JPS6013679B2 - 発酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製造法 - Google Patents
発酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製造法Info
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- JPS6013679B2 JPS6013679B2 JP54127802A JP12780279A JPS6013679B2 JP S6013679 B2 JPS6013679 B2 JP S6013679B2 JP 54127802 A JP54127802 A JP 54127802A JP 12780279 A JP12780279 A JP 12780279A JP S6013679 B2 JPS6013679 B2 JP S6013679B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、食塩を２〜５％含有する栄養培地で海洋また
は海洋関連物から分離したミクロコツカス、アースロバ
クターおよびパラコツカス属に属するビタミンＢ２生産
菌を、単独または２種以上を混合して培養して得られた
培養物からビタミンＢ２を採取することによる新規な発
酵法によるビタミンＢ２の製造法に関する。
は海洋関連物から分離したミクロコツカス、アースロバ
クターおよびパラコツカス属に属するビタミンＢ２生産
菌を、単独または２種以上を混合して培養して得られた
培養物からビタミンＢ２を採取することによる新規な発
酵法によるビタミンＢ２の製造法に関する。
ビタミンＢ２は、後酸、脂肪、蛋白質、炭水化物等の生
体内代謝において必須の因子であり、悪性貧血の治療薬
としての利用など、人間、家禽及び／又は家畜などに対
する医薬または飼餌料添加剤として広く実用に供されて
いる。
体内代謝において必須の因子であり、悪性貧血の治療薬
としての利用など、人間、家禽及び／又は家畜などに対
する医薬または飼餌料添加剤として広く実用に供されて
いる。
従来、ビタミンＢ，２の発酵法による製造法としては、
ストレプトマイシン、クロロテトラサイクリン等の抗生
物質を抽出した残液からのビタミンＢ２の抽出、プロピ
オニバクテリウムの糠質を培地炭素源とする培養物から
のビタミンＢ２の抽出、その他、バチルス、ブチリバク
テリア、フラボバクテリア等の菌体ならびにそれらの培
養液からのビタミンＢ２の抽出採取する方法が知られて
いる。
ストレプトマイシン、クロロテトラサイクリン等の抗生
物質を抽出した残液からのビタミンＢ２の抽出、プロピ
オニバクテリウムの糠質を培地炭素源とする培養物から
のビタミンＢ２の抽出、その他、バチルス、ブチリバク
テリア、フラボバクテリア等の菌体ならびにそれらの培
養液からのビタミンＢ２の抽出採取する方法が知られて
いる。
一方、本発明者等は微生物蛋白質又は生理活性物質の発
酵生産を目的に炭素源としてメタノールを資化し、食塩
濃度２％以上好ましくは２〜５％の海水または人工海水
を用いた渚地で増殖する微生物の探索を行なった結果、
瀬戸内海沿岸の海水及び海岸土壌又は海産物から採取し
た菌株のうち、パラコッカス属、ミクロコツカス属、お
よびアースロバクタ−属に属する菌株が、メタノールを
菌体への変換率約５０％という高変換率で資化し海水ま
たは人工海水を用いた栄養塔地で培養することによって
ビタミンＢ，２を蓄積することを見し・出し、本発明を
完成した。
酵生産を目的に炭素源としてメタノールを資化し、食塩
濃度２％以上好ましくは２〜５％の海水または人工海水
を用いた渚地で増殖する微生物の探索を行なった結果、
瀬戸内海沿岸の海水及び海岸土壌又は海産物から採取し
た菌株のうち、パラコッカス属、ミクロコツカス属、お
よびアースロバクタ−属に属する菌株が、メタノールを
菌体への変換率約５０％という高変換率で資化し海水ま
たは人工海水を用いた栄養塔地で培養することによって
