JPS60215629A - 組織蛋白質ｐｐ↓２↓１およびその取得法 - Google Patents
組織蛋白質ｐｐ↓２↓１およびその取得法Info
- Publication number
- JPS60215629A JPS60215629A JP60055778A JP5577885A JPS60215629A JP S60215629 A JPS60215629 A JP S60215629A JP 60055778 A JP60055778 A JP 60055778A JP 5577885 A JP5577885 A JP 5577885A JP S60215629 A JPS60215629 A JP S60215629A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- proteins
- molecular weight
- enrichment
- precipitation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4715—Pregnancy proteins, e.g. placenta proteins, alpha-feto-protein, pregnancy specific beta glycoprotein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/689—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to pregnancy or the gonads
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＰＰ２１として表示される組織蛋白質ならびに
その取得法に関する。ＰＰ２１は組織および体液中にお
けるＰＰ２１の検出および測定に役立てられうる抗血清
の調製に使用されうる。ＰＰ２，の検出および測定は診
断上重畳である。これらはある種の器官の疾病診断、疾
病経過の監視または治療の制御に役立てられうる。
その取得法に関する。ＰＰ２１は組織および体液中にお
けるＰＰ２１の検出および測定に役立てられうる抗血清
の調製に使用されうる。ＰＰ２，の検出および測定は診
断上重畳である。これらはある種の器官の疾病診断、疾
病経過の監視または治療の制御に役立てられうる。
従来組織蛋白も含めた蛋白質は知られているが、下記Ｐ
Ｐ２１について記載される性質を有するものは何ら知ら
れていない。
Ｐ２１について記載される性質を有するものは何ら知ら
れていない。
本発明は下記ａ）〜ｆ）項すなわち、
ａ）β１−グロブリンの範囲内にある電気泳動移動度、
ｂ）等電点４．６±０．３、
Ｃ）沈降係数ｓ２０Ｗ５＝ｚ±０．２８、ｄ）超遠心話
中で測定された分子量５２，９００±６、２００、 ｅ）吸光率Ｅ１％ （ ２８０ｎｍ ） １ ０．５±
１．０およびｃｔｙｒ ｆ）炭水化物含量１９．２±５．２ ｙ７’Ｉ Ｏ Ｏ
ｔ （マンノース１．８±０，４タ／１ｏｏ５ｉ＋１
ガラクトース４，６±１．０ｆ／１００１、７コース１
．３±１１．３Ｆ／１［＋［ＩＰ、Ｎ−アセチル−グル
コサミン６．５±２．Ｏ ｆ／１ ０ ０ ｆ％Ｎ−ア
セチル−ノイラミン酸５．３±１．！Ｍ／１００Ｆ）、
を特徴とする蛋白質ＰＰ２１に関する。
中で測定された分子量５２，９００±６、２００、 ｅ）吸光率Ｅ１％ （ ２８０ｎｍ ） １ ０．５±
１．０およびｃｔｙｒ ｆ）炭水化物含量１９．２±５．２ ｙ７’Ｉ Ｏ Ｏ
ｔ （マンノース１．８±０，４タ／１ｏｏ５ｉ＋１
ガラクトース４，６±１．０ｆ／１００１、７コース１
．３±１１．３Ｆ／１［＋［ＩＰ、Ｎ−アセチル−グル
コサミン６．５±２．Ｏ ｆ／１ ０ ０ ｆ％Ｎ−ア
セチル−ノイラミン酸５．３±１．！Ｍ／１００Ｆ）、
を特徴とする蛋白質ＰＰ２１に関する。
ＰＰ２１のアミノ酸組成を下記の表に示す。
リジン ８．７５ ３．９１
ヒスチジン １． ５ ８ ６． ８ １アルギニン
２． ７ ５ ６． ０ ７アスパラキン酸 ９．５９
１．９７ スレオニン ３． ７ ３ ７． ２ ２セリン ７．
４ ３ ５． ９ ５ グルタミン酸 ＆ １ ６ ５． １ ５ゾロリ７ １
１．３４ ９．５６ グリシン ７． ０ １ １． ２ ５アラ二ン ４．
９８ ３．６２ シスチンｙ２５．５０ ０．８４ バリン ｌｌＮ４ １．４２ メチオニン ｏ．ｏｏ ｏ．ｏ。
２． ７ ５ ６． ０ ７アスパラキン酸 ９．５９
１．９７ スレオニン ３． ７ ３ ７． ２ ２セリン ７．
４ ３ ５． ９ ５ グルタミン酸 ＆ １ ６ ５． １ ５ゾロリ７ １
１．３４ ９．５６ グリシン ７． ０ １ １． ２ ５アラ二ン ４．
９８ ３．６２ シスチンｙ２５．５０ ０．８４ バリン ｌｌＮ４ １．４２ メチオニン ｏ．ｏｏ ｏ．ｏ。
イソロイシン ４．８６ ２．７８
ロイシン ５．４２ １０．３４
チロシン ５．０１ ５．０１
フェニルアラニン ５．５６ １．［ＪＯトリプトファ
ン ２．１２ １７．６５この組ｆＡ蛋白質の特徴的指
標を以下に説明する。
ン ２．１２ １７．６５この組ｆＡ蛋白質の特徴的指
標を以下に説明する。
電気泳動移動度はベックマン・インスツルメント（Ｂｅ
ｃｋｍａｎ工ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｏ ）社製のミクロゾ
ーン（Ｍｉｃｒｏｚｏｎθ）Ｒ２０ワ型装置を用いアセ
チルセルロース箔〔サルトリウス（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ
）社製品〕上ｐ８８．６のジエチルバルビッール酸ナ
トリウム緩衝液を使用し２て微修正で測定された。
ｃｋｍａｎ工ｎｓｔｒｕｍｅｎｔｏ ）社製のミクロゾ
ーン（Ｍｉｃｒｏｚｏｎθ）Ｒ２０ワ型装置を用いアセ
チルセルロース箔〔サルトリウス（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ
）社製品〕上ｐ８８．６のジエチルバルビッール酸ナ
トリウム緩衝液を使用し２て微修正で測定された。
等を点はストックホルムのエル・ケー・ビー（ＬＫＢ
）社製のカラム（４４［］ｍｇ虎用いて距１１足された
。アムフオリｙ （Ａｍｐｈｏｌｉｎ ）混合物し；ｎ
ｐｌ（４，０〜６．０を有した。
）社製のカラム（４４［］ｍｇ虎用いて距１１足された
。アムフオリｙ （Ａｍｐｈｏｌｉｎ ）混合物し；ｎ
ｐｌ（４，０〜６．０を有した。
沈降係数はベックマン社製の分析用超遠心器〔スピンコ
（Ｓｐｉｎｃｏ ）装置Ｅ型〕中においてダブルセクタ
