JPS6062989A - 新規ナフタレノン化合物及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般式： （ただし、Ｒ，＝Ｈの時、Ｒ２＝ＯＨＸＲ，＝ＯＨの時
、Ｒ２はＨを示す。） で衣わされる新規なナフタレノン化合物ＰＤ及びその製
造法並びに該化合物を有効成分とする制癌剤に関するも
のである。

従来、癌化学療法剤として、アルキル化剤（ナイトロゼ
ンマスタード類、エチレンイミン類、スルフォン酸エス
テル類）、代謝拮抗物質（葉酸拮抗剤、プリン拮抗剤、
ビリミソン拮抗剤）、植物性核分裂前（コルセミド、ビ
ンブラスチン等）、抗生物質（デルコマイシン、カルテ
ノフイリン、マイトマイシン等）、ホルモン類（副腎ス
テロイド、男性ホルモン、女性ホルモン）及びポルフィ
リン錯塩（マーフィリン、Ｃ０ｐｐ）等が用いられてい
る。しかしながら、その殆んどは細胞毒型の物質であり
、重大な副作用を呈するため、低毒性ですぐれた制癌活
性を有する物質の開発が強く望まれている現状にある。

本発明者は、低毒性で制癌活性を有する物質を探索した
ところ、枯損松より分離したペニシリウム・デイバーズ
ム・パリエタス・オーレウムの培養物より新規なナフタ
レノン化合物ＰＤを単離することに成功し、更に該化合
物の生理活性につき、鋭意研究の結果、前人で表わされ
る化合物が著しく低毒性で、すぐれ九制癌活性を有する
事を見出し、この物質が癌治療に顕著な効果を発揮し得
ることの新たな知見を得てここに本発明を完成した。

本発明のナフタレノン化合物ＰＤは、人、寂畜、犬、猫
等々の温血動物に対するすぐれた癌化学療法剤となり得
るものである。

本発明に用いる制癌活性を有する化合物について以下に
説明する。

本発明の化合物は、以下の構造式を有する。

（１） 以下、化合物（１１を”ＰＤ−２”、化合物（２）を”
ＰＤ−１Ｉ−”と称する。

本発明の化合物を産生ずる微生物は、ペニシリウム（Ｐ
ｅｎｉｃｌｌｌｌｕｍ　）属に属する該化合物生産菌で
あり、その−例としてペニシリウム・デイパーズム・パ
リ：ｒ−ｐ　Ｘ　、　、ｌ−−Ｌ／つＡ　（Ｐｅｎｌｃ
ｉｌｌｌＬｒｎｄｉｖｅｒｓｕｍ　ｖａｒ、ａｕｒｅｕ
ｍ　）　Ｐ　−／　（以下”Ｐ−７株”と称する）が有
オリに用いられる。なお、Ｐ−７株の菌学的性質は、公
知のペニシリウム・デイパーズム・パリエタス・オーレ
ウムと同じである（　Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ’＋　ｇ＋　
３’ｌ八ｆへｇ、　／／Ｃ／９１１ｇ）参照）。

Ｐ−７株は、昭和３ｇ年２り＠２６日付にて、工業技術
院・微生物工業技術研究所に寄託され、その受託番号は
、微工研−寄６９３６号（ＦＥＲＭ−Ｐｌ、９３乙）で
ある。

以下、本発明化合物の分１１１１ｔ鞘製法について述べ
る。すなわち、上記Ｐ−／株を、例えば、２０〜２　、
ｔ　”Ｃで３週間平面静置培養させて得られる培養物の
培養Ｆ液を活性炭成層、次いで洗浄後、有機溶媒で脱着
させる。溶出液を合わせて濃縮し一有機溶剤で抽出し、
常法により洗浄、乾燥後、減圧蒸留する。得られた抽出
物を、シリカダルカラムクロマトグラフィー（溶出温媒
ベンゼン：アセトン＝＝４ｔ：／）に付し、ＰＤ−２と
ＰＤ−４の俗用画分を年め濃縮し、高速液体クロマトグ
ラフィーにて分離し、減圧留去後、結晶化して、ＰＤ−
２、ＰＤ−ｇをそれぞれ得る。

培地の栄養源としては微生物の培地に通常用いられる炭
素源、屋素源その他を含有させることができるが、炭素
源としては殿粉、デキストリン、グリセリン、グルコー
ス、シュークロース、ガラクトース、イノシトール、マ
ンニトールなどが、また屋累源としてはイースト・エキ
ストラクト、ベグトン、大豆粉、肉エキス、米ぬか、皺
、尿素、コーンスチープリカー、アンモニウム塩、硝酸
塩、その他の有機又は無機の蟹累化合物が用いられる。

