JPS5982088A - ピキア属菌によるソルビト−ルの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はブドウ糖から微生物的手法によってソルビトー
ルを製Ｒ１する方法に関（〕、よりｉ：Ｘシ＜、　ｔ；
Ｌピキア属微生物の生菌体、処叩菌体、菌体破砕物おＪ
、び菌（本抽出物等を用いで′）ψ几型二コー１−ンア
ミド　アデニン　ジヌクレオチド　小スフエイ１へ（以
下Ｎ　Ａ　ｒ）　ｌ）ト１とする）の存在下にブドウ糖
からソルビトールを効率よく製造する方法に関する。

ソルビトールは特有の１１味を有覆ると共に反応＋Ｉに
乏しく、無害であって、蘭潤調節作用を右するため、そ
のまま食品、歯みがさ、化１７１品舌１添加物として使
用される他、ビタミンＣ１界面粘１／１剤製造の中間原
料どＩノで広く使用され７いる。

ソルビ１ヘールは現在、ｒ渠内にはブドウ糖をうネーニ
ツノｌル等のＮ１触媒を用いて接触還元ｌノＣ製造され
ているが、このような方法によれば反応条イ′ｉが必然
的に高調（１６０℃）、高ＩＴ　（１７０ＫＯ，／ａｒ
ｎ２）となりＴネルギーを多く浦費す□る他、耐月容器
を必要とし・、更に水素を取扱う関係１爆発の危険が内
在している。

本発明者らはト記方法とは発想を異１１ノ、ηルコース
を微生物学的に還元り−ることにより緩和イ１条付でソ
ルビ１ヘールを製造する方法を試み／、−’　、、　−
１ｆ）ドウ糖をソルビ１〜−ルに還元ｔＪるＩＸＶ　７
７４　ＬＳＩ動物細１１［す系で（３１，羊の精のう中
（Ｈ、Ｇ　、　ｌ−１ｅｒｓ　　１１１ｏｃｌｌｅｌｌ
ｌ。

、Ｂｉｏｐｔ＋ｙｓ、　　△ｃｌａ　　３７　（Ｈｌｆ
ｉＯ）　１２７　１３８）あるいは１ノンズ中（Ｍ　、
　Ｌ　ｏｕ　　１３１ｏｃｈｅＩＩｌ。

Ｂｉｏｐｂｙｓ、　　ΔＣｉａ　　１　’Ｉ　１　（１
９６７）　！′）４−／−５）５つ）に存在することは
知られているが、微生物では、わヂかに粕分１１ｆｌ　
／ｌ　５　２４８３　／Ｉ月及び４６−２３０３８号に
キシロースをキリン１〜−ルに好気的に醗酵しＣ′Ｊ！
ｉｉ元りる方法が開示されているにすぎない。また、上
記発明に開示されｌこ菌株をグルニ１−ス１６地中で培
養してもソルビ１〜−ルを１ｑることはできなかった。

そこ−（パ本発明者らは多種類の微生物に′）いて試験
を行っＩ、二結宋、五炭糖中で培養増殖１ノしめたビニ
１７属の菌体、あるいは菌体抽出物、凍結乾燥菌体Ｎ　
Ａ　Ｉ）　Ｐ　ｌ−１の存在下に基質グルコースをソル
ビ１〜−ルに高収率に還元することを児出し゛Ｃ本発明
を完成するにな下った。

本弁明に用いるビニ１ア屈としＣはピキア・グルクラム
（Ｐ　１ｃｌ）ｉａ　　ｇｕｃｒｃｕｕｍ）　　１　「
００９４９．ビーＶア・４−シロ号（Ｐ　１ｃｈｉａ　
　ｘｙｌｏｓａ）　　　１　［００９５０等が挙げられ
るが、中でもピー＋−”Ｐ　、ｉ−シ１１”ＪＩＦＯ０
９５（ｌ　　がりｆましい。

本発明に係る菌を増殖させるにあたつ−ＣはＩ、ｉＪ水
源として２〜１５％、Ｄ−キシロース、Ｄ−ノノノヒノ
ース、Ｄ−リボース等のＩｊ炭糖を含イｊし、ｒ−スト
エキス又はコーンスディープリカー等を添付した液体培
地中で２５〜３５℃で２〜１０　＋＋　＋１；＋培養す
る。培養法は通気培養、振掃培養、回転ｉ・ラムｄ１等
好気的条件であればいずれも採用（゛さろ。

また、培地に上記成分の他各種ビタミン、無機″ζ′１
、ペプトンおよびイースト−ｒ、４ス等の有機物を加λ
てより増殖率を高めることもできる。

このようにして増殖した菌体を集菌、洗滌り、（ｊｑｋ
生菌をそのまま使用してもある程庶の９１宋【、１゜認
められるが凍結乾燥菌体、凍結融解菌体、７’　ｔ１〜
ン、■−チル等の有機溶媒処理した菌体等の処理菌体を
用いｌｃ力がはるかに効宋的である。また、超音波処理
、ビブロゲンレルミル等の破砕機を用いて調製した菌体
破砕物ｄ３よび菌体抽出物を用いることもできる。

ソルビ１〜−ルを製造するにあたー）では、ト記方−？
で得られた処理菌体、菌体破砕物又はこれから望ましく
は２５〜３５℃で反応させる。この際補Ｍ索としてＮ　
Ａ　Ｄ　Ｉ）　ｌ−１を共存さゼることによってソルビ
トールの生産性は飛躍的に向上する。

Ｎ　Ａ　Ｄ　Ｉ）　Ｈの添加量は使用する菌体の調製法
あるいは菌体の抽出操作により大幅に異り、ブドウ糖１
モル当り０．１ミリモル〜２０モル望ましくは０．１モ
ル〜１０モルである。反応に要する時間もまた条ヂ［に
より大きく変動し、例えば菌体抽出物を用いた場合、３
０分ないし１４日で反応は完了する。

