JPS5982083A - 浮遊細胞の高濃度培養法並びにその装置 - Google Patents
浮遊細胞の高濃度培養法並びにその装置Info
- Publication number
- JPS5982083A JPS5982083A JP57189243A JP18924382A JPS5982083A JP S5982083 A JPS5982083 A JP S5982083A JP 57189243 A JP57189243 A JP 57189243A JP 18924382 A JP18924382 A JP 18924382A JP S5982083 A JPS5982083 A JP S5982083A
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- JP
- Japan
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- cells
- culture
- medium
- cell
- tube
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は動植物細胞の浮遊培養法蓮ひにその装置に関す
る。
る。
更に詳しくは、本発明は培養槽底部に開口部を有し、細
胞沈澱管を兼ねた培養上清排出管と新鮮培地添加用の導
管を設けたことを特徴とする浮遊細胞の高濃度培養装置
並びに該装置を用い新鮮培地添加用の導管から培地を添
加しつつ培養上清排出管より培養上清を排出しつつ培養
を行なうことを特徴とする浮遊細胞の高濃度培養法に関
する。
胞沈澱管を兼ねた培養上清排出管と新鮮培地添加用の導
管を設けたことを特徴とする浮遊細胞の高濃度培養装置
並びに該装置を用い新鮮培地添加用の導管から培地を添
加しつつ培養上清排出管より培養上清を排出しつつ培養
を行なうことを特徴とする浮遊細胞の高濃度培養法に関
する。
動植物細胞、特に動物細胞の浮遊培養は、リンパ系細胞
、骨髄系細胞、白血球系細胞、Ｈθ１ａ細胞など上皮様
細胞の培養の際に試みられている。
、骨髄系細胞、白血球系細胞、Ｈθ１ａ細胞など上皮様
細胞の培養の際に試みられている。
こ扛らの細胞の培養を可能とする装置として、少量試験
用には、例えば、スピンナーフラスコ、大量培養の際に
は一般的には微生物培養用のジ２ Ｘ １０６ｃｅｌｌ
ｓ／′＋＋＋１前後の細胞濃度しか得られノロジー ア
ンド バイオエンジニアリング＋７．Ｐ、６２９（１９
７５年）〕。
用には、例えば、スピンナーフラスコ、大量培養の際に
は一般的には微生物培養用のジ２ Ｘ １０６ｃｅｌｌ
ｓ／′＋＋＋１前後の細胞濃度しか得られノロジー ア
ンド バイオエンジニアリング＋７．Ｐ、６２９（１９
７５年）〕。
高濃度の細胞培養液を得るためには、培養液中の老廃物
を除き、新鮮な培地を添加することにより達成さ扛るこ
とが知ら扛ている（同上）。
を除き、新鮮な培地を添加することにより達成さ扛るこ
とが知ら扛ている（同上）。
老廃物を除き、新鮮培地を添加するためには培養により
得らｎた細胞と培地上清とを無菌的に効率よく分離する
ことが必要となる１゜細胞と培地」二清とを分離する方
法として種々のフィルターにより細胞を分離する方法が
行なわれているが、フィルターの目詰まり、丑だフィル
ターを通過する際の圧損により細胞が死滅する等の問題
がある。
得らｎた細胞と培地上清とを無菌的に効率よく分離する
ことが必要となる１゜細胞と培地」二清とを分離する方
法として種々のフィルターにより細胞を分離する方法が
行なわれているが、フィルターの目詰まり、丑だフィル
ターを通過する際の圧損により細胞が死滅する等の問題
がある。
本発明者らは細胞と培地上清の分離方法並び養に用いら
扛る培地の比重より大きいことを利用したものであり、
沈澱管と培養」−清排出管を兼ねた管を培養槽に設ける
ことにより、肢管を通じてポンプ等で吸引さ牡る培養液
中の細胞は下部に沈澱し、結果的には」二清のみが、外
