペット
ヘモシアニン（１，８ｍｙ ）と接合させる。２４時間
後、物質を水に対して透析する。ウサギは不完全フロイ
ンドアツユパントにおける精製した免疫原（５０μｇ）
の毎月の多位皮内注射によっで免疫化する。抗体は中心
耳動脈から採血した血欣試料から得られる。
３、放射標識化オリゴペグチドの調製
オリゴペグチドｈＢＧＰ”” （０，５μ／１ ） ’
５ ｚβ−Ｄ−グルコース（２μｍｏｌｅ ）およびグ
ルコースオキシダーゼ（０−６４ｎｇ： ｌ ２５ （
ＪＡ＋２ ）の存ず１−ドにラクトパーオキシダーゼ（
２μｙ）によってＮａ１（１ｍＣ１１２５Ｉ ） ｆ：
用いて０．０５ＭリンｔｌｄｆＩＩＩＩ液でヨウパ化す
る。混合物を室温で１５分間数１１１ｆ麦、至黛全１ｍ
ｌに希釈し、トリクロロ酢敵（６−ポ蚕却および燐タン
グステン酸（０，２５重置チ）においてテトクローノ、
Ｃ（Ｉ＋）（ｌμｙ）とともに共沈させる。ペンット金
抗伊し、０．５Ｍ水酸化ナトリウム（Ｉ Ｏ−２０μｌ
）で中１生化によってｆＩｊ、浴屏し、タングステンば
塩ｋ ０．５ Ｍノエチレントリプミ／の１芥縫と配位
によっで複汗化する。標識化ペノ°チドの至比ｌ古１’
ＪｇｒＪ、５００ Ｃ１／ｙｎ ｒｎｏｌｅ以上である
。
５ ｚβ−Ｄ−グルコース（２μｍｏｌｅ ）およびグ
ルコースオキシダーゼ（０−６４ｎｇ： ｌ ２５ （
ＪＡ＋２ ）の存ず１−ドにラクトパーオキシダーゼ（
２μｙ）によってＮａ１（１ｍＣ１１２５Ｉ ） ｆ：
用いて０．０５ＭリンｔｌｄｆＩＩＩＩ液でヨウパ化す
る。混合物を室温で１５分間数１１１ｆ麦、至黛全１ｍ
ｌに希釈し、トリクロロ酢敵（６−ポ蚕却および燐タン
グステン酸（０，２５重置チ）においてテトクローノ、
Ｃ（Ｉ＋）（ｌμｙ）とともに共沈させる。ペンット金
抗伊し、０．５Ｍ水酸化ナトリウム（Ｉ Ｏ−２０μｌ
）で中１生化によってｆＩｊ、浴屏し、タングステンば
塩ｋ ０．５ Ｍノエチレントリプミ／の１芥縫と配位
によっで複汗化する。標識化ペノ°チドの至比ｌ古１’
ＪｇｒＪ、５００ Ｃ１／ｙｎ ｒｎｏｌｅ以上である
。
浴故金２５ ｖｎ Ｍエタノールアミン−塩酸（Ｐム１
９．ｏ）で０．５ ｍ−１Ｋ希釈し、ｐＢＥ９４ （−
ｙ７−−ｑソーｆ、ビスカタウェイ、ニーーノヤーノイ
）をっめ／こカラム（０，５Ｘ ２０ ｃｍ ）でのア
ノイニティクロマトグラノイーを用い−Ｃ、チトクロー
ムＣ１０ｒｎ９／ｍｌ ｋ Ｂむ２５ ／ＡＭエタノー
ルアミ／−７ｉ１ｅ（ｐＨ９，０）ｆ、１べて等しく浴
出することによって調製する。ビーク３および４におい
て＃−ｙｉＬる１勿賀Ｑよ、ラノオイノ・ノアッセイに
用いる。
９．ｏ）で０．５ ｍ−１Ｋ希釈し、ｐＢＥ９４ （−
ｙ７−−ｑソーｆ、ビスカタウェイ、ニーーノヤーノイ
）をっめ／こカラム（０，５Ｘ ２０ ｃｍ ）でのア
ノイニティクロマトグラノイーを用い−Ｃ、チトクロー
ムＣ１０ｒｎ９／ｍｌ ｋ Ｂむ２５ ／ＡＭエタノー
ルアミ／−７ｉ１ｅ（ｐＨ９，０）ｆ、１べて等しく浴
出することによって調製する。ビーク３および４におい
て＃−ｙｉＬる１勿賀Ｑよ、ラノオイノ・ノアッセイに
