JPS5974992A - 生理活性物質ｐ−２３９２４，その製造法および製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、１０トコラーゲン・プロリン水酸化酵素阻害
作用、コラーゲン生合成抑制作用などを有する新規な生
理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ。

Ｃ，Ｄ、Ｅ、そのＮａ法および製剤に関する。

１０トコラーゲン・プロリン水酸化酵素は、動物細胞内
のりボゾームで合成されたプロトコラーゲン中のプロリ
ンを特異的に水酸化する酵素であり、コラーゲン生合成
を律速する重要な因子の一つである。従来、木（ｉ′Ｉ
素活性金阻害するものとしては、鉄キレータ−（例えば
α、α′−ジピリジルなど）、Ｓ　Ｈ酵素阻害剤（例え
ばｐ−クロロマーキューリーベンゾエートなど）、ある
種の重金属（例えばＣｕ”＋、　Ｚｌｌ”−など）など
が知られているが、これらの物質はいずれもコラーゲン
および非コラーゲン性蛋白質の生合成を非特異的に阻害
するために副作用が大きく、医薬とはなυ得なかった。

非コラーゲン性蛋白質の生合成を阻害せず、コラーゲン
の生合成のみを特異的に１舅害する物質が見いだされれ
ば、その物質は動脈硬化症、肝硬変症、強皮症、ケロイ
ド、リューマチ性関節炎、肺線維症などのコラーゲンの
過剰蓄積を伴う臓器線維症を含めた疾病の予防治療に・
使用することができる。

本発明者らはプロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素活
性を阻害する物質を微生物代間１生産物中に求め、鋭意
検索を行なった結果、コラーゲンの生合成を特異的に抑
制する新規な生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ　、Ｃ
、ＤおよびＥを見いだし、これに基づいてさらに研究し
た結果、本発明全完成したつ 本発明は、（１）生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ。

Ｂ、Ｃ，ＤまたはＥ、（２）ヌトレブトミセス（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅ８）　Ｊｇに属し生理活性物質Ｐ−２
３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄおよび／またはＥを生産するｒ
ｊＨ力を有する微生物を培地に培養し、培養物中に生理
活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ。

Ｄおよび／またｅよＥｉ生成蓄積せしめ、これを採取す
ることを特徴とする生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ
、Ｃ，Ｄおよび／まだはＥの製造法および（３）生理活
性物質Ｐ−２３９２４Ａ’、Ｂ、Ｃ，Ｄおよび／または
Ｅを含有する線維化抑制剤であるう水明細書においては
、生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄおよび／
またはＥを「生理活性物管−′ＬＰ　−２３９２４ｊあ
るいは単にｒ　Ｐ−２３９２４Ｊと総称することもある
。また、生理活性物質Ｐ−２３５１ノ４Ａをｒｐ−２３
９２４Ａｊと、生理活性物質Ｐ−２３９２４ＢをｒＰ−
２３９２４Ｂｊと、生理活性物質Ｐ−２３９２４Ｃをｒ
ｐ−２３９２４ＣＪと、生理活性物ＮＰ−２３９２４Ｄ
をｒＰ−２３９２４ＤＪと、生理活性物質Ｐ−２３９２
４Ｅをｒ　ｐ−２３９２４ｂＪとそれぞれ１１３称する
こともある。

本発明方法に１吏用される微生物は、ストレプトミセス
属に属し、生理活性物質Ｐ−２３９２４を生産する能力
を有する微生物（以下、ｒｐ−２３９２４生産菌」と略
卦することもある。　）であればいずれでもよいっ その具体例としては、たとえば沖縄県石垣島の土壌から
分離されたヌトレブトミセス・エスピー隘２３９２４株
（以下、「凪２３９２４株」と略称することもある。）
が挙レアられる。

１４２３９２４株について、インターナショナル・ジャ
ーナル・オブ・システマテイツク・”ゝバクテリ〕オロ
ジー（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　　、Ｔｏｕｒｎｑ
、１　　ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ　）、　ｌ　６巻、３号。

３１３〜３４０頁（１９６６年）記載の方法に準じて検
討した性状は下記のとおりである。なお、ξ培地上の所
見は、特に記載しないかぎり、２８′Ｃにおいて１４日
間培養し、明察したものである。

（Ｉ）形態的特徴 基土菌糸よシ、らせん状、時により不完全なら１、）ん
伏、開放型らせん状、あるいは鉤状に短かい胞子鎖形成
菌糸を単純分枝状に伸長し、輪生枝は認められない。成
熟した胞子鎖は一般に５〜１０個の胞子の連鎖を認める
。胞子は円筒形ないし楕円形で大きさは０．４〜０．７
　Ｘ　０．７〜１．２μ、その表面は平滑である。

（１１）各種培地上での生育状態 各種培地における生育の程度（Ｇ）、気菌糸（ＡＭ）の
生育および色調、可溶性色素（ＳＰ）の有無および色調
などについて以下に列記する。

なお、角の記載について（）で示す標準色調記号はコン
テイナー・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎ
ｔａｉｎｅｒ　　　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　　ａｆＡ
ｍｅｒｉｃａ　）　　（７，）す・カラー・ハーモニー
・マニュア／Ｉ／（Ｔｂｅ　　Ｃａ］−ｏｒ　　Ｈａ、
ｒｍｏｎｙ　　Ｍａ、ｎｕａ］、　）第４版、１９５８
年によった。

（７）シュークロース・硝酸塩寒天培地（Ｇ）：貧弱 ＣＡＭ）：貧弱、淡灰褐色（３ｇｅ　）（ＳＰ）：なし くイ）グルコース・アスパラギン寒天培地（Ｇ）：貧弱 （ＡＭ）：なし くＳＰ）：なし くつ〕グリセリン・アスパラギン寒天培地（Ｇ）：なし くニ）ヌターチ・無機塩寒天培地 （Ｇ）：豊′ｇ （ＡＭ）：卯富、粉状、灰色（３ｉｈ）（Ｓ：Ｐ）：黄
出色（４ｇｃ） Ｈつチロシン寒天培地 （Ｇ）：貧弱 （ＡＭ）：貧弱、灰色（３ｂＦＬ） （ＳＰ）、：淡黄赤色（４ｅ　Ｆｌ、　）帖）栄養寒天
培地 （Ｇ）：中程度 （ＡＭ）：なし くＳＰ）：なし く至）イースト・麦芽寒天培地 （Ｇ）：中程度 （ＡＭ）：貧弱、灰色（３ｆｅ） （ＳＰ）：淡黄褐色（４ｎｅ　） 汐）メ　−　ト　ミ　−　ル身ど天ｊ格」也（Ｇ）：中
程度 （ＡＭ）：貧弱、淡灰掲色（３ｔ＜ｅ　）（ＳＰ）：な
し く　ｍ　）生理的性質 （ア）生育温度範囲＝１５〜３５゛Ｃ （イ）ゼラチンの液化（グルコース・ベフ゛トン・ゼラ
チン培地、２４℃、３個間）：陽性（弱）（つ）殿粉の
加水分解二陽性 に）脱脂乳の凝固・ペプトン化：共に陰性Ｃう硝酸塩の
還元性：陰性 （ソＪ）メラニン様色素の生成： ヂロゾン基天培地：疑陽性 ペプトン・イースト鉄塞天培地：陰性 （ＩＶ）炭素源の同化性（ブリードハム・ボッ１リープ
寒天％”、ｊ地） Ｌ−アフビノーヌ　　士　　イノシトール　　−Ｄ−キ
シローヌ　　　廿　　Ｌ−ラムノース　−Ｄ−グルコー
ス　　　廿　　ラフィノース　　一１〕−フラクト−ス
　　±　　Ｄ−マンニット　−シュークロース　　　士
　　対　照　　　　　−（注＞　：　１＋−：豊富な生
育、±：僅かに生育、−二生育せず 」−記形即的特徴からみて、本菌株がストレプトミセス
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）　Ｋに属することは明
らかである。

