JPS5944321A - 新規な蛋白質およびその取得方法 - Google Patents
新規な蛋白質およびその取得方法Info
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- JPS5944321A JPS5944321A JP58137893A JP13789383A JPS5944321A JP S5944321 A JPS5944321 A JP S5944321A JP 58137893 A JP58137893 A JP 58137893A JP 13789383 A JP13789383 A JP 13789383A JP S5944321 A JPS5944321 A JP S5944321A
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- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
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- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規な乃白′尚（ＰＰ１７）、ヒトの胎盤抽
出液からのその富化および取得方法ならびにその利用に
関する。
出液からのその富化および取得方法ならびにその利用に
関する。
ヒトの胎盤抽出液中には、その組織に由来する一連の可
溶性五白質の存在がｒｉｉＥ明されている（ Ｆ、 Ｃ
）、 Ｌｅｂｍａｎｎ氏編［ＣａｒｃｉｎＱ−Ｅｍｂｒ
ｙｏｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｊ第１巻中Ｈ，Ｂｏｈ
ｎ氏１” Ｐｌａｃｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｐｒｅｇｎａ
ｎｃｙＰｒｏｔｅｉｎｓ Ｊ （Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
Ｐｒｅｓｓ社１９７９年刊行）〕。
溶性五白質の存在がｒｉｉＥ明されている（ Ｆ、 Ｃ
）、 Ｌｅｂｍａｎｎ氏編［ＣａｒｃｉｎＱ−Ｅｍｂｒ
ｙｏｎｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ Ｊ第１巻中Ｈ，Ｂｏｈ
ｎ氏１” Ｐｌａｃｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｐｒｅｇｎａ
ｎｃｙＰｒｏｔｅｉｎｓ Ｊ （Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ
Ｐｒｅｓｓ社１９７９年刊行）〕。
本発明は、ＰＰ１７と命名された新規な可溶性胎盤蛋白
質の単離および特性化に関する。
質の単離および特性化に関する。
よく洗浄されたヒトの胎盤（６ｏｏｒ）から生理的食塩
水を用いてこの蛋白質の平均２．５■が抽出される。
水を用いてこの蛋白質の平均２．５■が抽出される。
ヒトの他の器官（例えば心臓、肺、皮膚、胃、腎臓、子
宮、肝臓〈牌臓、副腎、結腸および膀胱）からの抽出液
はこの蛋白質を含まないか甘たはごく微量のみ含有する
。ヒトの他の体液の血清中にはこの蛋白質は通常存在し
ないかまたは痕跡量程度（＜ＩＩＩｇ／ＩＩ）である。
宮、肝臓〈牌臓、副腎、結腸および膀胱）からの抽出液
はこの蛋白質を含まないか甘たはごく微量のみ含有する
。ヒトの他の体液の血清中にはこの蛋白質は通常存在し
ないかまたは痕跡量程度（＜ＩＩＩｇ／ＩＩ）である。
本発明の対象は蛋白質ｐｐ１７であり、それは下記すな
わち ａ） ’ｍ気泳動的易動度がβ１−およびα２−グロ
ブリンの中間範囲内にあること、 ｂ）等電点が５．２５士０．２０であること、Ｃ）沈降
係数８２０．Ｗが２．７±０．１Ｓであること、ｄ）
ドデシル硫酸ナトリウムを含むポリアクリルアミド（Ｆ
ＡＡ）ゲルにより測定された分子量が３８，０００±２
，０００であること、ｅ）吸光係数Ｅ１％（２ｓｏｎｍ
）が８５±０４であｆｆｉ ること、 ｆ）炭水化物部分が２．１±０９係（マンノース０．６
±０．２％、ガラクトース０．４±０，２悌、ギンロー
ス０２±０．１％、Ｎ−アセチルグルコザミン１．０±
０．３ ％ 、Ｎ−アセチルノイラミン酸０．２±０１
％）であること により特徴づけられる。
わち ａ） ’ｍ気泳動的易動度がβ１−およびα２−グロ
ブリンの中間範囲内にあること、 ｂ）等電点が５．２５士０．２０であること、Ｃ）沈降
係数８２０．Ｗが２．７±０．１Ｓであること、ｄ）
ドデシル硫酸ナトリウムを含むポリアクリルアミド（Ｆ
ＡＡ）ゲルにより測定された分子量が３８，０００±２
，０００であること、ｅ）吸光係数Ｅ１％（２ｓｏｎｍ
）が８５±０４であｆｆｉ ること、 ｆ）炭水化物部分が２．１±０９係（マンノース０．６
±０．２％、ガラクトース０．４±０，２悌、ギンロー
ス０２±０．１％、Ｎ−アセチルグルコザミン１．０±
０．３ ％ 、Ｎ−アセチルノイラミン酸０．２±０１
％）であること により特徴づけられる。
ＰＰ１７のアミノ酸組成は下記の衣に示されるようであ
る。
る。
リジン ５．８６ ５．５２
ヒスチジｙ ２．１６ ５
６．３７アルギニン ５，５０
２．９０アスノξラギン酸 ７．４４
２．５９スレオニン ４．
４１ ９．８０セリン ９．
１４ ４．７５グルタミン酸 １
ａ５２ ２．９４プロリン
４．４１ ５．１３グリシン
４．９３ ２９２アラニン
８，５６ １．５５シスチン捧
０．７５ ３．５８バリン
６．９Ｌ ３．５３メチオニン
１．４６ ７．８９イソロイシン
２，５３． ４．７０ロイシン
１１．３９ １．５５チロ
シン １．４３ １１．９
７フエニルアラニン ２．７９． ７
．２９トリプトフアン １．９７
８．４１組織蛋白質の諸性性の詳細は下記の通りであっ
た。
ヒスチジｙ ２．１６ ５
６．３７アルギニン ５，５０
２．９０アスノξラギン酸 ７．４４
２．５９スレオニン ４．