ビタミンＢ，２を蓄積することを見し・出し、本発明を
完成した。
本発明の方法に用いられる微生物は、広島湾沿岸の海水
、海底の土壌または海藻の懸濁液１の‘を５００の‘客
、坂口フラコに接種し、２８℃と４０℃で、約２．４％
の食塩と０．０２％のメタノールを主成分とする培地で
集積培養を２回繰り返した後、前記培地に寒天を加えた
培地で通常の平板培養によって分離された。
、海底の土壌または海藻の懸濁液１の‘を５００の‘客
、坂口フラコに接種し、２８℃と４０℃で、約２．４％
の食塩と０．０２％のメタノールを主成分とする培地で
集積培養を２回繰り返した後、前記培地に寒天を加えた
培地で通常の平板培養によって分離された。
それらのうちの代表的な菌株としては、１泌２‐Ａ菌：
パラコッカス・ヱスピ−１１２Ｌ−Ａ（ＰａｒａＣｏＣ
Ｃ雌Ｓｐ，１２Ｌ−Ａ）、１２Ａ２−Ｘ菌：ミクロコッ
カス・ルテウス（Ｍｉｃｒ■Ｍｃｕｓｌｕｔｅ船）、１
２Ａ２山ＯＹ菌：ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃ
ｒｏｃｏｃｃｕｓｖａｒｉａｎｓ）及び幼−Ａ菌：アー
スロバクタ−・ェスピ−・幼−Ａ（〜ｔｈｒｏ畑ｃｔｅ
ｒｓｐ．沙−Ａ）を挙げることができる。
パラコッカス・ヱスピ−１１２Ｌ−Ａ（ＰａｒａＣｏＣ
Ｃ雌Ｓｐ，１２Ｌ−Ａ）、１２Ａ２−Ｘ菌：ミクロコッ
カス・ルテウス（Ｍｉｃｒ■Ｍｃｕｓｌｕｔｅ船）、１
２Ａ２山ＯＹ菌：ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃ
ｒｏｃｏｃｃｕｓｖａｒｉａｎｓ）及び幼−Ａ菌：アー
スロバクタ−・ェスピ−・幼−Ａ（〜ｔｈｒｏ畑ｃｔｅ
ｒｓｐ．沙−Ａ）を挙げることができる。
上記菌株を用いるビタミンＢ，２の製造に於ける利点と
しては、炭素源としてメタノールを使用することができ
ること、即ちメタノールは他の石油系の原料と比較して
安価であり、さらに水溶性であること等より発酵の際の
酸素要求量、発熱量が少ない点、また海水もしくは人工
海水が利用できることより、真水を容易に得られない立
地条件下に於ても該製造の実施が可能であるなど多くの
利点を有する。
しては、炭素源としてメタノールを使用することができ
ること、即ちメタノールは他の石油系の原料と比較して
安価であり、さらに水溶性であること等より発酵の際の
酸素要求量、発熱量が少ない点、また海水もしくは人工
海水が利用できることより、真水を容易に得られない立
地条件下に於ても該製造の実施が可能であるなど多くの
利点を有する。
なお、これら例示の菌株は、いずれも新菌種または既知
菌種の内メタノールを利用出来る特異な菌株で、主要な
菌学的性状は次の通りである。
菌種の内メタノールを利用出来る特異な菌株で、主要な
菌学的性状は次の通りである。
１ 形態的性質
（１）肉汁寒天培地（３０℃ １〜２日間培養）０ 培
養的性質（１）肉汁寒天平板培養 （２ 肉汁寒天斜面培養 その他の性状で菌苔の色、光沢、周辺等は平板培養の性
質とほゞ同様であった。
養的性質（１）肉汁寒天平板培養 （２ 肉汁寒天斜面培養 その他の性状で菌苔の色、光沢、周辺等は平板培養の性
質とほゞ同様であった。
■肉汁培養
（４） 肉汁ゼラチン穿刺培養（２０℃ 約１ヶ月培養
）（５）リトマスミルク培養ｍ 生理的性質 ４菌株の発育に及ぼす食塩濃度の影響は次表の如くであ
る。
）（５）リトマスミルク培養ｍ 生理的性質 ４菌株の発育に及ぼす食塩濃度の影響は次表の如くであ
る。
基礎培地組成：べプトン１％、肉エキス１％の液体培地
培養条件：３０ｏｏ、５日間培養こ）にあげた４菌株は
いづれも食塩無添加の培地よりも２〜５％の食塩含有塔
地の方がより良好な発育が見られた。
培養条件：３０ｏｏ、５日間培養こ）にあげた４菌株は
いづれも食塩無添加の培地よりも２〜５％の食塩含有塔
地の方がより良好な発育が見られた。
４菌株が海底の土壌から分離された事実とも関連し、そ
れ等の発育は食塩２〜５％を含有せしめる事によって非
常に助長される。
れ等の発育は食塩２〜５％を含有せしめる事によって非
