JPS6083592A - 生理活性物質ｐ−２３９２４、その製造法および製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、プロトコラーゲン・プロリツ水酸化酵素阻害
作用、コラーゲン生合成抑制作用などを有する新規な生
理活性物質ｐ−２３９，２４，その誘尋体、その製造法
および製剤に関する。

プロトコラーゲン・プロリン水ば化酵索は、動物軸胞内
のりポゾームで合成されたプロトコラーゲン中のプロリ
ンを特異的に水酸化する酵素であシ、コラーゲン生合成
を律速するＭ要な因子の一つである。従来、本酵素活性
をｆｕｌｌ書するものとしては、鉄キレータ−（例えば
α、α′−ジピリジルなど）、８Ｈ酵素阻害剤（例えば
ｐ−クロロマーキューリーベンゾエートなど）、ある池
の■企偶（例えばＣｕ＋＋　Ｚｎ＋など）などが知られ
ているが、これらの物質はいずれもコラーゲン−・よび
非コラーゲン性蛋白質の生合成を非特異的に阻害するた
めに副作用が大きく、医薬とはな！ｌｌ得なか−た。非
コラーゲン性蛋白質９生合成を阻害せず、コラーゲンの
生合成のみを特異的にＩ！１１書する物質が見いだされ
れば、その物質は！ｔｉＪ　Ｉｊｌｌｔ　ｆ、史化症、
肝（閏変症、強皮症、ケロイド、リューマチ性関節炎、
肺線維症などのコラーゲンの過剰蓄積を部９１１に器線
維症を含めた疾泊の予防治療に使用することができる。

本発明者らはプロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素活
性を阻害する物質を斂生物代謝生産物中にめ、鋭意検案
を行なった結果、コラーゲンの生合成を特異的に抑制す
る新規な生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、
ＥおよびＦを見いだし、またこれら化合物は、それらの
可九体へ置換できることを見いだした。

本発明者らは、これらの知見に基ついてさらに研究した
結果、本発明を完成した。

本発明は、（１）一般式 〔式中、Ｒエ　は水系、メチルまたはヒドロキシメチル
を、Ｒ２は水素またはメトキンを、Ｒ３はヒドロキシま
たはメトキシを、Ｒ４は水素または式（２）、ストレグ
トミセヌ病に属し生理活性物１ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、
Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦを止座する能力を有する鰍
生物を招地に培食し、培餐物中に生理活性物質Ｐ−２３
９２４Ａ　、Ｂ　。

Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦを生成蓄積せしめ、これを
採取することを特徴とする生理活性物質Ｐ−２３９２４
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅおよび／またはＦの製造法。

〔式中、Ｒ工は水素、メチルまたはヒドロキシメチルを
、Ｒ２は水素またはメトキシを、Ｒ３はヒドロキシまた
はメトキシをそれぞれ示す。〕で表わされる化合物を還
元反応に付すことを待機とする一般式 〔式中、Ｒエ　、Ｒ２およびＲ３は前記と同５代義を有
する。〕で表わされる化合物の製造法、および（４）化
合物（１）を含有する線維化抑１Ｉｌｌｌハリである。

本明＋ｌ：ｔｉｌ書においては、一般式（１）で表わさ
れる化合物を、下表のとおシ称することもある。

（以下査・白） １だ、水明剣吉に５いては、一般式（Ｉ）で表わされる
化合物を総称して、あるいは牟−化合物を指杯して、生
理活性物質ｐ−２３９２４あるいは単にＰ−２’３９２
４と称することもある。

本発明方法に使用される斂生物は、ストレプトミセス偶
に属し、生理活性物質Ｐ　−２３９２４Ａ。

Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦ全生産する能力を有す
る做生物（以下、ｒＰ−２３９２４生産菌」と略称する
こともある。）であればいずれでもよい。

その具体例としては、たとえば沖縄県石垣島の土壌から
分離されたストレプトミセス・エスピー凪２３９２４株
（以下、「Ｉ仏２３９２４株」と略称することもある。

）が挙げられる。

ｊｈ２３９２４株について、インターナショナル・ジャ
ーナル・オプ・ンステマティソク・バクテリオロジ−（
工ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ＪＯｕｒｎａｌ　ｏｆＳ
ｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　
＋　ｌ　６巻ツ３号！３１３〜３４０頁（１９６６”Ｐ
）記載の方法に準じて検討した性状は下記のとおシであ
る。なお、ｊ６地上の所見は、特に記載しないかぎり、
２８Ｃにおいて１４日間培養し、ｆｌしたものでおる。

ＣＩ）形態的特徴 基生菌糸より、らせん状、詩により不完全ならせん状、
開放型らせん状、あるいは鉤状に馬かい胞子鎖形成繭糸
を単純分枝状に沖長し、輪生技は６ｇめられない。成熟
した胞子鎖は一般に５〜１゜個の胞子の連鎖を認める。

胞子は円筒形ないし１１１円形で大きさは０．４〜０．
７ＸＵ、７〜１．２μ、その表面は平滑である。

（ｎ）各種培地上での生肯状態 各種培地における虫目の程度（Ｇ　）　、気菌糸（ＡＭ
）の生前および色調、可溶性色素（Ｓ　Ｐ　）の有無お
よび色調などについて以−トに列記する。

なお、色の記載について０でボす保準色Ｕ、、】記号は
コンテイナー・コーポレーション・オグ・アメリカ（Ｃ
ｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ
ｍｅｒｉｅａ）ノサ・カラー・ハーモニー・マニュア／
’　（’ｒｈ。

Ｃａ１ｏｒ　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）　第４
１ＪＩ、１９５８牛によった。

（カンニークロース・（ｌ！’ｆ　を後室寒天培地（Ｇ
）：貧弱 ＣＡＭ）：貧弱、淡灰褐色（３ｇｅ） （ＳＰ）：なし くイタグルコース・アスパラギン蟇天培地（Ｇ）：貧弱 （ＡＭ）：なし くＳＰ）：なし く勿グリセリン・アスパラギン寒天培地（Ｇ）：なし くニ）スターチ・無Ｉａ塩基犬培地 Ｃ，Ｇ　）Ｉ：豊〆 （ＡＭ）’：豊豊富粉状、灰色（３ｉｈ）（Ｓｊ’）：
黄褐色（４ｇｃ） （イ）チロジノ寒大培地 （Ｇ）二貧弱 （ＡＭ）：貧弱、灰色（３ｂａ　） （ＳＰ）：淡黄赤色（４ｅａ） （至）〕栄栄養寒天適 地Ｇ）：中程度 （ＡＭ）：なし くＳＰ）：なし く勺イーヌト・麦芽邸大培地 （Ｇ）：中程度 （ＡＭ）：貧弱、灰色（３ｆｅ） （ｓｐ）：淡黄褐色（４ｎｅ） り〕オオートミール天培地 （Ｇ）：中程度 ＣＡ１１）：貧弱、淡灰出色（３ＥＣ）（ＳＰ）：なし くｍ）生理的性質 （刀生貸温度範囲：１５〜３５゛Ｃ （イ）ゼラチンの液化（クルコース・ペプトン・ゼラチ
ン培地、２４℃、３週間）：１ｔＨＪ−（駒）（つ〕殿
粉の加水分解：陽性 に）脱脂乳の凝固・ペプトン化：共に醸性（ロ）Ｊ餉酸
塩の還元性：陰性 ■〕メラニン様色素の生成： チロシン寒天培地：＠陽性 ペプトン・イースト鉄基天ｍ地：陰凶二（１ｖ）炭素源
の同化性（ブリードハム・ゴツトリーブ々≦犬培地） Ｌ−アラビノース　士　イノシトール　−Ｄ−キシロー
スー１−ｔ−Ｌ−ラムノース−Ｄ　−クルコース　丑　
ラフィノース　−Ｄ−フラクトーヌ　±　Ｄ−マンニッ
ト　−７ユークロース　士　対照　− （注）　ニー１ｔ：豊富な止釘、±：白かに生首、−：
生繭せず 上記形態的二１０微からみて、本菌株がストレプトミセ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｒ３）　１ｆｆｌに践する
ことは明らかである。

上ｊ）８患２３９２４株は、１府第１１５７キ９月２０
日に財団法人発酵Ｚｔｆ究所（Ｉ　Ｅ’　Ｏ）に受託番
号工ＦＯ１４２０５として′町託されている。また本敵
生物は口ｒ」和５７乎１０月１日に通１１θ産業省工京
技術院叡生物工業技ＶＩＪ研究所（Ｆｆ（Ｉ）に受託番
−づ・ＦＥＲＭ　Ｐ−６７３９として寄託され、該寄託
はプダベヌト条約に基づくｉ寄託に切換えられて受託ｒ
ｌｒ号Ｆ　Ｅ　ＲＭ　Ｂ　Ｐ　−３３８として同イβ■
究ｊ９１（ＦＴ’＋１）に保管されている。

一般に、ヌトレプトミセヌ属１７（はその性状がλ化し
やすく、たとえばＸ線照射、紫外線照射、放躬線照射９
人工変異剤を用いる人工又異手段などで容易に装具し得
る。このような友異株であっても、Ｐ−２３９２４Ａ、
Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦの生産能を有するもの
はすべて本発明の方法に使用し得る。