部に排出さ扛細胞の濃縮が可能となる。
扛る培地の比重より大きいことを利用したものであり、
沈澱管と培養」−清排出管を兼ねた管を培養槽に設ける
ことにより、肢管を通じてポンプ等で吸引さ牡る培養液
中の細胞は下部に沈澱し、結果的には」二清のみが、外
部に排出さ扛細胞の濃縮が可能となる。
本発明装置を用いて浮遊細胞の培養を行々えば、細胞と
培養上清の分離はスムースに且つ連続的に行なうことが
可能で、培養液中の老廃物を除きかつ、新鮮な培地を連
続的に行彦うことも可能となった。その結果、低濃度の
種細胞の仕込みで、高濃度の細胞凝度を有する浮遊細胞
の培養液を伯ることが可能となった。
培養上清の分離はスムースに且つ連続的に行なうことが
可能で、培養液中の老廃物を除きかつ、新鮮な培地を連
続的に行彦うことも可能となった。その結果、低濃度の
種細胞の仕込みで、高濃度の細胞凝度を有する浮遊細胞
の培養液を伯ることが可能となった。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明に用いられる装置は、例えば小試験用には第１図
に示されるが如き、変形スピンナーもので、この数字に
限定されるものではない。
に示されるが如き、変形スピンナーもので、この数字に
限定されるものではない。
形のものも用いうるが培養」二清のポンプ等による吸引
の際、細胞を併せ吸引するのをさける為に、縦長型の方
が好ましい。
の際、細胞を併せ吸引するのをさける為に、縦長型の方
が好ましい。
沈澱管と排出管を兼ねた管は通常培養槽の底部に開口部
を持ち、上部は上ブタをつき抜ける長い直立した管が好
ましい。しかし細胞の沈澱を充分に行なわせ、上清との
分離を充分に行なう為には、蛇管にしてもよい。
を持ち、上部は上ブタをつき抜ける長い直立した管が好
ましい。しかし細胞の沈澱を充分に行なわせ、上清との
分離を充分に行なう為には、蛇管にしてもよい。
又、第１図に示した如く、途中に、例えば球形、ダエン
形、ソロパン球形等のふくらみを設けてもよい１、こｎ
は排出管の下部より設けてもよいし、上部にのみ設けて
も効果がある。
形、ソロパン球形等のふくらみを設けてもよい１、こｎ
は排出管の下部より設けてもよいし、上部にのみ設けて
も効果がある。
管は切り口が円筒状のものが通常用いられるが上部の広
がった円錐管も用いることができる。
がった円錐管も用いることができる。
沈澱管の管径及び容量は任意に変え・得るが、排出スピ
ード及び新鮮培地の添加速度とも関係沈澱管の容量にほ
ぼ比例する。１０７ｃｅｌｌｓ／ ｍｌ以下本発明を実
施例により説明する。
ード及び新鮮培地の添加速度とも関係沈澱管の容量にほ
ぼ比例する。１０７ｃｅｌｌｓ／ ｍｌ以下本発明を実
施例により説明する。
実施例１
１ｔ（直径約１３２■、高さ約２４０論）の培養槽に、
直径２．５ ｃｒｎの円筒管、容積１０〇−を沈澱管と
して用いた。培養槽には、ＲＰＭニー１６４０ （３％
子牛血清添加〕培地を用い、種細ｎｌ：ｌとして、リン
パ芽球細胞であるナマルバｉ％ｌｌｌ Ｉｌｈ＞を７
Ｘ １０５ｃｅｌｌｓ／＋＋＋１！となる様に接種した
。全容量５００ ｍｅに対し１０．５ ｍｅ／ｈｒの速
度で」二清餠出及び新鮮培地の添加を行った。なを、ポ
ンプは、ペリスタティクポンプを用いた１、攪拌回転数
５０ ｒｐｍ 、通気は、１６ ｍ１７ ｍｉｎ 、
３７℃で培養しまた。細ｌ＠数を血球計算根を用いて
チ１１）定した結果を第１４図に示す。なわ゛１２０時
間後には、細胞濃度は６．６ Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ、
／ｍｇに達し、生存率は９６５％であった。
直径２．５ ｃｒｎの円筒管、容積１０〇−を沈澱管と
して用いた。培養槽には、ＲＰＭニー１６４０ （３％
子牛血清添加〕培地を用い、種細ｎｌ：ｌとして、リン
パ芽球細胞であるナマルバｉ％ｌｌｌ Ｉｌｈ＞を７
Ｘ １０５ｃｅｌｌｓ／＋＋＋１！となる様に接種した
。全容量５００ ｍｅに対し１０．５ ｍｅ／ｈｒの速
