JPS5823077B2 - 抗生物質ａｍ−３６０３およびその製造方法 - Google Patents
抗生物質ａｍ−３６０３およびその製造方法Info
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- JPS5823077B2 JPS5823077B2 JP55123283A JP12328380A JPS5823077B2 JP S5823077 B2 JPS5823077 B2 JP S5823077B2 JP 55123283 A JP55123283 A JP 55123283A JP 12328380 A JP12328380 A JP 12328380A JP S5823077 B2 JPS5823077 B2 JP S5823077B2
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- A61P31/04—Antibacterial agents
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規抗生物質ＡＭ−３６０３およびその製法に
関する。
関する。
本発明はある種の放線菌が新規抗生物質ＡＭ−３６０３
を生産するという知見に基いている。
を生産するという知見に基いている。
本発明の目的は、新規抗生物質ＡＭ−３６０３およびそ
の製法を提供することにある。
の製法を提供することにある。
本発明によって提供される抗生物質（ＡＭ−３６０３と
命名）は精製された状態において安定な白色粉末であっ
て、次の理化学的性質を有している。
命名）は精製された状態において安定な白色粉末であっ
て、次の理化学的性質を有している。
（１）融点：９５−□９７℃
（２）工やカニ、。
、１゜）２６．５−１９゜、。−１、。タノール中）
（３）元素分析（％）：Ｃ６５，７、Ｈ８，５６、Ｎ１
．９５ け）分子式： Ｃ４１Ｈ６５Ｎ０１２ （５）分子量： Ｆ Ｄマスｍ／ ｚ ７４５ （Ｍ＋
−１８）（６）Ｒｆ値：ＡＭ３６０３はキーゼルゲルＧ
〔西独メルク社製アルミ板シリカゲル薄層（０，２ｍｍ
Ａｒｔ５５５４）〕を用いる薄層クロマトグラフィーに
おいて次のＲｆ値を示す。
．９５ け）分子式： Ｃ４１Ｈ６５Ｎ０１２ （５）分子量： Ｆ Ｄマスｍ／ ｚ ７４５ （Ｍ＋
−１８）（６）Ｒｆ値：ＡＭ３６０３はキーゼルゲルＧ
〔西独メルク社製アルミ板シリカゲル薄層（０，２ｍｍ
Ａｒｔ５５５４）〕を用いる薄層クロマトグラフィーに
おいて次のＲｆ値を示す。
展開溶媒 Ｒｆ値
（ａ） ベンゼン／アセトン（１：１） ０．５
６（ｂ） クロロホルム／メタノール（９： ０．
５９１） （Ｃ） エタノール／水（２：Ｉ） ０．７
４（ｄ） 酢酸エチル／ピリジン／水（１： ０．
４８１：４） （ｅ） ベンゼン／酢酸エチル（１：１） ０．１
８：（７）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：第
１図の通り （８）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：第２図の通
り （９）’Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣ１ｓ中）：第
３図の通り （１０）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣ１３中）
：第４図の通り （１υ 溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、
酢酸エチル、ピリジン、ジエチルエーテル、クロロホル
ム、四塩化炭素、ベンゼン、トルエン、ジメチルスルホ
キシド、シクロヘキサノン等に可溶であるが、石油エー
テル、ノルマルヘキサンおよび水に溶解しない。
６（ｂ） クロロホルム／メタノール（９： ０．
５９１） （Ｃ） エタノール／水（２：Ｉ） ０．７
４（ｄ） 酢酸エチル／ピリジン／水（１： ０．
４８１：４） （ｅ） ベンゼン／酢酸エチル（１：１） ０．１
８：（７）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：第
１図の通り （８）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）：第２図の通
り （９）’Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣ１ｓ中）：第