常に助長される。
またこれ等の菌株は無機窒素源の利用試験で示した如く
、酵母エキス等を不含の培地には生育が悪く、ビタミン
Ｂ，２以外の何らかの生長因子をその生育に必要とする
ものと思われる。４菌株の前記諸性質をパージーズ マ
ニュアルオブ デタミネティブ バクテリオロジー第８
版（１９７４）の記載を参照して検索すると、１２Ａ２
− Ａ菌株はパラ コッカ ス属（ＧｅｎｕｓＰａｒａ
ｃｏｃｃｕｓ）に属する細菌と考えられる。
、酵母エキス等を不含の培地には生育が悪く、ビタミン
Ｂ，２以外の何らかの生長因子をその生育に必要とする
ものと思われる。４菌株の前記諸性質をパージーズ マ
ニュアルオブ デタミネティブ バクテリオロジー第８
版（１９７４）の記載を参照して検索すると、１２Ａ２
− Ａ菌株はパラ コッカ ス属（ＧｅｎｕｓＰａｒａ
ｃｏｃｃｕｓ）に属する細菌と考えられる。
この属にはパラコッカス・デニトリフィカンス（Ｐ．ｄ
ｅｎｉｍｆｉｃａ船）とパラコツカス・ハロデニトリフ
ィカンス（Ｐ．ｈａｌｏｄｅｎｉｍｆｉｃａｎｓ）とが
前記著書に記載されている。１２Ａ２一Ａ菌株とパラコ
ッカス・デニトリフィカンスとは次に記述する炭素源の
資化性に於て差異が見られた。従ってパラコツカス・デ
ニトリフィカンスとは別異の菌種と考えられる。
ｅｎｉｍｆｉｃａ船）とパラコツカス・ハロデニトリフ
ィカンス（Ｐ．ｈａｌｏｄｅｎｉｍｆｉｃａｎｓ）とが
前記著書に記載されている。１２Ａ２一Ａ菌株とパラコ
ッカス・デニトリフィカンスとは次に記述する炭素源の
資化性に於て差異が見られた。従ってパラコツカス・デ
ニトリフィカンスとは別異の菌種と考えられる。
またパラコッカス・ハロデニトリフィカンスとは培地中
に含まれる食塩濃度と菌の発育の状態に於て、グルコー
スから酸化的に酸の生成に於て、また生育最適温度及び
生育の温度範囲等多くの点で差異が見られた。従って１
２Ａ２一Ａはパラコツカス・ハロデニトリフィカンスに
近縁な菌とは考えられるが、技も特徴的性質とされる食
塩耐性に於て大きな差があり、更に１泌２‐Ａ菌株がメ
タノールを資化し得る性質を考慮すれば、パラコツカス
・ハロデニトリフィカンスとは８Ｕ異の新菌種と判断さ
れる。そこで１２Ａ２一Ａはパラコツカス・ヱスピー・
１２Ａ２−Ａ（Ｐａｒａｃ比ｃｕｓｓｐ．１２Ａ２一Ａ
）と命名した。１が２‐Ｘ菌株は前記した諸性質からミ
クロコッカス属に属する菌株と考えられる。
に含まれる食塩濃度と菌の発育の状態に於て、グルコー
スから酸化的に酸の生成に於て、また生育最適温度及び
生育の温度範囲等多くの点で差異が見られた。従って１
２Ａ２一Ａはパラコツカス・ハロデニトリフィカンスに
近縁な菌とは考えられるが、技も特徴的性質とされる食
塩耐性に於て大きな差があり、更に１泌２‐Ａ菌株がメ
タノールを資化し得る性質を考慮すれば、パラコツカス
・ハロデニトリフィカンスとは８Ｕ異の新菌種と判断さ
れる。そこで１２Ａ２一Ａはパラコツカス・ヱスピー・
１２Ａ２−Ａ（Ｐａｒａｃ比ｃｕｓｓｐ．１２Ａ２一Ａ
）と命名した。１が２‐Ｘ菌株は前記した諸性質からミ
クロコッカス属に属する菌株と考えられる。
前述の著書バ−ジーズ・マニュアルには、この属にミク
ロコツカス・ルテウス、ミクロコツカス・バリアンス、
ミクロコッカス・ロゼウスの３菌種が記載されているが
、いづれもＣ，化合物であるメタノールを利用する事は
知られていない。１２Ｌ−Ｘ菌株はミクロコッカス属の
前記３菌種の内ではミクロコッカス・ルテウスに最も近
似した。
ロコツカス・ルテウス、ミクロコツカス・バリアンス、
ミクロコッカス・ロゼウスの３菌種が記載されているが
、いづれもＣ，化合物であるメタノールを利用する事は
知られていない。１２Ｌ−Ｘ菌株はミクロコッカス属の
前記３菌種の内ではミクロコッカス・ルテウスに最も近
似した。
本符願の使用４菌株はすべてメタノール資化性細菌の分
類に於ていわゆる偏性メタノール質化細菌群（ｆａｃｕ
ｌｔｓｉｖｅ ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ
戊ｃｔｅｒｉａ）に属するものである事は明らかである
。
類に於ていわゆる偏性メタノール質化細菌群（ｆａｃｕ
ｌｔｓｉｖｅ ｍｅｔｈａｎｏｌ−ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ
戊ｃｔｅｒｉａ）に属するものである事は明らかである
。
１２ん−×菌株はミクロコツカス・ルテウス（Ｍｃｒｏ
ｃｏｃｃｕｓｌｕｔｅ低）に属し、メタノールの質化能
を有する特異な菌株であると同定した。
ｃｏｃｃｕｓｌｕｔｅ低）に属し、メタノールの質化能
を有する特異な菌株であると同定した。
次に１２Ａ２−ＯＹ菌株もその諸一性質からミクロコッ
カス属に属する菌株と考えられ、既知３菌種の内でミク
ロコッカス・バリアンスに最も近似した。
カス属に属する菌株と考えられ、既知３菌種の内でミク
ロコッカス・バリアンスに最も近似した。
そこでミクロコツカス・バリアンス（Ｍｊｃｒｏｃｏｃ
ｃ雌ｖａｒｉａｎｓ）に属し、メタノールの資化能を有
する特異な菌株であると同定した。
ｃ雌ｖａｒｉａｎｓ）に属し、メタノールの資化能を有
する特異な菌株であると同定した。
最後に、水−Ａ菌株は顕微鏡下で“く”の字に曲つた、
ベンデング型（ｂｅｎｄｉｎｇｔｙｐｅ）の細胞が多数
認められ、グラム染色は若い細胞は殆んど陰陣こ染まり
、古くなると細胞形は不そ、ろし、となり円形のものが
多数認められグラム・バリアブル（Ｇｒａｍｖａｒｉａ
ｂｌｅ）となる。この様な形態を示す事からコリネホー
ム・バクテリア（Ｃｏひ蛇ｆｏｒｍ鼠ｃｔｅｄａ）と言
われる細菌と考えられた。
ベンデング型（ｂｅｎｄｉｎｇｔｙｐｅ）の細胞が多数
認められ、グラム染色は若い細胞は殆んど陰陣こ染まり
、古くなると細胞形は不そ、ろし、となり円形のものが
多数認められグラム・バリアブル（Ｇｒａｍｖａｒｉａ
ｂｌｅ）となる。この様な形態を示す事からコリネホー
ム・バクテリア（Ｃｏひ蛇ｆｏｒｍ鼠ｃｔｅｄａ）と言
われる細菌と考えられた。
沙−Ａ菌株は鞭毛によって運動する。
鞭毛※色及び電子顕微鏡による観察で、それが鞭毛の多
くは単鞭毛で、その配置は殆んど極（ｐｏｌａｒ）又は
少しかた寄った極（ｓ肋ｐｏｌａｒ）であって、デゼネ
レイト・フラゲラム（ｄｅ鉾ｎｅねｔｅｎａｇｅｌｌｕ
ｍ）も認められた。以上の形態観察と本菌の分離源が海
底土壌と言う事も考慮しコリネホーム・バクテリアの内
で、アースロバクター属に属せしめられるのが適当であ
ろう。沙−Ａ菌株のＤＮＡのＧＣ含有量は６９．３％で
あった。また菌体脂肪酸組成の分析の結果は炭素数１６
及び１８の直鎖和脂肪酸、炭素数１８の不和脂肪酸を主
構成脂肪酸とし、しかもこの不和脂肪酸を最も多量に含
有していた。偏性メタノール資化性細菌の多くはこの様
な菌体脂肪酸組成を示すことは知られている。今までに
知られたコリネホーム・バクテリアの内、メタノールを
資化する細菌としてはコリネバクテリウム・メタノ フ
イ ラ ム （ Ｃｏｒ肌ｅ舷ｃｔｅｒｉ肌ｍｅｔｈ
ａｎｏｐｈｊ】肌ｍ＊１）、アースロバクター・ルフエ
スセンス（Ａれｈｒｏｂａｃにｒｍｆｅｓｃｅｎｓ＊２
）が報告されている。参考文献 ＊１ 醗酵工学会誌（
Ｊ．ＦｅｒｍｅｎねｔｉｏｎＴｅＣｈ側ｌｏｇｙ）５６
・４・２４３（１９７８） ＊２ 醗酵工学会試（Ｊ．ＦｅｒｍｅｎねｔｉｏｎＴｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ）４８、３２３（１９７０）これ等両
菌株とが−Ａ菌株は形態的にはよく似た性状を示すもの
と思われる。
くは単鞭毛で、その配置は殆んど極（ｐｏｌａｒ）又は
少しかた寄った極（ｓ肋ｐｏｌａｒ）であって、デゼネ
レイト・フラゲラム（ｄｅ鉾ｎｅねｔｅｎａｇｅｌｌｕ
ｍ）も認められた。以上の形態観察と本菌の分離源が海
底土壌と言う事も考慮しコリネホーム・バクテリアの内
で、アースロバクター属に属せしめられるのが適当であ
ろう。沙−Ａ菌株のＤＮＡのＧＣ含有量は６９．３％で
あった。また菌体脂肪酸組成の分析の結果は炭素数１６
及び１８の直鎖和脂肪酸、炭素数１８の不和脂肪酸を主