輩素源として、％にイースト・エキストラクト又はベグ
トンは前記使用微生物の生育を極めて良好ならしめるた
めに好適な成分である。その他無機塩類、例えは食塩、
燐酸塩類、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄
等の金属塩類を適宜に添加してもよい。培養温度、培養
時間等の培養条件は使用菌の発育に適し、しかも目的物
質の産生が最篩となるような条件が）８ばれる。例えば
、培地のｐＩＩは乙０ｇ〜７．２、％に７．ｏの中性附
近がよく、培養の温度、時間は一〇〜２左Ｃ程度、７０
日〜２５日程度がよい。

このようにして借られる培養物から目的物質をアセトン
で脱着した後、有機溶剤で処理して結晶性混合物を集め
、更に該混合物より′）Ｋ機溶剤との分配の差を利用す
る手段を用いれはよい。具体的には、まずＰ液に活性炭
を加えて吸着はせ、アセトンで脱着して得られる含水ア
セトン溶液よりアセトン螢留去、酢酸エチルで抽出、こ
れを留去した残留物を、夾雑する不純物を除く目的でシ
リカダルを用いたカラムクロマトグラフィーに付す。

溶剤系としてはベンゼン−アセトン糸が最適であり、混
合比は適宜それを変化させ、極性全次第に大きくしなが
ら溶出する。これは段階的にもグラジェントに変化させ
てもよく、シリカゲルカラムとしては、市販のカラムク
ロマト用元横剤を用いて調整してもよいし、縦裂のカラ
ムを用いることもできる。ＰＯ−コ、ＰＤ−グの浴出画
分をそれぞれ集め、高速液体クロマトグラフィーにて分
離する。溶媒は、ヘキサン−酢酸エチル系が最適である
。分離後、溶媒留去し、残渣を再結晶化すると、それぞ
れＰＤ−λ、ＰＤ−４を得る。

かくして得られた化合物ＰＤ−コ、ＰＤ−１の理化学的
性質は、θこの通りである。

［ＰＤ−コの理化学的性質］ （１１融　点：／ダ／〜／４ｔ３℃ （２）比旋光度：　〔α〕ｏ　−７ｇ、乙　（メタノ−
へＣ＝θ、０ｇ６）（３）マス・スペクトル：ｍ／ｚ　
／９グ（ｔｌ１＋）、ＫＢｒ　−＋ （４）ＩＲ・ス被りトル、ｖｍａｘｃｍ　３’ＩＯθ〜
３００θ、／６３θ、／左ｇθ （５１’　Ｈ−ＮＭＦ（スペクト＃：　（ＣＤＣ１５、
９０ＭＨｚ、δ）λ、θ７（ｄｄｄ　、　Ｊ−／／、’
ｌ　、　／／、９、／、Ｊ’０．２Ｈ２ＸＨ−３α） 、２．ｇ４（ｄｄｄＸＪ−１１，ｇ、　３．３、／／、
９ｌ−ＩＺ　５Ｈ−３β） ｔ、Ｊ乙（ｄｄ、Ｊ＝、ｔ、３、／３．．２Ｈｚ、Ｈ−
２）１１．９ｇ（ｄｃＪＸＪ−’１．ｇ、／八１ｌＨｚ
へＨ−１１）６．９３（ｄｄ、Ｊ−コ、０、ｇ　、３Ｈ
ｚ、　Ｈ−７）７、ｐＩＩ＜　ｄｄ、　Ｊ−２，０，ざ
、、３ｌ−ＩＺ、　Ｈ−５）？、Ｓ’７（ｔ、Ｊ−３，
，７Ｈｚ、Ｈ−１，ン（６）毒性：マウスに対し、！；
　０１ｎｇ／　Ｋ９に連続投与しても１０」ら壽注を認
めない。

