JPS60184391A - 抗生物質ｔａｎ―５８５ａおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａおよびその塩、
その製造法および７１／ヤシノぐり７−Ａの４リド唄１
）１１ミ７実）二１■リ−（Ｊうも本発明者らは、新規
な抗生物質の検察を目的として多数の微生物を土埃より
分離し、その産生ずる抗生物質を分離探索したところ、
ある種の微生物が新規な抗生物質を産生ずること、該微
生物がフレキシバクター属に属すること、該微生物を適
宜の培地に培養することによって主としてグラム陰性細
菌に対して抗菌力を示す抗生物質を培地中に蓄積しうろ
ことなどを知シ、この抗生物質を単離し、その物理化学
的および生物学的諸性質から、当該抗生物質が新規な抗
生物質であることを確め、これを抗生物質ＴＡＮ−５８
５Ａと称することにした。本発明者らは、これらの知見
に基づいてさらに研究を重ねた結果、本発明を完成した
。

本発明は、１）抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａおよびその塩
、２）フレキシバクター属に属する抗生物質ＴＡＮ−５
８５Ａ生屋麹を培地に培養し、培養物中に抗生物・ｇＴ
ＡＮ−５８５Ａを生成蓄積せしめ、これを採取すること
を特赦とする抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａの製造法、３）
オキシダティブーファーメンタテイブテストが非分解型
でアｔｖキン酸分解能を有する新菌種フレキシバクター
・アルギノリケファシエンスである。

なお、本願では抗生物’／（ＴＪＩＪ−５８５Ａを単に
「ＴＡＮ−５８５Ａ」と称することもある。

本発明で使用される抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａ生産菌と
しては、フレキシバクター（Ｆ’１ｅｘｉ−ｂａｃｔｅ
ｒ　）属に嘱し、抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａを産生ずる
能力を有するものであれば如何なる微生物でもよい。

抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａ生産菌の例としては、たとえ
ば本発明者らによって奈良県吉野郡吉舒山の土埃よシ採
取したフレキシバクター・アルギノリケファシエンスＹ
Ｋ−４９株（以下、「ＹＫ−４９株」と略称することも
ある。）があげられる。

ＹＫ−４９株の菌学的性状は下記のとおりである。

（ａ）形　幅 肉汁寒天斜面上で２４℃、２日間培養後の観察では、則
胞は直径０４〜０．７μｍ９通常長通常−１０μｍ＋７
）＃ＴＩ長い桿状を示すが、まれに５０〜７０μｍのフ
ィラメント状を呈することもある。

線毛を有さない。ブライディングによる運動性を有する
。胞子やミクロシストを形成せず、またダラム染色は陰
性で、抗酸性を示さない。

（ｂ）各種培地上での生育状態 ２４℃で培養し、１ないし１４日間にわたって観察した
。

■肉汁塞天平板培養：円形、凸円状、金縁の集落を形成
する。表面は平滑、半透明、白色〜クリーム色を呈する
。拡散性色素は生成しない。

■肉汁寒天斜面培養：拡布状の良好な生育を示し、光沢
のある淡褐色を呈する。

■肉汁液体培４Ｎ：混濁状に生育し、少欧の沈毅を生じ
、弱い＃ｉ環を形成する。

■肉汁ゼラチン穿刺培養：生育は弱い。

（のリドマス・ミルク：べ１トン化は凝陽性、下部の白
濁が認められ、脱色が認められるが、酸の生成および凝
固は認められない。

（０）生地的性質 ■硝酸塩の還元：陰性 ■脱窒反応：陰性 ■ＭＲ（メチルレッド）テスト：陰性 ■ｖＰ（フォーゲス・プロスカウエｌｖ）テスト：陰性 ■インドールの生成：陰性 ■硫化水素の生成：　陰性 ■デンプンの加水分解：陽性 ■クエン酸の利用二　陽性 ■無機窒素源の利用 ：）硝酸カリウム：陰性 ■）ｆ＆酸アンモニウム：擬陽性 Ｏ色素の生成（キングＡ、キングＢおよびマンニット酵
母エキス寒天の各培地）：可溶性色素を生成しない。