Ｐ−２３９２４生産菌の培養にあたっては、培地は液状
でも固状でもよいが通電は液１４＜　ｉν、地による振
温ｊｅ１養または通気撹拌培養が便利である。１Ｓ／。

地は放線菌の生付に通し、Ｐ−２３９２４Ａ、１３゜Ｃ
，Ｄ、Ｅおよび／または１゛を土圧させ１１するもので
あればどのようなものでもよい。すなわち、炭素源とし
ては例えばグルコース、ラクｌ−７，グリセリン、澱粉
、シュークロース、デキストリン。

４１ｊ煩、有機酸類（例、酢酸、酒石（狸など）など、
窒素源としては例えばペプトン、カサミノ酸（ディフコ
社＋７）、Ｎ−ｚアミンＡ（シェフイールｌ’社製）な
どの蛋白加水分解物、酵１、灼−キス、麦ｑエキス、大
豆粕、コーン・ステイープリカー、アミノ酸類（例、ア
スパラギン酸、グμタミン酸なト）、各種アンモニウム
塩（例、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムなど）な
どが用いられる。

無機塩として各種リン酸塩（Ａ、第一リン酸ナトリウム
、第ニリン酸カリウムなど）、硫酸マグネシウム、塩化
ナトリウム、硫酸第一鉄などの金属塩５重金成塩（例、
硫酸マンガン、硫酸亜鉛など）などを添加してもよく、
また菌の生育を促進する目的でビタミン類（例、ビタミ
ンＢｌ　、パントモノ淑カルシウムなど）、核酸関連化
合物（例、アデニン、ウラシルなど）などを添加しても
よい。

また培養方法および培養条件によっては、シリコーン、
ポリプロピレン・グリコ−）Ｖ調心体〔例、アクトコ−
／Ｌ／（武田薬品工業株式会社製）など〕。

大豆油なとの消泡剤全培地に加えることによシ、Ｐ−２
３９２４Ａ、Ｂ’、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦの生産
量を増大させるのに効果的な場合もある。

培養温度、培養時間、培地の液性などの培養条件は使用
する微生物の種類、培地組成などによって変動するが、
最終的にはＰ−２３９２４Ａ、Ｂ。

Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦの生産量が最大となるよう
に適当に選択、調節されればよく、多くの場合好気的条
件下に約２０〜４０℃でおよそ２４時間〜２４０時間培
養し、この間培地の液性全ｐＨ約４〜９付近に保つのが
よい。

このようにして得られた培養液から生理活性物質Ｐ−２
３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦを採取す
るにあたっては本物貝の性状に基づいて、種々の方法を
適当に組み合わせることによって容易に行ないうる。す
なわち、例えば、中性ないし微酸性で、水と混和しない
有板＋Ｗ媒、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホ
ルム、ブタノール、ペンセン、トルエン、ジエチルエー
テル、メチレンクロフィト、メチルイソグチルケトンな
どによる抽出、活性炭、シリカゲル、アルミナなどを用
いる吸着クロマトグラフィー、セファデックスカラムに
よるゲル濾過、イオン’ｌ−Ｊｊ４　＆Ｊ刀旨によるイ
オン交換クロマトグラフィーなどである。

これらの手段全適当に組み合わせて使用することによシ
、生理活性物質Ｐ−２３９２４Ａ　、Ｂ、Ｃ。

Ｄ、Ｅおよび／またはＦは培養物から結晶あるいは結晶
性粉末として単離される。

後述の実施例２で得られた生理活性物質Ｐ−２３９２４
Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ、ＥおよびＦの［化学的性質を以下に示
す。

ｆａｔ　融点：Ａ　１８６−１８８℃ｉＢ　２００−２
０２　℃）；Ｃ１８７〜　１　９　０　’Ｃ；　Ｄ２０
５〜２０７’Ｃ；Ｅ　１７４〜１７６’ＣｉＦ　１９１
〜１９５’Ｃ （ｂ）元素分析値（東側１ｉｉ’？）：（以下余白） （Ｃ）分子量（マヌ・スペクトルによるンおよび分子式
： ％式％： （ｅ］溶鮮性：Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、ＤおよびＦはい
ずれもジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、
ピリジン、５％炭酸水素ナトリウム水に易谷。メタノー
ル、ジオキサン。

酢酸に町浴。水、アセトン、クロロホルム。

ｎ−ヘキサン、石油エーテルに媒溶ないし不溶。ｐ−２
３９２４ｃはジメチルスルホキシド、ジメチルホルムア
ミド、ピリジン、５％炭酸水素ナトリウム水に易溶。メ
タノール。

ジオギサン、アセトン、酢酸に可溶。水、クロロホルム
、ｎ−ヘキサン、石油エーテルに昨溶又は不溶。Ｐ−２
３９２４Ｅはジメチルスルホキシド、ジメチルホルムア
ミド、ピリジン、５％度酸水素ナトリウム水、メタノー
ルに易溶。ジオキサン、酢１竣に可ＪＷ　ａ水、クロロ
ホルム、ｎ−ヘキサン、石油エーテルにかｉＥ溶又は不
溶。

（ｆＪ紫外部および可視部吸収スペクトル：第１〜第６
図に示す。各溶剤に溶解した直後の極大１％ 吸収を示す波長（ｎｍ）およびＥｌ、値は下記の第１表
の通りである。なお、第１〜第６図において□はメタノ
ール中での１則定４．−呆を、−−−−は０．ｌＮＨＣ
ｌ−９０％メタノール水中での測定結果を、−一−−−
−−−−−−は０　、　ｌ　Ｎ　Ｎａ０ＬＩ　−９０％
メタノール水中テノ測定結果をそれぞれ示す。

（以下余白） （ω赤外線吸収ヌペクトル：臭化カリウム綻により測定
した赤外線吸収スベク）／しな第７〜第１２図に示す。

極大吸収を示す主要な波数は次のとおりである。

（ｉ　）Ｐ−２３９２４Ａ ３３００．２９３０．１７１０．１６６５．１６４０゜
１６２０、　１５７０．　１５４０．　１５００．　１
４６０゜＋４２０．１３８０．＋３３５．１２８０．１
２４０゜１２．００．　１＋ａｏ、＋＋＋ｏ、１ｏ＋ｏ
、＋ｏｏｏ。

９７０、　９００．　８６０．　８００第７図参照 （ｉｉ）Ｐ−２３９２４Ｂ ３３００、　２９５０．　１７２５．　１７０５．　１
６６０゜１６３０．１５９０．１５４０，１４（ｉｏ、
１４２０゜１３７０．１３３０，１３００．１２７０，
１２１０゜１１９０．１１７０．１１３０，１１００，
１０６０゜１０２０、　９８０．　９５０．　８９０．
　８６０゜７９０、　７６０．　７００ ムＳ８図参照 ＣＩＩＩ　）　Ｐ　−２３９２４０ ３４００、３０７０，２９４０，＋７２０．　１６８０
゜１６３５、　１６００．　１５４（１，１４９０，＋
４６０゜１４２０、　１３８０．　１３５０．　１３１
０．　１２５０゜１２２０、　１１８０．　１１２０．
　１１００．　１０４０゜９９０、９３０．　８８０．
　８２０．　８００゜０５ 第９図参照 （ＩＶ）Ｐ−２３９２４Ｄ ３４００、　３３００．　２９６０．　＋７２０．　１
６７０゜１６３５．１６１０．１５４０．＋４４０．１
３８０゜１３４０．１３００．＋２６０．１２２０．１
２０５゜１１３０、ＮＯｏ、＋０６０．ＨＩＯｏ、９０
υ。

８７０、８２０．　８００．　７８０．　６９０第１０
図参照 （Ｖ）Ｐ−２３９２４Ｅ ３５５０．３３００．３０８０．２９５０．＋７２５゜
１６６０．１６４０．１６１０．１５７０．１５４０゜
１４９０．１４５５．１４２０．＋３８０．１３２５゜
１３００．１２４０，１２１０．１１Ｂ０，１１２０゜
１０８０、＋０４０．１０１０．　９４０．　９２０゜
８６０、８２０．　８００．　７７０．　７００第１１
図参照 （Ｖｌ　）　Ｐ　−２３９２４Ｆ ３３００、＋７２０．　１６８０．　１６６０．　１６
３Ｇ。

＋６００．　１５３０．　１４９０．　１４６０．　＋
４２０゜１３８０、　１３３５．　１３１０．　１２６
０．　１２２０゜１１９０、Ｎ３０．　１＋００．　１
０３０．　＋０００゜９８０、９５５．　８７０．　７
００ 第１２図参照 （社）呈色反応：Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ。

ＥおよびＦはいずれも塩化第二鉄反応、アルコ−／’　
性ＨＰ　ｅマグネシウム反応、リドンーヌミス反応陽性
。

ニンヒドリン反応、ニーｐリッヒ反応１会性。

（ｉ）性状：Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび
Ｆはいずれも成性Ｊｌｉｌ溶性であり、黄色ないし黄橙
色又は橙黄色の結晶、結晶性粉末あるいは粉末を示す。