（ＰＤ−グの理化学的性質〕 （１）融　点：／３ソ〜／　＜ｔ　／　Ｃ＋２１．旋光
ｉ　：　（α）１５’−３６，３ｃ＜、メｐノール、Ｃ
，−０，０６２）（３）マス・ス・ξクトル：「η／ｚ
　／７グ（Ｍ”）（４１’Ｈ−ＮＭＲスペクトル：（ｄ
−乙−アセトン、９ＱＨｚ、δ）２．０７Ｃｄｄｄ、　
Ｊ−／θ、ｇ、　／／、９、／３．乙Ｈ２゜１−１−３
α） Ｊ、７９（ｄｄｄ、　Ｊ４．乙、５．／、／へ９＋−１
２゜Ｈ−３β） ｔｌ、３ｇ（ｄｄ、Ｊ−５，／、／３．６Ｈｚ、Ｈ−；
ｌ）５．４／（ｄｄ、Ｊ４．乙、　１０．ｇＨｚ、ト１
−弘）７．０９（ｄｄ、Ｊ−２，０，７，’７Ｈ２ＸＨ
−乙）り、３３（ｔＸ　Ｊ−７，７ＨｚＸＨ−７）７、
＃？（ｄｄ、Ｊ−’２．０、’７．７Ｈ２，Ｈ−ど）（
５）毒　性：マウスに対し、５　Ｑ　ｔｎｙ　／　Ｋｇ
を連続投与しても何ら母性を認めない。

次に本発明のナフタレノン化合物ＰＤを有効成分とする
制癌剤について述べる。

本発明の制癌剤は、経口及び非経口投与のいずれも使用
可能であり、経口投与する場合は、軟・硬カプセル剤又
は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤として投与され、非経口
投与する場合は、注射剤、点滴剤及び固体状又はＷ！Ａ
濁粘稠液状として持続的な粘膜吸収が維持できるように
生薬のような剤型で投与され得る。

また、本発明の有効成分全製剤化するに邑っては、両式
で表わされる化合物は常法に従い、皮下或いは静脈注射
用製剤とすることができる他、カプセル剤、錠剤、細粒
剤等の剤型に製剤化して経口用に供することができる。

本発明の有効成分の製剤化は、界面活性剤、賦形剤、滑
沢剤、佐剤、及び有効成分の性質を考慮して腸溶性製剤
とするため罠医薬的に許容し得る皮膜形成物質、コーテ
ィング助剤等を用いて適宜行うことができ、その具体例
を埜けれは、次のとおりである。

本発明の組成物の崩壊、溶出を良好ならしめるために、
界面活性剤、例えばアルコール、エステル類、ポリエチ
レングリコール誘導体、ソルビタ７Ｑ）ＭＹＩ肪酸エス
テル類、硫酸化脂肪アルコール類等の７種又は２種以上
を添加することができる。

また、賦形剤としては、例えば蔗糖、乳糖、デンプン、
結晶セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン
酸マグネシウム、メタ珪２アルミン酸マグネシウム、合
成珪酸アルミニウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリ
ウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシメチルセルロ
ースカルシウム等の７種又は２種以上を組合せて添加す
ることができる。

滑゛沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、
タルク、硬化油等を７種又は２種以上添加することがで
き、また矯味剤及び矯臭剤として、食塩、サッカリン、
糖、マンニット、オレンジ油、カンゾウエキス、クエン
酸、ブドウ糖、メントール、ユーカリ油、リンゴ酸等の
甘味剤、香料、着色料、保存料等を含有させてもよい。

懸濁剤、湿潤剤の如き佐剤としては、例えばココナツト
油、オリーブ油、ゴマ油、落下牛油、乳酸カルシウム、
ベニバナ油、大豆リン脂質等を含有させることができる
。

また、沫膜形成物質としては、セルロース、糖類等の炭
水化物誘導体として酢酸フタル酸セルロース（ＣＡＰ）
、またアクリル酸系共重合体、二塩基酸モノエステル類
等のポリビニル誘導体としてアクリル酸メブール・メタ
アクリル酸共重合体、７メタアクリル酸メチル・メタア
クリル酸共重合体が挙けられる。

また、上記皮膜形成物質をコーティングするに際し、通
常使用されるコーティング助剤、例えば可塑剤の他、コ
ーティング操作時の薬剤相互の付着防止のための各種証
加剤を添加することによって皮膜形成剤の性質を改良し
たり、コーティング操作をより容易ならしめることがで
きる。なお、有効成分を皮膜形成物質を用いてマイク日
カプセル化してから賦形剤等と混合した剤型としても良
い。

ｑｉＶＣ代表的な剤型における配合比は下記の通りであ
る。

特に好ましい範囲 有効成分　θ、／〜９０　Ｍ−ｍ％　０．３〜／！；　
１ｉｉｉ：％賦形剤　／θ−’？９．ｇ　ｚ　ｇ左〜デ
ヮ、ｑｌ滑沢剤　θ〜Ｓθ　０−２゜Ｉ 界面活性剤　θ〜３０　０−コ。　ｌ 皮膜形成物質　θ、／寸ｏ　〃　θ、３−２０　Ｉ特に
好ましい賦形剤は、乳糖、結晶セルロース、カル日？キ
シメチルセルロースカルシウムである。