４１ ９．８０セリン ９．
１４ ４．７５グルタミン酸 １
ａ５２ ２．９４プロリン
４．４１ ５．１３グリシン
４．９３ ２９２アラニン
８，５６ １．５５シスチン捧
０．７５ ３．５８バリン
６．９Ｌ ３．５３メチオニン
１．４６ ７．８９イソロイシン
２，５３． ４．７０ロイシン
１１．３９ １．５５チロ
シン １．４３ １１．９
７フエニルアラニン ２．７９． ７
．２９トリプトフアン １．９７
８．４１組織蛋白質の諸性性の詳細は下記の通りであっ
た。
電気泳動的易動度は、微量化改変されたばツクマン・イ
ンスツルメント社製マイクロゾーン（Ｍｉｃｒｏｚｏｎ
ｅ ） Ｒ２００型にセルロースアセテートストリップ
（サルトリウス社製品）を用い、ｐＨａ乙のジエチルバ
ルビッール酸ナトリウム緩衝液で調べた。
ンスツルメント社製マイクロゾーン（Ｍｉｃｒｏｚｏｎ
ｅ ） Ｒ２００型にセルロースアセテートストリップ
（サルトリウス社製品）を用い、ｐＨａ乙のジエチルバ
ルビッール酸ナトリウム緩衝液で調べた。
等電点の測定は、ＬＫＢ社製のカラ２．（４４０ｒｎ／
りを用いて行なった。いわゆるアンホリン（Ａｍｐｈｏ
ｌ ｉｎ”’）混合液は、糖蛋白質（グリコプロティ
ン）の研究においてｐＨ４，０〜６．０の範囲を有した
。
りを用いて行なった。いわゆるアンホリン（Ａｍｐｈｏ
ｌ ｉｎ”’）混合液は、糖蛋白質（グリコプロティ
ン）の研究においてｐＨ４，０〜６．０の範囲を有した
。
沈降係数は、ベックマン社製分析用超遠心装［（スビン
コＥ型）により２８０ｎｍにおける紫外線スキャナー法
を用い二重、ｅ別セル中で毎分６０．０００回転により
測定した。溶媒にはＮａＣ＃０．２モル／ｌを含有する
ｐＨ６，ｓの００５モル洟度燐酸塩緩衝液を用いた。蛋
白質濃度は光学濃度（ＯＤ）約６に設定した。沈降係数
は２０℃における水を基研として算定した。
コＥ型）により２８０ｎｍにおける紫外線スキャナー法
を用い二重、ｅ別セル中で毎分６０．０００回転により
測定した。溶媒にはＮａＣ＃０．２モル／ｌを含有する
ｐＨ６，ｓの００５モル洟度燐酸塩緩衝液を用いた。蛋
白質濃度は光学濃度（ＯＤ）約６に設定した。沈降係数
は２０℃における水を基研として算定した。
５ＤＳ−ＦＡＡゲルによる分子量の測定には、ドデシル
硫酸ナトリウム（ＳＤＳ） ０． ’１ ％を含有する
Ｚ５チのポリアクリルアミドゲルを用いた。比較物質と
しては、ヒトの胎盤ラクトゲン（ＨＰＬ）およびヒトの
アルブミンならびにその凝集物を用いた。
硫酸ナトリウム（ＳＤＳ） ０． ’１ ％を含有する
Ｚ５チのポリアクリルアミドゲルを用いた。比較物質と
しては、ヒトの胎盤ラクトゲン（ＨＰＬ）およびヒトの
アルブミンならびにその凝集物を用いた。
吸光係数の測定には、その物質を炭酸水素アンモニウム
を加えてｐＨ７，０に調整した蒸留水に０．１０％（０
，１０！／ ｔＯＧｍ１）に溶解した。
を加えてｐＨ７，０に調整した蒸留水に０．１０％（０
，１０！／ ｔＯＧｍ１）に溶解した。
炭水化物の分析は下記の通りに実施した。すなわちグリ
コシド結合を加水分解した後に、遊離された中性の糖を
硼酸塩複合体としてアニオン交換カラムによＦ） （Ｙ
、 Ｃ，Ｌｅｅ氏その他１’−Ａｎａｌ。
コシド結合を加水分解した後に、遊離された中性の糖を
硼酸塩複合体としてアニオン交換カラムによＦ） （Ｙ
、 Ｃ，Ｌｅｅ氏その他１’−Ａｎａｌ。
Ｂｉｏｃｈｅｍ＊ Ｊ第２７巻第５６７頁（１９６９年
）〕分離し、溶離液にビシンコニン酸第１銅試桑［Ｋ。
）〕分離し、溶離液にビシンコニン酸第１銅試桑［Ｋ。
ＭｏｐｐｅｒおよびＭ、 Ｇｉｎｃｌｌｅｒ両氏［Ａｎ
ａｌ、 Ｂｊｏｃｈｐｍ、Ｊ８８５６巻第４４〔１頁（
１９７３年）〕を加えることによシ発色させ、ラムノー
スを内部標準物質として定付的に測定した。アミン糖は
ニンヒドリンとの反応により検出し宇部、い−フイラミ
ン酸の含櫓腋はＷａｒｒｅｎ氏の方法Ｃｊ−Ｍｅｔｈｎ
ｄＳｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙｊ Ｍ６巻第４６３〜４
６５頁（１９６１年）〕により測定される。
ａｌ、 Ｂｊｏｃｈｐｍ、Ｊ８８５６巻第４４〔１頁（
１９７３年）〕を加えることによシ発色させ、ラムノー
スを内部標準物質として定付的に測定した。アミン糖は
ニンヒドリンとの反応により検出し宇部、い−フイラミ
ン酸の含櫓腋はＷａｒｒｅｎ氏の方法Ｃｊ−Ｍｅｔｈｎ
ｄＳｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙｊ Ｍ６巻第４６３〜４
６５頁（１９６１年）〕により測定される。
アミノ酸分析は、Ｓ、Ｍｎｏｒｅ氏その他の方法〔［Ａ
ｎａｌ、 Ｃｈｅｍ、 ｊ第５０巻第１１８５ｆｆｌ
（１９５８年）〕に従い、ベックマン社製品マルチクロ
ムＢ型（閤品名）液体クロマトグラフ装（内により実施
した。
ｎａｌ、 Ｃｈｅｍ、 ｊ第５０巻第１１８５ｆｆｌ
（１９５８年）〕に従い、ベックマン社製品マルチクロ
ムＢ型（閤品名）液体クロマトグラフ装（内により実施
した。
残シスチンは過蟻酸を用いる蛋白質の酸化［Ｓ。
Ｍｏｏｒｅ氏その他［Ａｎａｌ 、 Ｃｈｅｍ、 Ｊ
第３０巻第１１８５頁（１９５８年）〕およびそれに峠
１くクロマトグラフィー（Ｓ 、 Ｍｏｏ ｒｅ氏［Ｊ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 Ｊ ４４２３８巻第２３
５頁（１９６３年）〕によりシスティン酸として定量し
た６ ］・リプトファン含有翰はＨ，Ｅｄｅｌｈｏｆ氏
の方法（［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｊ第６巻８１９
４８頁（１９６７年）〕に従い直接的フォトメーター測
定法によシ定址した。
第３０巻第１１８５頁（１９５８年）〕およびそれに峠
１くクロマトグラフィー（Ｓ 、 Ｍｏｏ ｒｅ氏［Ｊ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、 Ｊ ４４２３８巻第２３
