JPS6021000B2 - 抗生物質ａｍ−３６９６ａおよびその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規抗生物質ＡＭ−３６９Ｍおよびその製法に
関する。

本発明はある種の放線菌株が新規抗生物質を生産すると
いう知見に基いている。本発明の目的は新規抗生物質Ａ
Ｍ−３６９６Ａおよびその製法を提供することにある。
本発明によって提供される抗生物質ＡＭ‐３６９船と命
名）は白色粉末であり、塩酸塩の状態において次の性質
を有している。

０１元素分析（％） Ｃ ４３．３〜４６．６ 日 ４．４５〜５．０９ Ｎ ４．７４〜５．１８ ０ ３５．４〜４３．４ ＣＩ ４．０８〜８．８０ ‘２’分子量 マススベクトル分析では測定できなかった。

ァミコン社製分子ふるい膜〆ンブランフィルタ−、ＵＭ
−２（分子量１０００以下の物質が通過しうる）ので通
過率が３０％であり、また同ＵＭ‐０５（分子量５００
以下の物質が通過しうる）での通過率が１％であること
から、分子量は５００〜１００項範囲にあると推定され
る。また上記‘１）の元素分析値から計算するとＡＭ‐
３６９Ｍの組成式として、Ｃ３０〜３４日３７〜４卵３
０１８〜２４ＣＩＩ〜２またはＣ２０〜２が２４〜２卵
２０１１〜１丈１１〜２が与えられ、これらに対応する
分子量はそれぞれ８１０〜８８６または５５０〜５９５
である。（３’融 点 ２３０〜２８０午０（２３０午０で褐色が始まり２８０
つ０で黒変する）‘４’ 比旋光度 〔Ｑ〕蜜一１２２〜一１２６０（平均一１２４ｏ ）（
ＣＯ．５水）‘５）Ｒｆ 値 ＡＭ−３６９餅の塩酸塩はキ‐ゼルゲルＧ（西独メルク
社製シリカゲル〜ｔ７７３１）を用いて作った薄層（０
．３豚）を使用する薄層クロマトグラフィーにおいて次
のＲｆ値を示す。

展 開 溶 媒 Ｒｆ‘ａ｝ アセ
トン、メタノール、ギ酸、水（３１：１：１）
０．８５‘ｂ’酢酸エチル、ピリジン、水
（４：３：２） ０．４５‘ｃ’
ｎ‐ブタノール、酢酸、水（１：１：１）
０．６５‘ｄ’酢酸エチル、ピリジン、アセト
ン、水（５：５：１：３） ０．６５
｛６１ 紫外線吸収スペクトル（第１図の通り）極大吸
収（血） Ｅ珍水（ＦＨ４．４） ２
８２〜２８４６００．０１規定塩酸 ２
８１〜２８３５４０．０１規定カセィソーダ
３００〜３０２８１‘７１赤外線吸収スペクトル（ＫＢ
す去）（第２図の通り） ｛８１ 溶解性 水に溶解し、ジメチルスルフオキシド‘こ鶏溶であり、
メタノール等の低級アルコールやアセトン、酢酸エチル
、ベンゼン等の有機溶媒に溶解しない。

‘９１ 呈色反応 ライドン・ミス反応、アニスアルデヒド‐硫酸反応およ
び過マンガン酸カリ‐ブロモフェ／ールブル−反応に陽
性であり、アニシジン反応、ニンヒドリン反応および坂
口反応に陰性である。

００ 塩基性物質である。

次にＡＭ‐３６９船の生物学的性質を示す。

実施例において撮られたＡＭ−３６９船（塩酸塩）を用
いた場合、ハートィンフュージョン裏夫培地（ｐＨ７．
０）での最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は第１表の通りで
ある（測定は寒天稀釈法による）。第１表 試 験 菌 ＭＩ○（仏ｇ／似）スタフイ
ロコツカス・アウレウス ＦＤＡ２０９Ｐ１２．５スタ
フイロコツカス・アウレウス ＦＳ１２７７（ペニシリ
ン耐性） １２．５バチルス・ズ
ブチリスＰＣ１２１９ ３．１バチル
ス・セレウス Ｔ ６．３サルシ
ナ・ルテア ＰＣＩＩＯＯＩ Ｏ．
８ミコバクテリウム・スメグマチス ＡＴＣＣ６０７１
２．５／力ルデイア・アステロイデス ＫＢ−４９
３．１クロストリジウム・パフリンゲンス ＡＴＣＣ３
６２４１２．５エシエリヒア・コリ ＮＩＨＵ
〉１００プロテウス・ブルガリス び０３１６
７ ＞１００サルモネラ・テイフイムリウム Ｋ
Ｂ−２０ ＞１００シゲラ・ゾンネイ Ｅ３３
＞１００シユードモナス・エルギノサ Ｐ
‐３ ＞１００上記の通り抗生物質ＡＭ‐３６９６
Ａはグラム腸性菌に対して比較的強い抗菌活性を示し、
ペニシリン耐性菌や嫌気性菌に対しても有効である。