度で」二清餠出及び新鮮培地の添加を行った。なを、ポ
ンプは、ペリスタティクポンプを用いた１、攪拌回転数
５０ ｒｐｍ 、通気は、１６ ｍ１７ ｍｉｎ 、
３７℃で培養しまた。細ｌ＠数を血球計算根を用いて
チ１１）定した結果を第１４図に示す。なわ゛１２０時
間後には、細胞濃度は６．６ Ｘ １０６ｃｅｌｌｓ、
／ｍｇに達し、生存率は９６５％であった。
比較のために行った細胞沈澱管を用いない１易実施例１
に用いた装置を用い、リンパ芽球細上清排Ｉｆｆ及び新
鮮培地の添加を行い、流速は、（７） ２４時間までは、Ｏｍｅ ／′ｍｅ、２４〜４８時間ま
では１０．５ｍｅ／ ｈｒ、 ４８〜７２時間まで１
１．。
に用いた装置を用い、リンパ芽球細上清排Ｉｆｆ及び新
鮮培地の添加を行い、流速は、（７） ２４時間までは、Ｏｍｅ ／′ｍｅ、２４〜４８時間ま
では１０．５ｍｅ／ ｈｒ、 ４８〜７２時間まで１
１．。
ｍｅ／ｈｒ 、 ７２〜９６時間捷でを１２．５ ｍ
ｅ／ ｈｒ 。
ｅ／ ｈｒ 。
９６〜１２０時間捷で１５ｍｌ／ｈｒ、 １２０〜１
４４時間までを１７．５ ｍｌｌ／ ｈｒ とした。
４４時間までを１７．５ ｍｌｌ／ ｈｒ とした。
・その他の条件は、実施例１と同様に行った。第５図に
その結果を示す。なを１４４時間後の細胞数は、７．２
Ｘ ４０６ｃｅｌｌｓ／ ｍｌに達し、生存率は９１
．０％であった。
その結果を示す。なを１４４時間後の細胞数は、７．２
Ｘ ４０６ｃｅｌｌｓ／ ｍｌに達し、生存率は９１
．０％であった。
第１図は変形スピンナーフラスコ（本体ガラス製）を示
す。 １はガラス製の細胞沈澱管（排出口）、２はガラス製培
地添加口、６はステンレス製のシャフト、４はテフロン
製のサンプリング管、５は７５端、１１は口径約４２聰
、長さ約３７５脳である。 第２図は変形スピンナーフラスコの平面図である。 第３図は、大型培養槽及びそ扛を含む細胞高濃度培養装
置を示す。 １２は、培養槽本体を示し、１３は、細胞沈澱管（排出
管）を示し、１４は攪拌翼を示し、１５は上清排出用ポ
ンプ、１６は培地添加用ポンプ、１７は添加用培地槽、
１８は無菌フィルターを示す。 第４図は、実施例１における培養時間（横軸）と、生細
胞数（縦軸）の関係を表わしたものである。実線（１）
は細胞沈澱管を用いた本発明方法による生細胞数、点線
（２）は通常の培養法により得らｎる生細胞数を表わす
。 第；５図は実施例２における培養時間（横軸）特許出願
人 （１１４）工業技術院長石 坂 誠 − 第１図 第７図 第３図 第４図 時間 手続補正書輸発） １ 事件の表示 昭和５７年特許願第１８９２４３号 ２ 発明の名称 浮遊細胞の高濃度培養法並びにその装置３ 補正をする
者 事件との関係 特許出願人 明細書の発明の詳細な説明の欄、図面の簡単な説明の欄
及び図面の補充 ５ 補正の内容 （１） 明細書の第８ペーし、９行目と１０行目の間に
次の実施例を加入する。 「実施例３ リンパ芽球細胞ナマルバ株７×１０ゝｃｅｌｌｓ ／ｍ
ｌを種細胞として用い、ｂｏｏｍｌのコーンタイプ細胞
沈澱管をそなえた連続培養装置に接種した。細胞沈澱管
の容積は１００ｍ１で、下部開口部と上部最大底辺の半
径の比は１：１０となっている。培養培地としては無血
清培地を用い、基礎培地として、ＲＰＭＩ−１６４０に
ツメ１社′ｌＡ）を用い４ｍｇ／ｍｌのグルタミン、２
５ｕ／ｍｌのペニシリン、２５ ／Ｊ（１／ｍｌのスト
レプトマイシン、１０ｍＭヘペス緩衝液、０．２％の重
曹を加え、血清の代替物として３ ／−Ｊａ ／ｍｌの
インシュリン、た培地で培養した。温度を３７″Ｃ，回
転数５ ＯｒＩｌｍ、上面への通気２０ｍ ｌ ／ｍｉ
ｎ 、とし、培地交換速度を１２ｍ ｌ ／ｈｒへと徐
々に上昇させた。 培養の経時変化を第８図に示す。１４０時間までほぼ直
線的に細胞数は上昇し１４０〜２００時間までの間は徐
々に上昇しく３ ｘ １Ｑ６ｃｅｌｌｓ ／ｍｌに達し
た。 無血清培地であるにかかわらず、本装闘を用いることに
より血清含有培地に劣らない増殖を示した。 対照として行なった通常の培養では、４８時間の培養後