上記ストレプトミセス・エヌビー＆２３９２４株は、昭
和５７年９月２０日に財団法人発酵研究所（Ｉ　Ｆ　Ｏ
）に受託番号工Ｅ’０　１４２０５として、また本微生
物は昭和５７年７０月　ハ日に通商産業省１恭技術院微
生物工業技術研究所（ＦＲ工）に受託番５ｊＦＥＲＭ　
　ｐ−乙７３７　としてそれぞれ寄託されている。

一般に、ストレプトミセス属菌はその性状が変化ｌ−や
すく、たとえばＸ線照射、紫外線照射、放射線照射１人
工変異剤を用いる人工変異手段などで容易に変異し得る
うこのような変異株であっても、Ｐ−２３９２４の生産
能を有するものはすべて本発明の方法に１史用し得る。

Ｐ−２３９２４牛産菌の培養にあたっては、培地は液状
でも固状でもよいが通常は液体培地による振盪培養また
は通気攪拌培養が便利である。培地は放線菌の生育に適
し、Ｐ−２３９２４を生産させ得るものであればどのよ
うなものでもよい。

すなわち、炭素源としては例えばグルコ−７、ラクトー
ス、グリセリンｌ　＃粉１シュークロース。

デキス）ＩＪン、糖蜜、有機酸類（例、酊１１シ、酒石
酸など）など、窒素源としては例えｔｌ：べブトン。

カザミノ酸（ディフコ社ＩＨ）、ｐ＋−ＺアミンＡ（シ
ェフイールド社製）などの蛋白加水分解物、酵ｆυエキ
ヌ、麦芽エキス、大豆粕、コーン・ステイープリカー、
アミノ酸類（例、アスパラギン酸。

グルタミン酸など）、各種アンモニウム塩（例、１流酸
アンモニウム、塩化アンモニウムなど）など゛が用いら
れる。無機塩として各種リン酸塩（例、第一リン酸ナト
リウム、第ニリン酸カリウムなど）。

（ｉｋ　酸マクネシウム、塩化ナトリウム、硫酸１−４
などの金属塩、車金属塩（例、硫酸マンガン、硫酸亜鉛
など）など？：添加してもよく、まだ菌の生育を促進す
る目的でビタミン類（例、ビタミンＢｌ＋パントテン酸
カルシウムなど）、核酸関連化合物（例、アデニン、ウ
ラシルなど）などを添加してもよい、また培養方法およ
び培養条件によっては、シリコーン、ポリプロピレン・
グリコ−／Ｖ誘導体〔例、アクトコ−）ｖ（武田薬品工
業株式会社製〕など〕、大豆油なとの消泡剤を培地に加
えることにより、Ｐ−２３９２４の生産量全増大させる
のに効果的な場合もある。

１１〜養温度、培養時間、培地の液性などのｗ１養条件
は使用する１ｚ“々生物の種類、培地組成な°どによっ
て変動するが、最終的にはＰ−２３９２４の生産量が最
大となるように過当に選択、調節されればよく、多くの
場合好気的茶件丁に約２０〜４０゛Ｃでおよそ２４時間
〜２４０時間培養し、この間培地の液性ｆ：ｐＨ約４〜
９何近に保つのがよい９このようにして得られた培養Ｙ
Ｃ（から生理活性物質Ｐ−２３９２４を採取するにあた
って（」、本物質の性状に基づいて、種々の方法全適当
に組み合わせるととによって容易に行ないうる。すなわ
ち、例えば、中性ないし微酸性で、水と混和しない有機
溶媒、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホμム、
ゲタノール、ベンゼン、トルエン、ジエチルエーテル、
メチレンクロフィト、メチルインブチルケトンなどによ
る抽出、活を生炭、シリカゲＡ〕、アルミナなどを用い
る吸ｊｆｌクロマトグラフィー、セファデックヌカラム
によるゲル：１ｒ３ｊ尚、イオン交搏伺脂によるイオン
交換クロマトクラフィーなどである。これらの手段ｋ　
Ｊｌ掬当に組み合わせて１吏川することにより、生理活
性物質Ｐ−２３９２４は培養物から結晶あるいは結晶性
粉末として単離されろ。

後′３７Ｉ＜の実施１例２で得られた生理活性物質Ｐ−
２３９２４の諸性質を以ｒに示す。

（１）坤化学的１ご１：質 （Ｒ，）Ｆ、へ１１（点：Ａ　　１８６−＋８８″ｃ；
Ｂ　　２００−２０２’Ｃ；ｃ　　１８７−１９０℃；
■〕２０５−２０７’ＣＩＥ　　１７４−１７６℃（ｂ
）元素分析値二 （ｃ１分子Ｆｉ（（マス・スペクトルによる）および分
二ｒ式： ％式％： （Ｃ＝）溶舶゛１生：Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂおよび１〕
はいずれもジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミ
ド、ピリジン、５％炭酸水素ナトリウム水に易溶。メタ
ノール、ジオキザン、酢酸に可溶。水、アセトン、クロ
ロホルム、　ｎ　−２０ベキ−リフ２石油エーテルに難
溶ないし不溶。

Ｐ−２３９２４０はジメチルスルホキシド。

ツメ１Ａ／ホルムアミド、ピリジン、５％伏酸水素ナト
リウト水に易溶。メタノール、ジオキザン、アセトン、
酢酸に可溶。水、クロロホルム、丁１−ヘキサン、石油
エーテルに難溶又は不溶、。

Ｐ−２３９２４Ｅはジメチルスルホキシド。

ジメヂルホルムアミド、ピリジン、５％炭酸水素ナトリ
ウム水、メタノールに易溶っジオキサン、酢酸に可溶。

水、クロロホルム、１１−ヘキサン、石油エーテルに離
溶又は不溶。

（ｆ）紫外部および可視部吸収ヌベクトル：第１〜第５
図に示す。各溶Ａｌｌに溶解した直後の（°値大記の第
１表の通りである。なお、第１〜第５図において一一一
はメタノール中での７Ｊ！！Ｉ定結果を、−−−−１’
ｊ：０．１Ｎ　ＨＣｌ−９０％メタノール水中での測定
結果を、−−−一一一−−−ｔ」、Ｏ，Ｉ　Ｎ　ＮａＯ
Ｈ−９０％メタノール水吊テノ測定結果をそれぞれ示す
っ （以下余・自） ＋ｇ）赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠によシ測
定（−た赤外線吸収スペクトルを第６〜第１０図に示す
。極大吸収を示す主要な波数は次のとおりである。

＜　ｌ　）Ｐ−２３９２４Ａ ３３００．２９３０，１７１０．＋６６５．１６４０゜
１６２０．１５７０．１５４０．１５０（１，＋４６０
゜１４２０．１３８０，１３３５．１２８０．１２４０
゜１２００．１１８０，１１１０，１（１４０，１００
０゜９７０、　９００．　８６０．　８００喜乙１片参
Ｍ、 （ｉｉ）Ｐ−２３９２４Ｂ ３３００’、２９５０，１７２５，１７０５，１６６０
゜＋６３０．１５９０．１５４０．１４６０．１４２０
゜１３７０．１３３０，１３００，１２７０．１２＋０
゜１１９０．１＋７０．１１３０．＋１００．１０６０
゜１０２０、　９８０．　９５０．　８９０．　８６０
゜７９０、　７６０．　７００ 纂７膏参烈 （ＩＩＩ　）　Ｐ　−２３９２４Ｃ ３４００、　３０了０．　２９４０．　１７２０．　１
６８０゜１Ｇ３５，１６００，１５４０，１４９０，１
４６０゜１４２０．１３８０．１３５０，１３１０，１
２５０゜１２２０．１１８０．１１２０．　　＋１００
．１０４０゜９９０、　　９３０．　　８８０．　　８
２０．　　　Ｂｏｏ。

