JPS595275B2 - 新規な抗生物質生産菌 - Google Patents
新規な抗生物質生産菌Info
- Publication number
- JPS595275B2 JPS595275B2 JP21554482A JP21554482A JPS595275B2 JP S595275 B2 JPS595275 B2 JP S595275B2 JP 21554482 A JP21554482 A JP 21554482A JP 21554482 A JP21554482 A JP 21554482A JP S595275 B2 JPS595275 B2 JP S595275B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substance
- soluble
- culture
- agar medium
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な抗生物質生産菌に関する。
本発明者らは、土壌微生物より各種菌株を分離し、それ
らが生産する抗生物質を探索した結果、５ 兵庫県氷上
郡山南町の土壌から分離されたＫＣ−７０３８株が、グ
ラム陽性菌ならびにグラム陰性菌に対して抗菌力を示す
新規抗生物質を生産することを見い出し、さらにその培
養液より該物質を単離することに成功した。
らが生産する抗生物質を探索した結果、５ 兵庫県氷上
郡山南町の土壌から分離されたＫＣ−７０３８株が、グ
ラム陽性菌ならびにグラム陰性菌に対して抗菌力を示す
新規抗生物質を生産することを見い出し、さらにその培
養液より該物質を単離することに成功した。
１０この抗生物質はその物理的、化学的及び生物学的性
質が、既知抗生物質のそれと異なることから新規物質で
あることが認められ、ＫＡ−７０３８物質と命名された
。
質が、既知抗生物質のそれと異なることから新規物質で
あることが認められ、ＫＡ−７０３８物質と命名された
。
ＫＡ−７０３８物質は、通常は分子式
１５Ｃ１７Ｈ３５０５Ｎ５で示されるアミノ配糖体（Ｋ
Ａ−７０３８１）を主とし、そのほか分子式Ｃ１３Ｈ２
８０４Ｎ４で示されるアミノ配糖体（ＫＡ−７０３８１
）及び分子式Ｃ１５Ｈ３２０４Ｎ４で示されるアミノ配
糖体（ＫＡ−７０３８■）からなる混■０ 合物として
生産される。
Ａ−７０３８１）を主とし、そのほか分子式Ｃ１３Ｈ２
８０４Ｎ４で示されるアミノ配糖体（ＫＡ−７０３８１
）及び分子式Ｃ１５Ｈ３２０４Ｎ４で示されるアミノ配
糖体（ＫＡ−７０３８■）からなる混■０ 合物として
生産される。
本発明のＫＣ−７０３８株（微工研菌寄第４３８８号）
は、兵庫県氷上郡山南町で採取された土壌ｌｙを常法に
より滅菌食塩水１０ｍｌに懸濁させ、窒素源としてのＮ
Ｚ−アミン・タイプＡク５（シエフイールド・ケミカル
社製）及びグルコースを含有する寒天培地（ｐＨ７．０
〜７．２）に混和し、２７℃で７日間培養したのち、生
じた集落を採取し、次いで常法により純化して得ること
ができる。
は、兵庫県氷上郡山南町で採取された土壌ｌｙを常法に
より滅菌食塩水１０ｍｌに懸濁させ、窒素源としてのＮ
Ｚ−アミン・タイプＡク５（シエフイールド・ケミカル
社製）及びグルコースを含有する寒天培地（ｐＨ７．０
〜７．２）に混和し、２７℃で７日間培養したのち、生
じた集落を採取し、次いで常法により純化して得ること
ができる。
このものは下記の菌学的性質を有する。各３０種培地上
の性質は、特に指示しない限り２７℃で２１日間培養し
、常法に従い観察したものである。また色の表示はカラ
ー ・ハーモニー ・マニュアル（コンテイナー ・コ
ーポレーション・オブ・アメリカ）の分類に従つた。１
５１、形態学的性質 本菌株は、各種培地上で真性気菌糸を着生し、菌糸は単
純分枝し、短い螺旋状の胞子鎖を形成する。
の性質は、特に指示しない限り２７℃で２１日間培養し
、常法に従い観察したものである。また色の表示はカラ
ー ・ハーモニー ・マニュアル（コンテイナー ・コ
ーポレーション・オブ・アメリカ）の分類に従つた。１
５１、形態学的性質 本菌株は、各種培地上で真性気菌糸を着生し、菌糸は単
純分枝し、短い螺旋状の胞子鎖を形成する。
螺旋は２〜３回巻いている。胞子のうの形成は観察され
ない。胞子は楕円形ないし円筒形（０．５〜０．６μＸ
Ｏ．８〜１．２μ）で、胞子鎖に２０個ないしそれ以上
形成される。胞子鎖の表面はやや粗面状を呈するが、明
確なこぶ状を呈するには至らず平滑と認められる。１．
各種培地上の性状 １．しよ糖・硝酸塩寒天培地 生育：貧弱、無色。
ない。胞子は楕円形ないし円筒形（０．５〜０．６μＸ
Ｏ．８〜１．２μ）で、胞子鎖に２０個ないしそれ以上
形成される。胞子鎖の表面はやや粗面状を呈するが、明
確なこぶ状を呈するには至らず平滑と認められる。１．
各種培地上の性状 １．しよ糖・硝酸塩寒天培地 生育：貧弱、無色。
気菌糸：中程度、粉状、コバートブラウン（２１１）。
