JPS5993099A - オリゴヌクレオチド誘導体およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

技術分野 本発明は、一般に、新規オリゴヌクレオチド誘導体に関
する。さらに具体的には、本発明は、ヌクレオチドの塩
基以外の部分にスペーサーを介して保護されたアミン基
を導入してなるオリゴヌクレオチド誘導体に関する。本
発明は、゛まだ、このようなヌクレオチド誘導体の製造
法にも関する。 先行技術 近年、核酸の化学合成は新しい保護基の導入あるいはト
リエステル法、ホスファイト法等の新しい縮合法のｌ：
ｊ４’ｉｆ＝により飛躍的に発展している。また、遺伝
子工学の急速な進歩とあいまって、核酸の化学合成がこ
の分野でも重要な意義をもつようになってきた。例えば
、人工遺伝子を合成し、遺伝子組換え操作を利用して有
用物質の生芹が行なわれている（ヒト成長ホルモン：　
Ｎａｔｕｒｅ＋　２８Ｌ５４４　（１９７９）、白血球
由来インターフェロン：Ｎａｔｕｒｅ、２８７＋　　４
１１　　（１９８０）。　捷た、ハイブリＦ法のための
ゾローグ（Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、＋９、８
７９　（１９８１））とじでや、ｍＲＮＡあるいは一本
鎖ＤＮＡから逆転写酵素あるいはＤＮＡポリメラーゼに
よって二本鎖ＤＮＡ　を合成する際に必・政な鋳型ｆ）
ＮＡに相補的なりＮＡ断片（ゾライマー）として利用す
る例（Ｎｕｃｌ、　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、、　８．４０
５７（１９８０））もある。さらには、核酸を結合させ
た担体を用いるアフイニテイクロマトグラフイー用樹脂
として、オリゴ（ｄＴ）−セルロースまたはポリ（Ｕ）
−アカ。 −スカラムケ使って３′−末端にポリ（Ａ）を含むＲＮ
Ａ　’（（単１４１ｔするという応用例（Ｊ、　Ｂｌｏ
ｃｈｅｍ、＋８１　、９４１．　（１９７７）　）もあ
る。 このように、核酸の有機化学的合成手段は、遺伝子工学
、分子生物学等の分野の研死に多大な寄与ケもたらすも
のである。 本発明者らは、現在まで、オリゴヌクレオチドのイ旧幾
化学的合成分野で同相法を有力な合成手段とじて種々の
オリゴヌクレオチドの合成を行なってその応１−Ｆ４を
４６を討してきたが、特にアフイニテイクロマトグラフ
イー用１封脂あるいは非放射性アフイニテイゾロープ等
を開発すべく鋭意努力を屯ねた結果、これらの製造の際
に有用な中間となるオリゴヌクレオチドを見出した。 硯在寸で開発あるいは市販されているアフイニテイクロ
マトグラフイー１旧◇１脂（Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ。 Ｂｊｏｐｈｙｓ、、　１６８．５６１（１９７４）、Ｊ
、旧ｏｃｈｅｍ、。 ８３、７８３（１９７８）、特開昭５２−２５７９５号
、同５３−１０１、：３９６号、同５３−１３３２８３
号および同５５−３６２７７号各公報）や非放射性用ア
フイニテイゾローブ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ｓｃ１
．　ＵＳＡ、　７８．６６３３−６６３７　（１９８１
）　）に用いられているオリゴヌクレオチド誘導体の製
造法は、一般に＠ｌ戊にわたりめんどうであるという共
通の難点ケかかえていて応用範囲が限定されているのが
現状である。 要旨 本姥明に［上記の点に解決を与えることを目的とし、特
定のオリゴデオキシリボヌクレオチドのヌクレオチドの