了０５ ＆４２掲−９翼、 （ＩＶ）Ｐ−２３９２４Ｄ ３４００、　３３００．　２９６０．　１７２０．　　
＋６７０゜１６３５、　１６１０．　１５４０．　１４
４０．　１３Ｂ０゜＋３４０．　１３００．　１２６０
．　１２２０．　１２０５゜Ｎ３０．　１１００．　１
０６０．　１０００．　　９００゜８７０、　　８２０
．　　８０［）、　　　７Ｂ０．　　６９０壽Ｚ］ハ卑
Ｊ怪、 （Ｖ）Ｐ−２３９２４Ｅ ３５５０、　３３００．　３０Ｂ０．　２９５０．　１
７２５゜＋６６０．　１６４０．　１６１０．　　＋５
７０．　１５４０゜１４９０、　１４５５．　１４２０
．　１３Ｂ０．　１３２５゜１３００、　　＋２４０．
　１２１０．　１１８０．　１１２０゜１０Ｂ０．　　
＋０４０．　１０１０．　９４０．’　　９２０゜（１
６０，８２０，８００，７７０，７００１１θ１ｆｌ孝
讃、 ｏ−１）呈色反応：Ｐ−２３９２４はいずれも塩化第二
鉄反応、アルコ−＃性酊酸マグネシウム反応陽性９ ニンヒドリン反応、エールリッヒ反応陰性。

（１）性状：Ｐ−２３９２４はいずれも酸性脂溶性であ
り、黄色ないし黄橙色又は橙黄色の結晶、結晶性粉末あ
るいは粉末を示す。

ｌ　ｆｊ）　Ｍ　磁気共鳴メペクトル＝４００メガヘル
ツ、ジメチル−ｄ６　ヌルホキシト中で測定したスペク
トルを第１１〜１５図に示す。特′徴的ビークを以ｒに
示す。

（１）Ｐ−２３９２４Ａ １　　　ａ　ＤＭＳＯ−ｄ６　ｐｐｎｎ：１．８６（３
Ｈ，ｑ　）　、２．０９（３Ｈ，ｃｌ、、、Ｔ＝１．６
Ｈｚ）、２．７１（ＩＨ，ｒ（ｄ、、Ｔ＝８．８゜１３
．６Ｈｚ）、２．９１（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝５．０，１３
．６Ｈｚ）。

３．６６（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１２．９Ｈｚ）、３．７８（
１）Ｊ、ｄ。

Ｊ＝１２．９Ｈｚ）　、３．９６（３Ｈ出、４．４７（
ＩＨ，ｄ拍２’　　Ｊ＝５．［ｌ、８．３，８．８Ｈｚ
）、６．８９（ＩＨｊｑ、、Ｔ　＝Ｌ６Ｈ７）。

７．０９（ＩＨ，ｓ）、８．１８（ｌＩｉ、ｄ、Ｊ＝８
．３Ｈｚ）。

１２．４０（ＩＨ，ｓ） 賽／／］Ａ希朋、 （ｉｉ）Ｐ−２３９２４Ｂ δＴ）ＭＳＯ−（１６ｐｐｍ＋　　１．８６（３Ｈ，ｓ
）、１．９５（３１１，ｓ）、２．７０（ＩＨ，ｄｄ、
Ｊ＝８．８，１３．７１（ｚ）。

２．８９（ＩＬｄｄ、Ｊ＝４．９　、１３．７Ｈｚ　）
　、　３．６５（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝Ｉ３．１Ｈｚ）、３．
７７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝（ＩＨ，ｓ）、８．１８（ＩＨ，
ｄ、Ｊ＝８．ＩＴ（Ｚ）、１２．５９（ＨＴ、ｒ３） 筈／λ図＋郡、 （ＩＩＩ　　）　Ｐ　−２３９２４Ｃ δ′　］）ＭＳＯ−％、　　ｐｐｍ：　　　１．８５　
＜　３Ｈ，８）　　、　２．７１（Ｉ　Ｈ、（１（１、
Ｊ　＝　８．８　ｚ　Ｉ　３．７　Ｎ７　）　＋　２．
９１　（Ｉ　Ｈ。

ｄｄ、、Ｊ＝４．９，１３．７Ｈｚ）、３．６６（ＩＨ
，ｄ、Ｊ＝１２．９Ｈ７）、３．７７（ＩＨ，ｄ　、Ｊ
＝１２．９Ｈｚ）、ａ、ｄａ人ら （３Ｈ，ｓ）、３．９５（３Ｈ，ｓ）、４．４７（ＩＨ
，ｄｔ−；ｒ＝４．９，８．１．８．８Ｈｚ）、６．２
６（ＩＨ，ｎ）、７．１５（＋Ｈ１臼）、８．１８（Ｉ
Ｈ，ｃｌ、、Ｔ＝８．１Ｈｚ）。

１２．７３（ＩＨ，ｅ） １　壽７３国参版 （ｌｖ　）　　Ｐ　−２３９２４Ｄ δＤＭＳＯ−ｃｌ、６　ｐｐｍ：　　１．８５　（３Ｈ
、ｒｌ）　、　１．９４（３Ｈ−）　＋　２−７３　（
ｌ　Ｈ、ｄ　ｄ　、Ｊ−８−８、ｌ　３．５　Ｈｚ）　
。

２．９２．（ＩＨ，ｄｄ、、Ｊ＝４．８，１３．５Ｈｚ
）、３．６４（ＩＨ，（１，Ｊ＝１２．８Ｈ２）、３．
７６（ＩＨ，ｄ　、Ｊ＝、ｕｕ １２．８Ｈｚ）、４．００（３Ｈ，ｑ）、４．４８（Ｉ
Ｈ，ｄＥ−Ｊ＝４．８，８．１．８．８Ｈｚ）、７．０
３（ＩＨ，Ｉ：Ｉ）、８．１７＜　ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８．
ＩＨｚ）、＋２．７９（＋Ｈ，θ）ｉ岑／舖ヤ１冬− （ｖ　　）ｐ−２３９２４Ｅ Ｊ　１）ＭＳ＋Ｊ−ｄ６ｐｐ＋ｎ：　ｌ、Ｑ５（３Ｈ、
Ｏ）　、　２．７１（ＩＨ，ｄａ、Ｊ＝８．５，１３．
７Ｈ１）、２．９０（ＩＨ。

ｄｄ、Ｊ＝　４．９　＋　ｌ　３．７　ＨＺ　）　、３
．＋３７　（Ｉ　Ｈ、ｄ　、　Ｊ　＝１３．１Ｈｚ）、
３．７９（ＩＨ，ｄ　、、１’＝１３．１Ｈｚ）、３．
９８Ｒ）、６．８２（ＩＨ，ｔ、Ｊ＝２．２Ｈｚ）、７
．１５（ＩＨ，ｓ）。

０．１８（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝Ｑ、ＩＨｚ）、１２．２９（
ＩＩ、ｓ）薯／を国中λ（ （ｋＪ　７・、’ｊ　ＩＩクロマトグラフィーのＲｆ値
：　シリカゲル・プレー１（メルク社製、商品番号’）
７２９）お↓び逆相系ＨＰ　Ｔ　Ｌ　Ｃプレート、■マ
ｐ−Ｂ（メルク社製、商品Ｒ９１３７２５）上でのＲｆ
値は下記の通シであるう 上記の如き理化学的性質を示す化合物は知られておらず
、Ｐ−２３９２４は新規な物質と考えられる。