５頁（１９６３年）〕によりシスティン酸として定量し
た６ ］・リプトファン含有翰はＨ，Ｅｄｅｌｈｏｆ氏
の方法（［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｊ第６巻８１９
４８頁（１９６７年）〕に従い直接的フォトメーター測
定法によシ定址した。
ｐｐ１７は下記の通シの諸物件を有し、そしてそれらは
該当する方法を採用することによって単離操作に用いら
れた。
該当する方法を採用することによって単離操作に用いら
れた。
１）硫酸アンモニウムによりｐＨ５〜８そして３０〜５
０％飽ｉ１１において水治液から塩析される。
０％飽ｉ１１において水治液から塩析される。
２）水溶性のアクリジン塩基（例えば２−エトキシ−６
，９−ジアミノアクリジンラクテート）によシｐＨ７〜
９および塩基濃度０．４〜０．８Ｖ／１００ｍ７！にお
いて沈殿するが、しかし塩基濃度０−４ ”Ｅｌ／ １
００ ｍｌまたはそれ以下であるとｐＨ６，０では全熱
かまたはｔｌとんと沈殿しない。
，９−ジアミノアクリジンラクテート）によシｐＨ７〜
９および塩基濃度０．４〜０．８Ｖ／１００ｍ７！にお
いて沈殿するが、しかし塩基濃度０−４ ”Ｅｌ／ １
００ ｍｌまたはそれ以下であるとｐＨ６，０では全熱
かまたはｔｌとんと沈殿しない。
３）エタノールによる沈殿操作に際して、希薄塩溶液（
例えば１〜２チＮａＣｌ溶液）中ではｐＨ７においてア
ルコール（濃度２０％（客間）マででは主として上清中
にとどまる。
例えば１〜２チＮａＣｌ溶液）中ではｐＨ７においてア
ルコール（濃度２０％（客間）マででは主として上清中
にとどまる。
４）電気永動による分離におい−（ｐｐ１７はβ１−お
よびα２−グロブリンの中間に位置する易動度を示す。
よびα２−グロブリンの中間に位置する易動度を示す。
５）等電点フォーカスの決定に際してはｐＨ５１〜５．
４の卸、囲において５．２〜５．６の間に極大を示す。
４の卸、囲において５．２〜５．６の間に極大を示す。
６） ＰＰ１７は０．５モル濃ＩＷのクリシン−ＨＣ
”／緩衝液に対する透析に際して安定であり、免疫化学
的に変化しないが、これと反対に他の数棟の胎盤蛋白質
（例えばＰＰ９ ）はこれらの条件下で免疫化学的反応
性を失なう。
”／緩衝液に対する透析に際して安定であり、免疫化学
的に変化しないが、これと反対に他の数棟の胎盤蛋白質
（例えばＰＰ９ ）はこれらの条件下で免疫化学的反応
性を失なう。
７）セファデックス■によるゲルτ濾過においでＰＰ１
７は分子景２ Ｄ、 （］ ＯＯ〜６０．０ ＋Ｊ Ｏ
の幀〕、囲に現われる。
７は分子景２ Ｄ、 （］ ＯＯ〜６０．０ ＋Ｊ Ｏ
の幀〕、囲に現われる。
ａ） ｐｐ１７は弱塩基性のイオン交換剤（例えばＤ
ＥＡＥ−セルロースまたはＤＥＡＦ−セファデックス）
に低い伝導度（約０〜２ｍ５）および中性または弱塩基
性ＤＨ（約７〜９）において吸着され、高礎度の強電解
性塩類濃度〔０〜０．２％（Ｆ／１０ ｏｍｘ）］のＮ
ａＣ１溶液によりイオン交換剤から再び溶離される。
ＥＡＥ−セルロースまたはＤＥＡＦ−セファデックス）
に低い伝導度（約０〜２ｍ５）および中性または弱塩基
性ＤＨ（約７〜９）において吸着され、高礎度の強電解
性塩類濃度〔０〜０．２％（Ｆ／１０ ｏｍｘ）］のＮ
ａＣ１溶液によりイオン交換剤から再び溶離される。
９） ｐｐ１７はその水溶液から免疫吸着法によシ富
化されそして単離され得る。
化されそして単離され得る。
本発明の対象は、ヒトの胎盤抽出物を上記の諸物件を第
１」用して分画することを特徴とするｐｐ１７の取得方
法である。
１」用して分画することを特徴とするｐｐ１７の取得方
法である。
当業者には明らかなように、硫酸アンモニウムと同様に
生化学的調製法において通常用いられる中性塩類もまた
ｐｐ１７の塩析に用いられる。
生化学的調製法において通常用いられる中性塩類もまた
ｐｐ１７の塩析に用いられる。
アクリジン塩基と同様にキノリン塩基の水溶性誘導体も
また蛋白質分画法において知られる通り、本発明による
方法の（ｊｐ囲内において用いられ４１４る。その電気
泳動的挙動ならひに分子横に対応して、上記の諸物件を
有する蛋白１１を他の冴白質から分縮することに適当な
他の手段がこの蛋白質の単離に用いられ得る、このため
に、ゲル濾過、ゲルクロマトグラフィー、限外耐過の諸
方法ならひにｐｐ１７が希薄な緩衝溶液から弱塩基性の
イオン交換剤に結合され、そこから高き度の強電解性塩
類濃度しくより杓ひ溶離され得るという粘性もまた利用
され有る。
また蛋白質分画法において知られる通り、本発明による
方法の（ｊｐ囲内において用いられ４１４る。その電気
泳動的挙動ならひに分子横に対応して、上記の諸物件を
有する蛋白１１を他の冴白質から分縮することに適当な
他の手段がこの蛋白質の単離に用いられ得る、このため
に、ゲル濾過、ゲルクロマトグラフィー、限外耐過の諸
方法ならひにｐｐ１７が希薄な緩衝溶液から弱塩基性の
イオン交換剤に結合され、そこから高き度の強電解性塩
類濃度しくより杓ひ溶離され得るという粘性もまた利用
され有る。
ＰＰ、７の菖′化捷たはこの石臼）尚の他の蛋白ηから
の分離に壱効な各種の手段の合理的な組合わせによりＰ
Ｐｊ７が単離されイ！する。
の分離に壱効な各種の手段の合理的な組合わせによりＰ
Ｐｊ７が単離されイ！する。
ｐｐ１７の高化のための本発明の個々の１・ψ作段階を
対象と１て以下に記述し、ｆた富化操作の絹合わせによ
シ達成されたＰＰ１７の硝製のための操作法を示す。
対象と１て以下に記述し、ｆた富化操作の絹合わせによ
シ達成されたＰＰ１７の硝製のための操作法を示す。
実施例は、免疫吸着法の応用によるｐｐｌ ７の単離を
記述する。ヒトの胎盤からの水抽出液を直接に免疫吸着
法にかけることができる。抽出液中のＰＰ１７濃度は比
較的に低いので、最初にｐｐｌ７を抽出液の予備分画操
作によシ特異的に富化することが目的に適合する。
記述する。ヒトの胎盤からの水抽出液を直接に免疫吸着
法にかけることができる。抽出液中のＰＰ１７濃度は比
