JPS6058232B2 - 新規なジスルフイド誘導体 - Google Patents
新規なジスルフイド誘導体Info
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- JPS6058232B2 JPS6058232B2 JP53085900A JP8590078A JPS6058232B2 JP S6058232 B2 JPS6058232 B2 JP S6058232B2 JP 53085900 A JP53085900 A JP 53085900A JP 8590078 A JP8590078 A JP 8590078A JP S6058232 B2 JPS6058232 B2 JP S6058232B2
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/89—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
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- C07D277/62—Benzothiazoles
- C07D277/68—Benzothiazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は下記一般式〔Ｉ〕
Ｒ、−Ｓ−Ｓ−Ｒ２→Ｃｏ−Ｒ３分ｎＲ、〔Ｉ〕（た
だし、式中、Ｒ、は２−ベンゾチアゾリル基または２−
ピリジールーＮ−オキサイド基、Ｒ２は遊離または保護
された官能基を有してもよいアルキレン基、Ｒ３はアミ
ノ酸または低及ポリペプタイドのカルボキシル残基、Ｒ
４はカルボキシル基、その反応性誘導体または保護され
たカルボキシル基もしくはイミデート基、ｎはｏまたは
１を示す）で表わされる新規なジスルフィド誘導体に関
するものである。
だし、式中、Ｒ、は２−ベンゾチアゾリル基または２−
ピリジールーＮ−オキサイド基、Ｒ２は遊離または保護
された官能基を有してもよいアルキレン基、Ｒ３はアミ
ノ酸または低及ポリペプタイドのカルボキシル残基、Ｒ
４はカルボキシル基、その反応性誘導体または保護され
たカルボキシル基もしくはイミデート基、ｎはｏまたは
１を示す）で表わされる新規なジスルフィド誘導体に関
するものである。
この新規なジスルフィド誘導体はその５−５交換反応性
に有用な試薬であり、さらにこの新規なジスルフィド誘
導体のカルボキ゛シル基の反応性誘導体を用いることに
よりチオール基導入試薬として利用し得るものてある。
従来、チオール基を有する化合物に対してＳ一Ｓ交換
反応性を示すジスルフィド誘導体としては種々知られて
おり、近年コバレント・クロマトグ門ラフイーに利用さ
れている。〔ＴｈｅＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎ
ａｌ（１９７３）Ｌ圓、５７３〜５８４、実用と応用
アフイニテイークロマトグラフイー第６４〜６５頁（１
９７岬９月１０日株式会社講談社発行）、フアルマシア
（１９７８）Ｊ４（１）第４７〜５２頁〕もので、さら
に」部のジスルフィド誘導体はこのＳ−Ｓ交換反応性に
基いてチオール基を有する蛋白質とアミノ基を有する蛋
白質との架橋試薬として利用されている〔Ｂ】０ｃｈｅ
ｍ１ｓｔｒｙ．Ｕ７（８）１４９９〜１５０６（１９７
８）〕。しかしながら、従来のジスルフィド誘導体のＳ
−Ｓ交換反応速度は著しく悪く、その反応において長時
間を要すものてあつて、満足のいく化合物ではなかつた
。本発明者らは、種々のジスルフィド誘導体について種
々研究した結果、下記一般式〔１〕Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２
＋ＣＯ−Ｒ３＋−０Ｒ４〔１〕（たた七、式中、Ｒ，、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎは前記と同じ意味を示す）で表わ
される新規なジスルフィド誘導体が、その式中Ｒ１で示
される基において２−ベンゾチアゾリル基または２−ピ
リジールーＮ−オキサイド基、かつ式中Ｒ２で示される
基においてアルキレン基である場合に、そのＳ−Ｓ交換
反応に反応速度は従来の化合物のそれに比べ２〜１皓程
度早い反応速度てある有用な化合物てあることを見い出
した。
に有用な試薬であり、さらにこの新規なジスルフィド誘
導体のカルボキ゛シル基の反応性誘導体を用いることに
よりチオール基導入試薬として利用し得るものてある。
従来、チオール基を有する化合物に対してＳ一Ｓ交換
反応性を示すジスルフィド誘導体としては種々知られて
おり、近年コバレント・クロマトグ門ラフイーに利用さ
れている。〔ＴｈｅＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎ
ａｌ（１９７３）Ｌ圓、５７３〜５８４、実用と応用
アフイニテイークロマトグラフイー第６４〜６５頁（１
９７岬９月１０日株式会社講談社発行）、フアルマシア
（１９７８）Ｊ４（１）第４７〜５２頁〕もので、さら
に」部のジスルフィド誘導体はこのＳ−Ｓ交換反応性に
基いてチオール基を有する蛋白質とアミノ基を有する蛋
白質との架橋試薬として利用されている〔Ｂ】０ｃｈｅ
ｍ１ｓｔｒｙ．Ｕ７（８）１４９９〜１５０６（１９７
８）〕。しかしながら、従来のジスルフィド誘導体のＳ
−Ｓ交換反応速度は著しく悪く、その反応において長時
間を要すものてあつて、満足のいく化合物ではなかつた
。本発明者らは、種々のジスルフィド誘導体について種
々研究した結果、下記一般式〔１〕Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２
＋ＣＯ−Ｒ３＋−０Ｒ４〔１〕（たた七、式中、Ｒ，、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎは前記と同じ意味を示す）で表わ
される新規なジスルフィド誘導体が、その式中Ｒ１で示
される基において２−ベンゾチアゾリル基または２−ピ
リジールーＮ−オキサイド基、かつ式中Ｒ２で示される
基においてアルキレン基である場合に、そのＳ−Ｓ交換
反応に反応速度は従来の化合物のそれに比べ２〜１皓程
度早い反応速度てある有用な化合物てあることを見い出
した。
本発明は上記の知見に基いて完成されたもので、下記一
般式〔１〕Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２＋ＣＯ−Ｒ３＋ＮＲ，〔
１〕（ただし、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎは前
記を同じ意味を示す）て表わされる新規なジスルフィド
誘導体である。
般式〔１〕Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２＋ＣＯ−Ｒ３＋ＮＲ，〔
１〕（ただし、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎは前
記を同じ意味を示す）て表わされる新規なジスルフィド
誘導体である。
ます、本発明における一般式〔１〕で表わされる新規な
ジスルフィド誘導体（以下、ジスルフィド誘導体〔１〕
と称す）における基Ｒ１としては２−ベンゾチアゾリル
基、２−ピリジールーＮ−オキサイド基を示し、基Ｒ２
としては遊離したまたは保護された官能基を有するか、
または有しない直鎖状または分枝鎖状のアルキレン基を
示すもので、さらにその官能性としては例えばアミノ基
、カルボキシル基が挙げられ、さらに基Ｒ３としてはＳ
−Ｓ交換反応に影響を与えないスペーサーであつて、通
常アミノ酸または低級ポリペプタイドのカルボキシル残
基を示すもので、このアミノ酸としては公知の種々のα
−アミノ酸やω−アミノ酸などが挙げられ、また低級ポ
リペプタイドとしては、２〜５ケのアミノ酸からなるペ
プタイドが挙げられ、基Ｒ４としてはカルボキシル基、
またはその反応性誘導体、例えば活性エステル、酸ハロ
ゲンなどの誘導体、さらに保護されたカルボキシル基、
もしくはイミデート基を示すものであり、ｎは０または
１を示すものである。
ジスルフィド誘導体（以下、ジスルフィド誘導体〔１〕
と称す）における基Ｒ１としては２−ベンゾチアゾリル
基、２−ピリジールーＮ−オキサイド基を示し、基Ｒ２
としては遊離したまたは保護された官能基を有するか、
または有しない直鎖状または分枝鎖状のアルキレン基を
示すもので、さらにその官能性としては例えばアミノ基
、カルボキシル基が挙げられ、さらに基Ｒ３としてはＳ
−Ｓ交換反応に影響を与えないスペーサーであつて、通
常アミノ酸または低級ポリペプタイドのカルボキシル残
基を示すもので、このアミノ酸としては公知の種々のα
−アミノ酸やω−アミノ酸などが挙げられ、また低級ポ
リペプタイドとしては、２〜５ケのアミノ酸からなるペ
プタイドが挙げられ、基Ｒ４としてはカルボキシル基、
またはその反応性誘導体、例えば活性エステル、酸ハロ
ゲンなどの誘導体、さらに保護されたカルボキシル基、
もしくはイミデート基を示すものであり、ｎは０または
１を示すものである。
また本発明のジスルフィド誘導体について、それらの基
を具体的に例示すれば第１表に示す如くである。さらに
、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕は、そのベンゾチ
アゾリル基、ピリジールーＮ−オキサイド基の式Ｒ１の
基とアルキレン基の式Ｒ２の基の各基を有しているため
、そのＳ−Ｓ交換反応性は著しく良好なものである。次
いで、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕を得るに当つ
て、例示すれば、次式の反応によつて得られるものてあ
る。
を具体的に例示すれば第１表に示す如くである。さらに
、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕は、そのベンゾチ
アゾリル基、ピリジールーＮ−オキサイド基の式Ｒ１の
基とアルキレン基の式Ｒ２の基の各基を有しているため
、そのＳ−Ｓ交換反応性は著しく良好なものである。次
いで、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕を得るに当つ
て、例示すれば、次式の反応によつて得られるものてあ
る。
（ただし、式中、Ｒ４はＲ３と同一の基またはイミデー
ト基に変換しうる基、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎは前
記と同じ意味を示す）上記反応における、一般式〔■〕
で表わされる化合物、Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ１としては、例
えば２・２゛ージチオビス（ベンゾチアゾール）、２・
７ージチオビス（ピリジンーＮ−オキサイド）が挙げら
れる。
