JPS6038391A - アンスラサイクリン化合物ｒ２０ｐ１およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ＣＩ）発明゛の背景 本発明は、新規なアンスラサイクリン化合物およびその
用途に関する。

制癌性抗生物質としてのアンスラサイクリン化合物は医
薬として重要な位置を占めており、既に各種のものが提
案されている。

一般に、化学物質の生理活性はその化学構造に依存する
ところが大きいから、アンスラサイクリン化合物につい
てもそのアグリコン部分および糖部分の種類または置換
基において既存のものと異なる化合物に対しては不断の
希求があるといえよう。

〔■〕発明の概要 本発明は、上記の希求に応えるものである。

すなわち、本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２
０Ｐ１は、下式で示されるものである。本発明はこの化
合物の酸付加塩ノーする。

本発明による抗腫瘍剤は、下式で示されるアンスラサイ
クリン化合物Ｒ２０Ｐ］またはその酸付加塩を有効成分
とするものである。

〔■〕発明の詳細な説明 １）化学構造 本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｐ１は、
上記の式（Ａ）で示される化学構造を有する。

この化学構造は、下記のようにして決定された。

すなわち、Ｒ２０Ｐ１を０．ＩＮ塩酸に溶解し、１００
℃にＩ分間放置することによって加水分解することによ
り、アグリコン部分と糖部分としてダウノサミンを得た
。

アグリコン部分は、核磁気共鳴スペクトルおよびマスス
ペクトルの解析により、下記の構造（Ｂ）が推定された
。

また、Ｒ２０Ｐ１の紫外部可視部吸収スペクトル、赤外
吸収スペクトル、核磁気共鳴スペクトル、ＦＡＢ　（Ｆ
ａｓｔ　Ａｔｏｍ　Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ　）　マス
スペクトル、元素分析等の結果より、Ｒ２０Ｐ１の構造
式は上記式（Ａ）の通りに決定された。

２）物理化学的性状 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｐ１の物理化学的性状
のいくつかを示せば、下記の通りである。

（１）外　観：赤紫色粉末 （２）元素分析：　立　旦　Σ　旦 分析値　６４．７９　５．６９　２．８７　２６．６５
計算値　６４．８６　５．６５　２．９１　２６．５８
（Ｃ２６Ｈ２□Ｎ０８） （３）分子量：　４８１．５ （４）融　点：　１４３−１４８℃ （５）紫外部可視部吸収スペクトル 第１図に示した通りである。

ＭａＯＨλｒｒｌａｘｎｍ（Ｅ擾 ２５５（４７２）、２６８（５４８）、４９０（２３８
）、５１３（２６２）、５５０（１６２） ０．０１　Ｎ　Ｎａ　ＯＨ＋Ｍｅ　０Ｔ（２５１（４５
７）、２６５（４９５）、５１８（１９０）、５５５（
２３８）、５９７（１７１） （６）赤外吸収スペクトル（臭化カリウム法）第２図に
示した通りである。

（７）プロトン核磁気共鳴スペクトル （４００メガヘルツ、東クロロホルム中）第３図に示し
た通りである。

（８）炭素１３核磁気共鳴スペクトル （ｉｏｏメガヘルツ、重クロロホルム中）第４図に示し
た通りである。

（９）　Ｆ　Ａ　Ｂマススペクトル 第５図に示した通りである。

（１０）溶解性 酸性水、塩基性水、メタノール、エタノール、ｎ−プロ
パツール、ｎ−ブタノール、アセトン、酢酸エチル、ク
ロロホルムに可溶 水、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルに不溶 なお、Ｒ２０Ｐ１はメタノール溶液中で赤色であるが、
アルカリ性で紫色に変色する。

（１１）　Ｒｆ値 Ｒ２０Ｐ１のシリカゲルプレート上での種々の溶媒にお
けるＲｆ値は、下記の通りである。

展開系　Ｒｆ値（２５℃） クロロホルム：メタノール：ベンゼン　０．１９＝７　
：　３　：　３ クロロホルム：メタノール：酢酸　０．３５＝８：　２
　：　０，０５ クロロホルム：メタノール：アンモニア水　０．５７＝
８　：　２　：　０．０５ （メルク社「シリカゲル６０　Ｆ２５４−１プレートを
使用） この化合物は糖部分に一級アミノ基を有するので、その
酸付加塩がありうる。この場合の酸としては、塩化水素
酸および硫酸が代表的なものとして挙げられる。