Ｉｊ）　核磁気共鳴スペクト／Ｌ／＝４００メガヘルツ
、ジメチル−ｄ６　スルホキシド中で測定したスペクト
ルを第１３〜１８図に示す。１１′ｆ徴的ヒークを以下
に示す。

（、ｉ　）Ｐ−２３９２４Ａ δ　ＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　１．８６（：ＨＬｓ）　
、２．（１９（３Ｈ＋ｄ、Ｊ＝１．６Ｈｚ）、２．７１
（Ｉｎ、ｄｄ、Ｊ＝８．８＋１３．６１（ｚ）、２．９
１（ＩＨ５ｄｄ、Ｊ＝５．口。

１３．６Ｈ２）、３．６６（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１２．９Ｈ
ｚ）。

３．７８（ｌｐ、ｄ、Ｊ＝１２．９Ｈｚ）、３．９６（
３Ｈ。

ｓ）、４．４７（ｉｎ、ｄｔｌｉｋｅ＋　Ｊ＝５．０，
８．３゜８．８）ｉｚ）、６．８９（ＩＨ，ｑ、Ｊ＝１
．６１■ｚ）、’／、０９（ｌＨ＋ｓ）、８．１８（Ｉ
Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．３１ｉｚ）。

１２．４０（ＩＩＩ、ｓ） 第１３図参照 （ｉｉ）Ｐ−２３９２４Ｂ δ　ＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　１−８６（３１］＋ｑ）
、１．９５（３Ｈ，ｏ）、２．７０（ＩＨ，ａａ、Ｊ＝
８．８．１３．７Ｈｚ）、２．８９（ＩＨ，ｃｌｄ、Ｊ
＝４．９，１３．７Ｈｚ）。

３．６５　（ｌ　Ｈ＋、　ｄ　、Ｊ’　＝　Ｉ　３−　
Ｉ　Ｈｚ　）　、３　、７γ（ＩＨ９ｄ　、Ｊ　＝　ｌ
　３　、ｌ　Ｈｚ　）　＋　３．９５　（３Ｈ、ｓ　）
　、４．０３（３Ｈ，ｓ）、４．４７（ＩＨ，ｃＬｔｌ
ｉｋｅ、Ｊ＝４．９゜８．１，８．８Ｉ（ｚ）、７．１
１（ＩＨ，ｓ）、８．１ｊ３（ＩＬＩ、ａ、Ｊ＝８．１
１（ｚ）、１２．５９（ＩＨ，８ン第１４１参照 （ｉｌｌ　）　Ｐ　−２３９２４０ δ　ＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　Ｉ　、８５（３Ｈ，ｓ）
　、２．７１（Ｉｎ、ａｄ、、ｒ＝８．８，１３．７Ｈ
ｚ）、２−９１（Ｉｎ。

ｄａ、Ｊ＝４．９．＋３．γＬＴｚ）、３．６６（ＩＨ
９ｄ＋Ｊ＝１２．９１１ｚ）、３．γγ（ＩＨ，ｄ、Ｊ
＝＋２．９Ｊ（Ｚ）。

３．８８（３Ｈ，ｓ）、３．９５（３Ｈ，８）、４．４
７（ＩＨ。

ｄｔ　１ｉｋｅ、Ｊ−４，９，８，ｌ　、８．８Ｈｚ）
、６．２６（ＩＨ，３）、７．１５（ＩＨ，ｓ）、８．
１８（ＩＥｌ、ｄ。

Ｊ−８，１Ｈｚ）、１２．７３（Ｉｎ、ｅ）第１５図参
１１α ＜　ｌｖ　）　ｐ　−２３９２４Ｄ δ　ＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　Ｉ　、８５（３１，ｓ）
　、　１．９４（３Ｈ，ｓ）、２−７３（ＩＨ，ｄｄ、
Ｊ＝８．８．１３．５ＬＩｚ）。

２．９２（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝４．８，１３．５Ｈｚ）、
３．６４（ＩＨ，ｄ、、Ｔ＝１２．８Ｈｚ）　、３．７
６（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝Ｉ２．８Ｈｚ）、４．００（３Ｈ，
ｓ）、４．４８（Ｉｆｆ、ｄｔｌｉｋｅ。

Ｊ＝４．８，８．１．８．８Ｈｚ）、７．０３（ｌＨ，
ｓ）。

８．１７（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８．ＩＨｚ）、１２．７９（
ＩＨ，Ｏ）第１６図８照 （Ｖ）Ｐ−２３９２４ｇ ａ　ＤＭｓｏ−ｄ６ｐｐｍ：　１．８５（３１（、ｓ）
、２．７１（ｌｕ＋ａａ、Ｊ＝８．５＋１３．ＩＩ（ｚ
）、２．９０（ＩＩＩ。

ｄ　ｄ　、Ｊ　＝　４−９　、Ｉ　３−７　Ｈｚ　）　
、３．６７　（Ｉ　Ｈ、ｄ　＋　Ｊ　−１３，１Ｈｚ）
、３．７９（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝Ｉ３．！Ｈｚ）。

３．９８（３Ｈ，ｓ）、４．４７＜２Ｈ，ｄ、Ｊ＝２．
２１１２）。

４．４７（ＩＨ，ｄｔｌｉｋｓ、、Ｔ＝４．９，８．１
，８．５Ｈｚ）、５．４７（ＩＨ，ｓ）、６．８２（Ｉ
Ｉ、ｔ、Ｊ−２，２Ｈｚ）＋７．＋５（ＩＨ，ｓ）、８
．１８（ＩＨ，ａ。

Ｊ＝８．１Ｈｚ）、１２−２９（ＩＨ９８）第１７図参
照 （ｖｌ　）　Ｐ　−２３９２４Ｆ δ　”５ｏ−ｄ、３ＰＰｍ：　１．８５（３１ｆ＋！３
）、２．７Ｑ（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝８．８．、！３．７Ｈ
ｚ）、２．９０（Ｉｎ。

ｃｌｄ＋Ｊ＝４．９，１３．７Ｈｚ）、３．６７（ＩＨ
ｌｄ、−ｒ＝１３．１Ｈｚ）、３．８０（ＩＨ，ｄ、Ｊ
＝Ｉ３．ＩＨｙ、）。

３．９７（３Ｊ（，８）＋４．１０（３Ｈ，ｏ）、４．
３ｆｉ（２１ｉ。

ｄ　、Ｊ＝３．７ＬＩｚ）　１４．４７（ＩＨ，ｄ　ｔ
　１ｉｋｅ、Ｊ＝４．９，８．３，８−８Ｈｚ）、４．
９３（ＩＨ，ｂｒ　ｔ）。

７−１６（Ｉｆ（、ｓ）、８．２０（ＩＨ，ｄ、、Ｔ＝
８．３Ｈｚ）。

１２．７０（ｌＬｌ、８） 第１８１８１原 （脇ＩＪｊ課クロマトグラフィーのＲｆ　領ニジリカゲ
ル・プレート（メルク社製、商品番号５７２９）および
逆相系ＨＰＴＩ、Ｃプレート、ＲＰ−８（メルり社製、
商品番号１３７２５）ｌでのＲｆ値は下旬の通シである
。

上記の如き理化学的性質を示す化合物は知られておらず
、Ｐ−２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、ＥおよびＦは新規な
物置と考えられる。

上記の理化学的性質から、ｐ−２３９２４Ａ。

１３、Ｃ，Ｄ、ＥおよびＦの推足溝迄式は以［に２Ｆさ
れる。

化合物（Ｉ［ｌ）は遊離のカルボキン基をイアするので
、塩を形成することができる。該塩分形成するには、自
体公知の方法が用いられる。該塩としてはたとえばカル
シウム塩、マグネシウム塩、バリウム塩、ナトリウム塩
、カリウム塩、マンガン塩。

鉄塩ｒ　＞］・り塩、亜鉛伽などが挙げられる。

化合物（１１）（すなわち、化合物ＣＩ）においてＲ４
が水素で心る化合物。〕は、化合物（ｆｆｌ）（すなわ
ち、化合物ＣＩ）において、Ｒ４がｏＯＨ に付すことにより製造される。

本発明の還元反応は、自体公知の方法を採用すればよい
。たとえば、ノジ触還元＋　’ｉ’：ｉ解遍尤、龜光剤
を用いる還元などが挙げられる。

振触還元を行なうには、化合物（ｆｆｉ）を触昧の存在
下に還元を行なう。化合物＜ｍ）をまず溶媒〔例、アル
コ−）ｖ　（例、メタノール、エタノ−／１／ｌイソプ
ロパノー／Ｖ）、ジオキサン、テトラハイドロフラン、
ジメチルホルムアミドあるいハソレラの混合物など〕に
溶がし、触媒〔例、ラネーニッケル、パラジウム−炭素
、パラジウム−炭酸バリウム、酸化白金、ロジウムコン
プレックス、コバ）Ｖ　）のフネー型触媒、鉄のラネー
１￥、Ｉ触ηＶ島′ｉ１１のラネー型触媒など〕の存在
下に−り記ｉｄ　ｉ（：’ｔ、中に水；（クガスをる入
する。