上記の理化学的諸性質から、Ｐ−２３９２４の推定＋１
・７進式は以Ｆに示される。

Ｐ−２３９２４は遊離のカルボキシ基を有するので、塩
を形成することができる。該塩を形成するには、自体公
知の方法が用いられる。、、該塩としてはたとえばカル
シウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、ナトリウム塩
、カリウム塩、マンガン塩、鉄塩、銅塩、亜鉛塩などが
挙けられる。

Ｐ−２３９２４の生物学的性質を以Ｆに示す。

（ａ）１０トコラーゲン・プロリン水酸化酵素阻害作用
・阻害活性の測定は■、工、　Ｋｉｖｉｒｒｉｋｏら訃
よびＪ、　Ｈａｌｍｅらの方法（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　Ｂｉｏｌｏｇｉ　−ｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　
　２４２．４００７　（１９６７）およびＢｉｏｃｈｉ
ｍｉｃａ　　　　ｅｔ　　　　ＢｉｏｐｈｙｓｉｃＦＬ
　　　Ａｃ　Ｉ、ｔ　　　　１９８　　。

４６０（１９６７））に準じて、鶏胚より調製した部分
精製酵素標品を使用し、（Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇ］、ｙ）
５・４ＨユＯ（蛋白質研究奨励金製、大阪）を基質とし
て、Ｒ，Ｅ、　Ｒｈｏａｄｓ　らの方法（Ｍｅｔｈｏｄ
ｐ　　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　　ＸＭＩ　Ｂ、　　
３０６（１９７１）　）に準じて行なったっ不法によシ
部分精製酵素１００　ｔｌｇ（蛋白質として）の活性を
５０％阻害するのに必要なＰ−２３９２４の濃度は下記
の通りであった。

Ｐ−２３９２４Ａ：６．７ＸＩＯＭ Ｐ−２３９２４Ｂ：’９．５ｘｌＯＭ Ｐ−２３９２４Ｃ：５．７Ｘ１０　　ＭＰ−２３９２４
Ｄ：２．７Ｘ１０　　ＭＰ−２３９２４Ｅ：２．１ＸＩ
ＯＭ 上記の結果から明らかなように、Ｐ　−２３９２４は顕
著なプロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素阻害作用を
有する。

（ｂ）コラーゲン生合成抑制作用：　Ｔ、ＩｐｈＪ、ｍ
ａｒｕらの方法ＣＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌａｐ；ｙ　　３　ｌ　。

９１５　　（１９８２））Ｋ準じて、Ｐ−２３９２４を
１日１回、６Ｆ（１７４’Ｊ、ＳＤ−系ラット（雌、３
週令）の腹腔内に投与し、子宮のコフーゲン量および非
コフーゲン蛋白ｒＲ量を対照群と比較した。以下の第２
表に示したようにＰ−２３９２４はそれぞれコラーゲン
の生合成を選択的にかつ有意に抑制【７た。

（以下２ｔ−シｒ） １）開昭５９−７４９９２　（９） ※Ｉｌｕ害度＜　％　）　＝　、Ｃ”！二””’−−Ｘ
　＋　００（Ｆｌ）　−（Ａ） ※※　非コラーゲン１生蛋白質量＝全蛋白量−コラーゲ
ン尺 ※※※　エストフジオー／”−１７βは、５％エタノー
ル含有生理食塩水に溶解した。

尚、実験は１群１０匹のヲッ）ｆ：ｆ吏用した。

Ｐ−２３９２４の勝、１生ｉｔ＜ｅ　（Ｌ　Ｄ５０値（
ラット、■腔内投与）〕を以下に示ずつ Ｐ−２３９２４Ａ：　１００−２００’ｙ／Ａ：ｑ。

Ｐ−２３９２４Ｂ：５Ｏ−１００ｑ／＃ｑ、ｐ−２３９
２４Ｃ：　ｔｏｏ−２０１Ｊｌｎ９．／ｋｑ、Ｐ−２３
９２４Ｄ　：　４００ｗｙ／ｋｑＪａ、Ｊ＝、　Ｐ−２
３９２４Ｅ：約５０ツ／ｋｇ 上記したように、ｐ−２３９２４は、プロトコフーゲン
・プロリン水酸化酵素阻害作用および選択的なコラーゲ
ン生合成抑制ｆ’Ｆ用を有するので、例えば生化学的試
薬あるいは動物組織の線維化抑制剤などとじで有用であ
る。

すなわち、ｐ−２３９２４は、哺乳動物（ウサギ、ラッ
ト、マウス、イヌ、ネコ、人など）の臓器線維症の予防
・治療剤としてたとえば肺線維症。

肝硬変症、＋ｉ１を硬化症、動脈硬化症２強皮症、骨髄
線維症、１ρＬ’ｌＥ関節炎などの予防・治療のために
用いられろう Ｐ−２３９２４の投与量は対龜疾患、症状、投与対象、
投与方法によって異なるが、臓器線維症の予防・治療剤
として投与する場合は成人１人当り１日約１０〜＋００
０Ｍｙを１〜３回に分けて投与される。

Ｐ−２３９２４を投与するにあたっては、それ自体ある
いはｉｆｆ宜の薬理的に許容される担体、賦形剤、希釈
剤と混合し、粉剤、顆粒剤２錠剤、カプセル創、注射剤
などの剤型で経口的または非経′１ （例、ヒドロキシ７”ロピルセルロース、ヒドロギシブ
ロビルメチルセルロース、マクロゴールなト）。

Ｍ　＃／ｒｌｊ　＜例、デンプン、カルボキシメチルセ
ル■−１−スカルシウムなと）、賦形剤（例、乳糖、デ
ンプンなと）、滑沢剤（例、ステアリン酸マグネシウム
、タルクなど）などを適宜配合することができる。

また、非経口製剤、たとえば注射剤をｉｌＪする際には
、等張化剤（例、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マ
ンニド−μ、塩化ナトリウＪ・など）。

防１＆’６７ｊｌＪ　（例、ベンジルアルコール、クロ
ロブタノ−ρ、パフオキシ安息香酸メチル、パラオキシ
安息香酸プロピルなど）、緩衝剤（例、リン酸塩緩衝液
、酢酸ナトリウムＭ衝液など）など全適宜配合すること
ができる。

ｐ−２３９２４は、生化学的試薬として、たとえば動物
の培養細胞におけるコラーゲン生合成のｌＸ１１害剤と
しで、あるいはプロトコラ・−ゲン・プロリン水酸化酵
累活注に対するｌ持具的１！＋１害剤として有効に利用
できる。