較的に低いので、最初にｐｐｌ７を抽出液の予備分画操
作によシ特異的に富化することが目的に適合する。
従って、大量の蛋白質の分画操作に適する各種の方法例
えば中性塩、有機カチオンまたはアルコールによる分画
的沈殿あるいはゲル濾過またはイオン交換クロマトグラ
フィーによる分離等を参考にして基礎に採用することが
できる。
えば中性塩、有機カチオンまたはアルコールによる分画
的沈殿あるいはゲル濾過またはイオン交換クロマトグラ
フィーによる分離等を参考にして基礎に採用することが
できる。
胎盤蛋白質の単離に際して、水溶性アクリジン塩基およ
び硫酸アンモニウムによる複合分画操作が多くの場合に
目的に適合することが知られている。これはＰＰ１７の
単離にも応用され、実施例Ａにも記述される。
び硫酸アンモニウムによる複合分画操作が多くの場合に
目的に適合することが知られている。これはＰＰ１７の
単離にも応用され、実施例Ａにも記述される。
それ以上の富化のためには、随伴蛋白質の一部分がアル
コールを用いる沈殿操作により更に分離除去される。
コールを用いる沈殿操作により更に分離除去される。
しかしながら実施例中に示される富化のための各操作段
階は強制的ではなく、捷だそこに記述される系列順序逆
りに行なわねばならないことはない、 免疫吸着操作の段階も才た、例えばｐＨ２〜４好ましく
はｐＨ２，５の０５モル西巌グリシンーＨＣ／綬衝液に
対する透析を応用した後の１＋ＩＩえは調製Ｔｈ、気泳
動および等電点フォーカス測定等の他の分離法をもって
代替することができろ。
階は強制的ではなく、捷だそこに記述される系列順序逆
りに行なわねばならないことはない、 免疫吸着操作の段階も才た、例えばｐＨ２〜４好ましく
はｐＨ２，５の０５モル西巌グリシンーＨＣ／綬衝液に
対する透析を応用した後の１＋ＩＩえは調製Ｔｈ、気泳
動および等電点フォーカス測定等の他の分離法をもって
代替することができろ。
ｐｐｌ７の高度精製のためには、セファデックスＧ−１
００によるゲル濾過、ＤＩＥＡＦｉｉ−セファデックス
によるイオン交換クロマトグラフィーおよび反転免疫吸
着を使用できることが知られた。ｐｐｌ ７は抗原性を
有するので、ＰＰ１７のイ央出には分離操作による分画
において得られる変数値のほかに免疫化学的方法もまた
有用である。動物をこの蛋白質で免疫処置すると特異的
な抗体が産生される。
００によるゲル濾過、ＤＩＥＡＦｉｉ−セファデックス
によるイオン交換クロマトグラフィーおよび反転免疫吸
着を使用できることが知られた。ｐｐｌ ７は抗原性を
有するので、ＰＰ１７のイ央出には分離操作による分画
において得られる変数値のほかに免疫化学的方法もまた
有用である。動物をこの蛋白質で免疫処置すると特異的
な抗体が産生される。
この目的のために使用可能な抗血清は、下記のようにし
て得られる。
て得られる。
２−エトキシ−６，９−ジアミノアクリジンラクテート
および硫酸アンモニウムを用いる胎盤抽出液の分画［「
Ａｒｃｈ、 Ｇｙｎｉｉｋｏｌ、Ｊ第２１０巻第４４０
頁（１９７１炬）〕において、ＰＰ１７は主として胎盤
分画■に入る。この分画を０．５モル濃度のグリシン−
ＨＣＪ緩衝液（ｐＨ２，５）に対して１４時間透析し、
それを中和した後生理的食塩水に対して透析する。この
分画で家兎を免疫処置することによ９１種の多価抗血清
が得られ、そしてそれを用いてｐｐｌ７がｔ屯田され得
る。この抗血清は正常なヒト血清およびｐｐｌ７を含有
しない胎盤分画で吸収することにより抗原ｐｐ１７に対
してさらに高度に特択的にされ得る。この特異的抗血清
は一方ではｐｐｌ７の免疫学的検出に、また他方ではｐ
ｐｌ７の富化および単かに用いイ４Ｉる免疫吸着剤の調
製に役立つ。
および硫酸アンモニウムを用いる胎盤抽出液の分画［「
Ａｒｃｈ、 Ｇｙｎｉｉｋｏｌ、Ｊ第２１０巻第４４０
頁（１９７１炬）〕において、ＰＰ１７は主として胎盤
分画■に入る。この分画を０．５モル濃度のグリシン−
ＨＣＪ緩衝液（ｐＨ２，５）に対して１４時間透析し、
それを中和した後生理的食塩水に対して透析する。この
分画で家兎を免疫処置することによ９１種の多価抗血清
が得られ、そしてそれを用いてｐｐｌ７がｔ屯田され得
る。この抗血清は正常なヒト血清およびｐｐｌ７を含有
しない胎盤分画で吸収することにより抗原ｐｐ１７に対
してさらに高度に特択的にされ得る。この特異的抗血清
は一方ではｐｐｌ７の免疫学的検出に、また他方ではｐ
ｐｌ７の富化および単かに用いイ４Ｉる免疫吸着剤の調
製に役立つ。
本発明に従って得られる高１８鞘製ＰＰ１７％・用いて
、既知方法により動物をφ投処的して、それにより直接
に単一特異性の抗１１（Ｌ渭が調製される。
、既知方法により動物をφ投処的して、それにより直接
に単一特異性の抗１１（Ｌ渭が調製される。
１５、場において寒天を含むゲル中で分離後のｐｐｌ７
と家兎の特異的抗血清との９・疫学的反応を第１ａ図に
示す。これとの夕）１比において？ｉ”ｙ Ｉ ｂ図は
ヒトの血清（ＵＳ）に対する家兎のｔＩＬ血苗の免疫学
的反応により１］祝化された蛋白ヂ１の分離を示す。
と家兎の特異的抗血清との９・疫学的反応を第１ａ図に
示す。これとの夕）１比において？ｉ”ｙ Ｉ ｂ図は
ヒトの血清（ＵＳ）に対する家兎のｔＩＬ血苗の免疫学
的反応により１］祝化された蛋白ヂ１の分離を示す。
ｐｐｌ７の免疫学的検出のため（ｔこ（・ま、０ｕｃｈ
ｔｅ ｒ １ｏｎｙ氏によるゲル拡散法（５ｃｈｕｌ
ｔｚｅおよびＨｅ ｒｅｍａｎｓ両氏編［Ｍｏ１ｅｃｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏ−
ｔｅｉｎｓ Ｊ第１巻第１３４頁参照〕または放射免疫
ｄｊｌｌ定法および酵素免疫測定法のようなさらに痛感
度の方法を用い得る。
ｔｅ ｒ １ｏｎｙ氏によるゲル拡散法（５ｃｈｕｌ
ｔｚｅおよびＨｅ ｒｅｍａｎｓ両氏編［Ｍｏ１ｅｃｕ
ｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏ−
ｔｅｉｎｓ Ｊ第１巻第１３４頁参照〕または放射免疫