本抗生物質をマウスに腹腔内投与した場合のＬＤ則‘ま
３００のｏ／Ｘ９以上である。また本抗生物質は細胞壁
合成阻害作用を有している。従って抗生物質ＡＭ‐３６
９鮒はヒトおよび動物に対する抗菌剤および治療剤あら
ぴに試薬として有用であることが期待される。上記の理
化学的性質および生物学的性質を既知抗生物質の性質と
比較した結果、抗生物質ＡＭ‐３６９紬は新規物質であ
るとがわかった。

すなわち、塩基性、水溶性で２８仇伽付近に弱い吸収極
大を有しかつグラム陽性菌に対して有効な、類似の抗生
物質として、たとえば、エンジュラシジンＡ，Ｂ，Ｃお
よびＤ（特公昭４５一１７１斑号公報）、バンコマィシ
ン（特公昭３３一８４５０号公報）、バンコマィシンン
に類似するＡ−４６９６（持関昭４７一２０３９７号）
、同じくＡ‐４７７（特関昭４９‐７１１９６号）、同
じくアボパルシン（特開昭５０一１３５班号）、ＡＭ−
３７４（持開昭４８−２４７５２号公報）、トリキュラ
ミン（袴公昭４５一９２３４号公報）あるいはアミ／グ
リコシド類があげられる。しかしエンジュラシジンＡ，
Ｂ，ＣおよびＤは、いずれも窒素含量が１４％以上（Ａ
Ｍ‐３６９船は４．９７％）であり、またアルカリ条件
下での紫外線吸収スペクトルも２５０〜２６瓜ｍ付近（
ＡＭ−３６９Ｍは３０瓜ｍ付近）に吸収極大を有してい
るので、ＡＭ‐３６９６Ａと異なる。バンコマィシンは
両性物質で、高分子（１８００）である点においてＡＭ
−３６９６Ａと異なる。

Ａ−４６９６の元素分析値（Ｃ・・・５１．＄％、Ｈ…
５．７７％、Ｎ…５．４６％）はＡＭ‐３６９Ｍのもの
と異なる。Ａ‐４６９６の紫外線吸収スペクトルは酸性
条件下で２７節ｍに極大吸収を示し（ＡＭ‐３６９船は
２脇皿）、赤外線吸収スペクトルにおける１３００、１
２０仇〆‐１付近の吸収極大はＡＭ‐３６９船に観測さ
れるが、Ａ−４６９６には観測されない。Ａ−４４７の
元素分析値（Ｃ…斑．０６％、日・・・６１８％、Ｎ…
５７９％）はＡＭ−３６９Ｍのものと異なる。アボパル
シンの元素分析値（Ｃ・・・５２．３６％、日・・・５
．７７％、Ｎ…５．７０％）および分子量（滋００でＡ
Ｍ‐３６９船は１０００以下である）はＡＭ−３６９Ｍ
のものと異なる。ＡＭ‐３７４の元素分析値（Ｃ・・・
５１．６８％、日・・・５．８５％、Ｎ…７．０２％）
および分子量〔（１５００±３００）×Ｎ〕はＡＭ−３
６９６Ａのものと異なる。トリキュラミンとは窒素含量
（１８．４２％）および分子量（２１３０）がＡＭ−３
６９船のものと異なる。グラム腸性菌にだけ有効なアミ
ノグリコシド類は窒素含基（１０％以上）およびライド
ン・スミス反応陰性である点においてもＡＭ−３６９Ｍ
と異なる。以上の通り、抗生物質ＡＭ‐３６９Ｍは既知
抗生物質と明らかに区別されるので、新規である。本発
明による抗生物質ＡＭ‐３６９船はシュードノカルディ
ア属に属しかつ抗生物質ＡＭ‐３６９Ｍ生産能力を有す
る微生物を培地に好気的に培養し、菌体内外に抗生物質
ＡＭ−３６９Ｍを箸積させ、これを回収することによっ
て製造される。実施例に記載された菌株は、本発明者が
見出した放射線菌株で、山形県西村山郡の土壌から分離
選別したもので、その菌学的性状は次の通りである。１
〕 形態学的性質 栄養菌糸は合成培地および天然培地においてともによく
発達し、そのほとんどが培地中に侵透して生育する。

