JPS60188082A - （２ｓ）‐２‐ヒドロキシ‐２，６，６‐トリメチル‐１，４‐シクロヘキサンジオンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は＝＃キキ会聯＝≠４（２Ｓ　）　−２−、’、
’、”、、ｑ・踊１静ヒドロキシ−２，６，６，−）リ
フチル−１，４−シクロヘキサンジオ／の製造方法及び
該化合物よシなるたばこ用香喫味改良剤に関する。

近年、たばこの嗜好は低ニコチン、低タールのいわゆる
喫味の軽いたばこに急速に移行しつつあると同時に香喫
味に対する要求はますます多様化する傾向にある。従っ
てかかる傾向に対応するため香料をはじめとする種々の
添加物の研究、特にたばこ香喫味の多様化に有効な新規
香料の開発は重要な課題である。

本発明はかかる見地からたばこの香喫味改良に有効な化
合物を提供することを目的としてなされたものである０
本発明者らはある種の糸状菌がよ＜　、（６ＬＬ　）　
−２、２、６−ドリメチルー１．４−シクロヘキサンジ
オンを変換し、変換喫味改良剤としてすぐれた効果を発
揮することを見いだし、本発明をなすに至った。すなわ
ち、本発明は構造式（１）で表わされる（２８）−２−
ヒドロキシ−２，６，６−ドリメチルー１゜４−シクロ
ヘキサンジオンの製造方法及び該化合′吻からなるたば
こ用香喫味改良剤である０（１） 上記（２８）−２−ヒドロキシ−２，６，６−トリメチ
ル−１，４−シクロヘキサンジオン（以下、本化合物と
いう。）は、結晶性の物質であり、はのかなせ臭を伴な
う。

以下に本化合物のスペクトルデータ及び理化学的性質を
示す。

質量分析；　ｍ／ｚ　（％） １７０（Ｍ　、３）、１５２（Ｍ、１８．３）、１４２
（Ｍ−２８，３０）。

１２７（１５）、Ｚｏｏ（８）、９６．（４）、８５（
１２）。

７０（１５）、６９（１５）、５８（１００）、５７（
１５）。

５６（４２）、４３（６０）、４１（３２）”Ｈ−ＮＭ
几″１ 黄１　重オキサンー重クロロホルム　７：３゜ＭＳ ＋２．右欄のＨは左欄のシグナルに対応することを示す
。

■３゜重水の添加で消失 分子式；Ｃ，Ｈ１４０３ 理化学的性質；白色結晶 ｍ、ｐ、　７３〜７４°Ｃ 〔α）”　＋　１３．６°（Ｃ＝０．２８．ＣＨＣｌ３
）オイリイなせ臭あり 従来、構造式（Ｉｆ）で示される本化合物の対掌体であ
る旋光度（ａ）”−’　−１３：　１°（Ｃ＝１．０６
３　。

ＣＨＣｌ３）の化合物（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−２，
６，６−）ジメチル−１，４−シクロヘキサンジオン（
以下、化合物■という。）が報告されている。（Ｗａｄ
ａ、Ｔ、、　Ｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍ、　ＢｕｌｌＪ、邑
１１１７〜１．１１８（１９６４）、１３．４３〜４９
（］　９６５））（ＩＴ） 化合物０）はＤｌｇｉｔａｌｉｓ　ｐｕｒｐｕｒｅａ　
Ｌ、　（ジギタリス）の成分であるＤｌｇｉｐｒｏｌａ
ｃｔｏｎ　（ジギプロラクトン）の構造決定の過程で得
られた化合物である。

しかし、本化合物　の製造方法 ならびにそのたばこ用香喫味改良剤としての用途につい
ては、まったく知られていない。

−這　゛。

前掲のスペクトルデータ及び理化学的性質を示す本化合
物は、次の構造式（１）で示す（（、Ｒ）−２，２，６
−）リフチル−１，４−シクロヘキサンジオン（以下、
化合物Ｉという０）から微生物酸化によって一段階で得
られる０まず本発明で用いられる化合物Ｉは純度の高い
ものほど望ましい。