本反応は、約２０”Ｃないし１００　′Ｃ，サラＫＡＩ
Ｈしくは約６０℃ないし８０　’Ｃの？温度で、約１０
分ないし１０時間反応させることにより行なわれる。

常圧でも反応は進行するが、約５ないし２００　ｋｑ／
画２の加圧下に行なうと好都合である。

還元剤を用いる還元を行なうには、化合物＜　ＩＩＩ　
）を、還元剤〔例、金凡水素化合物（し）ｊ、水素化ア
ルミニウムリチウム、水素化ポウ；）ζナトリウム。

トリブチル く例、リチウム、ナトリウムなど）１＜ｌｉ・人すＳ（
し１１、塩化クロム、酢酸クロムなどの二価のクロムノ
１ζ・誦など）＋．！Ｉ４！鉛，　リｌ！鉛アマルガム
などノと、溶りＬ〔ｆＡＪ　、メタノール、エタノール
、ｔ−ブタノール。

アミルアルコール、ジメチルホルムアミド、ジオキサン
、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、エチレ
ングリコール、エチレンジアミン。

ジエチレントリアミンなど〕中で処理することにより行
なわれる。本反応は、約−５０′Ｃないし＋　５　０　
’Ｃ、さらに好１しくは室温ないし約８０′Ｃで、約０
．５ないし１０時間反応させる。

電解還元を行なうには、化合物（ｆｆｌ）全庖当な溶媒
にｊ６かし、通７．９用いられる方法で行なわれる。

たとえば、化合物（］■）を溶媒〔例、アルコール（例
、メタノール、エタノ−／Ｌ’）、アンモニア。

ジメチルホルムアミドなど〕に浴解し、低送″Ｉ％を圧
″１に極（し１］、白金，タングステンなど）ｔたは高
過電圧電極（例、鉛，亜鉛，水銀など）を用いて行なわ
れる。この場合、溶液のｐＨ全ｌ′Ｌ！２注薗に、たと
えばｐＨ　３ないし５に１１”６　ｚ．Ｅすると好都合
である。

不反応は、約２０゛Ｃないし１００Ｃで、さらに好まし
くは約６０ないし８０°Ｃで、約１ないし５時間反１，
６込せる。

このようにして由られた化合物（１１）金保取。

七，！鯛するにちたっては、本物質の性状に基づいて、
椋々の方法’＃　＋ｉｌ：ａ当に組み合せることによっ
て容易に行ないうる。すなわち、ｉ４’ｉｌえば、中性
ないし鎖酸性で、水と混和しない有’ａ　ｌＷ媒、例え
ば酢１°１ぞエチル、酢酸ブチル、クロロホルム、エタ
ノール。

ベンゼン、トルエン、ジエチルエーテル、メチレンクロ
ライド、メチルイソブチルケトンなどによる抽出、活性
伏，シリカゲル、アルミナなどを用いる吸着クロマトグ
ラフィー、セファデックスカラムによるゲ）ｖ’ｉ：＋
過、イオン’２　ｅ’Ａ　４？’Ｊ　ＢＵによるイオン
交換クロマトグラフィーなどである。これらの手段全適
当に組み合わせて使用することにより、化合物（ＩＩ）
を結晶あるいは結晶性粉末としてＪｌｊ製，単離される
。

後述の実施例３〜６で得られンｔ　Ｐ　−　２　３　９
　２　４ＡＲ．ＢＲ，ＣＲおよびＤＲの物理化学自注γ
パ↓牙以下に記載する。

（ａＪ片（点： Ｐ−２３９２４　ＡＲ　１４５−１４９ｃ；　ｎｎ　１
５６ｙ１５９’ｃ；　ＣＲ　２１０−２１２’Ｃ；　１
１１？　２６３−２６（ｉｃ（ｂ）元素分析イ直（火１
則（直　）　：Ｃ　Ｉ ＡＲ　６６、９９±１．０　５．２７＋０．５ＢＲ６３
，９３±ＬＯ５，５２±０．５ＣＲ６２，９６±１．０
　５．１０±０，５ＤＨ６３，０３土１．０　４．９９
±０．５（ｃ）分子量（マヌヌベクトルによる）および
分子式分子量　分子式 ＡＲ２３２Ｃよ３　”１２０４ Ｂ’Ｒ’　２６２　ｃ工。Ｈ工４０５ ＣＲ２４８０１３）（１２０５ Ｃ鯰０．２０％） ＡＲ０６ ＢＲＱ。

ＣＲ０８ ＤＲＱ。

（ｅ）溶解性： Ｐ−２３，９２４Ａｎ、Ｂｕ、ｃＲ，ＤＲはいずれもジ
メチ／Ｌ／ヌルホキ／ド、ピリジン、酢酸エチル、クロ
ロホルム、ジオキサンに易溶又バーｉＪ浴。

水、ｎ−ヘキサン、石油エーテルに難溶又は不ｍ　。

（ｆ）紫外部および可視部吸収スベク）Ａ／：第１９〜
２２図に示す。

各溶剤に溶解した直後の極大吸収を示す波数（ｎｍ）お
よびＥに値は下記の第２表の通シである。なお、第１９
〜第２２図において−はメタノール中での測定結果を、
−ｍ−−は０．ｌＮＨＣｌ−９０％メタノール水中での
測定結果を、−−一はＯ、ＩＮ　ＮａＯＨ−９０％メタ
ノール水中での測定結果をそれぞれ示す。

（以下企ｈ） り赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠により測定し
た赤外線吸収スペクトルを第２３〜第２６図に示す。極
大吸収を示す主要な波数＋１１次のとおシである。

（υＡＲ ３４００−３４５０，２９００−３０００，１６６０゜
１６３０、＋６０５．　１５７０．　＋４９０．　１４
２０゜１３７０、　１３３０．　１３１０．　＋２７５
．　１２４０゜１２００、　１１６５．　１１４０．　
１０６０．　１０００゜９１０、ａｙｏ、ｓ＋ｏ、８ｏ
ｏ、７００゜２０ 第２３図参照 （２）　Ｂ　Ｒ ３４００−３５００，２９６０，１６７０，１６３０゜
＋６００．１４９０．１４５５．１４２０：　＋ａａｏ
。

＋３３０．１２９０．１２３０．＋２２（１−、＋１５
０゜１１１０、＋０８０．１０２０．　９８０’、９２
０゜８７０、８２０．　γ９０．　γｏ５ 第２４図参照 （３）ＯＲ ３４００−３４５０．　２９３０．　１６８０．　１６
４０゜＋６００．　１４８５．　１４２０．　１３Ｂ０
．１３５０゜１３１０、−１２６０．１２５０．１２２
０．１２＋０゜１１４０、　１＋２０．　１０１５．　
９８０．　９６０゜９２０、８７０．　８５０．　７９
０．　Ｔ１０第２５図参Ｎ（イ （４ンＤＲ ３４３Ｇ、２９５０．　ｌＧ５５．　１６２０．　１５
９５゜＋４９０．　１４５０．　＋４３０．　１３６０
．　１３１０゜１２９０、　１２２０．　Ｎ３０．　１
１００．　１０８０゜＋０２０．　９４０．　８９０．
　８６５．　８３０゜７８５、７６０．　７１０．　６
８５ 第２６図参照 （司呈色反応：　Ｐ　−２３９２４Ａ　Ｒ＋　Ｂ　Ｒ＋
　ＣＲ＋ＤＲはいずれも塩化第二鉄反応、ハイドロザル
フフイＦによる還元反応陽性。

ニンヒドリン反応、ｐ−アニスアルデピドー硫酸反応陰
性。

（ｉ）注状：Ｐ−２３９２４ＡＲ，ＢＲ，ＣＲ，ＤＲは
いずれも弱酸性能Ｍ性でおり、抵色ないし橙赤色ないし
赤橙色の結晶又は結晶性粉末金示す。

（ｊ）核磁気共鳴スベク）／Ｌ’：４００メガヘルツ・
ジメチル−ｄ　・スルホキシド中でＩ剃疋し７Ｅヌベク
トルを第２７〜３０図に示す。特徴的ピークとその帰属
を以下に示す。

（１）　Ａ　Ｒ ｉ　ＤＭｓｏ−ａ　ｐｐｍ：２−０８５（３１Ｌｄ、Ｊ
＝１．６Ｉｆｚ、２−ＣＲ５）　、６．８６７（ｉｎ、
ｑ−Ｊ＝１．６ｕｚ１３−Ｈ）１７−０５７（１ＨＩ８
１５−Ｈ）１３．９５２（３Ｈ，臼、６−ｏｃｕ３）、
２．０４！Ｈ３ｕ＋Ｇ、７−ＣＲ５）、１２．３１４（
ｌＨ＋ｅ、重水置換により消失、３−０Ｈ） 歩ｒ！、２７図参照 （２）ＢＲ δＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　１　、９４９”（３１（、
、、ｓ　、２−ＣＲ５）　。

４、．０２６（３Ｈ９ｓ＋３−０ＣＨ３）　、７．’１
００（Ｈ（。

ｓ＋５−Ｈ）、３．！１１４９（３Ｈ，Ｑ＋６−０ＣＨ
３）＋２．０５３（３Ｈ，ｓ、γ−ｃＨ，，，）、１２
．５１０（ｉｎ。

０、重水置換によシ消失、　１３−０Ｈ）第２９図参照 （３）ＣＲ δＤＭＳＯ−ｄ６ｐｐｍ：　６．２４２（１に、ａ　、
２−Ｈ）。

３．８７０（３Ｈ，ｓ、３−０ＣＨ３）、７．１２７（
ＩＨ＋ｓ　＋５−Ｈ）、３．９４９（３Ｈ，ｓ　＋６−
ＯＣＨ３）＋２．０６３（３Ｈ，ｓ、７−ＣＲ５）、１
２．６３１（ＩＨ。

