JPS6062997A - インタ−フエロンの生産方法 - Google Patents
インタ−フエロンの生産方法Info
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- JPS6062997A JPS6062997A JP58171733A JP17173383A JPS6062997A JP S6062997 A JPS6062997 A JP S6062997A JP 58171733 A JP58171733 A JP 58171733A JP 17173383 A JP17173383 A JP 17173383A JP S6062997 A JPS6062997 A JP S6062997A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はインターフェロンを産生ずる哺乳動物細胞をア
スコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および／又はバナ
ジン化合物を含有する細胞培養液中で培養することから
なるインターフ１０ンの大量生産方法に関するものであ
る。
スコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および／又はバナ
ジン化合物を含有する細胞培養液中で培養することから
なるインターフ１０ンの大量生産方法に関するものであ
る。
長野ら（Ｃｏｍｎｔ、 Ｒｅｎｄ、 Ｓｏｃ、 Ｂｉｏ
ｌ １４８巻、１７００頁、１９５４年）およびｌ５ａ
ｃｃｓら（Ｐｒｏｃ。
ｌ １４８巻、１７００頁、１９５４年）およびｌ５ａ
ｃｃｓら（Ｐｒｏｃ。
Ｒｏｙ、 Ｓｏｃ、 Ｓｅｒ、Ｂ、 １４７巻、２５８
貞、１９５７年）によって発見されたインターフェロン
は、抗ウイルス作用以外に、抗＠瘍効果を有することが
報告され（Ｇｒｅ３ｓｏｒ、ＩらＢ、 Ｂ、 Ａ、、
５１６巻、２３１頁、１９７８年）、医薬としての可能
性が注目されるようになった。
貞、１９５７年）によって発見されたインターフェロン
は、抗ウイルス作用以外に、抗＠瘍効果を有することが
報告され（Ｇｒｅ３ｓｏｒ、ＩらＢ、 Ｂ、 Ａ、、
５１６巻、２３１頁、１９７８年）、医薬としての可能
性が注目されるようになった。
インターフェロンは現在、大きく３種に分類されており
、それぞれインターフェロン−〇（ＩＦＮ−α）、イン
ターフェロン−β（ＩＦＮ−β）、インターフェロン−
ｒ（ＩＦＮ−γ）と命名されている（ Ｎａｔｕｒｅ
２８６巻、１１０貞、１９８０年）。
、それぞれインターフェロン−〇（ＩＦＮ−α）、イン
ターフェロン−β（ＩＦＮ−β）、インターフェロン−
ｒ（ＩＦＮ−γ）と命名されている（ Ｎａｔｕｒｅ
２８６巻、１１０貞、１９８０年）。
ＩＦＮ−ａは主に白血球をウィルスによって刺激するこ
とにより、ＩＦＮ−βは主に線維芽細胞を二重鎖ＲＮＡ
やウィルスによって刺激することにより、まだＩＦＮ−
γは主にリンパ球をマイトゲンで刺激することにより生
産されている。
とにより、ＩＦＮ−βは主に線維芽細胞を二重鎖ＲＮＡ
やウィルスによって刺激することにより、まだＩＦＮ−
γは主にリンパ球をマイトゲンで刺激することにより生
産されている。
インターフェロンの大量生産法の確立は、インターフェ
ロンの医薬としての価値を評価する上に必須であり、こ
れまでにもＩＦＮ−βを多量に生産させる超誘発法（Ａ
ｎｔ １ｍ１ｃｒｏｂ、 Ａｇ、 Ｃｈｅ −ｍｏｔｈ
ｅｒ、、 ２巻４７６ｊ’４１９７２年）などの生産方
法が報告されている。また、ＩＦＮ−ＱおよびＩＦＮ−
βの大量生産には生産細胞を予め少量のインターフェロ
ンで処理しておくと、より多量のインターフェロンが生
産されるいわゆるプライミング現象も実用に供されてい
る。
ロンの医薬としての価値を評価する上に必須であり、こ
れまでにもＩＦＮ−βを多量に生産させる超誘発法（Ａ
ｎｔ １ｍ１ｃｒｏｂ、 Ａｇ、 Ｃｈｅ −ｍｏｔｈ
ｅｒ、、 ２巻４７６ｊ’４１９７２年）などの生産方
法が報告されている。また、ＩＦＮ−ＱおよびＩＦＮ−
βの大量生産には生産細胞を予め少量のインターフェロ
ンで処理しておくと、より多量のインターフェロンが生
産されるいわゆるプライミング現象も実用に供されてい
る。
しかしながら、インターフェロンの大量生産方法はこれ
らの方法によっても未だ十分ではなく、更に優れた大量
生産方法の開発が望まれている。一 本発明者らはインターフェロンの大量生産方法について
研究を重ねた結果、インターフェロンを産生ずる哺乳動
物細胞をアスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および
／又はバナジン化合物を含有する細胞培養液中で培養す
ることによシインターフェロンを大量生産することが可