ト基に変換しうる基、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ｎは前
記と同じ意味を示す）上記反応における、一般式〔■〕
で表わされる化合物、Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ１としては、例
えば２・２゛ージチオビス（ベンゾチアゾール）、２・
７ージチオビス（ピリジンーＮ−オキサイド）が挙げら
れる。
また一般式〔■〕で表わされる化合物、ＨＳ−Ｒ２−＋
ＣＯ−Ｒ３′＋−ＮＲ５としては、上記一般式〔■〕で
表わされる化合物と反応するチオールカルボン酸化合物
またはそのカルボ７酸誘導体、例えば活性エステル、酸
ハロゲンなどの反応性誘導体や保護誘導体や、チオール
ニトリル化合物などのイミデート基に変換しうるニトリ
ル基を有する化合物であればよく、例えばチオグリコー
ル酸、β−メルカプトプロピオン酸、チオ乳酸（α−メ
ルカプトプロピオン酸）、チオリンゴ酸、システイン、
ペニシラミン、グルタチオン、β−メルカプトプロピオ
ン酸−ε−アミノカプロン酸縮合生成物、β−メルカプ
トプロビオニトリルなどやそのカルボン酸誘導体などが
挙げられる。
ＣＯ−Ｒ３′＋−ＮＲ５としては、上記一般式〔■〕で
表わされる化合物と反応するチオールカルボン酸化合物
またはそのカルボ７酸誘導体、例えば活性エステル、酸
ハロゲンなどの反応性誘導体や保護誘導体や、チオール
ニトリル化合物などのイミデート基に変換しうるニトリ
ル基を有する化合物であればよく、例えばチオグリコー
ル酸、β−メルカプトプロピオン酸、チオ乳酸（α−メ
ルカプトプロピオン酸）、チオリンゴ酸、システイン、
ペニシラミン、グルタチオン、β−メルカプトプロピオ
ン酸−ε−アミノカプロン酸縮合生成物、β−メルカプ
トプロビオニトリルなどやそのカルボン酸誘導体などが
挙げられる。
また上記の化合物において、その分子内に有するアミノ
基やカルボキシル基などの官能基は、必要に応じて、有
機または無機の酸または塩基を用いて塩形成せしめて保
護するか、または公知の保護基を形成せしめ．てもよい
。またこれらの各種保護基はペプチド合成で既知なもの
、したがつて加水分解、酸分解、還元、アミノリシスま
たはヒドラジノリシスのような既知手段によつて容易に
脱離することのできる保護基が用いられる。例えば、ア
ミノ基に使用くする保護基としては、ホルミル基、トリ
フルオロアセチル基、フタロイル基、ベンゼンスルホニ
ル基、ｐ−トルエンスルホニル基、ｏ−ニトロフエニル
スルフエニル基、２●４−ジニトロフエニルスルフエニ
ル基などのアシル基、ベンジル基、ジフェニルメチル基
、トリフェニルメチル基（これらの基は場合によつては
ｏ−メトキシ基、ｐ−メトキシ基などの低級アルコキシ
基によつて置換さ７れている）などのアラルキシ基、ベ
ンジルオキシカルボニル基、ｏ−ブロモベンジルオキシ
カルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基
、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−クロロ
ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトＯ口ベンジルオ
キシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボ
ニル基、ｐ−フェニルアゾーベンジルオキシカルボニル
基、ｐ−（ｐ′−メトキシフェニルアゾ）−ベンジルオ
キシカルボニル基などのベンジルオキシカルボニル基、
シクロペン５チルオキシカルボニル基、トリクロロエチ
ルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカルボニル基
、ｔ−ブトキシカルボニル基、ジイソプロピルメトキシ
カルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２−フ
エニルーイソプロポキシカルボニ）ル基、２−トリルー
イソプロポキシカルボニル基、２−ｐ−ジフエニルーイ
ソプロポキシカルボニル基などのアラルキルオキシカル
ボニル基などがある。またこれらアミノ基をベンゾイル
アセトン、アセチルアセトン、ジメドンなどの１・３ー
ジケトンと反応させることによつて得られるエナミンの
形成により保護することができる。カルボキシル基は、
アミド形成、ヒドラチド形成またはエステル化によつて
保護される。すなわちアミド基は３・４ージメトキシベ
ンジル基、ビスー（ｐ−メトキシフェニル）メチル基な
どによつて置換される。ヒドラチド基はベンジルオキシ
カルボニル基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、
トリフルオロアセチル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、
トリチル基、２−ｐ−ジフエニルーイソプロポキシカル
ボニル基などによつて置換される。エステル基はメタノ
ール、エタノール、ｔ−ブタノール、シアノメチルアル
コールなどのアルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−
ブロモベンジルアルコール、ｐ−クロロベンジルアルコ
ール、ｐ−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニトロベ
ンジルアルコール、２◆４●６−トリメチルベンジルア
ルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベンゾイルメチ
ルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイルメチルアルコール
、ｐ−クロロベンゾイルメチルアルコールなどのアラル
カノール、２●４●６−トリクロロフェノール、２・４
・５−トリクロロフェノール、ペンタクロロフェノール
、ｐ−トロフエノール、２●４ージニトロフェノール、
ｐ−シアノフェノール、ｐ−メタンスルホニルフェノー
ルなどのフェノール、チオフェノール、チオクレゾール
、ｐ−ニトロチオフェノールなどのチオフェノールなど
によつて置換される。その他、水酸基は、例えばエステ
ル化またはエーテル化によつて保護することとができる
。
基やカルボキシル基などの官能基は、必要に応じて、有
機または無機の酸または塩基を用いて塩形成せしめて保
護するか、または公知の保護基を形成せしめ．てもよい
。またこれらの各種保護基はペプチド合成で既知なもの
、したがつて加水分解、酸分解、還元、アミノリシスま
たはヒドラジノリシスのような既知手段によつて容易に
脱離することのできる保護基が用いられる。例えば、ア
ミノ基に使用くする保護基としては、ホルミル基、トリ
フルオロアセチル基、フタロイル基、ベンゼンスルホニ
ル基、ｐ−トルエンスルホニル基、ｏ−ニトロフエニル
スルフエニル基、２●４−ジニトロフエニルスルフエニ
ル基などのアシル基、ベンジル基、ジフェニルメチル基
、トリフェニルメチル基（これらの基は場合によつては
ｏ−メトキシ基、ｐ−メトキシ基などの低級アルコキシ
基によつて置換さ７れている）などのアラルキシ基、ベ
ンジルオキシカルボニル基、ｏ−ブロモベンジルオキシ
カルボニル基、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル基
、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル基、ｐ−クロロ
ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトＯ口ベンジルオ
キシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボ
ニル基、ｐ−フェニルアゾーベンジルオキシカルボニル
基、ｐ−（ｐ′−メトキシフェニルアゾ）−ベンジルオ
キシカルボニル基などのベンジルオキシカルボニル基、
シクロペン５チルオキシカルボニル基、トリクロロエチ
ルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカルボニル基
、ｔ−ブトキシカルボニル基、ジイソプロピルメトキシ
カルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２−フ
エニルーイソプロポキシカルボニ）ル基、２−トリルー
イソプロポキシカルボニル基、２−ｐ−ジフエニルーイ
ソプロポキシカルボニル基などのアラルキルオキシカル
ボニル基などがある。またこれらアミノ基をベンゾイル
アセトン、アセチルアセトン、ジメドンなどの１・３ー
ジケトンと反応させることによつて得られるエナミンの
形成により保護することができる。カルボキシル基は、
アミド形成、ヒドラチド形成またはエステル化によつて
保護される。すなわちアミド基は３・４ージメトキシベ
ンジル基、ビスー（ｐ−メトキシフェニル）メチル基な
どによつて置換される。ヒドラチド基はベンジルオキシ
カルボニル基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、
トリフルオロアセチル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、
トリチル基、２−ｐ−ジフエニルーイソプロポキシカル
ボニル基などによつて置換される。エステル基はメタノ
ール、エタノール、ｔ−ブタノール、シアノメチルアル
コールなどのアルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−
ブロモベンジルアルコール、ｐ−クロロベンジルアルコ
ール、ｐ−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニトロベ
ンジルアルコール、２◆４●６−トリメチルベンジルア
ルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベンゾイルメチ
ルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイルメチルアルコール
、ｐ−クロロベンゾイルメチルアルコールなどのアラル
カノール、２●４●６−トリクロロフェノール、２・４
・５−トリクロロフェノール、ペンタクロロフェノール
、ｐ−トロフエノール、２●４ージニトロフェノール、
ｐ−シアノフェノール、ｐ−メタンスルホニルフェノー
ルなどのフェノール、チオフェノール、チオクレゾール
、ｐ−ニトロチオフェノールなどのチオフェノールなど
によつて置換される。その他、水酸基は、例えばエステ
ル化またはエーテル化によつて保護することとができる
。
このエステル化に適する基としては、例えばアセチル基
などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイ
ル基、ベンジルオキシカルボニル基、エチルオキシカル