また、投寿量は、対象腫瘍を有効に治療するに十分乏景
であり１腫瘍の症状、投与経路、剤型などによって左右
されるが、一般に、経口投与の場合、大人では７日当り
、約θ、０／〜１００グ／縁体重（小人では、θ、θ／
〜６ｏπｙ　／　１（ｙ体重）の範囲で、その上限は好
ましくは約ｓθη／縁体重、更に好ましくは約１０キ／
〜体１程度であり、非経口投与の場合、その上限は約１
０ｒｒｒｙ／Ｌｇ体１程度であり、好ましくはＳキ／Ｋ
ｙ体重、史に好ましくは２キ／に９体重が適当である。

次に、上記化合物の制癌活性を確認した制癌性試験法に
ついて述べる。

ラッ１の腹水から吉田肉ｊｍ細胞（Ｙｏｓｈｌｄａｓａ
ｒｃｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　）　ｆ取ジ出し、２０％の牛
胎児血清を含むＤＭ−／６θ培地（蛋白質、脂質を含ま
ず、アミノ酸組成として必須アミノ酸の他に可欠アミノ
酸を含む組織培費用純合成培地）で／　ｔｔｔｌ中に１
０〜／　５　Ｘ　／　０’　個の細胞数になるように希
釈する。この細胞浮遊液２０ｍ１をＴＯ４゜フラスコに
移して３７Ｃで３〜グ日間培養すると、細胞は増殖して
／屑ｌ中／１０〜／３０Ｘ１０　個になる。

この増殖した細胞浮遊液を再びｓｉＪ記ＤＭ−／乙θ培
地で希釈して／ｄ中７Ｓ〜コθ×１０４　個の細胞数に
なるようにする。この希釈細胞浮遊液のコθ肩ｅ全ＴＤ
４ｏフラスコに移し、３７℃で３〜ｑ日間培養して細胞
を増殖させる。このようにＴＤ４゜フラスコ内で前記Ｄ
　Ｍ　−／乙θ培地を用いて増殖、希釈、増殖順序を繰
り返すことによって吉川肉腫細胞の組織培養を継代維持
する。

組織培養に移されて、ＴＯ４ｏフラスコ内で増殖した吉
田肉腫却１胞を前記Ｄ　Ｍ　−／乙０培地中に懸濁して
／　ｍｅ中に２θ〜２２　Ｘ　／　０’　個の細胞数に
なるように調整する。この細胞浮遊液のコ１を各々のバ
イアルに分注し、被験化合物を最終減度が所定の値にな
るように１０μｔのメタノールに溶解して各々のバイア
ルに加えて３７℃で１日間培養する。培養後、バイアル
中の細胞浮ｉｔ液の一部を取り、崩球ｉｔ　ｊＥ　ｍを
用いて顕微鋭下に細胞数を数える。

以下に、本発明を製造例、製剤例及び試験例によって具
体的に説８Ａする。

製造例 培激、には、下記の組成のツアペック−イースト・エキ
ストラクト（Ｃｚａｐｅｋ　−Ｙｅａｓｔ　ｅｘｔｒａ
ｃｔ　）培地を使用した。

ショ糖　５ｏｙ ＫＣｔＯ，５ｔ Ｍ々ＳＯ４θ、左？ に２ＨＰＯ４／　ｆ ＮａＮ０５．２１ イースト・エキストラクト　３ｆ 滅劇水　１０１ ＣｐＨ７，コ） 上記培地を扁平培養フラスコ３０個に分注しくフラスコ
／個当り３３θＷＬｌ）、アルミ箔をして、オートクレ
ーブで７２０℃１．／、を分間滅菌する。

滅菌俵、前記Ｐ−／菌〔微工研菌寄第６９３６号（ＦＥ
ＲＭ−ＰＡ’１３６　））を接種して一〇〜２ＳＣで３
過間静置培誉を行った。フラスコから吸引濾過しで集め
た培養Ｆ液１０１に活性炭１０θ２を加え、次いで脱気
し、生産物を活性炭に吸着させた。このＩ占性炭を吸引
済過して取出し、約／ｌのに留水で洗浄した。

次に、この活性炭ケ約２ｔのアセトンに浸漬し、吸漬物
を脱着させた。さらに、この操作を再度行って残りの吸
着物を完全に脱着させた。アセトン溶出液を合わせて減
圧濃縮して得られた水溶液を、約／ｌの酢酸エチルで２
回抽出した。得られた抽出液を四重の飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸ナトリウムを加えて乾燥した。乾燥後減圧
蒸留し、酢酸エチル抽出物／　、ｊＦを得た。該抽出物
を少量のアセトンに俗かし、それを少量のシリカゲルに
吸着させた恢、アセトン金蒸発させて乾燥し、これをシ
リカゲルカラム（シリカグルコ００？）上にのせた。