■ウレアーゼ：　陰性 ■オキＶダーゼ：陽性 Ｏカタラーゼ：　陽性 ０生胃の範囲 １）　ｐＨ：　ｐ）１４．９〜８．５で生育するが、最
１１穫ｐＴＩは５．４〜６６゜ ＩＩ）温度：６〜３５℃で生育するが最適温度は１４〜
３１℃。

■酸素に対する態度：好気的 ■ｏ−ｒ（オキシダティブーファーメンタテイブ）テス
ト〔ヒユー・レイフソン（Ｈｕｇｈ−Ｌｅｉｆ−８ｏｎ
）法〕：非分解型 Ｏａからの酸およびガスの生成： 叡　ガス　利用性 （べ７１″４．）　（デービス培地） Ｌ−アラビノース　±　−＋ Ｄ−キシローヌ　−−＋ Ｄ−グルコース　±　−＋ Ｄ−マンノース　十　−＋ Ｄ−フックドース　−−＋ Ｄ−ガラクトース　−　−＋ 麦　芽　糖　−−＋ シ′　ヨ　糖　−−＋ 乳　糖　−−＋ トレハロース　−−十 り−ソルビット　−−− Ｄ−マンニット　−−＋ イノジット　−−− グリ七リン　−−＋ デ　ン　１　ン　−　、　十 〇多湖類の分解：寒天、セルロース、カルボキシメチル
セルロースおよびコロイダル・キチンを分解しない。ア
ルギン酸を分解する。

＠０％食塩の肉汁液体培養：生育する。

０５％餘塩の肉汁液体Ｌｆ！ｆ強：生育しない。

以トの題学的性質を有するＹＫ−４９株を、パーシーズ
・マニュアｌし・オブ・デターミナテイブ・バクテリオ
ロジ＝（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＤｅｔ
ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）
第３版およびインターナショナル・ジャーナル・オブ・
システマチック・バクテリオロジ−（工ｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　８ｙａｔｅｍａｔｉ
ａ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第３０巻２１５〜４
２０頁（１９８０年）、同第３２巻１４６〜１４９頁（
１９８２年）の記載と照合して、桿状ないしフィラメン
ト状のグラム陰性菌で、ミクロシストの形成能がなくブ
ライディングによる運動性を示し、寒天、セルロース、
カルボキシメチルセルロースおよびコロイダμ・キチン
のいずれをも分解せず、食塩の要求性がなく、食塩に耐
性を示さないことからフレキシバクター属に属するとす
るのが妥当である。そこでＹＫ−４９株をフレキシバク
ター属の公知の梱と比較したところ、次のようなＹＫ−
４９株の性質、すなわち、１）オキシダテイプ・ファー
メンタティブチストが非分解型で、２）アルギン酸の分
解能會有するなどの点で公知の棹と異なっていた。そこ
で、本醒を新菌種に属する株であると認め、該新菌種を
フレキシバクター・アルギノリケファシエンス（Ｆｌｅ
ｘｉｂａｃｔｅｒ　ａｌｇｉｎｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅ
ｎｓ　）と命名した。

なお、本菌株は、昭和５９年２月２２日から通商産業省
工業技術院嫌生物工業技術研究所（Ｆ’Ｒ工）に受託番
号ＦＥＲＭ　Ｐ−７４１：？〆とじて、また昭和５９年
２月２０日から財団法人発酵研究所にＩＦＯ１４３２１
としてそれぞれ寄託されている。

本発明に用いられるフレキシバクター属細菌は一般にそ
の性状が変化しやすく、たとえば紫外線、Ｘ線、化学薬
品（例、ニトロソグアニジン、エチルメタンスルホン酸
）などを用いる人工変異手段で容易に変異しうるもので
あり、どの様な変異株であっても本発明の対象とするＴ
ＡＮ−５８５＾の生産能ヲ有するものはすべて本発明に
使用することができる。