この形態はジグザグ状である。気菌糸はグルコース・ベ
プトン葵夫培地等の合成培地や天然塔地に豊富に着生し
、その色調は白色ないし灰白色を基調とするが、一部の
合成培地では灰青色を呈する。顕微で観察すると、１び
固以上の長い胞子鎖が不規則に分岐し、その先端は直線
状である。電子顕微鏡下では、その胞子は１．１〜３．
７×０．４ｒｍ程度の大小の円柱状である。またいわゆ
るブラストポアを形成する過程で見られるアクロベタル
バッディングが認められる。胞子の表面は平滑である。
菌核、胞子菱および遊走子は見出されない。〔口〕 各
種塔地での性状（第２表） イービー・シヤーリングら（ｌｎｔ・Ｊ．Ｓｙｓｔ．舷
ｃｔｅｒｉｏｌへ １６巻、３１３頁、１９６６年）の
方法に従い、それに公知の培地および実験方法を併せて
使用した。

色調は標準色表としてカラー１ハーモニー．マニュアル
第４版（コンテナ一・コーポレーション・オブ・アメリ
カ・シカゴ、１９５粋王）を用いて決定し、色票名とと
もに括弧内にそのコードを併せて記した。以下は特記し
ない限り、２７０、２週間目の各塔地上における観察結
果である。第 ２ 表ＩＳＰ：インターナショナル・ス
トレブトミセス・プロジェクト選定の培地〔ｍ〕 生物
学的性質 ‘１１ メラニン色素の形成 【ィ｝ チロシン寒天 陰性仰 べ
プトン・イースト鉄寒天 陰性Ｎグルコース・ベ
プトン・ゼラチン塔地・穿刺（２７０）
陰性Ａ トリプシン・イースト液 陰性｛２
１ チロシナーゼ反応 陰性｛３１
硫化水素生産館 陰性【４’硝酸銀
の還元（グルコース・硝酸塩渚地）
陽性■ スターチの加水分解
腸性｛６｝ゼラチンの液化（グルコース・ベプトン・ゼ
ラチン培地） 陽性‘７１脱脂乳
の凝固（２７０） 陽性【８１ 脱脂乳べ
プトン化（２７０） 腸性【９１ セルロース
の分解 陰性００ 生育温度範囲（℃）
２０〜３６（１１）炭素源の利用性（プリ
ドハム・ゴットリープ寒天塔地）よく利用する： Ｄ‐グルコース，Ｌ‐アラピノース，Ｄ−マンニトール
、シユクロース，ｉ‐イノシトール，ラフイノース、Ｄ
−キシロース，メリビオース，サリシン，フルクトース やや利用する： Ｌ−ラムノース 〔Ｗ〕 細胞の化学分析 細胞壁の組成： ジアミノピメリン酸はメソ型でグリシンを有せず、アラ
ビノースを有する。

ガラクトースを有する。

全菌体の糖組成： アラビノース，ガラクトース，リポース，グルコースを
有する。

従って、レシェバリェ（Ｉｎｔｅｒ．Ｊ．Ｓｙｓｔｅｍ
．Ｂａｃｔ．、２悌塗、４３５〜４４３頁、１９７位王
）の分類に従って本菌の細胞壁組成（Ｃｅｌｌｗａｌｌ
ｔｙｐｅ）はＮ型で、全菌体の糠組成（Ｗｈｏｌｅｃｅ
ｌｌｓｕｇｄｒｐａｔｅｒｎ）はＡ型となる。

本菌は細胞壁組成と全菌体の糖組成がＮＡ型であること
から、ミコバクテリウム属、ノカルディア属、シュード
ノカルデイア属、サーモモノスポーラ属、ミクロポリス
ポーラ属のいずれかに属するものと考えられる。