能であることを見出し、本発明を完成した。
らの方法によっても未だ十分ではなく、更に優れた大量
生産方法の開発が望まれている。一 本発明者らはインターフェロンの大量生産方法について
研究を重ねた結果、インターフェロンを産生ずる哺乳動
物細胞をアスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および
／又はバナジン化合物を含有する細胞培養液中で培養す
ることによシインターフェロンを大量生産することが可
能であることを見出し、本発明を完成した。
本発明しまインターフェロンを産生ずる哺乳動物細胞を
アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および／又はバ
ナジン化合物を含有する細胞培養液中で培養することを
特徴とするインターフェロンの生産方法である。
アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および／又はバ
ナジン化合物を含有する細胞培養液中で培養することを
特徴とするインターフェロンの生産方法である。
本発明は一般的には次のように実施する。すなわち、常
法に従って、インターフェロンを産生ずる細胞を増殖培
地、プライミング培地、誘導時の培地、又は生産培地中
で培養する際に通常の培地の代わりにアスコルビン酸、
アスコルビン酸誘導体および／又はバナジン化合物を含
有する培地を使用する。
法に従って、インターフェロンを産生ずる細胞を増殖培
地、プライミング培地、誘導時の培地、又は生産培地中
で培養する際に通常の培地の代わりにアスコルビン酸、
アスコルビン酸誘導体および／又はバナジン化合物を含
有する培地を使用する。
本発明で使用するアスコルビン酸はＬ〜アスコルビン酸
であることが好ましい。アスコルビン酸誘導体としては
Ｌ−アスコルビン酸の１ ＋ｉ［［ｉの金属塩および２
価の金属塩を使用することが可能であるが、１１ＩＩｊ
の金属塩を使用することが好ましく、１１ｉ１１ｉの金
属塩の中ではす） ＩＪウム塩が特に好ましい。細胞培
養液中の含有量は１〜ｓ ｏ ｏ’ｙ７ｔ、特に、１０
〜１００”５１／ｌが好ましい。
であることが好ましい。アスコルビン酸誘導体としては
Ｌ−アスコルビン酸の１ ＋ｉ［［ｉの金属塩および２
価の金属塩を使用することが可能であるが、１１ＩＩｊ
の金属塩を使用することが好ましく、１１ｉ１１ｉの金
属塩の中ではす） ＩＪウム塩が特に好ましい。細胞培
養液中の含有量は１〜ｓ ｏ ｏ’ｙ７ｔ、特に、１０
〜１００”５１／ｌが好ましい。
バナジン化合物としては硫酸バナジル、オルトバナジン
酸の１価の金属塩、メタノ（ナジン酸の１価の金属塩、
メタバナジン酸アンモニウムおよびデカバナジン酸の１
価の金属塩が好捷しく、特にオルトバナジン酸の１価の
金属塩が好ましい。１価の金属塩としてはす） ＩＪウ
ム塩が特に好ましい。細胞培養液中の・（ナジン化合物
の含量は０．０１〜ｉ ｏ ｏ ’ｇ７ｔが好ましく、
０．１〜１０１ｔが特に好ましい。
酸の１価の金属塩、メタノ（ナジン酸の１価の金属塩、
メタバナジン酸アンモニウムおよびデカバナジン酸の１
価の金属塩が好捷しく、特にオルトバナジン酸の１価の
金属塩が好ましい。１価の金属塩としてはす） ＩＪウ
ム塩が特に好ましい。細胞培養液中の・（ナジン化合物
の含量は０．０１〜ｉ ｏ ｏ ’ｇ７ｔが好ましく、
０．１〜１０１ｔが特に好ましい。
アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体およびバナジン
化合物はそれぞれ単独で培養液に含有させてもよいが、
両者を併用すれは、その効果はより大きくなる。
化合物はそれぞれ単独で培養液に含有させてもよいが、
両者を併用すれは、その効果はより大きくなる。
アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および／又はバ
ナジン化合物を含有させる培養液は増殖培地、プライミ
ング培地、誘起時の培地又は生産培地のいずれでもよく
、まだ、これらの培地の２種以上に含有させても良い。
ナジン化合物を含有させる培養液は増殖培地、プライミ
ング培地、誘起時の培地又は生産培地のいずれでもよく
、まだ、これらの培地の２種以上に含有させても良い。
アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体および／又はバ
ナジン化合物を含有させる培養液としてはイーグルＭＥ
Ｍ培地、ＲＰＭ１１６４０培地が一般的に使用されるが
、他の培地、例えば１９９培地、ハムＦ１２培地、Ｉ１
５培地、タルベノコー変法培地などを使用することもＴ
ＴＪ能である。
ナジン化合物を含有させる培養液としてはイーグルＭＥ
Ｍ培地、ＲＰＭ１１６４０培地が一般的に使用されるが
、他の培地、例えば１９９培地、ハムＦ１２培地、Ｉ１