ＴＡＮ−５８５Ａ生産菌の培養に際しては、炭素源とし
ては、たとえばグルコース、ショ掘、麦芽糖、廃糖蜜、
グリセロール、油脂類（例、大豆油、オリーブ油など）
、有機酸類（例、クエン酸、コハク酸、グルコン酸など
）など菌が資化しうるものが適宜用いられる。窒素源と
しては、たとえば大豆粉、棉実扮、コーン・ステイープ
・リカー、乾燥酵母、酵母エキス、肉エキス、べ１トン
、尿Ｓ、ＷＣ酸アンモニウム、硝酸アンモニウム。

ｍ化アンモニウム、リン酸アンモニウムなどの有機窒素
化合物や前部窒素化合物が利用できる。また、無機塩と
しては、たとえば塩化ナトリウム。

塩化カリウム、灰酸カルシウム、硫酸マグネシウム、リ
ン酸−カリウム、リン酸二ナトリウムなどの通常細−の
培養に必要なＭ、Ｍ塩類が単独もしくは適宜、Ａｒ１合
せて使用される。

また、硫酸＠１鉄、硫酸銅などの重金属頑、ビタミンＢ
＋　、ビオチンなどのビタミン鎖なども必要に応じて添
加される。さらにシリコーンオイルやポリアルキレング
リコールエーテルなどの消泡剤や界面活性剤を培地に添
加してもよい。その性菌の発育を助け、ＴＡＮ−５８５
Ａの生産を促進するような有機物や無機物を適宜に添加
してもよい。

培養方法としては、一般の抗生物質の生産方法と同様に
行なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培
養の場合は静置＠養、攪拌培養。

振盪培養、油気培養などいずれを実施してもよいがとく
に通気攪拌培養が好ましい。又培養温度はおよそ１５℃
〜３５ｂの範囲が好ましく、培地のＰＲは約４〜８の範
囲でおよそ８時間〜１６８時間、好ましくは２４時間〜
１４４時間培養する。

増養物から目的とする抗生物質Ｔ　Ａｌｘ　−５８５Ａ
を採取するには微生物の生産する代謝物才その鰍生物の
培誉物から採取するのに通常使用される分離手段が適宜
利用される。たとえば抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａは−■
■■■■■■、水溶性酸性物質としての化学的性状を示
し、主として培養ろ液中に含まれるので、まず培養液に
一過補助剤を加えて一過あるいは遠心分離によって、菌
体を除去し、得られた培贋Ｐ液を適宜の担体に峠Ｈ１ｌ
させて炉液中の有効成分を吸７ａさせ、次いで適宜の溶
媒で有効物質を脱清させ、分別採取する手段が有利に利
用される。クロマトグラフィーの担体としては活性炭、
シリカゲル、粉末セルロース、吸着性４ｆｊｉ脂など化
合物の吸着性の差を利用、゛まだは陰イオン交換樹脂、
陰イオン交換セルロースなど化合物の官能基の差を利用
、あるいは分子ふるい性担体類など化合物の分子所の差
を利用するものが有利に用いられる。これら担体から目
的とする化合物を溶出するためには担体の種類、性質に
よって組み合せが異なるが、たとえば水溶性有機溶媒の
含水溶液すなわち、含水アセトン、含水アルコール類な
ど、あるいは酸、アμ゛カリ、緩衝液もしくは無機ある
いは有機塩を含む水溶液などが適宜組み合わせて用いら
れる。