３図の通り （１０）１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣ１３中）
：第４図の通り （１υ 溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、
酢酸エチル、ピリジン、ジエチルエーテル、クロロホル
ム、四塩化炭素、ベンゼン、トルエン、ジメチルスルホ
キシド、シクロヘキサノン等に可溶であるが、石油エー
テル、ノルマルヘキサンおよび水に溶解しない。
０り 呈色反応ニアニスアルデヒド−硫酸反応、２・４
−ジニトロフェニルヒドラジン、ヒドロキＺルアミン、
硫酸セリウム等との反応、ドラーゲンドルフ反応等に陽
性であるが、ライドン−スミス反応、ニンヒドリンや塩
化第二鉄との反応に陰性である。
−ジニトロフェニルヒドラジン、ヒドロキＺルアミン、
硫酸セリウム等との反応、ドラーゲンドルフ反応等に陽
性であるが、ライドン−スミス反応、ニンヒドリンや塩
化第二鉄との反応に陰性である。
（１３）その他：中性物質である。
以上の理化学的性状から、抗生物質ＡＭ−３６０３は次
式（Ｉ）で示されると認められる。
式（Ｉ）で示されると認められる。
次にＡＭ−３６０３の生物学的性質を示す。
実施例において得られたＡＭ−３６０３の試料を用いた
場合の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は第１表の通りであ
る。
場合の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）は第１表の通りであ
る。
なお細菌用としてバートインフュージョン寒天培地（１
）Ｈ７，０；３７℃：２０時間後判定）、真菌用として
グルコース・ポテト培地（１）Ｈ６，０；２７℃；４４
時間後判定）を用いた。
）Ｈ７，０；３７℃：２０時間後判定）、真菌用として
グルコース・ポテト培地（１）Ｈ６，０；２７℃；４４
時間後判定）を用いた。
第 １ 表
ＩＣ
試 験 ＠ （μグ／ｍｌ）スタフィロコ
ッカス・アウレウス １００ＦＤＡ２０９Ｐ バチルス・ズブチリス ＰＣＩ ＞１００１９ サルシナ・ルテア ＰＣＩ ＞１００００１ ミコバクテリウム・スメグマチス １００ＡＴＣＣ６
０７ コリネバクテリウム・パウロメタ ０．２ボラム
ＫＢ−２１ ストレプトコッカス・ピオゲネス ２５２０３ エシェリヒア・コリ ＮＩＨＪ ＞１００クレブシ
エラ・ニューモニエ ＞１００ＰＣＩ ６０２ プロテウス・ブルガリス ＩＦＯ＞Ｚｏ。
ッカス・アウレウス １００ＦＤＡ２０９Ｐ バチルス・ズブチリス ＰＣＩ ＞１００１９ サルシナ・ルテア ＰＣＩ ＞１００００１ ミコバクテリウム・スメグマチス １００ＡＴＣＣ６
０７ コリネバクテリウム・パウロメタ ０．２ボラム
ＫＢ−２１ ストレプトコッカス・ピオゲネス ２５２０３ エシェリヒア・コリ ＮＩＨＪ ＞１００クレブシ
エラ・ニューモニエ ＞１００ＰＣＩ ６０２ プロテウス・ブルガリス ＩＦＯ＞Ｚｏ。
１６７
シュードモナス・エルギノザ Ｐ＞１００３
キャンディジ・アルビカンス 〉１００Ｆ−１
サツカロミセス・サケ ＫＦ−＞１００
６
クリプトコツカス・ネオフオルマ 〉１００ンスＫＦ−
３３ ペリシリウム、クリソゲナム ０．２Ｆ−９
７ ＩＣ 試 験 菌 （μｆ ／ｒｕｌ）アスペル
ギルス・ニガー ＫＦ−２５ ０２ アスペルギルス・ブレビバス １．５６Ｆ−
２０１ スフレロチニア・シネレア ＫＦ ＜０．１１８
１ ピリクラリア・オリゼ ＫＦ−＜０．１ ８０ オルタナリア・キクチアナ ＫＦ ３．１１８
５ ボツリチス・シネレア ＫＦ−１２，５ ８４ トリコフィトン・インターディジ ３．１タレ
ＫＦ−６２ ミクロスポラム・ジプセウム ５０Ｆ−６５ ムコール・ラセモサス ＫＦ−＞１００ ２３ フサリウム・オキシスポラム ＞ｉｏ。
３３ ペリシリウム、クリソゲナム ０．２Ｆ−９
７ ＩＣ 試 験 菌 （μｆ ／ｒｕｌ）アスペル
ギルス・ニガー ＫＦ−２５ ０２ アスペルギルス・ブレビバス １．５６Ｆ−
２０１ スフレロチニア・シネレア ＫＦ ＜０．１１８
１ ピリクラリア・オリゼ ＫＦ−＜０．１ ８０ オルタナリア・キクチアナ ＫＦ ３．１１８
５ ボツリチス・シネレア ＫＦ−１２，５ ８４ トリコフィトン・インターディジ ３．１タレ
ＫＦ−６２ ミクロスポラム・ジプセウム ５０Ｆ−６５ ムコール・ラセモサス ＫＦ−＞１００ ２３ フサリウム・オキシスポラム ＞ｉｏ。
ＫＦ−１６６
ペリキユラリア・ササキ ＫＦ−２５
１９
上記の通り抗生物質ＡＭ−３６０３は一部のグムラ陽性