５培地、タルベノコー変法培地などを使用することもＴ
ＴＪ能である。
アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体およびバナジン
化合物は市販品として入手ｐＪ能であり、例えば和光純
薬工業株式会社のし一アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビ
ン酸ナトリウム、オルトバナジン酸−、ナトリウムおよ
びメタバナジン酸ナトリウムを使用することができる。
化合物は市販品として入手ｐＪ能であり、例えば和光純
薬工業株式会社のし一アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビ
ン酸ナトリウム、オルトバナジン酸−、ナトリウムおよ
びメタバナジン酸ナトリウムを使用することができる。
インターフェロン産生細胞としでは、ＭＲＣ−５細胞、
Ｗｌ−５Ｂ細胞、ＦＩＯＷ１０００細胞、Ｆｌｏｗ４０
００細胞等のヒト二倍体細胞やヒト末梢白血球を使用す
ることができる。史に、Ｎａｍａ１ｗａ細胞、ＭＧ−６
５細胞、ＣＣＲＦ−５Ｂ細胞、ＣＣＲＦ −ＣＥＭ細胞
等のヒト由来の異数体細胞や、他の動物由来の細胞、例
えばＲＫ−１３（ウサギ由来）、ＭＤＣＫ細胞（イヌ由
来）、Ｌ９２９細胞（マウス由来）および種々の動物初
代培養細胞等も使用することが可能である。
Ｗｌ−５Ｂ細胞、ＦＩＯＷ１０００細胞、Ｆｌｏｗ４０
００細胞等のヒト二倍体細胞やヒト末梢白血球を使用す
ることができる。史に、Ｎａｍａ１ｗａ細胞、ＭＧ−６
５細胞、ＣＣＲＦ−５Ｂ細胞、ＣＣＲＦ −ＣＥＭ細胞
等のヒト由来の異数体細胞や、他の動物由来の細胞、例
えばＲＫ−１３（ウサギ由来）、ＭＤＣＫ細胞（イヌ由
来）、Ｌ９２９細胞（マウス由来）および種々の動物初
代培養細胞等も使用することが可能である。
これらの細胞は例えばアメリカン タイプカルチャー
コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＣｕｌｔｕ
ｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ）あるいは大日本奏薬株
式会社より入手することができる。
コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＣｕｌｔｕ
ｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ）あるいは大日本奏薬株
式会社より入手することができる。
インターフェロン産生細胞を培養した後、インターフェ
ロンを誘導させるための誘起剤としては通常の誘起剤例
えば、ボ１月ｌ）・ポリ（Ｃ）、センダイウィルス、ニ
ューカッスル病ウィルス、コン−カナバリンＡの他、グ
ラミジア、リケッチア、マイトゲン、リボ多糖等の誘起
剤を使用することができる。
ロンを誘導させるための誘起剤としては通常の誘起剤例
えば、ボ１月ｌ）・ポリ（Ｃ）、センダイウィルス、ニ
ューカッスル病ウィルス、コン−カナバリンＡの他、グ
ラミジア、リケッチア、マイトゲン、リボ多糖等の誘起
剤を使用することができる。
次に実験例及び実施例により本発明を具体的に説明する
が、本発明はこわらの例に限定されるものではない。
が、本発明はこわらの例に限定されるものではない。
実験例１
ヒト二倍体細胞であるＭＲＣ−５細胞を１０％仔牛血清
含有イーグルＭＥＭ培地（増殖培地）１０、ｍｌととも
に６ｃｒｎ径のプラスチックシャーレ［！＋Ｘ１０’個
／ｄで植え込み、５７℃、５％Ｃ０２下で培養した。細
胞がコンフルエントに達した後に培地を１００単位／―
のインターフェロン−βを含有する０、１％（Ｗ／Ｖ
）ヒト血清アルブミン含有イーグルＭＥＭ培地（プライ
ミング培地）５罰と交換し、−晩培養した。
含有イーグルＭＥＭ培地（増殖培地）１０、ｍｌととも
に６ｃｒｎ径のプラスチックシャーレ［！＋Ｘ１０’個
／ｄで植え込み、５７℃、５％Ｃ０２下で培養した。細
胞がコンフルエントに達した後に培地を１００単位／―
のインターフェロン−βを含有する０、１％（Ｗ／Ｖ
）ヒト血清アルブミン含有イーグルＭＥＭ培地（プライ
ミング培地）５罰と交換し、−晩培養した。
次いで、ボ１月■）・ボＩＪ （Ｃ１およびサイクロ−
＼キシミドを終濃度それぞれ３０ Ｎｆ／ｌおよび２τ
／ｌとなるように添加して５時間培養し、史にアクチノ
マイシンＤを終濃度１″９／ｌになるように添加して２
時間培養した。次にこの細胞をＰＢＳ−で２度洗浄後、
０．１ ％ （ｗ／ｖ ）ヒト血清アルブミン含有イー
グルＭＥＭ培地（生産培地）５ＷＬ／に変換した。−晩
培養後、培地中のインターフェロンカ価を測定した。イ
ンターフェロンの力価はＦＬ細胞およびシンドピスウィ
ルスを用いたＣＰＥ法で測定し、インターフェロンの国