また、本発明で使用される微生物としてはアスペルギル
ス（Ａｓｐｅｒｇ目１ｕｓ）属に属する菌で具体例とし
ては、例えば下記に示すようなものがアケラレる０アス
ペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒ−ｇ目１ｕｓ’、ｎｉ
ｇｅｒ）　ＪＴＳ　１９１　（機工研菌寄第５０８７号
）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉ　Ｉｌ
ｕａａｗａｍｏｒｌ　）　ＩＦＯ４３１４、アスペルギ
ルス・ソーク＋　（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　５ｏＪａ
ｅ）　ＩＦＯ５２４１％アスペルギルスーホエニゾス（
Ａｓｐｅｒｇｉｌ　１　ｕｓ　ｐｂｏｅｎｉｃｉｓ）Ｉ
　ＦＯ８８７４゜ なお、ＵＦＯは日本微生物株保存機関連盟の微生物保存
機関で、財団法人・発酵研究所であるＱ本発明による製
造方法を順を追って説明する０まず、菌体の胞子または
菌糸を例えば次のような方法で培養して種菌とする０１
）胞子を種菌とする場合：固形培地あるいは液体培地に
２４〜３７℃で静置培養し、十分胞子を形成させる０通
常、接種後３日目頃よシ菌叢上−面に胞子の形成が認め
られるが・一般に７〜ＪＯ日目のものが望ましい０２）
菌糸を種菌とする場合；液体培地に２４〜３７℃で２４
〜６０時間振盪または通気攪拌培養を行ない、粥状の菌
糸懸濁液を得てこれを使用するか、あるいは静置培養に
よシ得られた菌体をワーリング・プレンダーなどによシ
磨砕し、粥状の菌糸懸濁液を得てこれを使用する０ これら種菌をさらに液体培地に接種し、２４〜３７℃で
２４〜４８時間、振盪または通気攪拌培養を行なう。こ
のさい、微生物の接種形態としては、上記の胞子、菌糸
のほか前培養した培養液などを適宜選択することができ
る。

また、ここで用いる液体培地および種菌の培養のための
固形および液体培地に用いる栄養源としては、馬鈴薯、
麦芽汁、トウモロコシ、グ＃　ｊ　−７，、ショ糖、ｆ
ン粉、コーン・ステイープ・リカー、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、尿素、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニ
ウム、硫酸アンモニウム、リン酸カリウム、塩化カリウ
ム、硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸亜鉛、塩化カルシ
ウム、炭酸カルシウムなどの炭素源、窒素の、無接塩、
発育因子などのなかから適当なものを選んで使用するこ
とができる。これらの栄養源は水溶液とし、また固形培
地とする場合には１５〜２．０チの寒天を加え、加熱ま
たはｐ過などによシ無菌化して使用する。

次に以上のようにして予め培養された菌体培養液へ化合
物置を添加し、ひき続き振盪または通気攪拌を行なう。

この操作によって、化合物ｌは次第に本化合物へ変換さ
れる。化合物ｌの添加量は通常菌体培養液１１当シ０．
５〜３ｇが適当である。

理化学的性質およびスペクトロメトリーの結果は先に記
載した通りである。分子式は出発物質である化合物置に
比べて酸素が１個多いとと、ＩＨ−ＮＭＲスペクトルに
おいて、二〇（甘）ＣＬＩ、のプロトンに相当するシグ
ナルが消失し、代りに＞Ｃ（Ｏｒ（）ＣＨ３の構造に相
当するシグナルが表われることから、本化合物の平面構
造は２−ヒドロキシ−２，６，６−）ジメチル−１，４
−フクロヘキサンジオンと決定される。また、文献（Ｃ
ｈｅｍ、Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、　１３．４３−４９、
（１９６５））記載の（＋）−２−ヒドロキシ−２，６
，６−トリメチルー１．４−シクロヘキサンジオンの旋
光度〔α〕２←５−１３．１０（Ｃ＝１−０６３．ＣＨ
ＣＪ６）　との比１１１から、本化合物の絶対構造は（
２８）−２−ヒドロキシ−２，６，６−）ジメチル−１
，４−フクロヘキサンジオンであると決定されるＯ断≠
琲功本化合物は、エチルアルコール、水、エチレングリ
コール等の溶媒で適宜の濃度に希釈し、たばこ香料とし
て使用に供することができる。本化合物は単独でもよく
、さらに他のたばこ用香料、添加物などを適宜配合して
使用することができる０本化合物は製品たばこ用たばこ
刻に対し、０．０１〜３０　ｐｐｍ　（Ｗ／Ｗ）程度、
好ましくは０．１〜５　ｐｐｍ　（ｗ／ｗ）添加すると
とＫｌ）、き社を考判甘味・せ臭を付与し、刺激をやわ
らげる効果を有する。本化合物を有効に適用しうるたば
この種類はとくに限定されるものではな転凄キバイプた
ばこなどの香喫味の改良のためにも有効である。