構成脂肪酸とし、しかもこの不和脂肪酸を最も多量に含
有していた。偏性メタノール資化性細菌の多くはこの様
な菌体脂肪酸組成を示すことは知られている。今までに
知られたコリネホーム・バクテリアの内、メタノールを
資化する細菌としてはコリネバクテリウム・メタノ フ
イ ラ ム （ Ｃｏｒ肌ｅ舷ｃｔｅｒｉ肌ｍｅｔｈ
ａｎｏｐｈｊ】肌ｍ＊１）、アースロバクター・ルフエ
スセンス（Ａれｈｒｏｂａｃにｒｍｆｅｓｃｅｎｓ＊２
）が報告されている。参考文献 ＊１ 醗酵工学会誌（
Ｊ．ＦｅｒｍｅｎねｔｉｏｎＴｅＣｈ側ｌｏｇｙ）５６
・４・２４３（１９７８） ＊２ 醗酵工学会試（Ｊ．ＦｅｒｍｅｎねｔｉｏｎＴｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ）４８、３２３（１９７０）これ等両
菌株とが−Ａ菌株は形態的にはよく似た性状を示すもの
と思われる。
しかしコリネバクテリウム・メノフィラムはグラム染色
が陽性で運動性がなく、また生理的性質でも硫化水素及
びインドールの生成が陽性であって明らかに２ｂ−Ａ菌
株とは区別され、またアースロバクター・ルフェスセソ
ス菌株は赤色を呈し運動性のない点沙−Ａ菌とは明確に
相違する。以上より幼−Ａ菌株はアースロバクター属に
属する新種菌株と認め、アースロバクター・ェスピー・
が−Ａ（〜ｔｈｒｏ舷ｃｔｅｒｓｐ．沙一Ａ）と命名し
た。
が陽性で運動性がなく、また生理的性質でも硫化水素及
びインドールの生成が陽性であって明らかに２ｂ−Ａ菌
株とは区別され、またアースロバクター・ルフェスセソ
ス菌株は赤色を呈し運動性のない点沙−Ａ菌とは明確に
相違する。以上より幼−Ａ菌株はアースロバクター属に
属する新種菌株と認め、アースロバクター・ェスピー・
が−Ａ（〜ｔｈｒｏ舷ｃｔｅｒｓｐ．沙一Ａ）と命名し
た。
該菌株は、いずれも微生物工業技術研究所に寄託され、
それぞれパラコツカス・エスピー・１２Ｌ‐Ａ（Ｐａｒ
ａｃｏｃｃ船ｓｐ．１沙２‐Ａ）菌株が徴工研菌寄第５
２０５号、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｊｃｒｏｃｏ
ｃｃ雌ｌｕにｕｓ １２Ｌ−×）が徴工研菌寄第５２０
７号、ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃ
ｃ斑ｖａｎａｍｉが２０Ｙ）が徴工研菌寄第５２０６号
並びにアースロバクター・ェスピー・２ｂ‐Ａ（〜ｔｈ
ｒｏ舷ｔｅｒｓｐ．沙−Ａ）が徴工研菌寄第５２０４号
の寄託番号を得ている。本発明の方法においては上記し
た函株がメタ／ールを炭素源とし、その他該菌の生育に
必要な栄養源を含有する海水又は人工海水を用いた培地
で単独又は混合されるが、ビタミンＢ２の蓄積には混合
培養が好適である。
それぞれパラコツカス・エスピー・１２Ｌ‐Ａ（Ｐａｒ
ａｃｏｃｃ船ｓｐ．１沙２‐Ａ）菌株が徴工研菌寄第５
２０５号、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｊｃｒｏｃｏ
ｃｃ雌ｌｕにｕｓ １２Ｌ−×）が徴工研菌寄第５２０
７号、ミクロコッカス・バリアンス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃ
ｃ斑ｖａｎａｍｉが２０Ｙ）が徴工研菌寄第５２０６号
並びにアースロバクター・ェスピー・２ｂ‐Ａ（〜ｔｈ
ｒｏ舷ｔｅｒｓｐ．沙−Ａ）が徴工研菌寄第５２０４号
の寄託番号を得ている。本発明の方法においては上記し
た函株がメタ／ールを炭素源とし、その他該菌の生育に
必要な栄養源を含有する海水又は人工海水を用いた培地
で単独又は混合されるが、ビタミンＢ２の蓄積には混合
培養が好適である。
このときの培地の形態は一般に液体堵地とするのが有利
であり、また、好気条件下に培養を行なうのがよい。液
体培地による培養にあっては振糧培養、凝梓培養などの
いずれでもよいが、いわゆる深部通気燈梓培養によるの
が工業的には有利である。培地組成は適宜に選択可能で
あるが、いずれの菌株も、炭素源としてアルコール類、