ボニル基などの炭酸から誘導される基である。またエー
テル化に適する基としては、例えばベンジル基、テトラ
ヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。これら水
酸基の保護には２・２・２−トリフルオロー１−ブチル
オキシカルボニルアミノエチル基、２●２・２−トリフ
ルオロー１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチル基
も適する。しかしながら、これら水酸基を必ずしも保護
する必要はない。さらにイミノ基を保護するのに使用す
る基としては、例えばベンジル基、トリチル基、ベンジ
ルオキシカルボニル基、トノル基、アダマンチルオキシ
カルボニル基、２・２・２−トリフルオロー１−ｔ−ブ
チルオキシカルボニルアミノエチル基、２●２●２−ト
リフルオロー１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチ
ル基などであるが、このイミノ基を必ずしも保護する必
要はない。さらにまた、本発明において、個々のアミノ
酸もしくは２〜４個のアミノ酸からなる低級ペプチドの
縮合体からなるチオールカルボン酸を用いる場合は、例
えば、保護されたα−アミノ基および活性化末端カルボ
キシル基をもつアミノ酸またはまたはペプチドと遊離α
−アミノ基および保護された末端カルボキシル基をもつ
アミノ酸またはペプチドとを反応させるか、あるいは活
性化α−アミノ基および保護された末端カルボキシル基
をもつアミノ酸またはペプチドと遊離の末端カルボキシ
ル基および保護されたα−アミノ基をもつアミノ酸また
はペプチドを反応させることにより得られたものであつ
てもよい。次いで、この一般式〔■〕で表わされる化合
物、Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ１と、一般式〔■〕て表わされる
化合物、ＨＳ−Ｒ２（．ＣＯ−Ｒ３），、Ｒ５とを反応
せしめるのであるが、反応に当つて、通常メタノール、
エタノール、アセトン、ベンゼン、クロロホルム、四塩
化炭素などの溶媒が用いられ、この溶媒に各々の化合物
を等モル程度添加し、１０〜７０℃程度、好ましくは７
０℃程度、１紛間〜５時間程度、好ましくは２〜３時間
程度の条件下反応せしめ、反応終了後冷却または抽出な
どの通常の採取手段により反応生成物たる一般式〔■〕
で表わされる化合物、Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２−（ＣＯ−Ｒ
３．＋−ＮＲ５を得ればよい。
などの低級アルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイ
ル基、ベンジルオキシカルボニル基、エチルオキシカル
ボニル基などの炭酸から誘導される基である。またエー
テル化に適する基としては、例えばベンジル基、テトラ
ヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。これら水
酸基の保護には２・２・２−トリフルオロー１−ブチル
オキシカルボニルアミノエチル基、２●２・２−トリフ
ルオロー１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチル基
も適する。しかしながら、これら水酸基を必ずしも保護
する必要はない。さらにイミノ基を保護するのに使用す
る基としては、例えばベンジル基、トリチル基、ベンジ
ルオキシカルボニル基、トノル基、アダマンチルオキシ
カルボニル基、２・２・２−トリフルオロー１−ｔ−ブ
チルオキシカルボニルアミノエチル基、２●２●２−ト
リフルオロー１−ベンジルオキシカルボニルアミノエチ
ル基などであるが、このイミノ基を必ずしも保護する必
要はない。さらにまた、本発明において、個々のアミノ
酸もしくは２〜４個のアミノ酸からなる低級ペプチドの
縮合体からなるチオールカルボン酸を用いる場合は、例
えば、保護されたα−アミノ基および活性化末端カルボ
キシル基をもつアミノ酸またはまたはペプチドと遊離α
−アミノ基および保護された末端カルボキシル基をもつ
アミノ酸またはペプチドとを反応させるか、あるいは活
性化α−アミノ基および保護された末端カルボキシル基
をもつアミノ酸またはペプチドと遊離の末端カルボキシ
ル基および保護されたα−アミノ基をもつアミノ酸また
はペプチドを反応させることにより得られたものであつ
てもよい。次いで、この一般式〔■〕で表わされる化合
物、Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ１と、一般式〔■〕て表わされる
化合物、ＨＳ−Ｒ２（．ＣＯ−Ｒ３），、Ｒ５とを反応
せしめるのであるが、反応に当つて、通常メタノール、
エタノール、アセトン、ベンゼン、クロロホルム、四塩
化炭素などの溶媒が用いられ、この溶媒に各々の化合物
を等モル程度添加し、１０〜７０℃程度、好ましくは７
０℃程度、１紛間〜５時間程度、好ましくは２〜３時間
程度の条件下反応せしめ、反応終了後冷却または抽出な
どの通常の採取手段により反応生成物たる一般式〔■〕
で表わされる化合物、Ｒ１−Ｓ−Ｓ−Ｒ２−（ＣＯ−Ｒ
３．＋−ＮＲ５を得ればよい。
また、この反応生成物は、必要に応じて、そのカルボキ
シル基やニトリル基は通常の手段を用いてカルボキシル
基の反応性誘導体となすか、保護せしめるか、さらにニ
トリル基をイミデート基に変換せしめればよい。特に、
カルボキシル基の反応性誘導体としては、一般に使用さ
れる誘導体、例えば酸アジド、酸無水物、酸イミグゾリ
ド、活性エステル、酸ハロゲナイド、例えばシアノメチ
ルエステル、チオフェニルエステル、ｐ−ニトロチオフ
ェニルエステル、ｐ−メタンスルホニルフェニルエステ
ル、チオジルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、
２●４ージニトロフェニルエステル、２◆４●５−トリ
クロロフェニルエステル、２●４◆６−トリクロロフェ
ニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロキシフタ
ル酸イミドエステル、８−ヒドロキシキノリンエステル
またはＮ−ヒドロキシピペリジン“エステルなどに変換
することによつて、あるいはカルボジイミド、Ｎ−Ｎ″
一カルボニルージイミダゾールまたはイソオキゾリウム
塩、例えばウッドワード反応剤などを使用して反応させ
ることによつてその反応性誘導体となすことができる。
このようにして得られた、本発明のジスルフィド誘導体
〔１〕は極めて良好なＳ−Ｓ交換反応性を示す優れたも
のである。次に、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕を
例示し、またそのＳ−Ｓ交換反応速度を、対照としノて
の３−ピリジンー２″−イルジチオ）プロピオン酸と比
較して述べる。
シル基やニトリル基は通常の手段を用いてカルボキシル
基の反応性誘導体となすか、保護せしめるか、さらにニ
トリル基をイミデート基に変換せしめればよい。特に、
カルボキシル基の反応性誘導体としては、一般に使用さ
れる誘導体、例えば酸アジド、酸無水物、酸イミグゾリ
ド、活性エステル、酸ハロゲナイド、例えばシアノメチ
ルエステル、チオフェニルエステル、ｐ−ニトロチオフ
ェニルエステル、ｐ−メタンスルホニルフェニルエステ
ル、チオジルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、
２●４ージニトロフェニルエステル、２◆４●５−トリ
クロロフェニルエステル、２●４◆６−トリクロロフェ
ニルエステル、ペンタクロロフェニルエステル、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロキシフタ
ル酸イミドエステル、８−ヒドロキシキノリンエステル
またはＮ−ヒドロキシピペリジン“エステルなどに変換
することによつて、あるいはカルボジイミド、Ｎ−Ｎ″
一カルボニルージイミダゾールまたはイソオキゾリウム
塩、例えばウッドワード反応剤などを使用して反応させ
ることによつてその反応性誘導体となすことができる。
このようにして得られた、本発明のジスルフィド誘導体
〔１〕は極めて良好なＳ−Ｓ交換反応性を示す優れたも
のである。次に、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕を
例示し、またそのＳ−Ｓ交換反応速度を、対照としノて
の３−ピリジンー２″−イルジチオ）プロピオン酸と比
較して述べる。
なお、Ｓ−Ｓ交換反応速度の測定は、Ｓ−Ｓ交換反応を
行なわしめるチオール基をを有する化合物としてジチオ
スライトールの１７ＴＬＭＥＤＴＡ含有０．２Ｍトリス
塩酸緩衝液（ＰＨ７．５）を用いて反応せしめ、その結
果増加するその吸収をその極大吸収波長に測定し、１分
間当りのＳ−Ｓ交換反応のモル数を求めたものであその
結果、本発明のジスルフィド誘導体は、対照の化合物に
比べ、極めて良好なＳ−Ｓ反応速度を示すものであつた
。さらに、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕は、チオ
ール基導入試薬や架橋試薬として有用な化合物である。
行なわしめるチオール基をを有する化合物としてジチオ
スライトールの１７ＴＬＭＥＤＴＡ含有０．２Ｍトリス
塩酸緩衝液（ＰＨ７．５）を用いて反応せしめ、その結
果増加するその吸収をその極大吸収波長に測定し、１分
間当りのＳ−Ｓ交換反応のモル数を求めたものであその
結果、本発明のジスルフィド誘導体は、対照の化合物に
比べ、極めて良好なＳ−Ｓ反応速度を示すものであつた
。さらに、本発明のジスルフィド誘導体〔１〕は、チオ
ール基導入試薬や架橋試薬として有用な化合物である。
例えば、ジスルフィド誘導体〔１〕と、これと反応し得
る水酸基を有する化合物やアミン化合物とを、溶媒例え
ばベンゼン、トルエン、クロロホルム、アセトン、テト
ラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド中にて、必要に
応じて縮合剤の存在下反応せしめて本発明のジスルフィ
ド誘導体〔１〕の反応基たるＲ４の基と水酸基を有する
化合物やアミン化合物の水酸基、アミノ基などの基とに
基づいて、エステル結合、アミジノ結合またはアミド結
合などにて両者を結合し、次いでこれをアルカリ性条件
下室温ないし加温下にてそのジスルフィド結合を加水分
解して、その水素基を有する化合物やアミン化合物にチ
オール基を導入せしめる、またはこの上記のエステル結
合またはアミド結合などにて両者が結合した化合物に、
チオール基を有する化合物を、水性媒体下ＰＨ７〜８付
近のＰＨ条件にてＳ−Ｓ交換反応を行なわせしめてチオ
ール基を有する化合物と水酸基を有する化合物またはア
ミン化合物とを架橋結合せしめるものである。またこの
用途における、水酸基を有する化合物やアミン化合物と
しては種々の化合物が挙られ、インスリン、アルブミン
