JPS60168726A - 細胞毒性物質を結合した反応性高分子およびその製造法 - Google Patents
細胞毒性物質を結合した反応性高分子およびその製造法Info
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- JPS60168726A JPS60168726A JP59025665A JP2566584A JPS60168726A JP S60168726 A JPS60168726 A JP S60168726A JP 59025665 A JP59025665 A JP 59025665A JP 2566584 A JP2566584 A JP 2566584A JP S60168726 A JPS60168726 A JP S60168726A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は細胞毒性物質を結合した反応性重合体とその中
間体及びそれらの製造法に関する。更に詳しくは本発明
は腫瘍細胞等の標的物に結合能を有する抗腫瘍抗体等と
細胞毒物とを結合して標的指向型側がン剤等を製造する
場合において細胞毒物として用いることのできる反応性
重合体及びその製造法並びにその中間体及びその製造法
に関するものである。
間体及びそれらの製造法に関する。更に詳しくは本発明
は腫瘍細胞等の標的物に結合能を有する抗腫瘍抗体等と
細胞毒物とを結合して標的指向型側がン剤等を製造する
場合において細胞毒物として用いることのできる反応性
重合体及びその製造法並びにその中間体及びその製造法
に関するものである。
従来抗腫瘍抗体に細胞、毒物を結合して抗腫瘍剤を製造
する事は公知である。抗腫瘍抗体と細胞毒性の結合にあ
たりて抗腫瘍抗体の標的結合能を低下させずに多数の細
胞毒性物質を結合せしめるためポリマー担体が用いられ
ている。ポリマー担体として用いられている代表的ポリ
マーはデキストランポリグルタミン酸である。デキスト
ランの場合は主として過ヨウ素酸等で酸化してアルデヒ
ド誘導体にしＣ用いるが、細胞毒性物質と抗腫瘍抗体を
同一官能基を用いて反応させるため再現性良く結合体を
得るのが困難であり、かつ必要以上に抗腫瘍抗体が結合
し高分子量体を生成して腫瘍細胞等との結合能力を低下
させやすい。又ポリグルタミン酸は上記欠点を有する低
電荷を有するため抗体の結合能を低下せしめると同時に
体内の特定臓器に渠まるので標的指向型側がン剤として
望ましくない。
する事は公知である。抗腫瘍抗体と細胞毒性の結合にあ
たりて抗腫瘍抗体の標的結合能を低下させずに多数の細
胞毒性物質を結合せしめるためポリマー担体が用いられ
ている。ポリマー担体として用いられている代表的ポリ
マーはデキストランポリグルタミン酸である。デキスト
ランの場合は主として過ヨウ素酸等で酸化してアルデヒ
ド誘導体にしＣ用いるが、細胞毒性物質と抗腫瘍抗体を
同一官能基を用いて反応させるため再現性良く結合体を
得るのが困難であり、かつ必要以上に抗腫瘍抗体が結合
し高分子量体を生成して腫瘍細胞等との結合能力を低下
させやすい。又ポリグルタミン酸は上記欠点を有する低
電荷を有するため抗体の結合能を低下せしめると同時に
体内の特定臓器に渠まるので標的指向型側がン剤として
望ましくない。
本発明者らはかかる欠点を解決すべく鋭意検討を行なっ
た結果、電荷を有しないポリマー担体であって安価に容
易に抗腫瘍抗体の活性を低下させず、かつ制がン効果を
有するポリマー担体を見いだし本発明にいたった。
た結果、電荷を有しないポリマー担体であって安価に容
易に抗腫瘍抗体の活性を低下させず、かつ制がン効果を
有するポリマー担体を見いだし本発明にいたった。
本発明は標的指向型治療剤を製造するために使用できる
細胞毒性物質を結合した反応性面分子であってかつ標的
能を有する抗腫瘍抗体との結合能を有するものを提供す
るものである。
細胞毒性物質を結合した反応性面分子であってかつ標的
能を有する抗腫瘍抗体との結合能を有するものを提供す
るものである。
即ち、本発明は細胞毒性物質を結合した式〔１〕で表わ
される反応性高分子である。
される反応性高分子である。
〔式中、Ｘ、Ｙ、Ｗおよび２は各々次の意味を示す。
Ｘ：分子中にアミノ基もしくはイミノ基を有する細胞毒
性物質の反応残基又 はヒドロキシル基 Ｙ：水溶性脂肪族第一級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 ２：水素原子または一般式ｌもしくは −Ｓ−艮で示される基 ここでＺ′は隣りの硫黄原子と共に活性ジスルフィド結
合を形成し得る基、艮は炭化水素 （但し、２が水素原子である場合、−ＳＺで表わされる
一８Ｈ基は分子内または分子間で他の一８Ｈ基と平衡的
に−５−５−結合を形成し得るが、これらを含んで一５
Ｈと表現するものとする。） また、ｎ 、 ｍ 、 ｌ 、 ｒ 、 ｐおよび９は
０または自然数であって構成単位の数を示し、これらの
関係は次のとおりである。
性物質の反応残基又 はヒドロキシル基 Ｙ：水溶性脂肪族第一級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 ２：水素原子または一般式ｌもしくは −Ｓ−艮で示される基 ここでＺ′は隣りの硫黄原子と共に活性ジスルフィド結
合を形成し得る基、艮は炭化水素 （但し、２が水素原子である場合、−ＳＺで表わされる
一８Ｈ基は分子内または分子間で他の一８Ｈ基と平衡的
に−５−５−結合を形成し得るが、これらを含んで一５
Ｈと表現するものとする。） また、ｎ 、 ｍ 、 ｌ 、 ｒ 、 ｐおよび９は
０または自然数であって構成単位の数を示し、これらの
関係は次のとおりである。
ｎ 十ｍ≧２
０．００１≦ｐ＋ｑ／ｎ−）−ｍ−Ｈ＋ｒ＋ｐ＋ｑ≦０
．５０ ）で表わされ、分子量が２０００〜８，０００
，０００であるポリサクシンイミド誘導体。賢鳴４□こ
こで一般式（Ｉ）におけるＺは水素原子又は一般式２′
で示される基を意味し、２′は隣りの硫黄原子と共に活
性ジスルフィド結合を形成しうる基を表わすが、後者（
Ｚ’）としては、例えば、２−ピリジルチオ基 ８−カルボキシル−４−二トロフェニルチオ−、−）
ロー ２− ヒ＋） シルチ、ｔ ７Ｅ （ｏ２Ｎ−ｃ
！ｊ−ｓ−）、及びＮ−フェニルアミノーＮ′−フェニ
ルイる。
．５０ ）で表わされ、分子量が２０００〜８，０００
，０００であるポリサクシンイミド誘導体。賢鳴４□こ
こで一般式（Ｉ）におけるＺは水素原子又は一般式２′
で示される基を意味し、２′は隣りの硫黄原子と共に活
性ジスルフィド結合を形成しうる基を表わすが、後者（
Ｚ’）としては、例えば、２−ピリジルチオ基 ８−カルボキシル−４−二トロフェニルチオ−、−）
ロー ２− ヒ＋） シルチ、ｔ ７Ｅ （ｏ２Ｎ−ｃ
！ｊ−ｓ−）、及びＮ−フェニルアミノーＮ′−フェニ
ルイる。
Ｗは低級アルキレン基であり、例えば炭素数１〜４の直
鎖状または分枝鎖状のアルキレン基を挙げることができ
る。
鎖状または分枝鎖状のアルキレン基を挙げることができ
る。
式（１）のＸは分子中にアミノ基もしくはイミノ基を含
む細胞毒性物質の反応残基又はヒドロキシル基を表わす
。
む細胞毒性物質の反応残基又はヒドロキシル基を表わす
。
本発明における細胞毒性物質とは、そのままの状態で細
胞に毒性を発揮する物質、あるいはそのままでは毒性を
発揮しないが、生体内で細胞に毒性を発揮し得る物質に
転換し得る物質をいう。
胞に毒性を発揮する物質、あるいはそのままでは毒性を
発揮しないが、生体内で細胞に毒性を発揮し得る物質に
転換し得る物質をいう。
これらの例としては
ｐ−（Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）〕フェニレン
ジアミン Ｐ−（ビス（２−クロロエチル）アミノ〕−Ｌ−フェニ
ルアラニン（メルフアラン）２−アミノ−Ｎ−（ｐ−ビ
ス（２−クロロエチル）アミン〕フェニルー８−ヒドロ
キシプロピオンアミド １−（５’−（２−アミノエチルホスホリル）−β−Ｄ
−アラビノフラノシル）シトシン２−アミノ−Ｎ −（
ｐ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニル−８−
ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオンアミドメ
トトレキセート ｃＨ，ｃｔｉ。
ジアミン Ｐ−（ビス（２−クロロエチル）アミノ〕−Ｌ−フェニ
ルアラニン（メルフアラン）２−アミノ−Ｎ−（ｐ−ビ
ス（２−クロロエチル）アミン〕フェニルー８−ヒドロ
キシプロピオンアミド １−（５’−（２−アミノエチルホスホリル）−β−Ｄ
−アラビノフラノシル）シトシン２−アミノ−Ｎ −（
ｐ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェニル−８−
ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオンアミドメ
トトレキセート ｃＨ，ｃｔｉ。
アドリアマイシンＤ
マイトマイシンＣ
ｘ＝ｉ−ｉ 、ダウノマイシン
Ｘ＝田、アドリアマイシン
式〔１〕のＹは水溶性の脂肪族第一級アミンの反応残基
である。本発明の目的には必ずしも用いる必要はない（
４？＋ｒ＝０）が反応性高分子の水溶性を向上する目的
で導入する。
である。本発明の目的には必ずしも用いる必要はない（
４？＋ｒ＝０）が反応性高分子の水溶性を向上する目的
で導入する。
用いられる水溶性の脂肪族−級アミンとしてはエタノー
ルアミン、８−アミノ、−１，２−プロパンジオール等