ーセル中６０．００ ＯｒｐｍにてＵＶスキャンナー技
術を用いて２８０ｎｍで測定された。溶媒としては水が
用い、られた。蛋白質濃度しま０．２り／１０〇−であ
った。
（Ｓｐｉｎｃｏ ）装置Ｅ型〕中においてダブルセクタ
ーセル中６０．００ ＯｒｐｍにてＵＶスキャンナー技
術を用いて２８０ｎｍで測定された。溶媒としては水が
用い、られた。蛋白質濃度しま０．２り／１０〇−であ
った。
超遠心話中において分子量を測定するに（よ、沈降平衡
法が用いられた。その際蛋白質の濃度は光学濃度（０，
Ｄ、）約１．０にｆＡ整された。溶媒としては０．２モ
ル／ｌのＮａＣＬを含有する０、［Ｊ５モル／ｌのｇ４
敵塩経衝液（ｐＨ６，８）が用いられた。測定は９＊
ＯＤ Ｄ ｒｐｍでとり行われた。記録１光電スキヤン
ナーを使用してＵＶ−光学装置を用い２８００ｍで行わ
れた。
法が用いられた。その際蛋白質の濃度は光学濃度（０，
Ｄ、）約１．０にｆＡ整された。溶媒としては０．２モ
ル／ｌのＮａＣＬを含有する０、［Ｊ５モル／ｌのｇ４
敵塩経衝液（ｐＨ６，８）が用いられた。測定は９＊
ＯＤ Ｄ ｒｐｍでとり行われた。記録１光電スキヤン
ナーを使用してＵＶ−光学装置を用い２８００ｍで行わ
れた。
吸光率の測定には物質を蒸留水中に１ｆ！／Ｌの濃度ま
で溶解させた。
で溶解させた。
炭水化物の分析は下記のようにして実施された。すなわ
ち配糖体結合を加水分解後遊離された中性糖をボレート
複合体として陰イオン交換体カラムで分離し〔ワイ・シ
ー・リー（Ｙ、Ｃ，Ｌｅθ）氏他の［アナル・バイオケ
ム（Ａｎａ’１．Ｂｉ、ｏｃｈｅｍ、 ）ｊ第２７巻第
５６７頁（１９６９年〕参照〕、溶出液中にビシンコニ
ン酸第１銅試薬を混合することにより着色させ〔ケー・
モツノξ−（Ｋ、Ｍｏｐｐｅｒ ）およびエム−ギンド
ラ−（Ｍ、Ｇｉｎｄｌｅｒ）氏の［アナル・バイオケム
（Ａｎａｌ 、ＢｉｏＣｈｅｍ’、知力５６巻第４４０
頁（１９７３年〕参照］そして内部標準としてラムノー
スを使用して定耽的に測定した。
ち配糖体結合を加水分解後遊離された中性糖をボレート
複合体として陰イオン交換体カラムで分離し〔ワイ・シ
ー・リー（Ｙ、Ｃ，Ｌｅθ）氏他の［アナル・バイオケ
ム（Ａｎａ’１．Ｂｉ、ｏｃｈｅｍ、 ）ｊ第２７巻第
５６７頁（１９６９年〕参照〕、溶出液中にビシンコニ
ン酸第１銅試薬を混合することにより着色させ〔ケー・
モツノξ−（Ｋ、Ｍｏｐｐｅｒ ）およびエム−ギンド
ラ−（Ｍ、Ｇｉｎｄｌｅｒ）氏の［アナル・バイオケム
（Ａｎａｌ 、ＢｉｏＣｈｅｍ’、知力５６巻第４４０
頁（１９７３年〕参照］そして内部標準としてラムノー
スを使用して定耽的に測定した。
アミン糖はニンヒドリンとのその反応により検出されそ
して測定された。ノイラミン酸含量はウオレン（Ｗａｒ
ｒｅｎ ）氏による方法〔［メソツズ・イア −工７ザ
イモロジー（Ｍｅ ｔｈ ｏ ｄ Ｓｉｎ Ｋｎ＋ｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ月第■巻第４６３〜４知力頁（１９６３年
）参照〕を用いて測定された。
して測定された。ノイラミン酸含量はウオレン（Ｗａｒ
ｒｅｎ ）氏による方法〔［メソツズ・イア −工７ザ
イモロジー（Ｍｅ ｔｈ ｏ ｄ Ｓｉｎ Ｋｎ＋ｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ月第■巻第４６３〜４知力頁（１９６３年
）参照〕を用いて測定された。
アミノ酸分析はニス・ムーブ（ｓ 、Ｍｏｏｒθ）氏等
の「アナＡ／・ケム（Ａｎａｌ 、 Ｃｈｅｍ 、知力
３０巻第１１８５頁（１９５８年）に記載された方法に
従い、ベックマン社（Ｆｉｒｍａ、 Ｂｅｃｋｍａｎ）
製の液体クロマトグラフィー用マルチクローム（Ｍｕｌ
ｔｉｃｈｒｏｍ）Ｂを使用して実施された。捧−シスチ
ンは蛋白質を過蟻酸を用いて酸化し〔［アナル・ケム（
Ａｎａ’ｌ。
の「アナＡ／・ケム（Ａｎａｌ 、 Ｃｈｅｍ 、知力
３０巻第１１８５頁（１９５８年）に記載された方法に
従い、ベックマン社（Ｆｉｒｍａ、 Ｂｅｃｋｍａｎ）
製の液体クロマトグラフィー用マルチクローム（Ｍｕｌ
ｔｉｃｈｒｏｍ）Ｂを使用して実施された。捧−シスチ
ンは蛋白質を過蟻酸を用いて酸化し〔［アナル・ケム（
Ａｎａ’ｌ。
Ｃｈｅｍ、知力３０巻第１１８５頁（１９５８年）参照
］そして次にクロマトグラフィー〔［ジエー・パイオル
・ケム（、Ｔ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、）Ｊ第２６８巻第
２３５頁（１９６３年）参照〕した後システィン酸とし
て測定された。トリプトファン含量はエッチ・エーテル
ホフ（Ｈ，ＥｃＬθ１ｈｏｃｈ）氏の「バイオケミスト
リ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ月第６巻第１９４８頁（
１９６７年）記載の方法により直接側光測定された。
］そして次にクロマトグラフィー〔［ジエー・パイオル
・ケム（、Ｔ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、）Ｊ第２６８巻第
２３５頁（１９６３年）参照〕した後システィン酸とし
て測定された。トリプトファン含量はエッチ・エーテル
ホフ（Ｈ，ＥｃＬθ１ｈｏｃｈ）氏の「バイオケミスト
リ（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ月第６巻第１９４８頁（
１９６７年）記載の方法により直接側光測定された。
種々の人間の器官からの抽出物を調有すると、ＰＰ２１
は胎盤、胃、腸管（結腸、空腸）、膀胱ならびに牌臓中
において検出できた。心臓、肺、肝臓、皮膚、腎臓、副
腎および子宮のような人間の他の器官からの抽出物はこ
の蛋白質を含有しないかまたは痕跡しか含有しなかった
。
は胎盤、胃、腸管（結腸、空腸）、膀胱ならびに牌臓中
において検出できた。心臓、肺、肝臓、皮膚、腎臓、副
腎および子宮のような人間の他の器官からの抽出物はこ
の蛋白質を含有しないかまたは痕跡しか含有しなかった
。
ＰＰ２１を単離するにはこの蛋白質が存在する人間の器
官が用いられうる。これには特に多量に得られそしてこ
の蛋白質を充分に高濃度に含有する成熟した人間の胎盤
が適当である。成熟した人間の胎盤（６ＤＯｒ）から生
理学的塩浴液を用いて平均７１ｎｇのＰＰ２１が抽出さ
れうる。
官が用いられうる。これには特に多量に得られそしてこ
の蛋白質を充分に高濃度に含有する成熟した人間の胎盤
が適当である。成熟した人間の胎盤（６ＤＯｒ）から生
理学的塩浴液を用いて平均７１ｎｇのＰＰ２１が抽出さ