用いる。
４、）牛Ｂ（ンＰの調製
ＢＧＩ）は、子−生骨の鉱買頻化法によって、放出さノ
したタン・ぐり買かしセノ−γう′ックス□□□Ｇｌ
００ （）−ｒ−マシア）でのケ゛ルろ過、ひき続いて
のグライスらり叩Δミーり互へ（１９７６）、７；３巻
：１４４７−１４５１ページ）によって６己載のように
Ｌ）ｆ！；ＡＥ−七７アｒヮクス■Ａ−２５（−ｙアー
マノア）からのグレデイエント浴出によって精製される
。牛ＢＧＰは、アミノｄ３７−４９に対するｈＢＧＰの
よりに同じアミノ繊配列を有する。
したタン・ぐり買かしセノ−γう′ックス□□□Ｇｌ
００ （）−ｒ−マシア）でのケ゛ルろ過、ひき続いて
のグライスらり叩Δミーり互へ（１９７６）、７；３巻
：１４４７−１４５１ページ）によって６己載のように
Ｌ）ｆ！；ＡＥ−七７アｒヮクス■Ａ−２５（−ｙアー
マノア）からのグレデイエント浴出によって精製される
。牛ＢＧＰは、アミノｄ３７−４９に対するｈＢＧＰの
よりに同じアミノ繊配列を有する。
５、放射ヨウ累化子牛ＢＧＰの調製
ａ４した子牛ＢＧＰは、ＢＧＰ ｌ Ｏｖｎ９と１２５
Ｉ １ｍ（：ｉとともに培養することによる固体状態ラ
クト・ゼーオキ７ダーゼ法（タヴイドおよびレルスノエ
ルド。
Ｉ １ｍ（：ｉとともに培養することによる固体状態ラ
クト・ゼーオキ７ダーゼ法（タヴイドおよびレルスノエ
ルド。
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ 、 １３巻：１０１４−１
０２１１）によって１２５Ｉ （４Ｘ Ｉ Ｑ１８ｃｐ
ｍ／ｍｏ ｌｅ ；アマ−ジャム）で標識化する。標識
化ＢＧＰは、木精合１２５工がら分析物希釈剤（０，１
４Ｍｊｉ化ナトリウム；０．ＵＩＭリンＭｊｊｊｘ ；
’ ２５ ｒｎＭ ＥＤＴＡ ； ０．１ ％ダラチ；
／；０．１チツウィーン■２０（ングマケミカルＣｏ、
、セイ トルイス、 ミズイーＩＪ）、ｐＨ７，４で）
で平部化しノこセファｒ２クス■Ｇ−２５（７アーマシ
ア）カラムで、ケ°ルろ過で分離する。
０２１１）によって１２５Ｉ （４Ｘ Ｉ Ｑ１８ｃｐ
ｍ／ｍｏ ｌｅ ；アマ−ジャム）で標識化する。標識
化ＢＧＰは、木精合１２５工がら分析物希釈剤（０，１
４Ｍｊｉ化ナトリウム；０．ＵＩＭリンＭｊｊｊｘ ；
’ ２５ ｒｎＭ ＥＤＴＡ ； ０．１ ％ダラチ；
／；０．１チツウィーン■２０（ングマケミカルＣｏ、
、セイ トルイス、 ミズイーＩＪ）、ｐＨ７，４で）
で平部化しノこセファｒ２クス■Ｇ−２５（７アーマシ
ア）カラムで、ケ°ルろ過で分離する。
紅多くの分析か、実力視測２においてｉＣ載のように調
製された抗体とともにｈＢＧＰ３７−４９放射ヨウ素化
試薬を用いて実力出される。仕切ｔユ、０．２５％十血
清アルグミン、２０ ｍＭリン岐塩、ｈｎＧｐ の
標準を南する１ ｒｎＭ、 ｇＤＴＡノジスＢＧＰ−欠
乏血漿において実施される。トレーブーの付加前３日間
、および後ｌＬ」培養後、趙台トレーリー−は、ウサギ
抗ＢＧＰ抗体に対する第二抗体を用いることによって遊
離トレーサーから分離する。分析は、９フエムト、モル