塩基以外の時定部位にアミン基を導入してなるオリゴヌ
クレオチド誘導体によってこの目的を達成しようという
もので矛）る。 従って、本発明によるオリゴヌクレオチド誘導体は、下
式〔１１“〕で示されるものであること、を特徴とする
ものである。 また、本発明による下式〔］＼・′〕で示されるオリゴ
ヌクレオチ）′誘導体の製フ′〜法は、下式〔１〕で示
される化合物のＲ３ヲ除去したものと、下式［１１１’
）で示される化合物とを結卸させて下式ＣＩＶ〕の化合
′吻を得ること、全特徴とするものである。 〔ただし、ｍおよびｎにＬそれぞれ０捷たは任意の自然
数であり、ＲＯはリン酸基の保護基であり、Ｒ１は２価
の直鎖捷たは分岐鎖の炭化水素残基であり、Ｒ２はアミ
ン基の保護基であり、Ｒ３はヌクレオチ１ごの３′−末
端リン酸基の保護基であり　Ｂ／はヌクレオチドを構成
する塩基であって、必要に応じておよびＲｏ 保１．りされたものである（　Ｖ癌月Ｊａ個存在すると
きは、それらは同一でも異なってもよい）。〕効果 本発明者らの合成したオリゴデオキシリボヌクレオチド
は、その合成の際の難点を回避ｊ〜得るものであって、
以Ｆのような長所をもつ。 （イ）オリゴヌクレオチド中に存在する他の官能基（水
酸基、リン酸基、塩基部分のアミン基等）よりも反応性
が高いアミノ基を５′−末端延長上に有するので、この
部分で選択的に他の化合物の官能基（たとえば、−Ｃｏ
ｏＨ１カルボン酸活性エステル、ブロムシアンで活性化
したＯＨ基、その１１０）と結合さすることかできる。 （ロ）上記“アフイニテイクロマトグラフィー用樹脂や
非放射性アフイニテイプローブ等合成の際有用な中間体
となる。 （ハ）合成が容易で大量合成が可能である（特に本発明
者らが確立した同相合成法を併用すればその効果はさら
に大きい）。 本発明によるオリゴヌクレオチド誘導体は、前Ｂ′ ２′−デオキシリボヌクレオシＦの３′−および５′−
水酸基を除いたデオキシリボヌクレオ・ンド残基な示す
のに慣用されているものであって、具体的には下記の構
造のものである。 Ｂ′ 置換基Ｂ′は、ヌクレオチドを構成する塩基であって必
要に応じて保護したもの、を示す。本発明で［必要に応
じて保護された］というときの［必要に応じて」という
ことは、当該デオキシリボヌクレオチド誘導体を合成し
あるいはこれを他の反応に供する場合にこの塩基をこれ
らの反応の際に他の試薬からの攻撃から保護する必要が
ある場合にｔよ、ということを意味する。どのような１
局合にそのような保護が必要であるかあるいはどのよう
な保護基が訣用婆れるかに関しては、核酸合成に関する
文献または成叫たとえば後記したもの全参照することが
できる。Ｂ′の具体例は、通常はそれぞれアシル化した
アデニン、シトシンまたはグアニンあるいはヂミン（保
、穫不安）から選ばれたものである。化合′吻Ｃ■、ｌ
］中にＢ′が複斂個イｆイ王−ｒるときは、それらは同
一でも異なってもよい。 ｍおよびｎはそれぞれ０′または自然数ｒ示す。 本発明のオリゴヌクレオチド誘導体の重合度がｍ十〇で
表示されているのは、本発明の好捷しい製造法で重合度
がそれぞれｍまたはｎのフラクンヨン全縮合させている
ことによるものである（詳細後記）。その場合、ｍは実
用的には０〜６、特に１〜４、ｎｉｒま実用的には０〜
４０、背にＯ〜２０１　である。 基ＲＯは、リン酸基を保護する置換基である。 基Ｒ１は、化合物〔１〜りの核酸部分とアミン基部分と
を連結する二価の直鎖せたは分岐鎖の炭化水素残糸、特
に炭素数２〜２０程度のアルキレン基、である。 基Ｒ２は、５′−末端廷長上のアミン基の保護基である
