JPS6034185A - 生理活性物質ｐ−２３９２４，その製造法および製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、グロ［コラーゲン・プロリン水ｅ化酵素阻害
作用、コラーゲン生合成抑制作用などを有する新規な生
理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ。

Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆ、その製造法および製剤に関する。

プロトコラーゲン・１０リン水酸化酵素は、動物細胞内
のりボゾームで合成されたプロトコラーゲン中のプロリ
ンを特異的に水酸化する酵素であり、コラーゲン生合成
を律速する重要な因子の一つである。従来、本酵素活性
を阻害するものとしては、鉄キレータ−（例えばα、α
′−ジピリジルなど）、８Ｈ酵素阻害剤（例えばｐ−ク
ロロマーキューリーベンゾエートなど）、ある種の重金
属（例えばＣｕ　ｒ　Ｚｎ＋など）などが知られている
が、これらの物質はいずれもコラーゲンおよび非コラー
ゲン性蛋白質の生合成を非特異的に田舎するために副作
用が大きく、医薬とはなシ得なかった。非コラーゲン性
蛋白質の生合成を阻害せず、コラーゲンの生合成のみを
特異的に阻害する物質が見いだされれば、その物質は動
脈硬化症、肝硬変症、強皮症、ケロイド１．リューマチ
性関節炎、肺線維症などのコラーゲンの過剰蓄積を伴う
臓器線維症を含めた疾病の予防治療に＼使用することが
できる。

本発明者らはプロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素活
性を阻害する物質を微生物代謝生産物中にめ、鋭意ｔ！
１ｊｌＡを行なった結果、コラーゲンの生合成を特異的
に抑制する新規な生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ＋
ｃ、ｎ、ＥおよびＦを見いだし、これに基づいてさらに
研究した結果、本発明を完成した。

本発明は、（１）生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ　。

Ｂ、Ｃ，Ｄ、ＢまたはＦ、（２）ストレプトミセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し生理活性物質Ｐ−２
３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦを生産す
る能力を有する微生物を培地に＠養し、培養物中に生理
活性物ｆｆＰ−２３９２４Ａ、：ｓ　。

Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦを生成蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とする生理活性物質Ｐ−２３９２４
Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦの製造法および（
３）生理活性物質ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅお
よび／またはＦを含有する線維化抑制剤である。

本明細書においては、生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、
Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦを「生理活性物質ｐ−
２３９２４Ｊあるいは単にｒｐ−２３９２４Ｊと総称す
ることもある。また、生理活性物質ｐ−２３９２４Ａを
ｒｐ−２３９２４Ａｊと、生理活性物質Ｐ−２３９２４
Ｂをｒｐ−２３９２４ＢＪと、生理活性物質Ｐ−２３９
２４ｃを［Ｐ−２３９２４ＣＪと、生理活性物質Ｐ−２
３９２４ＤをｒＰ−２３９２４ＤＪと、生理活性物質Ｐ
−２３９２４Ｅをｒｐ−２３９２４ＥＪと生理活性物質
ｐ−２３９２ｔｒをｒＰ−２３９２４］ｉ’Ｊとそれぞ
れ略称することもある。

本発明方法に使用される微生物は、ストレプトミセス属
に属し、生理活性物１ｐ−２３９２４を生産する能力を
有する微生物（以下、「Ｐ−２３９２４生産菌」と略称
することもある。）であればいずれでもよい。

その具体例としては、たとえば沖縄県石垣島の土壌から
分離されたストレプトミセス・エスピー座２３９２４株
（以下、「賜２３９２４株」と略称することもある。）
が挙げられる。

ｍ２３９２４株について、インターナショナル・ジャー
ナル・オプ・システマティック・バクテリオロジー（工
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＳｙ
ｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　＋
　１６巻、３号、３１３〜３４０頁（１９６６年）記載
の方法に準じて検討した性状は下記のとおりである。な
お、培地上の所見は、特に記載しないかぎシ、２８℃に
おいて１４日間培養し、観察したものである。

（Ｉ）形態的特徴 捕虫菌糸よシ、らせん状、時によシネ完全ならせん状、
開放型らせん状、あるいは鉤状に短かい胞子鎖形成菌糸
を単純分校状に伸長し、輪生枝は認められない。成熟し
た胞子鎖は一般に５〜１０個の胞子の連鎖を認める。胞
子は円筒形ないし楕円形で大きさは０．４〜０．７　Ｘ
　Ｏ，７〜１．２μ、その表面は平滑である。

（ＩＩ）各種培地上での生育状態 各種培地における生育の程度（Ｇ）、気菌糸（ＡＭ）の
生育および色調、可溶性色素（ＳＰ）の有無および色調
などについて以下に列記する。

なお、色の記載について０で示す標準色調記号はコンテ
イナー・コーポレーシッン・オグーアメリカ（Ｃｏｎｔ
ａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒ
ｉｃａ）ノサ・カラー・ハーモニー・マニュ７　／ｌ／
　（ＴｈｅＣａｌｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ
　）第４版、１９５８年によった。

（７）シュークロース・硝酸塩寒天培地（Ｇ）：貧弱 （ＡＭ）、貧弱、淡灰褐色（３ｇｅ　）（ＳＰ）：なし Ｕ）グルコース・アスパラギン寒天培地（Ｇ）：貧弱 （ＡＭ）　：なし くＳＰ）　：なし くつ〕グリセリン・アスパラギン寒天培地（Ｇ）：なし くニ）スターチ・無機塩寒天＠地 （Ｇ）：豊富 （ＡＭ）：豊富、粉状、灰色（３ｉｈ　）（ＳＰ）：黄
褐色（４ｇｃ　） に）チロシン寒天培地 （Ｇ）：貧弱 ＣＡＭ）：貧弱、灰色（３ｈａ） （ＳＰ）二淡黄赤色（４ｅａ） （ロ）栄養寒天培地 （Ｇ）：中程度 （／Ｍ）：なし くＳＰ）：なし く至）イースト・麦芽寒天培地 （Ｇ）：中程度 （ＡＭ）　：貧弱、灰色（３ｆｅ） （ＳＰ）　：淡黄褐色（４ｎｅ　） 汐〕オートミーμ寒天培地 （Ｇ）：中程度 （ＡＭ）　、貧弱、淡灰褐色（３ｇｅ）（ＳＰ）　：な
し くＩＩＩ）生理的性質 に）生育温度範囲：１５〜３５℃ ば〕ゼラチンの液化（グルコース・ペグトン・ゼラチン
培地、２４℃、３週間）：陽性（弱）＠殿粉の加水分解
：陽性 に）脱脂乳の凝固・ペプトン化：共に陰性（３）硝酸塩
の還元性：陰性 Ｑ〕メラニン様色素の生成： チロシン寒天培地：縦隔性 ペプトン・イーヌト鉄寒天培地：陰性 （’ＩＶ）択ｊｋｉ源の同化性（ブリードハム・ボラト
リー１寒天培地） Ｌ−アラビノース　士　イノシト−μ　−Ｄ−キシロー
ス　＋　Ｌ−ラムノース　−Ｄ−グμコース　什　フフ
イノース　−Ｄ−フラクトース　±　Ｄ−マンニット　
−シュークロース　士　対照　− （注）：＋：豊富な生育、±：僅かに生育、−：生育せ
ず 上記形態的特徴からみて、本菌株がストレプトミセス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、）属に属することは明らか
である。

上記ストレプトミセス・エスピー＆２３９２４株は、昭
和５７年９月２０日に財団法人発酵研究所（工ＦＯ）に
受託番号ＩＦＯ１４２０５として、また本微生物は昭和
５７年１０月１日に通商産業省工業技術院微生物工業技
術研究所（ＦＢＩ）に受託番号ＦＥＢＭ　Ｐ−６７３９
としてそれぞれ寄託されている。