の水酸基を有する脂肪族−級アミン、ＣＨｓ（ＣＨｓ）
ｇ”Ｈｚ （ｇｔ ＝ １〜４の整数）の脂肪族アミン
等である。特に水酸基を有するエタノールアミン、８−
アミノ−１゜２−プロパンジオール等のアミンが好まし
い。
ルアミン、８−アミノ、−１，２−プロパンジオール等
の水酸基を有する脂肪族−級アミン、ＣＨｓ（ＣＨｓ）
ｇ”Ｈｚ （ｇｔ ＝ １〜４の整数）の脂肪族アミン
等である。特に水酸基を有するエタノールアミン、８−
アミノ−１゜２−プロパンジオール等のアミンが好まし
い。
ｎ十ｍはＸが結合した構成単位の数をあられし、４＋ｒ
は水溶性脂肪−級アミンが結合しｔこ構成単位の数を表
わし、ｐ＋ｑはＺが結合した構成単位の数をあられす。
は水溶性脂肪−級アミンが結合しｔこ構成単位の数を表
わし、ｐ＋ｑはＺが結合した構成単位の数をあられす。
ｎ＋ｍ／ｎ＋ｍ＋６＋ｒ＋ｐ＋ｑはモノマーユニットで
あるサクシンイミド基１モルに対してＸの縮合モル数を
あられす。
あるサクシンイミド基１モルに対してＸの縮合モル数を
あられす。
ｐ＋ｑ／ｎ＋ｍ＋６＋ｒ＋ｐ＋ｑはモノマーユニットで
あるサクシンイミド基１モルに対して一般式−ＮＨ−Ｗ
−３−Ｚで示される基の縮合モル数を表わす。
あるサクシンイミド基１モルに対して一般式−ＮＨ−Ｗ
−３−Ｚで示される基の縮合モル数を表わす。
分子量は末端のアミノ基の定量で得゛られた値で表示し
た。
た。
構成単位の重合体中での配列状態は任意である。即ち式
〔１〕では便宜上ブロック重合体の様に表わしであるが
、たとえばランダム共重合体を含みこれに限定されるも
のでない。
〔１〕では便宜上ブロック重合体の様に表わしであるが
、たとえばランダム共重合体を含みこれに限定されるも
のでない。
分子量は２．０００〜ａ、ｏ ｏ ｏ、ｏ ｏ ｏ好ま
しくは２．０００〜８，０００，０００ であり、ｎ
十ｍは２以上、ｎ＋ｍ／ｎ＋ｍ−＋１！＋ｒ＋ｐ＋ｑが
１未満であり、ｐ＋ｑ ／ｎ＋ｍ＋６＋ｒ＋ｐ＋ｑが０
．００１以上、０．５０以下好ましくは０．８以下であ
る。
しくは２．０００〜８，０００，０００ であり、ｎ
十ｍは２以上、ｎ＋ｍ／ｎ＋ｍ−＋１！＋ｒ＋ｐ＋ｑが
１未満であり、ｐ＋ｑ ／ｎ＋ｍ＋６＋ｒ＋ｐ＋ｑが０
．００１以上、０．５０以下好ましくは０．８以下であ
る。
分Ｆｔがこれ以下であると反応性高分子１分子に結合し
ている細胞毒性物質の数が少なくなって抗腫瘍抗体等に
結合できる細胞毒性物質の量が少なくなって好ましくな
い。又分子量が大きすぎると抗腫瘍抗体の会合体が生じ
やすくなり不溶化分、大分子量が生成しやすく好ましく
ない。
ている細胞毒性物質の数が少なくなって抗腫瘍抗体等に
結合できる細胞毒性物質の量が少なくなって好ましくな
い。又分子量が大きすぎると抗腫瘍抗体の会合体が生じ
やすくなり不溶化分、大分子量が生成しやすく好ましく
ない。
ｐ＋ｑ／ｎ＋ｍ＋６＋ｒ＋ｐ＋ｑはｏ、ｏ ｏ ｉ以上
であり、これ未満であると抗腫瘍抗体等との結合比率が
低くなり好ましくない。又０．６以下好ましくは０．８
以下であって多過ぎると抗腫瘍抗体等の会合体が生じや
す（なり不溶化分、大分子量分が増加して好ましくない
。
であり、これ未満であると抗腫瘍抗体等との結合比率が
低くなり好ましくない。又０．６以下好ましくは０．８
以下であって多過ぎると抗腫瘍抗体等の会合体が生じや
す（なり不溶化分、大分子量分が増加して好ましくない
。
本発明の、一般式（１）で表わされる反応性重合体は、
下記一般式〔２〕の構成単位を主成分とするポリサクシ
ンイミドより容易に誘導され得る。
下記一般式〔２〕の構成単位を主成分とするポリサクシ
ンイミドより容易に誘導され得る。
ポリサクシンイミドは別名アンヒドロポリアスパラチッ
クアシッドとも呼ばれる重合体であって、主としてアス
パラギン酸の熱縮合によって得ることができる。（Ｊ、
Ｋｏｖａｃｓｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ
、 ２６ １０８４（１９６１） ｉＰ 、 Ｎｅｒｉ
ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ、↓１８９
８（１９７Ｂ）’） 具体的製造法の例としては、アスパラギン酸（光学活性
体又はＤＬ体であっても良い）を常圧又は減圧下、１６
０℃以上２４０℃以下で脱水重合することによって得る
ことができる。脱水条件が厳しい程、短時間で高分子盪
の重合体を得る事ができるが、温度をこれ以上にすると
重合体の分解がおこり好ましくない。温度がこれ以下で
あると重合体を得るのに長時間を要し好ましくない。
クアシッドとも呼ばれる重合体であって、主としてアス
パラギン酸の熱縮合によって得ることができる。（Ｊ、
Ｋｏｖａｃｓｅｔ ａｌ、 Ｊ、 Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ
、 ２６ １０８４（１９６１） ｉＰ 、 Ｎｅｒｉ
ｅｔ ａｌ、、 Ｊ、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ、↓１８９
８（１９７Ｂ）’） 具体的製造法の例としては、アスパラギン酸（光学活性
体又はＤＬ体であっても良い）を常圧又は減圧下、１６
０℃以上２４０℃以下で脱水重合することによって得る
ことができる。脱水条件が厳しい程、短時間で高分子盪
の重合体を得る事ができるが、温度をこれ以上にすると
重合体の分解がおこり好ましくない。温度がこれ以下で
あると重合体を得るのに長時間を要し好ましくない。
重合後反応生成物をＤＭＦ又はＤＭＳＯに溶解して水に
て再沈を行ない未反応アスパラギン酸及び低分子縮合体
を除去してガラスフィルターで口過後乾燥を行なう。必
要とあればこの操作を繰返す。
て再沈を行ない未反応アスパラギン酸及び低分子縮合体
を除去してガラスフィルターで口過後乾燥を行なう。必
要とあればこの操作を繰返す。
かくして得られた重合体が一般式〔２〕で表わされるも
のである事がＩＲＳＮＭＲから示唆されているが、部分
的にこれ以外の構成単位を含んでいたとしても実質的に
一般式〔２〕の構成単位が主成分である事は一般に認め
られているところである。
のである事がＩＲＳＮＭＲから示唆されているが、部分
的にこれ以外の構成単位を含んでいたとしても実質的に
一般式〔２〕の構成単位が主成分である事は一般に認め
られているところである。
かくして得られたポリサクシンイミド〔２〕はアミノ基
を有する化合物たとえばエタノールアミンと反応して、
次に示す反応式の反応を行なう事が知られている。
を有する化合物たとえばエタノールアミンと反応して、
次に示す反応式の反応を行なう事が知られている。
０
〔２〕
Ｃ式中、ｋ、ｘおよびγは自然数を示す。〕まｒこ、ア
ルカリ条件下で次に示す反応式の反応を行なう事が知ら
れている。
ルカリ条件下で次に示す反応式の反応を行なう事が知ら
れている。
す
〔２〕
〔式中に、ｘおよびγは自然数を示す。〕本発明におけ
るポリサクシンイミド誘導体（１）を得る方法としては
２つの方法がある。
るポリサクシンイミド誘導体（１）を得る方法としては
２つの方法がある。
第一の方法は、式〔１〕においてＸ、、、Ｏｆ（である
反応性重合体〔８〕およびそれを経由してＸ＝細胞毒性
物質である反応性重合体〔１〕を得る方法である。すな
わちポリサクシンイミドを下記一般式〔８〕で示される
誘導体にする方法であり、さらに分子中にアミン基又は
イミノ基を含む細胞毒性物質を結合させ、必要とあれば
脂肪族第一級アミンと反応させる方法である。
反応性重合体〔８〕およびそれを経由してＸ＝細胞毒性
物質である反応性重合体〔１〕を得る方法である。すな
わちポリサクシンイミドを下記一般式〔８〕で示される
誘導体にする方法であり、さらに分子中にアミン基又は
イミノ基を含む細胞毒性物質を結合させ、必要とあれば
脂肪族第一級アミンと反応させる方法である。
第二の方法はＸ＝細胞毒性物質である重合体〔１〕を得
る方法であり、アミン基を有する細胞毒性物質を結合す
るのに有効な方法で細胞毒性物質、抗腫瘍抗体等との結
合能を有する官能基供与化合物（ＮＨ，−Ｗ−８−７，
１１） 及ヒ水溶性脂肪族第−級アミンをいずれもそれ
らが有するアミン基を用いて直接サクシンイミ体〔１〕
にする方法である。
る方法であり、アミン基を有する細胞毒性物質を結合す
るのに有効な方法で細胞毒性物質、抗腫瘍抗体等との結
合能を有する官能基供与化合物（ＮＨ，−Ｗ−８−７，
１１） 及ヒ水溶性脂肪族第−級アミンをいずれもそれ
らが有するアミン基を用いて直接サクシンイミ体〔１〕
にする方法である。
第一の方法としては、以下（１１〜（３）の方法がある
。
。
＋１１ （ａｌポリサクシンイミドと（イ）一般式）Ｉ
！Ｎ−Ｗ−Ｓ−Ｚ （Ｗと２は前記と同じ）で表わされ
する化合物、（用必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミ
ンと反応した後、アＩレカリ水溶液で処理して一般式〔
８〕の中間体を得る。
！Ｎ−Ｗ−Ｓ−Ｚ （Ｗと２は前記と同じ）で表わされ
する化合物、（用必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミ
ンと反応した後、アＩレカリ水溶液で処理して一般式〔
８〕の中間体を得る。
（ｂｌその後（／ｊアミ７基又はイミノ基を含む細胞毒
性物質、に）必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミンと
反応せしめる方法 （２） ポリサクシンイミドと（ａ）（イ）一般式Ｈ，
Ｎ −Ｗ−８−８−Ｒ（Ｗは前記と同じ。Ｋはアルキル