。アミン基の保護基は種々あるが、本発明においては、
化合物〔１＼・°〕の製造工程および、さらにその応用
から考えれば、各保護基の除去の際安定でありかつヌク
レオチドの部分を安ゲ１えな捷まで除去できるものが好
ましい。以−Ｈの６兄点からすれば、Ｒ２，！：Ｌ−’
ｒは、ｄ−ルトニトロクエニルスルフェニル基（ＮＦＳ
）　ｔたはトリフルオロアセチル基（ＴＦＡ）等があり
、なかでもトリフルオロアセチル基が好ましい。 基Ｃ０Ｒ４は通常のオリゴヌクレオチド合成の際に用い
られる３′−末端水酸基の保護基である。基Ｒ４は低級
アルキル基、アリール基（％にフェニル、またはメチル
置換フェニル）またＶま固相合成法の際用いられる適当
なスベーザーをもつ４Ｕ体（ホリスチレン誘導体ＰＬ）
、シリカゲル誘導体、ポリアクリルアミド誘導体ｂ）等
）がある。 ａ）　　Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｖ、　７７、　１８３　（１
９７７）Ｆｏｒｓｕｃｈｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｏｒｇ、　
Ｎａｔｕｒｓｔｏｆｆｅ。 ３２、２９７　　（１９７５） ｂ）　Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　９８．８
５１４　（１９７６）Ｎｕｃｌ、　　Ａｃ１ｄｓ　　Ｒ
ｅｇ、　　４　　、　１１３５　　（１９７’７）＃　
　　＃　　　４　、４３９１　　（１９７７）＃　　　
、　　　６　　、１．２６５　（１９７９）〃Ｎ　　　
８　　、５４９１　　（１，９８０）Ｔｅｔｒａｈｅｄ
ｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ＋　　１９７Ｌ　１８１．９１
９７９、　３６３５ 一般的説明 化合物〔１＼Ｉ工すなわち本発明による刈りゴヌクレメ
チＦ誘導体は、合目的的な壮しはの方法によって鼾成す
ることができる。 一つの好寸しい方法は、前記の式〔■〕で示される化合
物のＲ３を除去したものと、式〔■′〕で示される化合
物と全結合させることからなるものである。 一方、化合物〔１１〕、〔川′〕も合１」的的な任意の
方法、すなわち通常の核酸合成法で合成することができ
る。本う色明者らの同相合成法に従うのが好ましい（詳
細後記）。 第１図υよ、この好ましい合成法の一列を示すフローチ
ーヤ−１・である。フローチャー１・中の記号は下記の
意味合もつくその、を棧ｌいし詳ボＩＨは、前記および
イサバ己した〕１負っである。）Ｒｏ　　リン酸ノ吉を
保護する１６候基であって、通常オルトクロロフェニル
基が用いらｉｌる。 Ｒ１二価の直鎖またｒよ分岐鎖の炭化水素残基である。 Ｒ２アミノ基の保護基であって、通常トリフルオロアセ
チル基が用いられる。 Ｒ３他のすべての保護基が安定な条件で容易に脱１１１
ｆ＃されて、りン′酸ジエステル全力えることができる
１６換基であって、通常／アノエチル基が用いられる。 ＣＯＲ４ｉｆｉ常のオリゴヌクレオチド合成に用いられ
る３′−末端水酸基の保護基である。 Ｒ５通常のオリゴヌクレオチド合成の際に用いられる５
′−末端水酸基の保簡基であって、通常ジメトギシトリ
チル基である。 ｍ　　Ｏまたは任意の自然斂。 ｎ　Ｏ捷たは任意の自然数。 Ｂ′　保護さ１また塩基を示すが、通′にはＲ６−４ン
ゾイルアデニン、Ｎ′−イソブチリルグアニン、Ｒ６−
ベンゾイルシトシンおよびチミン（すなわち、保祿不要
）より選択される。 化は物〔ＩＩ〕の合成は、オリゴヌクレオチＰの合成お