一般に、ストレプトミセス属菌はその性状が変化しやす
く、たとえばＸ線照射、紫外線照射、放射線照射１人工
変異剤を用いる人工変異手段などで容易に変異し得る。

このような変異株であっても、ｐ−２３９２４の生産能
を有するものはすべて本発明の方法に使用し得る。

Ｐ−２３９２４生産菌の培養にあたっては、培地は液状
でも固状でもよいが通常は液体培地による振鈷培養また
は通気攪拌培養が便利である。培地は放線菌の生育に適
し、Ｐ−２３９２４を生産させ得るものであればどのよ
うなものでもよい。

すなわち、次素源としては例えばグルコース、ラフ）−
ス、グリセリン、ＩＷＩＩ粉、シュークロース。

デキストリン、糖蜜、有機酸類（例、酢酸、酒石酸など
）など、窒素源としては例えばペプトン。

カザミノ酸（ディフコ社製）、Ｎ−ＺアミンＡ（シェフ
イールド社製）などの蛋白加水分解物、酵母エキス、麦
芽エキス、大豆粕、コーン・ステイープリカー、アミノ
酸類（例、アヌパヲギン酸。

グルタミン酸など）、各種アンモニウム塩（例、硫酸ア
ンモニウム、塩化アンモニウムなど）などが用いられる
。無機塩として各種リン酸塩（例、第一リン酸ナトリウ
ム、第ニリン酸カリウムなど）。

硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄などの
金属塩１重金属塩（例、硫酸マンガン、硫酸亜鉛など）
などを添加してもよく、また菌の生育を促進する目的で
ビタミン類（例、ビタミンＢｌ　。

パントテン酸力ｐシウムなど）、核酸関連化合物（例、
アデニン、ウランμなど）などを添加してもよい。また
培養方法および培養条件にょっ”Ｃは、シリコーン、ポ
リプロピレン・グリコ−１ｖ銹ｓ体〔例、アクトコール
（武田薬品工業株式会社製）など〕、大豆油などの消泡
剤を培地に加えることニヨリ、Ｐ−２３９２４の生産量
を増大させるのに効果的な場合もある。

培養温度、培養時間、培地の液性などの培養条件は使用
する微生物の種類、培地組成などによって変動するが、
最終的にはＰ−２３９２４の生産量が最大となるように
適当に選択、調節されればよく、多くの場合好気的条件
下に約２０〜４０’Ｃでおよそ２４時間〜２４０時間培
養し、この間培地の液性をｐＨ約４〜９付近に保っのが
よい。

このようにして得られた培養液から生理活性物質ｐ−２
３９２４を採取するにあたっては本物質の性状に基づい
て、種々の方法を適当に組み合わせることによって容易
に行ないうる。すなわち、例えば、中性ないし漱酸性で
、水と混和しない有機溶媒、例えば酢酸エチル、酢酸ブ
チμ、クロロホルム、ブタノール、ベンゼン、トルエン
、ジエチμエーテ／Ｌ／、メチレンクロライド、メチル
イングチμケトンなどによる抽出、活性度、シリカゲ／
Ｌ’、アルミナなどを用いる吸着クロマトグツフィー、
セファデックスカラムによるゲ／Ｌ／濾過、イオン交換
樹脂によるイオン交換クロマトグラフィーなどである。

これらの手段を適当に組み合わせて使用することによシ
、生理活性物質Ｐ−２３９２４は培養物から結晶あるい
は結晶性粉末として単離式後述の実施例２で得られた生
理活性物質Ｐ−２３９２４の諸性質を以下に示す。

（１）理化学的性質 （ａ）融点：Ａ　１８６−１８８℃ｉＢ　２００−２０
２℃；Ｃ１８７−１９０℃；Ｄ ２０５−２０７℃；Ｅ　１γ４−１７６℃；Ｆ　１９１
−１９５℃ 缶）元素分析値（実測値）： （Ｃ）分子量（マス・スペクトルによる）および分子式
： ％式％： （ｅ）溶解性：Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、ＤおよびＦはい
ずれもジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、
ピリジン、５％戻醋酸水素ナトリウム水易溶。メタノ−
／ｌ／、ジオキサン。

酢酸に可溶。水、アセトン、クロロホμム。

ｎ−ヘキサン、石油エーテルに難溶ないし不溶。Ｐ−２
３９２４ｃはジメチルスルホキシド、ジメチルホルムア
ミド、ピリジン、５％灰酸水素すトリウム水に易溶。メ
タノール。

ジオキサン、アセトン、酢酸に可溶。水、クロロホｐム
、１１−ヘキサン、石油エーテルに難溶又は不溶。Ｐ−
２３９２４ｇはジメチルスルホキシド、ジメチμホｐム
アミド、ピリジン、５％灰酸水素ナトリウム水、メタノ
−〜に易溶。ジオキサン、酢酸に可溶。水、クロロホμ
ム、ｎ−ヘキサン、石油エーテルに難溶又は不溶。

（ｆ）紫外部および可視部吸収スペクト／Ｌ／：第１〜
第６図に示す。各溶剤に溶解した直後の極大１％ 吸収を示す波長（ｎｍ）およびＥｌ、値は下記の第１表
の通りである。なお、第１〜第６図において□はメタノ
−μ中での測定結果を、−一一一は０．１　Ｎ　ＭＣｌ
−９０％メタノ−μ水中での測定結果を、□−−−−−
−−はＱ、１ＮＮａＯＨ−９０％メタノ−μ水中での測
定結果をそれぞれ示す。

′、以１余白） （ｇｌ赤外線吸収スベク）Ａ／：臭化カリワム錠により
測定した赤外線吸収スペクトμを第ｔ〜第１２図に示す
。極大吸収を示す主要な波数は次のとおシである。

＜　ｌ　）Ｐ−２３９２４Ａ ３３００．２９３０，１７１０．１６６５．１６４０゜
＋６２０．１５７０．１５４０，１５００．１４６０゜
＋４２０．１３８０．１３３５．１２８０．１２４０゜
１２００．１１８０．１１１０．１０４０．＋０００゜
９７０、　９００．　８６０．　８００第７図参照 （ｉｉ）Ｐ−２３９２４Ｂ ３３００．２９５０．１？２５．＋７０５．１６６０゜
１６３０．１５９０．１５４０．＋４６０．１４２０゜
１３γ０．１３３０．＋３００．１２７０．１２１０゜
１１９０．１＋７０．１１３０．１＋００．１０６０゜
１０２０、　９８０．　９５０．　８９０．　８６０゜
７９０、　７６０．　７００ 第８図参照 （Ｉｌｌ）Ｐ−２３９２４Ｃ ３４００、３０７０，２９４０，１７２０，１６８０゜
１６３５、＋６００．　１５４０．　１４９０．　１４
６０゜＋４２０．　１３８０．　１３５０．　１３１０
．　＋２５０゜１２２０、＋１８０．　１１２０．　＋
１００．　１０４０゜９９０、９３０．　８８０．　８
２０．　８００゜０５ 第９図参照 （ＩＶ　）　Ｐ　−２３９２４Ｄ ３４００．３３００．２９６０，１７２０．１６７０゜
１６３５．１６１０．１５４０．１４４０．１３８０゜
＋３４０．１３００．１２６０，１２２０．１２０５゜
１１３０．１１００．１０６０．１０００．　９００゜
８７０、　８２０．　８００．　７８０．　６９０第１
０図参照 （ｖ）ｐ−２３９２４ｇ ３５５０．３３００．３０８０．２９５０．１γ２５゜
１６６０、Ｔ６４０，１６＋０．１５７０．１５４０゜
１４９０、＋４５５．１４２０．Ｔａ２Ｏ，１３２５゜
１３００．１２４０．１２１０，１１８０．＋１２０゜
１０８０、＋０４０．ｌ０Ｔ０．　９４０．　９２０゜
８６０、ｂ２ｏ、８００．　７７０．　７００第１１図
参照 （Ｖｌ）Ｐ−２３９２４Ｆ ３３００．１７２０．１６ｇ０．１６６０．１６３０゜
＋６００．１５３０．１４９０，１４６０，１４２０゜
１３８０．１３３５．１３＋０．１２６０．１２２０゜
１１９０、１１３０．　１１００．　１０３０．　＋０
００゜９８０、　９５５．　８７０．　７００第１２図
参照 （ｂｌ呈色反応：Ｐ−２３９２４はいずれも塩化第二鉄
反応、アルコール性酢酸マグネシウム反応、リドン−ス
ミス反応陽性。