Ｒ２０Ｐ１の製造 １）概要 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｐ１は現在のところ微
生物の培養によってのみしか得られていないが、類縁化
合物の合成化学的または微生物学的修飾によって製造す
ることも、あるいは全合成化学的に製造することもでき
よう。

微生物の培養による場合の菌株としては、アクチノマジ
ュラ槙に属するＲ２０Ｐ１生成能を有するものが使用さ
れる。具体的には、本発明者らの分離したアクチノマジ
ュラ・ロゼオビオラセエＲ２０がＲ２０Ｐ１を生産する
ことが本発明者らによって明らかにされているが、その
他の菌株については抗生物質生産菌単離の常法によって
適当なものを自然界より分離することが可能である。ま
た、Ａ。

ロゼオビオラセエＲ２０を含めてＲ２０Ｐ１生産菌を放
射線照射その他の処理に付して、Ｒ２０Ｐ１生産能を高
める余地も残されている。

２）　Ｒ２０株 アンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｐ１生産能を有するア
クチノマジュラ属の菌株として本発明者らの見出してい
るＲ２０株は、下記の内容のものである。

（１）由来および寄託番号 Ｒ２０株は福岡県嘉穂郡嘉穂町太字小野谷の野菜畑で採
取した土壌から分離されたものであり、昭和お年７月５
日に工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されて［微
工研菌寄第７１３８号」の番号を得ている。

（２）　菌学的性状および生理学的性質国際放線菌命名
委員会（ＩＭＦ　）の方法便覧に従って行なった本菌株
の特徴づけは、下記の通りである。

Ａ）形態性状 基生菌糸は分枝しながら寒天培地表面に放射状に広がり
、菌糸の分断は観察されない。空中菌糸は主軸を長く伸
ばし、短枝をはｙ直角（主軸に対して）に分岐（単軸分
枝）シ、その先端に１０個内外またはそれ以上の胞子か
らなる密な小螺旋状胞子鎖（１〜３回転、径２．０〜２
．５μ）及び擬似胞子嚢（径２．５〜３．５μ）や胞子
塊を形成する。

胞子鎖は巾０．５〜０．８μの円筒状シースに覆われ、
その表面は粗面状を呈し、個々の胞子は指骨状に連結す
る。胞子塊は不定形で、その胞子表面は粘質状物質で包
まれている。遊離胞子はまれに観察され、円筒形または
畏円形、巾０．５〜０．８μ、長さ０．７〜１．１μ、
平滑表面を呈する。真正胞子嚢、鞭毛胞子、菌核なとは
観察されない。全細胞加水分解物中にメゾ型ジアミノピ
メリン酸とマジュロースを含むことから、細胞壁タイプ
はＢＩＢと判断される。

Ｂ）培養性状 ％橿培地における培養性状（２７℃培養）の観察結果は
、表１に示す通りである。

Ｃ）生理的性状 生理的性状（炭素源の同化性を含む）は、表２に示す通
りである。

Ｄ）考察および同定 本菌株は、（１）細胞壁タイプがＩＩＩＢであり、（２
）胞子鎖は１０個またはそれ以上の胞子からなり、（３
）擬似胞子嚢や胞子塊を形成し、（４）真正胞子簀及び
鞭毛胞子が観察されないことから、アクチノマジュラ（
Ａｃｔｌｎｏｍａｄｕｒａ　）属に所属すると判断され
る。

野々村の検索表〔醗工、第５２巻、７１〜７７頁、１９
７４年〕と記載〔醗工、第４９巻、９０４〜９１２頁、
１９７１年〕より、本菌株はＡ、ロゼオビオラセエ（Ａ
。

ｒｏｓｅｏｖｉｏｌａｃｅａ　）に最も近縁であると判
断される。

そこで、本菌株とＡ、ロゼオピオラセエの標準菌株（Ｋ
ＣＣＡ−１４５（野々村Ａ−５）］を同条件下で培養し
、両菌株の主要な性状について比較した。

結果は表３に示されるように、菌叢色、裏面色及び最適
生育温度に僅少な差異がみられるものの、分類学的には
極めてよく類（ＩＪ、　Ｌでいる。よって、本菌株は、
アクチノマジュラ・ロゼオビオラセエ（Ａｃｔｊｎｏｍ
ａ山＋ｒａ　ｒｏｓｅｏｖｌｏｌａｃｅａ　Ｎｏｎｏｍ
ｕｒａ　ｅｔ　０ｈａｒａ１９７１）であると同定され
た。