ｈＢＧＰ ′７）！ｌ検出さ肛、４９フ工ムトモル
で５０チ結台μｍ１害を示す。４８製子牛ＢＧＰは、モ
ル基準で、１ｌＢＧＰ の５０％反＋１１．Ｓ性奮
与え、ヒト′１１′佃出′勿は、ＢＧＰの高ｉｒＡｉｍ
（Ｉ ＯＯ−３００ｎＭｌｌ ＢＧＰ ３７−４９７
ｆｊ ）を示す。上反小ｉ＋機１止ノし１１症血山ξ７
−４９ は、ｈＢＧｌ） 基準に平行なｒｔｊｉ言阻Ｍｋ示
ず。４柿の分相で倹丘した２０名女ｂｔ、および２０名
男憔の正７’＆ 血漿試料は、１７％（１） １’ｉ
−分析Ｃ−Ｖ、を示し、ＵＩＬ９ｉ ｂ１３にＰ レベ
ル（ピコ：（： ルｈＢＧＰ ｍｉ ）女性では５
．８ ：＝を二〇９および男１−１ミでは７．１上１．
３金示す。正常の上限は２０ピコモノφＪ（Ｎ＝ＩＯ：
３）であ４）。ｈＢＧＰは、上皮小俸戟北元進症患省２
７名中１６名、パケ゛ット病患渚３３名中２４名、お↓
び上次透析の漫性゛１を不全患者１５名中１２名におい
て増加する。
製された抗体とともにｈＢＧＰ３７−４９放射ヨウ素化
試薬を用いて実力出される。仕切ｔユ、０．２５％十血
清アルグミン、２０ ｍＭリン岐塩、ｈｎＧｐ の
標準を南する１ ｒｎＭ、 ｇＤＴＡノジスＢＧＰ−欠
乏血漿において実施される。トレーブーの付加前３日間
、および後ｌＬ」培養後、趙台トレーリー−は、ウサギ
抗ＢＧＰ抗体に対する第二抗体を用いることによって遊
離トレーサーから分離する。分析は、９フエムト、モル
ｈＢＧＰ ′７）！ｌ検出さ肛、４９フ工ムトモル
で５０チ結台μｍ１害を示す。４８製子牛ＢＧＰは、モ
ル基準で、１ｌＢＧＰ の５０％反＋１１．Ｓ性奮
与え、ヒト′１１′佃出′勿は、ＢＧＰの高ｉｒＡｉｍ
（Ｉ ＯＯ−３００ｎＭｌｌ ＢＧＰ ３７−４９７
ｆｊ ）を示す。上反小ｉ＋機１止ノし１１症血山ξ７
−４９ は、ｈＢＧｌ） 基準に平行なｒｔｊｉ言阻Ｍｋ示
ず。４柿の分相で倹丘した２０名女ｂｔ、および２０名
男憔の正７’＆ 血漿試料は、１７％（１） １’ｉ
−分析Ｃ−Ｖ、を示し、ＵＩＬ９ｉ ｂ１３にＰ レベ
ル（ピコ：（： ルｈＢＧＰ ｍｉ ）女性では５
．８ ：＝を二〇９および男１−１ミでは７．１上１．
３金示す。正常の上限は２０ピコモノφＪ（Ｎ＝ＩＯ：
３）であ４）。ｈＢＧＰは、上皮小俸戟北元進症患省２
７名中１６名、パケ゛ット病患渚３３名中２４名、お↓
び上次透析の漫性゛１を不全患者１５名中１２名におい
て増加する。
ｌ ｍＭ塩化マグネシウム、１５０ ｍ１Ｖｉ Ｑ化ナ
トリウムにおけるビオダルＰ−３０で、血ＩＭｈＢ（ｙ
ＰＦｉ才からｈＢＧＰとともに共−浴出し、２０チＱよ
、大きい血漿タンパクと非−共有的に結しデしてｂる。
トリウムにおけるビオダルＰ−３０で、血ＩＭｈＢ（ｙ
ＰＦｉ才からｈＢＧＰとともに共−浴出し、２０チＱよ
、大きい血漿タンパクと非−共有的に結しデしてｂる。
正常ヒトＩＩｕ倹者の血液におけるこの夙域一時共ＲＩ
Ａによって検出されるｈＢＧＰは、骨ｔておけるペノチ
ドと同じてあり、部分的により太き７よタン・Ｐり質と
非共Ｍ的に結合しでいると結論づけられる。
Ａによって検出されるｈＢＧＰは、骨ｔておけるペノチ