れうる。
免疫化学的にＰＰ２１と同様の挙動をする抗原はその他
に人間のｊ冶盤のいわゆるＭＴ’２蛋白質の成分である
。ＭＰ２蛋白質は胎盤中において明らかに膜と会合して
いる複雑な組成をした組織蛋白質の群である。
に人間のｊ冶盤のいわゆるＭＴ’２蛋白質の成分である
。ＭＰ２蛋白質は胎盤中において明らかに膜と会合して
いる複雑な組成をした組織蛋白質の群である。
これらは生理学門塩済液で洗浄後胎盤の不溶性組織残留
物を可溶化剤例えば非イオン系洗浄剤トライトン（Ｔｒ
ｉｔｏｎ町Ｘ−１００で処理することにより得られる。
物を可溶化剤例えば非イオン系洗浄剤トライトン（Ｔｒ
ｉｔｏｎ町Ｘ−１００で処理することにより得られる。
それらの単離および特性化は１９８６年９月２５日出願
の西ドイツ特許出願第３３３４４０５号に記載されてい
る。ＭＰ２蛋白質は２１Ｊ Ｏ，０００−ｆ、０［］０
．Ｏｆ］０以上の分子量を何する。それらの構成にはそ
れらの抗原決定基が相異する少くとも合計４個の異なる
成分が関与している。これら成分のうちのＣとして示さ
れる成分は本出願に記載される溶性組織蛋白質ＰＰ２＋
と免疫化学的に区別できない。
の西ドイツ特許出願第３３３４４０５号に記載されてい
る。ＭＰ２蛋白質は２１Ｊ Ｏ，０００−ｆ、０［］０
．Ｏｆ］０以上の分子量を何する。それらの構成にはそ
れらの抗原決定基が相異する少くとも合計４個の異なる
成分が関与している。これら成分のうちのＣとして示さ
れる成分は本出願に記載される溶性組織蛋白質ＰＰ２＋
と免疫化学的に区別できない。
ｐｐ２１は下記の性質を有し、これらの性質はそれらに
対応する措置を講することによりその単離法に使用され
うる。
対応する措置を講することによりその単離法に使用され
うる。
（１） 硫酸アンモニウムを用いてｐ）（６〜８および
６０〜６０％飽和で水溶液から沈殿する。
６０〜６０％飽和で水溶液から沈殿する。
（２）水溶性アクリジン塩基例七ば２−エトキシ−６，
９−ジアミノアクリジン乳酸塩を用いてｐＨ７〜９およ
び塩基濃度４〜８７／ｌで沈殿し、これに対１．塩基濃
度４２／ｌまたはそれより小さい場合はｐＨ６，０で全
くまたはほとんど沈殿しない。
９−ジアミノアクリジン乳酸塩を用いてｐＨ７〜９およ
び塩基濃度４〜８７／ｌで沈殿し、これに対１．塩基濃
度４２／ｌまたはそれより小さい場合はｐＨ６，０で全
くまたはほとんど沈殿しない。
（３）それが溶解されている希塩溶液例えば１０〜２ｏ
ｙ７ｔのＮａＣＡ浴液にエタノールを添加すると、ｐＨ
７でアルコール濃度２００ｍ１／ｌまでは大部分が上澄
み液中に留まる。
ｙ７ｔのＮａＣＡ浴液にエタノールを添加すると、ｐＨ
７でアルコール濃度２００ｍ１／ｌまでは大部分が上澄
み液中に留まる。
（４）電気泳動による分離に際してｐＨ７〜９でβ１−
グロブリンの範囲内に見出される。
グロブリンの範囲内に見出される。
（５）等電集束においてｐＨ４，３〜４．９主袂量はｐ
Ｈ４，４〜４．８で出現する。
Ｈ４，４〜４．８で出現する。
（６） セファデックス（ｓｅｐＨａａｅｘ ）ｏを用
いるゲル濾過において分子量４０． （） ［１０〜１
００．Ｄυ０を有する蛋白質と同様の挙動をする。
いるゲル濾過において分子量４０． （） ［１０〜１
００．Ｄυ０を有する蛋白質と同様の挙動をする。
（７） 弱塩基性イオンメ換体例えばＤＢＡＥ−セルロ
ースまたはＤＥＡＥ−セファテックスに伝導本釣Ｏ〜２
ｍＳおよびｐ）（約７〜？で結合しそして比較的濃い塩
浴液例えば１０〜５０ｆ／ｌのＮａＣｔ浴液で浴ＫＷさ
れうる。
ースまたはＤＥＡＥ−セファテックスに伝導本釣Ｏ〜２
ｍＳおよびｐ）（約７〜？で結合しそして比較的濃い塩
浴液例えば１０〜５０ｆ／ｌのＮａＣｔ浴液で浴ＫＷさ
れうる。
（８） 水浴液から免役吸着により富化されそして単離
さえうめ。
さえうめ。
それゆえ本発明はまたこの蛋白質ＰＰ２１を含有する器
官から希塩溶液または緩衝溶液を用いて得られた抽出物
を下記ａ）〜ｈ）項記載の処置、すなわち ａ） ｐＨ６〜８および３０〜６０％飽和における硫酸
アンモニウムを用いる蛋白ｆｆ（ＰＰ２１の沈〆゛Ｙ、
ｂ）ｐＨ６および塩基ｖＡ度４！／／ｌまたはそれ以下
における水溶性アクリジン塩基を用いる随伴蛋白質の分
能またはｐＨ７〜９および塩基濃度４〜８７／ｌにおけ
る水Ｍイ生アクリジン塩基を用いる蛋白質ＰＰ２１の沈
ｊベク、 ｃ） ｐＨ７で２１ＪＯｍＡｌｔまでのエタノールを添
加することによる随伴蛋白質の分離、 ｄ）β１−グロブリンの範囲内にある移動度を有する蛋
白フラクションが得られる調製用ゾーン電気泳動、 ｅ） ｐＨ４，４へ４．８の蛋白質が得られる等′亀集
束、ｆ）分子量４０．ＯＤＤ〜ｌＬｉ０．ＯＤＤを有す
る蛋白質が得られるゲル濾過または限外濾過、 ｇ）弱塩基性イオン交挨体・＼の吸着および蛋白質ＰＰ
２１の溶離、 ｈ）免疫吸着的富化、 の１釉類またはそれ以上にかけることを特徴とするＰＰ
２１の取得または富化法にも関する。
官から希塩溶液または緩衝溶液を用いて得られた抽出物
を下記ａ）〜ｈ）項記載の処置、すなわち ａ） ｐＨ６〜８および３０〜６０％飽和における硫酸
アンモニウムを用いる蛋白ｆｆ（ＰＰ２１の沈〆゛Ｙ、
ｂ）ｐＨ６および塩基ｖＡ度４！／／ｌまたはそれ以下
における水溶性アクリジン塩基を用いる随伴蛋白質の分
能またはｐＨ７〜９および塩基濃度４〜８７／ｌにおけ
る水Ｍイ生アクリジン塩基を用いる蛋白質ＰＰ２１の沈
ｊベク、 ｃ） ｐＨ７で２１ＪＯｍＡｌｔまでのエタノールを添
加することによる随伴蛋白質の分離、 ｄ）β１−グロブリンの範囲内にある移動度を有する蛋
白フラクションが得られる調製用ゾーン電気泳動、 ｅ） ｐＨ４，４へ４．８の蛋白質が得られる等′亀集
束、ｆ）分子量４０．ＯＤＤ〜ｌＬｉ０．ＯＤＤを有す
る蛋白質が得られるゲル濾過または限外濾過、 ｇ）弱塩基性イオン交挨体・＼の吸着および蛋白質ＰＰ
２１の溶離、 ｈ）免疫吸着的富化、 の１釉類またはそれ以上にかけることを特徴とするＰＰ
２１の取得または富化法にも関する。
硫酸アンモニウムと並んで勿論他の調製的生化学に慣用
に用いられる中性塩もＰＰ２１の沈殿に使用されうる。
に用いられる中性塩もＰＰ２１の沈殿に使用されうる。
アクリジン塩基と並んで蛋白質の分別について知られて
いるようなキノリン塩基の水溶性誘導体も本発明による
方法の範囲内において使用されうる。その電気泳動上の
挙動、その等電点またはその分子量に相応して、前記し
た性質を有する蛋白質を他の蛋白質から分離するのに適
した他の措置もこの蛋白質の単離に用いられうる。この
目的には調製用電気泳動、等電集束、ゲル濾過、ゲルク
ロマトグラフィーまたは限外沖過なる程々の方法または