日９重水ム換によ如消失、　８−０Ｈ）第２９図参照 （４）ＤＲ δＤＭＳＯ−ｄ６　ｐｐｍ：　１．９１Ｂ（３ｆｉ、０
．２又は７−ＣＨ３）、３．９９３（３］（、ｓ＋３−
ｏｃＩｉ３　）。

ｂ　、９６９　（’＋　ＩＮ　＋　ｓ　、５−　Ｈ）　
、１０−９４０　（Ｉ　Ｒ、ｓ　＋重水置換によシ消矢
、６−０Ｈ）、２．００５（３Ｈ＋　ｓ　＋　２又は７
−ａｎ、、）、！２．６３７（Ｉｎ。

８、重水置換にニジ消失、　８−０Ｈ）第３０−参照 （社）Ｗ４ｉ−クロマトグラフィーのＲｆ　ｉ似ニジリ
カゲル・プレート（メルク社製、商品：１８号５７２９
）および逆４目糸ＨＰＴＬＣプレート、　ＲＰ−１８（
メルク社製、部品番号１ｓｒ２＋＞ｉでのＲｆ　値は下
記の通りである。

Ｐ　−、，２３９２４の生物学的性質を以下に示す。

（ａ）プロトコラーゲン・プロリン水酸化ＤＸ　素ＤＪ
、　４作用：阻潜活性の測定はに、工、　Ｋｉｖｉｒｒ
ｉｋｏらおよびＪ、Ｈａｌｕ＋ｅ　らの方法（Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｒ、ａｉＣｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ　２４２　＋　４００７　（１９６７）およびＢｉ
ｏｃｈｉｍｉｃａ　ｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙａｉｃａ　Ａｃ
ｔａ　１９０　＋４６０　（１９６７））に準じて、４
胚より調製しノｄ１１１分稍製酵素係品を使用し、（Ｐ
ｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ）５　・４Ｈ２０（蛋白質研究奨
励金製、大阪）を古゛５タルとして、　Ｒ，Ｅ、　Ｒｈ
ｏａｄｓらの方法（ＭｅｔｈｏｄＢ　ｉｎＥｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ　ＸＶＩＩ　Ｂ、　３０６　（１９７１ン〕　
にｚ１！−じて行なった。不法によシ部分積限ｎ’ｉ累
１００メ’ｇ（缶白質として）の活性’ｔ５０”％”１
！ｉｔ害するのに必要なＰ−２３９２４の濃度は下記の
通シでおった。

Ｐ−２３９２４Ａ：６．７Ｘ１０　Ｍ Ｐ−２３９２４Ｂ：９．５Ｘ１０　Ｍ Ｐ−２３９２４Ｃ：５．７Ｘ１，０　１ＬＰ−２３９２
４Ｄ：２．７ＸｌＯＭ Ｆ−２３９２４１：２．ｌＸ１ＯＭ Ｐ−２３９２４Ｆ＋２．１ＸＩＯＭ 上記と同様の方法で、Ｐ−２３９２４ＡＲ。

ＢＲ、ＣＲまたはＤＲのプロトコラーゲン・プロリン水
酸化醇索阻害作用を測定した。結果全下表に示す。

（以下途・自・） 上記の結果から明らかなように、Ｐ−２３９２４は、プ
ロトコラーゲン・プロリン　水酸化酵素活性を強く阻害
する作用を有する。

（ｂＪ　：ｒラーゲン生合成抑制作用：　’Ｉ　、Ｉｐ
ｈｉｍａｒｕらの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈ
ａｒｍａｃｃｌｏｇｙ　３１　＋９１５（１９８２））
に準じて、Ｐ−２３９ｊ４を１日１回、６日冊、ＳＤ−
系ラット（雌、３週令）の腹腔内に投与し、子宮のコラ
ーゲン量お裏び非コラーゲン蛋白質量を対照群と比較し
た。以下の第３表に示したようにＰ＃−２３９２４はそ
れぞれコラーゲンの生合成を選択的にかつ有意に抑制し
た。

（以下金乙） 第３表における注を以下に示すつ ※※　非コラーゲン性蛋白質量二全蛋白景−コラーグン
量 ※※※エストラジオール−１７βΣ５％工１ｅ／−ル含
有生理食塩水に溶解した。

尚、実務【は１群１０匹のラットを使用した。

Ｐ−２８９２４の急性毎性〔ＬＤ５ｏ値（ラット、′＃
、Ｉｉｌ内投与）〕全投与に示す。

ｐ−２８９２４Ａ：１００〜２００１１１！／ｋｑ。

Ｐ−２３９２４Ｂ　：５０　〜１００ＭＩ／ん（ｊ、Ｐ
−２ａ９２４Ｃ：１００　〜２０（ＩＦ／ん９．　Ｐ−
２ａ９２４Ｄ　：　４００８１／に９以上、Ｐ−２ａ９
２４Ｅ：約５０に１／ｋｙ、ｐ−２３９２４Ｆ：　５０
〜ｒ　ｏ　ｏ　ｗ／Ｉｃｙ・ 上記したように、Ｐ−２３９２４は、プロトコラーゲン
・プロリン水酸化酵素阻害作用および選択的なコラーゲ
ン生合成抑制作用を有するので、例えば生化学的試薬あ
るいは動物組織の線維化抑制剤などとして有用である。

すなわち、Ｐ−２３９２４は、１１１０乳動物（ウザギ
、ラット、マウス、イヌ、ネコ、人など）の１臥器繊維
症の予防・治療剤としてたとえば肺線維症。

肝硬変症、腎侠化症、動脈嫂化症９強皮鉱、骨ｌ／Ｉ’
ｎ腺維症、慢性関１ｋ１１炎などの予防・治療のために
用いられる。

Ｐ−２８９２４の投与量は対象疾患、症状、投与対象、
投与方法によって異なるが、臓器線維症の予防・治療剤
として投与する場合は哺乳動物１日あたシ０．２ないし
２ｏｖｙ／ｈｑとなる量を１ないし３回に分けて投与さ
れる。

Ｐ−２８９２４を投与するにあたっては、それ自体ある
いは適宜の薬理的に許容される担体、　ｊＩＡ形剤、希
釈剤と混合し、粉剤、顆粒剤９錠剤、カプセル剤、注射
剤などの剤型で経口的または非経口的に投与することが
できる。

上記経口製剤、例えば錠剤を製造する際には、結合ＪＩ
ｒ例、ヒドロキシゾロｌｌ？”／Ｉ／セルローヌ、ヒド
ロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴールなト）
、崩壊剤（例、デンプン、カルボキシメチμ七μロース
カルシウムなど）、賦形剤（例、乳糖、デンプンなど）
、滑沢剤Ｃ例、ステアリン酸マグネシウム、りρりなど
）などを迷宜配合することができる。

また、非経口製剤、たとえば注射剤を限造する際には、
等張化剤ｃ例、ブドウ糖、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マン
ニトール、塩化ナトリウムなト）。

防腐剤（例、ベンジμアμコー／ｌ／、クロロブタノ−
／Ｌ’、パラオキシ安息香鹸メチル、パラオキシ安息香
酸プロピルなど）、、緩衝剤（例、リン酸塩緩衝液、酢
酸ナトリウム緩勧液など）などを適宜配合することがで
きる。

Ｐ−２８９２４は、生化学的試薬として、たとえば動物
の培養細胞におけるコラーゲン生合成の阻害剤として、
あるいはプロトコラーゲン・プロリン水酸化酵素活性に
対する特異的阻害剤として有効に利用できる。

以下に本発明を実施例にょシさらに具体的に説明する。

培地のパーセントは、重量／容量パーセントを示す。

実施例１ ストレプトミセス・エスピー１６２３９２４（ＩＦＯ１
４２０５，ＦＥＲＮ　ＢＰ−３３’８）をグルコース２
．０％、グリセリン１．０％、生大豆粉０．５％、コー
ン・ステイープ・リカー０．５％、ポリベグトン（六五
栄養化学株式会社製）０．３％、塩化ナトリウム０．３
％、炭酸カルシウム０．５％、ｐＨ７−０からなる液体
培地４００ゴを含む２１容坂ロフラスコ５本に接種し、
２８℃で２日間往復振部培養して培養液約２４を１４だ
。