しかしながら、その形態において、栄養菌糸がジグザグ
状を呈し、気菌糸はｌｑ固以上の長い胞子を有し、その
胞子はブラストポアを形成することも特徴とするから、
シュードノカルディア属（Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌへ ２虎等、３７３〜４１４頁、１９５７年）に属す
ると考えるのが合理的である。さて、従来シュードノカ
ルディア属に属する函種としては、シユードノカルデイ
ア・スピノザ（Ｉｎｔｅｒ．Ｊ．Ｓｙｓｔｅｍ．母ｃｔ
．、２１巻、２９〜４３頁、１９７１年）、シュードノ
カルデイア・サーモフイ−ラ（Ｉｎｔｅｒ．Ｊ．Ｓｙｓ
ｔｅｍ．舷ｃｔ．、２１巻、２９〜４３頁、１９７１年
）、シュードノカルディア・フアスティデイオーサ（米
国特許明細書４０３１２０６号、１９７７年）の３種が
知られている。しかし本菌株の前述の性質を、これらの
公知菌種に関する文献あるいは標準菌株と比較すると、
シユードノカルディア・スピノザは、その生育温度範囲
が２０〜３０ｑｏ（本菌株は２０〜３げ０）で、胞子の
大きさが２．５〜４．５×０．４〜１．０一ｍ（本菌株
は１．１〜３７×０．４仏ｍ）胞子の表面がとげ状（本
菌株は平滑）である点から本菌株と区別され、次にシュ
ードノカルディア・サーモフィーラは、その生育温度範
囲は２８〜６０℃であり、胞子の大きさは２．５×１．
５〜１．８〃ｍで、オートミール寒天塔地には生育しな
い点において、本菌株と区別され、またシュードノカル
ディア・フアスティデイオーサは、その胞子の大きさは
９〜１０×１．０山ｍであり、イースト麦芽寒天塔地、
スターチ無機塩塔地、栄養寒天培地等では盛り上がって
生育し、気菌糸は着生しないか、または着生しても非常
に乏しく白色である点において、本菌株と区別される。
このように本菌株は、公知のシユードノカルディア属の
３菌種と区別される新しい菌種に属すると認められるの
で、シュードノカルディア・アズレアと命名された。た
だし本菌株は、シユードノカルデイア・エスピ−ＡＭ‐
３６９６の名称で工業技術院微生物技術研究所に寄託（
徴工研菌第４７３８号）されている。上記菌株の変異株
も本発明の方法に使用することができる。

その他本抗生物質生産能力を有するシュードノカルディ
ア属に属する菌株も使用することができる。培地として
は、炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその他の栄
養物を程よく含有する合成培地または天然塔地を使用す
ることができる。

培地に使用される炭素源、窒素源は使用菌株の利用可能
なものならいずれの種類でも良い。すなわち炭素源とし
ては、たとえばグルコース、グリセロール、フラクトー
ス、マルトース、マンニツト、キシロース、ガラクトー
ス、ラクトース、リボース、澱粉またはその加水分解物
等の種々の炭水化物が使用できる。その濃度は通常、培
地に対して０．１％〜５％（グルコース換算）が好まし
い。またグルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種
有機酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種ア
ミノ酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコー
ル類やノルマルパラフィン等の各種の非芳香族系炭化水
素、あるいは植物性もしくは動物性の各種油脂等も使用
可能である。窒素源としては、アンモニア、塩化アンモ
ニウム、燐酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸ア
ンモニウム等の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニ
ウム塩類、尿素、ベプトン、ＮＺ−アミン、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母エキス、コーンスチープリカ−、
カゼイン加水分解物、フィッシュミールあるいはその消
化物、大豆粉あるいはその消化物、脱脂大豆あるいはそ
の消化物、蟻加水分解物等の含窒素有機物質、さらには
グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ酸が
使用可能である。無機物としては各種燐酸塩、硫酸マグ
ネシウム、食塩等、さらに微童の重金属塩が使用される
。

また栄養要求性を示す変異株を用いる場合には、当然そ
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この種の栄養素は天然物を含む培地を使用する
場合にはとくに添加を必要としない場合がある。