実施例　１．（製造例） 試験管内にバレイショ・グルコース寒天斜面培地を作り
、これにアスペルギルス・ニカー（Ａｓｐｅｒｇｉ　ｌ
１ｕｓ　ｎｊｇｅｒ）　ＪＴＳ　１９１菌株（機工研菌
寄第５１１５７号）を接種し、２８℃で７日間培養し池 て胞子を形成させみ。ついで、ショ糖３０ｇ、硝酸ナト
リウム２ｇ、リン酸二カリウム１１１塩化カリウム０５
ｇ、硫酸マグネシウム７水化物０、５　ｇ、ｆ（’ｆ母
エキス１ｇ、蒸留水１０００ｍ６からなる液体培地を３
１容三角フラスコに入れ、１２１℃で１５分間滅菌後、
前記菌株の胞子をその濃度が培地ｔｍｇ当り約２万個に
なるように接種し、回転振と都−う機にかけ２１０ｒｐ
ｍ　ｓ　２８℃で４８時間培養を一￥。このとき得られ
る培養物はｐＨ３，８程度、乾物重として約５ｇの菌体
を含む。

これに直ちに化合物１１ｇを添加し、２８℃で７日間様
と膿う培養後にｐＨ５，５、菌体乾物重８ｇの変換培養
物を得各。

この変換培養物から、本化合物の精製、単離を行う０す
なわち、該培養物へ酢酸エチルを１回尚シ、２５０ｍ１
１’　ずつ加えて２回攪拌・抽出する。両抽出液を合も
て５％炭酸水素す）　ＩＪウム水溶液・各５０ｎｌで２
回洗浄し、ついで蒸留水で１回洗浄する。無水硫酸ナト
リウムで脱水後、減圧下に溶媒を留去して、甘い香シを
有する褐色の中性区分０．９０．ｉｉｌを得る。ついで
、３０ｇのソリカゲルとへキサンを用いて、湿式法でカ
ラムを作９、中性区分を、混合比が９０：１０，８０：
２０，７０：３０であるヘキサン−酢酸エチル混合（（
ｉ各１　（ｌ　Ｏｍ　ｌで１ｈ次溶出し、ｌ（ｌずっ分
取する。本化合物は１６〜１８番目のフラクシｉン実施
例　２（製造例） 試験管内にバレイ７ヨ・グルコース寒天斜面培地を作り
、これにアスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
　Ｉｕｓ　ａｗａｍｏｒｉ）　ＩＦＯ４３１４菌株を接
種し、２８℃で７日間培養して胞子を形成させみ。

ついでショ糖３０ｇ、硝酸ナトリウム２１１リン酸二カ
リウムｌＩ、塩化カリウム０．．５’、９．硫酸マグネ
シウム７水化物０．５．９．酵母エキス１ｇ、蒸留水１
０１００Ｏから々る液体培地を３１容三角フラスコに入
れ、１２１’ｃで１５分間滅菌後、前記菌体の胞子をそ
の濃度が培地１ｍｌ当り約袢このとき得られる培養物は
ｐＨ４，０程度、乾物重として約６ｇの菌体を含む。こ
れに直ちに化合物１ｆ、９を添加し、２８℃で７日間様
とう培養後にｐ　１」５．０、菌体乾物重９ｇの変換培
養物を得鼠。

この変換培養物から、本化合物の精製・単離を行う。す
なわち、該培養物へ酢酸エチルを１回当り、２５０ｍＪ
ずつ加えて２回攪拌・抽出する。

両抽出液を合もて５チ炭酸水素ナトリウム水溶液、各５
０ｍ１で２回洗浄し、ついで蒸留水で１回洗浄する。無
水硫酸す）　ＩＪウムで脱水後、減圧下に溶媒を留去し
て、甘い香りを有する褐色の中性区分０．８７９を得為
。ついで、３０ｇのシリカゲルとヘキサンを用いて、湿
式法でカラムを作シ、中性区分を混合比が９０：１０，
８０　：　２０゜７０：３０であるヘキサン−酢酸エチ
ル混合液各１００ｒＪ’で順次溶出し、ｌｏｇずつ分取
する。本化合物は１６〜１８番目のフラクションに溶出
十亀 る０収景は０．１５ｇ、収率１５％で純度は９９％以」
二であった。

