JPH03287545A - 標的指向性高分子医薬化合物及びその中間体 - Google Patents
標的指向性高分子医薬化合物及びその中間体Info
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- JPH03287545A JPH03287545A JP2085492A JP8549290A JPH03287545A JP H03287545 A JPH03287545 A JP H03287545A JP 2085492 A JP2085492 A JP 2085492A JP 8549290 A JP8549290 A JP 8549290A JP H03287545 A JPH03287545 A JP H03287545A
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は標的指向性高分子医薬化合物及びその中間体に
関するものでる。
関するものでる。
更に詳しくは、本発明の第１の目的は親水性セグメント
及び薬物を結合せしめた薬理機能セグメントを有するブ
ロック（又はグラフト）コポリマーの親水性セグメント
以外の部位と標的指向性物質（即ち、生体内の所望部位
又は成分に対して高い親和性を有する物質）とを直接又
は結合鎖を介して結合させてなる標的指向性高分子医薬
化合物を提供することにある。
及び薬物を結合せしめた薬理機能セグメントを有するブ
ロック（又はグラフト）コポリマーの親水性セグメント
以外の部位と標的指向性物質（即ち、生体内の所望部位
又は成分に対して高い親和性を有する物質）とを直接又
は結合鎖を介して結合させてなる標的指向性高分子医薬
化合物を提供することにある。
本発明の第２の目的は親水性セグメントと薬物及び／又
は標的指向性物質を結合する能力のある官能基保有セグ
メントとを有するブロック（又はグラフト）コポリマー
からなる標的指向性高分子医薬化合物合成用中間体を提
供することにある。
は標的指向性物質を結合する能力のある官能基保有セグ
メントとを有するブロック（又はグラフト）コポリマー
からなる標的指向性高分子医薬化合物合成用中間体を提
供することにある。
本発明の標的指向性高分子医薬化合物は分子内に多量の
薬物を安定に結合保有させることが出来、且つその多量
の薬物を生体内の治療部位又は標的に向かって効率的に
到達させる能力を有するものである。
薬物を安定に結合保有させることが出来、且つその多量
の薬物を生体内の治療部位又は標的に向かって効率的に
到達させる能力を有するものである。
本発明によれば、薬物が疎水性物質の場合でもその疎水
性薬物を多量に結合させた薬理機能セグメントを中心と
してその外側を親水性セグメント即ち親水性高分子鎖で
包囲した状態のミセルを形成して薬物及び標的指向性物
質の結合が安定化され、水中に高濃度で可溶化され、し
かも高分子医薬品の場合問題となる抗原性が殆ど認めら
れない優れた特性を有する標的指向性高分子医薬化合物
が提供される。
性薬物を多量に結合させた薬理機能セグメントを中心と
してその外側を親水性セグメント即ち親水性高分子鎖で
包囲した状態のミセルを形成して薬物及び標的指向性物
質の結合が安定化され、水中に高濃度で可溶化され、し
かも高分子医薬品の場合問題となる抗原性が殆ど認めら
れない優れた特性を有する標的指向性高分子医薬化合物
が提供される。
低分子薬物と標的指向性物質とを結合させて標的指向性
医薬化合物を製造する際、高分子鎖を中間支持体として
両成分を結合させることにより、両成分の結合による機
能低下を防ごうとする試み及び目的とする標的指向性医
薬化合物の水溶性を損なうこと無く多量の薬物を結合さ
せようとする試みは従来、幾つかなされてきた。
医薬化合物を製造する際、高分子鎖を中間支持体として
両成分を結合させることにより、両成分の結合による機
能低下を防ごうとする試み及び目的とする標的指向性医
薬化合物の水溶性を損なうこと無く多量の薬物を結合さ
せようとする試みは従来、幾つかなされてきた。
しかしながら、従来の試みで用いられた高分子鎖は単一
成分からなるホモポリマーか、２種の成分を交互又は順
不同に重合させた物であり、それらの高分子鎖を用いて
製造された標的指向性医薬化合物は必ずしも医薬品とし
て満足出来るものではなかった。
成分からなるホモポリマーか、２種の成分を交互又は順
不同に重合させた物であり、それらの高分子鎖を用いて
製造された標的指向性医薬化合物は必ずしも医薬品とし
て満足出来るものではなかった。
従来の高分子鎖を中間支持体として用いて製造された標
的指向性高分子医薬化合物は薬効を上昇させるために疎
水性薬物の担持量を多くすると水溶性が低下する欠点が
あった。
的指向性高分子医薬化合物は薬効を上昇させるために疎
水性薬物の担持量を多くすると水溶性が低下する欠点が
あった。
本発明の課題は、従来の高分子鎖に代えて新規な構造の
高分子鎖を用いることにより従来の欠点を解消し、薬物
の担持量を多くしても水溶性が低下せず、高い薬効及び
標的指向性を保持する標的指向性高分子医薬化合物を提
供することにある。
高分子鎖を用いることにより従来の欠点を解消し、薬物
の担持量を多くしても水溶性が低下せず、高い薬効及び
標的指向性を保持する標的指向性高分子医薬化合物を提
供することにある。
本発明者等は上述の目的に合致する新規な構造の高分子
鎖を見出すべく種々研究を重ねた結果、薬物及び標的指
向性物質を結合して薬理機能を発揮するセグメントと薬
物及び標的指向性物が結合していない親水性セグメント
とを有するブロック（又はグラフト）コポリマーが非常
に優れた特性を有することを見出し本発明を完成した。
鎖を見出すべく種々研究を重ねた結果、薬物及び標的指
向性物質を結合して薬理機能を発揮するセグメントと薬
物及び標的指向性物が結合していない親水性セグメント
とを有するブロック（又はグラフト）コポリマーが非常
に優れた特性を有することを見出し本発明を完成した。
［課題を解決するための手段］
本発明は下記の各発明を包含するものである。
１．親水性セグメント及び薬物を結合せしめた薬理機能
セグメントを有するブロック（又はグラフト）コポリマ
ーの親水性セグメント以外の部位と標的指向性物質（即
ち、生体内の所望部位又は成分に対して高い親和性を有
する物質）とを直接又は結合鎖を介して結合させてなる
標的指向性高分子医薬化合物。
セグメントを有するブロック（又はグラフト）コポリマ
ーの親水性セグメント以外の部位と標的指向性物質（即
ち、生体内の所望部位又は成分に対して高い親和性を有
する物質）とを直接又は結合鎖を介して結合させてなる
標的指向性高分子医薬化合物。
２、一般式（Ｉ）
（式中、ｌは１〜３０、ｎは５〜４００．ａは１〜３０
０、ＸはＯ〜３００の整数を示し、Ｒ１は分子中に一個