弱塩基性イオン交換体に結合しそしてそこから再び溶離
されうるＰＰ２１の性質も用いられうる。
いるようなキノリン塩基の水溶性誘導体も本発明による
方法の範囲内において使用されうる。その電気泳動上の
挙動、その等電点またはその分子量に相応して、前記し
た性質を有する蛋白質を他の蛋白質から分離するのに適
した他の措置もこの蛋白質の単離に用いられうる。この
目的には調製用電気泳動、等電集束、ゲル濾過、ゲルク
ロマトグラフィーまたは限外沖過なる程々の方法または
弱塩基性イオン交換体に結合しそしてそこから再び溶離
されうるＰＰ２１の性質も用いられうる。
ＰＰ２１の富化または他の蛋白質からのこの蛋白質の分
離をもたらす前記した処置の好都合な組み合せによりＰ
Ｐ２１が単離されうる。
離をもたらす前記した処置の好都合な組み合せによりＰ
Ｐ２１が単離されうる。
それゆえ本発明はＰＰ２１富化のための個々の工程およ
び富化のための操作の組み合せにより得られるＰＰ２１
の精製法に関するものと見做される。
び富化のための操作の組み合せにより得られるＰＰ２１
の精製法に関するものと見做される。
実施例に示されるＰＰ２１の富化および単離のための工
程はすべて決して強制的なものではなくそしてまたそこ
に記載される順序で実施されねばならぬものでもない。
程はすべて決して強制的なものではなくそしてまたそこ
に記載される順序で実施されねばならぬものでもない。
免疫吸着には人間の胎盤からの抽出物が直接使用できた
。しかしながら胎盤抽出物中におけるｐｐ２．ｇ度が比
較的低いので、蛋白質の比較的大規模な分別に通する方
法、例えば中性塩または有機陽イオンを用いる分別沈殿
によりあるいはゲル沖過によりあるいはイオン交換クロ
マトグラフィーにより抽出物を予め分別して蛋白質ＰＰ
２１をはじめに特異的に富化することが好都合である。
。しかしながら胎盤抽出物中におけるｐｐ２．ｇ度が比
較的低いので、蛋白質の比較的大規模な分別に通する方
法、例えば中性塩または有機陽イオンを用いる分別沈殿
によりあるいはゲル沖過によりあるいはイオン交換クロ
マトグラフィーにより抽出物を予め分別して蛋白質ＰＰ
２１をはじめに特異的に富化することが好都合である。
免疫吸着の段階も他の分離法例えば調製的電気泳動また
は等電集束を用いることにより置換できる。
は等電集束を用いることにより置換できる。
単離の最終段階におけるＰＰ２１の高度精製にはウルト
ロゲル（Ｕｌｔｒｏｇｅｌ（９）ＡｃＡ ５４でのゲル
（濾過および逆免疫吸着が用いられうろことが判明した
。
ロゲル（Ｕｌｔｒｏｇｅｌ（９）ＡｃＡ ５４でのゲル
（濾過および逆免疫吸着が用いられうろことが判明した
。
例えば分離操作からのフラクション中においてＰＰ７１
を検出および測定するには、前記したパラメーターと並
んでまた免疫化学的方法も役立てられうる。何故ならｐ
ｐ２１は抗原性質を有するからである。
を検出および測定するには、前記したパラメーターと並
んでまた免疫化学的方法も役立てられうる。何故ならｐ
ｐ２１は抗原性質を有するからである。
ＰＰ２１の免疫化学的検出に適する抗血清は胎盤の膜と
会合した蛋白９ｍｐ２で家兎を免疫することによりはじ
めて得られた。その際得られた抗血清はＭＰ２蛋白質中
の少くとも４種類の異なる抗原成分（Ａ、Ｂ％Ｃおよび
Ｄ）に対する抗体な含有した。成分Ｃに対する抗体はま
た胎盤の可溶性蛋白質すなわち本発明に記載の組織蛋白
質ＰＰ２１でも沈殿することが見出された。
会合した蛋白９ｍｐ２で家兎を免疫することによりはじ
めて得られた。その際得られた抗血清はＭＰ２蛋白質中
の少くとも４種類の異なる抗原成分（Ａ、Ｂ％Ｃおよび
Ｄ）に対する抗体な含有した。成分Ｃに対する抗体はま
た胎盤の可溶性蛋白質すなわち本発明に記載の組織蛋白
質ＰＰ２１でも沈殿することが見出された。
抗ＭＰ７家兎血清は一方では胎盤の可溶性蛋白質フラク
ション中のＰＰ２ｊの免疫化学的検出に、もう一方では
可溶性胎盤蛋白質フラクションからのＰＰ２１の富化お
よび単離のための免疫吸着剤の調製に用いられうる。
ション中のＰＰ２ｊの免疫化学的検出に、もう一方では
可溶性胎盤蛋白質フラクションからのＰＰ２１の富化お
よび単離のための免疫吸着剤の調製に用いられうる。
これは、ＭＰ２蛋白質の構成に関与している他の抗原成
分が可溶性胎盤蛋白質フラクション中ニ全＜かまたはあ
っても痕跡にしか存在しないゆえ可能である。
分が可溶性胎盤蛋白質フラクション中ニ全＜かまたはあ
っても痕跡にしか存在しないゆえ可能である。
本発明記載の方法により得られるＭ製されたＰＰ２＋を
用いて知られた方法で動物を免疫することにより単一特
異的な抗血清が調製されうる。
用いて知られた方法で動物を免疫することにより単一特
異的な抗血清が調製されうる。
ＰＰ２１を免疫学的に検出するにはオウヒターロニイ（
Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ ） Ｋよるゲル拡散技法〔シ
ュルソエ（Ｓｃｈｕｌｔｚｏ ）およＯ゛ヘアマンス
Ｉ−ｉｅｌ−１ｅｒｅ ）両氏の［モレキュラー・バイ
オロジー・オブ・ヒユーマン・プロテインズ（Ｍｏｌｏ
ｃｕｌａ、ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙｅｆ Ｈｕｍａｎ Ｊ’
ｒｏじｅｉｎＪＪ第１巻１第１置１６４免＆！定のよう
なより感度の良い方法も用いられうる。
Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ ） Ｋよるゲル拡散技法〔シ
ュルソエ（Ｓｃｈｕｌｔｚｏ ）およＯ゛ヘアマンス
Ｉ−ｉｅｌ−１ｅｒｅ ）両氏の［モレキュラー・バイ
オロジー・オブ・ヒユーマン・プロテインズ（Ｍｏｌｏ
ｃｕｌａ、ｒ Ｂｉｏｌｏｇｙｅｆ Ｈｕｍａｎ Ｊ’
ｒｏじｅｉｎＪＪ第１巻１第１置１６４免＆！定のよう
なより感度の良い方法も用いられうる。
ＰＰ２１の検出および測定は診断上重要である。
ＰＰ２１はある種の器官中にのみ比較的高濃度に存在す
る組織蛋白質である。それら器官の疾患においては、細
胞破壊の増大により患者の血清中または他の体液中にお
１゛るこの組織蛋白質ｐｐ２。
る組織蛋白質である。それら器官の疾患においては、細
胞破壊の増大により患者の血清中または他の体液中にお
１゛るこの組織蛋白質ｐｐ２。
の濃度は正常値を越えて上昇しうる。それゆえ体液中に
おけるＰＰ２１の検出および測定はそれら器官の疾病の
診断にとってまたは疾病経過の監視のためおよび治療制
御のためのマーカーとして使用されうる。
おけるＰＰ２１の検出および測定はそれら器官の疾病の
診断にとってまたは疾病経過の監視のためおよび治療制