菌と植物病原性真菌ならびに動物ヒフ病原性真直に対し
て比較的強い抗菌活性を示す。
菌と植物病原性真菌ならびに動物ヒフ病原性真直に対し
て比較的強い抗菌活性を示す。
第２表はある種の病原菌に対する抗生物質ＡＭ−３６０
３の活性を、他の公知の抗生物質の対応する活性と比較
したもので、ＡＭ−３６０３の活性がと（に優れている
ことがわかる。
３の活性を、他の公知の抗生物質の対応する活性と比較
したもので、ＡＭ−３６０３の活性がと（に優れている
ことがわかる。
本抗生物質をマウスに腹腔内投与した場合のＬＤ５ｏは
２００ｒｎ９／ｋｇ以上である。
２００ｒｎ９／ｋｇ以上である。
また本抗生物質は真直の形態異常を誘発する作用を有し
ている。
ている。
従って抗生物質ＡＭ−３６０３はヒトおよび動物に対す
る抗菌剤および治療剤ならびに農業用や試薬として有用
であることが期待される。
る抗菌剤および治療剤ならびに農業用や試薬として有用
であることが期待される。
上記の理化学的性質および生物学的性質を既知抗生物質
の性質と比較したところ、ＡＭ−３６０３の諸性質のす
べてにわたって合致するものは見出せない。
の性質と比較したところ、ＡＭ−３６０３の諸性質のす
べてにわたって合致するものは見出せない。
たとえばアーボマイシンＳ（特公昭５０−２２１１９号
）およびアーボマイシンＡ（ミサト等、Ｊ、ｏｆ Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｌ ２２、４５７−４６２および
４６３−４６６（１９６９）、ｌは、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーの直接比較によって、ＡＭ−３６０３
と区別することができる。
）およびアーボマイシンＡ（ミサト等、Ｊ、ｏｆ Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｌ ２２、４５７−４６２および
４６３−４６６（１９６９）、ｌは、シリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーの直接比較によって、ＡＭ−３６０３
と区別することができる。
次にベンチュリシジ７ Ａ （Ｒｈｏｄｅｓ等、Ｎａｔ
ｕｒｅ 。
ｕｒｅ 。
１９２．９５２−９５４（１９６１）、：ｌは、シリカ
ゲル薄層クロマトグラフィーの直接比較および比旋光度
によって、ＡＭ−３６０３と区別することができる。
ゲル薄層クロマトグラフィーの直接比較および比旋光度
によって、ＡＭ−３６０３と区別することができる。
従って抗生物質ＡＭ−３６０３は新規物質であると考え
られる。
られる。
本発明による抗生物質ＡＭ−３６０３は、ストレプトミ
セス属に属しかつ抗生物質ＡＭ−３６０３生産能力を有
する微生物を培地に好気的に培養し、置体内外に抗生物
質ＡＭ−３６０３を蓄積させ、これを回収することによ
って製造される。
セス属に属しかつ抗生物質ＡＭ−３６０３生産能力を有
する微生物を培地に好気的に培養し、置体内外に抗生物
質ＡＭ−３６０３を蓄積させ、これを回収することによ
って製造される。
本発明の抗生物質ＡＭ−３６０３を生産するために使用
される微生物の実用的な例は、本発明者らによって埼玉
県入間郡の土壌から新たに分離されたストレプトミセス
・エスピーＡＭ−３６０３株があげられる。
される微生物の実用的な例は、本発明者らによって埼玉
県入間郡の土壌から新たに分離されたストレプトミセス
・エスピーＡＭ−３６０３株があげられる。
この菌株Ｑζ工業技術院微生物工業技術研究所に微工研
菌寄第５６１９号として寄託されている。
菌寄第５６１９号として寄託されている。
その菌学的性状は次の通りである。
（１）形態学的性質
栄養菌糸は天然培地、合成培地の両方でよく発達し、通
常は隔壁を有しない。
常は隔壁を有しない。
気菌糸は、スターチ無機塩寒天培地、グルコース・アス
パラギン寒天培地、グリセロール・アスパラギン寒天培
地等で豊富に着生し、グリセロール・リンゴ酸カルシウ
ム寒天培地、ペプトン・イースト鉄寒天培地、グルコー
ス・硝酸塩寒天培地等では、着生が貧弱かあるいは着生
しない。
パラギン寒天培地、グリセロール・アスパラギン寒天培
地等で豊富に着生し、グリセロール・リンゴ酸カルシウ
ム寒天培地、ペプトン・イースト鉄寒天培地、グルコー
ス・硝酸塩寒天培地等では、着生が貧弱かあるいは着生
しない。
気菌糸の色調は白色ないし淡黄色で、ベルベット状また
は綿状を呈する。
は綿状を呈する。
顕微鏡下の観察では、胞子柄は直線状ないしはループ状