よび生成ヌクレオチｒの５′−水酸基延長−ヒでの一級
゛アミノ基の導入からなる方法で行なうことができる。 その一実施態様Ｃよ、化合物

〔０〕の５′−水酸４をリ
ン酸化し、次いで化合物（１’：Ｉ’に結合させること
からなる（第１図参照）。リン酸化方法とｌ−では２価
のリン酸化試薬を用いるが、該試薬とＲ７で、ホスホ、
ジトリアゾリド、ホスホジクロリＦ捷たはホスホベンゾ
トリアシリＦ等がある。 とたろで化合物（０３は、通常１１知の核酸は酸洗に従
って合成できるが、本発明者らの確立した同相合成法に
従うのが好ま（−い（後記文献参照）。 寸だ、化合・吻Ｃ１，）は、アミノアルキレンアルコ−
ル（Ｎｌ２−Ｒ−ＯＨ）のアミノ基金Ｒ２で保護するこ
とによりイ！することかできる。なお、アミノアルキレ
ンアルコールはＣ２〜Ｃ１２のものが市販されていて、
人手が容易である。 化合□吻（ｌｌｌ’ｌの合成ｅよ、既知のオリゴヌ酸洗
オチド什成法に従っても、本発明者らの同相合成法に従
って行なってもよい。一般に、オリゴヌクレオチド合成
−成法としては、トリエステル法、ホスファイト法およ
びそれぞれの固相法および液相法があるが、本発明者ら
の開発した同相合成法（Ｆ記文献参照）が好ま１７い。 Ｔｅｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１９７９　＋
　３６３５（１９７９）Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　
Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　８．５４７３（１９８０）Ｎｕｃｌ
ｅｉｃ　　Ａｃ１ｄｓ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　　８＋　
　５４９１（１９８０）Ｎｕｃｌｅｉｃ　　Ａｃ１ｄｓ
　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　　８＋　　５５０７（１９８０
）Ｎｕｃｌｅｉｃ　　Ａｃ１ｄｓ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
　　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ　　５ｅｒｉｅｓ７　．２８１
　　（１９８０） 従って、化合物〔■′〕合成の一実施態様は、同相合成
法に従って化合物Ｃｆｌ［ｌを合成し、この化合物の５
′−末端基（Ｒ５）を水酸化して得ることからなるもの
である（詳、Ｈｌｌは後ＨＣ実験例参照のこと）。 基Ｒ５はオリゴヌクレオチｒを合成する除に通常用いら
れる保護基であって、直鎖または分岐鎖のトリチル基が
用いられる。この場合、赫５の除去は、ベンゼンスルホ
ン酸、酢酸捷たは臭化亜鉛の１．０Ｍイソゾロ・にノー
ル−塩化メチレン溶液中で行なう−Ｐトの方法がある。 また、通常基Ｒ５としては、ノメトキシトリチルを用い
る。 なお、化合物

〔０〕および〔１１〕等のオリゴヌクレオ
チドのけ酸洗は既に各種のものが公知であって保ｉ塵基
の抽頌およびその導入ないし除去ならびに縮合その曲に
ついて上記以外の詳細は、核鷹の化学合成しこ関する成
蒔や総説、たとえば、［ヌクレオシド・ヌクレオチドの
合成」　（丸善１９７７年）、「核酸有機化学」　（化
学同人１９７９年）、「核酸」（朝食書店１９７９年）
、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、　３４　＋３１４３　（１