、成長ホルモン、カルチトニン、プロラクチン、ＡＣＴ
Ｈ，．ＰＴＨｌグルカゴン、ガストリシン、セクレチン
、γ−グロブリン、またはＩｇＧｌＩｇＭ．ＩｇＡ、第
二抗体、エストロゲン、ＡＴＰ、カテコールアミン、ト
リヨードサイロニン、その他抗生物質、催眠剤などの抗
原、抗体、第二抗体、ハプテンなどの免疫成分やベルオ
キシダーゼ、カタラーゼ、コレステロールオキシダーゼ
、グリセロールデヒドロゲナーゼ、コリンオキシグーゼ
などの酸化還元酵素、アルカリフォスファターゼ、グル
コアミラーゼ、ホスフオリパーゼＤ１β−ガ，ラクトシ
ダーゼ、リゾチームなどの加水分解酵素やその他転位酵
素、リアーゼ、イソメラーゼなどの酵素、セルロース、
アミノ化セルロース、アガロース、デキストリン、、デ
キストランなどのポリサッカライドまたはそれらの水不
溶性担体、そ，の他アミノ化せしめたポリアミド、ポリ
アクリロニトリルまたはシラン化合物などの水酸基また
はアミノ基を有してなる水不溶性担体が挙げられるもの
で、公知化合物のみならず新規な化合物であつても水酸
基またはアミノ基などのジスルフィド化合物〔１〕と反
応し得るものであれぱすべてよく、また新規なアミノ基
を有する化合物としては、例えば６・６−ナイロン、６
−ナイロン、などのポリアミドをγ−アミノプロピルー
トリエトキシシランにて１００℃、３時間加熱反応後泊
取、水洗、乾燥することにより６・６−ナイロン、６−
ナイロンなどのポリアミドの一部にγ−アミノプロピル
基が導入されたγ−アミノプロピル化ポリアミド、ポリ
アクリロニトリルまたはポリアクリロニトリル系ポリマ
ーをジエチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラ
ンなどの媒体中水素化リチウムアルミニウムにて１〜化
時間加熱還流してそのニトリル基の一部を還元せしめて
アミノ基となしたアミノ化ポリアクリロニトリルまたは
ポリアクリロニトリル系ポリマーなどが挙られる。また
チオール基を有する化合物としては、、例えばベルオキ
シダーゼ、カタラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカ
リフォスファターゼなどの酵素や、ｓ−アセチルメルカ
プトサクシニツクアンハイドライドによるチオール基を
導入〔Ａｒ′Ｃｈ．ＢｌＯｃｈｅｍ．ＢｌＯｐｈｙ．？
６０５〜６１２（１９６２）〕せしめた種々の化合物、
や上記の加水分解により得られるジスルフィド化合物〔
１〕からの水酸基を有する化合物やアミン化合物へのチ
オール基導入化合物が挙げられる。このような種々の化
合物を適宜組合せて、Ｓ−Ｓ交換反応、通常水性媒体、
例えばＰＨ７〜８程度の緩衝液中にて室温下行なわせし
め、その後反応生成物は公知の分離、精製手段、例えは
塩析、相分離、抽出、透析、吸着クロマトグラフィーな
どの手段を用いて回収すればよい。このようにして得ら
れた生成物は、酵素と水不溶性担体との架橋結合体てあ
る固定化酵素、抗原または抗体などと水溶性担体との架
橋結合体である固定化抗原、抗体、蛋白質とハプテンと
の架橋結合体である抗原性ハプテン、酵素と免疫成分と
の架橋結合体である酵素免疫測定用成分などの有用な化
合物である。次に本発明の実施例および参考例を挙げて
具体的に述べるが、本発明はこれらによつて何んら限定
されるものではない。
る水酸基を有する化合物やアミン化合物とを、溶媒例え
ばベンゼン、トルエン、クロロホルム、アセトン、テト
ラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド中にて、必要に
応じて縮合剤の存在下反応せしめて本発明のジスルフィ
ド誘導体〔１〕の反応基たるＲ４の基と水酸基を有する
化合物やアミン化合物の水酸基、アミノ基などの基とに
基づいて、エステル結合、アミジノ結合またはアミド結
合などにて両者を結合し、次いでこれをアルカリ性条件
下室温ないし加温下にてそのジスルフィド結合を加水分
解して、その水素基を有する化合物やアミン化合物にチ
オール基を導入せしめる、またはこの上記のエステル結
合またはアミド結合などにて両者が結合した化合物に、
チオール基を有する化合物を、水性媒体下ＰＨ７〜８付
近のＰＨ条件にてＳ−Ｓ交換反応を行なわせしめてチオ
ール基を有する化合物と水酸基を有する化合物またはア
ミン化合物とを架橋結合せしめるものである。またこの
用途における、水酸基を有する化合物やアミン化合物と
しては種々の化合物が挙られ、インスリン、アルブミン
、成長ホルモン、カルチトニン、プロラクチン、ＡＣＴ
Ｈ，．ＰＴＨｌグルカゴン、ガストリシン、セクレチン
、γ−グロブリン、またはＩｇＧｌＩｇＭ．ＩｇＡ、第
二抗体、エストロゲン、ＡＴＰ、カテコールアミン、ト
リヨードサイロニン、その他抗生物質、催眠剤などの抗
原、抗体、第二抗体、ハプテンなどの免疫成分やベルオ
キシダーゼ、カタラーゼ、コレステロールオキシダーゼ
、グリセロールデヒドロゲナーゼ、コリンオキシグーゼ
などの酸化還元酵素、アルカリフォスファターゼ、グル
コアミラーゼ、ホスフオリパーゼＤ１β−ガ，ラクトシ
ダーゼ、リゾチームなどの加水分解酵素やその他転位酵
素、リアーゼ、イソメラーゼなどの酵素、セルロース、
アミノ化セルロース、アガロース、デキストリン、、デ
キストランなどのポリサッカライドまたはそれらの水不
溶性担体、そ，の他アミノ化せしめたポリアミド、ポリ
アクリロニトリルまたはシラン化合物などの水酸基また
はアミノ基を有してなる水不溶性担体が挙げられるもの
で、公知化合物のみならず新規な化合物であつても水酸
基またはアミノ基などのジスルフィド化合物〔１〕と反
応し得るものであれぱすべてよく、また新規なアミノ基
を有する化合物としては、例えば６・６−ナイロン、６
−ナイロン、などのポリアミドをγ−アミノプロピルー
トリエトキシシランにて１００℃、３時間加熱反応後泊
取、水洗、乾燥することにより６・６−ナイロン、６−
ナイロンなどのポリアミドの一部にγ−アミノプロピル
基が導入されたγ−アミノプロピル化ポリアミド、ポリ
アクリロニトリルまたはポリアクリロニトリル系ポリマ
ーをジエチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラ
ンなどの媒体中水素化リチウムアルミニウムにて１〜化
時間加熱還流してそのニトリル基の一部を還元せしめて
アミノ基となしたアミノ化ポリアクリロニトリルまたは
ポリアクリロニトリル系ポリマーなどが挙られる。また
チオール基を有する化合物としては、、例えばベルオキ
シダーゼ、カタラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカ
リフォスファターゼなどの酵素や、ｓ−アセチルメルカ
プトサクシニツクアンハイドライドによるチオール基を
導入〔Ａｒ′Ｃｈ．ＢｌＯｃｈｅｍ．ＢｌＯｐｈｙ．？
６０５〜６１２（１９６２）〕せしめた種々の化合物、
や上記の加水分解により得られるジスルフィド化合物〔
１〕からの水酸基を有する化合物やアミン化合物へのチ
オール基導入化合物が挙げられる。このような種々の化
合物を適宜組合せて、Ｓ−Ｓ交換反応、通常水性媒体、
例えばＰＨ７〜８程度の緩衝液中にて室温下行なわせし
め、その後反応生成物は公知の分離、精製手段、例えは
塩析、相分離、抽出、透析、吸着クロマトグラフィーな
どの手段を用いて回収すればよい。このようにして得ら
れた生成物は、酵素と水不溶性担体との架橋結合体てあ
る固定化酵素、抗原または抗体などと水溶性担体との架
橋結合体である固定化抗原、抗体、蛋白質とハプテンと
の架橋結合体である抗原性ハプテン、酵素と免疫成分と
の架橋結合体である酵素免疫測定用成分などの有用な化
合物である。次に本発明の実施例および参考例を挙げて
具体的に述べるが、本発明はこれらによつて何んら限定
されるものではない。
実施例１
２・２″ージチオビス（ベンゾチアゾール）１３．２ｙ
をベンゼン４００ｍ１に加え、さらにβ−メルカプトプ
ロピオン酸６ｙを加えて、７０℃、３時間加熱攪拌し、
その後反応液を氷水浴にて冷却して析出せしめて１３．
８ｙの粗結晶を得、さらにこれをベンゼンにて再結晶し
て１２′の３−（ベンゾチアゾールー２″−イルジチオ
）プロピオン酸の結晶を得た。
をベンゼン４００ｍ１に加え、さらにβ−メルカプトプ
ロピオン酸６ｙを加えて、７０℃、３時間加熱攪拌し、
その後反応液を氷水浴にて冷却して析出せしめて１３．
８ｙの粗結晶を得、さらにこれをベンゼンにて再結晶し
て１２′の３−（ベンゾチアゾールー２″−イルジチオ
）プロピオン酸の結晶を得た。
構造式：
融点：１６２〜１６４）Ｃ
λＭａＸ：２７２ｒ１ＴｒＬ．（メタノール）Ｒｆ値：
０．３３（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２によるシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィー）実施例２ ２・２″ージチオビス（ピリジンーＮ−オキサイド）４
．３ｙおよびβ−メルカプトプロピオン酸３ｙを用い、
以下実施例１と同様にして３−（ピリジンーＮ−オキサ
イドー２−イルジチオ）プロピオン酸４．１ｙの結晶を
得た。
０．３３（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２によるシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィー）実施例２ ２・２″ージチオビス（ピリジンーＮ−オキサイド）４
．３ｙおよびβ−メルカプトプロピオン酸３ｙを用い、
以下実施例１と同様にして３−（ピリジンーＮ−オキサ
イドー２−イルジチオ）プロピオン酸４．１ｙの結晶を
得た。
構造式： ※融点：
１１４〜１１５ Ｃ（補正値１２１〜１２３℃）λＭａ
ｘ：２７０ｎｍ（ＰＨ７．５、１０％ジメチルホルムア
ミド水溶液）Ｒｆ値：０．５３（ベンゼンニ酢酸エチル
ニ３：１によるシリカゲル薄層クロマトグラフィー）実
施例４ 実施例１と同様にして得られた３−（ベンゾチアゾール
ー２″−イルジチオ）プロピオン酸３ｙ１，融点：１２
６〜１２８℃λＲｎａ）ｃ：２７０ｎＴｒＬ（メタノー
ル）Ｒｆ値：０．６６（ブタノールニ酢酸：水＝４：１
：１によるシリカゲル薄層クロマトグラフィー）実施例
３実施例１と同様にして得られた３−（ベンゾチアゾー
ルー２″−イルジチオ）プロピオン酸３ｆＩを酢酸エチ
ル２０ｍ１に溶解し、これにＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミド１ｑおよびジシクロヘキシルカルボジイミド１．７
ダを加えて３時間、室温中で攪拌し、生成するジシクロ
ヘキシル尿素を戸別した後その酢酸エチル層を回収し、
さらにこれをＰＨ７．５のリン酸緩衝液で洗浄して未反
応の遊離酸を除去し、さらにこの酢酸エチル層に芒硝を
加えて脱水した後乾固し、さらにこれを熱石油エールに
溶解した後冷却して３−（ベンゾチアゾールー２″−イ