際標準品（に０２５−９０２−５２７ ）を基準として
表示した。
＼キシミドを終濃度それぞれ３０ Ｎｆ／ｌおよび２τ
／ｌとなるように添加して５時間培養し、史にアクチノ
マイシンＤを終濃度１″９／ｌになるように添加して２
時間培養した。次にこの細胞をＰＢＳ−で２度洗浄後、
０．１ ％ （ｗ／ｖ ）ヒト血清アルブミン含有イー
グルＭＥＭ培地（生産培地）５ＷＬ／に変換した。−晩
培養後、培地中のインターフェロンカ価を測定した。イ
ンターフェロンの力価はＦＬ細胞およびシンドピスウィ
ルスを用いたＣＰＥ法で測定し、インターフェロンの国
際標準品（に０２５−９０２−５２７ ）を基準として
表示した。
増殖培地、プライミング培地、線溝時の培地および／ま
たは生産培地へＬ−アスコルビン酸ナトリウムを２０
’（／／ｌおよび／またはオルトバナジン酸ナトリウム
を１７／を含有させた場合のインターフェロン生産量に
およぼす影響を調べた結果を第１表に示した。
たは生産培地へＬ−アスコルビン酸ナトリウムを２０
’（／／ｌおよび／またはオルトバナジン酸ナトリウム
を１７／を含有させた場合のインターフェロン生産量に
およぼす影響を調べた結果を第１表に示した。
実施例２
５ｘ１０４個／ｘｉのＮａｍａ１ｗａ細胞を５チ仔牛血
清含有ＲＰＭ１１６４０培地（増殖培地）２００罰とと
もにスピナーフラスコに植込んだ。３日間の増殖の後１
００単位／ｄのインターフェロン−ａおよび（１１％（
Ｗ／Ｖ ）ヒト血清アルブミンを含有する２００ＷＩＩ
！のＲＰＭＩ １６４０培地（プライミング培地）を用
いて一晩プライミングし、その後七ンダイウイルスを１
００ ＨＡＵ／―の終濃度で添加した。−晩培養後セン
ダイウイルスをｐＨ２，０で不活化し、液中のインター
フェロン−Ｑ力価を測定した。
清含有ＲＰＭ１１６４０培地（増殖培地）２００罰とと
もにスピナーフラスコに植込んだ。３日間の増殖の後１
００単位／ｄのインターフェロン−ａおよび（１１％（
Ｗ／Ｖ ）ヒト血清アルブミンを含有する２００ＷＩＩ
！のＲＰＭＩ １６４０培地（プライミング培地）を用
いて一晩プライミングし、その後七ンダイウイルスを１
００ ＨＡＵ／―の終濃度で添加した。−晩培養後セン
ダイウイルスをｐＨ２，０で不活化し、液中のインター
フェロン−Ｑ力価を測定した。
・力価はＣＰＥ法で測定し、インターフェロンの国際標
準品（Ｇ０２！ｌ−９０１−５２７）を基準として表示
した。
準品（Ｇ０２！ｌ−９０１−５２７）を基準として表示
した。
増殖培地へ各種濃度で含有させたメタバナジン酸ナトリ
ウムのインターフェロン−０生産敵へおよほす影響を調
べた結果を第２表に、またプライミング培地へ各種ｆＩ
ｌｋ度で添加したし一アスコルビン酸のインターフェロ
ンーａ 生産量へおよぼす影響を調べた結果を第３表に
示した。
ウムのインターフェロン−０生産敵へおよほす影響を調
べた結果を第２表に、またプライミング培地へ各種ｆＩ
ｌｋ度で添加したし一アスコルビン酸のインターフェロ
ンーａ 生産量へおよぼす影響を調べた結果を第３表に
示した。
第２表
増殖培地へ添加したメタバナジン酸 インターフェロン
−ａＯ（対照） ２，４１０ ０．００１ ２，５２０ α０１ ３，３１０ 口１ ４，１８０ １ ４．７４０ １０ ４．２６０ １００ ４６４０ １０００ ２、ｎ。
−ａＯ（対照） ２，４１０ ０．００１ ２，５２０ α０１ ３，３１０ 口１ ４，１８０ １ ４．７４０ １０ ４．２６０ １００ ４６４０ １０００ ２、ｎ。
第 ３ 表
プライミング培地へ添加したし一ア インターフェロン
−００（対照） ス２３０ ［ｌｌ ２，３２０ １ へ１３０ １０ ４．８７０ ３０ ５．３１０ １００ ４．９９０ ５００ へ７２０ ２０００ １．９５０ 実験例６ ３Ｘ１０６個のし９２９細胞を１０％（ｖ／ｖ ）の牛
胎児血清含有１？９培・地（増殖培地）５０ｄとともに
１５ＯｃｔＩの培養面積を有するプラスチックフラスコ
に植込み、４日間増殖させコンフルエントにした。１０
０″”９／ｌのボ１月り・ボＩ月Ｃ）および０．０１
％ （ｗ／ｖ ）のヒト血清アルブミンを含有する１９
９培地５０−に交換し、５時間後にα０１％（Ｗ／Ｖ
）のヒト血清アルブミンを含有する１９９培地（生産培
地）２５単叡に交換した。１８時間培養後に生産培地の
インターフェロンカｆｉｌｌｉを測定した。
−００（対照） ス２３０ ［ｌｌ ２，３２０ １ へ１３０ １０ ４．８７０ ３０ ５．３１０ １００ ４．９９０ ５００ へ７２０ ２０００ １．９５０ 実験例６ ３Ｘ１０６個のし９２９細胞を１０％（ｖ／ｖ ）の牛
胎児血清含有１？９培・地（増殖培地）５０ｄとともに
１５ＯｃｔＩの培養面積を有するプラスチックフラスコ
に植込み、４日間増殖させコンフルエントにした。１０
０″”９／ｌのボ１月り・ボＩ月Ｃ）および０．０１
％ （ｗ／ｖ ）のヒト血清アルブミンを含有する１９