反応終了後、母液からソルビトールを分１１１する。

ソルビ１〜−ルの分ｉｔ精製にあたっては遠心分離法、
限外濾過法、イオン交換ｖ１等公知の方法を組合せで利
用する。

以下、実施例を挙げて本発明の詳細な説明覆る。

実施例１ ５００ｎ＋ｌ容消化フラスコに滅菌した表１に示す組成
の培地５０ｍ１を入れピキア・ケルクラム　１１１ｒ　
ｏ　　ｏ９ａ９　　株およびピキア・キシロリ　ｌ　Ｆ
　Ｏ、’０９５０　　株をそれぞれ１白金耳舶菌し、３
０℃、０１１１間培養した。培養菌体をリンＭｔｊ組液
で２回洗滌し、６１００像にお（」る濁度が２５になる
よう（、ニリン酸緩衝液に懸１１１ｉ１１］だ。この菌
体懸濁液を２０分間超音波処理し、１４，０００（＋　
、　２０分間遠心分Ｎ１し、イの１：油画分をソルビト
ールの生産に供した。

上記操作で得た上清両分を用いて表２に丞づ組成の反応
液を調製し、ｒｌＨ７，５とし、３０　℃で６時間反応
させた。ピキア・ケルクラム　ＩＦ００９４９　　株で
は２１μ１ｌｌｏｌｅｓ　、ピキア・キシ［１すｆ　Ｆ
　Ｏ０９５０株では８１μｍｏｌｅｓのソルビｌ−−ル
がそれぞれ得られた。

Ｄ−×ｙ１０Ｓ０　　　　　　８（１ ’：、”１ｉｉ　　Ｋ　ｌ−１：！　ｌ：）。４　　０
．１ｇＭＱ　　ＳＯ２・　７１−１２０　　　　　０．
０５（］Ｃａ　　Ｃ１ン　　・　２＋−１２００，０Ｉ
Ｃ＋Ｍａ　　Ｃ１Ｏ，０１（１ カザミノ酸　　　　　　０．１１ｇ イースｌ−１キス　　　０．１（］ 表　　２ ）９心−ｌ’、　Ｗｉ　ｉｔ夕　　　　　　　　５　　
用１グルコース　　　　　３　、６ｍ　ｍｏｌｅｓＮΔ
ＩＩＰＨ０，２＋ｎ　ｍｏｌｃｓ リンＭ緩衝液　　　　Ｑ　、７１１１　ｍｏｌｅｓ蒸　
　溜　　水　　　　　　　　　５）１生産物のＭｆ認【
Ｊ薄層クロマ１〜グラフィー、高速液体クロマ１〜グラ
フイーおよびガスグロマトグラノイーによって行っＩｃ
　ｏまた、定年は高速液体りＬ１７１゛・グラノィーで
行った。

実施例 ミ ー′１　実施例１と同様に培養して得られたピキア・＝
１シロリ　Ｉ　Ｆ　Ｏ０９５０の菌体をリン酸緩衝液で
２回洗滌した後、凍結乾燥した。

得られた凍結乾燥菌体を用いて表３に示した反応組成液
を調製し、３０℃で１６時間反応させた１、その反応液
から１２１μｍｏｌｅｓのソルビ１〜−ルが得られた。

表　　３ 凍結乾燥菌体　　　　　０．５゜ グルコース　　　　　１０　　ｍ　ｍｏｌｅｓＮＡＤＰ
Ｈ２ｍｍｏｌｃｓ リン酸緩衝液　　　　　３．５　ｍ　ｍｏｌｅｓ蒸　　
溜　　水　　　　　　　　　４０　　用１実施例３ ビー１）７・キシロ°リ−Ｔ　Ｆ　Ｏ０９５０株を用い
て実施例１の方法で得た反応液２０ｍ１をイオン交換樹
脂（アミネックスＡＥ）：商品名）のカラムに通してソ
ルビ１〜−ルを精製した。得られたソルビ１−１〜−ル
は６５μｍｏｌｅｓであった。

ら １ ．１ １ ．１ １゜ 手影賢ｎ’ｔ−正用　（白え） 特許庁長官殿 １、　事イ′１の表示　　昭和　５７　年特許願第　１
９００５３　２−１、発明の名称 ５、　補正命令の日イ１　　　自　　発６、　補正によ
り増加する発明の数　　　な　　し７、　補正の対象　
　　明細書の［発明の詳細な説明の欄ｊ８、　補正の内
容　　別紙のとおり 別　　紙 明細ｐ（第７頁第６行「」のｒｖａｃ＋−＋をｌ−Ｎ　
ａ　Ｃｌ　ｊにｈ１正しまり。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１）　　ピキア属微生物を五炭糖を主栄養源とする培
   地を用いて好気的に培養して得られた生菌体処理菌体、
   菌体破砕物及び菌体抽出物の少くとも１種を還元型ニコ
   チンアミド　アデニン　ジヌクレオチド　ホスフェイト
   の共存下にブドウ糖に作用せしめてソルビトールを製造
   することを特徴とする微生物によるソルビトールの製造
   法。 【２）　　ピキア属微生物がピキア・ケルクウム、ピキ
   ア・キシロサである特許請求の範囲第１項の微生物によ
   るソルビトールの製造法。 〔刃　ピキア・ケルクラムが［Ｆ　０　０９４９．ピキ
   ア・キシロサがＩ　Ｆ　Ｏ０９５０である特許請求の範
   囲第２項の微生物によるソルビトールの製造法。