あり、同−又は相異なってＯＨ１及び薬物残基から選ば
れる残基を示すが、Ｒ１の少なくとも１個以上は薬物残
基を示し、Ｒ１は標的指向性物質残基を示し、Ｒ３ない
しＣＨｓ、 ＣｔＨｓなどを示し、Ａは直接結合又は結
合反応に用いられたカップリング剤に起因する結合鎖を
示す。） で示される上記１記載の標的指向性高分子医薬化合物。
０、ＸはＯ〜３００の整数を示し、Ｒ１は分子中に一個
あり、同−又は相異なってＯＨ１及び薬物残基から選ば
れる残基を示すが、Ｒ１の少なくとも１個以上は薬物残
基を示し、Ｒ１は標的指向性物質残基を示し、Ｒ３ない
しＣＨｓ、 ＣｔＨｓなどを示し、Ａは直接結合又は結
合反応に用いられたカップリング剤に起因する結合鎖を
示す。） で示される上記１記載の標的指向性高分子医薬化合物。
３、標的指向性物質が抗体であることを特徴とする上記
ｌ又は２記載の標的指向性高分子医薬化合物。
ｌ又は２記載の標的指向性高分子医薬化合物。
４、薬物が抗ガン剤であることを特徴とする上記１〜３
記載の標的指向性高分子医薬化合物。
記載の標的指向性高分子医薬化合物。
５、カップリング剤に起因する結合鎖Ａが式（ｎ）ＣＯ
ＣＦｌｚＣｔｂＳＳＣｆ（ｚｃＨｚｃＯ−・・・（ＩＩ
）で示される２価の鎖条化合物残基であることを特徴と
する上記２〜４記載の標的指向性高分子医薬化合物。
ＣＦｌｚＣｔｂＳＳＣｆ（ｚｃＨｚｃＯ−・・・（ＩＩ
）で示される２価の鎖条化合物残基であることを特徴と
する上記２〜４記載の標的指向性高分子医薬化合物。
６、標的指向性物質残基Ｒ２と結合鎖Ａとの結合がアミ
ド結合であることを特徴とする上記２〜５記載の標的指
向性高分子医薬化合物。
ド結合であることを特徴とする上記２〜５記載の標的指
向性高分子医薬化合物。
７、抗ガン剤がアドリアマイシンであることを特徴とす
る上記４〜６記載の標的指向性高分子医薬化合物。
る上記４〜６記載の標的指向性高分子医薬化合物。
８、親水性セグメントと薬物及び／又は標的指向性物質
を結合する能力のある官能基保有セグメントとを有する
ブロック（又はグラフト）コポリマーからなる標的指向
性高分子医薬化合物合成用中間体。
を結合する能力のある官能基保有セグメントとを有する
ブロック（又はグラフト）コポリマーからなる標的指向
性高分子医薬化合物合成用中間体。
９、一般式（ＩＩＩ）
Ｒ”４０ Ｃ）Ｉ ｚ ＣＦｉｇ＋ｉ−Ｎ Ｈ（ＣＯＣ
ＦＩ Ｎ ）Ｉ 謄ホＣＯＣＨｚ Ｃ）Ｉ Ｎ 肝ｒＺ
ＣＨ，ＣＯＹ ＣＯＹ −−−（ＩＩＩ）（式
中、ｎは５〜４００． ｍは１〜３００． ｘは零又は
１〜３００の整数を示し、Ｙは同−又は相異なってＯＨ
及び薬物残基から選ばれる残基を示し、を示し、Ｒ３は
Ｃ）＋３． ＣＪＳなどを示す）で示されるブロックコ
ポリマーｍ導体からなることを特徴とする上記８記載の
標的指向性高分子医薬化合物合成用中間体。
ＦＩ Ｎ ）Ｉ 謄ホＣＯＣＨｚ Ｃ）Ｉ Ｎ 肝ｒＺ
ＣＨ，ＣＯＹ ＣＯＹ −−−（ＩＩＩ）（式
中、ｎは５〜４００． ｍは１〜３００． ｘは零又は
１〜３００の整数を示し、Ｙは同−又は相異なってＯＨ
及び薬物残基から選ばれる残基を示し、を示し、Ｒ３は
Ｃ）＋３． ＣＪＳなどを示す）で示されるブロックコ
ポリマーｍ導体からなることを特徴とする上記８記載の
標的指向性高分子医薬化合物合成用中間体。
本発明に於いて、親水性のセグメントとしては、例えば
ポリエチレングリコール、ポリサンカライド、ポリアク
リルアミド、ポリメタクリルア逅ド。
ポリエチレングリコール、ポリサンカライド、ポリアク
リルアミド、ポリメタクリルア逅ド。
ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールポリメタ
クリル酸エステル、ポリアクリル酸エステル、ポリアミ
ノ酸等あるいはこれらの誘導体が利用出来る。
クリル酸エステル、ポリアクリル酸エステル、ポリアミ
ノ酸等あるいはこれらの誘導体が利用出来る。
薬物と結合して薬理機能セグメントを形成する成分とし
ては、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリリ
シン、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリリンゴ
酸、ポリ乳酸、ポリアルキレンオキシド、長鎖アルコー
ル等あるいはこれらの誘導体が利用出来る。
ては、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリリ
シン、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリリンゴ
酸、ポリ乳酸、ポリアルキレンオキシド、長鎖アルコー
ル等あるいはこれらの誘導体が利用出来る。
薬物としては、例えばアドリアマイシン ダウンマイシ
ン１メソトレキセート、マイトマイシンＣ等の抗ガン剤
、中枢神経系用架、末梢神経系用薬、アレル用薬加薬、
循環器官用架５呼吸器官用薬、消化器官側薬、ホルモン
剤１代謝性医薬品。
ン１メソトレキセート、マイトマイシンＣ等の抗ガン剤
、中枢神経系用架、末梢神経系用薬、アレル用薬加薬、
循環器官用架５呼吸器官用薬、消化器官側薬、ホルモン
剤１代謝性医薬品。
抗生物質、化学療法剤等が利用出来る。
標的指向性物質としては、温血動物又は人間由来のポリ
（又はモノ）クローナル抗体、レクチン、ポリサッカラ
イド、単糖、トランスフェリン等のような生体内の所望
部位又は成分に対して高い親和性を有する物質が利用出
来る。
（又はモノ）クローナル抗体、レクチン、ポリサッカラ
イド、単糖、トランスフェリン等のような生体内の所望
部位又は成分に対して高い親和性を有する物質が利用出
来る。
標的指向性物質とコポリマーとの結合は、直接又は結合
鎖を介して形成させることが出来る０例えば、２−イミ
ノチオレン、ｎ−サクシニもジル３−（２−ピリジルチ
オ）プロピオネート（ＳＰＤＰ） 。
鎖を介して形成させることが出来る０例えば、２−イミ
ノチオレン、ｎ−サクシニもジル３−（２−ピリジルチ
オ）プロピオネート（ＳＰＤＰ） 。
サクシニミジル４−（Ｐ−マレイミドフェニル）ブチレ
ート等のカップリング剤を用いるか、還元性ジスルフィ
ド基、マレイミド基等の間で結合を形成させることが出
来る。
ート等のカップリング剤を用いるか、還元性ジスルフィ
ド基、マレイミド基等の間で結合を形成させることが出
来る。
以下に、ポリエチレングリコール由来の親水性セグメン
ト及び薬物として抗ガン剤アドリアマイシンを結合せし
めたポリアスパラギン酸由来の薬理機能セグメントを有
するブロックコポリマーと人間由来の免疫グロブリンＧ
（抗体）とをカップリング剤（ＳＰＤＰ）を用いて結合
させてなる標的指向性高分子医薬化合物を例にとり、本
発明の詳細な説明する。この標的指向性高分子医薬化合
物の構造概略図は第１図に示すとおりである。