カラムの溶出溶媒には、ベンゼン：アセトン（４ｊ＝／
）を用いた。このカラムクロマトグラフィーによｔ）Ｐ
Ｄ−３を含む部分を分離し、ＴＬＣ上Ｒｆ／、４−コａ
ｊ（ヘキサン：酢酸エチル＝／：ｌ）の分画を集めて濃
縮し、高速液体クロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エ
チル＝／：／、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ　３０−！；、　ｇ
　ｆ！ｊ×３００ｔｎ）に付し、保持時間７９．２分（
ＰＩ）−１Ｊ）と２弘、部分（ＰＤ−２）のピークを集
めて濃縮、前記溶媒で再結晶して、それぞれ無色針状晶
を得た。ｆｉｔは、それぞれ培地当り１５−．２０ｑで
あった。

製剤例／（注射・点滴剤） 化合物Ｐ［）−ユ（ｌＯ■）を含有するように粉末ぶど
う糖５２を加えてバイアルに無菌的に分配し、密封した
上、窒素、ヘリウム等の不活性ガスを封入して冷暗所に
保存する。使用前に、θ、ざ左チ生理的食塩水ｌθ０−
を添加して静脈内注射剤とし、１日、ｌＯ〜／　００　
ｍ７７を症状に応じて静脈内注射又は点滴で投与する。

製剤例２（注射・点滴剤） 化合物ＰＤ−ＩＩＣ２ｍｆ）を用いて、製剤例／と同様
の方法により軽症用静脈内注射剤とし、７日、７０〜１
００ｍ１を症状に応じて静脈注射又は点滴で投与する。

製剤例３（腸溶性カプセル剤） 化合物ｐｏ−ａ（ｓｒ）、乳糖λ、９を乙ｌ及びヒドロ
キシプロビルセルコース０．０ダ２を谷々とり、よく混
合した後、”ｒｊＣ法に従って粒状に成形し、これをよ
く乾燥して篩別してビン、ヒートシール包装などに適し
た顆粒剤を製造する。次に、酢酸フタル酸セルロース０
　、３　？及びヒドロキシグロビルメチルセルロースフ
タレート０．、ｔｆ２溶解し７てａ、包２！／！８杓と
なし、Ｉ］ｉＩｈ己顆粒を浮遊流動させつ＼この基材を
被怪して腸溶性の顆粒剤とする。

この組成物をカプセルに充填して腸溶性カッ′セル喪剤
／θθ個を製造する。

試験例 上記化合物ＰＯ−ユおよびＰ［）−弘を用い、前記試験
法により吉川肉腫細胞（Ｙｏｓｈｌｄａ　ｓａｒｃｏｍ
ａｃｅｌｌｓ）Ｉｃ対する生育阻害活性を調べた。いず
れの化合物も２０〜５０μｍ７４１で生育阻害活性を示
した。この結果から、上記被験化合物は、癌細胞の増殖
抑制にすぐれた効果を発揮することが明らかである。

特許出願人　理化学研究Ｂ［

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１一般式 （ただし、Ｒ，＝Ｈの時、Ｒ２＝ＯＨ％　Ｒ，＝ＯＨの
   時、Ｒ２はＨを示す。） で示されるナフタレノン化合物ＰＤ。 （２Ｊ　Ｒ，＝ＨＸＲ２＝ＯＨである特許請求の範囲第
   （１）項記載の化合物。 （３１Ｒ，＝ＯＨＳＲ２＝ｌ−１である特許請求の範囲
   第＋１１項記載の化合物。 （４）Ａ！＝シリウム（Ｐｅｎｌｃｌｌｌｌｕｍ　）　
   ＦＡに属するナフタレノン化合物ＰＤ生産菌を培養して
   、培養物より前記ナフタレン化合物ｆ”Ｄを分離・採取
   することｌＦｒ徴とするナフタレノン化合物ｆ’Ｄの製
   造法。 （５）ヘニシリクム属に属するナフタレノン化合物ＰＤ
   生産菌が、ペニシリウム・デイパーズム・パリエタス・
   オーレウム（Ｐｅｎｉｃｌｌｌｉｕｎｄｌｖｅｒｓｕｍ
   ｖａｒ、　ａｕｒｅｍ）　Ｐ　−／　（微工研菌寄第６
   ９３乙号）である特許請求の範囲第（４）項記載の製造
   法。