また、これらのクロマトグラフィーによって得られた本
抗生物質の粗物質を分取用高速液体クロマトグラフィー
に付し、さらに精製する事もできる。

さらに詳しく述べるならば、担体として陰イオン交換樹
脂たとえばダウエックス−１（ダウ・アンド・ケミカル
社製、米国）、アンバーライトＩＲＡ−６８，４００，
４０２，４１０（ローム・アンド・ハース社製、米国）
、ダイヤイオン５Ａ−２１ＡおよびＣ（三菱化成社輔、
日本）などを用いるとろ液中の本抗生物質は吸着され、
塩類あるいは酸含有の水溶液あるいは緩衝液などで溶出
されふ。また陰イオン交換セルロースたとえばＤＩ−３
２（ワットマン社製、英国）、Ｄ）ＨＡＥ−七μロー７
−（ブラウン社製、西独）など、あるいは陰イオン交換
分子ふるい性１ＭＢｆａたとえばＤＥＡＥ−あるいはＱ
ＡＩ−セファデックス（ファルマシャ社製、スウェーデ
ン）などの相体に本抗生物質を吸着せしめ、塩類あるい
は酸含有の水溶液あるいは緩衝液などによって溶出させ
ることが出来る。これら溶出液中の塩類、着色物質など
ｆ：’ｌｆＩ！シ除くためにはクロマト用活性炭（試用
薬品工業社製、日本）あるいは吸着性樹脂たとえばダイ
ヤイオンＨｐ−２ｏ（三菱化成社製、日本）、アンバー
ライトＸＡＤ−ＩＩ（ローム・アンド・ハース社製、米
国→などが有利に用いられる。分画された溶出区分は、
１農縮、翻結、乾・礫などの工程を経て、粉末イビされ
る。かくして得られた粉末の縄文が悪い場合さらに精製
するためには高速液体クロマトグラフィー法が有利に利
用される。用いられる担体としては、たとえばＴ８にゲ
ル（＊洋曹達社製、日本）ＹＭＣゲ／Ｉ／（山村化学研
究所−、日本）などが挙げられ、移動層としてはメタノ
−／Ｌ’あるいはアセトニトリ／Ｌ’などと酸性水溶液
あるいは緩衝液などとの混合液が用いられる。

このようにして得られたＴＡＮ−５８５Ａは通常精製に
用いた塩類、緩ｆ＃液中の陽イオンたとえばナトリウム
、カリウム、リチウム、カルシウム、アンモニウムイオ
ンなどと結合してこれらの塩として拳離される。得られ
たＴＡＮ−５８５Ａ塩類を遊４体として得るためには活
性炭あるいは陽イオン交換樹脂のクロマトグラフィーを
利用する方法が一般的である。

抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａは金属場および有機アミン塩
を形成する。金嬌塩としては、たとえばナトリウム塩、
カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩などが挙げられ
る。

後述の実施例１で得られた’Ｔ’ＡＭ−５８５Ａジナト
リウム填の物理化学的性質はつぎのとおりである。

（１）　外観：白色粉末 （２）元素分析値−二（五酸化リン上４０℃で６時間減
圧乾燥した試料） Ｃ４６０±２０ Ｈ４，９±１Ｏ Ｎ　７．０士１．０ ０　３６．５” Ｎａ　５．６±１．０ ＊（ただし、酸素は他の元素を差し引いて計算） （３）分子量：　８　Ｉ　Ｌ（Ｓ　（５ｅｃｏｎｄａｒ
ｙ　Ｉｏｎ　Ｍａｓｓ３ｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　）法
による分子イオンビークは次のとおりである。

ｍ／ｚ　７７３．７５１．　７２９．７０７（４）水分
含量：６９士２％（熱天秤法）（５）推定分子式（分子
量）： ０３１Ｆ！３６Ｎ４ｏ１５Ｎ＆２（７５０，６４）（６
）円二色性スペクｌ−／しく水中）：〔θ）２２Ｂ＋２
　９５，５０　（’）±１０，０００け）紫外部吸収ス
ベク）／Ｌ’（水中）（第１図）：λｍａｘ　２２４±
２ｎｍ　（Ｅ’％＝３１２十３０）ＩＣ肩 ′Ａｍａｘ２６９±２　ｎ　ｍ　（Ｅ　”１　！＝　２
５士　５）λｍａｘ　２７７±２ｎｍ　（）ｌ！＝　２
０士　５．＠）（８）赤外部吸収スベク）／ｌ／（第２
図）：臭化カリウム鋺による主な吸収（波数）は次のと
おりである。