ルジチオ）プロピオン酸−スクシンイミドエステル２．
４ｙの結晶を得た。
１１４〜１１５ Ｃ（補正値１２１〜１２３℃）λＭａ
ｘ：２７０ｎｍ（ＰＨ７．５、１０％ジメチルホルムア
ミド水溶液）Ｒｆ値：０．５３（ベンゼンニ酢酸エチル
ニ３：１によるシリカゲル薄層クロマトグラフィー）実
施例４ 実施例１と同様にして得られた３−（ベンゾチアゾール
ー２″−イルジチオ）プロピオン酸３ｙ１，融点：１２
６〜１２８℃λＲｎａ）ｃ：２７０ｎＴｒＬ（メタノー
ル）Ｒｆ値：０．６６（ブタノールニ酢酸：水＝４：１
：１によるシリカゲル薄層クロマトグラフィー）実施例
３実施例１と同様にして得られた３−（ベンゾチアゾー
ルー２″−イルジチオ）プロピオン酸３ｆＩを酢酸エチ
ル２０ｍ１に溶解し、これにＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミド１ｑおよびジシクロヘキシルカルボジイミド１．７
ダを加えて３時間、室温中で攪拌し、生成するジシクロ
ヘキシル尿素を戸別した後その酢酸エチル層を回収し、
さらにこれをＰＨ７．５のリン酸緩衝液で洗浄して未反
応の遊離酸を除去し、さらにこの酢酸エチル層に芒硝を
加えて脱水した後乾固し、さらにこれを熱石油エールに
溶解した後冷却して３−（ベンゾチアゾールー２″−イ
ルジチオ）プロピオン酸−スクシンイミドエステル２．
４ｙの結晶を得た。
構造式：
＊ｐ−ニトロフェノール１．２ｆおよびジシクロヘキシ
ルカルボジイミド２．１ｑを酢酸エチル２０ｍ１に溶解
し、室温下３時間攪拌し、以下実施例３と同様に行なつ
て、３−（ベンゾチアゾールー２″−イル７ジチオ）プ
ロピオン酸−ｐ−ニトロフェニルエステル１．８５ｙの
結晶を得た。
ルカルボジイミド２．１ｑを酢酸エチル２０ｍ１に溶解
し、室温下３時間攪拌し、以下実施例３と同様に行なつ
て、３−（ベンゾチアゾールー２″−イル７ジチオ）プ
ロピオン酸−ｐ−ニトロフェニルエステル１．８５ｙの
結晶を得た。
構造式：
融点：１１３〜１１４をＣ
λ．，ＡＸ：２７９ｒ１７ＴＬ，（ＰＨ７．５、１０％
ジメチルホルムアミド水溶液）Ｒｆ値：０．８４（ベン
ゼンニ酢酸エチルニ５：１によるシリカゲル薄層クロマ
トグラフィー）実施例５ ３−（ベンゾチアゾールー７−イルジチオ）プロピオン
酸３ｙを塩化チオニル１０ｍ１に溶解し、２５℃、２時
間加熱した後減圧下にて塩化チオニルを留去して、３−
（ベンゾチアゾールー７−イルジチオ）プロピオン酸の
酸クロライド物を油状にて得た。
ジメチルホルムアミド水溶液）Ｒｆ値：０．８４（ベン
ゼンニ酢酸エチルニ５：１によるシリカゲル薄層クロマ
トグラフィー）実施例５ ３−（ベンゾチアゾールー７−イルジチオ）プロピオン
酸３ｙを塩化チオニル１０ｍ１に溶解し、２５℃、２時
間加熱した後減圧下にて塩化チオニルを留去して、３−
（ベンゾチアゾールー７−イルジチオ）プロピオン酸の
酸クロライド物を油状にて得た。
構造式：
λ．へニ２７２ｒ１ｍ（メタノール）
Ｒｆ値：０．２５（ベンゼンによるシリカゲル薄層クロ
マトグラフィー）実施例６、７ 実施例３と同様にして得られた３−（ベンゾチアゾール
ー７−イルジチオ）プロピオン酸−スクシンイミドエス
テル１．３ｆおよびε−アミノカプロン酸０．６ｙをテ
トラヒドロフラン５０ｍ１に加えて室温下一夜反応せし
め、次いで減圧下テトラヒドロフランを留去した後熱イ
ソプｏ／ぐノールに溶解し、これを冷却して６−Ｎ〔３
−（ベンゾチアゾールー２″−イルジチオ）プロピオニ
ル〕力フロン酸の結晶０．８ｙを得た。
マトグラフィー）実施例６、７ 実施例３と同様にして得られた３−（ベンゾチアゾール
ー７−イルジチオ）プロピオン酸−スクシンイミドエス
テル１．３ｆおよびε−アミノカプロン酸０．６ｙをテ
トラヒドロフラン５０ｍ１に加えて室温下一夜反応せし
め、次いで減圧下テトラヒドロフランを留去した後熱イ
ソプｏ／ぐノールに溶解し、これを冷却して６−Ｎ〔３
−（ベンゾチアゾールー２″−イルジチオ）プロピオニ
ル〕力フロン酸の結晶０．８ｙを得た。
構造式：
λＲｒ．ａｘ：２７２ｒ１ＴｒＬ（メタノール）Ｒｆ値
：０．０７（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２によるシリ
カゲル薄層クロマトグラフィー）さらに本品５００ｍ９
を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２００ｍ９、ジシク
ロヘキシルカルボジイミド３４０ｍ９とともにテトラヒ
ドロフラン１０ｍＬに溶解し、室温下３時間反応せしめ
、生成するジシクロヘシル尿素をｐ別した後テトラヒド
ロフランを留去し、残渣を熱石油エーテルに溶解し、冷
却して６−Ｎ〔３−（ベンゾチアゾールー７−イルジチ
オ）プロピオニル〕力フロン酸−スクシンイミドエステ
ル４３０ｍ９の結晶を得た。
：０．０７（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２によるシリ
カゲル薄層クロマトグラフィー）さらに本品５００ｍ９
を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２００ｍ９、ジシク
ロヘキシルカルボジイミド３４０ｍ９とともにテトラヒ
ドロフラン１０ｍＬに溶解し、室温下３時間反応せしめ
、生成するジシクロヘシル尿素をｐ別した後テトラヒド
ロフランを留去し、残渣を熱石油エーテルに溶解し、冷
却して６−Ｎ〔３−（ベンゾチアゾールー７−イルジチ
オ）プロピオニル〕力フロン酸−スクシンイミドエステ
ル４３０ｍ９の結晶を得た。
構造式：
λＭａ）．：２７１ｎＴｒＬ
Ｒｆ値：０．４２（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１によ
るシリカゲル薄層クロマトグラフィー）実施例８、９、
１０ 実施例２と同様にして得られた３−ピリジンーＮ−オキ
サイドー２″−イルジチオ）プロピオン酸を用いて、上
記実施例３、実施例４、実施例５の如くして、各々、そ
のスクシンイミドエステル、ｐ−ニトロフェニルエステ
ル、酸クロライドを得た。
るシリカゲル薄層クロマトグラフィー）実施例８、９、
１０ 実施例２と同様にして得られた３−ピリジンーＮ−オキ
サイドー２″−イルジチオ）プロピオン酸を用いて、上
記実施例３、実施例４、実施例５の如くして、各々、そ
のスクシンイミドエステル、ｐ−ニトロフェニルエステ
ル、酸クロライドを得た。
スクシンイミドエステル体
構造式：
λＭａｘ：２６０ｎ７ｎ（メタノール）
Ｒｆ値：０．２５（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１によ
るシリカゲル薄層クロマトグラフィー）ｐ−ニトロフェ
ニルエステル体 構造式： λＴｒ．ａｘ：３９１ｎｎ１．（メタノール）Ｒｆ値：
０．８２（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１によりシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィー）酸クロライド体 構造式： λＮｌａｘ：２７０ｎ７Ｔ１．（メタノール）Ｒｆ値：
０．１５（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１によるシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィー）実施例１１ ２−２″ージチオビス（ベンゾチアゾール）１．１ｙお
よびβ−メルカプトプロビオニトリルをベンゼン５０ｍ
１に溶解し、７０℃、３時間攪拌反応せしめ、次いでこ
れを氷水浴にて冷却して粗結晶を得、さらにベンゼンに
て再結晶して３−（ベンゾチアゾールー２″−イルジチ
オ）プロビオニトリル７５０ｍ９を得、次いでこの７０
０ｍ９を塩酸１９ｙ含有メタノール５０ｍＬに加えて一
夜５℃にて反応せしめ、その後溶媒を減圧留去して粗粉
末を得、これをベンゼンにて洗浄して、メチル・３−（
ベンゾチアゾールー２″−イルジチオ）プロピオニルイ
ミテート・塩酸塩７２０７Ｆ！９を得た。
るシリカゲル薄層クロマトグラフィー）ｐ−ニトロフェ
ニルエステル体 構造式： λＴｒ．ａｘ：３９１ｎｎ１．（メタノール）Ｒｆ値：
０．８２（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１によりシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィー）酸クロライド体 構造式： λＮｌａｘ：２７０ｎ７Ｔ１．（メタノール）Ｒｆ値：
０．１５（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１によるシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィー）実施例１１ ２−２″ージチオビス（ベンゾチアゾール）１．１ｙお
よびβ−メルカプトプロビオニトリルをベンゼン５０ｍ
１に溶解し、７０℃、３時間攪拌反応せしめ、次いでこ
れを氷水浴にて冷却して粗結晶を得、さらにベンゼンに
て再結晶して３−（ベンゾチアゾールー２″−イルジチ
オ）プロビオニトリル７５０ｍ９を得、次いでこの７０
０ｍ９を塩酸１９ｙ含有メタノール５０ｍＬに加えて一
夜５℃にて反応せしめ、その後溶媒を減圧留去して粗粉
末を得、これをベンゼンにて洗浄して、メチル・３−（
ベンゾチアゾールー２″−イルジチオ）プロピオニルイ
ミテート・塩酸塩７２０７Ｆ！９を得た。
構造式：
λＭａＸ：２７２ｒ１ＴｒＬ（メタノール）Ｒｆ値：０
．０５（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２によりシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー）実施例１２〜３５ 上記の２・２″ージチオビス（ベンゾチアゾール）また
は２・２ージチオビス（ピリジンーＮ−オキサイド）を
用い、かつチオグリコール酸、チオ乳酸、システイル、
チオリンゴ酸、ペニシラミン、Ｎ−（２−メルカプトプ
ロピオニル）グリシン、グルタチオンなどの種々の化合
物を用いて、上記実施例と同様にして、以下の通りの目
的物を得た。
．０５（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２によりシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー）実施例１２〜３５ 上記の２・２″ージチオビス（ベンゾチアゾール）また
は２・２ージチオビス（ピリジンーＮ−オキサイド）を
用い、かつチオグリコール酸、チオ乳酸、システイル、
チオリンゴ酸、ペニシラミン、Ｎ−（２−メルカプトプ
ロピオニル）グリシン、グルタチオンなどの種々の化合
物を用いて、上記実施例と同様にして、以下の通りの目
的物を得た。
なお、Ｒｆ値はシリカゲル薄層クロマトグノラフイーに
よるものである。＠構造体： λＴ！１ａＸ：２７２ｒ１ｍ（メタノール）Ｒｆ値：０