可溶性色素：なし。
２．グルコース・アスパラギン寒天培地
生育：中程度、クリーム（１ｉｃａ）。
気菌糸：中程度、粉状、白色（ａ）ないしコバートブラ
ウン（２１１）。
ウン（２１１）。
３．グリセリン・アスパラギン寒天培地
生育：貧弱、無色。
気菌糸゜貧弱、粉状、白色（ａ）。
可溶性色素：なし。
４．殿粉・無機塩寒天培地
生育：良好、パール（３ｂａ）。
気菌糸：良好、粉状、白色（ａ）ないしシルバーグレイ
（３ｆ）。
（３ｆ）。
可溶性色素：なし。
５．チロシン寒天培地
生育：良好、アイポリ一（２ｄｂ）。
気菌糸．中程度、粉状、白色（ａ）。
可溶性色素：なし。
６栄養寒天培地
生育：良好、ハブ（２ｆｂ）。
気菌糸：なし。
可溶性色素：なし。
７．イースト・麦芽寒天培地
生育：良好、ライトホウイート（２ｅａ）。
気菌糸：貧弱、粉状、白色（ａ）。可溶性色素：なし。
８．オートミール寒天培地
生育：中程度、無色。
気菌糸：良好、粉状、コバートブラウン（２１１）。
可溶性色素：なし。
９．ペプトン・イースト・鉄寒天培地
生育：良好、クリーム（１−Ｆｃａ）。
気菌糸：なし。
可溶性色素：わずかに黄色。
．生理的性質
１．生育温度範囲：１７〜３７℃。
２．ゼラチンの液化：陽性。
３，殿粉の加水分解：陽性。
４．ミルクに対する作用：生育しない。
５．メラニン様色素の生成：陰性。
．炭素源の資化性
ブリドハム・ゴツトリーブ寒天培地上では、下記に示す
炭素源は利用しない。
炭素源は利用しない。
Ｌ−アラピノース、Ｄ−キシロース、
Ｄ−グルコース、Ｄ−フラグドーズ、
しよ糖、イノシトール、
Ｌ−ラムノース、ラフイノース、
Ｄ−マンニツト。
前記の培地から硫酸銅を除いた培地上ではＤ−キシロー
ス及びＤ−グルコースを利用する。
ス及びＤ−グルコースを利用する。
以上の諸性質から、ＫＣ−７０３８株はストレプトミセ
ス属に属するものと考えられ、胞子鎖が螺旋状を呈し、
気菌糸が白色ないし灰色で、胞子表面が平滑で可溶性色
素を産生せず、糖の利用性のうち分類上安定した性状を
示すとされているイノシトール及びしよ糖を利用しない
菌株を、バージーズ・マニユアル・オブ・デイターミネ
イテイブ・バクテリオロジ一第８版（１９７５年）、シ
ヤーリング及びゴツトリーブのＩＳＰ菌株、ならびにワ
ツクスマン著［ザ・アクチノマイセテス」に記載の既知
菌株の中から検索すると、ストレフトミセス・アルゲン
テオルス（ＩＳＰ５２２６）、ストレプトミセス・グリ
ゼオフスカス（ＩＳＰ５ｌ９ｌ）及びストレプトミセス
・ピリドミセテイカス（ＩＳＰ５Ｏ２４）の３株があげ
られる。しかしＫＣ−７０３８株はイノシトール及びし
よ糖を除く他の炭素源の利用性及び胞子の微妙な形態に
おいて、ストレプトミセス・アルゲンテオルス及びスト
レプトミセス・グリセオフスカスとは明らかに異なる。
一方ストレプトミセス・ピリドミセテイカスとは、プリ
ドハム・ゴツトリーブ寒天培地上ですべての炭素源を利
用しない点でＫＣ−７０３８株は共通するが、下記の諸
点で明らかな相違が認められる。すなわち、ストレプト
ミセス・ピリドミセテイカスはＳＰの各種培地上での生
育が、ＫＣ一７０３８株に比較して悪く、気菌糸の着生
がほとんどみられない。
ス属に属するものと考えられ、胞子鎖が螺旋状を呈し、
気菌糸が白色ないし灰色で、胞子表面が平滑で可溶性色
素を産生せず、糖の利用性のうち分類上安定した性状を
示すとされているイノシトール及びしよ糖を利用しない
菌株を、バージーズ・マニユアル・オブ・デイターミネ
イテイブ・バクテリオロジ一第８版（１９７５年）、シ
ヤーリング及びゴツトリーブのＩＳＰ菌株、ならびにワ
ツクスマン著［ザ・アクチノマイセテス」に記載の既知
菌株の中から検索すると、ストレフトミセス・アルゲン
テオルス（ＩＳＰ５２２６）、ストレプトミセス・グリ
ゼオフスカス（ＩＳＰ５ｌ９ｌ）及びストレプトミセス
・ピリドミセテイカス（ＩＳＰ５Ｏ２４）の３株があげ
られる。しかしＫＣ−７０３８株はイノシトール及びし
よ糖を除く他の炭素源の利用性及び胞子の微妙な形態に
おいて、ストレプトミセス・アルゲンテオルス及びスト
レプトミセス・グリセオフスカスとは明らかに異なる。
一方ストレプトミセス・ピリドミセテイカスとは、プリ
ドハム・ゴツトリーブ寒天培地上ですべての炭素源を利
用しない点でＫＣ−７０３８株は共通するが、下記の諸
点で明らかな相違が認められる。すなわち、ストレプト
ミセス・ピリドミセテイカスはＳＰの各種培地上での生
育が、ＫＣ一７０３８株に比較して悪く、気菌糸の着生
がほとんどみられない。
またＫＣ−７０３８株はミルク培地上で発育せず、ゼラ
チンの液化が陽性であるのに対し、ストレプトミセス・
ピリドミセテイカスはゼラチンの液化が陰性で、ミルク
培地で生育する。更に硫酸銅を除いたプリドハム・ゴツ
トリーブ培地上でのグルコースとしよ糖の利用性におい
て明らかに相違する。またこれらの代射産物も異なつて
いる。これらの結果から、本菌株に該当する既知菌株は