以下に本発明を実施例によシさらに其体的に説明する。

培地のパーセントは、爪ＪＫ／容斌パーセントを示す。

実施例１ ヌトレプトミセス・エスピーＬ２３９２４（工Ｆ０　１
４２０５．ＦａＲＭ　ｐ−に７３ノ）をグルコース２．
０％、グリセリン１．０％、生大豆粉０．５％、コーン
・ステイープ・リカー０．５％、ポリペプトン０．３％
、塩化ナトリウム０．３％、伏酸力／Ｉ／シウム０．５
％、ｐＴ（７，０からなる液体培地４００　ｍｌを含む
２ｅ容坂ロフラスコ５本に接種し、２８′Ｃで２１」間
往復振肘培養して培養液約２ｅを得た。この培養液を上
記と同一の培地１００ｅを含む２００ｅ容タンクに移し
、２８℃で２日間、通気攪拌培養した。得られた培養液
６０ｅを可溶性ｉｌ役粉４％、脱脂大豆粉２％、チオ硫
酸ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、
リン酸二カリウム０．０５％、塩化カリウム０．０３％
（ｐＨ６，０）からなる液体培地＋２００＃を含む２０
０口ｌタンクに移植し、２４℃で５日間通気（Ｗ拌培養
を行なった。得られた培養液約１１５０ｇに、トプコパ
ーフィ）’３４（束興パーフィト工業株式’Ａ　社製）
　１５　ｋｇを加え、ハイフロヌーパーセル（ジョンズ
・マンビル社製、米国）３４Ａｇをフ０レコードしたフ
ィルタープレスを用いて画法およびｌ固形物を濾過し、
ろ液約＋　０００　ｅを得たつ菌体および固形物は水１
５０ｅで洗浄後再沖過して洗液１５０ｅを鴻た。このＦ
３液と洗液を合わせ、硫酸でｐＨ３，０に調整し、２容
の酢酸エチルを用い５て６１５０型ボドビルニアツク抽
出装置（ポドビμニアツク社製、米国）により向流抽出
した。得たつ転溶液を硫酸でｐＨ３，０に調整したのち
、再］Ｃび２容の酢酸エチルで抽出し、２容の水で２回
繰返し洗浄後、減圧濃縮した。濃縮液（４００胃／）を
シリカゲル（メルク社製、西ドイツ）カヲト（４，６Ｘ
６５ｃＭ）に流Ｌ２、酢酸エチ／ｌ１５００ｐｙ／。

つづいて１％蓚酸含有酢酸エチ）ｖ３ｇで溶出した。

１話性区分（約３ｅ）を集め、５００−の水で２回洗浄
したのち減ＥＥ　’Ｆ濃縮乾固し、得られた固形物をジ
メチルヌルホキサイド約３００　ｍｌに溶解したつこの
溶液に水３０Ｍ／を加えたのち、Ｐｒｅｐ　　ＰＡＫ−
５００／Ｃ□８　カラムを装着したＰｒｅｐ　ＬＣ／Ｓ
ｙｓｔｅｍ２０５０　ＯＡ型分取用液体クロマトグラフ
装置（つ」−ターズ社製、米国〕に導入し、メタノール
−水（１：Ｉ）混液３４、つづいてメタノール−水（３
：　２　）　、、ｉ式汀！５　ｅ、最後にｊｌｌ／−）
Ｖ２ｉ’ｒ用いて溶出し、溶出液を５００　ｙｌづつ分
取したつ主としてＰ−２３９２４Ａ、Ｃ，ＤおよびＥｆ
：含有する両分（フックジョン２〜８）３．５ｅと、主
としてＰ−２３９２４Ｂを含有する［０１分（フックジ
ョン９〜１３　）　２．５　ｅＶｃ分け７’ｔｔッＰ−
２３９２’４Ｂ含有画分は宇ｒａで放１ｒｔすると約２
．３ｆの黄橙色の）’−２３９２４Ｔ（結晶が析出した
のでこれ′ｌｃｒ別したのら、母（αを減圧濃縮して約
１ｅとし、２容のｙ′ｉｔ：酸エチルで３回抽出腰抽出
液に無水硫酸ナトリウム５０ｇを添加して脱水後、約３
０Ｍ／まで濃縮し、１１−へキサ７２００　ｙｉを加え
ろと苗種Ｐ−２３９２４ＢのイＮ晶約３１を得た。Ｐ−
２３９２４Ａ　、　Ｃ、ＩＩ）およびＥ含有両分を約１
０１００ｔまでンＯＡヤ１゛１シ、シリカゲル・カラム
（４，０Ｘ４２ｃｎｒ　）　ＶＣ流し、１％砕酸含有酢
酸エチｔｖ２ｅで溶出した。溶出液は１００　胃１づつ
分取し、主としてＰ−２３９２４ＡおよびＤを含有する
両分（フックジョン２〜７）６００ｍｌと、主としてＰ
−２３９２４ＣおよびＥを含有する両分（）、ヲクショ
ン８〜１４）７００＊／とに分けた。主としてＰ−２３
９２４人およびＤを含有する両分（６００＊／）を水洗
後、濃縮乾固し、メタノ−／１１５０鰐ｌＫ溶解し、水
５０Ｍ／を加えて希釈したのち、上記と同一の分取用液
体クロマトグラフ装置にかけ、メタノール−水（１：１
）混液５，５４で溶出した。溶出液は５００耐づつ分取
し、フックジョン１３〜１５までの区分１．５１を集め
、約７　Ｑ　Ｑ　ｍｌまで減圧濃縮したのち、２００　
ｍｌの酢酸エチ／ｌ／ｆ：添加して３回反復抽出した。

抽出液を合わせて無水硫酸ナトリウム３０９ｆ：添加し
て脱水後、減圧泊縮腰濃縮液約３０阿ｌにｎ−ヘキサン
２００−を加えると、Ｐ−２，３９２４ＡおよびＤを含
有する黄橙色１［ｌ粉末１゜７ｆがえられた。との粗粉
末をクロロホルム−酢酸（４：Ｉ）混液１００　ｍｌに
溶］１イし、シリカゲル・カラム（３，５Ｘ５２ｒＪＩ
Ｉ）に流し、クロロホ〜ムー百Ｆ酸（４：１）が１１色
４００　ｗｅ、クロロホルム−酢酸（７：３）混液１４
を用いて溶出した、溶出液をよ１１）Ｋｌづつ分取し、
主としてＰ−２３９２４ＡＩ含有する区分（フラクショ
ン２５〜２９）と主としてｐ　−２３９２４Ｔ）　′ｆ
：含有する区分（フラクション３６〜１３６）に分けた
。Ｐ−２３９２４Ａ含有凹ｊ分（５１３ｍｌ　）を減圧
下に濃縮乾固し、メタノ−１ｖ２００　ｍｌに溶解した
のち、水２００鰹ｔを添加し、上記分取用液体クロマト
グラフ装置を用いて再りロマトグヲフイーを行ないＰ−
２３９２４Ａ区分を集めた−１この区分を減圧濃縮後、
酢酸エチルを加えで抽出、脱水したのち濃縮するとＰ−
２３９２４Ａの粗粉末的２５０〜かえられたつとの粗粉
末をメタノール溶液から再結晶するど黄橙色のＰ−２３
９２４Ａ結晶約１１００ｒＩかえられた。

次いでｐ　−２３９−２４Ｄを含有する区分１ａを減圧
下に濃縮乾固し、乾固物を百Ｆ酸エチル約５００ＭＩＫ
溶解し、２００　ｍｌの水で３回繰返し洗浄した。

洗浄酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウム５Ｏｆで脱水後
、酢酸エチ／Ｌ’を減圧Ｆに留去し、ｉ樹液約３０＊Ｉ
！にｎ−ヘキサン２０〔ｌＫｌを加えると黄橙色のＰ−
２３９２４Ｉ）粗粉末的０．了ｑがえられた。　　　−
この粗粉末をクロロホルム−酢酸（４：ｌ）混液２５＊
Ｉ！Ｉｃ溶角γし、シリカゲル・°カラム（３Ｘ４５α
）に流し７、クロロホルム−酢酸（４：Ｉ）混液で溶出
し、Ｐ−２３９２４Ｄ区分子：集めた。この区分４００
　ｍｌを減圧濃縮し、７−縮液８０胃ｌに水１　（ｌ　
Ｏｍｌを加えたのち、２容の酢酸エチルで３回反復抽出
した。抽出液全台わせ、水洗、脱水したのち、酢酸エチ
ルを留去しでえられた粗粉末的５００　’ｆをメタノー
ル−酢酸エチ／Ｌ／（１：５）ｆｆ￥Ｘ液から再結晶す
ると黄橙色のｐ−２３９２４Ｄの結晶性粉末約３３０Ｍ
ｇかえられた。次に、シリカゲル・クロマトグラフィー
によってえられた主としてＰ−２３９２４Ｃ，Ｅを含有
する区分（フラクション８〜＋４）７００胃ｌを水洗、
脱水後、酢酸エチルを留去し、残渣をメタノ−）ｖ５　
Ｑ　ｍｅに溶解した。この溶液を水で２倍に希釈したの
ち、分取用液体クロマトグラフ装置（上記と同一カラム
）にかけ、メタノール−水（１：Ｉ）混液に溶出した。