基（例えば炭素数１〜５の低級アルキル基）アラルキル
基（例えば無置換または置換フェニルアルキル基）また
はアリール基（例えば無置換または置換フェニル基）等
の炭化水素基を示す。）、（ロ）必要とあれば水溶性脂
肪族−級アミンと反応させた後、アルカリ水溶液で処理
し一般式（８）（Ｚ＝−３−Ｒ）の中間体を得る。
性物質、に）必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミンと
反応せしめる方法 （２） ポリサクシンイミドと（ａ）（イ）一般式Ｈ，
Ｎ −Ｗ−８−８−Ｒ（Ｗは前記と同じ。Ｋはアルキル
基（例えば炭素数１〜５の低級アルキル基）アラルキル
基（例えば無置換または置換フェニルアルキル基）また
はアリール基（例えば無置換または置換フェニル基）等
の炭化水素基を示す。）、（ロ）必要とあれば水溶性脂
肪族−級アミンと反応させた後、アルカリ水溶液で処理
し一般式（８）（Ｚ＝−３−Ｒ）の中間体を得る。
（ｂ）その後（ハ）アミノ基又はイミノ基を含む細胞毒
性物質、に）必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミンを
反応させる。
性物質、に）必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミンを
反応させる。
（ａ）またはｌｂ）の反応後、必要とあれば反応性成物
のジスルフィド基をチオール化合物あるいは水素化ホウ
素化合物等で反応させて還元的に切断することによって
式〔ｌ〕において２＝水素原子の重合体を得る。
のジスルフィド基をチオール化合物あるいは水素化ホウ
素化合物等で反応させて還元的に切断することによって
式〔ｌ〕において２＝水素原子の重合体を得る。
（８）上記いずれかの方法で得られたチオール型反応性
重合体（式（１〕においてＺは水素原子）に活性ジスル
フィド比合物を反応させることによって得る方法がある
。この時は式（１）でＺ＝Ｚ／の重合体が得られる。
重合体（式（１〕においてＺは水素原子）に活性ジスル
フィド比合物を反応させることによって得る方法がある
。この時は式（１）でＺ＝Ｚ／の重合体が得られる。
さらに上記（ｇ ＄５よび（２）の方法として上述の（
ａ）における（イ）、（ロ）および（ｂ）におけるｅ＼
）、←）の反応は任意の順番で逐次行なう逐次反応法、
二成分の反応を同時に行なう同時反応法がある。
ａ）における（イ）、（ロ）および（ｂ）におけるｅ＼
）、←）の反応は任意の順番で逐次行なう逐次反応法、
二成分の反応を同時に行なう同時反応法がある。
反応溶媒として（イ）、（ロ）の反応はポリサクシンイ
ミドの良溶媒であるＤＭＦ又はＤＭＳ Ｏを用いる。
ミドの良溶媒であるＤＭＦ又はＤＭＳ Ｏを用いる。
ポリサクシンイミドもしくは（イ）、（ロ）の反応を逐
次反応法で行う場合は（イ）又は（ロ）を反応せしめた
ポリサクシンイミド誘導体を、そのｌ” ８０ （Ｗ／
Ｗ ） ％ ｃ７） Ｄ Ｍ Ｆ 又ハＤ Ｍ Ｓ Ｏ
溶媒中で（イ） 、 ｆ口）の１ないし２成分（溶液中
のサクシンイミド基１モルに対して一成分につきｏ、ｏ
ｏｔ〜ｌＯモル）と、−４０〜８０℃において１分〜２
日間攪拌下反応せしめるのが適当である。未反応の成分
は透析又はゲル沖過により除去することができる。一般
式〔８〕で表わされる中間体を得るには、前記（１１、
（２１における（λ）のアルカリ水溶液処理前の反応中
間体に未反応サクシンイミド基がある事が望ましい。未
反応サクシンイミド基が加水分解を受けて一〇〇〇Ｈ基
を形成するからである。
次反応法で行う場合は（イ）又は（ロ）を反応せしめた
ポリサクシンイミド誘導体を、そのｌ” ８０ （Ｗ／
Ｗ ） ％ ｃ７） Ｄ Ｍ Ｆ 又ハＤ Ｍ Ｓ Ｏ
溶媒中で（イ） 、 ｆ口）の１ないし２成分（溶液中
のサクシンイミド基１モルに対して一成分につきｏ、ｏ
ｏｔ〜ｌＯモル）と、−４０〜８０℃において１分〜２
日間攪拌下反応せしめるのが適当である。未反応の成分
は透析又はゲル沖過により除去することができる。一般
式〔８〕で表わされる中間体を得るには、前記（１１、
（２１における（λ）のアルカリ水溶液処理前の反応中
間体に未反応サクシンイミド基がある事が望ましい。未
反応サクシンイミド基が加水分解を受けて一〇〇〇Ｈ基
を形成するからである。
未反応サクシンイミド基がない時でも（イ）又は（０１
との反応残基が加水分解を受け一〇〇〇Ｈ基を形成する
。しかしその様な条件は主鎖も加水分解を受け低分子化
しやすいので前者の方が望ましい。未反応サクシンイミ
ド基を残す条件は別途に（イ）又は（ｃｌ）とポリサク
シンイミドとの反応速度をめる事により得る事ができる
。
との反応残基が加水分解を受け一〇〇〇Ｈ基を形成する
。しかしその様な条件は主鎖も加水分解を受け低分子化
しやすいので前者の方が望ましい。未反応サクシンイミ
ド基を残す条件は別途に（イ）又は（ｃｌ）とポリサク
シンイミドとの反応速度をめる事により得る事ができる
。
（イ）、（ロ）の使用モル数については、（イ）又は必
要とあれば（イ）、（ロ）の全モル数を使用するサクシ
ンイミド基の全モル数未満にすることが望ましい。かく
して得られたポリサクシンイミド誘導体をアルカリ条件
にする事により容易にカルボキシル基を導入する事がで
きる。アルカリ水溶液との反応はＤＭＦ 、ＤＭＳＯ溶
液中にアルカリ水溶液を滴下するか、又はアルカリ水溶
液中にポリサクシンイミド誘導体を加える事により行う
事ができる。アルカリ水溶液としては、ｐＨ３以上で良
いが０．０ ＩＮ〜２ Ｎ ＮａＯＨ水溶液が適当であ
る。
要とあれば（イ）、（ロ）の全モル数を使用するサクシ
ンイミド基の全モル数未満にすることが望ましい。かく
して得られたポリサクシンイミド誘導体をアルカリ条件
にする事により容易にカルボキシル基を導入する事がで
きる。アルカリ水溶液との反応はＤＭＦ 、ＤＭＳＯ溶
液中にアルカリ水溶液を滴下するか、又はアルカリ水溶
液中にポリサクシンイミド誘導体を加える事により行う
事ができる。アルカリ水溶液としては、ｐＨ３以上で良
いが０．０ ＩＮ〜２ Ｎ ＮａＯＨ水溶液が適当であ
る。
か（して得られた一般式〔８〕で表わされる中間体と方
法（１） 、 （２１におけるｅ＼）、に））との反応
は任意の順蕃で行なう逐次反応法、同時におこなう同時
反応法がある。本発明の目的では（ハ）を多く導入する
事が好ましいので１１）を反応後にに））を反応するの
が好ましい。
法（１） 、 （２１におけるｅ＼）、に））との反応
は任意の順蕃で行なう逐次反応法、同時におこなう同時
反応法がある。本発明の目的では（ハ）を多く導入する
事が好ましいので１１）を反応後にに））を反応するの
が好ましい。
反応溶媒としては通常水又はＤ Ｍ Ｆ 、ＤＭＳＯ等
の有機溶剤を反応溶液とする均一反応系でおこなわれる
。
の有機溶剤を反応溶液とする均一反応系でおこなわれる
。
反応に際しては、例えばｌ−エチル−８−（８−ジメチ
ルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩やジシクロへ
キシルカルボジイミドで重合体中のカルボキシル基を混
合酸無水物の形に活性化しておいてもよい。反応温度は
一４０Ｃ〜１００℃、反応時間はｌＯ分〜ｌＯ日間が適
当である。用いる中間体と（ハ）との割合は中間体の１
０〜２００％特に１００〜２００％が望ましい。（ハ）
との反応においてカルボキシル基が未反応で残存してい
る時はに）との反応においてカルボキシル基をなくする
。
ルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩やジシクロへ
キシルカルボジイミドで重合体中のカルボキシル基を混
合酸無水物の形に活性化しておいてもよい。反応温度は
一４０Ｃ〜１００℃、反応時間はｌＯ分〜ｌＯ日間が適
当である。用いる中間体と（ハ）との割合は中間体の１
０〜２００％特に１００〜２００％が望ましい。（ハ）
との反応においてカルボキシル基が未反応で残存してい
る時はに）との反応においてカルボキシル基をなくする
。
（１）の方法において望ましいＺは水素原子である。
アミノ基を含む細胞毒性物質を用いる時はより簡単な第
二の方法で製造が可能である。
二の方法で製造が可能である。
アミ７基を含む細胞毒性物質とは細胞毒性を有すると共
に、分子中のアミノ基がポリサクシンイミドのサクシン
イミド基 ０ １ １ と反応してアミド結合形成能を有する化合物を言う。
に、分子中のアミノ基がポリサクシンイミドのサクシン
イミド基 ０ １ １ と反応してアミド結合形成能を有する化合物を言う。
換言すればサクシンイミド基と反応してアミド結合を形
成するアミノ基を有していなければならない。
成するアミノ基を有していなければならない。
これらの例としては、ダウノマイシン、アドリアマイシ
ン、Ｐ−アミノ−Ｎ−（ｐ−ビスＣ２−クロロエチル）
アミノコフェニル−８−ヒドロキシアミド、２−アミノ
−Ｎ −（ｐ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェ
ニル−８−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオ
ンアミド、Ｐ−〔ビス（２−クロロエチル）アミノ）−
Ｌ−フェニルアラニン等脂肪族アミノ基を有するものが
挙げられる。
ン、Ｐ−アミノ−Ｎ−（ｐ−ビスＣ２−クロロエチル）
アミノコフェニル−８−ヒドロキシアミド、２−アミノ
−Ｎ −（ｐ−ビス（２−クロロエチル）アミノコフェ
ニル−８−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオ
ンアミド、Ｐ−〔ビス（２−クロロエチル）アミノ）−
Ｌ−フェニルアラニン等脂肪族アミノ基を有するものが
挙げられる。
第２の方法としては以下の（４）〜（６）の方法がある
。
。
（４） ポリサクシンイミド〔２〕と（イ）アミノ基を
有する細胞毒性物質（ロ）一般式Ｈ２Ｎ−Ｗ−８−Ｚ（
Ｗ、Ｚは前記と同じ）で表わされる化合物、およびｆ→
必要とあれば水溶性脂肪族アミンとの反応によって得る
方法。
有する細胞毒性物質（ロ）一般式Ｈ２Ｎ−Ｗ−８−Ｚ（
Ｗ、Ｚは前記と同じ）で表わされる化合物、およびｆ→
必要とあれば水溶性脂肪族アミンとの反応によって得る
方法。
（５） ポリサクシンイミド〔２〕と（イ）アミノ基を
有する細胞毒性物質（ロ）一般式Ｈ２Ｎ−Ｗ−５−８−
Ｒ（Ｗ、Ｒは前記と同じ。）で表わされる化合物および
ＧＴｌ）必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミンと反応
させ、ジスルフィド型の重合体を得る方法又は必要とあ
ればその後反応生成物のジスルフィド基をチオール化合
物あるいは水素化ホウ素化合物と反応させて還元的に切
断することによってチオール型重合体を得る方法。
有する細胞毒性物質（ロ）一般式Ｈ２Ｎ−Ｗ−５−８−
Ｒ（Ｗ、Ｒは前記と同じ。）で表わされる化合物および
ＧＴｌ）必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミンと反応
させ、ジスルフィド型の重合体を得る方法又は必要とあ
ればその後反応生成物のジスルフィド基をチオール化合
物あるいは水素化ホウ素化合物と反応させて還元的に切
断することによってチオール型重合体を得る方法。
（６）上記いずれかの方法で樽られたチオール型反応性
重合体（式（１）においてＺ＝ｆ（）に活性ジスルフィ
ド化合物を反応させることによって得る方法がある。こ
れによりＺがＺ′の反応性重合体（１）が得られる。
重合体（式（１）においてＺ＝ｆ（）に活性ジスルフィ
ド化合物を反応させることによって得る方法がある。こ
れによりＺがＺ′の反応性重合体（１）が得られる。
さらに上記（４）および（５）の方法としては上述の（
イ）、（ロ）および必要により（ハ）の各成分との反応
を任意の順番で逐次行なう逐次反応法、多成分との反応
を同時に行う同時反応法がある。
イ）、（ロ）および必要により（ハ）の各成分との反応
を任意の順番で逐次行なう逐次反応法、多成分との反応
を同時に行う同時反応法がある。
まｒ：ｅｑの成分との反応が必要なときは任意の一成分
との反応を単独で、残り二成分との反応を同時に行なう
二段階法が可能である。
との反応を単独で、残り二成分との反応を同時に行なう
二段階法が可能である。
反応溶媒としては、逐次反応又は二段階反応おける第一
番目の反応および同時反応は、ポリサクシンイミドの良
溶媒であるＤＭＦ又はＤＭＳＯを用いる。逐次反応又は
二段階反応の第二番目以後は、ＤＭＦ又はＤＭＳＯある
いは第一番目又は第二番目の反応で得られたポリサクシ
ンイミド誘導体が水溶性となつた時は水溶媒中で行う事
ができる。
番目の反応および同時反応は、ポリサクシンイミドの良
溶媒であるＤＭＦ又はＤＭＳＯを用いる。逐次反応又は
二段階反応の第二番目以後は、ＤＭＦ又はＤＭＳＯある
いは第一番目又は第二番目の反応で得られたポリサクシ
ンイミド誘導体が水溶性となつた時は水溶媒中で行う事
ができる。
上記（４）及び（５）の反応方法において（イ）、（ロ
）。
）。
（ハ）の成分を反応させるには、以下の操作により実施
される。
される。
ポリサクシンイミド〔２〕又は第一もしくは第二反応後
の未反応のサクシンイミド基ミド誘導体を、その１〜ｇ
ｏ （ｗ、”ｗ）％のＤＭＦ、ＤＭＳＯ又は水溶媒中
で、反応させるベキ成分（イ）、（ロ）、（ハ）の１な
いしそれ以上（溶液中のサクシンイミド基１モルに対し
て一成分につき、０．００１〜ｌＯモル）と、−４０〜
８０℃において１０分〜２０日間攪拌下反応せしめる。
の未反応のサクシンイミド基ミド誘導体を、その１〜ｇ
ｏ （ｗ、”ｗ）％のＤＭＦ、ＤＭＳＯ又は水溶媒中
で、反応させるベキ成分（イ）、（ロ）、（ハ）の１な
いしそれ以上（溶液中のサクシンイミド基１モルに対し
て一成分につき、０．００１〜ｌＯモル）と、−４０〜
８０℃において１０分〜２０日間攪拌下反応せしめる。
未反応の成分は透析又はゲル口過により除去することが
できる。
できる。
目的とするポリサクシンイミド誘導体（１）は、溶媒の
減圧留去又は凍結乾燥によって得られる。
減圧留去又は凍結乾燥によって得られる。
細胞毒性物質と、一般式Ｈ２Ｎ−Ｗ−５−Ｚ （Ｗおよ
びＺは前記と同じ。）で表わされる化合物または一般式
Ｈ２Ｎ−Ｗ−５−５−Ｒ（Ｗおよびｋは前記と同じ。）
で表わされる化合物の導入量を制御する方法は、−成分
との反応を行う時は別途に一定条件下でサクシンイミド
基との反応速度をあらかじめ知り、これにより溶液中の
サクシンイミド基の濃度、温度、反応時間、反応させる
べき成分の添加ｌを決めることにより可能である。二成
分以上の成分と同時に行う時は二成分以上の混合物での
各成分の相対反応速度をあらかじめ知り、加える成分の
混合比率及び添加量を調整する事によって行うことがで
きる。
びＺは前記と同じ。）で表わされる化合物または一般式
Ｈ２Ｎ−Ｗ−５−５−Ｒ（Ｗおよびｋは前記と同じ。）
で表わされる化合物の導入量を制御する方法は、−成分
との反応を行う時は別途に一定条件下でサクシンイミド
基との反応速度をあらかじめ知り、これにより溶液中の
サクシンイミド基の濃度、温度、反応時間、反応させる
べき成分の添加ｌを決めることにより可能である。二成
分以上の成分と同時に行う時は二成分以上の混合物での
各成分の相対反応速度をあらかじめ知り、加える成分の
混合比率及び添加量を調整する事によって行うことがで
きる。
分子量の制御は、ポリサクシンイミド重合体を得る縮合
条件の選択により行われ、さらに目的とする分子量を有
する重合体の分離はポリサクシンイミｙ重合体のＤＭＦ
溶液でのゲル口過による分子量分画及びポリサクシンイ
ミド誘導体を得てからの水溶媒中でのゲル口過による分
子量分画の方法による。
条件の選択により行われ、さらに目的とする分子量を有
する重合体の分離はポリサクシンイミｙ重合体のＤＭＦ
溶液でのゲル口過による分子量分画及びポリサクシンイ
ミド誘導体を得てからの水溶媒中でのゲル口過による分
子量分画の方法による。
（４）の方法において望ましいＺは水素原子である。
目的とする分子量分画の収率向上のためポリサクシンイ
ミド重合体を得る縮合条件の選択ポリサクシンイミドの
ＤＭＦ溶液でのゲル口過による分子量分画をあらかじめ
行なう。
ミド重合体を得る縮合条件の選択ポリサクシンイミドの
ＤＭＦ溶液でのゲル口過による分子量分画をあらかじめ
行なう。
前記（８）及び（６）の方法であるチオール型反応性重
合体（一般式（１）においてＺ＝Ｈ）に活性ジスルフィ
ド化合物を反応させて活性ジスルフィド基を有する反応
性重合体（一般式（１）においてＺ＝Ｚ／ ）を得る方
法において用いられる活性ジスルフィド化合物としては
、一般式〔１〕のＺ′で示される基のジスルフィド体、
具体的にはＺ′として例示した前述の基のジスルフィド
体例えば２−ピリジルチオ基のジスルフィド体である２
−ピリジ４−ピリジルチオ基のジスルフィド体である４
−ピリジルジスルフィド （Ｎ唖）−ｓ−ｓぺ巨））、８−カルボキシル−４−二
トロフェニルチオ基のジスルフィド体である５、５′−
ジチオビス（２−ニトロである。
合体（一般式（１）においてＺ＝Ｈ）に活性ジスルフィ
ド化合物を反応させて活性ジスルフィド基を有する反応
性重合体（一般式（１）においてＺ＝Ｚ／ ）を得る方
法において用いられる活性ジスルフィド化合物としては
、一般式〔１〕のＺ′で示される基のジスルフィド体、
具体的にはＺ′として例示した前述の基のジスルフィド
体例えば２−ピリジルチオ基のジスルフィド体である２
−ピリジ４−ピリジルチオ基のジスルフィド体である４
−ピリジルジスルフィド （Ｎ唖）−ｓ−ｓぺ巨））、８−カルボキシル−４−二
トロフェニルチオ基のジスルフィド体である５、５′−
ジチオビス（２−ニトロである。
チオール型反応性重合体と活性ジスルフィド化合物との
反応は、通常水又はＤＭＦやＤＭＳＯ等の有機溶媒を反
応溶媒とする均一反応系で行なわれる。あるいはまた、
重合体の水溶液に活性ジスルフィド化合物又はそのアセ
トイ溶液又はジオキサン溶液等を添加混合した反応系で
行なうこともできる。反応温度は一５〜７０℃、反応時
間は１分〜２４時間が適当である。
反応は、通常水又はＤＭＦやＤＭＳＯ等の有機溶媒を反
応溶媒とする均一反応系で行なわれる。あるいはまた、
重合体の水溶液に活性ジスルフィド化合物又はそのアセ
トイ溶液又はジオキサン溶液等を添加混合した反応系で
行なうこともできる。反応温度は一５〜７０℃、反応時
間は１分〜２４時間が適当である。
本発明の細胞毒性物質を結合した反応性高分子は、細胞
毒性物質による細胞毒性を有しかつ分子中に反応性に富
んだチオール基、又は環元により容易にチオール基が得
られるジスルフィド基、もしくは活性ジスルフィド基を
含んでいるので抗腫瘍抗体（抗腫瘍免疫グロブリン）等
のジスルフィド結合に由来するチオール基に由来するチ
オール基又はアミ７基を利用してＮ−サクシンイミジル
８−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ
）等から導入された活性ジスルフィド結合、またはＮ−
（メタ−マレイミドベンゾイロキシ）サクシンイミド（