ｄｊｌｌ定法および酵素免疫測定法のようなさらに痛感
度の方法を用い得る。
ＰＰ１７は多少なりとも胎盤「特異的」蛋昧質である。
このような蛋白質の検出および定量は診断法的意義を有
する。すなわち一方では妊娠経過の監視に、他方では栄
譬膜に特異的な腫瘍ならびに非栄養膜性の腫瘍の検出お
よび病状経過の監視ならびにこのような疾患における治
療の調整に関してである。
する。すなわち一方では妊娠経過の監視に、他方では栄
譬膜に特異的な腫瘍ならびに非栄養膜性の腫瘍の検出お
よび病状経過の監視ならびにこのような疾患における治
療の調整に関してである。
ｐｐｌ７はまた、ＰＰ１７を検出および定量するための
抗血清の調製に用いられ得る。
抗血清の調製に用いられ得る。
本発明は下記の実施例中に明示される。
実施例
Ａ）胎盤よりの抽出ならびにリバノールおよび硫酸アン
モニウムを用いる抽出液の分画冷凍保存したヒト胎盤１
，０００Ｆ４を切断ミキサー中で細断し０．４％（９７
１００ｍ１）の食塩溶液１．０ＯＯＪで抽出した。組織
残渣を遠心により分離除去の後に、抽出液を２〔１％酢
酸でｐＨ６，［１に調整し、そこへ２−エトキシ−６，
９−ジアミノアクリジンラクテート（ヘキスト社製品す
バノール■）の３％ （＆／１［］０ｒｎｆｆ） 宿１
（＋２００１を攪拌しつつ混入した。沈殿物を遠心分離
して投棄した。上清に１％（ｇ／ｌｔｊ Ｏｍ／）鯖の
ベントナイ）Ａ（エルブスレー社製品）を混入し、２矧
定ＮａＯＨ液を加えてｐＨ７，０に調整しそして濾過し
だ。炉液に６０％（＆／１００η１・Ｉ）にの硫酸アン
モニウムを攪拌しつつ徐々に加えた。これによりＰＰ、
７は他の蛋白質と共に沈降した。沈降物をｐ過分離して
約１２Ｋｖの浸潤なペーストが得られ、これを以下「Ａ
分画」と称する。
モニウムを用いる抽出液の分画冷凍保存したヒト胎盤１
，０００Ｆ４を切断ミキサー中で細断し０．４％（９７
１００ｍ１）の食塩溶液１．０ＯＯＪで抽出した。組織
残渣を遠心により分離除去の後に、抽出液を２〔１％酢
酸でｐＨ６，［１に調整し、そこへ２−エトキシ−６，
９−ジアミノアクリジンラクテート（ヘキスト社製品す
バノール■）の３％ （＆／１［］０ｒｎｆｆ） 宿１
（＋２００１を攪拌しつつ混入した。沈殿物を遠心分離
して投棄した。上清に１％（ｇ／ｌｔｊ Ｏｍ／）鯖の
ベントナイ）Ａ（エルブスレー社製品）を混入し、２矧
定ＮａＯＨ液を加えてｐＨ７，０に調整しそして濾過し
だ。炉液に６０％（＆／１００η１・Ｉ）にの硫酸アン
モニウムを攪拌しつつ徐々に加えた。これによりＰＰ、
７は他の蛋白質と共に沈降した。沈降物をｐ過分離して
約１２Ｋｖの浸潤なペーストが得られ、これを以下「Ａ
分画」と称する。
Ｂ）エタノールによる分画
Ａ分画５００ｇを水４００ ｍｅに溶解し、４℃におい
て生理的食塩水に対して透析した。透析の後に５ ％
（ｇ／ Ｉ Ｄ ０ｍ１）のＮａＣ１溶ｔｆ’ｔ、 ’
ｃ加えることによシ伝導度を１５ｍ５に調整した。しか
る後溶液を０℃に冷却し、９６チのエタノールを攪拌し
つつ徐々にアルコール最終濃度が２０％（り／１００
ｍｌ ）に達するまで混入した。沈殿物を遠心除去した
。しかる後上清を水に対し、そして次に１七ル／ｌのＮ
ａＣ６および０．１％（？ ／ １００ ｍｌ ）のＮ
ａＮ３を含む０，１モル濃度のトリス−Ｈ（Ｊ緩衝液（
ｐＨａ、 Ｏ、緩衝液■と称する）に対して透析した。
て生理的食塩水に対して透析した。透析の後に５ ％
（ｇ／ Ｉ Ｄ ０ｍ１）のＮａＣ１溶ｔｆ’ｔ、 ’
ｃ加えることによシ伝導度を１５ｍ５に調整した。しか
る後溶液を０℃に冷却し、９６チのエタノールを攪拌し
つつ徐々にアルコール最終濃度が２０％（り／１００
ｍｌ ）に達するまで混入した。沈殿物を遠心除去した
。しかる後上清を水に対し、そして次に１七ル／ｌのＮ
ａＣ６および０．１％（？ ／ １００ ｍｌ ）のＮ
ａＮ３を含む０，１モル濃度のトリス−Ｈ（Ｊ緩衝液（
ｐＨａ、 Ｏ、緩衝液■と称する）に対して透析した。
終局的に蛋白質は６８％（１１／ １１ｉ ０ｍｌ ）
の固体状硫酸アンモニウムを加えることにより沈降せし
められた。沈降物を水に溶解し、それを前記の緩衝液］
に対して透析した。これにより、ｐｐｌ７の平均３５
ｔｒｙを含有する溶液（Ｂ分画）約８５ ［１ｍｅが得
られた。
の固体状硫酸アンモニウムを加えることにより沈降せし
められた。沈降物を水に溶解し、それを前記の緩衝液］
に対して透析した。これにより、ｐｐｌ７の平均３５
ｔｒｙを含有する溶液（Ｂ分画）約８５ ［１ｍｅが得
られた。
Ｃ）免疫吸着法によるｐｐｌ７の富化
１、免疫吸着剤の調製
家兎の抗ｐｐ１７血消４００ｒｎｌを０．０２２モル濃
の燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）に対して透析し、免疫グ
ロブリンの分離のためにＤＥＡＥ−セルロースクロマト
グラフィーにかけた。免疫グロブリン分画（蛋白質量５
．９５１Ｆ）に、予め臭比シアン７４，４２で活性化さ
れた１片別精製の顆粒状アカロース（ファルマシア社製
品セファロース■） ５９５ ｆを混合して相体に共有
結合させた。このと１１個製操作は、Ｒ，Ａ、ｙｅｎ氏
−その他［１’−Ｎａ １シ１ｒｅ Ｊ ｍ ２１４巻
第１３０２頁（１９Ａ７年）〕により記述されている。
の燐酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）に対して透析し、免疫グ
ロブリンの分離のためにＤＥＡＥ−セルロースクロマト
グラフィーにかけた。免疫グロブリン分画（蛋白質量５
．９５１Ｆ）に、予め臭比シアン７４，４２で活性化さ
れた１片別精製の顆粒状アカロース（ファルマシア社製
品セファロース■） ５９５ ｆを混合して相体に共有
結合させた。このと１１個製操作は、Ｒ，Ａ、ｙｅｎ氏
−その他［１’−Ｎａ １シ１ｒｅ Ｊ ｍ ２１４巻
第１３０２頁（１９Ａ７年）〕により記述されている。
このようにして調製された免疫吸着剤を用いて胎盤蛋白
ＪＰ４．ｐｐ１７をその溶液手“「にｐｐｌ ７を富化