９培地５０−に交換し、５時間後にα０１％（Ｗ／Ｖ
）のヒト血清アルブミンを含有する１９９培地（生産培
地）２５単叡に交換した。１８時間培養後に生産培地の
インターフェロンカｆｉｌｌｉを測定した。
増殖培地へ添加した各種のバナジン化合物のインターフ
ェロン生産量へおよぼす影響を調べた結果を第４表に示
した。
ェロン生産量へおよぼす影響を調べた結果を第４表に示
した。
第 ４ 表
増殖培地に含有される インターフェロンバナジン化合
物不含（対照） ６３０ オルトバナジン酸ナトリウム ２″ｆ／ｌ−２５００硫
酸バナジル ２’ｆ／ｌ １１２０ デカバナジン酸ナトリウム ２ｍｇ、７１ １７３０メ
タバナジン酸アンモニウム ２ｒｎｙ／ｌ １５７０実
施例１ インターフェロン−αの生産Ｎａｍａ１ｗａ細
胞を３Ｘ１０Ｓ個／ｄの細胞濃度でＬ−アスコルビン酸
４０ ’９／ｌおよびメタバナジン酸ナトリウム３ ’
Ｆ／／ｌを含む５％（ｖ／ｖ ）仔牛血清添加ＲＰＭ１
１６４０培地に植え込んだ。この細胞をスピナーフラス
コ中で３７℃で、５日間培養後、遠心分離により細胞を
集めた。この細胞をα１％（ｗ／ｖ ）ヒト血清アルブ
ミン、４０’９／ｌ。
物不含（対照） ６３０ オルトバナジン酸ナトリウム ２″ｆ／ｌ−２５００硫
酸バナジル ２’ｆ／ｌ １１２０ デカバナジン酸ナトリウム ２ｍｇ、７１ １７３０メ
タバナジン酸アンモニウム ２ｒｎｙ／ｌ １５７０実
施例１ インターフェロン−αの生産Ｎａｍａ１ｗａ細
胞を３Ｘ１０Ｓ個／ｄの細胞濃度でＬ−アスコルビン酸
４０ ’９／ｌおよびメタバナジン酸ナトリウム３ ’
Ｆ／／ｌを含む５％（ｖ／ｖ ）仔牛血清添加ＲＰＭ１
１６４０培地に植え込んだ。この細胞をスピナーフラス
コ中で３７℃で、５日間培養後、遠心分離により細胞を
集めた。この細胞をα１％（ｗ／ｖ ）ヒト血清アルブ
ミン、４０’９／ｌ。
のＬ−アスコルビン酸、ｓＮｙ／ｌのメタバナジン酸ナ
トリウムおよび１００単位／―のインターフェロン−α
を含むＲＰＭＩ １６４０培地に懸濁し、−晩培養した
。センダイウィルスを終濃度１００ＨＡＵ／ｍｌに添加
してさらに一晩培養した。遠心分離により細胞を除いた
上清液をｐ）１２．０に調整し一晩４℃に静置すること
によりセンダイウィルスを不活化した。液中のインター
フ・エロンーａの力価は３，３４０単位／ゴであった。
トリウムおよび１００単位／―のインターフェロン−α
を含むＲＰＭＩ １６４０培地に懸濁し、−晩培養した
。センダイウィルスを終濃度１００ＨＡＵ／ｍｌに添加
してさらに一晩培養した。遠心分離により細胞を除いた
上清液をｐ）１２．０に調整し一晩４℃に静置すること
によりセンダイウィルスを不活化した。液中のインター
フ・エロンーａの力価は３，３４０単位／ゴであった。
Ｌ−アスコルビン酸およびメタバナジン酸ナトリウムを
含有しない培養液を使用した場合のインターフェロン−
〇の力価は１８２０単位／１であった。
含有しない培養液を使用した場合のインターフェロン−
〇の力価は１８２０単位／１であった。
実施例２ インターフェロン−βの生産二倍体細胞ＭＲ
Ｃ−５細胞を、１０％（Ｖ／Ｖ ）ノ仔牛血清、２０ｍ
ｆｊ／ｌのＬ−アスコルビン酸ナトリウムおよび１ ’
ｆ／／ｌのオルトバナジン酸ナトリウムを含むイーグル
ＭＥＭ培地Ｋ ４ Ｘ １０’／ ｍｅで植え込み、３
７℃で４日間培養した。培養液を０．１％（Ｗ／Ｖ ）
ヒト血清アルブミン、２０ｍＶ／ｌのＬ−アスコルビン
酸ナトリウム、１″１／ｌのオルトバナジン酸ナトリウ
ムおよび１００単位／ｍｅのインターフェロン−βを含
むイーグルＭＥＭ培地に代え、−晩培養した。ｓｏ’ｙ
７ｔのポリ（１トポ１月Ｃ）および２″Ｔ￥／ｌのサイ
クロへキシミドを添加して５時間培養後２’９／ｌのア
クチノマイシンＤを加え、さらに２時間培養した。
Ｃ−５細胞を、１０％（Ｖ／Ｖ ）ノ仔牛血清、２０ｍ
ｆｊ／ｌのＬ−アスコルビン酸ナトリウムおよび１ ’
ｆ／／ｌのオルトバナジン酸ナトリウムを含むイーグル
ＭＥＭ培地Ｋ ４ Ｘ １０’／ ｍｅで植え込み、３
７℃で４日間培養した。培養液を０．１％（Ｗ／Ｖ ）
ヒト血清アルブミン、２０ｍＶ／ｌのＬ−アスコルビン
酸ナトリウム、１″１／ｌのオルトバナジン酸ナトリウ
ムおよび１００単位／ｍｅのインターフェロン−βを含
むイーグルＭＥＭ培地に代え、−晩培養した。ｓｏ’ｙ
７ｔのポリ（１トポ１月Ｃ）および２″Ｔ￥／ｌのサイ
クロへキシミドを添加して５時間培養後２’９／ｌのア
クチノマイシンＤを加え、さらに２時間培養した。
ＰＢＳ−で２回洗浄後、０．１％（Ｗ／Ｖ ）のヒト血
清アルブミン添加イーグルＭＥＭ培地を加え一晩培養し
た。培養液中のインターフェロン−βの力１曲は、３５
，３００単位／ｄであった。Ｌ−アスコルビン酸ナトリ
ウムおよびオルトバナジン酸ナトリウムを含有しない培
養液を使用した場合のインターフェロン−βの力価は１