存在せず、本菌株は新菌株であると認められ、本発明者
らはこれをストレプトミセスＳｐ．黒ＫＣ一７０３８と
命名した。
チンの液化が陽性であるのに対し、ストレプトミセス・
ピリドミセテイカスはゼラチンの液化が陰性で、ミルク
培地で生育する。更に硫酸銅を除いたプリドハム・ゴツ
トリーブ培地上でのグルコースとしよ糖の利用性におい
て明らかに相違する。またこれらの代射産物も異なつて
いる。これらの結果から、本菌株に該当する既知菌株は
存在せず、本菌株は新菌株であると認められ、本発明者
らはこれをストレプトミセスＳｐ．黒ＫＣ一７０３８と
命名した。
本発明の抗生物質生産菌は、菌糸が単純分枝し、短い螺
旋状の胞子鎖を形成し、気菌糸が各種培地上で白色ない
しコバートブラウンを呈し、プリドハム・ゴツトリーブ
寒天培地上でＬ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−
グルコース、Ｄ−フラグドーズ、しよ糖、イノシトール
、Ｌ−ラムノース、ラフイノース及びＤ−マンニツトを
炭素源として利用せず、硫酸銅を除いたプリド・・ム・
ゴットリーブ寒天培地でＤ−キシロース及びＤ−グルコ
ースを利用し、抗生物質ＫＡ−７０３８生産能を有する
ストレプトミセスＳＰ．ｆＫＣ−７０３８である。
旋状の胞子鎖を形成し、気菌糸が各種培地上で白色ない
しコバートブラウンを呈し、プリドハム・ゴツトリーブ
寒天培地上でＬ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−
グルコース、Ｄ−フラグドーズ、しよ糖、イノシトール
、Ｌ−ラムノース、ラフイノース及びＤ−マンニツトを
炭素源として利用せず、硫酸銅を除いたプリド・・ム・
ゴットリーブ寒天培地でＤ−キシロース及びＤ−グルコ
ースを利用し、抗生物質ＫＡ−７０３８生産能を有する
ストレプトミセスＳＰ．ｆＫＣ−７０３８である。
本菌株の培養には通常の放線菌の培養方法が用いられる
。
。
培養基の炭素源としては種々のものが用いられるが、例
えばブドウ糖、殿粉、しよ糖、果糖、デキストリン、糖
蜜、グリセリンなどを単独で又は組み合せて用いること
ができる。更に菌の資化性によつては炭化水素、アルコ
ール類、有機酸、植物油なども用いられる。窒素源とし
ては、例えば塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿
素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、大豆粉、酵母
工キズ、乾燥酵母、ペプトン、肉工キズ、コーンステイ
ープリカ一、カザミノ酸、デイステイラーズソリユブル
などが単独で又は組み合せて用いられる。その他必要に
応じて無機塩、例えば食塩、硝酸塩、炭酸カルシウム、
塩化カリウム、塩化コバルト、硫酸鉄など、ならびに微
量の重金属を添加することができる。
えばブドウ糖、殿粉、しよ糖、果糖、デキストリン、糖
蜜、グリセリンなどを単独で又は組み合せて用いること
ができる。更に菌の資化性によつては炭化水素、アルコ
ール類、有機酸、植物油なども用いられる。窒素源とし
ては、例えば塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、尿
素、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、大豆粉、酵母
工キズ、乾燥酵母、ペプトン、肉工キズ、コーンステイ
ープリカ一、カザミノ酸、デイステイラーズソリユブル
などが単独で又は組み合せて用いられる。その他必要に
応じて無機塩、例えば食塩、硝酸塩、炭酸カルシウム、
塩化カリウム、塩化コバルト、硫酸鉄など、ならびに微
量の重金属を添加することができる。
更に菌の発育を助け、ＫＡ−７０３８物質の生産を促進
する有機及び無機物質を適宜に添加することができる。
通気培養法を用いる場合には、更に脂肪油、シリコーン
油、パラフインなどの消泡剤が用いられる。培養方法と
してぱ、固体培地上での培養も可能であるが、一般抗生
物質生産の方法と同様に液体培養法、特に深部培養法を
用いることが好ましい。
する有機及び無機物質を適宜に添加することができる。
通気培養法を用いる場合には、更に脂肪油、シリコーン
油、パラフインなどの消泡剤が用いられる。培養方法と
してぱ、固体培地上での培養も可能であるが、一般抗生
物質生産の方法と同様に液体培養法、特に深部培養法を
用いることが好ましい。
培養は好気的条件下で行われ、培養温度は一般に２０〜
３５℃で、２４〜２７℃付近が好ましい。ＫＡ−７０３
８物質の生産頃振盪培養、タンク培養のいずれの場合も
２〜１０日間培養を行うと、本抗生物質が培養液中に生
産蓄積される。培養液中の生産量が最大に達した時点で
培養を停止し、培養物から目的の抗生物質を単離精製す
る。培養▲液から本物質を単離精製するには、ＫＡ−７
０３８物質が水に可溶で一般の有機溶媒に難溶な水溶性
塩基性物質であるため、通常の水溶性塩基性抗生物質の