例えばメタノール、エタノール、エチレングリコール、
プロピレングリコール、及びコハク酸、リンゴ酸等の有
機酸並びにグルコース、又は麦芽糖、ショ糖等の炭水化
物が用いられるが、メタノール又はグルコースが有利に
用いられる。
であり、また、好気条件下に培養を行なうのがよい。液
体培地による培養にあっては振糧培養、凝梓培養などの
いずれでもよいが、いわゆる深部通気燈梓培養によるの
が工業的には有利である。培地組成は適宜に選択可能で
あるが、いずれの菌株も、炭素源としてアルコール類、
例えばメタノール、エタノール、エチレングリコール、
プロピレングリコール、及びコハク酸、リンゴ酸等の有
機酸並びにグルコース、又は麦芽糖、ショ糖等の炭水化
物が用いられるが、メタノール又はグルコースが有利に
用いられる。
なお、これらは単独で用し、るも、併用して用いてもよ
い。窒素源としては、たとえばアンモニア塩類、硝酸塩
類などの無機窒素化合物、尿素、コーンスチープリカー
、カゼイン、酵母エキス、肉エキスなどの有機窒素含有
物なが用いられる。
い。窒素源としては、たとえばアンモニア塩類、硝酸塩
類などの無機窒素化合物、尿素、コーンスチープリカー
、カゼイン、酵母エキス、肉エキスなどの有機窒素含有
物なが用いられる。
また無機塩類は必要によって海水組成塩類のうち、カル
シウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、リン酸塩等を
追加添加したり、塩化コバルト、塩化コリン、べタィン
又はペンズィミダゾール等のビタミンＢ２前駆体を加え
てもよい。このように調整した培地に前記の菌株が接種
されるが、これらは単独で又は２種以上の菌株を同時に
接種するか、または別々に前培養した後、それらを同時
に接種してもよいが、ビタミンＢ，２の多量蓄積には混
合して用いるのが望ましい。
シウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、リン酸塩等を
追加添加したり、塩化コバルト、塩化コリン、べタィン
又はペンズィミダゾール等のビタミンＢ２前駆体を加え
てもよい。このように調整した培地に前記の菌株が接種
されるが、これらは単独で又は２種以上の菌株を同時に
接種するか、または別々に前培養した後、それらを同時
に接種してもよいが、ビタミンＢ，２の多量蓄積には混
合して用いるのが望ましい。
いずれにしてもこれらの菌株の接種する浪合比は目的に
応じて適宜に変えることができる。培養に当っては温度
２５〜４０℃、好適には２５〜３５℃で、斑６〜８で３
日〜約１５日の培養日数が選ばれる。
応じて適宜に変えることができる。培養に当っては温度
２５〜４０℃、好適には２５〜３５℃で、斑６〜８で３
日〜約１５日の培養日数が選ばれる。
上述のようにして得られた培養物中に生成したビタミン
Ｂ，２は、それ自体公知のフェノール、フタノール等を
用いた溶媒抽出法、または活性炭、シリカゲル、イオン
交換樹脂等を用いるカラムクロマト法を適宜組み合せ使
用することによって採取できる。
Ｂ，２は、それ自体公知のフェノール、フタノール等を
用いた溶媒抽出法、または活性炭、シリカゲル、イオン
交換樹脂等を用いるカラムクロマト法を適宜組み合せ使
用することによって採取できる。
例えば培養物をまず遠０分離して菌体を得、シア／型ビ
タミンＢ，２として培養物から分離するときは、函体に
シアンイオンを加えて硫酸等の酸で軸５に調整し煮沸す
ることにより抽出できる（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎ
ｔ２６２１１４４）。なお生成するビタミンＢ，２量は
、培養液３０の‘を探り、８００仇．ｐ．ｍ．１８分間
遠心分離後、菌体に０．０１％ＫＣＮ水溶液を１０の【
加え、ＩＮ硫酸でｐＨ５．０に調整し、皿ｂ′ｓ．ｊ．
１５分間加圧抽出後、脱イオン水で３０の‘に戻した後
、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏ１ｊ２１５による微生物