溶出液は２００　ｍｌづつ分取し、主としてＰ−２３９
２４Ｆを含有する区分（フラクション１０〜１３　）　
＋３００肩ｔとＰ−２３９２４Ｃを含有する区分（フラ
クション１４〜１８）１＃とに分けた。

Ｐ−２３９２４Ｅ含有μり分を減圧濃縮し、２容の酢酸
コニチルで３回反復抽出、脱水後、約２０縛／ｌで濃縮
し、ＩＩ−ヘキサン２００胛ｌを添加すると黄橙色のＰ
　−２３９２，４Ｅの粗粉末的１２０　”Ｉがえられた
。この粗え９末をクロロホルム−メタノール（３：２）
混液３０　ｍｌに溶解し、シリカゲル・カラム（３ン４
５　ｔ’ｍ　）に流し、クロロホルム−メタノ−／ｌ／
（３：２）でＩｆｒ　）Ｊ、ｌ　Ｌ、Ｐ−２３９２４Ｆ
含有区分を４）めで濃縮し、濃縮液１（ｌｒ／に酢酸エ
チルｊｏＮ／、ｎ−ヘキザン５０鹸を加えると黄橙色の
Ｐ−２３９２４Ｅの結晶性粉末約３０ｑがえられたっＰ
−２３９２４Ｃを含有する画分１４は、減圧「にＷ；縮
乾固し、乾固物をクロロホルム１５鰐ｌに溶Ｖｌｒｌ？
　ｔ、、シリカゲル・カラム（３，０Ｘ４５備）に流し
、クロロホルム−酢酸Ｃ４：Ｉ）混液で溶出し、Ｐ−２
３９２４ｃ６含有する区分Ｙ集めた。

この区分を濃縮乾固するとＰ−２３９２４Ｇの粗粉末的
１５０〜がえられた。との粗粉末を酢酸エチ／’　７０
　ｍｌを加えて溶解し、２０ｗｔの水で３回繰返し洗浄
したのち、無水硫酸ナトリウム２．５Ｆを加えて脱水、
酢酸エチ／Ｌ’溶液を減圧濃縮して約１０−とし、ｎ−
ヘキサン２５芦／を加えると黄橙色のＰ−２３９２４Ｃ
の結晶約８５ツがえられた。

実施例２ 実施例１と同様の種培養液６０ｅを、可溶性−粉４％、
デキストリン１％、脱脂大豆粉２％、チオ硫酸ナトリウ
Ａ　ｏ、　１％、硫酸第一鉄・Ｔ結晶水０．０５％、リ
ン酸二カリウム０．０５％、ＵＫ　化カリウム０．０３
６１０ｐＨ６，０からなる液体培地１２００ｅを含む２
０００ｅ容タンクに移植［７，２４℃で６日間通気攪拌
培養を行なった。えられた培養液約１１００６を実施例
１と同様の方法で、ｒ過、酢酸エチル抽出、炭酸水素ナ
トリウ！−溶を夜への転溶、酢酸エチル再抽出したのち
、７１！＋！縮し、）゛啓樹液７００　＃Ｉ／を得た。

このγ虐樹液をシリカゲル・カラム（５，４ｘ（ｉ５ｃ
ｙｓ）に流し１．１ト酸エヂー／Ｉ／３１、つづいて１
％蓚酸含有酢酸エチ／Ｉ／３（ｌで溶出し、主としてＰ
−２３９２４Ａ　、ＢおよびＤを含有する区分２．６４
と、主としてＰ−２３９２４ＣおよびＥｆ、含有スル［
ｌＫ区分、ｌ区分けた。Ｐ−２３９２４Ａ、ＢおよびＤ
含有両分は水洗、脱水後、酢酸エチ／Ｉ／を留去して得
られた残渣を２００−のメタノールに溶角乍した。この
溶液にジメチｆＶ７．ｌＬ’ホキサイド２００＊（およ
び水２００　ｗｅを加え、ＰｒｅｐＰＡＫ−５００／Ｃ
Ｉ８カラム１に装着したＰｒｅ７ｙＬＣ／ｅｙｓｔｅｍ
５００Ａ型分取用液体クロマトグラフ装置に導入し、メ
タノール−水（１：Ｉ）混液で溶出し、主としてＰ−２
３９２４ＡおよびＤを含有する区分２．５６と主とＩ、
−ｃｐ−２３９２４Ｂｋ含有する区分３．１　ｅト？集
メｆ４．、Ｐ−２３９２４Ａオ、ｔヒＤ含有区分は」ユ
記液体クロマトグラフ装置で再クロマトグラフしたのち
、濃縮、酢酸エチル抽出、脱水、ン農な１１操作を行な
い濃縮液５０耐をえた。これをシリカゲル・カラム（４
，５Ｘ　７　Ｑ　ａｎ　）に流し、ジクロルメタン−酢
酸（９・１）ＵＲ＋、！Ｍ、同（８：２）混液５．Ｏｅ
、（７：３）混液パ２ｅの順に溶出し、主としてＰ−２
３９２４Ａを含有する区分ｉ４Ｈ：Ｐ−２３９２４ｒ＋
泰＋ｆ÷を含有−ｊる区分１．２４を集めた。Ｐ−２３
９２４Ａ含有区分を３００鰹／の水で３回水洗したのち
ジクロル・メタン層を分取して濃縮乾固し、乾固物をメ
タノール２００−に溶解し、水２００　＊ｔを加えで、
前記と同一の条件で分取用液体クロマトグラフ装置にか
けた。Ｐ−２３９２４Ａ含有区分を集め、濃縮してメタ
２ノールを留去し、２容酢酸エチルで３回抽出を繰返し
たのち、抽出液を合わせて脱水し、濃縮乾固した。乾固
物をメタノールに溶解し、放置するとｐ−２３９２４Ａ
の結晶３００ｑがえられた。つぎＶＣｐ−２３９２４Ｂ
含有区分＜　１．２ｅ）を減圧濃縮し、濃縮液３０解ｌ
をシリカゲル・カラム（３，５Ｘ５０ｃｙＮ）に流し、
ジクロルメタン−酢酸（９：Ｉ）混液１ｅ、同（８：２
）混液、（７：３）混液各１４で順次溶出した。主とし
てＰ−２３９２４Ｄを含有する区分１．４ｅを集めて減
圧下に濃縮乾固し、乾固物にメタノ−１Ｌ／２００　ｍ
ｌを加えて溶解した。この溶液に水２００　ｗｌを加え
、Ｏ１Ｊ記と同一の条件で分取用面体クロマトグラフを
行ない、Ｐ−２３９２４Ｂ区分２．７４を集めた。