．３６（ベンゼンニメタノールニ１：２）Ｓ−Ｓ交換反
応速度３５．６μＭＯｌｅ／分◎構造式：λ．Ｎａｘ：
２７２ｒ１ｍ，（メタノール）Ｒｆ値：０．３８（ベン
ゼンニメタノールニ１：２）９構造式：λＲＴｌａｘ：
２７１ｎ７Ｔ１．（メタノール）Ｒｆ値：０．０８（ベ
ンゼンニメタノールニ１：２）、６．６０（ブタノール
ニ酢酸：水＝４：１：５の上層）［相］構造式： λＴｎａ）Ｃ：２７１ｎＷ１，（メタノール）Ｒｆ値：
０．１５（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２）［相］構造
式：Ｘｍａｘ：２７１ｎｗＬ（ＰＨ７．５．リン酸バッ
ファー）Ｒｆ値：０．６０（ブタノールニ酢酸：水＝４
：１：の上層）８構造式： λＭａｘ：２７１ｎｗＬ（メタノール） Ｒｆ値：０．３０（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：の
上層）Ｓ−Ｓ交換反応速度３５．５μＭＯｌｅ／分［相
］構造式： １１１２＋Ｓ−Ｓ−ＣＨ−ＣＯ−ＣＨ
λＴｎａｘ：２７１ｎｍ，、４１８ｒ１７ＴＬ（メタノ
ール）Ｒｆ値：０．２３（ブタノールニ酢酸：水＝４：
１：５θ の上層）［相］構造式： λＴｒｌａｘ：２７１ｎ７Ｔ１，（メタノール）Ｒｆ値
：０．４８（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）［相］構
造式：１。
よるものである。＠構造体： λＴ！１ａＸ：２７２ｒ１ｍ（メタノール）Ｒｆ値：０
．３６（ベンゼンニメタノールニ１：２）Ｓ−Ｓ交換反
応速度３５．６μＭＯｌｅ／分◎構造式：λ．Ｎａｘ：
２７２ｒ１ｍ，（メタノール）Ｒｆ値：０．３８（ベン
ゼンニメタノールニ１：２）９構造式：λＲＴｌａｘ：
２７１ｎ７Ｔ１．（メタノール）Ｒｆ値：０．０８（ベ
ンゼンニメタノールニ１：２）、６．６０（ブタノール
ニ酢酸：水＝４：１：５の上層）［相］構造式： λＴｎａ）Ｃ：２７１ｎＷ１，（メタノール）Ｒｆ値：
０．１５（ベンゼンニ酢酸エチルニ１：２）［相］構造
式：Ｘｍａｘ：２７１ｎｗＬ（ＰＨ７．５．リン酸バッ
ファー）Ｒｆ値：０．６０（ブタノールニ酢酸：水＝４
：１：の上層）８構造式： λＭａｘ：２７１ｎｗＬ（メタノール） Ｒｆ値：０．３０（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：の
上層）Ｓ−Ｓ交換反応速度３５．５μＭＯｌｅ／分［相
］構造式： １１１２＋Ｓ−Ｓ−ＣＨ−ＣＯ−ＣＨ
λＴｎａｘ：２７１ｎｍ，、４１８ｒ１７ＴＬ（メタノ
ール）Ｒｆ値：０．２３（ブタノールニ酢酸：水＝４：
１：５θ の上層）［相］構造式： λＴｒｌａｘ：２７１ｎ７Ｔ１，（メタノール）Ｒｆ値
：０．４８（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）［相］構
造式：１。
）３ＣＨ２Ｃ００ＨλＭａｘ：２７１ｎＴｒＬ（メタノ
ール）Ｒｆ値：０．１２（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：
１）Ｓ−Ｓ交換反応速度３５．０μＭＯｌｅ／分３構造
式：λＭａｘ：２７８ｒ１ＴＬ Ｒｆ値：０．８０（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）
／＼／５、Ｏ構造式： 局。
ール）Ｒｆ値：０．１２（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：
１）Ｓ−Ｓ交換反応速度３５．０μＭＯｌｅ／分３構造
式：λＭａｘ：２７８ｒ１ＴＬ Ｒｆ値：０．８０（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）
／＼／５、Ｏ構造式： 局。
：２７１ｍｍ（メタノール）７Ｒｆ値：０．１５（ベン
ゼンニ酢酸エチルニ３：１）Ｓ−Ｓ交換反応速度３６．
６μＭＯｌｅ／分◎構造式：λｍ＆ｘ：２７１ｎｗＬ（
メタノール）Ｒｆ値：０．８０（ベンゼンニ酢酸エチル
ニ３：１）［相］構造式：゛０ ＸｍａＸ：２７１ｎ７ＴＩ．（メタノール）Ｒｆ値：０
．１０（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）Ｓ−Ｓ交換反
応速度３５．７μＭＯｌｅ／分（ハ）構造式：λ１１１
ａＸ：２７１ｎＴｒＬ（メタノール）Ｒｆ値：０．０５
（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）＠構造式：局Ａｘ：
２７２ｒ１ｍ，（メタノール）Ｒｆ値：０．３１（ブタ
ノールニ酢酸：水＝４：１：の上層）ｓ−Ｓ交換反応速
度３５．２μＭＯｌｅ／分＠構造式：λＲｒ．ａｘ：２
７０ｒ１ｍ（メタノール）Ｒｆ値：０．７（ブタノール
ニ酢酸：水＝４：１：の上層）Ｓ−Ｓ交換反応速度９２
．８μＭＯＩｅ／分＠構造式：λＭａｘ：２７０ｒ１Ｔ
ｒＬ（メタノール）Ｒｆ値：０．６６（ブタノールニ酢
酸：水＝４：１１）Ｓ−Ｓ交換反応速度９３．２μＭＯ
ｌｅ／分＠構造式：λＭａｘ：３１０ｒ１ｊ１．（メタ
ノール）Ｒｆ値：０．８２（ベンゼンニ酢酸エチルニ３
：１）［相］構造式：０ＸＴ１１ａＸ：２７１ｎＴｒ！
．（メタノール）Ｒｆ値：０．４１（ブタノールニ酢酸
：水＝４：ニ１） Ｓ−Ｓ交換反応速度９２．６μＭＯ
ｌｅ／分９構造式：λＭａ）ｃ：２７１ｎｒｒＬ，（メ
タノール）０Ｒｆ値：０．２５（ブタノールニ酢酸：水
＝４：１１）Ｏ構造式： λＲｎａｘ：２７０ｒ）７ｎ，（メタノール）Ｒｆ値：
０．３２（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：Ｏ１１）Ｓ
−Ｓ交換反応速度９０．１μＭＯｌｅ／分Ｏ構造式：λ
ＮｌａＸ：２７０ｒ１ＴｒＬＲｆ値：０．２０（ブタノ
ールニ酢酸：水＝４：１：１）Ｓ−Ｓ交換反応速度９１
．５μＭＯｌｅ／分［有］構造式：λＭａｘ：２７０ｒ
１７ｎ Ｒｆ値：０．４１（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：１
）［相］構造式： λＭａ：Ｘ：２７０ｒ１ＴｒＬ Ｒｆ値：０．２５（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：１
）参考例１ ５００ｍ１容三つロフラスコを約３５℃の恒温水浴にひ
たし、約１紛間窒素で置換せしめ、次いで、フラスコ内
に１２０ｍ１の蒸留水を加え、さらにアルキルスルホン
酸ナトリウム２ｙ１アクリロニトリル８０ダ、過硫酸ナ
トリウム０．１ｙ１亜硫酸水素ナトリウム０．０３３ｙ
を加え、約３時間攪拌せしめて乳濁液を得、次いでこれ
を約５００ｍ１の水に注ぎ、攪拌下塩を加えて凝固せし
めて生成物を析出し、これを枦別、水洗し、通風乾燥し
たポリアクリロニトリル（イ）．５％、３０℃における
ジメチルホルムアミドでの対数粘度は約１０．５である
）を得た。
ゼンニ酢酸エチルニ３：１）Ｓ−Ｓ交換反応速度３６．
６μＭＯｌｅ／分◎構造式：λｍ＆ｘ：２７１ｎｗＬ（
メタノール）Ｒｆ値：０．８０（ベンゼンニ酢酸エチル
ニ３：１）［相］構造式：゛０ ＸｍａＸ：２７１ｎ７ＴＩ．（メタノール）Ｒｆ値：０
．１０（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）Ｓ−Ｓ交換反
応速度３５．７μＭＯｌｅ／分（ハ）構造式：λ１１１
ａＸ：２７１ｎＴｒＬ（メタノール）Ｒｆ値：０．０５
（ベンゼンニ酢酸エチルニ３：１）＠構造式：局Ａｘ：
２７２ｒ１ｍ，（メタノール）Ｒｆ値：０．３１（ブタ
ノールニ酢酸：水＝４：１：の上層）ｓ−Ｓ交換反応速
度３５．２μＭＯｌｅ／分＠構造式：λＲｒ．ａｘ：２
７０ｒ１ｍ（メタノール）Ｒｆ値：０．７（ブタノール
ニ酢酸：水＝４：１：の上層）Ｓ−Ｓ交換反応速度９２
．８μＭＯＩｅ／分＠構造式：λＭａｘ：２７０ｒ１Ｔ
ｒＬ（メタノール）Ｒｆ値：０．６６（ブタノールニ酢
酸：水＝４：１１）Ｓ−Ｓ交換反応速度９３．２μＭＯ
ｌｅ／分＠構造式：λＭａｘ：３１０ｒ１ｊ１．（メタ
ノール）Ｒｆ値：０．８２（ベンゼンニ酢酸エチルニ３
：１）［相］構造式：０ＸＴ１１ａＸ：２７１ｎＴｒ！
．（メタノール）Ｒｆ値：０．４１（ブタノールニ酢酸
：水＝４：ニ１） Ｓ−Ｓ交換反応速度９２．６μＭＯ
ｌｅ／分９構造式：λＭａ）ｃ：２７１ｎｒｒＬ，（メ
タノール）０Ｒｆ値：０．２５（ブタノールニ酢酸：水
＝４：１１）Ｏ構造式： λＲｎａｘ：２７０ｒ）７ｎ，（メタノール）Ｒｆ値：
０．３２（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：Ｏ１１）Ｓ
−Ｓ交換反応速度９０．１μＭＯｌｅ／分Ｏ構造式：λ
ＮｌａＸ：２７０ｒ１ＴｒＬＲｆ値：０．２０（ブタノ
ールニ酢酸：水＝４：１：１）Ｓ−Ｓ交換反応速度９１
．５μＭＯｌｅ／分［有］構造式：λＭａｘ：２７０ｒ
１７ｎ Ｒｆ値：０．４１（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：１
）［相］構造式： λＭａ：Ｘ：２７０ｒ１ＴｒＬ Ｒｆ値：０．２５（ブタノールニ酢酸：水＝４：１：１
）参考例１ ５００ｍ１容三つロフラスコを約３５℃の恒温水浴にひ
たし、約１紛間窒素で置換せしめ、次いで、フラスコ内
に１２０ｍ１の蒸留水を加え、さらにアルキルスルホン
酸ナトリウム２ｙ１アクリロニトリル８０ダ、過硫酸ナ
トリウム０．１ｙ１亜硫酸水素ナトリウム０．０３３ｙ
を加え、約３時間攪拌せしめて乳濁液を得、次いでこれ
を約５００ｍ１の水に注ぎ、攪拌下塩を加えて凝固せし
めて生成物を析出し、これを枦別、水洗し、通風乾燥し
たポリアクリロニトリル（イ）．５％、３０℃における
ジメチルホルムアミドでの対数粘度は約１０．５である
）を得た。
次いでこのポリアクリロニトリル１０ｙをジメチルホル
ムアミド１５０ｍ１に溶解し、これを、２０％ジメチル
ホルムアミド含有水浴中に、糸状に成形して、多孔質構
造を有するフィラメント状のポリアクリロニトリルを得
た。同様に、ポリアクリロニトリル１０ｙを２０％ジメ
チルホルムアミド含有水浴中に、アトマイザ−カップを
用いて滴下して、多孔質構”造を有する粒状のポリアク
リロニトリルを得た。次いで、水素化リチウムアルミニ
ウム２．５ｇを三つロフラスコに加え、乾燥エーテル１
００ｍ１を添加・攪拌し、これに上記の多孔質構造を有
する粒状のポリアクリロニトリル２ｑを加えて５０℃に
て托時間加熱還流し、反応後氷冷下、水を滴下して未反
応の水素化リチウムアルミニウムを分解せしめ、さらに
１ＮＨＣ１を滴下して、その分解物を溶解せしめ、次い
でこれを沖別して、アミノ化された該ポリアクリロニト
リルを回収し、次いで１ＮＨＣＩ１水、１ＮＮａ０Ｈ１
水、０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）の順で洗浄し
て遊離アミノ基およびニトリル基を有する多孔質構造の
粒状物を得た。同様に、上記の多孔質構造を有する粒状