ドと同じてあり、部分的により太き７よタン・Ｐり質と
非共Ｍ的に結合しでいると結論づけられる。
本分析は、生理学ｔＪヲ液体（・こおける■３ＧＰ（１
）測定用の非常に感夏の良い方法を提供することでのる
。
）測定用の非常に感夏の良い方法を提供することでのる
。
このように骨と関連のある広範囲の疾病をもつと考えら
れる患者金、鋭敏にモニターでさ、特に血漿または他の
液体におけるＢＧＰの変動葡伐出できる。なぜなら、用
いられたオリゴペノチドは、実實的に、天然に存在する
タンパク翼より小σく、常法によって容易に合成できる
。１４力目的に、′１ヶ異性の重大な損失なくオリコ゛
ペゾチドの吻１１旧１９性質を増大できる。
れる患者金、鋭敏にモニターでさ、特に血漿または他の
液体におけるＢＧＰの変動葡伐出できる。なぜなら、用
いられたオリゴペノチドは、実實的に、天然に存在する
タンパク翼より小σく、常法によって容易に合成できる
。１４力目的に、′１ヶ異性の重大な損失なくオリコ゛
ペゾチドの吻１１旧１９性質を増大できる。
ＭｉＪ述の発明は、実施１ν１（・こよって詳細に記載
したが、理庁ｒ′ケ明確にするためで＄Ｆ）、木兄す」
の範囲がこれらの央〃ｌ！ｌｉ列に限定するものでｂＪ
、ないということ（よい９までもない。
したが、理庁ｒ′ケ明確にするためで＄Ｆ）、木兄す」
の範囲がこれらの央〃ｌ！ｌｉ列に限定するものでｂＪ
、ないということ（よい９までもない。
特１１・出Ｈ（人
ザ リーノエンツ 討グ リゝ ユニパーシティオブ
カリフォルニア ！１￥１汗出＋、＋＋Ｕ代理人 弁理士 青゛ 木 朗 ｊＩ゛理士 西部４１１之 非理上 石 １１１ 敬 弁理士 山 １１ １１ｊｉ 之 ツド アメリカ合衆国カリフォルニア ・サン・デイエゴ・デルフイニ ス１１０３７ ３７
カリフォルニア ！１￥１汗出＋、＋＋Ｕ代理人 弁理士 青゛ 木 朗 ｊＩ゛理士 西部４１１之 非理上 石 １１１ 敬 弁理士 山 １１ １１ｊｉ 之 ツド アメリカ合衆国カリフォルニア ・サン・デイエゴ・デルフイニ ス１１０３７ ３７
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、アミノ酸１０個から１６個快でのアミノ酸配列で、
末端配列は、末端アミノ酸を含み、１個よυ多くないア
ミノ酸置換Ｑよ、ＰｈｅおよびＴｈｒまたはＧｔｕおよ
びＧｔａ以外の交換を含むことができること金除いで、
３個までのアミノ酸か、異なる一アミノ酸でｌＩ′￥、
換されうることを昌んでなるｈ １３ＧＰにメＪする特
異抗体に対しで、ｈ１３ＧＰと競争することのできるオ
リゴペプチド。 ２、 ｈＢｃンＰ１−１５、旧３Ｇ■、１５−５０、
ｈｔｓＧｉ’ 以内にある配列をもつアミノ酸１０
飼から１６個までのアミノ酸で、末端配列は、末端アミ
ノ醒全誹み、１個より多くｌいアミノｍａｔ侠は、Ｐｈ
ｅおよびＴｙｒま／こはＧｔｕおよびＧｉｎ以外の交換
を含むことができることを除いて、３個までのアミンば
か、異なるアミノ酸で置換されつることを含んでなるｈ
ＢＧＰに対する特異抗体に対してｈＢＧＰと競争するこ
とのできるオリゴ８ベグチド。 ３、該オリゴペプチドが、ｋ１８ＧＰ ５７−”である