３４３０．３２８０．２９５０．１７６０．１６２０゜
１５１５．１４０５．１３００．１２４０．１１８０゜
１１１０．１０６５．１０２５．　９５０．　８３０゜
７６０、　６００．　５３５Ｃ１１−１（９）　”’Ｃ
−核磁気共鳴（ＣＭＲ）スペクトル（１００ＭＨ２，重
水中）：少なくとも下記のシグナルが認められる。

１７８０値ｓ）、１７７．６０（ａ）、１７１．５偵ｓ
１．　１７６．８８（ｓ）。

１６６．９６（ａ）、１６６．７ダｄ）、１６１．０１
（ｓ）、１５９．４７（ａ）。

１３３９ダｓ）、１３２．７６（ｓ）、１３２．５槍＋
×２）＋１３２．４預ｓ）、１３１．３３（ｄ、ｘ２）
、１３１．１９（ｓ）。

１１９．８９（ｄ、Ｘ２）、１１７．８５（ｄ、Ｘ２）
、１０３．１１（ｄ）。

７８．９９（ｄ）、７８．１７１ｄ１．　７５．９ダｄ
）、７５．５９（ｄ）。

７４．５３（ｄｌ、７４．５３（８）、６８．０７（ｔ
）、６３．５７（ｄ）。

５６．２２（ｄ）、５６．０５（ｔ）、３２．６４（ｔ
）　Ｔ）ｐｍ　（ただし、ａ　：　ｓｉｎｇｌｅｔ、　
ｄ　：　ｄｏｕｂｌｅｔ、　ｔ　：ｔｒｉｐｌｅｔ　を
表わす） ｉｏ）　溶解性： 可溶：水、ジメチルスルフォキサイド。

難溶：酢酸エチル、クロロフォルム、アセトン。

■　呈色反応： 陽性：ニンヒドリン反応、ニーｐリツヒ試薬。

陰性：ブレイブ・リーバツク反応、バートン反応、ドラ
ーゲンドルフ反応。

妨　安定性：１００μ９／１ｇｔ　＋水溶液中、６０℃
。

３時間 ｐＨ５〜７：　安定 ｐＨ３：　や−不安定 ｐＨ９：　不安定 ６３）　薄層クロマトグラフィーニスボットフィルム、
セルロースｆ（東京化成社製） １４）高速液体クロマトグラフィー（日立社製１日本）
：担体、　ＹＩＪＣム−３１２（山村化学研究所製６日
本）、移動層；　５％メタノール１０．０１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ３，０）。

２Ｍｌ／　ｗｉｎ、Ｒｔ　（ｗｉｎ　）　＝　３．３ｏ
Ｓ　比旋光度：〔α〕荀・５−８１．６°±１５°　（
ｃ＝０５６、水中） ａｏ　酸性、中性、塩基性の区別：中性物質（ただし、
遊離体のＴＡＮ−５８５Ａは鍛性物質）次ＫＴＡａ−５
８５Ａジナトリウム塩の生物学的性状について述べる。

この化合物の各種微生物に対する抗菌スペクトルは第１
表に示すとおりである。

ｗＩ１表 シュードモナス・エアルギノーサ１ｒＦＴ）　１２６８
９　１　１００蒼 セラチア・マルセツセンス　ＩＮ’０１２６４８　〉１
００唯 アシネトバクタ−・カルクアセティクスＩＦＶ）　１３
０１１６１５０スタフイロコツカス・オウレウス　ｒＤ
Ａ２０９Ｐ　ｌ　＞１００ｔ＜ｆｐレス−ｙ、ｊｆリヌ
　Ｎ’Ｉ）ｌＪＰｅＩ２１９　１　＞１００（注１）培
地：バクトアンテイビオテイツクメデイム３．１７．５
１Ｆｉバクト・イースト・エキストラクト、５ｇ↓バク
トアガー。