３）培養／Ｒ２０ＰＩの生産 アンスラサイクリンＲ２０Ｐ１は、アクチノマジュラ属
に属するＲ２０Ｐ１生産菌を適当な培地で好気的に培養
し、培養物から目的的を採取することによって製造する
ことができる。

培地は、Ｒ２０Ｐ１生産菌が利用しうる任意の栄養源を
含有するものでありうる。具体的には、例えば、炭素源
としてグルコース、シュークロース、マＡ／）−ス、ス
ターチ、および油脂類などが使用でき、窒素源として大
豆粉、綿実粕、肉エキス、ペゾトン、乾燥酵母、酵母エ
キス、およびコーンスチープリカーなどの有機物並びに
アンモニウム塩または硝酸塩、たとえば硫酸アンモニウ
ム、硝酸ナトリウム、および塩化アンモニウム等の無機
物が使用できる。また、必要に応じて、食塩、塩化カリ
ウム、リン酸塩、重金属塩など無機塩類を添加すること
ができる。発酵中の発泡を抑制する為に、常法に従って
適当な消泡剤、たとえばシリコーンを添加することもで
きる。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培養温度は５℃〜４５℃が適当であるが、２７”Ｃ
〜３０’Ｃが好ましい。この方法でＲ２０Ｐ１の生産量
は、損盪培養、通気攪拌培養共に６日〜７日で最高に達
する。

このようにしてＲ２０Ｐ１の蓄積された培養物が得られ
る。培養物中では、Ｒ２０Ｐ１はその一部は菌体中に存
在するが、その大部分は培養泥液に存在する。

このような培養物からＲ２０Ｐ１を採取するには、合目
的的な任意の方法が利用可能である。その一つの方法は
、抽出の原理に基くものであって、具体的には、たとえ
ば、培譬戸液中のＲ２０Ｐ１についてはこれを水不混和
性のＲ２０Ｐｌ用溶媒（前記参照）例えば酢酸エチル、
クロロホルム、シタノール等で抽出する方法（培養Ｐ液
は中性ないし微塩基性であると抽出効率が良好である）
、あるいは菌体内のＲ２０Ｐ１についてはｐ過、遠心分
離等で得た菌体集体をクロロホルム、酢酸エチル、ブタ
ノール、メタノール、エタノール、アセトン、（１５） 塩酸溶液または酢酸溶液などで処理して回収することが
できる。菌体を分離せずに培養物そのま匁を上記の抽出
操作に付すこともできる。適当な溶媒を用いた向流分配
法も抽出の範躊に入れることができる。

培養物からＲ２０Ｐ１を採取する他の方法の一つは、吸
着の原理に基くものであって、既に液状となっているＲ
２０Ｐ１含有物、例えば培養ろ液あるいは上記のように
して抽出操作を行なうことによって得られる抽出液、を
対象として、適当な吸着剤、例えば活性炭、アルミナ、
シリカゲル、ＶダイヤイオンＨｐ２０ｊ（三菱化成社製
）、［セファデックスＬＨ２０ｊ（ファルマシア社製）
等、を用いたカラムクロマトグラフィー、液体クロマト
グラフィー、その他によって目的Ｒ２０Ｐ１を吸着させ
、その後溶離させることによって、Ｒ２０Ｐ１を得るこ
とができる。このようにして得られたＲ２０Ｐ１溶液を
減圧濃縮乾固すれば、Ｒ２０Ｐ１の粗標品が得られる。

このようにして得られるＲ２０Ｐ１の粗標品をさく１６
） らに精製するためには、上記の抽出法および吸着法を必
要に応じて組合せて必要回数実施すればよい。例えば、
シリカゲル、「セファデックスＬＨ加」、弱酸性イオン
交換樹脂、活性炭などの吸着剤またはゲル沖過剤な用い
たカラムクロマトグラフィー、適当な溶媒を用いた液体
クロマトグラフィー、および向流分配法を適宜組合わせ
て実施することができる。具体的には、例えば、Ｒ２０
Ｐ１粗標品を少量のクロロホルムに溶解し、シリカゲル
カラムを用いて、適当な溶媒で展開して活性成分を溶出
させ、溶出液を減圧濃縮後、更に「セファデックスＬＨ
２（月カラムで溶出させると、Ｒ２０Ｐ１が単一物質と
して分離されるから、これを濃縮してから適当な溶媒か
ら晶析させて、Ｒ２０Ｐ１を結晶として得ることができ
る。