ニンヒドリン反応、ニーｐリッと反応陰性。

（１〕性伏：　ｐ−２３９２４はいずれも酸性脂溶性で
あシ、黄色ないし黄橙色又は橙黄色の結晶、結晶性粉末
あるいは粉末を示す。

（ｊ）核磁気共鳴スペクト／Ｌ’：４００メガへルツ、
ジメチμｍｄ＆　スルホキシト中で測定したヌベク）／
ｖを第１３〜１８図に示す。特徴的ピークを以下に示す
。

（＋　）Ｐ−２３９２４Ａ δ　ＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　１．８６（３Ｈ、ｓ　）
　、　２　、０９　（３Ｈ。

ｄ＋Ｊ＝１．６Ｈｚ）＋　２．７１（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ−
８，８゜１３．６Ｈｚ）、２．９１（ＩＨ２ｄｄ、Ｊ＝
５．０＋１３．６Ｈｚ）、　３．６６（ＩＨ，ｄ、、Ｔ
＝１２．９Ｈｚ）。

３−７８（ＩＨｌｄ、Ｊ＝１２−９Ｈｚ）＋　３．９６
（３Ｈ。

ｓ）、４．４７（ＩＨ，ｄ−ｔ、１ｉｋｅ、Ｊ−５，０
，８，３゜８．８Ｈ２）、６．８９（ＩＨｌ（１，Ｊ＝
１．６Ｈｚ）。

７．０９（ＩＨ，ｓ）、８．１８（ＩＨ，ｄ、Ｊ−８−
３Ｈｚ）＋１２．４０（ＩＨ，ｓ） 第１３図参照 （ｉｉ）Ｐ−２３９２４Ｂ ＩＩ　ＤＩＳＯ−屯ｐｐｍ：　１．８６（３Ｈ，ｓ）、
１．９５（３Ｈ，ｓ）、２．ｒＯ（ＩＨ，ｄｄ、、Ｔ−
８，８，１３，ＩＨｚ）　、２．８９（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ
＝４．９，１３．７Ｈｚ）。

３．６５（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝Ｉ３．ＩＨｚ）　、３．７７
（ＩＨ。

ｄ、Ｊ＝１３．１Ｈｚ）、３．９５（３Ｈ，ｓ）、４．
０３（３Ｈ，８）　、４−４７　（ｌＨ，ａ　ｔｌｉｋ
ｅ　＋　Ｊ＝４．９　＋８．１，８．８Ｈｚ）、７．１
１（ＩＨ，ｓ）、８．ｉ８（ｉＨ，ｄ　、、ｒ＝８．１
Ｈｚ）、１２．５９（ＩＨ，ｓ）第１４図参照 （ＩＩＩ）Ｐ−２３９２４Ｇ δ　ＤＩＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　１．８５（３Ｈ，ｓ）　
、２．７１（ＪＲ，ｄｄ、、Ｔ−８，８，１３，７Ｈｚ
）、２．９１（ＩＨ２ｄｄ、Ｊ＝４−９＋１’３−７Ｈ
ｚ）　、３．６６（ＩＨ。

ｄ　＋　Ｊ＝　１２．９１１　ｚ　）　＋　３．７７　
（Ｉ　Ｈ＋　ｄ　、Ｊ　＝　１２−９Ｈｚ）、３．８８
（３１（、ｓ）、３．９５（３Ｈ，ｓ）。

４．４７（ＩＨ，ｄ　ｔｌｉｋｅ、Ｊ＝４．９．８．１
，８．８Ｈｚ）、６．２６（ＩＨ，ｓ）、７．１５（Ｉ
Ｈ，ａ）。

８．１８（１１ｉ、ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、１２．７３
（ＩＨ。

８） 第１５図参照 （ＩＶ　）　Ｐ　−２３９２４Ｄ Ｉ　ＤＭＳＯ−ｄａ　ｐｐｍ：　１−８５（：３Ｈ、ｓ
　）　、Ｉ　、９４（３Ｈ，ｓ）　、２．７３（ｉｎ、
ｄｄ、Ｊ＝８．８，１３．５Ｈｚ）、２．９２（ＩＨ，
ｄｄ、Ｊ−４，８，１３，５Ｈｚ）。

３．６４（ＩＨ，ｄ、Ｊ−１２，８Ｈｚ）　、３．７６
（ＩＨｌｄ、Ｊ＝１２．８Ｈｚ）、４．００（３Ｈ，ｓ
）、４．４８（ＩＨ，ｄｔｌｉｋｅｌ、ｖ−４，８＋８
−１．８．８Ｈｚ）　＋７．０３（ＩＩＩｓ）　、８．
１７（１’Ｈ，ｄＩＪ”８．ＩＨ２）。

１２．７９（ＩＨ，ｓ） 第１６図参照 （ｖ）ｐ−２３９２４Ｅ δ　ＤＭＳＯ−６，６ｐｐｍ　：　１．８５（３Ｈ，ｓ
）　、２．７１（ｔｕ、ａａ、Ｊ＝８．５，１３．７Ｈ
ｚ）　、２．９０（ＩＨｌｄｄ、Ｊ＝４．９，１３．７
Ｈｚ）、３．６７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１３．１Ｈｚ）、３
．７９（ＩＨ，ｄ、、Ｔ＝１３．１Ｈｚ）。

３．９８（３Ｈ，ｓ）、４．４７（２Ｈ，ｄ、Ｊ−２，
２Ｈｚ）。

４．４７（ＩＨ，ｄｔｌｉｋｅ、Ｊ＝４．９．８．１，
８．５Ｈｚ）、５．４７（ｌＨ，ｓ）、６．８２（ＩＨ
，ｔ、Ｊ−２，２Ｈｚ）、７．１５（ＩＨ；ｓ）、８．
１８（ＩＨ，ｄ。

Ｊ＝８．１Ｈｚ）、１２．２９（ＩＨ，ｓ）第１７図参
照 ＜　ｖｌ　＞　ｐ　−２３９２４Ｆ δ　ＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ　：　１．８５（３Ｈ，ｓ）
　、２−７０（ｌＨ，ｄｄ、Ｊ＝８．８，１３．７Ｈｚ
）　、２．９０（ＩＨ９ｄｄ、Ｊ＝４．９，１３．７Ｈ
ｚ＞、３．６７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１３、１Ｈｚ）　、３
．８０（ｌｕ＋ａ＋Ｊ＝ＩＺ、１１（ｚ）　。

３．９７（３Ｈ，ｓ）、４．１０（３１，ｓ）、４．３
６（２Ｈ１ｄ　、Ｊ＝３．７Ｈｚ）　１４．４７（ＩＨ
，ｄｔ　１ｉｋｅ、　Ｊ＝４．９，８．３．８．８’Ｈ
ｚ）、４．９３’（ＩＨ，ｂｒ　ｔ）。

７．１６（１，Ｈ，ｓ）　、８．２０（ＩＨ，ｄ、、Ｔ
＝８．３Ｈｚ）。

１２．７０（ＩＨ，ｓ） 第１８図参照 （ｋ）薄層クロマトグツフィーのＲｆ値：シリカブμ・
グレート（メ〜り社製、商品番号５７２９）および逆相
糸ＨＰＴＬＣプレート、ＲＰ−８（メルク社製、商品番
号１３７２５）上でのＩ？ｆ値は下記の通シである。

上記の如き理化学的性質を示す化合物は知られておらず
、Ｐ−２３９２４は新規な物質と考えられる。

上記の理化学的諸性質から、ｐ−２３９２４の推定構造
式は以下に示される。

ｐ−２３９２４は遊離のカルボキシ基を有するので、塩
を形成することができる。該塩を形成するには、自体公
知の方法が用いられる。該塩としてはたとえば力ｐシウ
ム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、ナトリウム塩、カ
リウム塩、マンガン塩、鉄塩、銅塩、亜鉛塩などが挙げ
られる。