２０ｇ；蒸留水、１１；ｐＨ７，０゜ （注２）接種菌液として１０６コロニー・フォーミング
・ユニット／　１ｄを用いた。

また、“ｒＡＮ５８５Ａジナトリウム填は種々のβ−ラ
クタメースに対して安定である。第２表に１０テウス・
ミラビリスＡＴＣＣ２１１００を被検菌とし、２橿のβ
−ラクタメースに対する安定性をしらべた結果を例示す
る。

第２表 注１）数ｆｌｉはペーパー・ディスク法による阻止円直
径（ｍｍ　）を示す。培地：栄養寒天培地（ｐＨ７，０
） ＊＊；阻止用がないことを示す。

またＴＡＮ−５８５Ａジナトリウム塩の実験的マウス感
染症における治療効果は第３表に示すとお〕であシ、ｉ
ｎ　ｖｉｔｒｏの抗菌力が弱いにもかかわらず、ｉｎ　
ｖｉｖｏ　の効果が優れている抗生物質である。

第３表 ＊　腹腔内感染；　傘＊　Ｔｒｙｐｔｉｃａｓａ　ｓｏ
ｙａｇａｒ（Ｂ　Ｂ　Ｌ　ＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙＳ
ｙａｔｅｍａ社製、米国）＠地、接種菌液として１０８
コロニー・フォーミング・ユニット／胃ｌを用いた。

＊＊＊　３回投与 さらに、ＴＡＮ−５８５Ａジナトリウム塩を１ｇ／峻で
マウスに皮下投与しても急性毒性は全く認められなかっ
た。

これらのデータから明らかなようにＴＡＮ−５８５Ａは
主としてグフム陰性菌に対して抗菌性を示し、哺乳動物
などに毒性を示さない抗生物質であると云える。し九が
ってＴＡＮ−５８５Ａはヒトおよび家畜、家きんなどの
細菌感染症の治療に用いることが出来る。

ＴＡＮ−５８５Ａをたとえば変形菌感染症の治療薬とし
て用いるにｄまたとえはＴＡＮ−５８５Ａ會生理的食堪
水に溶＋ｌｉ！　Ｌ、て注射剤として非経口的に皮下ま
たは筋肉内に１〜５０７４７ＫＱ１日、好ま１７＜は５
〜２０．、す／＃／日投与する。また経口剤として、抗
生物’ｄＴＡＮ−５８５Ａを乳糖と混合してカプセル剤
とし、ＴＡＮ−５８５１として１〜Ｉ　Ｏ（１＃、：＋
７　／ｋＱ　／日好ましくは５〜５０　ｍ：ｊｌ／１４
／／日投与する。

また、本発明によって得られるｒＡＩＪ−５８５Ａは、
殺繭剤として用いることができる。たとえばＴＡｌｌ−
５８５Ａを０．０１〜０．ＩＷ／Ｖ％の濃度で蒸留水に
溶解した液剤、またはワセリン、ラノリンを基剤とし、
１ｇあだシＴＡＮ−５８５Ａ全０．２〜２０呼、好まし
くは１〜１０Ｍｙ含有する軟膏剤として、ヒトおよび動
物の手９足、眼、耳などの殺菌、消ｍに用いることがで
きる。

抗生物［ＴＡＮ−５８５Ａはまた新しい医薬品の合成中
間体としても極めて有望な化合物である。

以上述べた諸性質から抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａはモノ
ザイクリックβ−フクタム系抗生物質と思われるが、こ
れらに属する既知抗生物ｌホのうち物理化学的性状が比
較的類似しているものとして、ノカルジンン（Ｎｏｃａ
ｒｄｉｃｉｎ　）群抗生物質が挙げられる。しかし、抗
生物質ＴＡＮ−５８５Ａの分子式、光外部吸収スベク）
Ａ／、ＣＭＲスペクトルおよび抗菌スペクトルをノカル
ジシンのそれラド比較すると明らかに異るので、ＴＡＮ
−５８５Ａは新規モノサイクリックβ−ラクタム系抗生
物質である。