御のためのマーカーとして使用されうる。
それゆえＰＰ２１はｐ：ｐ２１の検出および測定に役立
てられうる抗血清のＪ４製にも使用されうる。
てられうる抗血清のＪ４製にも使用されうる。
下記の実施例により本発明を説明する。
実施例 １
Ａ）胎盤の抽出およびアクリジン誘導体および硫酸アン
モニウムを用いる抽出物の分別冷凍された成熟した人間
の胎盤１，０００Ｋｒを切断混合機中で粉砕しそして４
ｑ７ｔの食塩浴液１、０００ｔを用いて抽出した。この
抽出液から遠心分離により組織残留物を分離したのち２
００ｍｅ／を酢酸溶液を用いてｐｐ ６． ［Ｊに．；
Ｉ！ｉＩ整しそして攪拌下に２−エトキシ−６、９−ジ
アミノアクリジン−ラクテート（ヘキスト（ １’ｌｏ
ｅ ａｈ ｅｎ社製品）の３ ０ ｆｌ／ｌ ｉ液２０
０ｔを加えた。沈殿を遠心分離により分離しそして捨工
た。上澄み液に１ｏ７／ｌのベントナイトＡ〔エルブス
レー・アンド・カンパ＝ − （ｌｎｒｂｓｌ″６ｈ
＆Ｃｏ．）、カイセンハイム（［）ｅｉｏｅｎｈｅｉｍ
）／ライン（Ｒｈｏｉｎ））を加えそして２ Ｎ Ｎａ
．ＯＨの添加によりｐＨ ７． ０にＴｈｊ ＆しそし
て渥廼した。り・敵に攪拌下に６ｏｕｙ７ｔのＩＡ酸ア
ンモニウムを徐々に加えた。その際胎盤蛋白質ＰＰ２１
が他の蛋白質と一緒に沈殿した。沈殿を渥過した。以下
にフラクションＡとして表示される湿ったベースト約１
２ｙ４が得られた。
モニウムを用いる抽出物の分別冷凍された成熟した人間
の胎盤１，０００Ｋｒを切断混合機中で粉砕しそして４
ｑ７ｔの食塩浴液１、０００ｔを用いて抽出した。この
抽出液から遠心分離により組織残留物を分離したのち２
００ｍｅ／を酢酸溶液を用いてｐｐ ６． ［Ｊに．；
Ｉ！ｉＩ整しそして攪拌下に２−エトキシ−６、９−ジ
アミノアクリジン−ラクテート（ヘキスト（ １’ｌｏ
ｅ ａｈ ｅｎ社製品）の３ ０ ｆｌ／ｌ ｉ液２０
０ｔを加えた。沈殿を遠心分離により分離しそして捨工
た。上澄み液に１ｏ７／ｌのベントナイトＡ〔エルブス
レー・アンド・カンパ＝ − （ｌｎｒｂｓｌ″６ｈ
＆Ｃｏ．）、カイセンハイム（［）ｅｉｏｅｎｈｅｉｍ
）／ライン（Ｒｈｏｉｎ））を加えそして２ Ｎ Ｎａ
．ＯＨの添加によりｐＨ ７． ０にＴｈｊ ＆しそし
て渥廼した。り・敵に攪拌下に６ｏｕｙ７ｔのＩＡ酸ア
ンモニウムを徐々に加えた。その際胎盤蛋白質ＰＰ２１
が他の蛋白質と一緒に沈殿した。沈殿を渥過した。以下
にフラクションＡとして表示される湿ったベースト約１
２ｙ４が得られた。
Ｂ）セファラックス（Ｓｅｐｂａｄｅｘ ） Ｇ −
１ ５ ０でのゲルσｊＪｈ フラクションＡ５ＤＯＰを約４ ０ ０ ｍｌの水に俗
解さぜそして１キル／ｌのＮａ ＣＬおよび１１／ｌの
”””ｓ ’ｋ ３イ１するｕ． ｉモル／ｌのトリス
−）ｉｃ７緩衝液（ ｐＩ４８． ０ ） （康イ１シ
■溶液Ｉｌ）で透析した。蛋白質を含有する溶液をセフ
ァデックスＧ− １ ５０を充填したカラムＣ２０Ｘ１
００ｃｒｎ）に加えそしてゲル濾過した。俗離には１モ
ル／ Ｌ Ｏ） ＮａＣｔおよびｉ ｙ７ｔのＮａＪを
含有するｐＨ８のｏ．１−ｅルｉｔトリス−ＨＣＬ緩価
液（６衝浴液ｌｌ）が用いられた。溶出液はオウヒター
ロ二一（○ｕｃｈｔｅ工１ｏｎｙＪによるゲル拡散試験
において以児の抗ＪＡＰ２皿清を用いＰＰ２１について
ｇ．査した。ＰＰ２，を比較的大量に含イイするフラク
ション（分子量４ ０， ０ ０ ０〜１００、０００
）を集めた。続イテ３ ０ ０ ｆ／ ｔ （’） 固
形硫酸アンモニウムを添加することにより蛋白質を沈殿
させた。この沈殿を水に俗解させそして緩衝溶液■で透
析した（フラクションＢ）。
１ ５ ０でのゲルσｊＪｈ フラクションＡ５ＤＯＰを約４ ０ ０ ｍｌの水に俗
解さぜそして１キル／ｌのＮａ ＣＬおよび１１／ｌの
”””ｓ ’ｋ ３イ１するｕ． ｉモル／ｌのトリス
−）ｉｃ７緩衝液（ ｐＩ４８． ０ ） （康イ１シ
■溶液Ｉｌ）で透析した。蛋白質を含有する溶液をセフ
ァデックスＧ− １ ５０を充填したカラムＣ２０Ｘ１
００ｃｒｎ）に加えそしてゲル濾過した。俗離には１モ
ル／ Ｌ Ｏ） ＮａＣｔおよびｉ ｙ７ｔのＮａＪを
含有するｐＨ８のｏ．１−ｅルｉｔトリス−ＨＣＬ緩価
液（６衝浴液ｌｌ）が用いられた。溶出液はオウヒター
ロ二一（○ｕｃｈｔｅ工１ｏｎｙＪによるゲル拡散試験
において以児の抗ＪＡＰ２皿清を用いＰＰ２１について
ｇ．査した。ＰＰ２，を比較的大量に含イイするフラク
ション（分子量４ ０， ０ ０ ０〜１００、０００
）を集めた。続イテ３ ０ ０ ｆ／ ｔ （’） 固
形硫酸アンモニウムを添加することにより蛋白質を沈殿
させた。この沈殿を水に俗解させそして緩衝溶液■で透
析した（フラクションＢ）。
Ｃ）免疫吸着によるＰＰ２１の富化
１）家兎の抗も（Ｐ２血清の調製
ＰＰ２１に対する抗体の取得
ＭＰ２蛋白質（西ドイツ特許出願第６３ ３／ｌ ４０
５号参照）の高分子フラジとヨン（沈降係数約２Ｏ Ｓ
またはそれ以上〕を用いて坂宛を免疫することによりＰ
Ｐ ２１に対する抗体を含有する抗簡清が得られた。免
疫肱与はアジュバントとして水１２化アルミニウムを用
い６週間にわたり遂行されそして下記のようにして実施
された。高分子ＭＰ２７ラク７ヨンを生理食塩溶液中に
溶解させ（濃度口、０６’７Ｆ／３ｍＩ！、）そして水
酸化７／ｌ／ミニウムを添加して１ヒ９１押して懸濁液
となす。家兎に連続する５日間１匹当り懸濁液３ ｍｅ
中の蛋白質０．０６ｍｇずつを静脈注射［〜だ。次に９
日間の休止をおいた。次に再び連続する５日間上記した
量の抗原で免疫し、再び９日間の休止をおぎそ（２て終
りにもう一回連続５日間各０．０６ηずつの抗原を注射
した。新たに７〜９日間の待機時間をおいたのち動物か
ら採血した。血液が凝固したのち血餅から血清を去り分
けて取得した。
５号参照）の高分子フラジとヨン（沈降係数約２Ｏ Ｓ
またはそれ以上〕を用いて坂宛を免疫することによりＰ
Ｐ ２１に対する抗体を含有する抗簡清が得られた。免
疫肱与はアジュバントとして水１２化アルミニウムを用
い６週間にわたり遂行されそして下記のようにして実施
された。高分子ＭＰ２７ラク７ヨンを生理食塩溶液中に
溶解させ（濃度口、０６’７Ｆ／３ｍＩ！、）そして水
酸化７／ｌ／ミニウムを添加して１ヒ９１押して懸濁液
となす。家兎に連続する５日間１匹当り懸濁液３ ｍｅ
中の蛋白質０．０６ｍｇずつを静脈注射［〜だ。次に９
日間の休止をおいた。次に再び連続する５日間上記した
量の抗原で免疫し、再び９日間の休止をおぎそ（２て終
りにもう一回連続５日間各０．０６ηずつの抗原を注射
した。新たに７〜９日間の待機時間をおいたのち動物か