この培養液を上記と同一の培地１００１を含む２００１
谷タンクに移し、２８℃で２日間、３ｉ１）気撹拌培養
した。得られた培養液６０１を可溶性澱粉４％、脱脂大
豆粉２％、チオ硫−ナトリウム０．１％、硫酸マグネシ
ウム０．０５％、リン呵ρ二カリウム０．０５％、塩化
カリウム０．０３％（ｐＨ６−０）からなる液体培地１
２０Ｏｎを含む２０００＃タンクに後型し、２４°Ｃで
５日間通気撹拌培養を行なった。得られた培養液約１１
５０ｎに、ドブコパーライト＃３４（束興バ−ライト工
業株式会社製）１５ｋｇを加え、ハイフロスーパーセ／
Ｌ／（ジタンズ・マンピル社ｍ、米国）ａ４ｋｔｉ（ｘ
プレコートしたフィルタープレスを用いて菌体および固
形物を炉辺し、炉液約１０００Ａを得た。菌体および固
ル物は水１５０１で洗浄後書濾過して洗液１５０１を得
た。この炉液と洗液を合わせ、硫酸でｐＨ３−０に調整
し、イ答の酢酸エチρを用いて６ｔ５ｏａボドビルニア
ツク抽出装置（ポドビルニアック社製、米国）により向
流抽出した。得られた抽出液約４３０４は１％炭酸水素
ナトリウム水イ容で同じ装置を用いて転溶し、転溶液２
１５１を得だ。転溶液を硫酸でｐＨ３，０にル１１整し
たのち、沓び号容の酢酸エチルで抽出し、に容の水で２
回繰返し洗浄後、減圧濃顧した。濃縮液（４００ｙｌ）
をシリカゲル（メルク社製、西ドイツ）カラム（４，６
Ｘ６５りに流し、酢酸エチ／ｌ１５００ｙａｔ、つづい
て１％蓚酸含有酢酸エチ／Ｉ／ａｌｌで溶出した。活性
区分（約８１）を集め、５００ゴの水で２回洗浄したの
ち減圧下濃酪乾匠し、得られたｌｉ！Ｌｌ形物をジメチ
ルスルホキサイド約３００ｔｌに溶解した。この耐液に
水３０ｙｘｌを加えたのち、Ｐｒｅｐ　ＰＡＫ−５００
／　Ｃ□８カラムを装着したＰｒｅｐ　ＬＣ／　Ｓｙｓ
ｔｅｍ　５００　Ａ型分取用液体クロマトグラフ装置（
ウォーターズ社鯛。

米国）に尋人し、メタノール−水（１：１）混液３１、
つづいてメタノール−水（ａ：２）混液５１、最後にメ
タノ−μ２１を用いて溶出し、溶出液を５００ｓ＋／づ
つ分取した。主としてＰ−２ａ９２４Ａ　、Ｃ、Ｄおよ
びＥを含有する両分（フラクション２〜８）ａ、ｉと、
主としてＰ−２８９２４Ｂを含有する画分（フラクショ
ン９〜１ａ）２．５Ａに分けた。ｐ−２３９２４Ｂも有
画分は室温で放置すると約２．３ｇの黄橙色のＰ−２３
９２４Ｂ結晶が析出したのでこれを戸別したのち、母液
を減圧濃縮して的１１とし、届容の酢酸エチルで３回抽
出し、抽出を伐に無水硫酸ナトリウム５０ｆをｈ≦加し
て脱水後、約：３０ｔｎｌまで７１Ａ／ｒＭし、ｎ−ヘ
キサン２００ｖ；ｌを加えると＊橙色結晶性のＰ−２ａ
９２１ｓ粗粉末約７．１Ｆかえられた。この粗粉末をメ
タノ−１’ｌｕ液から再結晶し、Ｐ−２８９２４Ｂの結
晶的３ｇを得だ。Ｐ−２，３９２４Ａ、Ｃ，ＤおよびＥ
含有画分を杓１００ｇ７まで濃縮し、シリカゲル・カラ
ム（４，０Ｘ４２ｆｆｌに流し、１％蓚酸古有酢酸エチ
ル２１で溶出した。溶出液は１００ゴづつ分取し、王と
してＰ−２ａ９２４ＡおよｑＤを含有する画分（〕・ラ
クション２〜７）６００ｇ／と、主としてＰ−２ａ９２
４ｃおよびＥを含有する画分（７ラクシヲン８〜１４）
７００４１１’とに分けた。主としてＰ−２３９２４ｘ
およびＤを含有する一分（６００ｇｌ　）を水洗後、謂
媚乾固し、メタノール５０ｍ１に溶解し、水５０ゴを加
えて猾釈したのち、上記と同一の分取用液体クロマトグ
ラフ装置にかり、メタノール−水（１：１）混液５．５
１で溶出した。

溶出液は５００ゴづつ分収し、フラクション１３〜１５
までの区分１．５１を集め、約’１００ｒｔｒｌまで減
圧６刷したのち、２００ゴの酢酸エチルを添加して３回
反復抽出した。抽出液を合わせて無水硫酸ナトリウム３
０ｇを添加して脱水後、減圧濃縮し、濃、縮液約ａ（Ｊ
ｘｌにｎ−ヘキサン２００／を加えると、Ｐ−２ａ９２
４Ａおよび１）を含有する黄橙色粗粉末１．７ｆがえら
れた。この粗粉末をクロロホルム−酢酸（４：１）混液
１００ｙｔに溶解し、シリカゲル・カラム（ａ、５Ｘ５
２ＣＭ）Ｋ流し、クロロホルム−酢酸（４：１）混液４
００鍔ｔ、クロロホルム−酢酸（７二３）混液Ｂを用い
て溶出した。溶出液は１０＊／づつ分取し、主としてＰ
−２ａ９２４Ａを含有する区分（フラクション２５〜２
９）と主としてＰ−２３９２４Ｄを含有する区分（フラ
クション３６〜１ａ６）に分けた。ｐ−２ａ９２ｔＡ含
有画分（５０がｔ）を減圧下に濃縮乾固し、メタノ−／
ｌ／２０ｏＭｔに溶解したのち、水２００Ｈｔｆ：添加
し、上記分収用面体クロマトグラフ装置を用いて再クロ
マトグラフィーを行ないＰ−２ａ９２４Ａ区分を集めた
。この区分を減圧濃縮後、酢酸エチルを加えて抽゛出、
脱水したのち濃縮するとＰ−２８９２４Ａの粗粉末的２
５０９かえられた。この粗粉末をメタノール耐液から再
結晶すると負橙色のｐ−２ａ９２４Ａ結晶約１００ｇ＃
ｆえられた。次いでＰ−２８９２４１１を含有する区分
１１を減圧下に濃縮乾固し、乾固物を酢酸エチル約５０
０躍ｔに溶解し、２００ゴの水で３回繰返し洗浄した。

洗浄酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウム５０ｆで脱水後
、酢酸エチルを減圧下に留去し、濃縮液約ａＯｔｒｔｌ
にｎ−ヘキサン２００ゴを加えると黄橙色のｐ−２ｄ９
２４Ｄ粗粉末約０．７１かえられた。この粗粉末をクロ
ロホルム−酢酸（４：１）混液２５ｔｘｔに溶解し、シ
リカゲル・カラム（ａｘ４５ｃＩＩりに流し、クロロホ
ルム−酢酸（４：１）混液で溶出し、Ｐ−２ａ９２４Ｄ
区分を集めた。この区分４００πｌを減圧濃縮し、濃縮
液８０ｍ１に水１００ｙｌを加えたのち、ｈ容の酢酸エ
チルで３回反復抽出した。抽出液を合わせ、水洗、脱水
したのち、酢酸エチルを留去してえられた粗粉末的５０
０７４をメタノール−酢酸エチ／Ｉ／（１：５）混液か
ら再結晶すると黄橙色のＰ−２ａ９２４Ｄの結晶性粉末
的３３０９かえられた。次に、シリカゲル・クロマトグ
ラフィーによってえられた主としてＰ−２３９２４Ｇ、
Ｅを含有する区分（フラクション８〜１４）７００ｇｔ
を水洗、脱水後、酢酸エチルを留去し、残渣をメタノー
ル５０Ｍ／に溶解した。この溶液を水で２倍に希釈した
の゛ら１分取用液体クロマトグフフ装置（上記と同一カ
ラム）にかけ、メタノール−水（１：１）混液に溶出し
た。溶出液は２００ゴづつ分取し、主としてＰ−２３９
２４Ｅを含有する区分（７ラクシヨン１０〜１３）８０
０ｇ／とＰ−２ａ９２４Ｃを含有する区分（フラクショ
ン１４〜１８）１７？とに分けた。Ｐ−２ａ９２４Ｅ含
有画分を減圧濃縮し、３容の酢酸エチルで３回反復抽出
、脱水後、約２０ｍ１まで濃縮し、ｎ−ヘキサン２００
ｘｌを添加すると黄橙色のＰ−２ａ９２４Ｅの粗粉末的
１２０！？ｆかえられた。この粗粉末をクロロホルム−
メタノール（ａ　：　２　）混ｆ（ｔａ　０ｔｔｒｌに
溶解し、シリカゲル・カラム（ａＸ４５Ｃｆｆ）に流シ
、クロロホルム−メタノール（ａ：２）でａ出し、Ｐ−
２３９２４Ｅ含有区分を集めて’１ＭＭ６し、濃縮液１
０ｔＩＩｔに酢酸エチ／Ｉ／１０π１．　ｎ−ヘキサン
５０ゴを加えると黄橙色のＰ−２３９２４Ｅの結晶性粉
末的３０■がえられた。ｐ−２８９２４ｃを含有する画
分１７は、減圧下に濃縮乾固し、乾固物をクロロホルム
Ｌ５ｗｌに溶解し、シリカゲル・カラム（ａ、０Ｘ４５
ＣＩＸ）に流し、クロロホルム−酢酸（４：１）混液で
溶出し、Ｐ−２ａ９２４Ｃを含有する区分を集めた。こ
の区分を濃縮乾固するとＰ−２ａ９２４Ｃの粗粉末的１
５０〜かえられた。この粗粉末を酢酸エチ＃　７０　ｔ
ｔｔｌを加えて溶解し、２０房ｌの水で３回繰返し洗浄
したのち、無水硫酸ナトリウム２．５ｆを加えて脱水、
酢酸エチル溶液を減圧濃縮して約１０ゴとし、ｎ−へキ
サン２５ｍ１を加えると黄橙色のＰ−２３９２４０の結
晶約８５Ｍｙかえられた。