本発明によるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｐ１は、
制癌活性および抗菌活性を有ししかも毒性が低いという
点で医薬として有用な化合物である。

■）生理活性 （１）抗腫瘍性 Ｒ２０Ｐ１は、実験動物の白血病に対して著しい抗腫瘍
作用を示した。例えば、ＣＤＦｌ　マウスに対してＰ３
８８白血病細胞の懸濁液ｌＸｌ０６ケ／マウスを腹腔内
に移植し、移植後より１日目と５日目とにＲ２０Ｐ１を
投与した。関口間観察を行ない、生理食塩水を投与した
対照群のマウスの生存日数を１００とした延命率（％）
で効果を示すと、下記の通りであった。

８．６　１７８ ４．３　１６８ ２．１５　１５３ １．０８　１４６ ０．５４　１１４ （２）抗菌性 Ｒ２０Ｐ１は種々の微生物に対して抗菌作用を示す物質
であり、最小増殖阻止濃度（ＭＩＣ）を寒天平板希釈法
によりめた。

（イ）検定菌が細菌の場合 Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈ１ｎｔｏｎ寒天培ｆｌｕ、／　ｐＨ
７，３／３７℃／２１）時間 （ロ）　検定菌が酵母の場合 ５ａｂｏｏｒａｕｄ　ｄｅｘｔｒｏｓｅ寒天培地／ｐＨ
５，６７５℃／４８時間 （ハ）検定菌がカビの場合 ８ａｂｏｕｒａｕｄ　ｄｅｘｔｒｏｓｅ寒天培地／ｐＨ
５，６１５℃１５日間 ＭＩＣは、１０６個／ｍｌに検定菌の菌体懸濁液あるい
は胞子懸濁液を調製し、ミクロプランタ−で接種して、
培養後の生育の有無で判定した。

（１９） Ｒ２０Ｐ１の最小増殖阻止濃度（ＭＩＣ）微生物　ＭＩ
　Ｃ（μｇＡＩ） Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｇ　ａｕｒｅｕｓ　ＩＦＯ
１２７３２＞　６．７Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌ
ｌｓ　ＩＦＯ３１３４６，７Ｍ１ｃｒｏｃｏｃｅｕｓ　
１ｕｔｅｕｓＡＴＣＣ９３４１（ＭＳ−１）　３．３５
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇＩｎｏｓａ　ＩＩ
ＩＱ）　１２５８２　＞　６．７Ｓａ１ｍｏｎｅ１１ａ
ｔｙｐｈｌｎ＋＋＋ｒｌｕｍＩＩＤ９７１（ＭＳ−１）
　＞６．７Ｅｇｅｈｅｒｊｃｈｌａ　ｃｏｌｔ　ＩＦＯ
１２７３４＞６．７Ｓａｃｃｈａｒｏｒ＋ｙｅａｓｅｅ
ｒｅｖ１ｇｌａｅＡＴＣＣ９７６３＞６．７Ｃａｎｄｉ
ｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　Ｎｏ、　Ｙｕ　１２００　＞
　６．７ｐｅｎｉｃＩ１１１＋ｌＴＩ　ｃｈｒｙａｏｇ
＠ｎｕｍ　ＡＴＣＪコ　１０００２　＞　６．７Ｔｒｉ
ｃｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍａｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ　
＞　６．７上記のように、本発明のＲ２０Ｐ１は抗菌作
用を有し、特にダラム陽性菌に対して抗菌性を示すので
、これらに起因する感染症に対して有効な抗生物質とし
て使用することができる。

（３）急性毒性（ＬＤ５０　） Ｒ２０Ｐ１のマウス腹腔内注射によるＬＤ５０は、（２
０） １００　（ｍｇＡｇ　）以上であった。

２）抗腫瘍剤 このように、本発明のアンスラサイクリン化合物Ｒ２０
Ｐ１はヒトを含む動物の腫瘍、特に悪性腫瘍に対して抗
腫瘍性を示すことが明らかにされた。

したがって、本発明のＲ２０Ｐ１は抗腫瘍剤ないし腫瘍
治療剤として使用することができる。

抗腫瘍剤としてのＲ２０Ｐ１は合目的的な任意の投与経
路で、また採用投与経路によって決まる剤型で、投与す
ることができる。薬剤としては製薬上許容される担体な
いし希釈剤で希釈された形態がふつうである。