実施例　３．（製造例） 試験管内にバレイショ・グルコース寒天斜面培地を作り
、これにアスペルギルス・ソージャ（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ　５ｏｊａｅ）　ＩＦＯ５２４１菌株を接種し、
２８℃で７日間培養して胞子を形成させる。つイテソヨ
［３Ｊ／、硝酸ナトリウム２ｇ、ＩＪン酸二、カリウム
ｌｙ１塩化カリウム０．５９　、硫酸マグネシウム７水
化物０．５９　、酵母エキス１ｇ、ｋ≧留水１０１００
Ｏからなる液体培地を３１容三角フラスコに入れ、１２
１　’Ｃで１５分間滅菌後・前記菌体の胞子をその濃度
が培地１ｍｌ当シ約２万個となる様に接種し、回転振と
ぅ機にがけ２１（’冒 ｒｐｍ、２８℃で４８時間培養を行ＳＯ桝兵ギこのとき
得られる培養物はｐＨ３，９和度、乾物重として約５．
５９の菌体を含む。これに直ちに化合物（１）１．！７
を添加し、２８℃で７日間振とう培養後にｐＨ４，８、
菌体乾物量７．５１の変換培養物を丘− 得も。

この変換培養物から、本化合物の精製・単ｒｉＦを行う
。すなわち、該培養物へ酢酸エチルを１回当シ、２５０
ｍ１ずつ加えて２回攪拌・抽出する。

両袖出液を合ｔて５％炭酸水素ナトリウム水溶液、各５
０ｍ４で２回洗浄し、ついで蒸留水で１回洗浄する。無
水健酸す）　ＩＪウムで脱水後、減圧下に溶媒を留去し
て、甘い香りを有する褐色の中性区分０．７０．ｌｉ＋
を得る。ついで、３０ｇのシリカゲルとへキサンを用い
て、湿式法でカラムを作シ、中性区分を混合比が９０：
１０，８０：２０、７０　：　３０であるヘキサン−酢
酸エチル混合液各１００ｍＪ　で順次溶出し、１０ｇず
つ分取する。

本化合物は１６〜１８　番目のフラクションに溶出チ以
上であった〇 実施例　４゜ 日本専売公社１ｒ５品名「ジャス）Ｊ出葉組みの刻上品
１００．！９に対し、本化合物０．５　＃を３ｍｌのエ
タノールに溶解して、噴霧・添加した後紙巻し、本化合
物無添加の上記たばこ刻の巻上品を対照として、これら
を喫煙したときのにおい・味及び刺激について２点識別
法により比較した。専門パネル２０人の評価はつぎに示
すとおりてあった。

（注）数字Ｃ１よいとした人数 ■印は危険率１％で有意差があることを示す。

手続補正書（自発） 昭和５９年　４月１０日 特許庁長官　若杉和夫　殿 １　事件の表示 昭和５９年特許願第４３８４１号 ２　発明の名称 （２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，６−ドリメチルー
１，４〜ンクロヘキサンジオンの製造方法及び該化合物
からなるたばこ用香喫味改良剤３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　東京都港区虎ノ門二丁目２番１号名称　（４５６
）　日本専売公社 代表者　総裁　長　岡　實 １　指定代理人 住所　東京都港区虎ノ門二丁目２番■号５　補正の対象 「指定−１！１」および「明細口の特許請求の範囲の４
（’Ｉｄ　Ｊ ６　補正の内容 （１）別紙１のとおり （２）別紙２のとおり （別紙２） ２、特許請求の範囲 培地中で（６Ｒ）−２，２，６−）リメチルー１．４−
ンクロヘキサンジオンにアスペルギルス属に属する菌を
作用させ、微生物変換により構造式（１）で表わされる
化合物（２’５）−２−ヒドロキシ−２，６１６−　）
ツメチル−１，４−ンクロヘを特徴とする４（゛４造式
（］）で表わされる化合物の製造方法

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　喰捲ヰば（６Ｒ）−２，２，６−）リメチ／ｌ／
   −３，４−シクロへキサンジオンにアスペルギルス属に
   属する菌を作用させ、微生物変換によシ構造式（１）で
   表わされる化合物（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−２，６，
   ６−）リメチル−１、４−シクロヘキサンジオンを生成
   させ。 ナ＃卆＃味スることを特徴とする構造式（１）で表わさ
   れる化合物の製造方法。 （１） ２、　構造式（１）で表わされる化合物よシなるたばこ
   用香喫味改良剤。 （１）