ト及び薬物として抗ガン剤アドリアマイシンを結合せし
めたポリアスパラギン酸由来の薬理機能セグメントを有
するブロックコポリマーと人間由来の免疫グロブリンＧ
（抗体）とをカップリング剤（ＳＰＤＰ）を用いて結合
させてなる標的指向性高分子医薬化合物を例にとり、本
発明の詳細な説明する。この標的指向性高分子医薬化合
物の構造概略図は第１図に示すとおりである。
この化合物の台底は、第２図の反応式に示すごとくβ−
ベンジル Ｌ−アスパルテートＮ−カルボン酸無水物（
ＢＬＡ−ＮＣＡ）を、片末端メトキシ基等のアルコキシ
基、片末端１級アミノ基のポリエチレングリコール（分
子量２５０〜１８０００）を開始剤として重合させ、ポ
リエチレングリコールポリ（β−ベンジル Ｌ−アスパ
ルテート）ブロックコポリマー（ＰＥＧ−ＰＢＬＡ ）
を得、次いでこのＰＥＧ−ＰＢＬＡをアルカリ加水分解
してポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロ
ックコポリマー（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ） ）を得る。こ
のＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ）アスパラギン酸残基の８０％が
アルカリ加水分解の際にβ−アよド化している。
ベンジル Ｌ−アスパルテートＮ−カルボン酸無水物（
ＢＬＡ−ＮＣＡ）を、片末端メトキシ基等のアルコキシ
基、片末端１級アミノ基のポリエチレングリコール（分
子量２５０〜１８０００）を開始剤として重合させ、ポ
リエチレングリコールポリ（β−ベンジル Ｌ−アスパ
ルテート）ブロックコポリマー（ＰＥＧ−ＰＢＬＡ ）
を得、次いでこのＰＥＧ−ＰＢＬＡをアルカリ加水分解
してポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロ
ックコポリマー（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ） ）を得る。こ
のＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ）アスパラギン酸残基の８０％が
アルカリ加水分解の際にβ−アよド化している。
このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ）の末端１級アミノ基にカップ
リング剤（ＳＰＤＰ）を反応させてカップリングの為の
官能基であるピリジルジチオプロピオニル基（ＦＤＰ
）を導入し、（ｍ）式に於けるＹがＯＨＯ本発明中間体
（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ）−ＦＤＰ）を得る。この中間体
に抗ガン剤アドリアマイシン（ＡＤＪ？Ｉ）と水溶性カ
ルボジイミド（ＥＤＣ）を加えることによりアドリアマ
イシンの１級アミノ基とポリアスパラギン酸のカルボキ
シル基との間にアミド結合を形成させて（ＩＩＩ）式に
於けるＹが薬物残基の本発明中間体（ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓ
ｐ（ＡＤＲ）］−ＰＤＰ）を得る。
リング剤（ＳＰＤＰ）を反応させてカップリングの為の
官能基であるピリジルジチオプロピオニル基（ＦＤＰ
）を導入し、（ｍ）式に於けるＹがＯＨＯ本発明中間体
（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ）−ＦＤＰ）を得る。この中間体
に抗ガン剤アドリアマイシン（ＡＤＪ？Ｉ）と水溶性カ
ルボジイミド（ＥＤＣ）を加えることによりアドリアマ
イシンの１級アミノ基とポリアスパラギン酸のカルボキ
シル基との間にアミド結合を形成させて（ＩＩＩ）式に
於けるＹが薬物残基の本発明中間体（ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓ
ｐ（ＡＤＲ）］−ＰＤＰ）を得る。
この薬物を導入した中間体をジチオスレイトール（ＤＴ
Ｔ ）で還元し、ＦＤＰ鎖の一５Ｓ−結合を切断して一
５Ｈとした後、あらかじめカンプリング剤（ＳＰＤＰ）
によってピリジルジチオプロピオニル基を導入しである
人間由来の免疫グロブリンＧと反応させ一５Ｓ−交換反
応によって目的とする（Ｉ）式の本発明標的指向性高分
子医薬化合物（ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］ＩｇＧ
）を得る。
Ｔ ）で還元し、ＦＤＰ鎖の一５Ｓ−結合を切断して一
５Ｈとした後、あらかじめカンプリング剤（ＳＰＤＰ）
によってピリジルジチオプロピオニル基を導入しである
人間由来の免疫グロブリンＧと反応させ一５Ｓ−交換反
応によって目的とする（Ｉ）式の本発明標的指向性高分
子医薬化合物（ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］ＩｇＧ
）を得る。
このようＬこして台底される本発明化合物のポリアスパ
ラギン酸（Ｐ （Ａｓｐ））部分の分子量は１１６〜３
５．０００まで可変であり、また、アドリアマイシンの
置換率（アスパラギン酸残基に対して）はＰ （Ａｓｐ
）の分子量が１９００の場合１２〜３３ｓｏ１％、また
、１０，０００の場合３〜３７ｍｏ１％のものを得てい
る。
ラギン酸（Ｐ （Ａｓｐ））部分の分子量は１１６〜３
５．０００まで可変であり、また、アドリアマイシンの
置換率（アスパラギン酸残基に対して）はＰ （Ａｓｐ
）の分子量が１９００の場合１２〜３３ｓｏ１％、また
、１０，０００の場合３〜３７ｍｏ１％のものを得てい
る。
免疫グロブリンＧ１分子に対して導入されたアドリアマ
イシン担持ブロックコポリマーの数は平均０．３から２
５個までのものを得ている。
イシン担持ブロックコポリマーの数は平均０．３から２
５個までのものを得ている。
台底した本発明化合物はいずれの場合も高いアドリアマ
イシン置換率にもかかわらず良好な水溶性を有しており
、凍結乾燥したり濃縮したり（アドリアマイシン換算２
０■／ｄ）してもその水溶性・は保たれた。
イシン置換率にもかかわらず良好な水溶性を有しており
、凍結乾燥したり濃縮したり（アドリアマイシン換算２
０■／ｄ）してもその水溶性・は保たれた。
又、本発明化合物は、ブロックコポリマーと抗体との結
合鎖中のジスルフィド結合が還元剤に対し、通常のジス
ルフィド結合に比較して著しく安定化されていた。
合鎖中のジスルフィド結合が還元剤に対し、通常のジス
ルフィド結合に比較して著しく安定化されていた。
これらの理由は、化合物が水溶液中で分子中のアドリア
マイシン結合部位及びジスルフィド結合部位の囲りをポ
リエチレングリコール鎖で包囲した状態のミセルとして
ごクロに凝集した結果、化合物の水溶性が保持されると