で１．２３Ｘ１０ ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなり、その後
細胞数は減少した。」 （２） 明細用の１０ぺ−じ３行目の後に次の文を（２
） 加える。 ［第６図は変形スピンナーフラスコ（本体ガラス製）の
１例を示す。 １９は逆円錐形沈澱管（排出口）、２０は培地添加口、
２１はサンプリング管、２２は空気入り口、２３は空気
出口、２４は撹拌子を示す。 第７図は逆円錐形細胞沈澱管を用いる大型の細胞高濃度
培養装置の１例を示す。 ２５は培養槽本体、２６は細胞沈澱管、（排出管、２７
は攪拌翼、２８は上清排出用ポンプ、２９は培地添加用
ポンプ、３０は添加用培地槽、３１は無菌フィルターを
示す。 第８図は実施例３における培養時間（横軸）と生細胞数
（縦軸）の関係を表わす。実線１は細胞沈澱管を用いた
本発明方法による生細胞数（ＶＣＣ）点線２は通常の培
養法により得られる生細胞数（ＶＣＣ）を示す・ｊ ６ 添付書類の目録 図面（第６〜８図） １通（８） 第６図 第７図
す。 １はガラス製の細胞沈澱管（排出口）、２はガラス製培
地添加口、６はステンレス製のシャフト、４はテフロン
製のサンプリング管、５は７５端、１１は口径約４２聰
、長さ約３７５脳である。 第２図は変形スピンナーフラスコの平面図である。 第３図は、大型培養槽及びそ扛を含む細胞高濃度培養装
置を示す。 １２は、培養槽本体を示し、１３は、細胞沈澱管（排出
管）を示し、１４は攪拌翼を示し、１５は上清排出用ポ
ンプ、１６は培地添加用ポンプ、１７は添加用培地槽、
１８は無菌フィルターを示す。 第４図は、実施例１における培養時間（横軸）と、生細
胞数（縦軸）の関係を表わしたものである。実線（１）
は細胞沈澱管を用いた本発明方法による生細胞数、点線
（２）は通常の培養法により得らｎる生細胞数を表わす
。 第；５図は実施例２における培養時間（横軸）特許出願
人 （１１４）工業技術院長石 坂 誠 − 第１図 第７図 第３図 第４図 時間 手続補正書輸発） １ 事件の表示 昭和５７年特許願第１８９２４３号 ２ 発明の名称 浮遊細胞の高濃度培養法並びにその装置３ 補正をする
者 事件との関係 特許出願人 明細書の発明の詳細な説明の欄、図面の簡単な説明の欄
及び図面の補充 ５ 補正の内容 （１） 明細書の第８ペーし、９行目と１０行目の間に
次の実施例を加入する。 「実施例３ リンパ芽球細胞ナマルバ株７×１０ゝｃｅｌｌｓ ／ｍ
ｌを種細胞として用い、ｂｏｏｍｌのコーンタイプ細胞
沈澱管をそなえた連続培養装置に接種した。細胞沈澱管
の容積は１００ｍ１で、下部開口部と上部最大底辺の半
径の比は１：１０となっている。培養培地としては無血
清培地を用い、基礎培地として、ＲＰＭＩ−１６４０に
ツメ１社′ｌＡ）を用い４ｍｇ／ｍｌのグルタミン、２
５ｕ／ｍｌのペニシリン、２５ ／Ｊ（１／ｍｌのスト
レプトマイシン、１０ｍＭヘペス緩衝液、０．２％の重
曹を加え、血清の代替物として３ ／−Ｊａ ／ｍｌの
インシュリン、た培地で培養した。温度を３７″Ｃ，回
転数５ ＯｒＩｌｍ、上面への通気２０ｍ ｌ ／ｍｉ
ｎ 、とし、培地交換速度を１２ｍ ｌ ／ｈｒへと徐
々に上昇させた。 培養の経時変化を第８図に示す。１４０時間までほぼ直
線的に細胞数は上昇し１４０〜２００時間までの間は徐
々に上昇しく３ ｘ １Ｑ６ｃｅｌｌｓ ／ｍｌに達し
た。 無血清培地であるにかかわらず、本装闘を用いることに
より血清含有培地に劣らない増殖を示した。 対照として行なった通常の培養では、４８時間の培養後
で１．２３Ｘ１０ ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなり、その後
細胞数は減少した。」 （２） 明細用の１０ぺ−じ３行目の後に次の文を（２
） 加える。 ［第６図は変形スピンナーフラスコ（本体ガラス製）の
１例を示す。 １９は逆円錐形沈澱管（排出口）、２０は培地添加口、