Ｐ−２３９２４の生物学的性質を以下に示す。

（ａ）プロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素阻害作用
；阻害活性の測定はに、工、　Ｋｉｖｉｒｒｉｋｏらお
よび、ｒ、　Ｈａｌｍｅらの方法ＣＪｏｕｒｎａｌ−ｏ
ｆ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　■、４
００７　（１９６７）およびＢｉｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅ
ｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ　１９Ｂ　＋４６
０　（１９６７））に準じて、鶏胚より調製した部分精
製酵素標品を使用し、（Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ）５　
・４Ｈ２０（蛋白質研究奨励金製、大阪）を基質として
、Ｒ，Ｅ、　Ｒｈｏａ、ｄｓ　らの方法ＣＭｅｔｈｏｄ
ｓ　ｉｎＫｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　Ｘ％’ｌｌ　Ｂ、　３
０６　（１９７１）　〕に準じて行なった。拳法によｐ
部分Ｍ製酵素１００μｇ（蛋白質として）の活性を５０
％阻害するのに必要なＰ−２３９２４の濃度は下記の通
シであった。

Ｐ−２３９２４Ａ　：　６．７Ｘ１０　ＭＰ−２３９２
４Ｂ　：　９．５ｘｌＯＭＰ−２３９２４Ｃ：５．７Ｘ
１０　Ｍ Ｐ−２３９２４Ｄ：２．７Ｘ１０　Ｍ Ｐ−２３９２４Ｅ：２．１ｘｌＯＭ Ｐ−２３９２４Ｆ：２．１１０　Ｍ 上記の結果から明らかなように、ｐ−２３９２４は顕著
なプロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素阻害作用を有
する。

（ｂ）コラーゲン生合成抑制作用：Ｔ、Ｉｓｈｉｍａｒ
ｕらの方法ＣＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌｏｇｙ　３１　＋９１５　Ｎ９８２））に準じて、
Ｐ−２３９２４を１日１回、６日間、ＳＤ−系ラット（
雌、３週令）の腹腔内に投与し、子宮のコラーゲン量お
よび非コラーゲン蛋白質量を対照群と比較した。以下の
第２表に示したようにｐ−２３９２４はそれぞれコラー
ゲンの生合成を選択的にかつ有意に抑制した。

（以下余白） ※※　非コラーゲン性蛋白質量＝全蛋白量−コラーゲン
量 ※※※エストフジオーｌｖ−１７βは５％エタノ−〜含
有生理食塩水に溶解した。

尚、実験は１群１０匹のラットを使用した。

Ｐ−２３９２４の急性毒性ＣＩ、　Ｉ）５０値（ラット
、腹腔内投与）〕を以下に示す。

Ｐ−２３９２４Ａ：　１００〜２００Ｍｇ／＃。

Ｐ−２３９２４Ｂ　：　５０〜１００ダ／幻、Ｐ−２３
９２４Ｃ：１００〜２００Ｖ／ｋｑ　、　ｐ　−２３９
２４Ｄ：　４００１１１／＃以上、Ｐ−２３９２４Ｅ：
約５０ｑ／＃、Ｐ−２３９２４Ｆ：約５０ｑ／ｋｑ以上
。

上記したように、Ｐ−２３９２４は、プロトコラーゲン
・プロリン水酸化酵素阻害作用および選択的なコラーゲ
ン生合成抑制作用を有するので、例えば生化学的試薬あ
るいは動物組織の線維化抑制剤などとして有用である。

すなわち、Ｐ−２３９２４は、哺乳動物（ウサキ、ラッ
ト、マウス、イヌ、ネコ、人など）の臓器線維症の予防
・治療剤としてたとえば肺線維症。

肝硬変症、腎硬化症、動脈硬化症９強皮症、骨髄線維症
、ｔ４４性関節炎などの予防・治療のために用いられる
。

Ｐ−２３９２４の投与量は対象疾患、症状、投与対象、
投与方法によって異なるが、臓器線維症の予防・治療剤
として投与する場合は成人１人当り１日約１０〜１００
０９を１〜３回に分けて投与される。

Ｐ−２３９２４を投与するにあたっては、それ自体ある
いは適宜の薬理的に許容される担体、賦形剤、希釈剤と
混合し、粉剤、顆粒剤９錠剤、カブ七〜剤、注射剤など
の剤型で経口的または非経口的に投与することができる
。

上記経口製剤、例えば錠剤を製造する際には、結合剤（
例、ヒドロキシプロピ〜セμロース、ヒドロキシプロヒ
ルメチルセルロース、マクロゴールなど）、崩壊剤（例
、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウムな
ど）、賦形剤（例、乳糖、デンプンなど）、滑沢剤（例
、ステアリン酸マグネシウム、りμりなど）などを適宜
配合することができる。

また、非経口製剤、たとえば注射剤を製造する際には、
等張化剤（例、ブドウ糖、Ｄ−ソμビト’−／Ｉ／、Ｄ
−マンニトール、塩化ナトリウムなど）。

防腐剤（例、ベンジ〜アμコー／Ｉ／、クロロブタノ−
μ、バラオキシ安息査酸メチ／Ｌ／、バラオキシ安息香
酸プロピルなど）１Ｍ！衝剤（例、リン酸塩緩衝液、酢
酸ナトリウム緩衝液など）などを適宜配合することがで
きる。

Ｐ−２３９２４は、生化学的試薬として、たとえば動物
の培養細胞におけるコラーゲン生合成の阻害剤として、
あるいはプロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素活性に
対する特異的阻害剤として有効に利用できる。

以下に本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。

培地のパーセントは、重量／容量パーセントを示す。

実施例１ ストレプトミセス・エスピーｍ２３９２４（ＩＦＯ１４
２０５，ＦＥＲＭ　ｐ−６７３９）をグルコース２．０
％、グリセリン１．０％、生大豆粉０．５％、コーン・
ステイープ・リカー０．５％、ポリペプトン０．３％、
塩化ナトリウム０．３％、脚酸カルシウム０．５％、ｐ
Ｈ７，０からなる液体培地４００ｇｔを含む２ｅ容坂ロ
フラスコ５本に接種し、２８℃で２日間往復振盪培養し
て培養液約２１を得た。この培養液を上記と同一の培地
１００１を含む２００ｇ容タンクに移し、２８℃で２日
間、通気攪拌培養した。得られた培養液６０ｇを可溶性
澱粉４％、脱脂大豆粉２％、チオ硫酸ナトリウム０．１
％、硫酸マグネシウム０．０５％、リン酸二カリウム０
．０．５％、塩化カリウム０．０３％（ｐＨ６，０）カ
らナル液体培地１２００１を含む２０００ｅタンクに移
殖し、２４℃で５日間通気攪拌培養を行なった。得られ
た培養液約１１５０１に、トゲコバーライ）＃３４（東
興パーライト工業株式％式％ （ジョンズ・マンビル社製、米国＞３４ｋＱをプレコー
［したフィルタープレスを用いて菌体および固形物を濾
過し、ｐ成約１０００４！を得た。菌体および固形物は
水１５０１で洗浄後再濾過して洗液１５０７？を得た。

このｐ液と洗液を合わせ、硫酸でｐＨ３，０に調整し、
２容の酢酸エチルを用いて８１５０ｆｆボドビルニアツ
ク抽出装置（ポドピ〜ニアツク社製、米国）によシ向流
抽出した。得られた抽出成約４３０４は１％戻酸水素ナ
トリウム水〃容で同じ装置を用いて転溶し、転溶液２１
５ｅを得た。転溶液を硫酸でｐＨ３，０に調整したのち
、再び２容の酢酸エチルで抽出し、２容の水で２回繰返
し洗浄後、減圧濃縮した。濃縮液（４００ｔｘｌ　）を
シリカゲｌＬ／（メルり社製、西ドイツ）カラム（４，
６Ｘ６５りに流し、酢酸エチ／Ｌ１５００　ｍｌ、つづ
いて１％イ↓酸含有酢酸エチル３ｅで溶出した。