共にジスルフィド結合が還元剤の攻撃から立体的に守ら
れたためである。
マイシン結合部位及びジスルフィド結合部位の囲りをポ
リエチレングリコール鎖で包囲した状態のミセルとして
ごクロに凝集した結果、化合物の水溶性が保持されると
共にジスルフィド結合が還元剤の攻撃から立体的に守ら
れたためである。
このことは、アドリアマイシンに基づくケイ光がミクロ
凝集によって消光したことから示された。
凝集によって消光したことから示された。
（実施例）
以下、本発明を更に詳細に説明するために実施例を示す
。なお、以下の説明骨中、化合物芯又は化合物略記号の
後に付した（ ）内の数字は本発明化合物の合成手順を
示す第２図に於ける化合物番号を示す。
。なお、以下の説明骨中、化合物芯又は化合物略記号の
後に付した（ ）内の数字は本発明化合物の合成手順を
示す第２図に於ける化合物番号を示す。
１瓜朋工
β−ベンジル Ｌ−アスパルテート Ｎ−カルボン酸無
水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ） （２） ７．２１ｇをＮ、Ｎ
−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ） １２−に溶かし、
クロロホルム６０ｄを加える。片末端メトキシ基片末端
アミノ基のポリエチレングリコール（分子量４３００）
（Ｉ）６ 、 ＯＯｇをクロロホルム６０−に溶かし
てその溶液をＢＬＡ−ＮＣＡ溶液に加える。７０時間後
に反応混合液を２１のジエチルエーテルに滴下して沈澱
したポリマーを濾過で回収して、ジエチルエーテルで洗
浄した後に真空で乾燥してポリエチレングリコール−ポ
リ（β−ベンジル Ｌ−アスパルテート）ブロックコポ
リマー（ＰＥＧ−ＰＢＬＡ） （３）を得る。収量１０
．０９ｇ （８４％）。
水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ） （２） ７．２１ｇをＮ、Ｎ
−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ） １２−に溶かし、
クロロホルム６０ｄを加える。片末端メトキシ基片末端
アミノ基のポリエチレングリコール（分子量４３００）
（Ｉ）６ 、 ＯＯｇをクロロホルム６０−に溶かし
てその溶液をＢＬＡ−ＮＣＡ溶液に加える。７０時間後
に反応混合液を２１のジエチルエーテルに滴下して沈澱
したポリマーを濾過で回収して、ジエチルエーテルで洗
浄した後に真空で乾燥してポリエチレングリコール−ポ
リ（β−ベンジル Ｌ−アスパルテート）ブロックコポ
リマー（ＰＥＧ−ＰＢＬＡ） （３）を得る。収量１０
．０９ｇ （８４％）。
ＰＥＧ−ＰＢＬＡ（３） １０．０３ｇを１００−クロ
ロホルムに溶かす。水：メタノール：ｌ−プロパツール
＝１：１：２（体積割合）に水酸化ナトリウムを０．４
３Ｎｉ９かしたアルカリ混合液をＰＥＧ−ＰＢＬＡ？Ｗ
液に加える。
ロホルムに溶かす。水：メタノール：ｌ−プロパツール
＝１：１：２（体積割合）に水酸化ナトリウムを０．４
３Ｎｉ９かしたアルカリ混合液をＰＥＧ−ＰＢＬＡ？Ｗ
液に加える。
そのアルカリの添加量はＰＢＬＡ部分のベンジルエステ
ルの１．５倍当量になるようにした。Ｏ″Ｃ１１０分攪
拌後、分離のジエチルエーテルに滴下する。沈澱したポ
リマーを濾別して、２０１ｄの蒸留水に溶かして５ｐｅ
ｃｔｒａｐｏｒ ７透析膜（分子量分画＝１０００）を
用いて水中で３９時間透析する。膜内の溶液を凍結乾燥
してポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロ
ックコポリ７−（ＰＥＧ−Ｐ（＾３ｐ） ） （４ａ）
を得る。収量３．９４ｇ （４９％）。
ルの１．５倍当量になるようにした。Ｏ″Ｃ１１０分攪
拌後、分離のジエチルエーテルに滴下する。沈澱したポ
リマーを濾別して、２０１ｄの蒸留水に溶かして５ｐｅ
ｃｔｒａｐｏｒ ７透析膜（分子量分画＝１０００）を
用いて水中で３９時間透析する。膜内の溶液を凍結乾燥
してポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロ
ックコポリ７−（ＰＥＧ−Ｐ（＾３ｐ） ） （４ａ）
を得る。収量３．９４ｇ （４９％）。
このブロックコポリマー鎖１本当り、１７個のアスパラ
ギン酸残基があることがプロトンＮＭＲの測定よりわか
った。
ギン酸残基があることがプロトンＮＭＲの測定よりわか
った。
ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ）ブロックコポリマー（４ａ） １
．０２２ｇをｐＨ９，５，０，１Ｎホウ酸ナトリウム緩
衝液２００ｄに溶かす。Ｎ〜サクシニミジル３−（２−
ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ） １．０２
１ｇを１０−のＤＭＦに溶かしたものを、室温１０分間
隔で等量ずつ２回に分けて（４ａ）の溶液に加えた。
．０２２ｇをｐＨ９，５，０，１Ｎホウ酸ナトリウム緩
衝液２００ｄに溶かす。Ｎ〜サクシニミジル３−（２−
ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ） １．０２
１ｇを１０−のＤＭＦに溶かしたものを、室温１０分間
隔で等量ずつ２回に分けて（４ａ）の溶液に加えた。
２回目の添加から１０分後に反応液を蒸留水中で一晩透
析（スペクトラボア７の分子量カット１０００の透析膜
を使用）した後、セファデックスＧ−２５のゲルを充填
したカラムで蒸留水中でゲル濾過し、凍結乾燥した。収
量５２３．１■（収率５１％）。
析（スペクトラボア７の分子量カット１０００の透析膜
を使用）した後、セファデックスＧ−２５のゲルを充填
したカラムで蒸留水中でゲル濾過し、凍結乾燥した。収
量５２３．１■（収率５１％）。
フロックコポリマーのアミノ基末端に導入した３−（２
−ピリジルジチオ）プロピオニルＭ （ＦＤＰ）の定量
は５０ｍＭジチオスレイトールで還元した際に放出され
る２−ピリジンチオンの３４３ｎｍの吸収により定量し
、２０％の末端にＦＤＰが導入されていることが分かっ
た。
−ピリジルジチオ）プロピオニルＭ （ＦＤＰ）の定量
は５０ｍＭジチオスレイトールで還元した際に放出され
る２−ピリジンチオンの３４３ｎｍの吸収により定量し
、２０％の末端にＦＤＰが導入されていることが分かっ
た。
ここで得た（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ）−ＰＤＰ）ブｏ ７
クコボリマー（４ｂ） ５２３．１ｍｇを０．１Ｎ リ
ンＭｌ衝液（ｐＨ７，５０，１Ｍ ＮａＣ１含有）（Ｐ
ＢＳ） ５−に溶かし、これに１４−ジチオスレイト
ール７７．４ｍｇを水１−に熔かして加え、室温下２０