学的定量法により、発酵、精製時のビタミンＢ２の量を
確認した。以下に実施例をあげて、本願発明をさらに具
体的に説明する。
タミンＢ，２として培養物から分離するときは、函体に
シアンイオンを加えて硫酸等の酸で軸５に調整し煮沸す
ることにより抽出できる（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎ
ｔ２６２１１４４）。なお生成するビタミンＢ，２量は
、培養液３０の‘を探り、８００仇．ｐ．ｍ．１８分間
遠心分離後、菌体に０．０１％ＫＣＮ水溶液を１０の【
加え、ＩＮ硫酸でｐＨ５．０に調整し、皿ｂ′ｓ．ｊ．
１５分間加圧抽出後、脱イオン水で３０の‘に戻した後
、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏ１ｊ２１５による微生物
学的定量法により、発酵、精製時のビタミンＢ２の量を
確認した。以下に実施例をあげて、本願発明をさらに具
体的に説明する。
実施例 １
アースロバクタ…・ェスピー・沙−Ａ（徴工研菌寄第５
２０４号）を、下記、人工海水改変塔地（ＡＳＷ塔地）
で３日前培養した培養液１２の‘を殺菌した下記人工海
水基本塔地１．２〆を入れた２そ客のミニジャーフアー
メンターに接種し、培養温度２籍０、通気量０．６ぞ／
ｍｉｎ、縄梓回転数７０机ｐｍで５日間培養した。
２０４号）を、下記、人工海水改変塔地（ＡＳＷ塔地）
で３日前培養した培養液１２の‘を殺菌した下記人工海
水基本塔地１．２〆を入れた２そ客のミニジャーフアー
メンターに接種し、培養温度２籍０、通気量０．６ぞ／
ｍｉｎ、縄梓回転数７０机ｐｍで５日間培養した。
なお培地中のりん酸塩は別に殺菌後、無菌的に添加し、
培養初期は競梓回転数を２０びｐｍに保ち、培地のｐＨ
低下が見られ始めた後回転数を上述の培養条件まで上げ
た。このときビタミンＢ２の生成濃度は４．２山夕／そ
であった。培地組成（ＡＳＷ培地）＊ 日３Ｂ○３０
．１５２ソ〃，ＭｎＣ１２・４日２００．４２ターＺ，
ＺｎＣ１２３２の〆Ｚ，Ｃ。
培養初期は競梓回転数を２０びｐｍに保ち、培地のｐＨ
低下が見られ始めた後回転数を上述の培養条件まで上げ
た。このときビタミンＢ２の生成濃度は４．２山夕／そ
であった。培地組成（ＡＳＷ培地）＊ 日３Ｂ○３０
．１５２ソ〃，ＭｎＣ１２・４日２００．４２ターＺ，
ＺｎＣ１２３２の〆Ｚ，Ｃ。
ＣＩ２．６日２０１．４３の多Ｚ，ＣｕＣ１３・２日２
００．０２の汐杉，Ｎａ２Ｍｏｏ４・２日２０７．２６
枕災ゼ＊＊（物〆Ｚサィァミン１．０，リボフラビン１
．０，ピリトキシン１．０，バントテン酸かレンワム１
．０，ニコチン酸１．０，フオリン酸０．１，Ｐ‐アミ
ノ安息香酸０．１人工海水基本培地 ＊ 稀金属は、ＡＳＷ培地と同じ。
００．０２の汐杉，Ｎａ２Ｍｏｏ４・２日２０７．２６
枕災ゼ＊＊（物〆Ｚサィァミン１．０，リボフラビン１
．０，ピリトキシン１．０，バントテン酸かレンワム１
．０，ニコチン酸１．０，フオリン酸０．１，Ｐ‐アミ
ノ安息香酸０．１人工海水基本培地 ＊ 稀金属は、ＡＳＷ培地と同じ。
実施例 ２
パラコッカス・ェスピ‐・１泌２‐Ａ（徴工研菌寄第５
２０５号）、ミクｐコッカス・ルテウス（徴工研菌寄第
５２０７号）及びミクロコッカス・バリアンス（徴工研
菌寄第５２０６号）をそれぞれ単独に、実施例１と同機
にＡＳＷ培地で前培養し同様の人工海水基本培地にて、
培養日数を７日に変え培養した。
２０５号）、ミクｐコッカス・ルテウス（徴工研菌寄第
５２０７号）及びミクロコッカス・バリアンス（徴工研
菌寄第５２０６号）をそれぞれ単独に、実施例１と同機
にＡＳＷ培地で前培養し同様の人工海水基本培地にて、
培養日数を７日に変え培養した。
なお培養温度はパラコッカス・ェスピ−・１２Ｌ−Ａの
場合は３０午０、他の２菌株は２７℃で実施した。この
とき、各菌株によるビタミンＢ，２の生成濃度はそれぞ
れ、パラコツカス・ェスピー・１２Ｌ−Ａ：４．物夕／
そミクロコツカス・ルテウス ：３．６〃
ミクロコツカス・バリアンス ：６．２〃であ
った。