ら採血した。血液が凝固したのち血餅から血清を去り分
けて取得した。
２）免疫吸着剤の調製
家兎の抗Ｍｉ’２血清５００ｍ１を０．０２モル／を燐
酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）で透析しそして免疫グロブリ
ンを分６０するためにＤＩＡＩ−セルロースでクロマト
グラフ・イーした。その除免疫グロブリンはＤＥＡＦ−
セルロースに妨げられずに横切って移動し、一方残りの
血清蛋白質は大部分がＤＥＡＥ−セルロースに吸治され
た。操作（蛋白質４７８９）における免疫グロブリンフ
ラクションを次にブロムシアン５９．９ ｔを用いて活
性化したビート形ノ’ｆ’Ｊ別に精製されたアガロース
〔スウェーデン、ウプサラのファルマシア（Ｐｈａｒｍ
ａ、ｃｉａ ）社製品、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏ
ＥＮｅ■）４Ｂ：］ ４７Ｅｌと反応させそして担体（
（共有結合させた。この方法は例えばアキセン（Ａｘｅ
ｎ）氏他により「ネーチュア（Ｎａ、ｔｕｒθ月第２１
４巻第１６ｏ２頁（１９６７年）に記載されている。こ
の方法で調製された免疫吸滝゛剤を用いて蛋白質ｐｐ２
＋をその溶液特にＰＰ２１が富化された胎盤フラクショ
ンがら単離できた。
酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）で透析しそして免疫グロブリ
ンを分６０するためにＤＩＡＩ−セルロースでクロマト
グラフ・イーした。その除免疫グロブリンはＤＥＡＦ−
セルロースに妨げられずに横切って移動し、一方残りの
血清蛋白質は大部分がＤＥＡＥ−セルロースに吸治され
た。操作（蛋白質４７８９）における免疫グロブリンフ
ラクションを次にブロムシアン５９．９ ｔを用いて活
性化したビート形ノ’ｆ’Ｊ別に精製されたアガロース
〔スウェーデン、ウプサラのファルマシア（Ｐｈａｒｍ
ａ、ｃｉａ ）社製品、セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏ
ＥＮｅ■）４Ｂ：］ ４７Ｅｌと反応させそして担体（
（共有結合させた。この方法は例えばアキセン（Ａｘｅ
ｎ）氏他により「ネーチュア（Ｎａ、ｔｕｒθ月第２１
４巻第１６ｏ２頁（１９６７年）に記載されている。こ
の方法で調製された免疫吸滝゛剤を用いて蛋白質ｐｐ２
＋をその溶液特にＰＰ２１が富化された胎盤フラクショ
ンがら単離できた。
３）免疫吸着の実施
免疫吸着剤を緩衝溶液［ｉＫ懸濁させ、クロマトグラフ
ィー用カラム（５，５Ｘ２Ｄａｎ）に充填しそして緩衝
溶液■で洗った。次にフラクションＢの半量をカラムに
適用するとその際ＰＰ２１が免疫吸着的に結合された。
ィー用カラム（５，５Ｘ２Ｄａｎ）に充填しそして緩衝
溶液■で洗った。次にフラクションＢの半量をカラムに
適用するとその際ＰＰ２１が免疫吸着的に結合された。
このカラムをｅ衝溶液■で充分に洗浄した。次に吸着さ
れた蛋白質を６モル／ｌの尿素浴液約６［１０ｒｎＩＶ
を用いてカラムがら溶離させた。ＰＰ、１を含有する溶
出液を緩衝溶液ｎで透析しそして限外濾過器を用いて約
１０ｍ１まで濃縮した。収量は１回の吸着当りＰＰ７１
約１０〜であった。
れた蛋白質を６モル／ｌの尿素浴液約６［１０ｒｎＩＶ
を用いてカラムがら溶離させた。ＰＰ、１を含有する溶
出液を緩衝溶液ｎで透析しそして限外濾過器を用いて約
１０ｍ１まで濃縮した。収量は１回の吸着当りＰＰ７１
約１０〜であった。
カラム中の吸着剤はＰＰ２１の溶離後直ちに再び緩衝溶
液Ｈで光分洗った。これはＰＰ２１の免疫吸着的結合に
１」１使用できた。
液Ｈで光分洗った。これはＰＰ２１の免疫吸着的結合に
１」１使用できた。
Ｄ） ＰＰ２１の高度精製
免疫吸着により得られた蛋白質はなお非特異的に結合し
た抑清蛋白質およびその他の胎盤組織蛋白質によりしば
しば汚染されていた。これら血清随伴蛋白質の大部分の
除去はウルトロゲル（υｌｔｒｏｇｅｌ ）ＡＣＡ ３
４でのゲルｐ過により行われ５る。次に残る随伴蛋白質
は逆のまたは負の免疫吸光、すなわちなお、不純物とし
て存在する蛋白質に対する担″体と結合した抗体を用い
て除去された。その際、実質上は血清免疫グロブリンお
よび痕跡の胎盤組織蛋白質ＭＰ４が問題であった。
た抑清蛋白質およびその他の胎盤組織蛋白質によりしば
しば汚染されていた。これら血清随伴蛋白質の大部分の
除去はウルトロゲル（υｌｔｒｏｇｅｌ ）ＡＣＡ ３
４でのゲルｐ過により行われ５る。次に残る随伴蛋白質
は逆のまたは負の免疫吸光、すなわちなお、不純物とし
て存在する蛋白質に対する担″体と結合した抗体を用い
て除去された。その際、実質上は血清免疫グロブリンお
よび痕跡の胎盤組織蛋白質ＭＰ４が問題であった。
第１ａ図は寒天含有ゲ゛ル中の電界での分離後における
ＰＰ２１と家兎の特異的な抗匍清（Ａｎｔｉ−：ＰＰ２
１ ）との免疫学的反応を示す図である〔コレラ菌（Ｖ
ｉｂｒｉｏ Ｃｏｒｎｍａ）から得られる酵素ノイラミ
ニダー七（ＮＤ）で処理するかまたは処理せず〕。処理
されてない天然蛋白質はβ１−グロブリンの範囲に見出
される。ノイラミン酸の除去によりこの蛋白質は塩基性
が強くなりそしてｒ−グロブリンの範囲に現われる。
Ｉｌａ［Ｍ 第”°図′１３ト血清（Ｈ８）に対す４家兎０抗血 Ｐ
Ｐ２＋清（Ａｎｔｉ−Ｈ８）とのその免疫反応により視
認可能第１ｂ図
ＰＰ２１と家兎の特異的な抗匍清（Ａｎｔｉ−：ＰＰ２
１ ）との免疫学的反応を示す図である〔コレラ菌（Ｖ
ｉｂｒｉｏ Ｃｏｒｎｍａ）から得られる酵素ノイラミ
ニダー七（ＮＤ）で処理するかまたは処理せず〕。処理
されてない天然蛋白質はβ１−グロブリンの範囲に見出
される。ノイラミン酸の除去によりこの蛋白質は塩基性
が強くなりそしてｒ−グロブリンの範囲に現われる。
Ｉｌａ［Ｍ 第”°図′１３ト血清（Ｈ８）に対す４家兎０抗血 Ｐ
Ｐ２＋清（Ａｎｔｉ−Ｈ８）とのその免疫反応により視
認可能第１ｂ図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １）下記ａ〕〜ｆ）項すなわち、 ａ）β１−グロブリンの範囲内にある′電気泳動移動度
、 ｂ）等電点４．６±０．６、 Ｃ）沈降係数８２０．Ｗ ３．２±０．２８゜ｄ）超遠
心器中で測定された分子量５２，９００±／）、２００
． １％ ｅ）吸光率Ｅ１Ｃｍ（２８Ｄｒｕｎ）１０．５±１．０
およびｆ）炭水化物含量１９．２±５．２９／１０ Ｕ
ｒ（マンノース１．８±０．１’／１００ｒ、ガラク
トース４．６±１．［ｌ ′？／Ｉ Ｄ Ｏ？、フコー
ス１．５±０．３Ｆ／１００ｒ、Ｎ−アセチル−グルコ