０，２００単叡ｍｌであった。
清アルブミン添加イーグルＭＥＭ培地を加え一晩培養し
た。培養液中のインターフェロン−βの力１曲は、３５
，３００単位／ｄであった。Ｌ−アスコルビン酸ナトリ
ウムおよびオルトバナジン酸ナトリウムを含有しない培
養液を使用した場合のインターフェロン−βの力価は１
０，２００単叡ｍｌであった。
実施例６ インターフェロン−γの生産健康成人より得
た末梢血からフィコール−ヒバツク（ＦｉｃｏｌｉＩ（
ｙｐａｑｕｅ ） グラジｘ ／ト法によりリンパ球を
含有する分画を採取し、それらの細胞をプラスチックシ
ャーレ中で培養後、非付着細胞を分取した。分取した細
胞を、２０ ’７／ｌのＬ−アスコルビン酸ナトリウム
および２ ’ｆｌ／ｌのメタバナジン酸ナトリウムを含
有する［ｌＬ１％（ｗ／ｖ ） ヒト血清アルブミン添
加ＲＰＭ１１６４０培地中に２ｘ１０’個／１ に浮遊
した。この浮遊液にコンカナバリンＡを５μり／ｄの６
度で添加し４８時間培養した。培養終了後、細胞を遠心
分離により除去し、培養液中のインターフェロン−γの
力価を、インターフェロン−αの国際標準品（Ｇ０２３
−９０１−５２７ ）を基準としてＣＰＥ法で測定した
。その結果、培養液中のインターフェロン〜γの力価は
２，９３０単位／ｍｅであった。
た末梢血からフィコール−ヒバツク（ＦｉｃｏｌｉＩ（
ｙｐａｑｕｅ ） グラジｘ ／ト法によりリンパ球を
含有する分画を採取し、それらの細胞をプラスチックシ
ャーレ中で培養後、非付着細胞を分取した。分取した細
胞を、２０ ’７／ｌのＬ−アスコルビン酸ナトリウム
および２ ’ｆｌ／ｌのメタバナジン酸ナトリウムを含
有する［ｌＬ１％（ｗ／ｖ ） ヒト血清アルブミン添
加ＲＰＭ１１６４０培地中に２ｘ１０’個／１ に浮遊
した。この浮遊液にコンカナバリンＡを５μり／ｄの６
度で添加し４８時間培養した。培養終了後、細胞を遠心
分離により除去し、培養液中のインターフェロン−γの
力価を、インターフェロン−αの国際標準品（Ｇ０２３
−９０１−５２７ ）を基準としてＣＰＥ法で測定した
。その結果、培養液中のインターフェロン〜γの力価は
２，９３０単位／ｍｅであった。
また、Ｌ〜アスコルビン酸ナトリウムおよびメタバナジ
ン酸ナトリウムを含有しない培養液を使用した場合のイ
ンターフェロン−γθ力ｆｉｌｌｉは６８０単位／ゴで
あった。
ン酸ナトリウムを含有しない培養液を使用した場合のイ
ンターフェロン−γθ力ｆｉｌｌｉは６８０単位／ゴで
あった。
特許出願人
持田製薬株式会社
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （υ インターフェロンを生産する哺乳動物細胞をアス
コルビン酸、アスコルビン酸誘導体および／又はバナジ
ン化合物を含有する細胞培養液中で培養することを特徴
とするインターフェロンの生産方法。 （２） アスコルビン酸が、Ｌ−アスコルビン酸である
特許請求の範囲第１項記載の生産方法。 ＋３１ アスコルビン酸誘導体がＬ−アスコルビン酸の
１１［ＩＩｉの金属塩である特許請求の範囲第１項記載
の生産方法。 （４） アスコルビン酸又はアスコルビン酸誘導体の含
量が１〜５００″ｙ／ｌである特許請求の範囲第１項な
いし第３項のいずれか一項記載の生産方法。 （５）バナジン化合物が硫酸バナジルである特許請求の
範囲第１項記載の生産方法。 （６） バナジン化合物がオルトバナジン酸の１価の金
属塩である特許請求の範囲第１項記載の生産方法。 （７）バナジン化合物がオルトバナジン酸のナトリウム
塩である特許請求の範囲第１項記載の生産方法。 （８１バナジン化合物がメタバナジン酸の１両の金属塩
である特許請求の範囲第１項記載の生産方法。 （９）バナジン化合物がメタバナジン酸アンモニウムで
ある特許請求の範囲第１項記載の生産方法。 （ＩＧ バナジン化合物がデカバナジン酸の１価の金属
塩である特許請求の範囲第１項記載の生産方法。 ａυ バナジン化合物の含量が０．０１〜１０口“ｆ／
／ｌである特許請求の範囲第１項、第５項ないし第１１
項のいずれか一項記載の生産方法。 鰻 細胞培養液が増殖培地、プライミング培地、誘起の
培地および生産培地からなる群から選けノｔだ少なくと
も１種である特許請求の範囲第１項記載の生産方法。 θＪ インターフェロンを生産するａ ７７ｆ！が、ヒ
ト由来の細胞である特許請求の範囲第１項記載の生産方
法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58171733A JPS6062997A (ja) | 1983-09-17 | 1983-09-17 | インタ−フエロンの生産方法 |
| US06/645,761 US4680261A (en) | 1983-09-17 | 1984-08-30 | Process for producing interferon |