分間反応させて、ブロックコポリマー末端ＰＤＰ鎖中の
Ｓ−Ｓ結合を一５Ｈに還元した。
クコボリマー（４ｂ） ５２３．１ｍｇを０．１Ｎ リ
ンＭｌ衝液（ｐＨ７，５０，１Ｍ ＮａＣ１含有）（Ｐ
ＢＳ） ５−に溶かし、これに１４−ジチオスレイト
ール７７．４ｍｇを水１−に熔かして加え、室温下２０
分間反応させて、ブロックコポリマー末端ＰＤＰ鎖中の
Ｓ−Ｓ結合を一５Ｈに還元した。
還元反応後、透析（スペクトラボア７、分画分子量１０
００の膜を使用、蒸留水中）次いでゲル濾過（セファデ
ックスＧ−２５，蒸留水中）して低分子物を除いたもの
をチオプロピルセファロース６Ｂ（５５ｄ、 ＰＢＳ中
）のゲルカラムに通塔し、−５ｔ（末端を有するブロッ
クコポリマーをこれに固定した。
００の膜を使用、蒸留水中）次いでゲル濾過（セファデ
ックスＧ−２５，蒸留水中）して低分子物を除いたもの
をチオプロピルセファロース６Ｂ（５５ｄ、 ＰＢＳ中
）のゲルカラムに通塔し、−５ｔ（末端を有するブロッ
クコポリマーをこれに固定した。
ゲルカラムをＰＢＳで充分洗浄した後、還元剤の２−メ
ルカプトエタノール２０ｍＭを含むＰＢＳ ３７０−を
通塔し、固定したブロックコポリマー［ＰＥＧ−Ｐ （
Ａｓｐ）−末端５）ＩＥを流出させ、凍結乾燥した。
ルカプトエタノール２０ｍＭを含むＰＢＳ ３７０−を
通塔し、固定したブロックコポリマー［ＰＥＧ−Ｐ （
Ａｓｐ）−末端５）ＩＥを流出させ、凍結乾燥した。
透析（スペクトラボア７、分画分子量１０００． ｚ留
水中）、次いでゲル濾過（セファデックスＧ−２５ＰＢ
Ｓ中）して低分子物を除いて得たブロックコポリマー？
ｇ １１４０ ｍｌに、２．２′−ジピリジルジスルフ
ィド１９９．８ｍｇをエタノール２０ｍ（に？容かして
加え、室温で２時間反応させた後透析、ゲル′ａ過して
精製し、凍結乾燥した。収量３１．９ｍｇ （収率６％
）。
水中）、次いでゲル濾過（セファデックスＧ−２５ＰＢ
Ｓ中）して低分子物を除いて得たブロックコポリマー？
ｇ １１４０ ｍｌに、２．２′−ジピリジルジスルフ
ィド１９９．８ｍｇをエタノール２０ｍ（に？容かして
加え、室温で２時間反応させた後透析、ゲル′ａ過して
精製し、凍結乾燥した。収量３１．９ｍｇ （収率６％
）。
フロックコポリマー末端へのＰＤＰｉの導入率は前記と
同し方法で定量した結果４８％であった。
同し方法で定量した結果４８％であった。
ＰＥＧ−Ｐ （Ａｓｐ） −ＰＤＰ （４ｂ） ヘアド
リアマイシフ（ＡＤＲ）を導入してＰＥＧ−ＰＩＡｓｐ
（ＡＤＲ）］−ＰＤＰ（６）を台底するため、アドリア
マイシン塩酸塩９．５■をＤＭＦ ９．５ｄに熔かし、
これに１．３倍当量のトリエチルアミンを力Ｕえた。こ
のアドリアマイシンを客演にフロックコポリマー（４ｂ
） １２．４■を渾留水０．４−に溶かして加え、これ
に５０−の１−エチル−３−（３−ジメチルア逅ノプロ
ビル）カルボジイミド（ＥＤＣ）を加え、０℃で４時間
反応させた。
リアマイシフ（ＡＤＲ）を導入してＰＥＧ−ＰＩＡｓｐ
（ＡＤＲ）］−ＰＤＰ（６）を台底するため、アドリア
マイシン塩酸塩９．５■をＤＭＦ ９．５ｄに熔かし、
これに１．３倍当量のトリエチルアミンを力Ｕえた。こ
のアドリアマイシンを客演にフロックコポリマー（４ｂ
） １２．４■を渾留水０．４−に溶かして加え、これ
に５０−の１−エチル−３−（３−ジメチルア逅ノプロ
ビル）カルボジイミド（ＥＤＣ）を加え、０℃で４時間
反応させた。
さらに５０−のＥＤＣを加えて室温で１９時間反応させ
た０反応後、Ｏ，ＩＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ）（
４，５）で３時間透析（スペクトラボア７、分画分子量
１０００） Ｌ、セファデックスＧ−２５でゲル濾過（
０，ＩＨ酢酸ナトリウム緩衝液中、ｐＨ４，５）して精
製した。
た０反応後、Ｏ，ＩＭの酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ）（
４，５）で３時間透析（スペクトラボア７、分画分子量
１０００） Ｌ、セファデックスＧ−２５でゲル濾過（
０，ＩＨ酢酸ナトリウム緩衝液中、ｐＨ４，５）して精
製した。
得られたＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］−ＰＤＰ（６
）のＡＤＲ導入率は４８５ｎ−の吸収より求めた結果、
ポリアスパラギン酸のカルボキシ基に対し約３０当量％
であった。
）のＡＤＲ導入率は４８５ｎ−の吸収より求めた結果、
ポリアスパラギン酸のカルボキシ基に対し約３０当量％
であった。
カップリングのための抗体へのＦＤＰ基の導入は人間の
イムノグロブリンＧ （ＩｇＧ、シグマ社製）３５．２
ｇをＰＢＳに溶かし、０．４５μｍのフィルターを通し
て凝集物を除き、セファデックスＧ−２５カラムを通し
て低分子不純物を除いた後、５ＰＤＰ（５） ２０ｍＭ
を含むエタノール溶液１４６μｌを加えて、室温で３０
分間反応させた０反応後ゲル濾過（セファデックスＧ−
２５，ＰＢＳ中）してＩｇＧ−ＦＤＰ（８）分画を得た
。
イムノグロブリンＧ （ＩｇＧ、シグマ社製）３５．２
ｇをＰＢＳに溶かし、０．４５μｍのフィルターを通し
て凝集物を除き、セファデックスＧ−２５カラムを通し
て低分子不純物を除いた後、５ＰＤＰ（５） ２０ｍＭ
を含むエタノール溶液１４６μｌを加えて、室温で３０
分間反応させた０反応後ゲル濾過（セファデックスＧ−
２５，ＰＢＳ中）してＩｇＧ−ＦＤＰ（８）分画を得た
。
ＦＤＰ基の導入量は、前記の方法で求めた結果、ＩｇＧ
１分子あたり３．５〜５．６であった。
１分子あたり３．５〜５．６であった。
ブロックコポリマー（７） （ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（Ａ
ＤＲ）］−末端Ｓ旧とＩｇＧ−ＦＤＰ （８）とのカッ
プリングで目的とするＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ））
−ＩｇＧ（９）を得る反応は、超音波照射を行った場合
と行わなかった場合の２通り行った。
ＤＲ）］−末端Ｓ旧とＩｇＧ−ＦＤＰ （８）とのカッ
プリングで目的とするＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ））
−ＩｇＧ（９）を得る反応は、超音波照射を行った場合
と行わなかった場合の２通り行った。
（イ）超音波照射を行わない場合
０．４０■の結合＾ＤＲを含むＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（Ａ
ＤＲ）］−ＰＤＰ（６）をＰＢＳ ４．９ａｊ！に溶解
し、１００ｍＭのジチオスレイトール水溶液２５０ｄを
加えて室温下２０分間反応させて、ＰＤＰ鎖中の一５Ｓ
−結合を還元して末端−８Ｈ基のあるブロックコポリマ