場合は３０午０、他の２菌株は２７℃で実施した。この
とき、各菌株によるビタミンＢ，２の生成濃度はそれぞ
れ、パラコツカス・ェスピー・１２Ｌ−Ａ：４．物夕／
そミクロコツカス・ルテウス ：３．６〃
ミクロコツカス・バリアンス ：６．２〃であ
った。
実施例 ３
パラコッカス・ェスピ−・１２Ａ２一Ａ（徴工研菌客第
５２０５号）、ミクロコッカス・ルテゥス（徴工研菌寄
第５２０７号）及びミクロコッカス・バリアンス（徴工
研菌寄第５２０６号）をそれぞれ、ＡＳＷ塔地を加えた
寒天スラントより１白金耳ずつ１００泌のＡＳＷ培地が
入った５００Ｍ容フラスコに接種し、２８ｑｏで１昼夜
１１８ｐｍ‘こて前培養した。
５２０５号）、ミクロコッカス・ルテゥス（徴工研菌寄
第５２０７号）及びミクロコッカス・バリアンス（徴工
研菌寄第５２０６号）をそれぞれ、ＡＳＷ塔地を加えた
寒天スラントより１白金耳ずつ１００泌のＡＳＷ培地が
入った５００Ｍ容フラスコに接種し、２８ｑｏで１昼夜
１１８ｐｍ‘こて前培養した。
Claims (1)
- １ 海洋、海岸土壌または海産物から分離したミクロコ
ツカス、アースロバクターおよびパラコツカス属に属す
るビタミンＢ＿１＿２生産菌を単独または二種以上、食
塩を２％以上含有しその他窒素源、炭素源、その他の無
機塩類、微量要素を含有する栄養培地で２５〜４０℃、
ｐＨ６〜８で好気的に培養し、培養液からビタミンＢ＿
１＿２を採取することを特徴とする発酵法によるビタミ
ンＢ＿１＿２の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54127802A JPS6013679B2 (ja) | 1979-10-02 | 1979-10-02 | 発酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP54127802A JPS6013679B2 (ja) | 1979-10-02 | 1979-10-02 | 発酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5651994A JPS5651994A (en) | 1981-05-09 |
| JPS6013679B2 true JPS6013679B2 (ja) | 1985-04-09 |
Family
ID=14969030
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP54127802A Expired JPS6013679B2 (ja) | 1979-10-02 | 1979-10-02 | 発酵法によるビタミンｂ↓１↓２の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6013679B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0469863U (ja) * | 1990-10-30 | 1992-06-19 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8181749B2 (en) | 2007-08-09 | 2012-05-22 | Mitsubishi Electric Corporation | Speed governor for an elevator |
-
1979
- 1979-10-02 JP JP54127802A patent/JPS6013679B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0469863U (ja) * | 1990-10-30 | 1992-06-19 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5651994A (en) | 1981-05-09 |
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