| IL72929A IL72929A (en) | 1983-09-17 | 1984-09-13 | Process for producing interferons in large quantities |
| GB08423247A GB2146645B (en) | 1983-09-17 | 1984-09-14 | Interferon production |
| DE19843434122 DE3434122A1 (de) | 1983-09-17 | 1984-09-17 | Verfahren zur herstellung von interferon |
| IT48861/84A IT1179247B (it) | 1983-09-17 | 1984-09-17 | Procedimento per produrre interferone |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58171733A JPS6062997A (ja) | 1983-09-17 | 1983-09-17 | インタ−フエロンの生産方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6062997A true JPS6062997A (ja) | 1985-04-11 |
| JPH0358717B2 JPH0358717B2 (ja) | 1991-09-06 |
Family
ID=15928670
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58171733A Granted JPS6062997A (ja) | 1983-09-17 | 1983-09-17 | インタ−フエロンの生産方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4680261A (ja) |
| JP (1) | JPS6062997A (ja) |
| DE (1) | DE3434122A1 (ja) |
| GB (1) | GB2146645B (ja) |
| IL (1) | IL72929A (ja) |
| IT (1) | IT1179247B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992018537A1 (en) * | 1991-04-18 | 1992-10-29 | Toray Industries, Inc. | Interleukin 6 composition and production thereof |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1988000236A1 (en) * | 1986-07-03 | 1988-01-14 | Tompkins Wayne A F | Methods and materials for vanadium immunomodulation |
| US5346988A (en) * | 1990-06-20 | 1994-09-13 | Tampa Bay Research Institute | Process for obtaining cellular protein having anti-HIV activity |
| US5641868A (en) * | 1991-04-18 | 1997-06-24 | Toray Industries, Inc. | Interlekin-6 compositions, and a production process thereof |
| US5643881A (en) * | 1994-08-04 | 1997-07-01 | Tampa Bay Research Institute | Protein having anti-HIV activity and method for obtaining it |
| WO1996029092A1 (en) * | 1995-03-17 | 1996-09-26 | Toray Industries, Inc. | Corneal vascularization inhibitor |
| US6855519B2 (en) | 1995-08-22 | 2005-02-15 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhancing the production of interferon in cell culture |