ー（７）に変換した後、ゲル濾過（セファデックスＧ−
２５，ＰＢＳ中）して低分子物を除いた。この液にＩｇ
Ｇ−ＦＤＰ（８）（ＩｇＧ １分子当りＰＤＰ鎖５．６
個含む）９．３■をＰＢＳ９−に溶かして加え、室温で
１７時間反応させた。
ＤＲ）］−ＰＤＰ（６）をＰＢＳ ４．９ａｊ！に溶解
し、１００ｍＭのジチオスレイトール水溶液２５０ｄを
加えて室温下２０分間反応させて、ＰＤＰ鎖中の一５Ｓ
−結合を還元して末端−８Ｈ基のあるブロックコポリマ
ー（７）に変換した後、ゲル濾過（セファデックスＧ−
２５，ＰＢＳ中）して低分子物を除いた。この液にＩｇ
Ｇ−ＦＤＰ（８）（ＩｇＧ １分子当りＰＤＰ鎖５．６
個含む）９．３■をＰＢＳ９−に溶かして加え、室温で
１７時間反応させた。
反応後、反応混合物をゲル濾過（セファクリルＳ−２０
０，ＰＢＳ中）により分画し、各分画について、高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ） Ｃカラム：アサヒ
バツクＧ５−５２０．溶媒：Ｑ、１Ｍリン酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ７，５，０，３Ｍ ＮａＣ１含有）〕で９
分した。
０，ＰＢＳ中）により分画し、各分画について、高速液
体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ） Ｃカラム：アサヒ
バツクＧ５−５２０．溶媒：Ｑ、１Ｍリン酸ナトリウム
緩衝液（ｐＨ７，５，０，３Ｍ ＮａＣ１含有）〕で９
分した。
ゲル濾過の流出曲線は第３図に示し、ＨＰＬＣによる分
析チャートは第４図に示した。
析チャートは第４図に示した。
第３図の１０５ｄ付近に流出する第１のピークは抗体と
反応しなかったＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＨ）］−末端
ＳＨ（７）のミセルのピークと置数した。第３図の第２
のピークはＨＰＬＣによる分析の結果１ｇＧとほぼ同し
分画に流出し、且つＡＤＨに基づ＜ ４７Ｏｎ−の吸収
を示したことから目的とする本発明の標的°指向性高分
子医薬化合物ＰＥＧ−Ｐ ［八５ｐ（ＡＤＨ）］−１ｇ
Ｇ（９）であることが確認された。
反応しなかったＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＨ）］−末端
ＳＨ（７）のミセルのピークと置数した。第３図の第２
のピークはＨＰＬＣによる分析の結果１ｇＧとほぼ同し
分画に流出し、且つＡＤＨに基づ＜ ４７Ｏｎ−の吸収
を示したことから目的とする本発明の標的°指向性高分
子医薬化合物ＰＥＧ−Ｐ ［八５ｐ（ＡＤＨ）］−１ｇ
Ｇ（９）であることが確認された。
（ロ）超音波照射を行う場合
０．８９■の結合ＡＤＨを含むブロックコポリマー（６
）をＰＢＳ ５．２５ａｆｆｉに溶解し、１００−のジ
チオスレイトール水溶液２５０ｍを加えて室温下２０分
間反応させてＰＤＰ鎖中の一５Ｓ−結合を還元して末端
−５Ｒ基のあるブロックコポリマー（７）に変換した後
ゲル濾過（セファデックスＧ−２５，ＰＢＳ中）して低
分子物を除いた。
）をＰＢＳ ５．２５ａｆｆｉに溶解し、１００−のジ
チオスレイトール水溶液２５０ｍを加えて室温下２０分
間反応させてＰＤＰ鎖中の一５Ｓ−結合を還元して末端
−５Ｒ基のあるブロックコポリマー（７）に変換した後
ゲル濾過（セファデックスＧ−２５，ＰＢＳ中）して低
分子物を除いた。
この液にＩｇＧ−ＦＤＰ（８） （ＩｇＧ １分子当り
ＰＤＰ鎖３．５′個含む） １２．６■をＰＢＳ １０
ｄに溶かして加え、超音波照射（８１種： Ｖａｌｅｔ
ｃｅｌｌ ｄｉｓｒｕｐｔｅｒ ＭｏｄｅｌＵＣ［）
１１０）を１分間照射、１分間静置の繰り返しで行い
ながら、１５℃で２時間反応させた。
ＰＤＰ鎖３．５′個含む） １２．６■をＰＢＳ １０
ｄに溶かして加え、超音波照射（８１種： Ｖａｌｅｔ
ｃｅｌｌ ｄｉｓｒｕｐｔｅｒ ＭｏｄｅｌＵＣ［）
１１０）を１分間照射、１分間静置の繰り返しで行い
ながら、１５℃で２時間反応させた。
反応後、反応混合物をゲル濾過（セファクリルＳ−３０
０，ＰＢＳ中）により分画し、各分画について）ＩＰＬ
ＣＣカラム：アサヒバツクＧ５−５２０．溶媒：０．１
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，５，０，３ＭＮａ
Ｃ１含有）〕で９分した。
０，ＰＢＳ中）により分画し、各分画について）ＩＰＬ
ＣＣカラム：アサヒバツクＧ５−５２０．溶媒：０．１
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，５，０，３ＭＮａ
Ｃ１含有）〕で９分した。
ゲル濾過の流出曲線は第５図に示し、ＨＰＬＣによる分
析チャートは第６図に示した。
析チャートは第６図に示した。
ゲル濾過の流出曲線は左に肩を持ったピークを示し、そ
の前後を５個のフラクション（Ｆｌ〜Ｆ５）に分画して
分析した。ＦｌからＦ３には目的とするＰＥＧ−Ｐ ［
Ａｓｐ （ＡＤＲ） ］ −１ｇＧ （９）が流出し、
その後に流出するＦ４とＦ５には抗体とカップリングし
なかったブロックコポリマーＰＥＧＰ（ＡＳＰ（ＡＤＨ
） ］−末端ＳＲ（７）が低濃度のためミセルを形成す
ること無く流出した。
の前後を５個のフラクション（Ｆｌ〜Ｆ５）に分画して
分析した。ＦｌからＦ３には目的とするＰＥＧ−Ｐ ［
Ａｓｐ （ＡＤＲ） ］ −１ｇＧ （９）が流出し、
その後に流出するＦ４とＦ５には抗体とカップリングし
なかったブロックコポリマーＰＥＧＰ（ＡＳＰ（ＡＤＨ
） ］−末端ＳＲ（７）が低濃度のためミセルを形成す
ること無く流出した。
超音波照射の反応に及ぼす効果を調べるため、上記（イ
）及び０）で得た各フラクションについて、２８０ｎｍ
と４８５ｒ＋ｗ＋ （又は４７０ｎｍ ）の吸収からカ
ップリング効率及び取得した目的物の組成を調べ第１表
に示す結果を得た。
）及び０）で得た各フラクションについて、２８０ｎｍ
と４８５ｒ＋ｗ＋ （又は４７０ｎｍ ）の吸収からカ
ップリング効率及び取得した目的物の組成を調べ第１表
に示す結果を得た。
カンブリング効率は原料（７）中の全へ〇Ｈに対する目
的化合物（９）中のＡＤＲの比率（％）で示し、組成は
ＡＤＲ／ＩｇＧ及びＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ （ＡＤＲ）
］／ＩｇＧで示した。
的化合物（９）中のＡＤＲの比率（％）で示し、組成は
ＡＤＲ／ＩｇＧ及びＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ （ＡＤＲ）
］／ＩｇＧで示した。
第１表
第１表の結果から明らかなように、超音波照射を行った