次に実施例をもってさらに詳細に本発明の詳細な説明す
るが、これによって本発明が限定されるものではない。

パーセントは、特にことわりのないかぎり型巣／容量％
を示す。

実施例１ ；工ｒｏ　１４３２１）の菌株を、グルコース２％、ソ
ルブル・スターチ３％、生大豆粉１％、コーン・ステイ
ープ・リカー１％、ポリペ１トン（大五栄費化学社製）
０５％９食塩０．３％を含む水溶液（ｐＨ７，０）に沈
降性伏酸力μシウム０．５％を添加した培地５００鯉ｔ
を含む２ｊ谷坂ロフヲヌコに接種して、２４℃で４８時
間往復振借培養した。

この培養液全量を、上記培地にアクトコ−／Ｌ／（消泡
剤、試用薬品工業社製）０．０５％を添加した培地３０
Ｊを含む容量５０１のタンクに接種し、２４℃で通気敞
３０ｊ／分、２００回転／分の条件下で４８時間培養し
た。この培養液６Ｊをグリセロ−Ａ／　３％、生大豆粉
１，５％、コーン・グμテン・ミーｌｖ１．５％、ポリ
ペプトン０．２％を含む水溶液（ｐＨ７，０）に沈降性
灰酸カルシウム０．５％、アクトコ−／Ｌ’０．０５％
を添加した培地１２０Ｊを含む容１ｔ２ＱＯｊのタンク
に接種し、２４℃で、ｄ気敵１２０Ｊ／分、１５０回転
／分の条件下で、６６時間培養した。培養液（１００ｊ
、ｐＨ６，３）をハイフロ・スーパー・セル（ジョンズ
・マンビル社製、米国）を用いて濾過し、炉液（８８Ｊ
）をＩＲＡ−４０２（Ｃ１型、４Ｉ）のカラムクロマト
グラフィーに付した。吸着された抗生物質を１．０Ｍ食
塩水（３２ｊ）で溶出し、溶出液を活性炭のカラムクロ
マトグラフィー（２，５Ｊ）に付した。活性区分を８％
イソ・ブタノール水（１２，５ｊ）で溶出し、溶出液を
工ＲＡ−６８（Ｃ１型、１ｊ）のカラムクロマトグラフ
ィーに付した。吸清抗繭物質を１．０Ｍ食塩水（８ｊ）
で溶出し、溶出液を活性炭のクロマトグラフィー（１，
５４）に付し、脱塩操作を行った。脱塩水溶液を１．４
ｊまで減圧低温下濃縮し、濃縮液をＱＡＫ−セファデッ
クス（Ａ−２５，Ｃ１型、０．４Ｊ）のカラムクロマト
グラフィーに付した。カラムを０．０５　Ｍ食塩水（４
番）で洗滌後、抗生物質を１．０Ｍ食塩水で分画溶出し
た。活性画分を集め、活性炭のカラムクロマトグラフィ
ーに付し、８％イソ・ブタノール水で溶出した。溶出液
を威圧濃縮、Ｓ結乾燥し、凍結乾燥品にアセｔンを加え
て粗物質１．６９９を得た。