活性区分（約３ｇ）を集め、５００ｄの水で２回洗浄し
たのち減圧上濃縮乾固し、得られた固形物をジメチルス
ルホキサイド約３００ｇＪに溶解した。

この溶液に水３０Ｉｄを加えたのち、Ｐｒｅｐ　、ＰＡ
Ｋ−５００１０１８カラムを装着したＰｒｅｐ　ＬＣ／
Ｓｙｓｔｅｍ５００Ａ型分取用液体クロマトグラフ装置
（ウォーターズ社製、米国）に導入し、メタノ−μ−水
（１：１）混液３１１つづいてメタノール−水（３：２
）混液５ｇ、最後にメｐノー１ｖ２１１を用いて溶出し
、溶出液を５００ｓｌづつ分取した。主としてＰ−２３
９２４Ａ、Ｃ，ＤおよびＥを含有する画分（７ラクシ、
ン２〜ａ　＞　３．５１１と、主としてＰ−２３９２４
Ｂ６含有する両分（フラノン、ｙ９−１３）２．５ｅに
分けた。Ｐ−２３９２４Ｂ含有画分は室温で放置すると
約２．３１の黄橙色のＰ−２３９２４Ｂ結晶が析出した
のでこれを炉別したのち、母液を減圧濃縮して約１ｇと
し、％容の酢酸エチμで３回抽出し、抽出液に無水硫酸
ナトリウム５０ｆを添加して脱水後、約３０ｇＺまで濃
縮し、ｎ−へキサン２００ｍ１を加えると黄橙色結晶性
のＰ−２３９２４Ｂ粗粉末約７．１ｇかえられた。この
粗粉末をメタノ−μ溶液から再結晶し、Ｐ−２３９２４
Ｂの結晶的３１を得た。Ｐ−２３９２４Ａ、Ｃ，Ｄおよ
びＥ含有画分を約１０ロゴまで濃縮し、シリカゲル・カ
ラム（４，０Ｘ４２ｃＩＩ）に流し、１％蓚酸含有酢酸
エチ／Ｉ／−２４で溶出した。

溶出液は１００＋ｗｔづつ分取し、生としてＰ−。

２３９２４ＡおよびＤを含有する両分（７ラクシロン２
〜７）６００ｓｓｌと、主としてＰ　−２３９２４Ｃお
よびＥを含有する画分（７ラクＶヨ７８〜１４）７００
＋ｗ／とに分けた。主としてＰ−２３９２４ＡおよびＤ
を含有する両分（６００ｍ＋？）を水洗後、２！ｌ、ｔ
ｒｌ固Ｌ、ｉｐノー１ｖ５０ｓ＋ｊ？に溶解Ｌ、水５０
ｍ１を加えて希釈したのち、上記と同一の分取用液体ク
ロマトグラフ装置にかけ、メタノ−μ−水（１：１）混
液５．５１１で溶出した。溶出液は５００ｓｌづつ分取
し、７フクシヨン１３〜１５までの区分１．５１９：集
め、約７ＱＯｍｔまで減圧濃縮したのち、２０（Ｊｌｌ
ｔ（Ｄ酢酸エチルを添加して３回反復抽出した。抽出液
を合わせて無水硫酸ナトリウム３０ｆｆ７を添加して脱
水後、減圧濃縮し、濃縮液約３０ｍ１にｎ−へキサン２
００ｇ／を加えると、Ｐ−２３９２４Ａおよびｐを含有
する黄橙色粗粉末１．７ｆ２＞ｆえられた。この粗粉末
をクロロホルム−酢酸（４：１）混液１００ｇ／に溶解
し、シリカゲル・カラム（３，５Ｘ５２ｃＩＩ）に流し
、クロロホルム−［［（４：１）混液４００胃ｌ、クロ
ロホルムー酢酸（７：３）混液１１を用いて溶出した。

溶出液社１０ｇｔづつ分取Ｌ１主としてｐ−２３９２４
Ａを含有する区分（７フクＳ／ヨン２５〜２９）と主と
してＰ−２３９２４Ｄを含有する区分（７ラクＶＷン３
６〜１３６）に分けた。ｐ−２３９２４Ａ含有画分（５
０ｇ／）を減圧′下に濃縮乾固し、メタノ−ｙｖ２００
ｍに溶解したのち、水２００厘ｌを添加し、上記分取用
液体クロマトグラフ装置を用いて再クロマトグラフィー
を行ないｐ−２３９２４Ａ区分を集めた。この区分を減
圧濃縮後、酢酸エチμを加えて抽出、脱水したのち濃縮
するとｐ−２３９２４Ａの粗粉末的２５０１ｖがえられ
た。この粗粉末をメタノ−μ溶液から再結晶すると黄橙
色のＰ−２３９２４Ａ結晶約１００１ｑがえられた。

次いでＰ−２３９２４Ｄを含有する区分１１を減圧下に
濃縮乾固し、乾固物を酢酸エチル約５００ｍ１に溶解し
、２００ｇ１の水で３回繰返し洗浄した。

洗浄酢酸エチ／Ｌ／Ｍを無水硫酸ナトリウム５０ｆで脱
水後、酢酸エチルを減圧下に留去し、濃縮液的３０ｔｘ
ｔにｎ−ヘキサン２００ｔｌを加えると黄橙色のＰ−２
３９２４：ｏ粗粉末約０．７ｆが見られた。

この粗粉末をクロロホルム−酢酸（４：１）混液２５ゴ
に溶解し、シリカゲル・カラム（３Ｘ４５１）に流し、
クロロホルム−酢酸（４二１）混液で溶出し、Ｐ−２３
９２４Ｄ区分を集めた。この区分４００ｇｔを減圧濃縮
し、濃縮液８０ｔｓｌに水１００ゴを加えたのち、２容
の酢酸エチルで３回反復抽出した。抽出液を合わせ、水
洗、脱水したのち、酢酸エチＩｖヲ留去して見られた粗
粉末的５００ｑをメタノ−μｍ酢酸エチ／’（１：５）
混液から再結晶すると黄橙色のＰ−２３９２４Ｄの結晶
性粉末約３３０ダがえられた。次に、シリカゲル・クロ
マトグラフィーによって見られた主としてＰ−２３９２
４ｃ　、Ｅを含有する区分（７ラクシヨン８〜１４）７
００ｇ？を水洗、脱水後、酢酸エチ／Ｌ’を留去し、残
渣をメタノ−ＩＶ　５０　ｄに溶解した。この溶液を水
で２倍に希釈したのち、分取用液体クロマトグラフ装置
（上記と同一カラム）にかけ、メタノ−μｍ水（１：ｌ
）混液に溶出した。溶出液は２００ｓｇＪづつ分取し、
主としてＰ−２３９２４Ｅを含有する区分（フラクショ
ン１０〜１３）８０（Ｉｇ／とＰ−２３９２４ｃを含有
する区分（７ラクシヨン１４〜１８）ＩＪとに分けた。

Ｐ−２３９２４Ｅ含有画分を減圧濃縮し、２容の酢酸エ
チルで３回反復抽出、脱水後、約２０ｇｔまで濃縮し、
ｎ−ヘキサン２００ｇ／を添加すると黄橙色のＰ−２３
９２４Ｅの粗粉末的１２０１１ｇかえられた。この粗粉
末をクロロホルム−メタノ−μ（３：２）混液３０ｇ／
に溶解し、Ｖリカゲ７し・カラム（３Ｘ４５ｆｆｉ）に
流し、クロロホルム−メタノ−μ（３：２）で溶出し、
ｐ−２３９２４Ｆ含有区分を集めて濃縮し、濃縮液１０
ｇ／に酢酸エチ／’　１０　ｍｌ、　ｎ−へキサ７５０
１１ｔを加えると黄橙色のＰ−２３９２４１の結晶性粉
末約３０ダかえられた。Ｐ−２３９２４Ｃを含有する両
分１ｇは、減圧下に濃縮乾固し、乾固物をクロロホルム
１５ｍ１に溶解し、シリカゲル・カラム（３，ＯＸ４５
ａＩ）に流し、クロロホルム−酢酸（４：１）混液で溶
出し、Ｐ−２３９２４Ｃを含有する区分を集めた。