のポリアクリロニトリルの代りに、多孔質構造を有する
フィラメント状のポリアクリロニトリルを用いて行なつ
た結果、遊離アミノ基およびニトリル基を有する多孔質
構造のフィラメント状物を得た。このようにして得られ
た遊離アミノ基およびニトリル基を有する多孔質構造物
を、１２．５％グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（Ｐ
Ｈ８．５）に加えて０℃、２紛間反応応せしめ、次いで
これをｐ取し、ホウ酸緩衝液にて洗浄後、さらにこれを
７−ＡＤＣＡ（７−アミノデスアセトキシセフアロスポ
ラン酸）／０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）に加え
て３０℃、６吟間振盪して反応せしめ、その後その上清
中に残存する７−ＡＤＣＡの量を液体クロマトグラフィ
ーにより求めて、該遊離アミノ基およびニトリル基を有
する多孔質構造物１ｙ当り７一，ＡＤＣＡ３３〜３５μ
Ｍを結合し得るアミノ基を有している構造物であつた。
また、上記のグルタルアルデヒド処理後、０．２Ｍヘキ
サメチレンジアミン（ＰＨ９．５）を室温下２時間処理
しさらにグルタルアルデヒドを反応せしてた後、７−Ａ
ＤＣＡを同様反応せしめて求めた結果７−ＡＤＣＡの結
合量は４２〜４６μＭｌｙであつた。
ムアミド１５０ｍ１に溶解し、これを、２０％ジメチル
ホルムアミド含有水浴中に、糸状に成形して、多孔質構
造を有するフィラメント状のポリアクリロニトリルを得
た。同様に、ポリアクリロニトリル１０ｙを２０％ジメ
チルホルムアミド含有水浴中に、アトマイザ−カップを
用いて滴下して、多孔質構”造を有する粒状のポリアク
リロニトリルを得た。次いで、水素化リチウムアルミニ
ウム２．５ｇを三つロフラスコに加え、乾燥エーテル１
００ｍ１を添加・攪拌し、これに上記の多孔質構造を有
する粒状のポリアクリロニトリル２ｑを加えて５０℃に
て托時間加熱還流し、反応後氷冷下、水を滴下して未反
応の水素化リチウムアルミニウムを分解せしめ、さらに
１ＮＨＣ１を滴下して、その分解物を溶解せしめ、次い
でこれを沖別して、アミノ化された該ポリアクリロニト
リルを回収し、次いで１ＮＨＣＩ１水、１ＮＮａ０Ｈ１
水、０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）の順で洗浄し
て遊離アミノ基およびニトリル基を有する多孔質構造の
粒状物を得た。同様に、上記の多孔質構造を有する粒状
のポリアクリロニトリルの代りに、多孔質構造を有する
フィラメント状のポリアクリロニトリルを用いて行なつ
た結果、遊離アミノ基およびニトリル基を有する多孔質
構造のフィラメント状物を得た。このようにして得られ
た遊離アミノ基およびニトリル基を有する多孔質構造物
を、１２．５％グルタルアルデヒド／ホウ酸緩衝液（Ｐ
Ｈ８．５）に加えて０℃、２紛間反応応せしめ、次いで
これをｐ取し、ホウ酸緩衝液にて洗浄後、さらにこれを
７−ＡＤＣＡ（７−アミノデスアセトキシセフアロスポ
ラン酸）／０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）に加え
て３０℃、６吟間振盪して反応せしめ、その後その上清
中に残存する７−ＡＤＣＡの量を液体クロマトグラフィ
ーにより求めて、該遊離アミノ基およびニトリル基を有
する多孔質構造物１ｙ当り７一，ＡＤＣＡ３３〜３５μ
Ｍを結合し得るアミノ基を有している構造物であつた。
また、上記のグルタルアルデヒド処理後、０．２Ｍヘキ
サメチレンジアミン（ＰＨ９．５）を室温下２時間処理
しさらにグルタルアルデヒドを反応せしてた後、７−Ａ
ＤＣＡを同様反応せしめて求めた結果７−ＡＤＣＡの結
合量は４２〜４６μＭｌｙであつた。
本発明においては、この新規な遊離アミノ基およびニト
リル基を有する多孔性構造物を、アミノ基を有する化合
物として使用しうるものてある。
リル基を有する多孔性構造物を、アミノ基を有する化合
物として使用しうるものてある。
参考例９６・６−ナイロンピース（径４．８Ｔｗｔ）１
００ｙをγーアミノプロピルトリエトキシシラン１００
ｍＬ中に分散して、１００℃、３時間加熱処理した後該
ピースを沖取し、水洗して乾燥してアミノプロピル化し
た該ビーズを得た。
００ｙをγーアミノプロピルトリエトキシシラン１００
ｍＬ中に分散して、１００℃、３時間加熱処理した後該
ピースを沖取し、水洗して乾燥してアミノプロピル化し
た該ビーズを得た。
本化合物を、無水コハク酸２０ｑ／１５０ｍ１ジメチル
ホルムアミド中に加え、一夜放置反応せしめ、戸取し、
ジメチルホルムアミドにて洗浄し、これをジシクロヘキ
シルカルボジイミド２０．６ｙおよびＮ−ヒドロキシス
クシンイミド１１．５ｙ／ジメチルホルムアミド１５０
ｍ１にて一夜反応せしめてジメチルホルムアミドにて洗
浄し、さらにこのピースを０．０５Ｍリン酸緩衝液（Ｐ
Ｈ７．４）（イ）．１％ＮａＮ３、０．２５％牛血清
アルブミン、３７ＴＬＭＭｇＣ１。、０．１５ｒ！４Ｎ
ａｃＩ含有：以下抗原抗体用緩衝液と略す）で３回洗浄
し、これにウサギのモルモツトＩｇＧ抗体（以下Ａｂ２
と略す）を加えて５℃、１７時間放置してｐ取し、抗原
抗体用緩衝液で３回洗浄してＡｂ２Ｂ結合該ピースを得
、さらにこの２ビーズを用いて、これに、モルモツトの
牛インスリン抗体（以下Ａｂｌと略す）２γを用いるβ
−ガラクトシダーゼ架橋結合体（参考例４参照）１００
ｍＬを加えて２０！１１寺間、５℃下放置し、抗原抗体
用緩衝液で洗浄し、５ｍ９ノｍｌのオルトニトロフェニ
ルガラクトサイド（イ）．１％牛血清アルブミン、１０
ＴｒＬ，Ｍメルカプトエタノール含有ＰＨ６．７、０．
１Ｍリン酸緩衝液）２００μｅからなるβ−ガラクトシ
ダーゼ呈色反応を用いて４４ｅＣ２吟間反応せしめ、直
ちにグリシン緩衝液（ＰＨｌＯ．５、０．１Ｍ）２５ｍ
１を加えて反応を停止せしめ、これを４２０ｒ１７Ｔｔ
．に比色分析して、少なくとも１ピース当り５４γのＡ
ｂ２を結合せしめ得るアミノプロピル基を導入された化
合物であつた。本発明において、この新規なアミノプロ
ピル化せしめたナイロンビーズも利用し得るものである
。
ホルムアミド中に加え、一夜放置反応せしめ、戸取し、
ジメチルホルムアミドにて洗浄し、これをジシクロヘキ
シルカルボジイミド２０．６ｙおよびＮ−ヒドロキシス
クシンイミド１１．５ｙ／ジメチルホルムアミド１５０
ｍ１にて一夜反応せしめてジメチルホルムアミドにて洗
浄し、さらにこのピースを０．０５Ｍリン酸緩衝液（Ｐ
Ｈ７．４）（イ）．１％ＮａＮ３、０．２５％牛血清
アルブミン、３７ＴＬＭＭｇＣ１。、０．１５ｒ！４Ｎ
ａｃＩ含有：以下抗原抗体用緩衝液と略す）で３回洗浄
し、これにウサギのモルモツトＩｇＧ抗体（以下Ａｂ２
と略す）を加えて５℃、１７時間放置してｐ取し、抗原
抗体用緩衝液で３回洗浄してＡｂ２Ｂ結合該ピースを得
、さらにこの２ビーズを用いて、これに、モルモツトの
牛インスリン抗体（以下Ａｂｌと略す）２γを用いるβ
−ガラクトシダーゼ架橋結合体（参考例４参照）１００
ｍＬを加えて２０！１１寺間、５℃下放置し、抗原抗体
用緩衝液で洗浄し、５ｍ９ノｍｌのオルトニトロフェニ
ルガラクトサイド（イ）．１％牛血清アルブミン、１０
ＴｒＬ，Ｍメルカプトエタノール含有ＰＨ６．７、０．
１Ｍリン酸緩衝液）２００μｅからなるβ−ガラクトシ
ダーゼ呈色反応を用いて４４ｅＣ２吟間反応せしめ、直
ちにグリシン緩衝液（ＰＨｌＯ．５、０．１Ｍ）２５ｍ
１を加えて反応を停止せしめ、これを４２０ｒ１７Ｔｔ
．に比色分析して、少なくとも１ピース当り５４γのＡ
ｂ２を結合せしめ得るアミノプロピル基を導入された化
合物であつた。本発明において、この新規なアミノプロ
ピル化せしめたナイロンビーズも利用し得るものである
。
参考例３
牛インスリン６０ｍｇを０．１Ｍベロナール緩衝液（Ｐ
Ｈ７．５）１０ｍｔに溶解し、これに、３（−ベンゾチ
アゾールー２−イルジチオ）プロピオン酸スクシンイミ
ドエステル３．１ｍ９溶解１ｍ１ジメチルホルムアミド
溶液を加えて室温下４時間攪拌せしめ、その後ＰＨを５
．０に調整して生成物を析出せしめ、これを３０００ｒ
′Ｐｍｌｌ紛間遠心分離して３−（ベンゾチアゾールー
２″−イルジチオ）プロピオニル基を導入せしめたイン
スリン誘導体を得、さらにクエン酸緩衝液（ＰＨ５）で
洗浄後、これを１０ｍＬの０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ
７．５）に溶解し、その０．１ｍＬ・を分取し、これに
、あらかじめリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）５ｍ１に５Ｔ
ｆＬｇのβ−ガラクトシダーゼを溶解した溶液を加えて
室温下、１時間反応せしめて、次いでこの反応液をセフ
アデツクスＧ−１００（商品名）（１×８０Ｃ７７りに
チャージし、０．１５ＭＮａｃ１含有０．０１Ｍリン酸
緩衝液（ＰＨ７．５）にて、１フラクシヨン４ｍ１づつ
分画して、第７〜８フラクシヨンの活性画分を回収して
インスリンとβ−ガラクトシダーゼとを架橋結合せしめ
た化合物を得た。
Ｈ７．５）１０ｍｔに溶解し、これに、３（−ベンゾチ
アゾールー２−イルジチオ）プロピオン酸スクシンイミ
ドエステル３．１ｍ９溶解１ｍ１ジメチルホルムアミド
溶液を加えて室温下４時間攪拌せしめ、その後ＰＨを５
．０に調整して生成物を析出せしめ、これを３０００ｒ
′Ｐｍｌｌ紛間遠心分離して３−（ベンゾチアゾールー
２″−イルジチオ）プロピオニル基を導入せしめたイン
スリン誘導体を得、さらにクエン酸緩衝液（ＰＨ５）で
洗浄後、これを１０ｍＬの０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ
７．５）に溶解し、その０．１ｍＬ・を分取し、これに
、あらかじめリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）５ｍ１に５Ｔ
ｆＬｇのβ−ガラクトシダーゼを溶解した溶液を加えて
室温下、１時間反応せしめて、次いでこの反応液をセフ
アデツクスＧ−１００（商品名）（１×８０Ｃ７７りに
チャージし、０．１５ＭＮａｃ１含有０．０１Ｍリン酸
緩衝液（ＰＨ７．５）にて、１フラクシヨン４ｍ１づつ
分画して、第７〜８フラクシヨンの活性画分を回収して
インスリンとβ−ガラクトシダーゼとを架橋結合せしめ
た化合物を得た。
さらに０．０２ｎｙ〜１０ｒ１Ｖの牛インスリンを試験
管に取り、これらに上記のインスリンーβ−ガラクトシ
ダーゼ架橋結合物とモルモツトの抗牛インスリン血清と
を加えて５℃、一夜反応せしめ、さらに第２抗体として
ウサギの抗モルモツトＩｇＧ血清を加えて５℃、一夜反
応せしめ、これを３０００ｒｐｍ１１０分間遠心分離し
、得られた沈澱物を、上記参考例２と同一のβ−ガラク
トシダーゼの活性測定手段を用いて、上記のインスリン
ーβ−ガラクトシダーゼ架橋結合体とインスリンとを用
いてなるインスリン抗血清の第２抗体法による酵素免疫
を行なつた。その結果は第１図に示す通りであり、良好