この四分１城！Ｔ：王にメタノ−／Ｌ／を留去して得た
濃縮液１．５ｅｉｃＺ容酢酸エチルを加えて３回反復抽
出したのち、脱水し、約２５ｍ１まで濃縮放置するとＰ
−２３９２４Ｄ結晶約１１かえられた。Ｐ−２３９２４
１３を含有する画分（３，１４）は室温で放Ｎｔすると
Ｐ−２３９２４Ｉ３の結晶が析出した。

これを集めメタノールから再結してＰ−２３９２４Ｂの
結晶約３ｇかえられた。次に前記の主としてＰ　−２，
３９２４ｃおよびＥｆ：含有する画分（４，２ｅ）は１
ｅの水を用いて３回洗浄後、無水硫酸ナトリウム３０ｆ
ｔ用いて脱水し、酢酸エチ／Ｌ’を留去して得られた残
渣をメタノ−／Ｌ／２００　ｍｌに溶解した。これに水
２００＋ｗ／ｅ加えて前記と同一の条件でｆｉ１体クロ
マトグラフを繰返し、Ｐ−２３９２４Ｅを含有する区分
１，８４とＰ−２３９２４Ｃを含＃ｆルＱ分２．４６　
？：集メタ。Ｐ−２３９２４Ｂ４有両分１．８４は約５
０Ｗ／まで減圧濃縮し、あらかじめメタノールにｐ１ｖ
濁して充填したセフパアデツクスエ、Ｈ−２０（ファμ
マシアｔＬＭ、ヌエーデン）カラム（３，５Ｘ５２ｆｆ
ｉ）に流し、メタノールで溶出し、Ｐ−２３９２４Ｆの
みを含有する区分２００ｖｔｌを集めた。この画分を減
圧濃縮し、濃縮液２０Ｆ／に酢酸エチ／ｖ２０　胃／と
ｎ−ヘキサン２００　ｍｌを加えると黄橙色のＰ−２３
９２４Ｆの結晶性粉末約７００１Ｈｇが得られた。次に
主としてＰ　−２３９２４０を含有する区分２．４６′
ｆＬ減圧濃縮し、〃り糊液１．２ＮＫ％容の酢酸エチ１
ｖヲ加えて３回繰返し抽出したのち、酢酸エチ／ｌ’層
全無水硫酸ナトリウム２０Ｆを用いて脱水し、酢酸エチ
ルを留去して得られた残渣をメタノールにとかし放置す
るとＰ−２３９２４０の粗結晶が析出した。これをメタ
ノールから再結晶すると、Ｐ−２３９２４Ｃの結晶１．
５ｆが得られたつ 実施例３ 錠剤 （１）Ｐ−２３９２４Ａ　　　　　　　　　Ｉ　００Ｈ
９（２）乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　４７〜
、（３）コーンスターチ　　　　　　　　　　　４０り
（４）ハイドロキシプロピルセルロース−Ｌ　　　　＋
２屑ｆ上記の成分に常法（湿式法）にしたがって打錠し
、錠剤とする。

実施例４ 錠剤 （１）Ｐ−２３９２４１１１００ＰＶ （２）乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　４７”ｙ
（３）コーンスターチ　　　　　　　　　　４０グ（４
）ハイドロキシ１０ビル七／Ｉ／ロース−Ｌ　　　　＋
２■上記の成分を常法（湿式法）にしたがって打錠し、
錠剤とするう 実施例５ カプセル剤 （１）Ｐ−２３９２４Ｃｊ００ツ （２）ラクト−７１３５〜 （３）コーンスターチ　　　　　　　　　　　６０〜（
４）ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　５ｑ上記
の成分（１）、（２）、（３）および（４）の−を混和
したのち、常法に従って顆粒化する。これに、成分（４
）の桟りを加え、常法に従って１号ゼラチンカプセｔｖ
＜第１０改正日本薬局方〕に封入し、カプセル剤と−す
るっ 実施例 カフ９セル剤 （１）ｒ−２３９２４Ｌｌ　　　　　　　　　　　３０
０〜（２）ラフ１−ス　　　　　　　　　　　＋３５ｆ
ｆｇ（３）コーンスターチ　　　　　　　　　　６０り
」二記の成分（１）　、　（２）　、　（３）および（
４）の−を混和したのち、常法に従って１Ｍ粒化する。

これに、成分（４）の残りを加え、常法に従って００号
ゼラチンカブ゛セル（第１０改正日本薬局方）に封入し
、カプセル剤とする。

実施例７ 錠剤 （１）ｐ−２３９２４１’：　　　　　　　　　　１０
０Ｑ＋（２）乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　４
７１’ｆｌ（３）コーンスターチ　　　　　　　　　　
　４０〜（４）ハイド和キシプロピルセルロース−Ｌ　
　　　１２〜（５）ステアリン酸マグネシウム　　　　
　　　１〜上記の成分を常法（湿式法）にしたがって杓
錠し、錠剤とする。

４、図面の１１＋１単なｈ）υｊｌｌ 第１図ないし第５図は生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、
Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅの紫外部および可視部吸収ヌペクト＃を
、第６図ないし第１０図は生理活性物質Ｐ−２３９２４
Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅの赤外部吸１■スペク１１し會、第
）１図ないし第１５図は生理活性物′ｉ￥Ｐ−２３９２
４Ａ　、　Ｂ　、　Ｃ、Ｔ）、　ＥＬｙ）核磁気共鳴ス
ベク）／Ｌ’をそれぞれ表わす。

参幇ヤイ　− し」 Ｙ岬Ｙ　リ 巳 ビ光−−浸 眉姻軒　？ 冑塑暗←　？ 受託一番号変更届 昭和５８年１０月ｌゲ日 特許庁長官　殿 ／事件のｌそ示 ＋Ｉ／イ和５７年特許ｊｊ順第１８５０４３号、７！発
明の名称 生）ＪＪｉ活性物７τＰ−２３９２４，その製造法およ
び製剤３　手続をしだ者 事件との閂１系　　特許出用人 住所　大阪市東区道修町２丁目２７番地名称　（２９３
）武田薬品工業株式会社代表者　　倉　林　育　四　部 り代理人 住　所　　大阪市河用区十三本町２丁目１７番Ｂ５ｆＳ
　旧寄託機関の名称 工業技術院１（１“（生物工業技術研究ｍ６　旧受託番
号 Ｆ’ＥＲＭ　　Ｐ−６７３９ Ｚ　新寄託機関の名称 工業技術院微、生物工業技術研究所 ざ新受託番号 Ｆ’ＥＲＭ　　ＢＰ−３３８ ９、添イ１書類の目録 （１）新受託番号を征明する書面　　　　　　１通以上 手　　続　　補　　正　　書（自発） 昭和５８年１０月ｌり日 特許庁長官　殿 ２、発明の名称 生理活性物質Ｐ−２：３９２４．その製造法および製剤
３、補正をする者 事ｆ’ｌとの関侍　　　特許出願人 任　　所　　大阪市東区道修町２丁目２７番地名　称（
２９３）武＋１１薬品工業株式会社代表者　　　倉　　
林　　育　　四　　部６　補正の内容 （１）明細書第１３貝第２０行の「て、」を［て寄託さ
れている。」に訂正する。

（２）同書第１４頁第２〜３０の１それ、ぞれ寄託され
ている。」を［寄託され、該寄託はプダベス［茶杓に県
づく寄託に切ぜさえられｔ、受託番号ｒａＲＭＢＰ−３
３８として同研究所（Ｆ’ＲＩ）に保管されでいる。」
に訂正する。