単離精製法を利用することができる。例えばイオン交換
樹脂、活性炭などによる吸脱着法、セルロース、シリカ
ゲル、アルミナなどを用いるカラムクロマトグラフイ一
、補助剤として高級脂肪酸を加えて、ブタノール、アミ
ルアルコールなどで抽出する方法などを適宜組み合わせ
て用いることができる。培養▲液を、好ましくはＰＨ７
〜９に調製したのち、弱酸性陽イオン交換樹脂のカラム
に通すと、ＫＡ−７０３８物質が吸着される。
３５℃で、２４〜２７℃付近が好ましい。ＫＡ−７０３
８物質の生産頃振盪培養、タンク培養のいずれの場合も
２〜１０日間培養を行うと、本抗生物質が培養液中に生
産蓄積される。培養液中の生産量が最大に達した時点で
培養を停止し、培養物から目的の抗生物質を単離精製す
る。培養▲液から本物質を単離精製するには、ＫＡ−７
０３８物質が水に可溶で一般の有機溶媒に難溶な水溶性
塩基性物質であるため、通常の水溶性塩基性抗生物質の
単離精製法を利用することができる。例えばイオン交換
樹脂、活性炭などによる吸脱着法、セルロース、シリカ
ゲル、アルミナなどを用いるカラムクロマトグラフイ一
、補助剤として高級脂肪酸を加えて、ブタノール、アミ
ルアルコールなどで抽出する方法などを適宜組み合わせ
て用いることができる。培養▲液を、好ましくはＰＨ７
〜９に調製したのち、弱酸性陽イオン交換樹脂のカラム
に通すと、ＫＡ−７０３８物質が吸着される。
これを０．１〜３．０規定のアルカリ又は酸で溶出し、
活性成分を凍結乾燥すると、ＫＡ−７０３８物質の粗粉
末が得られる。弱酸性陽イオン交換樹脂としては、例え
ばアンバーライトＩＲＣ−５０，．ＩＲＣ−８４又はＣ
Ｇ−５０（ローム・アンドハース社製）、ダイヤイオン
ＷＫ−１０又はＷＫ−２０（三菱化成社製）などが用い
られる。
活性成分を凍結乾燥すると、ＫＡ−７０３８物質の粗粉
末が得られる。弱酸性陽イオン交換樹脂としては、例え
ばアンバーライトＩＲＣ−５０，．ＩＲＣ−８４又はＣ
Ｇ−５０（ローム・アンドハース社製）、ダイヤイオン
ＷＫ−１０又はＷＫ−２０（三菱化成社製）などが用い
られる。
アルカリとしては、例えばアンモニア水、水酸化ナトリ
ウム水溶液など、酸としては例えば蟻酸、塩酸、硫酸な
どが用いられる。培養▲液をＰＨ７〜９に調整し、目的
物質を活性炭に吸着させ、酸性の水又は塩酸メタノール
で溶出させる方法も利用できる。こうして得られる粗粉
末を、弱酸性陽イオン交換樹脂、ＣＭ−セフアデツクス
、ＣＭ−セルロースなどに吸着させ、アンモニア水、蟻
酸アンモニウム水溶液などを用いて濃度勾配法又は濃度
段階法で溶出することにより、それぞれ遊離塩基として
ＫＡ−７０３８１物質、ＫＡ−７０３８物質及びＫＡ−
７０３８１物質が順次溶出され、各成分に分離すること
ができる。
ウム水溶液など、酸としては例えば蟻酸、塩酸、硫酸な
どが用いられる。培養▲液をＰＨ７〜９に調整し、目的
物質を活性炭に吸着させ、酸性の水又は塩酸メタノール
で溶出させる方法も利用できる。こうして得られる粗粉
末を、弱酸性陽イオン交換樹脂、ＣＭ−セフアデツクス
、ＣＭ−セルロースなどに吸着させ、アンモニア水、蟻
酸アンモニウム水溶液などを用いて濃度勾配法又は濃度
段階法で溶出することにより、それぞれ遊離塩基として
ＫＡ−７０３８１物質、ＫＡ−７０３８物質及びＫＡ−
７０３８１物質が順次溶出され、各成分に分離すること
ができる。
上記各成分は各々濃縮後凍結乾燥することにょり粉末化
でき、さらにこれを例えばセルロース、強塩基性陰イオ
ン交換樹脂などを用いるカラムクロマトグラフイ一によ
つて精製し、純品を得ることができる。
でき、さらにこれを例えばセルロース、強塩基性陰イオ
ン交換樹脂などを用いるカラムクロマトグラフイ一によ
つて精製し、純品を得ることができる。
これらの遊離塩基（１，．１及び）はそれぞれ無機酸例
えば塩酸、硫酸、臭化水素酸など又は有機酸例えば酢酸
、しゆう酸などを加え、常法により対応する酸付加塩に
導くことができる。
えば塩酸、硫酸、臭化水素酸など又は有機酸例えば酢酸
、しゆう酸などを加え、常法により対応する酸付加塩に
導くことができる。
ＫＡ−７０３８物質は、ＫＡ−７０３８１物質より末端
のグリシル基を除去した構造を有するので、ＫＡ−７０
３８１物質をアルカリ又は酸で分解することによつても
ＫＡ−７０３８物質を製造することができる。
のグリシル基を除去した構造を有するので、ＫＡ−７０
３８１物質をアルカリ又は酸で分解することによつても
ＫＡ−７０３８物質を製造することができる。
この際作用させるアルカリ試薬としては、例えば水酸化
ナトリウム、水酸化バリウムなどの０．１〜４．０規定
水溶液、あるいは酸性試薬としては、例えば０．１〜１
．０規定の塩酸、硫酸などを用いることができる。ＫＡ
−７０３８１．同ｌ及び同はいずれも塩基性水溶性の白
色物質で、主としてグラム陽性菌及び陰性菌に対して抗
菌性を示し、更に各種の既知抗生物質に耐性を有する菌