この区分を濃縮乾固するとＰ−２３９２４ｃの粗粉末的
１５０４Ｆかえられた。この粗粉末を酢酸エチ／Ｓ’　
７０　ｄを加えて溶解し、２０ｍ＋／の水で３回繰返し
洗浄したのち、無水硫酸ナトリウム２．５ｆを加えて脱
水、酢酸エチル溶液を減圧濃縮して約１０ｇｔとし、ｎ
−ヘキサン２５ｍ１を加えると黄橙色のＰ−２３９２４
ｃの結晶約８５叩が見られた。

次に前記と全く同じ方法で、培養液ふら酢酸エチｐによ
る抽出、１％次酸水素ナトリウム水による転溶、酸性側
での酢酸エチμによる抽出、水洗。

濃縮等の操作を経て得られた濃縮液（２００＋ｗｌ）を
シリカゲル（メルク社製、西ドイツ）カラム（４，６ｘ
６５ｍ）Ｋ流り、酢酸ｘチ／ｌ１２Ｂ、　つづいて１％
蓚酸含有酢酸エチ／Ｉ／７１で溶出した。主としてＰ−
２３９２４Ｆを含有する区分２１を集め、３００ゴの水
で２回洗浄したのち、減圧上濃縮乾固し、得られた固形
分をクロロホルム−酢酸（９：１）混液８０ｒｘｌに溶
解した。この溶液をクリ力ゲル力ラム（３，４Ｘ　５４
ｚ　）　Ｋ流し、クロロホルム：酢酸（９：１）混液１
．２ｅ、同（８：２）混液１．２１、同（７：　３　）
混液１．２ｍ”溶出シ、主としてＰ−２３９２４１ｉ’
を含有する区分（約１．５　Ｉｔ　）を集めて憾圧下に
濃縮乾固し、得ら−れた残渣をメタノール−水’（１：
　１　’）混液４００ｍ１に溶解したのちＰｒｅｐ　Ｐ
ＡＫ−５００／ｃユ。カラムを装着したＰｒｅｐ　ＬＣ
／　Ｓｙｓｔｅｍ　５００　Ａ型分取用液体クロマトグ
ラフ装置に導入し、メタノール−水（３：２）混液５ｇ
を用いて溶出した。主としてｐ−２３９２４Ｆを含有す
る区分を集めて減圧下に濃縮乾固するとＰ−２３９２４
Ｆの粗粉末１．’３　ｆが得られた。これをメタノ−／
Ｌ／：水（８：２）混液から再結晶すると黄橙色のＰ−
２３９２４Ｆの結晶約５００ダが得られた。

実施例２ 実施例１と同様の種培養液６０ｇを、可溶性澱粉４％、
デキストリン１％、脱脂大豆粉２％、チオ硫酸ナトリウ
ム０．１％、硫酸第一鉄・７結晶水０．０５％、リン酸
二カリウム０．０５％、塩化カリウム０．０３％ｐＨ６
，０からなる液体培地１２００＃を含む２００ＯＮ容タ
ンクに移植し、２４℃で６日間通気攪拌培養を行なった
。見られた培養液約１１００＃を実施例１と同様の方法
で、濾過、酢酸エチル抽出、決酸水素ナトリウム溶液へ
の転溶、酢酸エチル再抽出したのち、濃縮し、濃縮液７
００ＩＩｌを得た。この濃縮液をシリカゲル・カラム（
５，４Ｘ６５［）に流し、酢酸エチＩｖ３＃、つづいて
１％蓚酸含有酢酸エチ７し１［１？で溶出し、主として
Ｐ−２３９２４Ａ、ＢおよびＤを含有する区分２．６４
と、主としてＰ−２３９２４ｃおよびＥｌ含有すル区分
４．２４？、！：、ＥＥ、！：してｐ−２３９２４Ｆ’
Ｑ含有する区分３．Ｏｇとに分けた。Ｐ−２３９２４Ａ
、ＢおよびＤ含有画分は水洗、脱水後、酢酸エチルを留
去して得られた残渣を２００ｓｔのメタノ−μに溶解し
た。この溶液にジメチμスμホキサイド２００ｄおよび
水２００ｍ１を加え、ＰｒｅｐＰＡＫ−５００／Ｃ，Ｂ
　カラムを装着したＰｒａｐ　ＬＣ／Ｓｙｓｔｅｍ　５
００　Ａ製分収用液体クロマトグラフ装置に導入し、メ
タノ−μ−水（１：１）混液で溶出し、主としてＰ−２
３９２４ＡおよびＤを含有する区分２．５Ｅと主として
Ｐ−２３９２４Ｂを含有する区分３．１ｇとを集めた。

Ｐ−２３９２４ＡおよびＤ含有区分は上記液体クロマト
グラフ装置で再クロマトグラフしたのち、濃縮、酢酸エ
チ／し抽出、脱水、濃縮操作を行ない濃縮液５０ｇ／を
えた。これをシリカゲρ・カラム（４，５Ｘ７０ｔｆｉ
＞に流し、ジクロルメタン−酢酸（９：１）混液１．５
＃、同（８：２）混液５．Ｏｅ、（７：３）混ｉ　２　
ｇ　＋７）ｌｌ＠ｌｃ溶出Ｌ、主としてｐ−２３９２４
Ａを含有する区分１１とＰ−２３９２４Ｄを含有する区
分１．２１を集めた。Ｐ−２３９２４Ａ含有区分を３０
０ｓｔの水で３回水洗したのちジクロルメタン層を分取
して濃縮乾固し、乾固物をメタノ−Ｉｖ２００ａｌ？に
溶解し、水２００ａ＋ｔを加えて、前記と同一の条件で
分取用液体クロマトグラフ装置にかけた。Ｐ−２３９２
４Ａ含有区分を集め、濃縮してメタノ−／しを留去し、
２容酢酸エチルで３回抽出を繰返したのち、抽出液を合
わせて脱水し、濃縮乾固した。乾固物をメタノ−μに溶
解し、放置するとＰ−２３９２４Ａの結晶３００ｑがえ
らレタ。つｆｆＫＰ−２３９２４Ｄ含有区分（１，２４
？）を減圧濃縮し、濃縮液３０ｇ／をシリカゲμ・カラ
ム（３，５Ｘ５０ｃＭ）に流し、ジクロルメタン−酢酸
（９：１）混液１１、同（８：２）混液、（Ｔ：３）混
液各１ｅで順次溶出した。主としてＰ−２３９２４Ｄを
含有する区分１．４ｇを集めて減圧下に濃縮乾固し、乾
固物にメタノ−Ａ’２００ｇ／を加えて溶解した。この
溶液に水２００ｇ／を加え、前記と同一の条件で分取用
液体クロマトグラフを行ない、Ｐ−２３９２４Ｂ区分２
．７１を集めた。

この画分を減圧下にメタノールを留去して得た濃縮液１
．５＃ＫＺ容酢酸エチｐを加えて３回反復抽出したのち
、脱水し、約２５ｍ１まで濃縮放置するとＰ−２３９２
４Ｄ結晶約１１かえられた。Ｐ−２３９２４Ｂを含有す
る画分（３，１１）は室温で放置するとＰ−２３９２４
Ｂの結晶が析出した。