２１はサンプリング管、２２は空気入り口、２３は空気
出口、２４は撹拌子を示す。 第７図は逆円錐形細胞沈澱管を用いる大型の細胞高濃度
培養装置の１例を示す。 ２５は培養槽本体、２６は細胞沈澱管、（排出管、２７
は攪拌翼、２８は上清排出用ポンプ、２９は培地添加用
ポンプ、３０は添加用培地槽、３１は無菌フィルターを
示す。 第８図は実施例３における培養時間（横軸）と生細胞数
（縦軸）の関係を表わす。実線１は細胞沈澱管を用いた
本発明方法による生細胞数（ＶＣＣ）点線２は通常の培
養法により得られる生細胞数（ＶＣＣ）を示す・ｊ ６ 添付書類の目録 図面（第６〜８図） １通（８） 第６図 第７図
Claims (2)
- （１）培養槽底部に開口部を有し、細胞沈澱管を兼ねた
培養上清排出管と、新鮮培地添加用の導管を設けたこと
を特徴とする浮遊細胞の高濃度培養装置。 - （２）培養槽底部に開口部を有し細胞沈澱管を兼ねた培
養上清排出管と新鮮培地添加用の導管を設けた浮遊細胞
の高濃度培養装置を用い、新鮮培地添加用の導管から培
地を添加し同時に培養上清排出管より培養上清を排出し
つつ培養を行なうことを特徴とする浮遊細胞の高濃度培
養法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189243A JPS5982083A (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | 浮遊細胞の高濃度培養法並びにその装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57189243A JPS5982083A (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | 浮遊細胞の高濃度培養法並びにその装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5982083A true JPS5982083A (ja) | 1984-05-11 |
| JPS6136915B2 JPS6136915B2 (ja) | 1986-08-21 |
Family
ID=16238010
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57189243A Granted JPS5982083A (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | 浮遊細胞の高濃度培養法並びにその装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5982083A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6274284A (ja) * | 1985-09-27 | 1987-04-06 | Teijin Ltd | 動物細胞の培養方法 |
| JP2020188691A (ja) * | 2019-05-20 | 2020-11-26 | 株式会社Ihi | 細胞培養装置 |
-
1982
- 1982-10-29 JP JP57189243A patent/JPS5982083A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6274284A (ja) * | 1985-09-27 | 1987-04-06 | Teijin Ltd | 動物細胞の培養方法 |
| JP2020188691A (ja) * | 2019-05-20 | 2020-11-26 | 株式会社Ihi | 細胞培養装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6136915B2 (ja) | 1986-08-21 |
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