ＭＢＳ）、Ｎ−（４−カルボキシシクロヘキシルメチル
）マレイミドのＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル
（ＣＨＭ）から導入されたマレイミド基を介して、抗腫
瘍抗体等と結合する事ができる。
毒性物質による細胞毒性を有しかつ分子中に反応性に富
んだチオール基、又は環元により容易にチオール基が得
られるジスルフィド基、もしくは活性ジスルフィド基を
含んでいるので抗腫瘍抗体（抗腫瘍免疫グロブリン）等
のジスルフィド結合に由来するチオール基に由来するチ
オール基又はアミ７基を利用してＮ−サクシンイミジル
８−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ
）等から導入された活性ジスルフィド結合、またはＮ−
（メタ−マレイミドベンゾイロキシ）サクシンイミド（
ＭＢＳ）、Ｎ−（４−カルボキシシクロヘキシルメチル
）マレイミドのＮ−ヒドロキシサクシンイミドエステル
（ＣＨＭ）から導入されたマレイミド基を介して、抗腫
瘍抗体等と結合する事ができる。
抗腫瘍抗体のジスルフィド結合に由来するチオール基と
反応性高分子に由来するチオール基との結合方法として
０−フェニレンジアレイミド等のシマレイミド化合物の
、一つのマレイミド基をあらかじめ抗腫瘍抗体又は反応
性高分子の一方のチオール基と反応せしめてマレイミド
基を導入しｔこ後他方のチオール基と反応せしめる方法
がある。
反応性高分子に由来するチオール基との結合方法として
０−フェニレンジアレイミド等のシマレイミド化合物の
、一つのマレイミド基をあらかじめ抗腫瘍抗体又は反応
性高分子の一方のチオール基と反応せしめてマレイミド
基を導入しｔこ後他方のチオール基と反応せしめる方法
がある。
抗腫瘍抗体等のジスルフィド結合に由来するチオール基
は抗体をジチオスレイトール、システアミン等の還元剤
でジスルフィド結合を還元する事によって得られる。
は抗体をジチオスレイトール、システアミン等の還元剤
でジスルフィド結合を還元する事によって得られる。
又抗体をペプシン処理することによりＦａｂ’の２量体
を得、この２４休が有するジスルフィド結合をジチオス
レイトール、システアミン等の還元剤で切断して、分子
中にチオール基を有するＦａｂ’を得る。
を得、この２４休が有するジスルフィド結合をジチオス
レイトール、システアミン等の還元剤で切断して、分子
中にチオール基を有するＦａｂ’を得る。
かくして得られた反応性重合体〔１〕、抗腫瘍抗体等の
標的指向能を有する物質との結合体は選択的な癌治療薬
として効果が期待される。以下参考例及び実施例により
本発明を詳述する。
標的指向能を有する物質との結合体は選択的な癌治療薬
として効果が期待される。以下参考例及び実施例により
本発明を詳述する。
参考例１ ボリサクシンイミドの重合
Ｌ−アスパラギン酸６６．５ Ｆに８５％リン酸２０．
６ ｍｌを加えロータリーエバポレーターで１９０℃に
加熱しつつ、５．５時間１０ｆｆＨｒの減圧上重合を行
った。
６ ｍｌを加えロータリーエバポレーターで１９０℃に
加熱しつつ、５．５時間１０ｆｆＨｒの減圧上重合を行
った。
重合後ＤＭＦに溶解して水にて再沈を行っｔこ。再沈後
がラスフィルターで口過し８０℃にて８日間真空乾燥を
行った。
がラスフィルターで口過し８０℃にて８日間真空乾燥を
行った。
得られた重合体をＫＢｒ錠剤法にて赤外吸収の測定を行
ったところ１８００．１７２０゜−重 １６６０ｃｙｎ にサクシンイミド基特有の吸収が認め
られた。
ったところ１８００．１７２０゜−重 １６６０ｃｙｎ にサクシンイミド基特有の吸収が認め
られた。
分子量測定はＧＰＣ測定により行った。ＤＭＦ用ＧＰＣ
カラム（ＡＤ−３ＱＭ／Ｓ−昭和電工）を用い、得られ
たポリサクシンイミＦ ヲＤＭＦ ＋ ０．０１ Ｍ
Ｌｔ Ｂ ｒ溶媒に０．２％の濃度になる様溶解し、該
溶液２６０μｌを注入し同一溶媒を溶出溶媒として示差
屈折計で測定を行った。各種分子量のポリエチレングリ
コールを用いて検量線を作成した。
カラム（ＡＤ−３ＱＭ／Ｓ−昭和電工）を用い、得られ
たポリサクシンイミＦ ヲＤＭＦ ＋ ０．０１ Ｍ
Ｌｔ Ｂ ｒ溶媒に０．２％の濃度になる様溶解し、該
溶液２６０μｌを注入し同一溶媒を溶出溶媒として示差
屈折計で測定を行った。各種分子量のポリエチレングリ
コールを用いて検量線を作成した。
得られたポリサクシンイミドはポリエチレングリコール
換算で重量平均分子量８．９×１．０、数平均分子量１
．５Ｘ１０であった。
換算で重量平均分子量８．９×１．０、数平均分子量１
．５Ｘ１０であった。
実施例１
前記参考例で得られたポリサクシンイミド１．５６Ｆ（
サクシンイミド基１ （３ｍｍｏｅに相当）を９０ｇ１
のＤＭＦに溶解した。
サクシンイミド基１ （３ｍｍｏｅに相当）を９０ｇ１
のＤＭＦに溶解した。
この溶液にシステアミン８４．７■（０，４５ｒｒ−ｎ
ｏ（１）、ｘ）ｉ／−／Ｌ／７ミ７６５８ｖＲｆ（ｌ□
、７ｍｍｏｄ ）をＤＭＦ１０ｇ／に混合した溶液を加
えて、４℃２４時間反応を行った。反応後反応液にＩＮ
ＮａＯＨ溶液約５０ ｍｌを攪拌下１時間にわたって
滴下した。この後ｐＨ４の水溶液で透析を行なった。ダ
イヤフローメンブランｌ８）（アミコン製分子量１万カ
ツト）でＬｏｓｔに濃縮した後、５ｅｐｈａｄｅｘ’
Ｇ −２５スーパーフアイア（ファルマシャ製） ２．
６ ｃｍｘｆ Ｘ ４０−のカラムでゲル沖過を行ない
低分子成分を除去した。
ｏ（１）、ｘ）ｉ／−／Ｌ／７ミ７６５８ｖＲｆ（ｌ□
、７ｍｍｏｄ ）をＤＭＦ１０ｇ／に混合した溶液を加
えて、４℃２４時間反応を行った。反応後反応液にＩＮ
ＮａＯＨ溶液約５０ ｍｌを攪拌下１時間にわたって
滴下した。この後ｐＨ４の水溶液で透析を行なった。ダ
イヤフローメンブランｌ８）（アミコン製分子量１万カ
ツト）でＬｏｓｔに濃縮した後、５ｅｐｈａｄｅｘ’
Ｇ −２５スーパーフアイア（ファルマシャ製） ２．
６ ｃｍｘｆ Ｘ ４０−のカラムでゲル沖過を行ない
低分子成分を除去した。
凍結乾燥を行ない、一般式〔８〕でＺ＝水素原子である
中間体を得た。
中間体を得た。
中間体中のチオール基の定量を実施例８で示す方法で測
定したところ、中間体ｌｆ中に１．５Ｘ１０’モルのチ
オール基が存在していた。カルボキシル基の定量は常法
に従い酸−塩基滴定法により行った。この結果中間体ｌ
ｆ中に２．８Ｘ１０ モルのカルボキシル基が存在して
いた。ＩＲ及び ””ＣニーＮＭＲの測定から未反応のサクシンイミド基
は認められなかった。
定したところ、中間体ｌｆ中に１．５Ｘ１０’モルのチ
オール基が存在していた。カルボキシル基の定量は常法
に従い酸−塩基滴定法により行った。この結果中間体ｌ
ｆ中に２．８Ｘ１０ モルのカルボキシル基が存在して
いた。ＩＲ及び ””ＣニーＮＭＲの測定から未反応のサクシンイミド基
は認められなかった。
上記測定結果よりサクシンイミド基１モルあたりのシス
テアミンの導入量（Ｋモル）、カルボキシル基の導入量
（７モル）を下記の連立方程式からめた。
テアミンの導入量（Ｋモル）、カルボキシル基の導入量
（７モル）を下記の連立方程式からめた。
ａ（１−ｘ−ｙ ）＋ｂｘ＋ｃｙ
γ
ａ （１−ｘ−ｙ ）＋ｂｘ＋ｃ ｙ
ここでａ、ｂ、ｃ、ｔ、ｓは下記の如くである。
サクシンイミド基がエタノールアミンと反応した七ツマ
ーユニットの分子ｆｉｔ ａ＝１５８サクシンイミド基
がシステアミンと反応したモノマーユニットの分子量
１）＝１７４サクシンイミド基が加水分解されたモノマ
ーユニットの分子量 Ｃ＝１１５ 中間体（８１１ｆ中のシステアミンの導入量 ｔ＝１，
４２ＸｌＯモル 中間体（８）Ｉｆ中のカルボキシル基の導入量 Ｓ＝２
．８ＸＩＯモル 計算の結果Ｘ＝０．０２モル、ｙ ＝ ｏ、 ａモルで
あワた。
ーユニットの分子ｆｉｔ ａ＝１５８サクシンイミド基
がシステアミンと反応したモノマーユニットの分子量
１）＝１７４サクシンイミド基が加水分解されたモノマ
ーユニットの分子量 Ｃ＝１１５ 中間体（８１１ｆ中のシステアミンの導入量 ｔ＝１，
４２ＸｌＯモル 中間体（８）Ｉｆ中のカルボキシル基の導入量 Ｓ＝２
．８ＸＩＯモル 計算の結果Ｘ＝０．０２モル、ｙ ＝ ｏ、 ａモルで
あワた。
分子量は末端のアミンの測定により行った。上記中間体
５１ＮＩをＯ，ｌ Ｍホウ酸ナトリウム溶液ｌ肩ｔに溶
解し、次に２．４．６−ドリニトロベンゼンスルホンｍ
（以下″ｌＮＢ５と略す）８２ｑをＬＯｔｘｔの０．１
Ｍホウ酸ナトリウム溶液に溶解した溶液０．１ ｍｌ
を加え、２５’Ｃで４５分反応を行った後、さらに０．
１Ｍホウ酸ナナトリウム溶液１９ ｒｘｌを加え４２０
ｎｍの吸収の測定を行った。既知量のアスパラギン酸を
用いた検量線より、分子吸光係数ｉｉ、ｔｏｏの値が得
られ、この分子吸光係数を用いて末端アミンの値を算出
した。
５１ＮＩをＯ，ｌ Ｍホウ酸ナトリウム溶液ｌ肩ｔに溶
解し、次に２．４．６−ドリニトロベンゼンスルホンｍ
（以下″ｌＮＢ５と略す）８２ｑをＬＯｔｘｔの０．１
Ｍホウ酸ナトリウム溶液に溶解した溶液０．１ ｍｌ
を加え、２５’Ｃで４５分反応を行った後、さらに０．
１Ｍホウ酸ナナトリウム溶液１９ ｒｘｌを加え４２０
ｎｍの吸収の測定を行った。既知量のアスパラギン酸を
用いた検量線より、分子吸光係数ｉｉ、ｔｏｏの値が得
られ、この分子吸光係数を用いて末端アミンの値を算出
した。
この結果中間体ｌｖ中に５ Ｘ ｌ Ｏ−’モルのアミ
ノ基が存在していた。この結果より平均分子量は約２０
，０００となる。
ノ基が存在していた。この結果より平均分子量は約２０
，０００となる。