を呈し、ｉｏ個以上の胞子の連鎖が認められる。
を呈し、ｉｏ個以上の胞子の連鎖が認められる。
胞子の大きさは０．４〜０．５μ×１．０〜１．１μで
ほぼ楕円形で、胞子の表面は平滑である。
ほぼ楕円形で、胞子の表面は平滑である。
繭核、胞子前および遊走子は見出されない。
（２）各種培地上での性状
イー・ピー・シャーリングら（Ｉｎｔ、Ｊ。
５ｙｓｔ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ 、 １６巻、３１３
頁、１９６６年）の方法に従い、それに公知の培地およ
び実験方法を併せて使用した。
頁、１９６６年）の方法に従い、それに公知の培地およ
び実験方法を併せて使用した。
その結果を次表に示す。
色調は標準色としてカラー・ハーモニー・マニュアル第
４版（コンテナー・コーポレーション・オブ・アメリカ
・シカゴ、１９５８年）を用いて決定し、色票名ととも
に括弧内にそのコードを併せて記しｔも以下は特記しな
い限り、２７℃、２週間目の各培地における観察である
。
４版（コンテナー・コーポレーション・オブ・アメリカ
・シカゴ、１９５８年）を用いて決定し、色票名ととも
に括弧内にそのコードを併せて記しｔも以下は特記しな
い限り、２７℃、２週間目の各培地における観察である
。
（３）生理的諸性質
（ａ） メラニン色素の形成
（イ）チロシン寒天 陰性（ロ）ペ
プトン・イースト鉄寒天 陰性（）→ グルコ
ース・ペプトン・ゼラ チン培地穿刺（２１〜２３℃） 陰性に） ト
リプトン・イースト液 陰性（ｂ） チロシ
ナーゼ反応 陰性（Ｃ） 硫化水素
の生産 陰性（ｄ） 硝酸塩の還
元 陽性（ｅ） ゼラチンの液
化（グルコー ス・ペプトン・ゼラチン培地）陽性 （ｆ） スターチの加水分解 陽性（
ｇ） 脱脂乳の凝固（３７℃） 陰性（ｈ
） 脱脂乳のペプトン化（３７°Ｃ） 陽性（ｉ
） セルロースの分解 陰性（ｊ）
生育温度範囲 ２２〜４２°Ｃ（ｋ）
炭素源の利用性（プリトノ・ム・ゴドリーブ寒天培
地） よ（利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ
−キシロース、Ｄ−マンニトール、ラフィノース、ｉ−
イノシトール やや利用する：プリシン 利用しない：Ｌ−アラビノース、シュークロース、ラム
ノース 細胞壁組成 ディアミノピメリン酸はＬＬ−型であり、アラビノース
、ガラクトースは認められない。
プトン・イースト鉄寒天 陰性（）→ グルコ
ース・ペプトン・ゼラ チン培地穿刺（２１〜２３℃） 陰性に） ト
リプトン・イースト液 陰性（ｂ） チロシ
ナーゼ反応 陰性（Ｃ） 硫化水素
の生産 陰性（ｄ） 硝酸塩の還
元 陽性（ｅ） ゼラチンの液
化（グルコー ス・ペプトン・ゼラチン培地）陽性 （ｆ） スターチの加水分解 陽性（
ｇ） 脱脂乳の凝固（３７℃） 陰性（ｈ
） 脱脂乳のペプトン化（３７°Ｃ） 陽性（ｉ
） セルロースの分解 陰性（ｊ）
生育温度範囲 ２２〜４２°Ｃ（ｋ）
炭素源の利用性（プリトノ・ム・ゴドリーブ寒天培
地） よ（利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ
−キシロース、Ｄ−マンニトール、ラフィノース、ｉ−
イノシトール やや利用する：プリシン 利用しない：Ｌ−アラビノース、シュークロース、ラム
ノース 細胞壁組成 ディアミノピメリン酸はＬＬ−型であり、アラビノース
、ガラクトースは認められない。
以上、半画の菌学的性状を要約すると次のとおりになる
。
。
細胞壁組成はＬＬ−ディアミノピメリン酸を有する。
また形態的には直線状またはループ状の胞子柄を形成し
、胞子の表面は平滑である。
、胞子の表面は平滑である。
培養上の諸性質としては、栄養菌糸は黄色を呈し、ｐＨ
の変化によって変化せず、気菌糸の色調は白色ないし淡
黄色を呈する。
の変化によって変化せず、気菌糸の色調は白色ないし淡
黄色を呈する。
可溶性色素およびメラニン色素は生産しない。
これらの結果から、本菌株はストレプトミセス属に属す
る菌種であり、プリドハムとトレスナーの分類（バーシ
ス・マニュアル・オブ・デタミネーテイブ・バクテリオ
ロジー第８版、１９７４年７４８〜８２９頁）によるホ
ワイトあるいはイエローシリーズに属する歯種と考えら
れる。
る菌種であり、プリドハムとトレスナーの分類（バーシ
ス・マニュアル・オブ・デタミネーテイブ・バクテリオ
ロジー第８版、１９７４年７４８〜８２９頁）によるホ
ワイトあるいはイエローシリーズに属する歯種と考えら
れる。
上記菌株の変異株も本発明の方法に使用することができ