醗酵は振遼培養、または通気蝿梓深部培養等の好気的条
件下で行なう。

培養温度は通常、２０〜４０００である。培養期間は通
常１〜８日で、菌体内外に著童の抗生物質ＡＭ−３６９
船が生成蓄積する。培養終了後に培養物より抗生物質Ａ
Ｍ‐３６９船をたとえば次の方法で採取する。培養物を
遠心分離により炉液と沈殿物とに分離する。炉液からは
活性炭、多孔性合成樹脂、イオン交換樹脂等に吸着させ
、溶出させることにより抽出する。沈殿物からは含水ア
セトンや含水メタノール等の有機溶媒で抽出する。抽出
物を適宜、濃縮乾圃することによりＡＭ−３６９Ｍの粗
粉末を得る。粗粉末はさらに、水溶性物質の精製におい
て通常用いられる公知の方法、たとえばイオン交モ敷樹
脂、シリカゲル等の吸着剤、あるいはゲル炉過剤などに
よる各種クロマトグラフィー法、濃縮法、塩析法などを
適宜組み合わせることにより精製される。その１例とし
て、カーボキシメチルセルロース（日十型）を用い、溶
出溶液としてギ酸アンモニウム溶液を用いる直線濃度勾
配溶世法によるカラムクロマトグラフィー法があげられ
る。これらの精製方法で得られる活性画分を濃縮乾岡す
ることにより抗生物質ＡＭ−３６９Ｍの粉末を得ること
ができる。本発明において、ＡＭ‐３６９６の検出定量
は、ＡＭ‐３６９麓に感受性を示す微生物（例、スタフ
イロコツカス・アウレウスＦＤＡ２０解、バチルス・ス
プチＩＪスＰＣ１２１９またはサルシナ・ルテアＰＣＩ
ＩＯＯＩ）を被険菌として用いる生物学的方法または呈
色反応を利用する化学的方法いよって行なったが、この
種の方法は周知である。

実施例 シュード／カルディア・Ｓｐ．ＡＭ‐３６９６株（徴工
研菌第４７斑号：ＮＲＲＬＩ１４１２）の斜面培養から
１白金耳を５００の‘の種塔地（グリセリン２．０％、
大豆粉２．０％、塩０．３％、ｐＨ７．０）を入れた２
そ客の三角フラスコに接種し、２７０で２日間振盤培養
して種培養を得た。

この種培養を１００その醗酵塔地〔デキスリン（２．０
％）、大豆粉（１．０％）、酵母エキス（０．３％）、
ＫＨ２Ｐ０４（０．１％）、Ｋ２ＨＰ０４（０．１％）
、Ｍ鷹Ｓ０４・７は０（０．１％）；ｐＨ７．０〕を入
れた２００そ客タンクファーメンターに２％宛接種し、
２７０で４自問通気縄柊培養（通気量５０夕／ｍｉｎ、
鍵梓２０仇．ｐ．ｍ．）を行なった。培養液を遠心分離
して菌体その他の沈澱物を除去した上清液１８０そに、
あらかじめ脱気した活性炭９０雌を加えて３０分間燭拝
した。その後活性炭を炉別し、水洗し、０．０１規定硫
酸を含む６０％アセトンで溶出し、溶出液の活性画分を
合わせて濃縮した。濃縮液を水酸化バリウムで中和し、
生成した沈殿物を炉耳Ｕした。炉液を弱酸性陽イオン交
換樹脂アンバーライト瓜Ｃ−５０（日十型）のカラム（
３そ）に通落し、カラムを水洗し、０．１規定塩酸で溶
出し、活性画分を合わせて苛性ソーダで中和した。中和
した溶液を活性炭のカラム（１８００の‘）に通塔し、
水洗後０．０１規定塩酸を含む６０％アセトンで溶出し
て活性画分を合わせて濃縮した。濃縮液に弱塩基性陰イ
オン交換樹脂アンバーライトＩＲ‐４５（ＯＨ‐型）を
加えて中和し、樹脂を淀別後、炉液を凍結乾燥してＡＭ
−３６９針の粗粉末２雌を得た。この粗粉末１礎を１０
０肌【の水に溶解し、活性炭を充填したカラム（３００
の‘）に通塔し、カラムを水洗後１０％ピリジン溶液６
００の【、０．１規定塩酸６００の‘、０．０１規定塩
酸２００私を順次カラムに通塔し、いずれの場合もカラ
ムの通過液は捨てた。