９７ｓ）、有機ば成化学、　３４　、７２３（１９７８
）および化学の領域、　３３　、５６６　（１４７７９
１等全参照する仁とができる。 オリゴヌクレオチド誘導体（化合・吻〔■〕）は、上記
の化合物〔■〕と〔■′〕とを結合させることにより得
ることができる。 両者のｆ４１６合は、縮合剤の存在下におりて化合物Ｃ
ＤＩ′〕の５′−末端水酸基と化合物〔１］〕の３′−
末端リン酸基との脱水縄付によるリン酸結合全実現する
方法によってイｉなうことができる。 コ（７）　ＪＪＪ　合の縮合剤としては、トノルクロリ
ド、メ／テレンスルホニルクロリト、メンチレンスルホ
ニルテトラゾリｒおよびメンチレンスルホニルニトロト
リアゾリｒ等があるがメンチレンスルホニルニトロトリ
アゾリドが好ましい。詳細な反応条件等は後記実験例を
参照されたい。 実施例 第２図のフローチーｒ−）に従って、本発明の化汁パ吻
（同図の化合物■）を＃遺した。 第２図で、記号は次の意味を待つ。 Ｂ′　ベンゾイル化アデニン ＤＭＴｒ　　ジメトキシトリチル ＣＥシアンエチル ＴＦＡ　）リフルオロアセチル ２ 実施例 （ｊ−アミンヘキサノールＩＡ７ｇ　（１０ｍｍｏｌ）
ｅジオキサン（１５ｍｌ）にＦＩＬＬＮし、トリノルオ
ロアセチルーｆ−オニチル１．８０ｍ１　（１４，４ｍ
　ｍｏｌ）を加え、室温で一夜反応を行なう。反応終了
後、この溶液を濃縮し、残渣をエーテルに溶解し、水で
３回抽出を行なう。エーテル層を無水硫酸ナトリウムで
乾燥後、濃縮を行なう。残渣にエーテルを加えて溶解し
た後、ペンタンを加えて結晶化させることにより、粉末
状の化合物Ｃ（１）：）　（＋−’）フルオロ−アセチ
ル−６−−７’　ミノヘキサノール）分１仔る。 次に、既知の方法で曾成した５′−ヒドロキシーノヌク
レオチｔ’　Ｃ（Ｏ）３８００ｍｇ　（０，７１ｍ　ｍ
ｏｌ）をピリノン共沸により無水にし、これにオルトク
ロロフェニルポスホロノトリアゾリＩ’（１゜Ｏｍｍｏ
ｌ）の・ジオキサン（６゜Ｏｍ＋）溶液を肌えて２時間
反応させ、Ａ：ｊ’ｅいて化合・吻〔（，１））　３０
（１ｍｇ　（１、４ｍ　ｍｏ　ｌ　）および１−ノブ−
ルーイミダゾール てさらに２時間反応させる。反応の終了全確認後、ピリ
ジン−水を加えて過剰のトリアゾリドを分解し、溶媒を
留去する。残漬をクロロホルムに溶解した後、水、０。 ５Ｍリン酸二水素ナトリウム水溶孜、飽和炭酸水素ナト
リウムおよび５％塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水
硫酸ナトリウムで乾燥する。クロロホルム層を濃縮後、
シリカゲルカラムで精製（溶出液として０〜′４係のメ
タノール含有クロロホルムを使用）シ、目的物を含む溶
出液を（ｎ縮後、この溶液をペンタン中に滴下しで、粉
末状の化合物〔（２）〕をイ４ネる。 一方、ジメトキシトリチルアデノシン／樹脂〔■〕″（
ここで１ソ１脂は担体に過ぎないが、樹脂に担持された
目的化合物は外画的には樹脂そのものと凌らないので間
服に担持された当該化合・（勿を以下において竿に１ケ
１脂と呼ぶことにする）：３００ｍｇ（０．３３ｍｍｏ
ｌ）をイソゾロノミノール−塩化メチレン（　１５：　
８５）　（ｖ／ｖ）浴？ＩＥＩＯｍｌで３回洗浄後、臭
化唾鉛の１．０Ｍのイソゾロノミノール−塩化メチレン
溶液８ｍｌで５分＋ｔ４１ずつ４回反応させて伸４崩〔
ｑ）］の脱ｉ・リテル化物〔＠」全得る。 １何脂〔＠〕をイソプロ・ξノールー溶化メチレン溶液
１０　ｍ　ｌで３回洗浄し、これにジヌクレオチド（０
）１５０ｍｇ（０．１ｍｍｏｌ）のピリジン溶液を添加