特許請求の範囲第２項記載のオリゴペプチド。 ４、該オリゴペプチドが、ｈ ＢＧＰ １５ ′１−′
＜ Ｂ １６−３０であるｊ特許請求の範囲第２項記載
のオリゴペプチド。 ５・ 該オリゴペプチドが、ｈＢＧＰｌ−”もり、＜ｉ
ｄ＋２である特許請求の範囲Ａ′４Ｊ２項記載のオリ」
１゛ベゾチド。 ６、ｉ亥オリコヘグチドが、ｈ ＢＧＰについての診断
分析において有用な検出可能なシグナルを提供できる標
識と接合する時、ｉ′ｆ請求の範囲第ｉ ｚ 、第２項
、第；３項、第４項または第５項のいずれかに記載のオ
リゴペプチドの接合体。 ７、該標識が、放射性核種である特許請求の範囲第６項
記載の接合体。 ８、該放射性核種が放射性ヨウ素である翁ＷＦ請求の範
囲第７項記載の接合体。 ９、該標識が、螢光体である！時♂ｆｉｉｔＪ求の範囲
第６項記載の接合体。 ＩＯ１該標識が、酵素である付６「請求の範囲第（）項
ｄ巾成の仮付体。 １１、共イＪ的に免疫原と接合する１１ケ訂請求の範囲
第１項または第２項記載のオリ了ペプチドを含んでなる
免疫原接合体。 １２、該免疫ノ、Ｉ、１．が、キイホールリンペットヘ
モシアニンである特許ｄ；゛！求の範囲第１０項ｉ己載
の免疫！曇日ｇ、合体。 ｘ３． ！ｒ′ｆｒｒ請求の範囲第１１−Ｌ貞１山敗
の免疫７県に、ｌクボストの免疫１１；＆←よっで調製
され７□こ抗体。 ７−４９ １４、 該〕リコ゛ペソ゛チドが旧３ＵＰ で
ある特許請求の範囲第１３頃ｉ己載の抗体。 １５、生理学的液体における旧３ＧＰを１）ＩＩＩ定す
るに肖たｐ、共有的（′こ免疫原と接合するアミノ酸ｉ
。 ＋１＋８１から１６個までのアミノ酸１犯列で、末端配
列は、末端アミノ１波を剣み、１個より多くないアミノ
１賀む置換は、Ｐｈｅおよび’］’ ｈ ｒまたはＧ／
−ｕおよび（ン１ａ以外の交換（ｉ：合むことかできる
こと金除いて、３個−までのアミン酸が、異なるアミノ
酸で置換さ〕１うることゲ含んでなるｈ ＢＧＰにλ・
Ｊする特異抗体に対し７で、 ｈＢＧＰ と競争するこ
とのできるオリコ゛ペノ１−１５ １５
−．５０チドお工びｈＢＧＰ 、ｈＢＧＰ 、
ｈＢＧＰ 以内にある配列金もつアミノ酸１０１［
＾１から１６１１６ｊまでのアミノ酸で、末端配列（ｒ
よ木端アミノ酸全含み、１個よや多くないアミノ酸置換
は、ＰｈｅおよびＴｒｙまたはＧｔｕおよびＧｔａ以外
の父換金ａ゛むことができることを除いで、３１向−ま
でのアミノ１疫が、異なるアミノ酸で置換されうろこと
を含んでなるｂ ＢＧＰに対する特異抗体に対し−ｒｈ
ｔ３Ｇｐ と競争することのできるオリ了ペプチドを含
んでなる免疫原接合体でホストを免疫化することにより
て調製される抗体および該オリコゝペン０チドが、ＩＩ
ＨＧＰについての診断分析において有用な検出”’Ｊ
ａｓ ７ｒシグナル全提供できる標識と接合するアミノ
酸１０個から１６個までのアミノ酸配列で、末端配列は
、末端アミノ酸を沈み、１個より多くない”アミノ酸置
換は、ＰｈｅおよびＴｈｒｉたはＧｔｕおよびＧｌａ以
外の交換を含むことができることを除いて、３個までの