方が高いカップリング効率を示した。その理由は、超音
波照射により原料ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］−末
端Ｓ）！ （７）のミセル構造が破壊されてＩｇＧとの
反応が起こりやすくなったためと考えられる。
方が高いカップリング効率を示した。その理由は、超音
波照射により原料ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］−末
端Ｓ）！ （７）のミセル構造が破壊されてＩｇＧとの
反応が起こりやすくなったためと考えられる。
得られた化合物が目的とするＰＥＧ ［Ａｓｐ （ＡＤ
Ｒ） ］ −ＩｇＧ （９）であることを確認するため
、（ロ）と同じ条件で、末端にカップリングのための基
を有しないＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］ とＩ
ｇＧとを混合してＨＰＬＣで分析した結果、両成分は明
瞭なピークで分離され、ＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ（ＡＤＲ
）］ はミセルとして流出し、ＩｇＧのピークを示す
成分にはＡＤＲに基づ＜ ４７０ｎ−の吸収が認められ
なかった。この［（ＰＬＣチャートは第７図に示した。
Ｒ） ］ −ＩｇＧ （９）であることを確認するため
、（ロ）と同じ条件で、末端にカップリングのための基
を有しないＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］ とＩ
ｇＧとを混合してＨＰＬＣで分析した結果、両成分は明
瞭なピークで分離され、ＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ（ＡＤＲ
）］ はミセルとして流出し、ＩｇＧのピークを示す
成分にはＡＤＲに基づ＜ ４７０ｎ−の吸収が認められ
なかった。この［（ＰＬＣチャートは第７図に示した。
試験例１（耐還元剤安定性試験）
実施例で台底した本発明化合物ＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ（
ＡＤＲ）］ＩｇＧ （９） （ＡＤＲ） １．８７ Ｘ
１０− ’Ｍを含むＰＢＳ溶液６００μｌにジチオス
レイトール１００ｍＭを含むＰＢＳ溶液６００μｌを加
え、これを２８°Ｃで３０分間放置した場合と超音波照
射（機種： Ｖａｌｅｔ ｃｅｌｌ ｄｉｓｒｕｐｔｅ
ｒ ＭｏｄｅｌＵＣＤ １００）を１分間照射、１分間
静置の繰り返しで２５℃で３５分間反応させた場合の２
種の反応混合物を試料とし、ゲル濾過型）ＩＰＬｃ （
カラム：アサヒバツクＧ５−５２０．溶媒： ０．ＩＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，５，０，３Ｍ Ｎ
ａＣ１含有）〕で９分した。
ＡＤＲ）］ＩｇＧ （９） （ＡＤＲ） １．８７ Ｘ
１０− ’Ｍを含むＰＢＳ溶液６００μｌにジチオス
レイトール１００ｍＭを含むＰＢＳ溶液６００μｌを加
え、これを２８°Ｃで３０分間放置した場合と超音波照
射（機種： Ｖａｌｅｔ ｃｅｌｌ ｄｉｓｒｕｐｔｅ
ｒ ＭｏｄｅｌＵＣＤ １００）を１分間照射、１分間
静置の繰り返しで２５℃で３５分間反応させた場合の２
種の反応混合物を試料とし、ゲル濾過型）ＩＰＬｃ （
カラム：アサヒバツクＧ５−５２０．溶媒： ０．ＩＭ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，５，０，３Ｍ Ｎ
ａＣ１含有）〕で９分した。
その結果、単に放置した試料は、ピークが無処理の場合
と変化せず、ＩｇＧの流出体積（と同じ場所）に流出し
た。このことは、プロ・ツクコポリマーと抗体とを結合
するジスルフィド結合がジチオスレイトールによって還
元されなかったことを示すものである。一方、超音波照
射した試料は一部のジスルフィド結合が切れて抗体から
離れたＰＥＧＰ ：Ａｓｐ （ＡＤＲ） ］−末端Ｓ）
ｌがミセルを形成してＩｇＧより先に流出した。
と変化せず、ＩｇＧの流出体積（と同じ場所）に流出し
た。このことは、プロ・ツクコポリマーと抗体とを結合
するジスルフィド結合がジチオスレイトールによって還
元されなかったことを示すものである。一方、超音波照
射した試料は一部のジスルフィド結合が切れて抗体から
離れたＰＥＧＰ ：Ａｓｐ （ＡＤＲ） ］−末端Ｓ）
ｌがミセルを形成してＩｇＧより先に流出した。
以上のことから、通常のジスルフィド結合が完全に解離
するジチオスレイトールの存在下に於いても、本発明化
合物ＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ（八ＤＲ） ］ −１ｇＧ
（９）中のジスルフィド結合は非常に安定であることが
確認された。
するジチオスレイトールの存在下に於いても、本発明化
合物ＰＥＧ−Ｐ ［Ａｓｐ（八ＤＲ） ］ −１ｇＧ
（９）中のジスルフィド結合は非常に安定であることが
確認された。
なお、この試験に於けるゲル濾過型ＨＰＬＣのチャート
は第８図に示した。
は第８図に示した。
試験例２（ミセル安定性試験）
ＡＤＲ，ＰＥＧ−Ｐ［八５ｐ（ＡＤＲ）］及びＰＥＧ−
Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］−ＴｇＧの３種の化合物を試料
とし、それぞれの試料についてＡＤＲ濃度が１０−’〜
１０−’Ｍの範囲の各種濃度の試料溶液（ｐＨ７，４の
リン酸等張液中）を調製し、それぞれの試料溶液につい
て、ＡＤＲに起因する蛍光（励起： ４７１ｎｍ、蛍光
５９５ｎｍ ）を測定した結果、ＰＥＧ鎖の結合した試
ｆ４溶液はＡＤＲ溶液に比較して著しく蛍光強度が弱か
った。
Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤＲ）］−ＴｇＧの３種の化合物を試料
とし、それぞれの試料についてＡＤＲ濃度が１０−’〜
１０−’Ｍの範囲の各種濃度の試料溶液（ｐＨ７，４の
リン酸等張液中）を調製し、それぞれの試料溶液につい
て、ＡＤＲに起因する蛍光（励起： ４７１ｎｍ、蛍光
５９５ｎｍ ）を測定した結果、ＰＥＧ鎖の結合した試
ｆ４溶液はＡＤＲ溶液に比較して著しく蛍光強度が弱か
った。
次に、上記３種の試料溶液にドデシル硫酸ナトリウム（
ＳＯＳ）を１％濃度になるように添加した後、上記と同
様に蛍光を測定した結果、いずれの試料溶液も蛍光強度
が著しく増加したが、その強度順位はＡＤＲ＞ＰＥＧ−
ＰｉＡｓｐ（ＡＤＲ）］ ＞ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤ
Ｒ）ｉ−ＩｇＧであり、本発明化合物の蛍光強度が最も
弱かった。
ＳＯＳ）を１％濃度になるように添加した後、上記と同