後、共沸させてこの溶液系を無水とし、メシチレンスル
ボニルニトロトリアゾリド１５０ｍｇ　（０．５ｍｍｏ
ｌ）と無水ピリジン２ｍｌとを添加して９０分間反応（
縮合）させる。反応後、ピリジンｌｏｍｌで３回洗浄し
、触Ｍ’：＃：（約ｌｏｎｇ）のジメチルアミノピリジ
ンを含む無水酢酸−ピリ、ジン（　１　：　９）（Ｖ／
Ｖ）溶液１（１ｍｌを添加し１０分間反応させて未反応
５′−水酸基をアセチル化して保藺し、こｈをピリジン
で洗浄して化合物〔＠〕を得る。このような縮合反応操
作全６回くり返して、化合−吻〔（すｎ＝１２）ｉ得る
。 次に、化合′吻［＋３）　ｎ＝１２］　１１５ｍｇ　（
３．４５μｍｏｌ）をｔｖＪ脂○と同僚の方法で脱トリ
チル化した化合物［＋３．）’　］　ｐこ、化合物Ｃ（
２．Ｄ　６０ｍｇ　（０．０４ｍｍｏｌ）　ｆ　）リエ
ブールアミンービリジンー水（１：３：１，（φ））溶
液３ｍｌで処理（脱／アノエチル化）した化合物〔（す
′〕・を加え、無水にしたのち、メシチレンスルボニル
ニトロトリアゾリド５０ｍｇ　（０．２ｍｍｏｌ）およ
びピリジン１　ｍｌを加えて９０分間反応（縮合）させ
、反応終了後、樹脂をピリジンおよびメタノールで洗浄
し、乾燥して、完全に保循されたオリゴヌクレオチｒ誘
導体Ｃ（４）３を得る。 なお、化＠物〔（初の確認を畠速液体クロマトグラフイ
ーで行なった。そのために保内基の除去を以下の条件で
行なった。すなわち、化ば物〔（４力１５ｍｇを０．５
　Ｍテトラメチルグアニジン−ピリジン−２−カルボア
ルドキシメイトの２オギサンー水（９：　１　（Ｖ／ｖ
））溶液２００μｍを加え、遠沈管中、￥γ＆Ｊで調時
間反応させる。反応後、濃アンモニア水（２゜５ｍ１）
’ｚ加えて密閉し、５０°Ｃで一夜反応させる。反応路
ｒ＜ａ、ｊ″′１過し、ｆ液を濃縮後、水に溶＋ｌＩ′
ｔさせてからエーテルで抽出を行なう。水層をａ　ｆｉ
ｌ（後セファデックスＧ　−５０（φ１．５Ｘ１２０ｃ
ｍ。 溶出ｌ＆は０．０５Ｍの重炭酸トリエチルアンモニウム
緩匍ｊ液１１１１７．５　）で脱塩精製（ッて、化合吻
〔１４刀からすべて保躾基を除去した。このときの化合
物のセファデックスの溶出）ξターンおよび１．〜ＷＩ
　４　液体クロマトグラフィー（μ−Ｂｏｎｄａｐａｋ
　Ｃｌ８）で純度をＡ・対定した（祭の、岩田・ξター
ンヶ、それぞれｆ８３図および肩も４図に７ドした。 同様の方法で式〔１）りで示される化合物をば成し、そ
の化合物の確認も同様の方法で行なった。なお、実ｊ′
倹しｌ１２右゛よび４についてのセファデックスと高速
液体クロマトグラフィーの結果を、それぞれ第５〜６図
および第７〜８図に示した。これらの結果から、化合物
の合成が確紹された。 ′まだ、上記実！険例１〜７の製造の際のＢ’、ｍ。 ｎ　、　Ｒ’、　Ｒ２および塩基配列を第１表に示した
。 第１表中、「化合Ｉ吻」とは、第２図中の化合・吻を示
す。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の化合物ケ合成する方法の一例を：示
すフローチャートである。 ａ（’＋　２１Ｎ＜１は、実験例で示した本化合物のフ
ローチャートである。 第３．５および７図ｔよ化付物〔■〕（それぞれ実験例
−１，２および４）の保護基金すべて除去したもの全セ
ファデックスＧ−５０によるカラムクロマトグラフィー
にかけたときの溶出ノミターンである。 ｊ１３４．６および８図は化合物［１ｔ’）　（実強例
−１，２および４）の保−基金すべて除去したものの高