次に前記と全く同じ方法で、培養液から酢酸エチルによ
る抽出、１９Ｇ炭酸水素ナトリウム水による転溶、酸性
側での酢酸エチルによる抽出、水洗。

濃縮等の操作を経て得られた濃闇液（２００ゴ）をシリ
カゲＩＬ／（メルク社−１西ドイツ）カラム（４，６Ｘ
６５ｃ１１ｔ）に流し、酢酸エチ１２１．つづいて１％
蓚酸含有＃酸エチル７１で溶出した。

主としてｐ−２ａ９２４ｐを含有する区分２１を集め、
８００　ｍｌの水で２回洗浄したのち、減圧上濃縮乾固
し、得られた固形分をクロロホルム−酢ｅ（９：１）混
液８０ｗｔに溶解した。この溶液をシリカゲルカラム（
ａ、４Ｘ５４Ｃ＃）に流し、クロロホルム：酢酸（９：
１）混液１．２１、同（８：２）混液１．２１、同（７
：ａ）混液１．２１で溶出し、王としてＰ−２３９２４
Ｆを含有する区分（約１．５１）を集めて減圧下に濃縮
乾固し、得られた残漬をメタノール−水（１：１）混、
液４００ｇｔに溶解したのちＰｒｅ　ｐ’　ＰＡＫ　−
５００／Ｃｘａカラムを装着したＰｒｅｐ　ＬＣ／Ｓｙ
ｓｔｅｍ　５　’００　Ａ型動収用液体クロマトグラフ
装置に尋人し、メタノール−水（ａ：２）混液５１を用
いて溶出しだ。

主としてＰ−２３９２４Ｆを含治する区分を集めて減圧
下に濃縮乾固するとｐ−２８９，，２・４Ｆの粗粉末１
．３ｇが得られた。これをメタノール：水（８：２）混
液から再結晶すると黄橙色のＰ−２３°９２４Ｆの結晶
約５００１ｐｙが（−：、＋られた。

実施例２ 実施例１と同様の種培養液６０ｅを、可溶性を肴＃４％
、デキストリン１％、脱脂大豆粉２％、チオ硫酸ナトリ
ウム０．１％、硫酸第一鉄・７結晶水０．０５％、リン
酸二カリウム０．０５％、塩化カリウム０．０３％ｐＪ
（６，０からなる液体培地１２０Ｏｎを含む２００Ｏｎ
容タンクに後型し、２４℃で６日間通気撹拌培養を行な
った。えられた培養液約１１００４を実施例１と同様の
方法で、ｐ過、酢酸エチル抽出、炭酸水素ナトリウム溶
液への転溶、酢酸エチル再抽出したのち、１ｍ　１ｈＩ
ＩＬ、濃縮液７００　ａｔを得た。この２ａ縮液をシリ
カゲル・カラム（５，４Ｘ６５ＣＭ）に流し、酢酸エチ
ル３１、つづいて１％蓚酸含有酢酸エチル１０１で溶出
し、主とＩ、てＰ−２ａ９２４Ａ、ＢおよＵＤを含有す
る区分２．６４と、主としてＰ〜２ａ９２４ＣおよびＥ
を含有する区分４．２４と、主としてＰ−２８９２４Ｆ
を含有する区分３．Ｏｌとに分けた。Ｐ−２１９２４Ａ
、ＢおよびＤ含有ＩＮ分は水洗、脱水後、酢酸エチルを
留去して得られた残渣を２００　ｔｓｌのメタノールに
溶解した。この溶液にジメチルスルホキサイド２００　
ｚｑｔおよび水２００ｔｔｌを加え、Ｐｒｅｐ　ＰＡＫ
−５００／　Ｃ１ａカラムを装着したＰｒｅｐ　ＬＣ／
Ｓｙｓｔｅｍ　５００　Ａ型分取用液体クロマトグラフ
装置に導入し、メタノール−水（１：１）混液で溶出し
、主としてｐ−２３９２４人およびＤを含有する区分２
．５Ｉｌと王としてＰ−２３９２４Ｂを含有する区分ａ
、ｌｌとを集めた。

Ｐ−２ａ９２４ＡおよびＤ含有ＩＫ分は上記液体クロマ
トグラフ装置で再りロマトグフ７したのち、濃縮、酢酸
エチル抽出、脱水、濃縮操作を行ない濃縮液５０　ｔｔ
ｔｌをえた。これをシリカゲル・カラム（４，５Ｘ・’
ｔｏｃｍ）に流し、ジクロフレメタン−酢酸（９：１）
混液１，５１、同（８：２）混液５．０１．弓（７：ａ
）混液２１の順に溶出し、主としてＰ−２３９２４Ａを
含有する区分ｌｌとＰ−２ａ９２４Ｄを含有する区分１
．２１を集めた。

Ｐ−２ａ９２４Ａ含有区分を３００ｉ／の水でａ回水洗
シたのちジクロルメタン層を分取して濃縮乾固し、乾固
物をメタノ−／ｌ／２００ｔｔｌに溶解し、水２００ｇ
／を加えて、前記と同一の条件で分散用電体クロマトグ
ラフ装置にかけた。Ｐ−２８９２４Ａ含有区分を集め、
濃縮してメタノールを留去し、８容酢酸エチルで３回抽
出を繰返したのち、抽出液を合わせて脱水し、濃縮乾固
した。乾固物をメタノ−μに溶解し、放置するとｐ−２
ａ９２４Ａの結晶ａ　００　Ｓ２がえられた。つぎにＰ
　−２，１＄　９２４Ｄ金含有分（１，２１）を減圧濃
縮し、濃縮液３０ｍｔケシリカゲル・カラム（ａ、５Ｘ
５（Ｂ１１）ニ流シ、ジクロルメタン層酢ｅ（９：　１
　）１％液１１、同（８：２）混液、川（７二３）混液
各１４で順次溶出した。主としてＰ−２８９２４Ｄを含
有する区分１＃４１を集めて減圧下に濃オと乾固し、乾
固物にメタノ−／Ｉ／２００ゴを加えて溶解した。

この溶液に水２００がｔを加え、前記と同一の条件で分
取用液体クロマトグラフを行ない、Ｐ−２ａ９２４Ｄ区
分２．７１を集めた。この両分を減圧下にメタノ−μを
留去して得た濃描液１．５１に入谷酢飲エチρを加えて
３回反復抽出したのち、脱水し、約２６ｙｔｔｌまで濃
縮放置するとＰ−２ａ　９２４　Ｄｔｒｉ晶約１ｇかえ
られた。Ｐ−２３９２４Ｂを含有する一分（３・Ｉｎ）
は室温で放置する晶約３ｆかえられた。次に前記の王と
してＰ−２ａ９２４ＣおよびＥを含有する山分（４，２
１）は１１の水を用いて８回洗浄後、無水硫酸ナトリウ
ム８０ノを用いて脱水し、酢酸エチルを留去して得られ
た残渣をメタノール２０ＯｄＶＣｒ＆解したＯこれに水
２００ゴを加えて前記と同一の条件で液体クロマトグラ
フを繰返し、Ｐ−２３９２４Ｅを含有する区分１．８１
とｐ−２ａ９２４ｃを含有する区分２．４４を集めた。

Ｐ−２３９２’４Ｅ食有固分ｔ、ａｎは約５０ゴまで減
圧濃縮し、おらかしめメタノールに懸尚して充填したセ
ファデックスＬＨ−２０（）１／Ｌ／マシア社製、スエ
ーデン）カラム（ａ、５Ｘ５２ｆｆ）に流し、メタノー
ルで溶出し、Ｐ−２８９２４ｘのみを含有する区分２０
０１！Ｉｔを集めた。この画分を減圧１ｇ４怖し、ｔＥ
’４　＊Ｆｊ液２０ｎｌに酢酸エチル２０ゴとｎ−ヘキ
サン２００７Ｊｌを加えると黄橙色のＰ−２８９２４Ｅ
の結晶性粉末的７００＃が得られた。次に主としてＰ−
２３９２４　Ｃを含有する区分２．４１を減圧り縮し、
υ：ｉ＋ｉｉ［１、２１に８谷の酢酸エチルを加えて３
回繰返し抽出したのち、Ω１：酸エチル層を無水硫ｒｉ
’；！　すｌ・リウム２０ｆを用いて脱水し、酢酸エチ
ルを留去して得られた残７Ｍ、（ｉｌ−メタノールにと
かし放ｉ′ｌするとＰ−２ａ９２４Ｇの粗結晶が析出し
だ。