に対しても抗菌性を示す有用な新抗生物質である。
ナトリウム、水酸化バリウムなどの０．１〜４．０規定
水溶液、あるいは酸性試薬としては、例えば０．１〜１
．０規定の塩酸、硫酸などを用いることができる。ＫＡ
−７０３８１．同ｌ及び同はいずれも塩基性水溶性の白
色物質で、主としてグラム陽性菌及び陰性菌に対して抗
菌性を示し、更に各種の既知抗生物質に耐性を有する菌
に対しても抗菌性を示す有用な新抗生物質である。
本物質の理化学的及び生物学的性質は下記のとおりであ
る。
る。
ＫＡ−７０３８１物質（遊離塩基）
（１）外観：白色粉末
（２）分子式：Ｃｌ７Ｈ３５Ｏ５Ｎ５
（３）元素分析値：
ＣＨＮ
計算値（％） ５２．４２９．０６１７．９８実験値（
％） ５１，９８８．７１１７．６４（４）分子量：３
８９（マススペクトル）（５）融点：８３〜９０℃ （６）比旋光度：〔α〕甘＋１２０．５）（ｃ＝１、Ｈ
２Ｏ）（７）紫外線吸収スペクトル： ２２０〜３６０ｎｍで特異的な吸収を示さず、末端吸収
のみを示す。
％） ５１，９８８．７１１７．６４（４）分子量：３
８９（マススペクトル）（５）融点：８３〜９０℃ （６）比旋光度：〔α〕甘＋１２０．５）（ｃ＝１、Ｈ
２Ｏ）（７）紫外線吸収スペクトル： ２２０〜３６０ｎｍで特異的な吸収を示さず、末端吸収
のみを示す。
（８）赤外線吸収スペクトル：
臭化カリウム中にペレツトした赤外線吸収スベクトルは
第１図に示すとおりである。
第１図に示すとおりである。
（９）溶剤に対する溶解性：
水に極めて溶けやすい。
メタノールに易溶。エタノールにやや溶ける。アセトン
にわずかに溶ける。クロロホルム、酢酸エチル、エーテ
ル、ヘキサン、石油エーテルに不溶。ＧＯ）呈色反応： ニンヒドリン反応及びライドン・スミス反応に陽性。
にわずかに溶ける。クロロホルム、酢酸エチル、エーテ
ル、ヘキサン、石油エーテルに不溶。ＧＯ）呈色反応： ニンヒドリン反応及びライドン・スミス反応に陽性。
坂口反応、塩化第二鉄反応及びフエーリング反応に陰性
。ａ１）安定性：ＰＨ２，Ｏ〜８，０で安定。
。ａ１）安定性：ＰＨ２，Ｏ〜８，０で安定。
（自）ＮＭＲ値：塩酸塩としてδＤ２Ｏ（Ｐｐｍ）２．
７５（３Ｈ．．ｓ．．Ｎ−Ｑｂ）３．１２（３Ｈ．ｓ．
Ｎ−ＣＨ３）３．４５（３Ｈ．．ｓ１０Ｃも） ４．０６（２Ｈ，．ｓ．Ｃ０Ｃ川Ｎ） ５．３２（１Ｈ，．ｄ．．Ｊ−３．５Ｈｚ１アノメリツ
クＨ）（自）マススペクトル値： ｍ／Ｚ３９Ｏ（Ｍ＋＋１）、３６０１２７６、２５８、
２３０１１４３０４）▲紙クロマトグラフイ一 Ｒｆ値：０．８６ ▲紙：ワツトマン篇１ 溶媒：クロロホルムーメタノール一１７％アンモニア水
（２：１：１）の下層Ａ５）薄層クロマトグラフイーリ プレートとしては、ＴＬＣアルミニウムシート・シリカ
ゲル６０−Ｆ２５４Ｏ．２ｍＴＩＬ（タルク社製）を用
いた。
７５（３Ｈ．．ｓ．．Ｎ−Ｑｂ）３．１２（３Ｈ．ｓ．
Ｎ−ＣＨ３）３．４５（３Ｈ．．ｓ１０Ｃも） ４．０６（２Ｈ，．ｓ．Ｃ０Ｃ川Ｎ） ５．３２（１Ｈ，．ｄ．．Ｊ−３．５Ｈｚ１アノメリツ
クＨ）（自）マススペクトル値： ｍ／Ｚ３９Ｏ（Ｍ＋＋１）、３６０１２７６、２５８、
２３０１１４３０４）▲紙クロマトグラフイ一 Ｒｆ値：０．８６ ▲紙：ワツトマン篇１ 溶媒：クロロホルムーメタノール一１７％アンモニア水
（２：１：１）の下層Ａ５）薄層クロマトグラフイーリ プレートとしては、ＴＬＣアルミニウムシート・シリカ
ゲル６０−Ｆ２５４Ｏ．２ｍＴＩＬ（タルク社製）を用
いた。
ＫＡ−７０３８川物質（遊離塩基）
（１）外観：白色粉末
（２）分子式：Ｃｌ３Ｈ２８Ｏ４Ｎ４
（３）元素分析値：
（４）分子量：３０４（マススペクトル）（５）融点：
８５〜１０２℃ （６）比旋光度：〔α〕甘＋６１ク（ｃ−１、Ｈ２Ｏ）
（７）紫外線吸収スペクトル：２２０〜３６０ｎｍで特
異的な吸収を示さず、末端吸収のみを示す。
８５〜１０２℃ （６）比旋光度：〔α〕甘＋６１ク（ｃ−１、Ｈ２Ｏ）
（７）紫外線吸収スペクトル：２２０〜３６０ｎｍで特
異的な吸収を示さず、末端吸収のみを示す。
（８）赤外線吸収スペクトル：
臭化カリウム中にペレツトした赤外線吸収スベクトルは
第２図に示すとおりである。
第２図に示すとおりである。
（９）溶剤に対する溶解性：
水に極めて溶けやすい。
メタノールに易溶。エタノールにやや溶ける。アセトン
にわずかに溶ける。クロロホルム、酢酸エチル、エーテ
ル、ヘキサン、石油エーテルに不溶。，．（代）呈色反
応： ニンヒドリン反応及びライドンスミス反応に陽性、坂口
反応、塩化第二鉄反応及びフエーリング反応に陰性。
にわずかに溶ける。クロロホルム、酢酸エチル、エーテ
ル、ヘキサン、石油エーテルに不溶。，．（代）呈色反
応： ニンヒドリン反応及びライドンスミス反応に陽性、坂口
反応、塩化第二鉄反応及びフエーリング反応に陰性。
（自）安定性：ＰＨ２．Ｏ〜９．０で安定。
０２｝ＮＭＲ値：塩酸塩ど・して
δＤ２Ｏ（Ｐｐｍ）：２．８３（３Ｈ．．ｓ，．ＮＣＨ
３）５．８４（１Ｈ．ｄ．Ｊ＝３．５Ｈｚアノメリツク