速液体クロマトグラフィーの溶出パターンである。 出願人代理人　　猪　　股　　　清 早３図 分画数 免４図 保　持　時　間　（分） 県５図 分画数 第６図 保持時間（分） 屯７図 分画数 則８図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式〔１〜ｒ〕で示されるものであることを特徴と
   する、オリゴヌクレオチド誘導体。 〔ただし、ｍおよびｎばそれぞれｏｔたは任意の自然数
   であり、ＲＯはリン酸基の保護基であ’）、Ｒ”は２価
   の直鎖または分岐鎖の炭化水素残基であり、Ｒ２はアミ
   ン基の保護基であり、Ｃ０Ｒ４はヌクレオチドの３′−
   末端水酸基の保護基であり　Ｂ／はヌクレオチｒｆ：構
   成する塩基であっておよびＲｏ 必要に応じて保護されたものであるＣＷ窃Ｉ数岡存仕す
   るときはそれらは同一でも異なってもよい）。］ ２、塩基Ｂ′がそれぞれ保護されたアデニン、シトシン
   およびグアニンならびにチミン（保護不要）からなる群
   より選ばれたものである、特許請求の範囲第１項記載の
   オリゴヌクレオチド誘導体。 記載のオリゴヌクレオチＦ：′誘導体。 ４、　Ｒ１が炭素数２〜２ｏの直鎖または分岐鎖のアル
   キレン基である、特許請求の範囲第１〜３項のいずれか
   １項にｉ記載のオリゴヌクレオチド誘導体。 ５、　Ｒ２カオル１−ニトロフェニルスルフェニル基ま
   たはトリフルオロアセチル基である、特許請求の範囲第
   １〜４項のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド誘
   導体。 ６、　Ｃ０Ｒ４基のＲ４が低級アルキル基またはアリー
   ル基である、特許請求の範囲第１〜５項のいずれか１項
   にｉ記載のオリゴヌクレオチド誘導体。 ７、　Ｃ０Ｒ４基のＲ４がスベーザを介した担体であっ
   て、ポリスチレン誘導体、シリカゲル誘導体またはポリ
   アクリルアミド誘導体である、特許請求の範囲第１〜５
   項のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド誘導体。 ８、　ｍが０才たは６までの自然数、ｎが０または１（
   ）までの自然数である、特許請求の範囲第１〜７項のい
   ずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド誘導体。 ９、下式〔１１〕で示憾れる化合物のＲ３を除去したも
   のと、上式〔１０で示される化合物とを結合させて下式
   〔■〕の化合物を得ることを特徴とする、下式［ＩＤで
   示されるオリゴヌクレオチド誘導体の製造法。 〔ただし、ｍおよびｎはそれぞれＯまたは任意の自然数
   であり、Ｒｏはリン酸基の保護基であり、Ｒ１ば２価の
   直鎖捷たは分岐鎖の炭化水素残基であり、Ｒ２はアミン
   基の保護基であり、■七３はヌクレオチドの３′−末端
   リン酸基の保護基であり、Ｃ０Ｒ４はヌクレオチドの３
   ′−末端水酸基の保護基であり、１３′はヌクレオチド
   ｋ　＋４１を成する塩基であって、心安に応じて保評さ
   れたものである仏虻（ （複数個存在するときは、それらは同一でも異なっても
   よい）。〕 １０、化合物〔■〕と〔■′〕との結合イ縮合剤の作用
   下で行なう、特許請求の範囲第９項記載の方法。 １１、縮合剤がトシルクロリド、メシチレンスルホニル
   クロリド、メシチレンスルホニルテトラソリ臼すよびメ
   ンチレンスルホニルニトロトリアゾリドのいずれかであ
   る、特許請求の範囲第１Ｏ項記載の方法。