アミノ酸が異なるアミノ酸で置換じれつることを含んで
なるｈＢＧＰに対する特異わ１４体に対してｈＨＧＰと
競争することのできるオリ了ペプチドおよび、ｈＢＧＰ
””１５、ｈＢＧＰ １５−３０、ｈ ｕＧｐ ３５−
４９以内にある配列をもつアミノ酸１ＯＩＩＩ！１１か
ら１６個までのアミノ酸で末端配列は、末端アミノ酸に
’Ｒ−み、１個より多くないアミノ酸部、換はＰｈｅお
よびＴｙｒまたはＧｌｕふ−よびＧＡａ以外の父挾全含
むことができることを除いて、３個までのアミノ酸が、
異なる゛アミノ酸てｌ１ｆｆｉ俣されうることを含んで
なるｈＢＧＰに対する特異抗体に対してｈＢＧＰ と競
Φできるメリゴベフ０チド、該１ リコ゛波〕０チドが
、ｈＢＧｌ）３７−４９であるオリコ゛＜グチド、該オ
リコ゛ペノチドがｈＢＧＰ”” しく” ”−３０テ；
ｔｖＪ６オ’） ：ｊ゛Ｊ７’Ｊ７’チｔ’該〕リボペ
プチドが、ｈＢＧｐ”−１１ＬＬ＜ｌ−１１２である、
号すコ゛べ、ノ０チドの標識化接合体からなるグループ
選択された少なくでも１つの試薬音用いる方法゛であυ
、該方法は、分析媒質において、ｈ ＢＧＰに対して特
異抗体、該抗体に対しで、ｈＢＧＰ と競争できる標識
化接合体を績汗させ、該標献が検出されうるシグナル全
（是供し；そしで、＋ｉン試不・ＦにおけるＢＧＰの測
定とし〜て該杭内に結合もしくは未結合する標５歳化接
合体の量を定置することｋｇんでなる方法。 １６、該抗体は、ｈＢＧＰ の接合体で産生農へ、
該標識化接合体は、放射性ヨウ素化ｈＢＧ■）３７−４
９である特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １７、％許請求の範ｖｐ第１項もしくは第２１貝のいず
れかによるオリ了ペプチドに応答してＡｋ生する抗体。 １８６ 該抗体がモノクローナルである特許請求の範
囲第１７項記載の抗体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/382,844 US4438208A (en) | 1982-05-27 | 1982-05-27 | Region-specific determinants for vitamin K dependent bone protein |
| US382844 | 1999-08-25 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4169843A Division JP2644139B2 (ja) | 1982-05-27 | 1992-05-19 | オリゴペプチド接合体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5943361A true JPS5943361A (ja) | 1984-03-10 |
Family
ID=23510627
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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