Ｈ）（自）マススペクトル値： ｍ／Ｚ３Ｏ５（Ｍ＋＋ｌ）、２１４、２０５、１７７、
１２９ａ４）▲紙クロマトグラフイー： Ｒｆ値：０．１８ ▲紙：ワツトマン黒１ 溶媒：クロロホルムーメタノール１７％アンモニア水（
２：１：１）の下層（自）薄層クロマトグラフイーリ プレートとしては、ＴＬＣアルミニウムシート・シリカ
ゲル６０−Ｆ２５４Ｏ．２ｍｍ（タルク社製）を用いた
。
３）５．８４（１Ｈ．ｄ．Ｊ＝３．５Ｈｚアノメリツク
Ｈ）（自）マススペクトル値： ｍ／Ｚ３Ｏ５（Ｍ＋＋ｌ）、２１４、２０５、１７７、
１２９ａ４）▲紙クロマトグラフイー： Ｒｆ値：０．１８ ▲紙：ワツトマン黒１ 溶媒：クロロホルムーメタノール１７％アンモニア水（
２：１：１）の下層（自）薄層クロマトグラフイーリ プレートとしては、ＴＬＣアルミニウムシート・シリカ
ゲル６０−Ｆ２５４Ｏ．２ｍｍ（タルク社製）を用いた
。
ＫＡ−７０３８物質（遊離塩基）
（１）外観：白色粉末
（２）分子式：Ｃｌ５Ｈ３２Ｏ４Ｎ４
（３）元素分析値：
（４）分子量：３３２（マススペクトル）（５）融点：
７４〜８３℃ （６）比旋光度：〔α〕帛＋７８ク（ｃ＝０．５、Ｈ２
Ｏ）（７）紫外線吸収スペクトル： ２２０〜３６０ｎｍで特異的な吸収を示さず、末端吸収
のみを示す。
７４〜８３℃ （６）比旋光度：〔α〕帛＋７８ク（ｃ＝０．５、Ｈ２
Ｏ）（７）紫外線吸収スペクトル： ２２０〜３６０ｎｍで特異的な吸収を示さず、末端吸収
のみを示す。
（８）赤外線吸収スペクトル：
臭化カリウム中にペレツトした赤外線吸収スベクトルは
第３図に示すとおりである。
第３図に示すとおりである。
（９）溶剤に対する溶解性：
水に極めて溶けやすい。
メタノールに易溶。エタノールにやや溶ける。アセトン
にわずかに溶ける。クロロホルム、酢酸エチル、エーテ
ル、ヘキサン、石油エーテルに不溶。ＡＯ）呈色反応： ニンヒドリン反応及びライドンスミス反応に陽性。
にわずかに溶ける。クロロホルム、酢酸エチル、エーテ
ル、ヘキサン、石油エーテルに不溶。ＡＯ）呈色反応： ニンヒドリン反応及びライドンスミス反応に陽性。
坂口反応、塩化第二鉄反応及びフエーリング反応に陰性
。（自）安定性：ＰＨ２．Ｏ〜９．０で安定。
。（自）安定性：ＰＨ２．Ｏ〜９．０で安定。
０２） ＮＭＲ値：塩酸塩として
δＤ２Ｏ（Ｐｐｍ）２．７３（３Ｈ．ｓ．Ｎ−ＣＨ３）
２．８３（３Ｈ，．ｓ，．Ｎ−Ｃ塩）３．４６（３Ｈ．
ｓ．０Ｃ財） ５．４３（１Ｈ．．ｄ．．Ｊ−３，５Ｈｚ１アノメリツ
クＨ）（自）マススペクトル値： ｍ／Ｚ３３３（Ｍ＋＋１）、３３２、２８３、２３０１
２１９、１９１、１４３ａ４）Ｆ３紙クロマトグラフイ
ー： Ｒｆ値：０．９２ ▲紙：ワツトマン黒１ 溶媒：クロロホルムーメタノール一１７％アンモニア水
（２：１：１）の下層Ａ５）薄層クロマトグラフイーリ プレートとしては、ＴＬＣアルミニウムシート・シリカ
ゲル６０−Ｆ２５４Ｏ．２ｍｍ（タルク社製）を用いた
。
２．８３（３Ｈ，．ｓ，．Ｎ−Ｃ塩）３．４６（３Ｈ．
ｓ．０Ｃ財） ５．４３（１Ｈ．．ｄ．．Ｊ−３，５Ｈｚ１アノメリツ
クＨ）（自）マススペクトル値： ｍ／Ｚ３３３（Ｍ＋＋１）、３３２、２８３、２３０１
２１９、１９１、１４３ａ４）Ｆ３紙クロマトグラフイ
ー： Ｒｆ値：０．９２ ▲紙：ワツトマン黒１ 溶媒：クロロホルムーメタノール一１７％アンモニア水
（２：１：１）の下層Ａ５）薄層クロマトグラフイーリ プレートとしては、ＴＬＣアルミニウムシート・シリカ
ゲル６０−Ｆ２５４Ｏ．２ｍｍ（タルク社製）を用いた
。
これらの理化学的性質から、本物質はそれぞれ下記の構
造を有することが認められた。
造を有することが認められた。
抗菌作用．
ＫＡ−７０３８物質（１、ｌ及び）の各種微生物に対す
る抗菌スペクトルは第１表に示すとおりである。
る抗菌スペクトルは第１表に示すとおりである。
毒性：
ＫＡ−７０３８１物質のマウスに対する急性毒性は、１
００ワ／Ｋｇ以上（静脈内投与）及び４００Ｔ１ｆ７／
Ｋ９以上（腹腔内投与）である。
００ワ／Ｋｇ以上（静脈内投与）及び４００Ｔ１ｆ７／
Ｋ９以上（腹腔内投与）である。
本物質は前述のように広範囲の優れた抗菌スペクトラム
を有することから、抗菌性物質として医薬、動物薬など
として有用である。また本物質は種々の誘導体を合成す
るための出発物質としても有用である。次に本発明の菌
を用いてＫＡ−７０３８物質を製造する場合の具体例を
示す。
を有することから、抗菌性物質として医薬、動物薬など
として有用である。また本物質は種々の誘導体を合成す
るための出発物質としても有用である。次に本発明の菌
を用いてＫＡ−７０３８物質を製造する場合の具体例を
示す。
例１
殿粉４％、大豆粉０．５％、コーンステイーブリカ一４
％、硫酸マグネシウム・七水塩０．０５％、第一リン酸
カリウム０．１％、食塩０．３％及び炭酸カルシウム０
．１％の組成を有し、ＰＨ７．Ｏに調整して滅菌した培
地に、ストレプトミセスＫＣ７Ｏ３８株を接種し２７℃