上記と同様の方法で培養、Ｍ１１１！して得た粗物質１
．４２ｇを合つして、少量の水にとかし、逆層系担体Ｍ
ＭＣゲルを用いた分取用高速クロマ卜グラフィーに付し
た。０．０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ３，０）で抗生
物質を溶出し、溶出液を活性炭のクロマトグラフィーで
脱塩操作に付した。除塩水溶液を減圧ａ縮、凍結乾燥し
、アセトンを加えて沈鹸化した。ＴＡＮ−５８５Ａジナ
トリウム塩の白色粉末（１，３４ｖ　）が得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａジナトリウム塩の紫
外部吸収スベク）／Ｌ’（水中）を、第２図は赤外部吸
収スベク）／しく　ＫＢｒ法）をそれぞれ示す。 ＄１区 手　続　補　正　書（自発） １．事件の表示 昭和５９年特許願第　４０８２６　号 ２、発明の名称 抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａ、その製造法およびフレキシ
バクター属の新菌種 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　所　大阪市東区道修町２丁目２７番地名　称（２９
３）武田薬品工業株式会社代表者　倉　林　育　四　部 ４、代理人 住　所　大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号東京
連絡先（特許法規課）電話２７８−２２１９・２２１８
６、補正の内容 １）明細書第１６頁第１２行の「Ｃ３□１（３６Ｎ４０
１５Ｎａ２　（７５０−’６４−　）　Ｊをｒ　Ｃ３０
Ｈ３２！Ｎ４０１６Ｎａ２　（７５０、・ｔ＆）Ｊに補
正する。 ２）同書第１７頁第９行のｒ　１７８．０９（Ｅｌ）Ｊ
の前にｒ　１８８．４６（ｓ）、　Ｊを挿入し、同行の
「１７７゜５９（ａ）Ｊを削除する。 ３）同書第１７頁第１１行のｒ　１３２．７６（８）、
　Ｊを削除する。 ４）同書第１７頁第１２行の１１３１．１９（８）、　
Ｊを削除する。 ５）同書第２６頁第１３行のｒｌ、ＯＪをｒｏ、ＩＪに
補正する。 以上 ２−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　ジナトリウム塩として次の物理化学的性状を有す
   る抗生物質ＴＡＮ−５８５Ａおよびその塩（１）　外観
   ：白色粉末 （２）　元素分析値％、五酸化リン上で４０℃、６時間
   減圧乾燥した試料： Ｃ４６０土２．０ Ｈ４，９±１．Ｏ Ｎ　７．０±１．Ｏ Ｈａ　５．６±１０ （３）分子量：　７ｓｏ＋２２（ＳＩＭＳ法による）（
   ４）円二色性ヌベクト／Ｉ／（水中）：〔θ〕２２８よ
   ２−９５５００±１００００（５）紫外部吸収スベク）
   ／しく水中）：１％ 一＆Ｘ　２２４±２ｎｍ（Ｅｌｃ、ｕ−３１２±３０）
   　−λｍａｘ　２６９±２ｎｍ（Ｅ”％−２５＋　５）
   ｃｔｉ− λｍａｘ　２７７±２ｎｍ　（ｐ２　？、％＝　２．、
   士　５　、１Ｍ　）（６）赤外部吸収スペク）　／Ｌ／
   ：　良化カリウム綻による主な吸収。 ３４３０、　３２８０．２９５０．　１７６０．　１６
   ２０゜１５１５、　１４０５．　１３００．　１２４０
   ．　１１８０゜１１１０、　１０６５．　１０２５．　
   ９５０．　８３０゜７６０、　６００．　５３５１’１
   １ （７）溶解性：水、ジメチルスルフォキサイドに可溶、
   酢酸エチ／Ｌ／、クロロフォルム、アセトンに難溶 （８）呈色反応：ニンヒドリン、エールリッヒ試薬に陽
   性、ブレイブ・リーバツク、バートン、ドラーゲンドル
   フ反応に陰性。 ２、　フレキシバクター属に嘱する抗生物質ＴＡＮ−５
   ８５Ａ生産菌を＠地に培養し、培養物中に抗生物質Ｔ　
   Ａ、Ｎ　−５８５１を生成蓄積せしめ、これを採取する
   ことを特徴とする抗生物質ＴＡＮ−５８５１の製造法。 ３　オキシダティブーファーメンタテイブテストが非分
   解型で、アルギン酸分解能を有するフＶキシバフタ−・
   アルギノリケファシエンス。