る。
る。
その他本抗生物質生産能力を有するストンブトミセス属
に属する菌株も使用することができる。
に属する菌株も使用することができる。
培地としては、ストレプトミセス属の微生物の培養に適
する炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその他の栄
養物を程良く含有する合成培地または天然培地を使用す
ることができる。
する炭素源、窒素源、無機物、必要に応じてその他の栄
養物を程良く含有する合成培地または天然培地を使用す
ることができる。
培地に使用される炭素源、窒素源は使用菌株の利用可能
なものならいずれの種類でも良い。
なものならいずれの種類でも良い。
すなわち炭素源としては、たとえばグルコース、グリ七
ロール、フラクトース、マルトース、マンニット、キシ
ロース、ガラクトース、ラクトース、リボース、澱粉ま
たはその加水分解物等の種々の炭水化物が使用できる。
ロール、フラクトース、マルトース、マンニット、キシ
ロース、ガラクトース、ラクトース、リボース、澱粉ま
たはその加水分解物等の種々の炭水化物が使用できる。
その濃度は通常、培地に対して０．１〜５％（グルコー
ス換算）が好ましい。
ス換算）が好ましい。
またグルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各種有機
酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ
酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコール類
やノルマルパラフィン等各種の非芳香族系炭化水素、あ
るいは植物性もしくは動物性の各種油脂等も使用可能で
ある。
酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ
酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコール類
やノルマルパラフィン等各種の非芳香族系炭化水素、あ
るいは植物性もしくは動物性の各種油脂等も使用可能で
ある。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、燐酸
アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、ペプトン、ＮＺ−アミン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物
、フィツシュミールあるいはその消化物、大豆粉あるい
はその消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、輛加水分
解物等の含窒素有機物質、さらにはグリシン、グルタミ
ン酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。
アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、ペプトン、ＮＺ−アミン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物
、フィツシュミールあるいはその消化物、大豆粉あるい
はその消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、輛加水分
解物等の含窒素有機物質、さらにはグリシン、グルタミ
ン酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。
無機物としては各種燐酸塩、硫酸マグネシウム、食塩等
、さらに微量の重金属塩が使用される。
、さらに微量の重金属塩が使用される。
また栄養要求性を示す変異株を用いる場合に＋３当然そ
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この種の栄養素は天然物を含む培地を使用する
場合にはとくに添加を必要としない場合がある。
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この種の栄養素は天然物を含む培地を使用する
場合にはとくに添加を必要としない場合がある。
醗酵は振盪培養、または通気攪拌深部培養等の好気的条
件下でたとえばｐＨ５〜８で行なう。
件下でたとえばｐＨ５〜８で行なう。
培養温度は通常、２０〜４０℃である。
培養期間は通常１〜８日で、菌体内外に著量の抗生物質
ＡＭ３６０３が生成蓄積する。