で約４８時間前培養したものを第１種菌とする。
％、硫酸マグネシウム・七水塩０．０５％、第一リン酸
カリウム０．１％、食塩０．３％及び炭酸カルシウム０
．１％の組成を有し、ＰＨ７．Ｏに調整して滅菌した培
地に、ストレプトミセスＫＣ７Ｏ３８株を接種し２７℃
で約４８時間前培養したものを第１種菌とする。
２００１容のタンクに種菌培地と同じ培地に綿実油１％
を添加した培地１００１を仕込み、第１種菌５００ｍ１
を接種し、２７℃で通気撹拌方式（２２０ｒｐｍ、通気
量５０１／分）により４日培養する。
を添加した培地１００１を仕込み、第１種菌５００ｍ１
を接種し、２７℃で通気撹拌方式（２２０ｒｐｍ、通気
量５０１／分）により４日培養する。
培養終了後、培養物に希硫酸を添加してＰＨを２．０に
調整したのち、ｆ過助剤としてダイカライト（ダイカラ
イト・オリエント社製）を加えて菌体を▲去する。
調整したのち、ｆ過助剤としてダイカライト（ダイカラ
イト・オリエント社製）を加えて菌体を▲去する。
▲液に希水酸化ナトリウム水溶液を加えてＰＨを８．０
に調整し、弱酸性陽イオン交換樹脂アンバーライトＩＲ
Ｃ−５０（ＮＨ４＋型）のカラムに通し、水洗したのち
１規定アンモニア水で溶出して活性区分を集め、減圧下
に濃縮後凍結乾燥すると、ＫＡ−７０３８物質の粗粉末
９．７７が得られる。この粗粉末９．７ｆを蒸留水１１
に溶解し、希硫酸でＰＨを７．０に調整し、陽イオン交
換樹脂ＣＭセフアデツクスＣ−２５（ＮＨ４＋型）のカ
ラム（３×１５０ｃｍ）に通し、水洗したのち０．０５
規定のアンモニア水５１と０．５規定のアンモニア水５
１の間で濃度勾配法を用いて毎時６０ｍ１の速度で溶出
する。
に調整し、弱酸性陽イオン交換樹脂アンバーライトＩＲ
Ｃ−５０（ＮＨ４＋型）のカラムに通し、水洗したのち
１規定アンモニア水で溶出して活性区分を集め、減圧下
に濃縮後凍結乾燥すると、ＫＡ−７０３８物質の粗粉末
９．７７が得られる。この粗粉末９．７ｆを蒸留水１１
に溶解し、希硫酸でＰＨを７．０に調整し、陽イオン交
換樹脂ＣＭセフアデツクスＣ−２５（ＮＨ４＋型）のカ
ラム（３×１５０ｃｍ）に通し、水洗したのち０．０５
規定のアンモニア水５１と０．５規定のアンモニア水５
１の間で濃度勾配法を用いて毎時６０ｍ１の速度で溶出
する。
溶出液を３０ｍ１ずつ分画し、各画分の活性をバチルス
・ズブチリスの寒天平板を用いてペーパーデイスク法で
測定する。活性画分１１３〜１３４を凍結乾燥すると、
ＫＡ一７０３８１物質の粗粉末０．４７が得られ、活性
画分１３５〜１４９からはＫＡ−７０３８１物質と物質
の混合物の粗粉末０．３６７が得られる。
・ズブチリスの寒天平板を用いてペーパーデイスク法で
測定する。活性画分１１３〜１３４を凍結乾燥すると、
ＫＡ一７０３８１物質の粗粉末０．４７が得られ、活性
画分１３５〜１４９からはＫＡ−７０３８１物質と物質
の混合物の粗粉末０．３６７が得られる。
更に活性画分１５０〜１７２から、無色不定形粉末とし
てＫＡ−７０３８１物質の遊離塩基の純品０．９ｔが得
られる。ＫＡ−７０３８１の粗粉末０．３１ｆ７を蒸留
水に溶解し、弱酸性陽イオン交換樹脂ＣＭ−セフアデツ
クスＣ−２５（ＮＨ４＋型）に吸着させたのち水洗し、
水２．２５．ｅと０．５規定のアンモニア水２．２５１
の間で濃度勾配法を用いて溶出する。
てＫＡ−７０３８１物質の遊離塩基の純品０．９ｔが得
られる。ＫＡ−７０３８１の粗粉末０．３１ｆ７を蒸留
水に溶解し、弱酸性陽イオン交換樹脂ＣＭ−セフアデツ
クスＣ−２５（ＮＨ４＋型）に吸着させたのち水洗し、
水２．２５．ｅと０．５規定のアンモニア水２．２５１
の間で濃度勾配法を用いて溶出する。
前記と同様に活性を測定して活性画分を集め、凍結乾燥
すると、無色不定形粉末としてＫＡ７Ｏ３８ｌ物質の遊
離塩基０，２１７が得られる。
すると、無色不定形粉末としてＫＡ７Ｏ３８ｌ物質の遊
離塩基０，２１７が得られる。
ＫＡ−７０３８１物質と物質の混合物０．２６ｙをセル
ロース粉末３００ｍ１を充填したカラム上に均一な層と
して充填する。クロロホルム−メタノール−１７％アン
モニア水（２：１：１）の下層部を溶出液として毎時３
０ｍ１の速度で溶離し、溶離液を１０ｍ１ずつ分画して
前記と同様な方法で活性を測定する。初めにＫＡ−７０
３８１物質が溶出し、次いでＫＡ−７０３８ｍ物質が溶
出する。ＫＡ−７０３８物質を含む画分を集め、減圧下
に溶媒を留去し、再び水２０ｍ１に溶解して弱酸性イオ
ン交換樹脂ＣＭ−セフアデツクスＣ−２５（ＮＨ４＋型
）５ｍ１のカラムに通す。水洗したのち０．５規定のア
ンモニア水で溶出し、活性画分を集めて凍結乾燥すると
、無色不定形粉末としてＫＡー７０３８物質の遊離塩基
０．０５ｙが得られる。こうして得られるＫＡ−７０３
８１物質、物質及び物質の遊離塩基は、それぞれ前記の
諸性質を示す。例２ ＫＡ−７０３８１物質１４．５ヮを水２ｍ１に溶解し、
水酸化バリウムの６水塩７００ヮを加え、１００℃で３
．５時間加熱する。