これを集めメタノ−μから再結してＰ−２３９２４Ｂの
結晶約３１かえられた。次に前記の主としてＰ−２３９
２４ＣおよびＥを含有する両分（４，２４）は１１の水
を用いて３回洗浄後、無水硫酸ナトリウム３０ｆを用い
て脱水し、酢酸エチμを留去して得られた残渣をメタノ
−７Ｌ／２９０ｇ／に溶解した。これに水２００ｄを加
えて前記と同一の条件で液体クロマ）グラブを繰返し、
Ｐ−２３９２４Ｆを含有する区分１．８４とＰ−２３９
２４０を含有する区分２．４１を集めた。Ｐ−２３９２
４Ｆ含有両分１．８４は約５０ｇｔまで減圧濃縮し、あ
らかじめメタノ−μに懸濁して充填したセファデックス
Ｌｕ−２０（）゛ア／Ｉ／々シア社製、スエーデン）カ
ラム（３，５Ｘ５２Ｗ）に流し、メタノ−μで溶出し、
Ｐ−２３９２４にのみを含有する区分２００ｄを集めた
。この両分を減圧濃縮し、濃縮液２０ｄに酢酸エチ／Ｌ
’　２０　＊ｔとｎ−ヘキサン２００ｇ／を加えると黄
橙色のＰ−２３９２４１の結晶性粉末的７００１１Ｉが
得られた。次に主としてＰ−２３９２４０を含有する区
分２．４４を減圧濃縮し、濃縮液１．２４に２容の酢酸
エチルを加えて３回繰返し抽出したのち、酢酸エチル層
を無水硫酸ナトリウム２０Ｆを用いて脱水し、酢酸エチ
ルを留去して得られた残渣をメタノ−μにとかし放置す
るとＰ−２３９２４ｃの粗結晶が析出した。これをメタ
ノ−μから再結晶すると、ｐ−２３９２４０の結晶！、
　５　ｆが得られた。

次に前記の主としてＰ−２３９２４Ｆを含有する区分（
３，Ｏβ）は水洗、脱水後、酢酸エチルを留去して得ら
れた残渣をクロロホルム−酢酸（９：１）混液１００−
に溶解した。この溶液をシリカゲルカラム（３，４Ｘ５
４ｆｆ）ｇ流し、クロロホルム−酢酸（９：１）混液１
ｇ、同（８：２）混液１７１！、（７：　３　’）混液
１６　ノ［Ｋ溶出Ｌ、主トしてＰ−２３９２４Ｆを含有
する区分１．８１を集め、濃縮乾固した。乾固物をメグ
ノーμｍ水（１：１）４００ｘｔに溶解し、Ｐｒｅｐ　
ＰＡＫ　−５００／”１８カラムを装着したＰｒｅｐ　
ＬＣ／Ｓｙｓｔｅｍ　５００　Ａ型分取用液体クロマト
グラフ装置に導入し、メタノ−ｐ−水（３：２）混液で
溶出し、主としてＰ−２３９２４Ｆを含有する区分（２
，４１）ｔ−集めた。

これを減圧下に濃縮するとｐ−２３９２４Ｆの粗結晶が
析出した。これをメタノ−１ｖ：水（３：２）から再結
晶するとＰ−２３９２４１’の結晶２．５１が得られた
。

実施例３ 錠剤 （１）Ｐ−２３９２４Ａ　ＩｏＯダ （２）乳糖　４７＃ （３）コーンスターチ　４０ダ （４）ハイドロキシブシピル七μロース−１１２ＭＩ（
５）ステアリン酸マグネシウム　１櫂上記の成分を常法
（湿式法）にしたがって打錠し、錠剤とする。

実施例４ 錠剤 （１）Ｐ−２３９２４Ｂ　ｌ　００Ｑ （２）乳糖　４７ｑ （３）コーンスターチ　４（ｌｑ （４）ハイドロキゾプロヒ〃セ、ル′ロース−Ｌ　１２
り１錠あたり２００ダ 上記の成分を常法（湿式法）にしたがって打錠し、錠剤
とする。

実施例５ カプセル剤 （１）Ｐ−２３９２４Ｃ１００り （２）ラクトース　１３５ｑ （３）コーンスターチ　６０ｑ （４）ステアリン酸マグネシウム　５ダ上記の成分（１
）　、　（２）　、　（３）および（４）の−を混和し
たのち、常法に従って顆粒化する。これに、成分（４）
の残シを加え、常法に従って１号ゼラチンカグセ／１／
（第１０改正日本薬局方）に封入し、カプセル剤とする
。

実施例６ カプセル剤 （１）Ｐ−２３９２４Ｄ　３００ｑ （２）ラクトース　１３５ｑ （３）コーンスターチ　６０ｑ （４）ステアリン酸マグネシウム　５ダーヒ記の成分（
１）　、　（２）　、　（３）および（４）の百を混和
したのち、常法に従って顆粒化する。これに、成分（４
）の残りを加え、常法に従ってＯＯ号ゼラチンカプセ／
Ｉ／（第１０改正日本薬局方）に封入し、カプセル剤と
する。

実施例７ 錠剤 （１）Ｐ−２３９２４Ｅ　１０（１ （２）乳糖　４７ｑ （３）コーンスターチ　４（１１ （４）ハイドロキシプロピルセμロース−Ｌ　１２”！
（５）ステアリン酸マグネシウム　１ｑ上記の成分を常
法（湿式法）にしたがって打錠し、錠剤とする。

実施例８ 錠剤 （１）］？−２３９２４１ｉ”　１００〜（２）乳糖　
４７ダ （３）コーンスターチ　４０り （４）ハイドロキシデロビ〃セルｐ−スーＩ、　１２ｍ
ｇ上記の成分を常法（ａ式法）にしたがって打鋲し、錠
剤とする。