ＡＭ３６０３が生成蓄積する。
培養終了後に培養物より抗生物質ＡＭ−３６０３をたと
えば次の方法で採取する。
えば次の方法で採取する。
培養物を遠心分離によりｒ液と沈澱物とに分離する。
Ｐ液からは活性炭、多孔性合成高分子樹脂、イオン交換
樹脂等に吸着させ、溶出させることにより抽出する。
樹脂等に吸着させ、溶出させることにより抽出する。
沈澱物からは酢酸エチルまたはノルマルブタノールや含
水アセトン等の有機溶媒で抽出する。
水アセトン等の有機溶媒で抽出する。
抽出物を適宜、濃縮乾固することによりＡＭ−３６０３
の粗粉末を得る。
の粗粉末を得る。
粗粉末はさらに、脂溶性物質の精製において通常用いら
れる公知の方法、たとえばシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー等の濃縮法、塩析法などを適宜組み合わせるこ
とにより精製される。
れる公知の方法、たとえばシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー等の濃縮法、塩析法などを適宜組み合わせるこ
とにより精製される。
これらの精製方法で得られる活性画分を濃縮乾固するこ
とにより抗生物質ＡＭ−３６０３の粉末を得ることがで
きる。
とにより抗生物質ＡＭ−３６０３の粉末を得ることがで
きる。
本発明において、ＡＭ−３６０３の検出定量は、ＡＭ−
３６０３に感受性を示す微生物（例、ピリキュラリア・
オリゼ、アスペルギルス・ニガー、スフレロチニア・シ
ネレア）を被検閑として用いる生物学的方法または呈色
反応を利用する化学的方法によって行なった。
３６０３に感受性を示す微生物（例、ピリキュラリア・
オリゼ、アスペルギルス・ニガー、スフレロチニア・シ
ネレア）を被検閑として用いる生物学的方法または呈色
反応を利用する化学的方法によって行なった。
この種の方法は公知である。実施例
ストレプトミセス・エスピー（ｓｐ）ＡＭ−３６０３株
（微工研菌寄第５６１９号（ＮＲＲＬ−１２５１８））
の斜面培養から１白金耳を１００ｍ１の種培地（グリセ
リン１．０％、グルコース０．２％、大豆粉ｉ、ｏ％、
食塩０．３％、ｐＨ７，０）を入れた５００ｍ１容の坂
ロフラスコに接種し、２７℃で２日間振盪培養して種培
養を得た。
（微工研菌寄第５６１９号（ＮＲＲＬ−１２５１８））
の斜面培養から１白金耳を１００ｍ１の種培地（グリセ
リン１．０％、グルコース０．２％、大豆粉ｉ、ｏ％、
食塩０．３％、ｐＨ７，０）を入れた５００ｍ１容の坂
ロフラスコに接種し、２７℃で２日間振盪培養して種培
養を得た。
この種培養１１を７０１の醗酵培地〔グリセリン（２％
）、グルコース（０，４％）、大豆粉（１，０％）、Ｎ
ａＣ１（０，３％）、ｐＨ７，０，ｌを入れた１００１
容ジャーファーメンタ−に接種し、２７℃で３日間通気
攪拌培養（通気量５０１／１ｎｉ！Ｌ、攪拌２００ｒ、
ｐ、ｍ、） を行なった。
）、グルコース（０，４％）、大豆粉（１，０％）、Ｎ
ａＣ１（０，３％）、ｐＨ７，０，ｌを入れた１００１
容ジャーファーメンタ−に接種し、２７℃で３日間通気
攪拌培養（通気量５０１／１ｎｉ！Ｌ、攪拌２００ｒ、
ｐ、ｍ、） を行なった。
培養液（６５Ａ）をカセイソーダでｐＨ７，０に調節し
、１８１の酢酸エチルで２回抽出した。
、１８１の酢酸エチルで２回抽出した。
酢酸エチル層を合わせ、減圧下で５００ｒｒＬｌまで濃
縮し、濃縮液を２度水洗後（各ＩＱＱｍＡ’）、硫酸ナ
トリウム１００Ｓ’を加えて脱水し、濃縮後、濃縮液の
１０倍量のノルマルヘキサンを加えることにより沈澱さ
せ、ＡＭ−３６０３の粗粉末（２５，４Ｆ）を得た。
縮し、濃縮液を２度水洗後（各ＩＱＱｍＡ’）、硫酸ナ
トリウム１００Ｓ’を加えて脱水し、濃縮後、濃縮液の
１０倍量のノルマルヘキサンを加えることにより沈澱さ
せ、ＡＭ−３６０３の粗粉末（２５，４Ｆ）を得た。
抗生物質ＡＭ−３６０３の粗粉末２５グを酢酸エチル（
５０ｍｌ）に溶解し、メルク社製シリカゲル（Ａｒｔ
７７３４）５０Ｐを加え、次に酢酸エチルを減圧下で
濃縮乾固した。
５０ｍｌ）に溶解し、メルク社製シリカゲル（Ａｒｔ
７７３４）５０Ｐを加え、次に酢酸エチルを減圧下で
濃縮乾固した。
クロロホルム（１，５７）に懸濁させたシリカゲル（メ
ルク、Ａｒｔ ７７３４ ５００ｆ）で調製したカラ
ム（１１）の上端に、上記の濃縮残渣をクロロホルム１
００７１／ｌ！に懸濁して添加した。
ルク、Ａｒｔ ７７３４ ５００ｆ）で調製したカラ
ム（１１）の上端に、上記の濃縮残渣をクロロホルム１
００７１／ｌ！に懸濁して添加した。