ロース粉末３００ｍ１を充填したカラム上に均一な層と
して充填する。クロロホルム−メタノール−１７％アン
モニア水（２：１：１）の下層部を溶出液として毎時３
０ｍ１の速度で溶離し、溶離液を１０ｍ１ずつ分画して
前記と同様な方法で活性を測定する。初めにＫＡ−７０
３８１物質が溶出し、次いでＫＡ−７０３８ｍ物質が溶
出する。ＫＡ−７０３８物質を含む画分を集め、減圧下
に溶媒を留去し、再び水２０ｍ１に溶解して弱酸性イオ
ン交換樹脂ＣＭ−セフアデツクスＣ−２５（ＮＨ４＋型
）５ｍ１のカラムに通す。水洗したのち０．５規定のア
ンモニア水で溶出し、活性画分を集めて凍結乾燥すると
、無色不定形粉末としてＫＡー７０３８物質の遊離塩基
０．０５ｙが得られる。こうして得られるＫＡ−７０３
８１物質、物質及び物質の遊離塩基は、それぞれ前記の
諸性質を示す。例２ ＫＡ−７０３８１物質１４．５ヮを水２ｍ１に溶解し、
水酸化バリウムの６水塩７００ヮを加え、１００℃で３
．５時間加熱する。
反応終了後、反応液に炭酸ガスを通し、生成する炭酸バ
リウムを除去する。▲液を弱酸性陽イオン交換樹脂ＣＭ
−セフアデツクスＣ−２５（ＮＨ４＋型）３ｍ１のカラ
ムに通し、活性物質を吸着させる。水洗したのち、１規
定のアンモニア水で溶出し、活性画分を集めて凍結乾燥
すると、無色不定形粉末としてＫＡ７Ｏ３８物質の遊離
塩基６，５即が得られる。
リウムを除去する。▲液を弱酸性陽イオン交換樹脂ＣＭ
−セフアデツクスＣ−２５（ＮＨ４＋型）３ｍ１のカラ
ムに通し、活性物質を吸着させる。水洗したのち、１規
定のアンモニア水で溶出し、活性画分を集めて凍結乾燥
すると、無色不定形粉末としてＫＡ７Ｏ３８物質の遊離
塩基６，５即が得られる。
第１図はＫＡ−７０３８１物質の赤外線吸収スベクトル
、第２図はＫＡ−７０３８川物質の赤外線吸収スペクト
ル、第３図はＫＡ−７０３８物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
、第２図はＫＡ−７０３８川物質の赤外線吸収スペクト
ル、第３図はＫＡ−７０３８物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
Claims (1)
- １ 菌糸が単純分枝し、短い螺旋状の胞子鎖を形成し、
気菌糸が各種培地上で白色ないしコバートブラウンを呈
し、プリドハム・ゴツトリーブ寒天培地上でＬ−アラビ
ノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フラク
トース、しよ糖、イノシトール、Ｌ−ラムノース、ラフ
ィノース及びＤ−マンニットを炭素源として利用せず、
硫酸銅を除いたプリドハム・ゴツトリーブ寒天培地でＤ
−キシロース及びＤ−グルコースを利用し、抗生物質Ｋ
Ａ−７０３８生産能を有するストレプトミセスｓｐ．Ｎ
ｏ．ＫＣ−７０３８。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21554482A JPS595275B2 (ja) | 1982-12-10 | 1982-12-10 | 新規な抗生物質生産菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21554482A JPS595275B2 (ja) | 1982-12-10 | 1982-12-10 | 新規な抗生物質生産菌 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53034972A Division JPS5819680B2 (ja) | 1978-03-28 | 1978-03-28 | 新規な抗生物質及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58121790A JPS58121790A (ja) | 1983-07-20 |
| JPS595275B2 true JPS595275B2 (ja) | 1984-02-03 |
Family
ID=16674181
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21554482A Expired JPS595275B2 (ja) | 1982-12-10 | 1982-12-10 | 新規な抗生物質生産菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS595275B2 (ja) |
-
1982
- 1982-12-10 JP JP21554482A patent/JPS595275B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58121790A (ja) | 1983-07-20 |
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