サミン６．５±２．Ｏｒ／１００り、Ｎ−アセチル−ノ
イラミン酸５，６十１．５り／１υＵ１ハ を特徴とする蛋白質ＰＰ２１゜ ２）蛋白質ＰＰ２１を含有する器官好ましくは胎盤、胃
、腸、膀胱または牌臓から希塩溶液または緩衝溶液を用
いて得られた抽出物を下記ａ）〜ｈ）項記載の処置、す
なわち ａ） ｐＨ６〜８および３０〜６０％飽和における硫酸
アンモニウムを用いる蛋白質ＰＰ２１の沈殿、 ｂ）、 Ｔ）Ｈ６および塩基濃度４２／ｌまたはそれ以
下における水溶性アクリジン塩基を用いる随伴蛋白質の
分離またはｐＨ７〜９および塩基濃度４〜ｂｙ７ｔにお
ける水浴性アクリジン塩基を用いる蛋白質ＰＰ２１の沈
殿、ｃ） ｐＨ７で２００ｍｔ／ｌまでのエタノールを
添加することによる随伴蛋白質の分離、 ｄ）β１−グロブリンの範囲内にある郡動度を有する蛋
白フラクションが得られる調製用ゾーン電気泳動、 ｅ） ｐＨ４，４〜４．８の蛋白質が得られる等電集束
、ｆ）分子量４０．ＯＤＤ〜ｉｏｏ、ｏｏｏを有する蛋
白質が得られるゲル濾過または限外涙過、ｇ）弱塩基性
イオン交換体への吸着および蛋白質ＰＰ２１の溶離、 ｈ〕 免疫吸着的富化、 ０１種類またはそれ以上にかけることを特徴とする特許 の取得または富化法。 ３）抗血清の取得、および疾病の診断、疾病の監視また
は治療の制御をするためにこの蛋白質を検出および測定
するための免疫化学的方法の構成への前記特許請求の範
囲第１項記載の蛋白質ＰＰ２，の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843410694 DE3410694A1 (de) | 1984-03-23 | 1984-03-23 | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3410694.4 | 1984-03-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60215629A true JPS60215629A (ja) | 1985-10-29 |
| JPH0720994B2 JPH0720994B2 (ja) | 1995-03-08 |
Family
ID=6231393
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60055778A Expired - Lifetime JPH0720994B2 (ja) | 1984-03-23 | 1985-03-22 | 組織蛋白質ｐｐ▲下２▼▲下１▼およびその取得法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4594328A (ja) |
| EP (1) | EP0156266A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0720994B2 (ja) |
| AU (1) | AU576712B2 (ja) |
| CA (1) | CA1243014A (ja) |
| DE (1) | DE3410694A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0689014B2 (ja) * | 1986-01-21 | 1994-11-09 | 興和株式会社 | トロンビン結合性物質およびその製法 |
| ES2065318T3 (es) * | 1986-07-15 | 1995-02-16 | Kowa Co | Sustancia que se une a trombina y procedimiento para su preparacion. |
| US4937324A (en) * | 1987-02-06 | 1990-06-26 | Zymogenetics, Inc. | Chromatographic purification of human proteins having anticoagulant and anti-inflammatory activity |
| US6172198B1 (en) | 1993-03-19 | 2001-01-09 | Northern Sydney Area Health Service | PAPP-A, its immunodetection and uses |
| US20030220233A1 (en) | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
| US5968477A (en) * | 1994-01-24 | 1999-10-19 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexin conjugates with hexose and a chelator |
| USRE42761E1 (en) | 1997-12-31 | 2011-09-27 | Crossroads Systems, Inc. | Storage router and method for providing virtual local storage |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2221261A1 (de) * | 1972-04-29 | 1973-11-15 | Behringwerke Ag | Ap-glykoproteine und verfahren zu ihrer isolierung |
| DE2718325C2 (de) * | 1977-04-25 | 1986-09-25 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Leucinreiches 3,1-S-α↓2↓-Glykoprotein sowie dessen Verwendung |
| DE2720704C2 (de) * | 1977-05-07 | 1986-09-25 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues Glycoprotein, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung |
| DE3228503A1 (de) * | 1982-07-30 | 1984-02-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)7(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3315000A1 (de) * | 1983-04-26 | 1984-10-31 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)4(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3334405A1 (de) * | 1983-09-23 | 1985-04-04 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Membranassoziierte proteine (mp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)), verfahren zu ihrer gewinnung sowie ihre verwendung |
| DE3338480A1 (de) * | 1983-10-22 | 1985-05-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)0(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3418888A1 (de) * | 1984-05-21 | 1985-11-21 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)8(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
-
1984
- 1984-03-23 DE DE19843410694 patent/DE3410694A1/de active Granted
-
1985
- 1985-03-15 EP EP85103021A patent/EP0156266A3/de not_active Withdrawn
- 1985-03-21 US US06/714,495 patent/US4594328A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-21 CA CA000477146A patent/CA1243014A/en not_active Expired
- 1985-03-22 JP JP60055778A patent/JPH0720994B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-22 AU AU40289/85A patent/AU576712B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0720994B2 (ja) | 1995-03-08 |
| AU4028985A (en) | 1985-09-26 |
| DE3410694A1 (de) | 1985-10-03 |
| DE3410694C2 (ja) | 1991-09-26 |
| US4594328A (en) | 1986-06-10 |
| EP0156266A3 (de) | 1986-12-03 |
| AU576712B2 (en) | 1988-09-01 |
| CA1243014A (en) | 1988-10-11 |
| EP0156266A2 (de) | 1985-10-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4507229A (en) | Tissue protein PP4, a process for isolating it and its use | |
| JPS6361318B2 (ja) | ||
| CA1134352A (en) | Ubiquitary tissue protein pp.sub.8 | |
| US4500451A (en) | New protein PP13 extracted from human placental tissues and use thereof | |
| JPS6361319B2 (ja) | ||
| US4302385A (en) | Placenta-specific tissue protein PP10 | |
| US4468345A (en) | Protein (PP17), a process for concentrating and isolating it and its use | |
| US4746731A (en) | Isolated tissue protein PP18 | |
| JPH0354120B2 (ja) | ||
| EP0037963B1 (de) | Neues Protein PP9, Verfahren zu seiner Gewinnung sowie seine Verwendung | |
| US4592863A (en) | Protein PP20, a process for obtaining it, and its use | |
| CA1243014A (en) | Tissue protein pp in21 xx, a process for obtaining it and its use | |
| EP0029191B1 (de) | Neues Protein PP11, ein Verfahren zu seiner Gewinnung und seine Verwendung | |
| US4599318A (en) | Tissue protein PP19, a process for obtaining it, and its use | |
| CA1222693A (en) | Membrane-associated proteins (mp.sub.2), a process for obtaining them, and their use | |
| EP0190350A1 (en) | Process for preparing human proline hydroxylase | |
| JPS6364407B2 (ja) | ||
| Izumi et al. | Characterization of abnormal thyroglobulin in a transplantable rat thyroid tumor | |
| JPS601132A (ja) | 胎盤蛋白質およびその取得法 |