（３）同書第３５頁第１行の［ｐ−６７３９Ｊを［Ｔ３
Ｐ−３３８１に訂正する。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１〕次の理化学的性質を有する生理活性物質Ｐ−２３
   ９２４Ａ、ｎ、ｃ、ＤｔたはＥ：（１）生理活性物質Ｐ
   −２３９２４Ａ （ａ）融点：１８６〜１８８℃　２ （ｂ）分子式・ａｌ１３１１１９　Ｎ　Ｏフ５Ｏ９５，
   メクノー）ｖ） （ｄＪ紫外部および可視部吸収ヌベクトル、甑大吸収を
   示す波長（ｎｍ）： ２２０±２，２６３±２（刊）、２７０±２゜４２０±
   １０（メタノール中）；２２１±２，２６４±２　（１
   ｒｉ）　。 ２γ０±２．　４２０±１０（０，１Ｎ　　ＨＣｌ−９
   ０％メタノ−ル水中　）；２１６±２．　　２３８±２
   ．　　２７７±２゜５４０±１０（０，１１丁　ＮＦ３
   ０Ｈ−９０％メタノール水中）（ｅ）赤タ目１１ζ１閃
   収ヌベクトル、臭化カリウ°゛ｌ−錠、極大吸収を示す
   主要波数（ｃｍ）： ３３００．２９３０．＋７１０．１６６５．１６４０゜
   １６２０．１５７０，１５４０．　１５００，１４６０
   ゜１４２０．１３８０．　１３３５．１２８１）、１２
   ４０゜１２００．１１８０．Ｎ１（１，１０４０，＋０
   ００゜９７０、　９００．　８６０．　８００（２）生
   理活性物質Ｐ−２３９２４Ｂ （ａ）融点：２００−２０２”Ｃ （ｂ）分子式：　Ｃ１９Ｈ２１ＮＯＢ　５ｆｃＪ比旋光
   度：〔α））２３−９０°　±１０°　（ｃｍ０．５１
   ．メタノ−／Ｌ／） （（］）紫外部および可視部吸１１．７ヌベクト／し、
   極大吸収を示す波長（ｎｍ）： ２２０±２，２６２±２（肩）、２６８±２゜３０８±
   ２．　４２０±１０（メタノール中）；２２０±２，２
   ６１±２（肩）、２６８±２゜３０８±２，４２０±Ｉ
   　Ｏ（０，Ｉ　Ｎ　ＨＣｌ−９０％メタノール水中）：
   ２１６±２，２３７±２，２８４±２゜５４０±１０＜
   ０．１ＨｍａｏＨ−９０％メタノ−／し水中）（ρ）光
   外部吸収ヌベクトル、臭化カリウ１１錠、棒大吸収を示
   す波数（ｃｍ’−’　）： ３３００，２９５０．＋７２５，１７０５，１６６０゜
   １６３０．１５９０．＋５４０．１４６０，１４２０゜
   １３７０．１３３０．＋３００．１２７０．１２１０゜
   １１９０．１１７０．１１３０，１１００，１０６０゜
   １０２０、　９８０．　９５０．　８９０．　８６０゜
   ７９０、　　７６０．　　７００ （３）生理活性物質Ｐ−２３９２４Ｃ Ｉａ、）融点：１８７−１９０’ｃ （ｂ）分子式：　ｃＩＢ　Ｈ１９ＮＯＢ　５ｆｃｌ比旋
   光度：〔αイ３−９３　±１０　（Ｃ＝０．５１．メタ
   ノ−／Ｌ／） Ｃｄ）紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波長（ｎｍ）： ２２１±２，２６０±２（肩）、２６５±２゜３０６±
   ２，４２０±１０（メタノール中）：２２１±２，２６
   ０±２（肩）、２６６±２　、　ｓａｔ、ｚ２゜４２０
   ±１ｏ（０，ｌ　Ｎ　ＨＣｌ−９０％メタノール水中）
   ；２１６±２，２３６±２，２８６±２．　５４０±１
   ０（Ｑ、　ｌ　Ｎ　Ｎａ、０Ｈ−９０％メタノール水中
   パ）（ｅ）光外部吸収スペクトル、臭化カリウム錠、扼
   大吸収を示す主要波数（（７）　）。 ３４００．３０７０，２９４０，１７２０．１６８０゜
   １６３５．１６００，１５４０，１４９０，１４６０゜
   １４２０．１３８０，１３５０．１３１０．１２５０゜
   １２２０．１１８０．Ｎ２０．＋１００．１０４０゜９
   ９０、　９３０．　８８０．　８２０．　８００゜０５ （４）生理活性物質Ｐ−２３９２４Ｄ （ａ）融点：２０５〜２０７℃ （ｂ）分子式：ＣＩＢＨ□９ＮＯ８Ｓ （ｃ）比旋光度：〔α〕る３−６２°　±１０°　（ｃ
   ＝０．５１．メタノ−／Ｌ／） ｆｄ）紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波長（ｎｕ）： ２２０±２，２７１±２，３０６±２，４２０±１０（
   メタノール中）；２２０±２，２７１±２゜３０６−１
   −２．　４２０＋ｌ０（０，１ＮＨｃ１−９０％ｊり／
   −）Ｌ’氷水中、２１６±２，２３４±２，２９９±２
   ゜５４０±２０（０，ＩＮ　ＮａＯＨ−９０％メタノ−
   μ水中）（ｅｌ赤外部吸収スペクトル、臭化カリウム錠
   、極大吸収を示す主要波数（℃　）： ３４００．３３００，２９６０．＋７２０，１６７０゜
   １６３５、＋６１０．１５４０，１４４０．１３８０゜
   ＋３４０．１３００．Ｈ６０，＋２２０．１２０５゜１
   １３０．１１００．１０６０，１０００．　９００゜８
   ７０、　８２０．　８００．　７８０．　６９０（５）
   生１１ｉ活性物質Ｐ−２３９２４Ｆｆａ、）融点：１７
   ４〜１７６℃ （ｂ）分子式：　ｃｌ、８　Ｈ１９ＮｏＢ　５（ｃＪ比
   旋光度：　［α〕’ｉ３−８６°　±１０°　（ｃ＝０
   ．５．メタノール） （ｄＪ紫外部および可視部吸収スペクトル、極大吸収を
   示す波長（ｎｍ）： ２２１±２，２６３±２（肩）、２７１±２゜４２０±
   １０（メタノール中）：２２１±２゜２６４±２（肩）
   、２７１±２，４２０±１０（０，１ＮＨＣＩ−９０％
   メタノール水中）；２１６±２゜２３８±２，２８７±
   ２，５４０±１０（，０，ｌＮＮａＯＨ−９０％メタノ
   ール水中） （ｅ）赤外部吸収スベク）／し、臭化カリウム錠、極大
   吸収を示す主要波数（（７）−１）：３５５０．３３０
   ０，３０８０，２９５０，１７２５゜１６６０、＋６４
   ０．１６１０．１５７０．＋５４０゜１４９０，１４５
   ５，１４２０，１３８０，１３２５゜１３００．１２４
   ０，１２１０．１１８０．１１２０゜１０８０、＋０４
   ０．＋０１０．　９４０．　９２０゜８６０、　　８２
   ０．　　８００．　　７７０．　　７００〔２〕ストレ
   プトミセス属に属し生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ
   、Ｃ，Ｄおよび／またはＥを生産する能力を有する微生
   物を培地に培養し、培養物中に生理活性物質Ｐ−２３９
   ２４Ａ、Ｂ、Ｃ。 Ｄおよび／またはＥを生成蓄積せしめ、これを採取する
   ことを特徴とする生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、
   Ｃ，Ｄおよび／またはＥの製造法。 し３〕生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ。 Ｄおよび／またはＥを含有する線維化抑制剤。