な測定結果を示した。参考例４ 参考例３の牛インスリンの代りに、モルモツトの牛イン
スリン抗体を用いて、３−（ベンゾチアゾールー２′−
イルジチオ）プロピオン酸スクシンイミドエステルと反
応せしめ、以下参考例３と同様に行なつてモルモツトの
牛インスリン抗体−βーガラクトシダーゼ架橋結合体を
得た。
管に取り、これらに上記のインスリンーβ−ガラクトシ
ダーゼ架橋結合物とモルモツトの抗牛インスリン血清と
を加えて５℃、一夜反応せしめ、さらに第２抗体として
ウサギの抗モルモツトＩｇＧ血清を加えて５℃、一夜反
応せしめ、これを３０００ｒｐｍ１１０分間遠心分離し
、得られた沈澱物を、上記参考例２と同一のβ−ガラク
トシダーゼの活性測定手段を用いて、上記のインスリン
ーβ−ガラクトシダーゼ架橋結合体とインスリンとを用
いてなるインスリン抗血清の第２抗体法による酵素免疫
を行なつた。その結果は第１図に示す通りであり、良好
な測定結果を示した。参考例４ 参考例３の牛インスリンの代りに、モルモツトの牛イン
スリン抗体を用いて、３−（ベンゾチアゾールー２′−
イルジチオ）プロピオン酸スクシンイミドエステルと反
応せしめ、以下参考例３と同様に行なつてモルモツトの
牛インスリン抗体−βーガラクトシダーゼ架橋結合体を
得た。
本品は上記参考例２に記載の通り利用されたものである
。参考例５参考例２で得られたアミノプロピル化した６
．６ーナイロンピース２唯を５瓦１ジメチルホルムアミ
ドに加え、さらにこれに３−（ベンゾチアゾールー２″
−イルジチオ）プロピオン酸シクシンイミドエステル２
．０ｍ９含有ジメチルホルムアミド１ｍιを加えて室温
下４時間攪拌し、その後これを戸取し、ジメチルホルム
アミドー０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）にて洗浄
し、さらにこれを０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）
５ｍＬに加え、次いでこれに３ｍ９をβ−ガラクトシダ
ーゼ含有０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）を加えて
室温下２時間反応せしめ、これを戸取し、０．ＩＭリン
酸緩衝液（ＰＨ７．５）にて洗浄して、β−ガラクトシ
ダーゼの不溶化ビーズを得た（１−ビーズ当りβ−ガラ
クトシダーゼ６Ｕ．の活性を有していた）。
。参考例５参考例２で得られたアミノプロピル化した６
．６ーナイロンピース２唯を５瓦１ジメチルホルムアミ
ドに加え、さらにこれに３−（ベンゾチアゾールー２″
−イルジチオ）プロピオン酸シクシンイミドエステル２
．０ｍ９含有ジメチルホルムアミド１ｍιを加えて室温
下４時間攪拌し、その後これを戸取し、ジメチルホルム
アミドー０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）にて洗浄
し、さらにこれを０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）
５ｍＬに加え、次いでこれに３ｍ９をβ−ガラクトシダ
ーゼ含有０．ＩＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．５）を加えて
室温下２時間反応せしめ、これを戸取し、０．ＩＭリン
酸緩衝液（ＰＨ７．５）にて洗浄して、β−ガラクトシ
ダーゼの不溶化ビーズを得た（１−ビーズ当りβ−ガラ
クトシダーゼ６Ｕ．の活性を有していた）。
参考例６
５ｍ９のβ−ガラクトシダーゼ含有０．ＩＭベロナール
緩衝液（ＰＨ７．５）５７７１１に、３．１ｍ９の３−
（ベンゾチアゾールー７−イルジチオ）プロピオン酸ス
クシンイミドエステル含有１ｍ１ジメチルホルムアミド
を加えて室温下、４時間攪拌反応せしめ、３−（ベンゾ
チアゾールー２’−イルジチオ）プロピオニル化したβ
−ガラクトシダーゼを得その後これを０．ＩＮ炭酸ナト
リウム水溶液を用いて、ＰＨ９．Ｏに調整した水溶液に
加え２時間放置して、そのＳ−Ｓ結合を加水分解してβ
−チオプロピオニル化されたβ−ガラクトシダーゼ（β
−ガラクトシダーゼ１分子中β−チオプロピオニル基２
紛子導入）を得た。
緩衝液（ＰＨ７．５）５７７１１に、３．１ｍ９の３−
（ベンゾチアゾールー７−イルジチオ）プロピオン酸ス
クシンイミドエステル含有１ｍ１ジメチルホルムアミド
を加えて室温下、４時間攪拌反応せしめ、３−（ベンゾ
チアゾールー２’−イルジチオ）プロピオニル化したβ
−ガラクトシダーゼを得その後これを０．ＩＮ炭酸ナト
リウム水溶液を用いて、ＰＨ９．Ｏに調整した水溶液に
加え２時間放置して、そのＳ−Ｓ結合を加水分解してβ
−チオプロピオニル化されたβ−ガラクトシダーゼ（β
−ガラクトシダーゼ１分子中β−チオプロピオニル基２
紛子導入）を得た。
第１図は酵素免疫法におけるインスリンの測定曲線を示
す。
す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記、一般式〔 I 〕 ▲数式、化学式、表等があります▼〔 I 〕（ただし、
式中、Ｒ＿１は２−ベンゾチアゾリル基または２−ピリ
ジール−Ｎ−オキサイド基、Ｒ＿２は遊離または保護さ
れた官能基を有してもよいアルキレン基、Ｒ＿３はアミ
ノ酸または低級ポリペプタイドのカルボキシル残基、Ｒ
＿４はカルボキシル基、その反応性誘導体または保護さ
れたカルボキシル基もしくはイミデート基、ｎは０また
は１を示す）で表わされる新規なジスルフィド誘導体。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53085900A JPS6058232B2 (ja) | 1978-07-13 | 1978-07-13 | 新規なジスルフイド誘導体 |
| FR7918007A FR2430943A1 (fr) | 1978-07-13 | 1979-07-11 | Nouveaux derives disulfures |
| GB7924336A GB2029825B (en) | 1978-07-13 | 1979-07-12 | Benzothiazolyl and pyndyl n oxide disulphide derivatives |
| US06/057,502 US4258193A (en) | 1978-07-13 | 1979-07-13 | Disulfide derivatives having S--S exchange reactivity |
| DE19792928384 DE2928384A1 (de) | 1978-07-13 | 1979-07-13 | Disulfidderivate |
| SE7906233A SE448095B (sv) | 1978-07-13 | 1979-07-19 | Disulfidderivat |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP53085900A JPS6058232B2 (ja) | 1978-07-13 | 1978-07-13 | 新規なジスルフイド誘導体 |
Related Child Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16491178A Division JPS5522657A (en) | 1978-07-13 | 1978-12-28 | Reactive compound |
| JP16490978A Division JPS5512178A (en) | 1978-04-28 | 1978-12-28 | Carrier having s-s exchange reactivity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5517302A JPS5517302A (en) | 1980-02-06 |
| JPS6058232B2 true JPS6058232B2 (ja) | 1985-12-19 |
Family
ID=13871729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP53085900A Expired JPS6058232B2 (ja) | 1978-07-13 | 1978-07-13 | 新規なジスルフイド誘導体 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6058232B2 (ja) |
| SE (1) | SE448095B (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE8102193L (sv) * | 1981-04-06 | 1982-10-07 | Pharmacia Ab | Terapeutiskt aktiv organisk forening och dess anvendning |
| SE8102194L (sv) * | 1981-04-06 | 1982-10-07 | Pharmacia Ab | Terapeutiskt aktiv organisk forening och farmaceutisk beredning innehallande denna |
| JPS5880558A (ja) * | 1981-11-09 | 1983-05-14 | Sekisui Chem Co Ltd | 免疫化学的測定試薬 |
| JPS6391563A (ja) * | 1986-10-07 | 1988-04-22 | Nitsusui Seiyaku Kk | 細菌由来蛋白特異抗原の検査法 |
| GB0420062D0 (en) * | 2004-09-09 | 2004-10-13 | Akubio Ltd | Assay methods,materials and preparations |
| KR20200058590A (ko) * | 2008-04-30 | 2020-05-27 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 가교제 및 그 용도 |
-
1978
- 1978-07-13 JP JP53085900A patent/JPS6058232B2/ja not_active Expired
-
1979
- 1979-07-19 SE SE7906233A patent/SE448095B/sv not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5517302A (en) | 1980-02-06 |
| SE7906233L (sv) | 1981-01-20 |
| SE448095B (sv) | 1987-01-19 |
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