Ｘ、γの値から平均モノマーユニットの分子量は１４５
．４となり、分子量より重合度ｎ’ −１−ｒｄ ＋
ＩＪ’ ＋ ” ＋ Ｐ’ ＋ Ｑ’ （７）平均値１
ｔ１８８゜ｘ、ｙよりｎ’＋ｍ’の平均値は４１ 、
ｅ／＋ ｒ／の平均値は９４．ｐ’＋イの平均値は８と
なる。
．４となり、分子量より重合度ｎ’ −１−ｒｄ ＋
ＩＪ’ ＋ ” ＋ Ｐ’ ＋ Ｑ’ （７）平均値１
ｔ１８８゜ｘ、ｙよりｎ’＋ｍ’の平均値は４１ 、
ｅ／＋ ｒ／の平均値は９４．ｐ’＋イの平均値は８と
なる。
実施例２
実施例１で得られた中間体２０■を５ ｖｔｌの水に溶
解し、これに１−エチル−（８−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド塩酸塩６８キを加え、ＩＮＨｃＪ
テｐＨ５，６に調整した。この液にダウノマイシン塩酸
塩２０■を８ ｄの水に溶解したものを滴下する。１時
間室温で反応を行った後ｌＮＮａＯＨテＰＨ９，５＄（
調整した。ソノ後０．１５Ｎ ＮａＣ１水溶液で平衡化
した５ｅｐｈａｄｅｘ＠ Ｇ−２５スーパーファイン（
ファルマシャ製） ８．９ｃｍｊ’Ｘ ４．５ ｃｍの
カラムでゲル濾過を行ない低分子成分を除去した後８％
ＮａＣ１水溶液で透析を行ない透析後エタノールアミン
塩酸塩１００〜、ｌ−エチル−３−（８−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミド塩酸塩２００Ｗヲ加エテＩ
ＮＨＣ＃テｐｉ（５，０７！： Ｌ １時間室温で反応
を行った。その後８％ＮａＣ１水溶液で透析を行った後
凍結乾燥を行った。
解し、これに１−エチル−（８−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド塩酸塩６８キを加え、ＩＮＨｃＪ
テｐＨ５，６に調整した。この液にダウノマイシン塩酸
塩２０■を８ ｄの水に溶解したものを滴下する。１時
間室温で反応を行った後ｌＮＮａＯＨテＰＨ９，５＄（
調整した。ソノ後０．１５Ｎ ＮａＣ１水溶液で平衡化
した５ｅｐｈａｄｅｘ＠ Ｇ−２５スーパーファイン（
ファルマシャ製） ８．９ｃｍｊ’Ｘ ４．５ ｃｍの
カラムでゲル濾過を行ない低分子成分を除去した後８％
ＮａＣ１水溶液で透析を行ない透析後エタノールアミン
塩酸塩１００〜、ｌ−エチル−３−（８−ジメチルアミ
ノプロピル）カルボジイミド塩酸塩２００Ｗヲ加エテＩ
ＮＨＣ＃テｐｉ（５，０７！： Ｌ １時間室温で反応
を行った。その後８％ＮａＣ１水溶液で透析を行った後
凍結乾燥を行った。
収１ｔ１８ｒＮｉ
得られたポリサクシンイミド誘導体中のダウンマイシン
の導入量は０．１Ｍ Ｏ，１Ｍリン酸ナトリウム−０，
１５Ｍ食塩緩衝液（ＰＨ７，４）の溶液中の４８５０ｍ
の吸収よりめた。ポリサクシンイミド誘導体ｌＶ中に
４９ＸｌＯ’モルのダウノマイシンが導入されていた。
の導入量は０．１Ｍ Ｏ，１Ｍリン酸ナトリウム−０，
１５Ｍ食塩緩衝液（ＰＨ７，４）の溶液中の４８５０ｍ
の吸収よりめた。ポリサクシンイミド誘導体ｌＶ中に
４９ＸｌＯ’モルのダウノマイシンが導入されていた。
チオール基の定置は実施例８の方法で行った。ポリサク
シンイミド誘導体ｌｆ中に９．８ＸｌＯ’モルのチオー
ル基があった。ＩＲ及び”Ｃ−ＮＭＲより未反応のカル
ボキシル基は検出されなかった。
シンイミド誘導体ｌｆ中に９．８ＸｌＯ’モルのチオー
ル基があった。ＩＲ及び”Ｃ−ＮＭＲより未反応のカル
ボキシル基は検出されなかった。
上記の結果、サクシンイミド基１モルあたりのチオール
基は０．０２モル、ダウノマイシンは０．１モル結合し
ている。
基は０．０２モル、ダウノマイシンは０．１モル結合し
ている。
末端アミ７基の定量は実施例１と同様の方法で行った。
ポリサクシンイミド誘導体ｌｖ中に８．５８ＸｌＯ’
モルのアミノ基が存在し、平均分子量は２８，０００と
なる。
モルのアミノ基が存在し、平均分子量は２８，０００と
なる。
これらの値より、式（１）においてＸ＝ダウノマイシン
であり、２が水素原子であり、かつ重合度ｎ＋ｍ＋６＋
ｒ＋ｐ＋ｑの平均値１８８ 、 ｎ−１−ｍの平均値１
４．ｄ−１−ｒの平均値１２１ 、 ｐ＋ｑの平均値８
のポリサクシンイミド誘導体である。
であり、２が水素原子であり、かつ重合度ｎ＋ｍ＋６＋
ｒ＋ｐ＋ｑの平均値１８８ 、 ｎ−１−ｍの平均値１
４．ｄ−１−ｒの平均値１２１ 、 ｐ＋ｑの平均値８
のポリサクシンイミド誘導体である。
実施例８
本実施例はチオール型の中間体〔８〕
（Ｚ＝水素原子）を、Ｚ＝Ｚ／の中間体〔８〕にする方
法を示すと共に、チオール型中間体〔８〕中のチオール
基の定量方法をも示すものである。
法を示すと共に、チオール型中間体〔８〕中のチオール
基の定量方法をも示すものである。
実施例１で得られた中間体（８）２０ｍＦを８ ｒｓｔ
のＱ、 ｌ Ｍ ｌｊ ７酸ナトリ１７ ムー１ｍＭＥ
ＤＴＡ （Ｐ ｆ（７，０）の衝液に溶解し、ジチオス
レイトールｌＱｍｙを加えて８０℃１時間還元反応を行
った。反応後前記緩衝液で平衡化しり５ｅｐｈａｄｅｘ
ｏＧ −２５スーパーファイン（ファルマシ’）’ Ｉ
ｌｊ ） ２．０ ｃａｎ Ｘ １５ｃｍでゲル沖過し
、低分子成分を除去した同一緩衝液で２０倍に希釈した
。この反応液５００μｅに５ｍＭ ４−ピリジルジスル
フィドのメタノール溶液２０μａを加え３０℃１５分間
反応させ、Ｚ ＝ Ｚ ＩＩ ＝−８うで示される中間
体〔８〕を得た。同時に生成した４−チオピリドンを３
２４ ｎｍで測定した。４−チオピリドンの分子吸光係
数 １、９８ Ｘ ｌ Ｏ’ヲ用いて中間体〔８〕（ｚ＝水
素原子）のチオール基量を計算したところ中間体１１中
に１．４ＸｌＯ’モルのチオール基が存在していｒこ。
のＱ、 ｌ Ｍ ｌｊ ７酸ナトリ１７ ムー１ｍＭＥ
ＤＴＡ （Ｐ ｆ（７，０）の衝液に溶解し、ジチオス
レイトールｌＱｍｙを加えて８０℃１時間還元反応を行
った。反応後前記緩衝液で平衡化しり５ｅｐｈａｄｅｘ
ｏＧ −２５スーパーファイン（ファルマシ’）’ Ｉ
ｌｊ ） ２．０ ｃａｎ Ｘ １５ｃｍでゲル沖過し
、低分子成分を除去した同一緩衝液で２０倍に希釈した
。この反応液５００μｅに５ｍＭ ４−ピリジルジスル
フィドのメタノール溶液２０μａを加え３０℃１５分間
反応させ、Ｚ ＝ Ｚ ＩＩ ＝−８うで示される中間
体〔８〕を得た。同時に生成した４−チオピリドンを３
２４ ｎｍで測定した。４−チオピリドンの分子吸光係
数 １、９８ Ｘ ｌ Ｏ’ヲ用いて中間体〔８〕（ｚ＝水
素原子）のチオール基量を計算したところ中間体１１中
に１．４ＸｌＯ’モルのチオール基が存在していｒこ。
実施例４
前記参考例で得られたポリサクシンイミド８６■（サク
シンイミド基Ｑ、 ３９ ｍｍｏｌに相当）を２ ｍｌ
のＤＭＦに溶解した。
シンイミド基Ｑ、 ３９ ｍｍｏｌに相当）を２ ｍｌ
のＤＭＦに溶解した。
この液にダウノマイシン塩酸塩２０ｍｙ（８６μｍｏｌ
）を加えたのちトリエチルアミン１２μｅ（８６μｍ
ｏｌ）を加えて室温でＩＯ日間反応させた。その後シス
テアミンｓ、、７＋ダ、エタノールアミン０．１８譚／
ＤＭＦｌ ｍｌを混合した溶液を加え４℃で４時間反
応させｒこ。
）を加えたのちトリエチルアミン１２μｅ（８６μｍ
ｏｌ）を加えて室温でＩＯ日間反応させた。その後シス
テアミンｓ、、７＋ダ、エタノールアミン０．１８譚／
ＤＭＦｌ ｍｌを混合した溶液を加え４℃で４時間反
応させｒこ。
この反応溶液を水に対して２日間透析後孔径０．４５μ
ｍの膜（ミリポアフィルタ−）で不溶化部分を除去し０
液を５ｅｐｈａｄｅｘ［相］Ｇ−２５スーパーファイン
（ファルマシャ製）２．６圀メ×４０ｔ−Ｉｎのカラム
で、溶出液として蒸留水を用いてゲル口過し低分子成分
を除去した。この後凍結乾燥を行いポリサクシンイミド
誘導体を得た。収量４ｏ＋＋ｖ。
ｍの膜（ミリポアフィルタ−）で不溶化部分を除去し０
液を５ｅｐｈａｄｅｘ［相］Ｇ−２５スーパーファイン
（ファルマシャ製）２．６圀メ×４０ｔ−Ｉｎのカラム
で、溶出液として蒸留水を用いてゲル口過し低分子成分
を除去した。この後凍結乾燥を行いポリサクシンイミド
誘導体を得た。収量４ｏ＋＋ｖ。
ＩＲ、”Ｃ−ＮＭ艮の測定より未反応サクシンイミド基
は検出されなかった。
は検出されなかった。
得られたポリサクシンイミド誘導体中のサクシンイミド
基１ｍｏ／あたりのダウノマイシン及びシステアミンの
導入緻は実施例２と同様の方法でめた。ポリサクシンイ
ミド誘導体１２中に１．２ＸｌＯモルのダウノマイシン
が結合していた。
基１ｍｏ／あたりのダウノマイシン及びシステアミンの
導入緻は実施例２と同様の方法でめた。ポリサクシンイ
ミド誘導体１２中に１．２ＸｌＯモルのダウノマイシン
が結合していた。
結合したシステアミンの量は実施例８の方法で行った。
ポリサクシンイミド誘導体１１中に２．５ＸｌＯモルの
システアミンが存在していた。
システアミンが存在していた。
１１１及び” Ｃ： −Ｎ Ｍ Ｒの測定から未反応サ
クシンイミド基は検出されなかった。
クシンイミド基は検出されなかった。
上記の値よりサクシンイミド基１モルにダウノマイシン
が０．０２モル、システアミンが０．００５モル結合し
ている。
が０．０２モル、システアミンが０．００５モル結合し
ている。
実施例１と同様の方法で末端アミン基の定量を行ったと
ころポリサクシンイミド誘導体１ｆ中に１．２５ Ｘ
ｌ Ｏモルのアミノ基が存在していた。平均分子量はｇ
ｏ、ｏ ｏ 。
ころポリサクシンイミド誘導体１ｆ中に１．２５ Ｘ
ｌ Ｏモルのアミノ基が存在していた。平均分子量はｇ
ｏ、ｏ ｏ 。
となる。
以上の結果より重合度ｎ＋ｍ＋ｇ＋ｒ＋ｐ＋ｑの平均値