カラムを順次クロロホルム（２１）、クロロホルム／メ
タノール（３００：１、ｌ’）、クロロホルム／メタノ
ール（１００： １，３Ｊ）、クロロホルム／メタノー
ル（５０：１．５１）、クロロホルム／メタノール（２
０：１．２１）、クロロホルム／メタノール（５二１．
２７）で溶出し、１５〜２０ｒｕｌずつ分画した。
タノール（３００：１、ｌ’）、クロロホルム／メタノ
ール（１００： １，３Ｊ）、クロロホルム／メタノー
ル（５０：１．５１）、クロロホルム／メタノール（２
０：１．２１）、クロロホルム／メタノール（５二１．
２７）で溶出し、１５〜２０ｒｕｌずつ分画した。
活性画分（Ａ３５４〜８０３）を集めて減圧下で濃縮乾
固し、ＡＭ−３６０３を含む粉末（２０Ｓｌ’）を得た
。
固し、ＡＭ−３６０３を含む粉末（２０Ｓｌ’）を得た
。
この粉末１９グを酢酸エチル（５０ｍｌ）に溶解し、シ
リカゲル粉末（Ａｒｔ７７３４ ）４Ｍ’を加え、上記
カラムクロマトグラフィーのためのサンプルの前処理と
同様に濃縮乾固し、残渣をベンゼン８０ｍ１に懸濁した
。
リカゲル粉末（Ａｒｔ７７３４ ）４Ｍ’を加え、上記
カラムクロマトグラフィーのためのサンプルの前処理と
同様に濃縮乾固し、残渣をベンゼン８０ｍ１に懸濁した
。
これをベンゼンに懸濁したシリカゲル４００１で調製し
たカラム（８００ｍｌ）の上端に負荷した。
たカラム（８００ｍｌ）の上端に負荷した。
カラムヲＪｌｊＩ次ベンゼン（２１）、ベンゼン／アセ
トン（１ｏ ： １．３．５１）、ベンセス／アセトン
（６：１．３．５ ｌ）、ベンゼン／アセトン（３：１
．３１）、ベンゼン／アセトン（１：１．２１）で溶出
し、１５〜２０ｍ１ずつ分画した。
トン（１ｏ ： １．３．５１）、ベンセス／アセトン
（６：１．３．５ ｌ）、ベンゼン／アセトン（３：１
．３１）、ベンゼン／アセトン（１：１．２１）で溶出
し、１５〜２０ｍ１ずつ分画した。
活性画分（煮３２０〜５５８）を集めて濃縮し、濃縮液
の１０倍量のノルマルヘキサンを添加して粉末（１１？
）を得た。
の１０倍量のノルマルヘキサンを添加して粉末（１１？
）を得た。
この粉末３１をベンゼン１０ｒｕｌに溶解させ、分取用
高速液体クロマトグラフ（日本ウォーターズ、プレパッ
ク５００型）のカラム〔多孔性シリカ（８０ミクロン）
を充填した両塔カートリッジカラム（５，７ＣｆｒＬＸ
３０ＣＩ／Ｌ） 、ｌに負荷し、ベンゼン／アセトン
（４：１．５１）で溶出し、５０ｒＩＬｌずつ分画した
。
高速液体クロマトグラフ（日本ウォーターズ、プレパッ
ク５００型）のカラム〔多孔性シリカ（８０ミクロン）
を充填した両塔カートリッジカラム（５，７ＣｆｒＬＸ
３０ＣＩ／Ｌ） 、ｌに負荷し、ベンゼン／アセトン
（４：１．５１）で溶出し、５０ｒＩＬｌずつ分画した
。
各両分をシリカゲル薄層（０，２ｍｒｔｔ。Ａｒｔ５５
５４）にスポットし、ベンゼン／アセトン（１：１）で
展開後、硫酸を噴霧、加熱発色させ、単一スポットを与
える両分（＆１９〜３７を集めて濃縮乾固することによ
りＡＭ−３６０３の精製粉末１．４５ｆを得た。
５４）にスポットし、ベンゼン／アセトン（１：１）で
展開後、硫酸を噴霧、加熱発色させ、単一スポットを与
える両分（＆１９〜３７を集めて濃縮乾固することによ
りＡＭ−３６０３の精製粉末１．４５ｆを得た。
本試料の性質は本明細書第３頁１９行目から第６頁１６
行目までに記載した通りであった。
行目までに記載した通りであった。
第１図は抗生物質ＡＭ−３６０３の精製粉末の紫外線吸
収スペクトル（メタノール中）を示し、第２図は赤外線
吸収スペクトル（ＫＢｒ法）を示す。 第３図および第４図はそれ治れ抗生物質ＡＭ−３６０３
の１Ｈおよび１３Ｃ核磁気共鳴スヘクトルを示す。
収スペクトル（メタノール中）を示し、第２図は赤外線
吸収スペクトル（ＫＢｒ法）を示す。 第３図および第４図はそれ治れ抗生物質ＡＭ−３６０３
の１Ｈおよび１３Ｃ核磁気共鳴スヘクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次式（１）で表わされる抗生物質ＡＭ＝３６０３゜ ２ ストレプトミセス属に属し、かつ抗生物質ＡＭ−３
６０３生産能を有する微生物を培地に好気的に培養する
ことにより、抗生物質ＡＭ−３６０３を菌体内外に蓄積
させ、仁れを回収することを特徴とする特許請求の範囲
第１項記載の抗生物質ＡＭ−３６０３の製造方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55123283A JPS5823077B2 (ja) | 1980-09-05 | 1980-09-05 | 抗生物質ａｍ−３６０３およびその製造方法 |