| US5840565A (en) * | 1995-08-22 | 1998-11-24 | The Regents Of The University Of California | Methods for enhancing the production of viral vaccines in PKR-deficient cell culture |
| US6974681B1 (en) * | 2002-08-23 | 2005-12-13 | Immunex Corporation | Cell culture performance with vanadate |
| US7367961B2 (en) * | 2004-09-10 | 2008-05-06 | Depuy Spine, Inc. | Intradiscal injection of autologous interferon |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5774093A (en) * | 1980-10-27 | 1982-05-10 | Ajinomoto Co Inc | Method of increasing interferon production |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4007086A (en) * | 1975-01-23 | 1977-02-08 | The Upjohn Company | Interferon induction |
| US4144126A (en) * | 1975-05-21 | 1979-03-13 | Beecham Group Limited | Cell culture method |
| US4460685A (en) * | 1980-05-29 | 1984-07-17 | New York University | Method of enhancing the production of human γ Interferon |
-
1983
- 1983-09-17 JP JP58171733A patent/JPS6062997A/ja active Granted
-
1984
- 1984-08-30 US US06/645,761 patent/US4680261A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-09-13 IL IL72929A patent/IL72929A/xx unknown
- 1984-09-14 GB GB08423247A patent/GB2146645B/en not_active Expired
- 1984-09-17 IT IT48861/84A patent/IT1179247B/it active
- 1984-09-17 DE DE19843434122 patent/DE3434122A1/de active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5774093A (en) * | 1980-10-27 | 1982-05-10 | Ajinomoto Co Inc | Method of increasing interferon production |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992018537A1 (en) * | 1991-04-18 | 1992-10-29 | Toray Industries, Inc. | Interleukin 6 composition and production thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4680261A (en) | 1987-07-14 |
| GB2146645A (en) | 1985-04-24 |
| DE3434122A1 (de) | 1985-06-05 |
| DE3434122C2 (ja) | 1992-05-21 |
| IT8448861A1 (it) | 1986-03-17 |
| GB2146645B (en) | 1987-02-25 |
| GB8423247D0 (en) | 1984-10-17 |
| JPH0358717B2 (ja) | 1991-09-06 |
| IL72929A0 (en) | 1984-12-31 |
| IT1179247B (it) | 1987-09-16 |
| IL72929A (en) | 1988-09-30 |
| IT8448861A0 (it) | 1984-09-17 |
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