【図面の簡単な説明】

第１図ないし第６図は生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、
Ｂ、ｃ、Ｄ、Ｅ、ｙの紫外部および可視部吸収スペクト
ルを、第７図ないし第１２図は生理活性物質Ｐ−２３９
２４Ａ　、　Ｂ　、　Ｃ，Ｄ。 Ｅ、Ｆの赤外部吸収スペクトルを、第１３図ないし第１
８図は生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ。 Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆの核磁気共鳴スベク）／１／’ｉそれぞ
へム メ輝縛　リ ヅ光袂　リ 巴 コ イ葦質　ザΣ 巴 イｍｌ樋　リ 巴 ０ｔ　？ 胃博＋Ｚ 型割跣　２ （転）蝦＠−？ 手　続　補　正　書（自発） １．事件の表示 昭和　５８年特許願第１４２３４７号 ２、発明の名称 生理活性物質Ｐ−２３９２４、その製造法および製剤３
、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　所　大阪市東区道修町２丁目２７番地名　称（２９
３）武田薬品工業株式会社代表者　倉　林　育　四　部 ４、代理人 住　所　大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号東京
連絡先（特許法規課）１１話２７ｇ−２２１９・２２１
８６、補正の内容 （１）明細書第１５頁第１０行の「て、」を「て寄託さ
れている。」に訂正する。 （２）同書第１５頁第１２〜１３行の「それぞれ寄託さ
れている。」を「寄託され、該寄託はブダベヌト条約に
基づく寄託に切換えられて、受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ−
３３８として同研究所（１’ＲＩ）に保管されている。 」に訂正する。 （３）同書第３８頁第２行の「Ｐ−６７３９」を［ＢＰ
−３３８４に訂正する。 以上 受託番号変更届 昭和５８年１り月／ダ日 ／事件の表示 昭和５８年特許願第１４２３４７号 λ発明の名称 生理活性物質Ｐ−２３９２４，その製造法訃よび製剤３
　手続をした者 事件との関係　特許出願人 住所　大阪市東区道修町２丁目２７番地名称　（２９３
）武田薬品工業株式会社代表者　倉林育四部 り代理人 住　所　大阪市淀用区十三本町２丁目１７番８５号］ 玉 〕 オ　旧寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 ６旧受託番号 ＦＥＲＭ　Ｐ−６７３９ Ｚ　新寄託機関の名称 工業技術院微生物工業技術研究所 と新受託番号 ＦＬ！ＲＭ　ＥＰ−３３８ タ　添付書類の目録 （１）新受託番号を証明する書面　１通以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１〕次の理化学的性質を有する生理活性物質Ｐ−２３
   ９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、ＥまたはＦ：（１）生理活性物
   質Ｐ−２３９２４Ａ （ａ）融点：１８６〜１８８℃ ｉ′ｂ）分子式：Ｃｌ８Ｈ工、Ｎ０７ＳＯ８５，メタノ
   −／Ｌ／） （ｄ）紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波板（ｎｍ　）　： ２２０±２．２６３±２（肩）、２７０±２゜４２０±
   １０（メタノール中）；２２１±２．　２６４±２（肩
   ）、２７０±２．４２０±１０（０，１Ｍ　ＨＣｌ−９
   ０％メタノール水中）ｉ２１６±２．２３８±２゜２７
   ７±２，５４０±１０（０，ＩＮ　ＮａＯＨ−９０％メ
   タノール水中） （ｅ）赤外部吸収スペクトμ、臭化カリウム錠、極大吸
   収を示す主要波数（ｍ’）： ３３００．２９３０．１７１０．１６６５．＋６４０゜
   １６２０．１５７０．１５４０，１５００．１４６０゜
   １４２０．１３８０，１３３５．１２８０．１２４０゜
   １２００、　１１Ｂ０．　１１１０．　１０４０．　１
   ０００゜９７０、９００．　８６０．　８００ （２）生理活性物質Ｐ−２３９２４Ｂ （ａ）融点：２００〜２０２℃ （ｂ）分子式二〇〇、■３、Ｎ０８Ｓ Ｏ，５１、メタノ−／Ｉ／） （ω紫外部および可視部吸収スペクトμ、極大吸収を示
   す波長（ｎｍ　）　： ２２０±２，２６２±２（肩）、２６８±２゜３０８±
   ２．４２０±１０（メタノール中）；２２０±２．　２
   ６１±２（肩）、２６８土２゜３０８土２．　４２０±
   １０（０，１Ｎ　ＭＣｌ−９０％　メタノ−μ水中）ｉ
   ２１６土２．２３７±２゜２８４±２．５４０±１０（
   ０，ＩＮ　ＨａＯＨ−９０％メタノ−μ水中） （ｅ）赤外部吸収スペクトル、臭化カリウム錠、極大吸
   収を示す波数（ＣＩＩＩ）： ３３００．２９５０．１γ２５．１７０５．１６６０゜
   ＋６３０．１５９０，１５４０．１４６０，１４２０゜
   １３７０．１３３０．１３００．１２７０．１２１０゜
   １１９０．１１７０．１１３０．１１００，１０６０゜
   ＋０２０．　９８０．　９５０．　８９０．　８６０゜
   ７９０、　７６０．　７００ （３）生理活性物質Ｐ−２３９２４０ （ａ）融点＝１８７〜１９０℃ （ｂ）分子式：Ｃよ。Ｈよ、Ｎ０８Ｓ （ｃ）比旋光度：〔α１２３−９３°　±１０’（ｃ＝
   Ｄ ０．５＋　、メタノ−／Ｌ／） （ｄ）紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波長（ｎｍ）： ２２１±２．２６０±２（肩）、２６５±２゜３０６±
   ２．　４２０±１０（メタノール中）■２２１±２，２
   ６０±２（肩）、２６６±２゜３０６−ｔ：２．４２０
   ±１０（０，１ＮＨＣＩ−９０％メタノ−ｐ水中）＋２
   １６±２，２３６±２゜２８６±２．　５４０±１０（
   ０，ＩＮ　ＮａＯＨ−９０％メタノ−μ水中） （ｅ）赤外部吸収スペクトル、臭化カリウム錠、極大吸
   収を示す主要波数（ｍｌ）： ３４００．３０７０，２９４０，１７２０．１６８０゜
   １６３５．１６００．１５４０，１４９０．１４６０゜
   １４２０．１３８０．１３５０．＋３１０．１２５０゜
   ＋２２０．１１８０．１＋２０．１１００．１０４０゜
   ９９０、９３０．　８８０．　８２０．　８００゜０５ （４）生理活性物質Ｐ−２３９２４Ｄ （ω融点：２０５〜２０７℃ （ｂ）分子式：Ｃｌ８Ｈ工。Ｎ０８Ｓ Ｏ，５１、メタノ−／Ｌ／） （ａ）紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波長（ｎｍ）： ２２０±２．２７１±２，３０６±２．４２０±１０（
   メタノ−μ中＞　；　２２０±２．２７１±２゜３０６
   ±２．４２０±１０（０，ＩＮ　ａｃｌ−９０％メタノ
   ール水中）、２１６±２，２３４±２゜２９９±２．　
   ５４０±２０（０，１ＮＮａＯＨ−９Ｑ　％メタノール
   中） （ａ）光外部吸収ヌベク）／Ｌ’、臭化カリウム錠、極
   大吸収を示す主要波数（ｃａｔ−’　）　：３４００、
   　３３００．　２９６０．　＋７２０．　１６７０゜１
   ６３５、　１６１０．　１５４０．　１４４０．　１３
   ８０゜＋３４０．　１３００．　１２６０．　１２２０
   ．　１２０５゜＋１３０．　１１００．　１０６０．　
   １０００．　９００゜８７０、８２０．　８００．　７
   ８０．　６９０（５）生理活性物質Ｐ−２３９２４Ｆ （ａ）融点＝１７４〜１７６℃ （ｂ）分子式：Ｃ０８■０．Ｎ０８Ｓ （ｃ）比旋光度：〔α）’３−８６°　±１０°　（ｃ
   −０，５１ツタノー／Ｌ／） （ｄ）紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波長（ｎｍ）： ２２１±２．２６３±２（肩）＋　２７１±２゜４２０
   ±１０（メタノール中）＋２２１±２゜２６４±２（肩
   ）、２７１±２．４２０±１０（０，１ｕＨＣＩ　−９
   ０％メタノール水中）ｓ　２１６±２゜２３８±２．　
   ２８７±２．　５４０±１０（０，１ＮＮａＯＨ−９０
   ％メタノ−μ水中） （ｅ）光外部吸収スペク［ル、臭化カリウム錠、極大吸
   収を示す主要波数（１）： ３５５０．３３００．３０Ｂ０，２９５０．＋７２５゜
   １６６０．１６４０，１６１０．１５７０，１５４０゜
   １４９０．１４５５，１４２０．１３Ｂ０．＋３２５゜
   １３００．１２４０．１２１０．１＋８０．１１２０゜
   １０８０．１０４０．１０１０．　９４０．　９２０゜
   ８６０、　８２０．　８００．　７７０．　７００（６
   〕生理活性物質Ｐ−２３９２４Ｆ （ａ）融点＝１９１〜１９５℃ （ｂ）分子式：　Ｃ１９■２１　ＮＯ９８（ｃ）比旋光
   度：〔α〕曾−９１°±１０°　（ｃ＝０．５１　、メ
   タノ−／′Ｖ） （ｄＪ紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波長（ａｍ）： ２２２±２．２６２±２（肩）、２６８±２゜３０８±
   ２．４２０±１５（メタノ−ｐ中）；２２１±２．　２
   ６２±２（肩＞、２６７±２゜３０７土２．　４１５±
   １５（０，１Ｎ　ＨＣＩ　−９０％メタノ−１Ｖ水中）
   ；　２２２±２（肩）、２３６±２゜２７０±２．　５
   ４２±２０（０，ＩＮ　ＮａＯＨ−９０％メタノール水
   中） （ｅ）赤外部吸収スペクト〜、臭化カリウム錠、極大吸
   収を示す波数（ｉｌ）Ｈ ３３００、＋７２０．１６８０．１６６０．１６３０゜
   ＋６００．１５３０．１４９０．１４６０．１４２０゜
   １３８０．１３３５．１３１０．１２６０．１２２０゜
   １！９０，１１３０．１＋００．１０３０．１０００゜
   ９８０、　９５５．　８７０．　７００〔２〕ストレズ
   トミセヌ属に属し生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ　、Ｂ
   、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＰを生産する能力を有する
   微生物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質ｐ−２
   ３９２４Ａ、Ｂ。 Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／ｉたはＦを生成蓄積せしめ、これを
   採取することを特徴とする生理活性物質Ｐ−２３９２４
   Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦの製造法。 〔３〕生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ。 Ｄ、Ｅおよび／またはＦを含有する線維化抑制剤。