| AU74798/81A AU536957B2 (en) | 1980-09-05 | 1981-09-01 | Antibiotic am-3603 |
| FR8116817A FR2489691A1 (fr) | 1980-09-05 | 1981-09-04 | Antibiotique am-3603 et procede pour sa production |
| US06/434,818 US4493845A (en) | 1980-09-05 | 1982-10-18 | Antibiotic AM-3603 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55123283A JPS5823077B2 (ja) | 1980-09-05 | 1980-09-05 | 抗生物質ａｍ−３６０３およびその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5748996A JPS5748996A (en) | 1982-03-20 |
| JPS5823077B2 true JPS5823077B2 (ja) | 1983-05-12 |
Family
ID=14856726
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55123283A Expired JPS5823077B2 (ja) | 1980-09-05 | 1980-09-05 | 抗生物質ａｍ−３６０３およびその製造方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4493845A (ja) |
| JP (1) | JPS5823077B2 (ja) |
| AU (1) | AU536957B2 (ja) |
| FR (1) | FR2489691A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6427686A (en) * | 1987-07-23 | 1989-01-30 | Hodogaya Chemical Co Ltd | Viscous substance removing agent |
| JP2875611B2 (ja) * | 1990-08-29 | 1999-03-31 | エーザイ株式会社 | ケイ酸カルシウム含有外用剤 |
| KR100385152B1 (ko) * | 2001-03-14 | 2003-05-23 | 씨제이 주식회사 | 카프레오마이신의 정제방법 |
| JP5030777B2 (ja) * | 2005-06-27 | 2012-09-19 | 日本化薬株式会社 | 生理活性物質ｎｋ１３６５０ｐ３、その製造法及び用途 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6015318B2 (ja) * | 1977-05-02 | 1985-04-18 | 明治製菓株式会社 | 新抗生物質ｓｆ−１９４２物質，その製造法およびそれを含有する抗ガン剤 |
-
1980
- 1980-09-05 JP JP55123283A patent/JPS5823077B2/ja not_active Expired
-
1981
- 1981-09-01 AU AU74798/81A patent/AU536957B2/en not_active Ceased
- 1981-09-04 FR FR8116817A patent/FR2489691A1/fr active Granted
-
1982
- 1982-10-18 US US06/434,818 patent/US4493845A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5748996A (en) | 1982-03-20 |
| AU7479881A (en) | 1982-03-11 |
| FR2489691A1 (fr) | 1982-03-12 |
| AU536957B2 (en) | 1984-05-31 |
| US4493845A (en) | 1985-01-15 |
| FR2489691B1 (ja) | 1985-01-18 |
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