これをメタノールから再結晶すると、ｐ−２ａ９２４Ｃ
の結晶１．５Ｆが得られた。

次に前記の王としてＰ−２３９２４Ｆを含有する区分（
３，ＯＪ？）は水洗、脱水後、酢酸エチルを留去して得
られた残渣をクロロホルム−酢酸（９：１）混液１００
ｒ／に溶解した。この溶液をシリカゲルカラムに（，４
Ｘ５４ｏ＋ａ）Ｋ流し、クロロホルム−酢酸（９：１）
混液１１、同（８：２）混液１ｎ、１ｇ１（７：ａ）混
液１１の順に溶出し、主（！−Ｌ、テＰ−２ａ　９２４
　ｒヲ含有ｆルＬＡ分１　、８　ｇを集め、製糊乾固し
た。乾固物をメタノール−水（１：１）４００ａ／に溶
解し、Ｐｒｅｐ　ＰＡＫ　−５００／　Ｃｚａカラムを
装’Ａ”Ｉ　Ｌ／たＰｒｅｐ　ＬＣ／！９ｙｓｔｅｍ５
００Ａ型分取用液悴クロマトグラフ装置に導入し、メタ
ノール−水（ａ：２）混液で溶出し、主としてＰ−２３
９２４Ｆを含有ｆル区分（２−４ｇ　）’ｃ集めた。こ
れを減圧下に０顛するとｐ−２３９２４Ｆの粗結晶が析
出した。これをメタノール：水（３：２）から再結晶す
るとＰ　−２３９２４Ｆ’の結晶２．５ｇが得られた。

実施例３ Ｐ−２ａ９２４Ａ１Ｆをメタ／−ｔｖａｏＯｔｙｔＫ溶
解し、溶解液を５００ｒｔ容のオートクレーブに入れ、
ラネーニッケ１５ｆを添加したのち、初圧１００　ｋｔ
ｉ／ａｔｔ２．反応温度７０℃で５時間接触還元した・ 反応液を一過して触媒を除去したのち炉液を約２０ｇｔ
まで減圧０桶し、濃幅液を水で希釈して約３００ｙｎｌ
とした。

この液を１００＋＋ｙ／の酢酸エチルで３回抽出をＦＦ
！返したのち、抽出液を５０ゴの水で２回水洗したのち
、酢酸エチル層を分取脱水後、約２０ｒｒｔｔまてｔ・
ミ圧ａ顧すると橙赤色のＰ　−２３９２４Ａ　ｘ＋の結
晶１１９りが得られた。

実施例４ ｐ−２３９２４Ｂ２−５１をメタノール５００ゴに鼎解
し、溶解液を１ｆ容のオートクレーブに入れ、ラネーニ
ッケル１５．ｆを添加したのぢ、初圧１００　ｋｇ　／
　ｏｎ２．反応温度７０℃で５時間接触還元した。

反１６液を濾過して触媒を除去したのち、ｐ液を減圧下
で帳顛乾固した。乾固物をらＴ酸エチル２５０ゴに溶解
し、８解液を１００ｎ？の水で３回水洗したのち、酢酸
エチ／Ｉ／届を分取脱水後、約２５ｔｔｚｔ″！。

で減圧濃＋ｆ（ＩＪすると橙赤色のＰ−２３９２４ＢＨ
の結晶０．９ｇが得られた。

実施例５ １）　−２ａ　９２４　ｃ　３ｆをメタノール７００＊
ｌに藩解し、溶解液をｉｌ谷のオートクレーブに入れ、
ラネーニッケル１５ｇを添加したのち、初圧ｌｏ。

ｋｇ／ｃｍ２．反応温度７０℃で５時間接触還元した。

反応液を濾過してＭ（妹を１奈去したのちｐ液を減圧下
で０扁乾固した。乾固物をｕト酸エチル８００πｌ（（
溶解し、溶解液を水ａ００ゴで３回水洗したのち、酢酸
エチル層を分取脱水後、約５０ｙｌまで漱圧ｍ諦すると
、橙赤色のＰ−２ａ９２４ｃｎの結晶１．２ａｆが得ら
れた。

実施例６ Ｐ−２３９２４Ｄ１ｇを実施例３と同様の操作をおこな
ったところ、橙赤色のＰ　−２８９２４ＤＲの結晶３４
１ｑが得られた。

実施例７ 錠剤 （１ンＰ−２ａ９２４Ａ、Ｂ、ＥまたはＦ　１００＃（
２）乳糖　４７り （３〕コーンスターチ　４ｏＦｙ （４）ハイドロキシグロビルセルロースーＬ　１２ｒ！
ｇｌ蛙あた。ｊＪ２００〜 上記の成分を常法（湿式法）にし菅がってｔｒ　６．ｉ
＋し、錠剤とする。

実施例８ カプセル剤 （１）Ｐ−２３９２４０１００ｒ９ （２）フクトース　１８５り （３）コーンスターチ　６０ｑ １カプセル６たシａＯＯり 上記の成分（１）　、　（２）　、　（３）および（４
）の責を混和したのち、常法に従って顆粒化する。これ
に、成分（４）の残シを加え、常法に従って１号ゼラチ
ンカプセル（第１Ｏ改正日本薬局方）に封入し、カプセ
ル剤とする。

実施例９ カプセル却ｊ （１）Ｐ−２３９２４Ｄ　ａｏｏり （２）フクトーヌ　１３５ｑ （３）コーンスターチ　６０ｑ １カプセ／ｌ／ろたり５００　ｔｌｙ 上記の成分（１）　、　（２）　、　（３）および（４
）の問を混和したのち、常法に従って顆粒化する。これ
に、成分（４）の残りを加え、常法に従って００号ゼラ
チンカプセル（負′Ｘ１０改正日本薬局方）に封入し、
カプセル剤とする。

実施例１０ 錠剤 （ｌｌｐ−２ａ９２４ＡＲ，ＢＲ，ｃＲまたはＤＲ１０
０ｔ！ｙ（２）乳糖　４７り （３）コーンスターチ　４０り （４）ハイドロキシプロピルセルロース−Ｌ　ｌ　２”
７９１錠あだｐ　２００　ｒ９ 上記の成分を常法（湿式法）にしたがって打錠し、錠剤
とする。

【図面の簡単な説明】

第１図ないし第６し１および第１９図ないし２２図は生
理活性物質Ｐ−１３９２４Ａ、ｎ　、Ｃ、Ｄ。 Ｅ、Ｆ、ＡＲ，ＢＲ，ＣＲおよび］ノＲの紫外部および
可視部吸収ヌベク）／しを、第７図ないし第１２図およ
び第２３図ないし第２６図は生ｆ１（活性物質Ｐ−２ａ
９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＡＲ。 ＢＲ、ＣＲおよびＤＲの赤外部吸ｊ■スペクトルを、第
１３図ないし第１８図および第２７図ないし第３０しｌ
は生理活性物１Ｐ−２ａ９２４Ａ、Ｂ、Ｃ。 Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＡＲ，ＢＲ，ＣＲおよびＤＲ’（Ｄ核硫気
共鳴スペクトルをそれぞれ表わす。 式■舊　デ漫 Ｕ」 ６罰Ｉ ｂ」 型Ｎ皆　？ 光頼費　笹 ”１”＝？−￥−！＜” ｂ」 ｉ む碇　Ｕ ＊ｌ頚酷？ 硼咽會？

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１ン、　−ｆＢと式 〔式中、Ｒエ　は水素、メチ／Ｌ’またはヒドロキシメ
   チルを、Ｒ２は水素またはメトキシを、Ｒ３はヒドロキ
   シまだはメトキシを、Ｒ４は水素または弐〇ｕ３ＣＯＮ
   ｕ９Ｉ（ＣＨ３Ｓ−で表わされる基をそれぞれ示ＯＯＨ す。〕で表わされる化合物。 （２）、−ストレプトミセスＪ＾に騙し生理活性物質Ｐ
   −２３９２４Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／まだはＦを生
   産する能力を有する微生物を培地に培養し、培−物中に
   生理活性物質Ｐ−２３９２，４Ａ　、Ｂ　。 Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／またはＦを生成蓄積せしめ、これを
   採取することを特徴とする生理活性物質Ｐ−２３９２４
   Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅおよび／゛まだｄＦの製造法。 （３）、一般式 〔式中、Ｒ１は水素、メチ／ｌ／またはヒドロキシメチ
   ルを、Ｒ２は水素まだはメトキシを、Ｒ３はヒドロキシ
   まだはメトキシをそれぞれボす。〕でイくわされる化合
   物を還元反応に付すことをノｒ、ｓ徴とする二股式 〔式中、Ｒよ　、Ｒ２およびＲ３は＋Ｊｉｌ記と同、（
   Ｊ、＃？丘有する。〕で表わされる化合物の製造法。 （４）、一般式 〔式中、Ｒよは水素、メチル、ヒドロキシメチｐを、Ｒ
   ２は水素またはメトキシを、Ｒ３はヒドロキシまたはメ
   トキシを、Ｒ４は水素または式