された胎盤外内から単離し倚た。
ＪＰ４．ｐｐ１７をその溶液手“「にｐｐｌ ７を富化
された胎盤外内から単離し倚た。
２、免疫吸着操作の実施
免疫吸着剤をｍｋ ｔｒｉ ｇ Ｉｔ （Ｎａに１１．
０七ル／ｌ およびＮａＮ３０．１チを含有する０１モ
ル一度のトリス−ＨＣｌ綾南液、ｐＨ８，１中に懸γ姉
し、しかる後クロマトグラフカラム（５，ＯＸ ２１
ｃｒｎ ）にフｆＬ ｊ（Ｑし、緩衝液■をさらに注加
した。′次にＢ分画の半弼″をカラムに装入し、これに
よりｐｐｌ７は免疫吸着的に結合された。しかる後緩衝
液■をカラムに注加し、終局的には吸着された蛋白質を
３モル濃度のナオシアン化カリウム溶液により溶離した
。ｐｐｌ７を含有する溶離液を緩衝液■に対して透析し
、限外濾過によシ約ｊ５ｍ／に濃縮した。
０七ル／ｌ およびＮａＮ３０．１チを含有する０１モ
ル一度のトリス−ＨＣｌ綾南液、ｐＨ８，１中に懸γ姉
し、しかる後クロマトグラフカラム（５，ＯＸ ２１
ｃｒｎ ）にフｆＬ ｊ（Ｑし、緩衝液■をさらに注加
した。′次にＢ分画の半弼″をカラムに装入し、これに
よりｐｐｌ７は免疫吸着的に結合された。しかる後緩衝
液■をカラムに注加し、終局的には吸着された蛋白質を
３モル濃度のナオシアン化カリウム溶液により溶離した
。ｐｐｌ７を含有する溶離液を緩衝液■に対して透析し
、限外濾過によシ約ｊ５ｍ／に濃縮した。
吸着操作１回当りの収量はＰＰ１７６■であった。
カラ人中の免疫吸着剤はｐｐｌ７の溶離後直ちに緩衝液
１で中和し、徹底的に洗浄し、それをＰＰ１７の免疫吸
着的結合のために更新して用いた。
１で中和し、徹底的に洗浄し、それをＰＰ１７の免疫吸
着的結合のために更新して用いた。
Ｄ） ｐｐｌ７の高度精製
免疫吸着操作により得られた蛋白質は、まだしばしば非
特異的に結合された血清蛋白質および他の胎盤蛋白質に
より不純化された。血清随伴蛋白質の主要部分の分離除
去は、セファデックス（）−１００を用いるゲルｐ過に
よシ達成された。
特異的に結合された血清蛋白質および他の胎盤蛋白質に
より不純化された。血清随伴蛋白質の主要部分の分離除
去は、セファデックス（）−１００を用いるゲルｐ過に
よシ達成された。
残余の随伴蛋白餡に、次に反転あるいはネガティブ免疫
吸着すなわち相体に結合された抗不ｉ１蛋白質抗体を用
いる方法により除去さ′Ｉｌた。これは本質的にヒトの
胎盤ラクトゲン（ＨＰＪ、、） ｉよひ免疫グロブリン
に関する。
吸着すなわち相体に結合された抗不ｉ１蛋白質抗体を用
いる方法により除去さ′Ｉｌた。これは本質的にヒトの
胎盤ラクトゲン（ＨＰＪ、、） ｉよひ免疫グロブリン
に関する。
ｐｐｌ、４．Ｊ品中に時々なお微相に存在した赤血球石
臼質は、終局的にはＤＥＡＥ−セファテックスクロマト
グラフ４−により除去し得た、ｐｐｌ７をそこで０．０
１モル′ａ度のトリス−ＨｔＪ緩衝液中（ｐＨ７、０）
でカラムに装入して吸着させ、しがる後ＮａＣＡｌ Ｏ
〜２ ％ （り／ＩＤＯ＋＋＋／りの直線的地濃度勾配
により溶離した。赤血球蛋白Ｗはその時イメン交換剤に
一層強く吸着されており、ＰＰ＋７の後でようやくカラ
ムから溶離された。
臼質は、終局的にはＤＥＡＥ−セファテックスクロマト
グラフ４−により除去し得た、ｐｐｌ７をそこで０．０
１モル′ａ度のトリス−ＨｔＪ緩衝液中（ｐＨ７、０）
でカラムに装入して吸着させ、しがる後ＮａＣＡｌ Ｏ
〜２ ％ （り／ＩＤＯ＋＋＋／りの直線的地濃度勾配
により溶離した。赤血球蛋白Ｗはその時イメン交換剤に
一層強く吸着されており、ＰＰ＋７の後でようやくカラ
ムから溶離された。
第１ａ図は電場において寒天を含むゲル中で分離後のｐ
ｐｌ ７と家兎の特異的抗血清との免疫学的反応を示す
。 第１ｂ図はヒトの血清（Ｈ８）に対する家兎の抗血清の
免疫学的反応によシ可視化された蛋白質の分離を示す。 代理 人 弁理士 山 下 白１ 、（・、゛ ・じ−″□
ｐｌ ７と家兎の特異的抗血清との免疫学的反応を示す
。 第１ｂ図はヒトの血清（Ｈ８）に対する家兎の抗血清の
免疫学的反応によシ可視化された蛋白質の分離を示す。 代理 人 弁理士 山 下 白１ 、（・、゛ ・じ−″□
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）下記特性すなわち ａ）電気泳動的易動度がβ１−およびα２−グロフＩＪ
ンの中間の範囲にあること、 ｂ）等電点ｆ）ｉ ５．２５±０．２０であること、Ｃ
）沈降係数Ｓ０ が２．７±０． Ｉ Ｓ ｆあルコ
ト、２０、ｗ ｄ） ドデシルイ希酸ナトリウム（ＥＩＤＳ） ’ｉ金
含有るポリアクリルアミドゲル中において測定された分
子量が３８，０００±２，０００であること、 １％ ｅ）吸光係に＊ Ｅ １（Ｍ（２８０ｎｍ ）が８．５
±０．４であること、 ｆ） ２．１±０．９％の炭水化物部分中にマンツー
−Ｘｏ、３＝Ｉ：０．２％、ガラ久ドース０．４±０．
２％、キシロース０．２ ±０．１％、１寸−アセチル
グルコサミン１．０±０．６％お上ぴＮ−アセチルノイ
ラミン酸０，２±０．１チを含有することを特徴とする
蛋白質ＰＰ１．。 ２、特許請求の範囲第１項記載の諸変数値を有する蛋白
質を含有するヒト胎盤よりの抽出物を蛋白質単離のだめ
の多くの既知方法の組合わせによる処理に付し、それに
より上記の緒特性を有する蛋白質を含有する物袈を得、
それから蛋白質をイ好ることを７１！！ｌ徴とする、偶
−許請求の範囲第１項記載の？Ｕ白質を取得するための
方法。 ３）ヒト胎盤よりの抽出（吻を上記の諸処理方法すなわ
ち （１） ｐＨ５〜８のψｖ、囲および３０〜５０％飽
、オＵにおける硫酸アンモニウムでの沈降、 （２）ｐＨ７〜９の間および塙基磯Ｂ Ｏ，４〜ｏ、ｓ
ｙ／１００ ｍｌにおける水溶性のアクリジン塩基で
の沈降、 （３）ｐＨ７０および２０％（容量）寸でのアルコール
濃度における希薄な塩溶液中の随伴蛋白質の沈降、 （４） ｐＨａＯにおける電気泳動的分離およびβ１
−グロブリンとα２−グロブリンとの中間の易動度を有
する分画の取得、 （５） Ｔ）Ｈ５，１〜５．４の範囲における等重点