様に蛍光を測定した結果、いずれの試料溶液も蛍光強度
が著しく増加したが、その強度順位はＡＤＲ＞ＰＥＧ−
ＰｉＡｓｐ（ＡＤＲ）］ ＞ＰＥＧ−Ｐ［Ａｓｐ（ＡＤ
Ｒ）ｉ−ＩｇＧであり、本発明化合物の蛍光強度が最も
弱かった。
以上のことから、本発明化合物は溶液中でＡＤＲがＰＥ
Ｇ鎖によって包囲された状態のミセルを形成してＡＤＲ
に起因する蛍光強度が弱くなっており、そのミセルが界
面活性剤（ＳＤＳ）の添加によって破壊されることによ
って蛍光強度が増加したものと考えられる。
Ｇ鎖によって包囲された状態のミセルを形成してＡＤＲ
に起因する蛍光強度が弱くなっており、そのミセルが界
面活性剤（ＳＤＳ）の添加によって破壊されることによ
って蛍光強度が増加したものと考えられる。
又、このミセルの形成が試験例１に於けるジスルフィド
結合の安定性をもたらしていることも分かった。
結合の安定性をもたらしていることも分かった。
本発明により、分子内に多量の薬物を結合させても水溶
性が低下せず標的指向性物質を安定な結合で保持してい
る新規な標的指向性高分子医薬化合物及びその合成中間
体が提供された。
性が低下せず標的指向性物質を安定な結合で保持してい
る新規な標的指向性高分子医薬化合物及びその合成中間
体が提供された。
本発明の標的指向性高分子医薬化合物は、生体内の所望
部位又は成分に向かって、多量の薬物を効果的に到達し
、且つ抗原性が殆ど認められない優れた特性を有するも
のであり、今後の医療分野において多大の貢献が期待さ
れるものである。
部位又は成分に向かって、多量の薬物を効果的に到達し
、且つ抗原性が殆ど認められない優れた特性を有するも
のであり、今後の医療分野において多大の貢献が期待さ
れるものである。
第１図は本発明の標的指向性高分子医薬化合物の構造概
略図、第２図は本発明化合物の合成手順、第３図は本発
明化合物を合成する際のブロックコポリマーと抗体との
カップリング反応を超音波無しで行った反応混合物のゲ
ル濾過の流出曲線、第４図は第３図の流出フラクション
を分析するためのＨＰＬＣチャート、第５図はブロック
コポリマーと抗体とのカップリング反応を超音波照射下
に行った反応混合物のゲル濾過の流出曲線、第６図は第
５図の流出フラクションを分析するためのＨＰＬＣチャ
ート、第７図は抗体１ｇＧとＰＥＧ−Ｐ （Ａｓｐ （
ＡＤＲ） ］との混合物を分析するためのＨＰＬＣチャ
ート、第８図は本発明化合物の還元剤に対する安定性を
評価するためのＨＰＬＣチャート、第９図は本発明化合
物のアドリアマイシンに基づく蛍光強度と溶液濃度及び
界面活性剤（ＳＯＳ）によるミセルの破壊有無との関係
を類似化合物と比較した図面をそれぞれ示す。
略図、第２図は本発明化合物の合成手順、第３図は本発
明化合物を合成する際のブロックコポリマーと抗体との
カップリング反応を超音波無しで行った反応混合物のゲ
ル濾過の流出曲線、第４図は第３図の流出フラクション
を分析するためのＨＰＬＣチャート、第５図はブロック
コポリマーと抗体とのカップリング反応を超音波照射下
に行った反応混合物のゲル濾過の流出曲線、第６図は第
５図の流出フラクションを分析するためのＨＰＬＣチャ
ート、第７図は抗体１ｇＧとＰＥＧ−Ｐ （Ａｓｐ （
ＡＤＲ） ］との混合物を分析するためのＨＰＬＣチャ
ート、第８図は本発明化合物の還元剤に対する安定性を
評価するためのＨＰＬＣチャート、第９図は本発明化合
物のアドリアマイシンに基づく蛍光強度と溶液濃度及び
界面活性剤（ＳＯＳ）によるミセルの破壊有無との関係
を類似化合物と比較した図面をそれぞれ示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、親水性セグメント及び薬物を結合せしめた薬理機能
セグメントを有するブロック（又はグラフト）コポリマ
ーの親水性セグメント以外の部位と標的指向性物質（即
ち、生体内の所望部位又は成分に対して高い親和性を有
する物質）とを直接又は結合鎖を介して結合させてなる
標的指向性高分子医薬化合物。 ２、一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（ I ） （式中、ｌは１〜３０、ｎは５〜４００、ｍは１〜３０
０、ｘは０〜３００の整数を示し、Ｒ＾１は分子中にｍ
個あり、同一又は相異なってＯＨ、及び薬物残基から選
ばれる残基を示すが、Ｒ＾１の少なくとも１個以上は薬
物残基を示し、Ｒ＾２は標的指向性物質残基を示し、Ｒ
＾３はＣＨ＿３、Ｃ＿２Ｈ＿５などを示し、Ａは直接結
合又は結合反応に用いられたカップリング剤に起因する
結合鎖を示す。） で示される請求項１記載の標的指向性高分子医薬化合物
。 ３、標的指向性物質が抗体であることを特徴とする請求
項１又は２記載の標的指向性高分子医薬化合物。 ４、薬物が抗ガン剤であることを特徴とする請求項１〜
３記載の標的指向性高分子医薬化合物。 ５、カップリング剤に起因する結合鎖Ａが式（II）−Ｃ
ＯＣＨ＿２ＣＨ＿２ＳＳＣＨ＿２ＣＨ＿２ＣＯ−・・・
（II）で示される２価の鎖状化合物残基であることを特
徴とする請求項２〜４記載の標的指向性高分子医薬化合
物。 ６、標的指向性物質残基Ｒ＾２と結合鎖Ａとの結合がア
ミド結合であることを特徴とする請求項２〜５記載の標
的指向性高分子医薬化合物。 ７、抗ガン剤がアドリアマイシンであることを特徴とす
る請求項４〜６記載の標的指向性高分子医薬化合物。 ８、親水性セグメントと薬物及び／又は標的指向性物質
を結合する能力のある官能基保有セグメントとを有する
ブロック（又はグラフト）コポリマーからなる標的指向
性高分子医薬化合物合成用中間体。 ９、一般式（III） ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（III） （式中、ｎは５〜４００、ｍは１〜３００、ｘは零又は
１〜３００の整数を示し、Ｙは同一又は相異なってＯＨ
及び薬物残基から選ばれる残基を示し、Ｚは−ＣＯＣＨ
＿２ＣＨ＿２ＳＨ又は▲数式、化学式、表等があります
▼を示し、Ｒ＾３はＣＨ＿３、Ｃ＿２Ｈ＿５などを示す
）で示されるブロックコポリマー誘導体からなることを
特徴とする請求項８記載の標的指向性高分子医薬化合物
合成用中間体。
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|---|---|---|---|
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|---|---|
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| JP2626654B2 JP2626654B2 (ja) | 1997-07-02 |
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