抗腫瘍剤としてのＲ２０Ｐ１を実際に投与する場合には
、これを注射用蒸留水または生理食塩水に溶解して注射
する方法が代表的なものの一つとして挙げられる。具体
的には、動物の場合は腹腔内注射、皮下注射、静脈また
は動脈への血管内注射および局所投与等の注射による方
法が、ヒトの場合は静脈または動脈への血管内注射また
は局所投与等の注射による方法がある。

Ｒ２０Ｐ１の投与量は、動物試験の結果および種々の情
況を勘案（７て、連続的または間けつ的に投与したとき
に総投与量が一定量を越えないように定められる。具体
的な投与量は、投与方法、患者または被処理動物の状況
、例えば年令、体重、性別、感受性、食餌、投与時間、
併用する薬剤、患者またはその病気の程度に応じて変化
することはいうまでもなく、また一定の条件のもとにお
ける適量と投与回数は、上記の指針を基として専門医の
適量決定試験によって決定されなければならな（１゜ 実　験　例 以下において「チ」は［ｗ、／ｖ％−！である。

実施例１ （１）種母の調製 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して、ｐＨ７，２に調製したものである。

ポリペプトン　１％ モラセス　１％ 肉エキス　１チ 上記培地１５ｍ１　を大型試験管に分注殺菌し、アクチ
ノマ・ジュラ・ロゼオビオラセエＲ２０をスラントより
１白金耳接種し、３７℃にて７２時間試験管振盪機によ
り振盪（２３Ｏｒｐｍ　’）　したものを種母としブこ
。

（２）培養 使用した培地は、下記の組成の成分を１リツトルの水に
溶解して、ｐＨ７，４に調整したものである。

ブドウ糖　２．５％ 大豆粉　１．５％ 乾燥酵母　０．２％ 炭酸カルシウム（沈降性）０．４％ −に記培地１０リットルを１００　ｍｌずつ５００　ｍ
ｌの三角フラスコに分注殺菌したものへ、上記種母１ｍ
ｌを添加し、ロータリーシェーカー（２３０ｒｐｍ　）
を用いて２７’Ｃにて７日間回転培養を行なった。

（３）　Ｒ２０Ｐ　１の採取 培養後、培養液を濾過し、菌体と炉液とを分離（２３） する。ろ液をＩＮ塩酸でｐｎ　２に調整し、「ダイアイ
オン）ｆＰ−２０４（三菱化成社製）のカラム５Ｘ４０
ｃｍ　に吸着させる。蒸留水およびり０チメタノールで
溶出して、濃縮する。濃縮液をｐＨ８，５に調整し、ク
ロロホルム−メタノ−、／Ｉ／（９：１）混液で３回反
復抽出した。この抽出液を濃縮後、６倍量のへキサンを
加えて生じた沈殿物を乾燥すると、赤色粉末１００　ｍ
ｇ　を得る（Ｒ２０Ｐ１粗標品）。

実施例２ 実施例１で得られたＲ２０Ｐ１粗標品１００　ｍｇをメ
タノールに溶解し、メタノールで平衡化した「セファデ
ックスＬＨ−２０Ｊ　（ファルマシア社製）カラム２Ｘ
５０ｃｍにのせ、メタノールでよくカラムを洗った後、
０．５１酢酸−メタノールで溶出する。溶出液を濃縮乾
固した後、クロロホルム−メタノール（９：１）混液に
溶解し、蒸留水で数回洗浄する。有機溶媒層を無水硫酸
ナトリウムで乾燥し、濃縮乾固すると、Ｒ２０Ｐ１粉末
を１０　ｍ　ｇ得た。

（２４）

【図面の簡単な説明】

第１図は、Ｒ２０Ｐ１の紫外部可視部吸収スペクトルを
模写したものである。 ■・・・メタノール中 ２−＝　０，０１　Ｎ　Ｎａ（Ｍｆ−メタノール中第２
図は、Ｒ２０Ｐ１の赤外吸収スペクトルを模写したもの
である。 第３図は、Ｒ２０Ｐ１の”Ｈ−ＮＭＲスペクトルを模写
したものである。 第４図は、Ｒ２０Ｐ１の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを模
写したものである。 第５図は、Ｒ２０Ｐ１のＦ’ＡＢマススペクトルヲ模写
したものである。 出願人代理人　猪　股　清

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式で示されるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｐ
   １またはその酸付加塩 ２、下式で示されるアンスラサイクリン化合物Ｒ２０Ｐ
   １またはその酸付加塩を有効成分とする抗腫瘍剤。