次に０．０１規定塩酸を含む５０％アセトン溶液で溶出
し、活性画分を合わせて濃縮し、アンバーライト瓜‐４
５（ＯＨ‐型）を添加して中和後、樹脂を炉別した。炉
液にセルロース粉末アビセル（商品名）傘を加えて濃綾
乾固した。ァピセル（４０ｇ）をｎ‐ブタノールに懸濁
してカラムに充填し、この上部に上記の鶴のアビセルを
ｎ‐ブタノールに懸濁して負荷した。このカラム（１１
０泌）からｎ‐ブタノー、酢酸、水（５：１：２）から
なる溶出液で溶出し、画分（各１．８８ｃｃ）のうち４
１〜６０番を集めて濃縮し、濃縮液を苛性ソーダで中和
した。中和後、活性炭カラム（２０の‘）に通塔し、水
洗後０．０１規定塩酸を含む５０％アセトン溶液で溶出
し、活性画分を集めて濃縮し、アンバーライトｍ−４５
（ＯＨ−型）で中和後、樹脂を炉別し、炉液を凍結乾燥
してＡＭ−３６９６Ａの粉末（塩酸塩）１５０倣を得た
。これを水５Ｍに熔解させ、０．５規定苛性ソーダでＰ
Ｈ７．５に調節し、弱酸性陽イオン交換セルロースカー
ボキシメチルセルロース（ワットマン社製）（日十型）
のカラム（１８０の【）に通塔し、カラムを水洗後、水
（７５０の【）および０．５モルギ酸アンモニウム（７
５０の‘）からなる溶出溶液で直線濃度勾配溶出法によ
り溶出し、画分（各７の‘）の１４７〜１７の蚤を集め
た。集めた活性画分を活性炭カラム（１０の‘）に通※
し、水洗後、０．０１規定塩酸を含む５０％アセトン溶
液で溶出し、活性画分を集めて濃縮し、アンバーライト
ＩＲ‐４５（ＯＨ‐型）で中和後、樹脂を炉別し、炉液
を凍結乾燥してＡＭ‐３６９６Ａの粉末（塩酸塩）４１
のｏを得た。このものの性質は本明細書第４頁１行目か
ら第７頁１行目までに記載した通りであった。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＡＭ‐３６９秘の精製粉末（塩酸塩）
の紫外線吸収スペクトルを示し、第２図は赤外線吸収ス
ペクトル（ＫＢす去）を示す。 鰭１四多２図

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 塩酸塩の状態において白色粉末であつて、次の理化
   学的性質を有することを特徴とする抗生物質ＡＭ−３６
   ９６Ａ。 （イ） 元素分析 Ｃ ４３．５％ Ｈ ４．４６％ Ｎ ４．９７％ （ロ） 融点 ２３０〜２８０℃ （ハ） 比旋光度 〔α〕＾２＾８＿Ｄ−１２２〜−１
   ２６°（平均−１２４°）（ｃ０．５、水） （ニ） 紫外線吸収スペクトル 第１図の通り （ホ） 赤外線吸収スペクトル 第２図の通り （ヘ） Ｒｆ値 西独メルク社製シリカゲルＧ（Ａｒｔ７７３１）を用
   て作成した薄層（０．３ｍｍ）を用いたクロマトグラフ
   イーにおいて次のＲｆ値を示す。 展開溶媒 Ｒｆ アセトン・メタノール・ギ酸・水 （３：１：１：１） ０．８５ 酢酸エチル・ピリジン・水 （４：３：２） ０．４５ ｎ−ブタノール・酢酸・水 （１：１：１） ０．６５ 酢酸エチル・ピリジン・アセトン・ 水（５：５：１：３） ０．６５ （ト） 溶剤に対する溶解性 水に溶解し、ジメチルスルフオキシドに難溶であり、
   メタノール等の低級アルコールやアセトン、酢酸エチル
   、ベンゼン等の有機溶媒に溶解しない。 （チ） 呈色反応 ライドン・スミス反応、アニスアルデヒド−硫酸反応
   および過マンガン酸カリ−ブロモフエノールブル−反応
   に陽性であり、アニシジン反応、ニンヒドリン反応およ
   び坂口反応に陰性である。 （リ） その他 塩基性物質である。 ２ シユードノカルデイア属に属しかつ抗生物質ＡＭ−
   ３６９６Ａ生産能力を有する微生物を培地に好気的に培
   養することによつて、抗生物質ＡＭ−３６９６Ａを菌体
   内外に著積させ、これを回収することを特徴とする抗生
   物質ＡＭ−３６９６Ａの製造方法。