は４７８となり、ｎ ＋ｍ （７）平均値はｔ ｏ 、
ａ＋ｒの平均値は４６６゜Ｐ＋９の平均値が２である
、式（１’）においてＸ＝ダウンマイシン、Ｚ＝水素原
子であるポリサクシンイミド誘導体が得られた。
は４７８となり、ｎ ＋ｍ （７）平均値はｔ ｏ 、
ａ＋ｒの平均値は４６６゜Ｐ＋９の平均値が２である
、式（１’）においてＸ＝ダウンマイシン、Ｚ＝水素原
子であるポリサクシンイミド誘導体が得られた。
実施例５
前記参考例で得られたポリサクシンイミド８６■（サク
シンイミド基Ｑ、 ３９ ｒｒｍｏｌに相当）を２ ｍ
ｌのＤＭＦに溶解した。
シンイミド基Ｑ、 ３９ ｒｒｍｏｌに相当）を２ ｍ
ｌのＤＭＦに溶解した。
この溶液にアドリアマイシン塩酸塩４０■（６９μｍ０
４）を加えたのちトリエチルアミン２０μｅを加え、室
温で１０日間反応させた。その後システアミン６、７
ｍ９を加えて室温で８時間攪拌後、エタノールアミン０
．１８ ｔｓｌ′ｌｆｅＤＭ Ｆ １ ｍｌと混じた液
をくわえてさらに１時間反応を行った。この反応溶液を
水に対して２日間透析し、不溶化部分を孔径０．４５μ
ｍの膜（ミリボアフィル■ ター）で除去しｒ液を５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −２５ス
ーパーフアイン（ファルマシャＷ）２．６（Ｗ＊ Ｘ
４０ Ｃｒｎのカラムで溶出液として蒸留水を用いてゲ
ル沖過し低分子成分を除去した。この後凍結乾燥を行い
ポリサクシンイミド誘導体を得た。収量４０１η。
４）を加えたのちトリエチルアミン２０μｅを加え、室
温で１０日間反応させた。その後システアミン６、７
ｍ９を加えて室温で８時間攪拌後、エタノールアミン０
．１８ ｔｓｌ′ｌｆｅＤＭ Ｆ １ ｍｌと混じた液
をくわえてさらに１時間反応を行った。この反応溶液を
水に対して２日間透析し、不溶化部分を孔径０．４５μ
ｍの膜（ミリボアフィル■ ター）で除去しｒ液を５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −２５ス
ーパーフアイン（ファルマシャＷ）２．６（Ｗ＊ Ｘ
４０ Ｃｒｎのカラムで溶出液として蒸留水を用いてゲ
ル沖過し低分子成分を除去した。この後凍結乾燥を行い
ポリサクシンイミド誘導体を得た。収量４０１η。
Ｉ Ｒ、”Ｃ−ＮＭＲの測定より未反応サクシンイミド
羞は検出されなかった。
羞は検出されなかった。
得られたポリサクシンイミド誘導体中のアドリアマイシ
ンの定量は実施例２におけるダウノマイシンの定量と同
様に行った。
ンの定量は実施例２におけるダウノマイシンの定量と同
様に行った。
ｌｆ中に２．２４Ｘ１０ モルのアドリアマイシンが結
合していた。
合していた。
システアミンの結合量は実施例８の方法でチオール基の
定量よりめた。１１中に２．８ＸｌＯ’モルのシステア
ミンが結合していた。
定量よりめた。１１中に２．８ＸｌＯ’モルのシステア
ミンが結合していた。
上記の値よりサクシンイミド基１モルにアドリアマイシ
ンが０．０４モル、システアミンが０．００５モル結合
していた。
ンが０．０４モル、システアミンが０．００５モル結合
していた。
実施例１と同様の方法で末端アミノ基を定量したところ
１１中に１．１８ＸｌＯモルのアミ７基が存在していた
。平均分子量は８５，０００となる。
１１中に１．１８ＸｌＯモルのアミ７基が存在していた
。平均分子量は８５，０００となる。
以上の結果より重合度ｎ＋ｍ＋ｇ＋ｒ＋ｐ＋ｑの平均値
は４７２．ｎ＋ｍ（７）平均値はｌ ９ 、 （１＋Ｔ
の平均値は４５１ 、 ｐ＋ｑの平均値は２である、式
（１）においてＸ＝ニアドリアマイシンＺ＝水素原子で
あるポリサクシンイミド誘導体が得られた。
は４７２．ｎ＋ｍ（７）平均値はｌ ９ 、 （１＋Ｔ
の平均値は４５１ 、 ｐ＋ｑの平均値は２である、式
（１）においてＸ＝ニアドリアマイシンＺ＝水素原子で
あるポリサクシンイミド誘導体が得られた。
実施例６
前記参考例で得られたポリサクシンイミド８６ｒＮＩ（
サクシンイミド基Ｑ、 ３９ ｍｍｏｅに相当）を２
ｍｌのＤＭＦに溶解した。
サクシンイミド基Ｑ、 ３９ ｍｍｏｅに相当）を２
ｍｌのＤＭＦに溶解した。
この溶液にＰ−（ビス（２−クロロエチル）アミノ）−
Ｌ−フェニルアラニン（別名メルフアラン） ５８ＦＷ
（０，１ｇｍｍｏｊｌｊ）を加えた後、トリエチルアミ
ン５８μｅを加えて、６０℃４８時間攪拌を行った。そ
の後システアミンａ、４＋９、ａ−アミノ−１゜２−プ
ロパンジオール０．１２ ｍｌ、 Ｄ Ｍ Ｆｏ、５ｍ
ｌを混合した°溶液を加え４０℃で２時間反応を行った
。その後蒸留水で２日間透析し、孔径０．４５μｍの膜
（ミリポアフィルタ−）で不溶部分を沖過し、沖液を５
ｅｐｈａｄｅｘ”Ｇ−２５スーパーフアイン（ファルマ
シャ製）２、６ ｃｍ〆×４０譚のカラムで溶出液とし
て蒸留水を用いてゲル口過し、低分子成分を除去した。
Ｌ−フェニルアラニン（別名メルフアラン） ５８ＦＷ
（０，１ｇｍｍｏｊｌｊ）を加えた後、トリエチルアミ
ン５８μｅを加えて、６０℃４８時間攪拌を行った。そ
の後システアミンａ、４＋９、ａ−アミノ−１゜２−プ
ロパンジオール０．１２ ｍｌ、 Ｄ Ｍ Ｆｏ、５ｍ
ｌを混合した°溶液を加え４０℃で２時間反応を行った
。その後蒸留水で２日間透析し、孔径０．４５μｍの膜
（ミリポアフィルタ−）で不溶部分を沖過し、沖液を５
ｅｐｈａｄｅｘ”Ｇ−２５スーパーフアイン（ファルマ
シャ製）２、６ ｃｍ〆×４０譚のカラムで溶出液とし
て蒸留水を用いてゲル口過し、低分子成分を除去した。
この後凍結乾燥を行ないポリサクシンイミド誘導体を得
た。収量８５■。
た。収量８５■。
ＩＲ，”Ｃ−ＮＭＲの測定より未反応サクシンイミド基
は検出されなかつた。
は検出されなかつた。
得られたポリサクシンイミド誘導体中のサクシンイミド
基１ｍｏｄあたりのｐ−Ｃビス（２−クロロエチル）ア
ミノ）−Ｌ−フェニルアラニン及びシスティンの導入量
は以下の様にもとめた。
基１ｍｏｄあたりのｐ−Ｃビス（２−クロロエチル）ア
ミノ）−Ｌ−フェニルアラニン及びシスティンの導入量
は以下の様にもとめた。
ポリサクシンイミド誘導体ｌｖ中のｐ−〔ビス（２−ク
ロロエチル）アミノ） −Ｌ−フェニルアラニンの導入
量をポリサクシンイミド誘導体のｇ、ＩＭＰＢＳ バッ
ファー（ｐＨ７，４）の溶液中の２５８．５ ｎｍの吸
収よりＰ−〔ビス（２−クロロエチル）アミノ）−Ｌ−
フェニルアラニンと吸光度が変化しないものとして測定
した。Ｉｆ中に２、５ Ｘ ｌ Ｏモル結合していた。
ロロエチル）アミノ） −Ｌ−フェニルアラニンの導入
量をポリサクシンイミド誘導体のｇ、ＩＭＰＢＳ バッ
ファー（ｐＨ７，４）の溶液中の２５８．５ ｎｍの吸
収よりＰ−〔ビス（２−クロロエチル）アミノ）−Ｌ−
フェニルアラニンと吸光度が変化しないものとして測定
した。Ｉｆ中に２、５ Ｘ ｌ Ｏモル結合していた。
システアミンの結合量は実施例８の方法でチオール基の
定量よりめた。ｌｉ中に２．４ＸｌＯ’モルのシステア
ミンが結合していた。
定量よりめた。ｌｉ中に２．４ＸｌＯ’モルのシステア
ミンが結合していた。
上記の値よりサクシンイミド基１モルにｐ−（ビス（２
−クロロエチル）アミノ〕−Ｌ−フェニルアラニンが０
．１モル、システアミンが０．００５モル結合している
。
−クロロエチル）アミノ〕−Ｌ−フェニルアラニンが０
．１モル、システアミンが０．００５モル結合している
。
実施例１と同様の方法で末端アミ７基を定量したところ
ｌｔ中に２．５Ｘ１０ モルのアミノ基が存在していた
。平均分子量は４０．０００となる。
ｌｔ中に２．５Ｘ１０ モルのアミノ基が存在していた
。平均分子量は４０．０００となる。
以上の結果より重合度ｎ＋ｍ＋ｇ＋ｒ＋ｐ＋ｑの平均値
は１９１で、ｎ ＋ｍ ｃ７）平均値が１９ 、 ｅ＋
ｒの平均値がｔ７１．ｐ＋９の平均値が１である、式〔
１〕においてＸ、、、Ｐ−（ビス（２−クロロエチル）
アミン）−Ｌ−フェニルアラニン、Ｚ＝水素原子である
ポリサクシンイミド誘導体が得られた。
は１９１で、ｎ ＋ｍ ｃ７）平均値が１９ 、 ｅ＋
ｒの平均値がｔ７１．ｐ＋９の平均値が１である、式〔
１〕においてＸ、、、Ｐ−（ビス（２−クロロエチル）
アミン）−Ｌ−フェニルアラニン、Ｚ＝水素原子である
ポリサクシンイミド誘導体が得られた。
参考例２
実施例４で得られたダウノマイシンを結合したポリサク
シンイミド誘導体の制癌効果を調べた。
シンイミド誘導体の制癌効果を調べた。
マウス白血病細胞であるＰ２Ｓ５の５×１０’個／譚ｌ
の溶液をつくりこの液にポリサクシンイミド誘導体を加
え、３７℃ ５％Ｃ０２で２日間培養を行った後、細胞
数をコールタ−カウンターで測定した。
の溶液をつくりこの液にポリサクシンイミド誘導体を加
え、３７℃ ５％Ｃ０２で２日間培養を行った後、細胞
数をコールタ−カウンターで測定した。
結果は以下の通りであった。
投 呼量 増殖抑制率
２０μｇ／ｙｉｌ ９７％
６ ８９
２ ８４
以上のどと（実施例４で得られたダウノマイシンを結合
したポリサクシンイミド誘導体は制癌効果を有すること
が明らかとなった。
したポリサクシンイミド誘導体は制癌効果を有すること
が明らかとなった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１１一般式 ％式％ 〔式中、Ｘ、Ｙ、ＷおよびＺは各々次の意味を示す。 Ｘ：分子中にアミノ基もしくはイミノ基を有する細胞毒
性物質の反応残基又 はヒドロキシル基である。 Ｙ：水溶性脂肪族第一級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 Ｚ：水素原子又は一般式Ｚ′もしくは一般式−Ｓ−４で