フォーカスの決定、 （６）ｐＨ２〜４の緩衝液に対する透析および沈降した
不純物の分離除去、 （７）分子［２０，０００〜６０． ［１００の蛋白質
を取得するためのゲルｐ過、 （８）＠白質の弱塩基性イオン交換剤への吸着および溶
離、 （９）免疫吸着操作 のうちの少なくとも一つにイ′：１しそしてＰＰ１７を
富化した分画を取得することを特徴とする特許請求の範
囲第１項記載の蛋白質を濃縮する方法。 ４）蛋白質に対して特異的な抗体よりとの冴白質を取得
するだめの特許請求の範囲第１項記載の浜白質の使用。 ５）壜白質の検出および氷槽のだめの免疫学的方法にお
ける所白儒の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3228503.5 | 1982-07-30 | ||
| DE19823228503 DE3228503A1 (de) | 1982-07-30 | 1982-07-30 | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)7(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5944321A true JPS5944321A (ja) | 1984-03-12 |
| JPH0354679B2 JPH0354679B2 (ja) | 1991-08-20 |
Family
ID=6169725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58137893A Granted JPS5944321A (ja) | 1982-07-30 | 1983-07-29 | 新規な蛋白質およびその取得方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4468345A (ja) |
| EP (1) | EP0100522B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5944321A (ja) |
| AT (1) | ATE38388T1 (ja) |
| AU (1) | AU555759B2 (ja) |
| CA (1) | CA1213212A (ja) |
| DE (2) | DE3228503A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62169728A (ja) * | 1986-01-21 | 1987-07-25 | Kowa Co | トロンビン結合性物質およびその製法 |
| JPH06206026A (ja) * | 1992-09-15 | 1994-07-26 | Wagner Spray Tech Corp | ペイント吸込管用フィルタアセンブリ |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3230996A1 (de) * | 1982-08-20 | 1984-02-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)3(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3315000A1 (de) * | 1983-04-26 | 1984-10-31 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)4(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3334405A1 (de) * | 1983-09-23 | 1985-04-04 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Membranassoziierte proteine (mp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)), verfahren zu ihrer gewinnung sowie ihre verwendung |
| DE3338480A1 (de) * | 1983-10-22 | 1985-05-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)0(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3404563A1 (de) * | 1984-02-09 | 1985-08-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3410694A1 (de) * | 1984-03-23 | 1985-10-03 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3418888A1 (de) * | 1984-05-21 | 1985-11-21 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)8(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| EP0302459A3 (en) * | 1987-08-04 | 1990-02-07 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Human placenta-derived thermostable cell growth factor and a process for production thereof |
| US5968477A (en) | 1994-01-24 | 1999-10-19 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator |
| US20030220233A1 (en) * | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
| CA2190727C (en) * | 1994-05-19 | 2006-07-18 | Sudhakar Kasina | Aromatic amine substituted bridged nitrogen and sulfur donor atom ligands for imaging |
| US6005083A (en) | 1997-03-28 | 1999-12-21 | Neorx Corporation | Bridged aromatic substituted amine ligands with donor atoms |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2042430A (en) * | 1934-06-18 | 1936-05-26 | Lakeland Foundation | Pregnancy antigen |
| DE2221261A1 (de) * | 1972-04-29 | 1973-11-15 | Behringwerke Ag | Ap-glykoproteine und verfahren zu ihrer isolierung |
| DE2640387C3 (de) * | 1976-09-08 | 1981-01-22 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebespezifisches Protein und Verfahren zu dessen Herstellung |
| DE2842467A1 (de) * | 1978-09-29 | 1980-04-10 | Behringwerke Ag | Neues ubiquitaeres gewebsprotein pp tief 8 |
| DE2952792A1 (de) * | 1979-12-31 | 1981-07-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)15(pfeil abwaerts)) mit immunsuppressiver wirkung |
| DE3013724A1 (de) * | 1980-04-10 | 1981-10-15 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp (pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowieseine verwendung |
| DE3109629A1 (de) * | 1981-03-13 | 1982-09-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)6(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung" |
-
1982
- 1982-07-30 DE DE19823228503 patent/DE3228503A1/de not_active Withdrawn
-
1983
- 1983-07-27 AT AT83107375T patent/ATE38388T1/de active
- 1983-07-27 EP EP83107375A patent/EP0100522B1/de not_active Expired
- 1983-07-27 DE DE8383107375T patent/DE3378368D1/de not_active Expired
- 1983-07-29 CA CA000433645A patent/CA1213212A/en not_active Expired
- 1983-07-29 US US06/518,349 patent/US4468345A/en not_active Expired - Fee Related
- 1983-07-29 AU AU17453/83A patent/AU555759B2/en not_active Ceased
- 1983-07-29 JP JP58137893A patent/JPS5944321A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62169728A (ja) * | 1986-01-21 | 1987-07-25 | Kowa Co | トロンビン結合性物質およびその製法 |
| JPH06206026A (ja) * | 1992-09-15 | 1994-07-26 | Wagner Spray Tech Corp | ペイント吸込管用フィルタアセンブリ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0100522B1 (de) | 1988-11-02 |
| EP0100522A2 (de) | 1984-02-15 |
| AU1745383A (en) | 1984-02-02 |
| DE3378368D1 (en) | 1988-12-08 |
| CA1213212A (en) | 1986-10-28 |
| DE3228503A1 (de) | 1984-02-02 |
| AU555759B2 (en) | 1986-10-09 |
| US4468345A (en) | 1984-08-28 |
| ATE38388T1 (de) | 1988-11-15 |
| JPH0354679B2 (ja) | 1991-08-20 |
| EP0100522A3 (en) | 1986-05-21 |
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