示される基、ここでＺ／は隣りの硫黄原子と共に活性ジ
スル フィド基を形成しうる基、艮は炭化 水素基 （但し、Ｚが水素原子である場合、−ＳＺで表わされる
ーＳＲ基は分子内または分子間で他の一５Ｈ基と平衡的
に−５−Ｓ−結合を形成し得るが、これらを含んで一５
Ｈと表現するものとする。） またｎ 、 ｍ 、 ｌ 、 ｙ 、 ｐおよび９は０
または自然数であって構成単位の数を示し、これらの関
係は次のとおりである。 ｎ十ｍ≧２ ０．００１≦ｐ＋ｑ／ｎ−＋−ｍ＋４ｉ’＋ｒ＋ｐ＋ｑ
≦０．５０）で表わされ、分子量が２０００〜ａ、ｏ
ｏ ｏ、ｏ ｏ 。 であるポリサクシンイミド誘導体。 （２）一般式 〔式中、ｘ、ｙ、ｗおよび２は各々次の意味を示す。 ｘ′二分子中にアミノ基又はイミノ基を有する細胞毒性
物質の反応残基 Ｙ：水溶性脂肪族第一級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 ２：水素原子又は一般式Ｚ／ もしくは一般式−５−１
で示される基、ここでＺ′は隣りの硫黄原子と共に活性
ジスル フィド基を形成し得る基、ｋは炭化 水素 （但し、Ｚが水素原子である場合−ＳＺで表わされる一
５Ｈ基は分子内または分子間で他の一５Ｈ基と平衡的に
−５−Ｓ−結合を形成し得るが、これらを含んで一８Ｈ
と表現するものとする。） また、ｎ 、 ｍ 、 ｌ 、 ｒ 、 ｐおよびｑは
０または自然数であって構成単位の数を示し、これらの
関係は次のとおりである。 ｎ−１−ｍ≧２ ０．００１≦ｐ＋ｑ／ｎ−１−ｍ＋６＋ｒ＋ｐ≦０．５
０ 〕であられされ、分子量が２０００〜ｓ、ｏ ｏ
ｏ、ｏ 。 であるポリサクシンイミド誘導体を製造するにあたり、
一般式 〔式中、Ｙ、ＺおよびＷは前述と同じ。 ｎ’ 、Ｉｎ’ 、／ｚ ｅｒ’ ｅＰ’ オヨヒｑ’
ハ。 または自然数であって構成単位の数を示し、これらの関
係は次のとおりである。 ｎ’−１−ｍ’≧２ ｏ、ｏｏｔ≦〆＋（１’ ／ｎ ’−１−１ｎ’＋ ６
′＋ｒ’＋ｐ′＋ｑ′≦ｏ、５０ ）で表わされる重合
体に （イ） アミノ基又はイミノ基を含む細胞毒性物質 （Ｏ） 必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミン を反応させることを特徴とする前記ポリサクシンイミド
誘導体の製造法 ８）一般式 〔式中、Ｘ、ＹおよびＷは各々次の意味を示す。 Ｘ：分子中にアミ７基又はイミノ基を有する細胞毒性物
質の反応残基 Ｙ：水溶性脂肪族第一級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 また、ｎ、ｍ、ｇ、ｒ、ｐおよびｑは０または自然数で
あって構成単位の数を示し、これらの関係は次のとおり
である。 ｎ−４−ｍ≧２ ０．００１≦ｐ＋ｑ／ｎ−ｔ−ｍ−Ｈ＋ｒ＋ｐ≦０．５
０ ）であられされ、分子量が２０００〜８，０００，
０００であるポリサクシンイミド誘導体を製造するにあ
たり、一般式 Ｃ式中、Ｙ、ＺおよびＷは前述と同じ。 Ｒは炭化水素基。 ｎ’ 、ｍ’ 、ｌ’ 、ｒ’ 、ｐ’ およびｑ／は
Ｏまたは自然数であって構成単位の数を示し、これらの
関係は次のとおりである。 ｎ ’ −１−ｍ ’≧２ ０．００１≦〆＋ｑ’／ｎ′＋ｒｎ’＋＃ｌ＋ｒ’＋ｐ
′＋ｑ’≦ｏ、＋ｓ Ｏ）で表わされる重合体に （イ） アミノ基又はイミノ基を含む細胞毒性物質 （ロ）必要とあれば水溶性脂肪族第一級アミを反応させ
次いでジスルフィド結合を還元的に切断することを特徴
とする前記ボリサクシンイミド誘導体の製造法 （４）一般式 〔式中、Ｘｒ′、 Ｙ 、 Ｗおよび２は各々次の意味
を示す。 ｘ′二分子中にアミノ基を有する細胞毒性物質の反応残
基又はヒドロキシル基 Ｙ：水溶性脂肪族第−級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 Ｚ：水素原子又は一般式Ｚ／ もしくは一般式−５−ｔ
ｔで示される基、ここでＺ′は隣りの硫黄原子と共に活
性ジスル フィド基を形成しうる基、艮は炭化 水素基 （但し、Ｚが水素原子である場合、−ＳＺで表わされる
一８Ｈ基は分子内または分子間で他の−ＳＨ基と平衡的
に−８−８−結合を形成し得るが、これらを含んで一８
Ｈと表現するものとする。） またｎ 、 ｍ 、 ｌ 、 ｒ 、 ｐおよび９は０
または自然数であって構成単位の数を示し、これらの関
係は次のとおりである。 ｎ−４−ｍ≧２ ｏ、ｏｏｔ≦ｐ＋ｑ／ｎ−１−ａｌ−Ｈ＋ｒ＋ｐ＋ｑ≦
０．５０ ’１で表わされ、分子量が球状蛋白換算２０
００〜８．０００，０００ であるポリサクシンイミド
誘導体を製造するにあたり、一般式 ０ 〔式中、ｋは自然数を示す。〕 で表わされるポリサクシンイミドに （イ）アミノ基を有する二官能性細胞毒性物質又は水 （ａｌｌ一般式８２Ｎ−Ｗ−３−Ｚ （式中、Ｗおよび
２は前述と同じ意味を示す。〕で表わされる化合物およ
び （７Ｘ）必要とあれば水溶性脂肪族アミンを反応させる
ことを特徴とする前記ポリサクシンイミド誘導体の製造
法。 （５）一般式 〔式中、Ｘｔｔ、 ｙおよびＷは各々次の意味を示す。 ｘ′：分子中にアミン基を有する細胞毒性物質の反応残
基又はヒドロキシル基 Ｙ：水溶性脂肪族第−級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 またｎ 、 ｍ 、 ｌ 、 ｒ 、 ｐおよびｑは０
または自然数であって構成単位の数を示し、これらの関
係は次のとおりである。 ｎ−１−ｍ≧２ ０．００１≦ｐ＋ｑ ／ｎ＋ｍ−Ｈ＋ｒ＋ｐ＋ｑ≦０．
５０（但し一８Ｈ基は分子内または分子間で他の一３Ｒ
基と平衡的に−５−５−結合を形成し得るが、これらを
含んで一８Ｈと表現するものとする。）〕 で表わされ、分子着が２０００〜ａ、ｏ ｏ ｏ、ｏ
ｏ 。 であるポリサクシンイミド誘導体を製造するにあたり、
一般式 〔式中、ｋは自然数を示す。〕 で表わされるポリサクシンイミドに （イ）アミノ基を有する細胞毒性物質又は水（ロ）一般
式Ｈ２Ｎ−Ｗ−３−８−艮〔式中、Ｗは前述と同じ悪法
を、艮は炭化水素基を示す。〕で表わされる化合物、お
よび （ハ）必要とあれば水溶性脂肪族アミンを反応させ、次
いでこの反応生成物のジスルフィド結合を還元的に切断
することを特徴とする前記ポリサクシンイミド誘導体の
製造法。 （６）一般式 〔式中、Ｘ、Ｙ、Ｗおよび２１は各々次の意味を示す。 Ｘ：分子中にアミノ基もしくはイミノ基を有する細胞毒
性物質の反応残基又 はヒドロキシル基 Ｙ：水溶性脂肪族第一級アミン残基 Ｗ：低級アルキレン基 ｚ′：隣りの硫黄原子と共に活性ジスルフィド基を形成
しうる基 またｎ 、 ｍ 、 ｌ 、 ｒ 、 ｐおよびｑはＯ
または自然数であって構成単位の数を示し、これらの関
係は次のとおりである。 ｎ−１−ｍ≧２ ｏ、ｏ ｏ ｉ≦ｐ＋ｑ ／ｎ−）−ｍ−Ｈ＋ｒ＋ｐ＋
ｑ≦０．５０）で表わされ、分子針が２０００〜ａ、ｏ
ｏ ｏ、ｏ ｏ 。 であるポリサクシイミド誘導体を製造するにあたり、一
般式 〔式中、Ｘ 、 Ｙ 、 Ｗ 、 ｎ 、 ｍ 、 ｌ
、 ｒ 、 ｐおよび９は前述と同じ意味を示す。〕 で表わされるチオール型ポリサクシイミド誘導体に活性
ジスルフィド化合物を反応させることを特徴とする前記
ポリサクシイミド誘導体の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59025665A JPS60168726A (ja) | 1984-02-13 | 1984-02-13 | 細胞毒性物質を結合した反応性高分子およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59025665A JPS60168726A (ja) | 1984-02-13 | 1984-02-13 | 細胞毒性物質を結合した反応性高分子およびその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60168726A true JPS60168726A (ja) | 1985-09-02 |
Family
ID=12172084
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59025665A Pending JPS60168726A (ja) | 1984-02-13 | 1984-02-13 | 細胞毒性物質を結合した反応性高分子およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60168726A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03287545A (ja) * | 1990-03-31 | 1991-12-18 | Res Dev Corp Of Japan | 標的指向性高分子医薬化合物及びその中間体 |
-
1984
- 1984-02-13 JP JP59025665A patent/JPS60168726A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03287545A (ja) * | 1990-03-31 | 1991-12-18 | Res Dev Corp Of Japan | 標的指向性高分子医薬化合物及びその中間体 |
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