JPS6067426A - 低毒性制ガン剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な制ガン剤及びその製造方法に関し、−さ
らに詳しくは特定の分子量を有するジビニルエーテル−
無水マレイン酸共重合体に、制ガン活性物質を結合させ
たものを活性成分として成る、低ｊ８性かつ制ガン効果
に優れた制ガン剤及びその製１告力法に関するものであ
る。

近年、優わた制ガン効果を有する物質として５−フルオ
ロウリジンやｌ−β−Ｄ−アラビノフラノ／ルントノン
のような核酸誘導体、あるいはアドリアマイシンやダウ
ンマイシンのようなアントラザイクリン系抗生物質など
が見出されている。

しかしながら、これらの制ガン活性物質は、優れた制ガ
ン効果を有すると同時に、正常細胞に対しても強い毒性
を示す欠点を有し、したがってその使用に除しては、副
作用に対して十二分な注意が必要でアバそのため少量づ
つ多数回投与するなど煩雑な方法がとられている。

ところで、前記のような低分子化合物である制ガン活性
ｌ吻質を高分子化合物に結合させた場合、該制ガン活性
物質は体内で徐々に放出されてその濃度が一定に保たれ
、１庭そのものの体内分布が変り、毒性が軽減されて制
ガン効果が高まることが期待される。

本発明者らは、このような事情に鑑み、活性水素を有す
る制ガン活性物質を結合させる高分子化合物について鋭
意研究を重ねた結果、ある特定の分子量を有するジビニ
ルエーテル−無水マレイン酸共重合体は、それ自体優れ
た制ガン効果を有し、かつ毒性が極めて低く、また分子
中に多数の酸無水物構造を有しているため、活性水素を
もつ制ガン活性物質と容易に反応し、しかもこの反応物
は温和な条件下で前記制ガン活性物質を徐々に放出する
など、該制ガン活性物質の担体として極めて優れている
ことを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに
至った。

すなわち、本発明は、一般式 （式中のＲは制ガン活性を与える残基、ｎはＲと結合す
るジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体の分子量
２　、０００〜１５，０００に相当する値でろる） で示される高分子化合物及びその薬理的に許容しつる塩
類を活性成分として成る制ガン剤、及び有機溶媒の存在
下、分子ｚ２．ｏｏｏ〜１５，０００を有するジビニル
エーテル−無水マレイン酸共重合体に、活性水素を有す
る制ガン活性物質を反応させだのち加水分解し、次いで
所望に応じ塩に変えることを特徴とする、前記一般式（
１）で示される制ガン剤及びその塩類の製造方法を提供
するものである。

本発明に用いるジビニルエーテル−無水マレイン酸共重
合体は、次の式 ％式％ （式中のｎは該共重合体の分子量２，０００〜１５，０
００に相当する値である） で示される分子量が２．０００〜１５，０００の範囲の
ものであって、ジビニルエーテルと無水マレイン酸とを
公知の方法に従って共重合させることにょｐ得られる。

このジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体は制ガ
ン活性、抗菌性、インターフェロン誘発能などの種々の
活性を有しているが、その分子量が２　、０００未満の
ものは前記活性が低く、その上納金した制ガン活性物質
の徐放性に問題がラシ、一方１５，０００を超えると毒
性が強くなって好ましくない。

丑だ、前記共重合体は、その分子中に多数の酸無水物構
造を有しているた板氷酸基、アミノ基、メルカプト基な
どの活性水素を有する制ガン活性物質と容易に反応して
、それぞれエステル結合、アミド結合、チオエステル結
合を形成しつる。

本発明に用いられる制ガン活性物質としては、例えば水
酸基を含有するものとして、５−フルオロウリ７ン、ア
ミン基を含有するものとして、１−β−Ｄ−アラビノフ
ラノシルシトシン、アドリアマイシンやダウンマイシン
のようなアントラサイクリン系抗生′吻質などが挙げら
れる。前記一般式（＋）におけるこれらの制ガン活性物
質の残基■（を次に示す。

Ｒ’＝　ｃａ３　ダウノマイシン残基 不発明の制ガン剤は、例えばＮ−メチルビロリド７など
の有機溶媒、トリエチルアミンなどの触媒の存在下、ジ
ビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体と前記の制ガ
ン活性物質とを反応させたのち加水分解し、次いでイオ
ン交換樹脂や限外ろ過膜などを用いて目的物以外のもの
を取り除いたのち、凍結乾燥などを行うことによって得
られる。

１だ、所望に応じ、前記の加水分解後、薬理的に許容し
うる塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、カル／ラム
塩、マグネシウム塩などに変えたのち、限外ろ過、凍結
乾燥などを行い、塩として取り出してもよい。

このようにして得られた制ガン剤中の制ガン活性物質の
含有敏は、好ましくは５〜４０重量係重量囲である。

本発明の制ガン剤における制ガン活性物質の徐放性につ
いては、例えばアドリアマイシンとジビニルエーテル−
無水マレイン酸共重合体との結合物の場合、試験管内の
０．１規定、ｐＨ７，２１Ｊン酸２週間で約２０％であ
った。また１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンと
該共重合体との結合物の場合、試験管内の生理食塩水溶
液中における制ガン活性物質の放出速度は、１週間で５
０％程度であった。

さらに、ｐ３８８白血病の雄のＣＤＦ　ｊマウスを用い
た制ガン効果については、例えばアドリアマイシンと該
共重合体との結合物では最高延命率５７０チ（６０日生
存５／６）、アトリアマイノン単独では同８５係（６０
日生存Ｏ／６）であり、１−β−り一アラビノフラノ／
ルシトシンと該共重合体との結合物では最高延命率１２
５％、１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン単独で
は同１０％であったＯ このように、本発明の制ガン剤は、制ガン活性物質の徐
放性に優れ低毒性である上に、それ自体制ガン活性をも
つ該共重合体との相乗効果によシ、該制ガン活性！吻質
を単独で用いる場合に比べて、優れた制ガン効果を有す
る。

６　Ｉｔｒ　中ｉ　ａｌｌ　’Ｘ７．　Ｆｔｊ　＃　４
５１１　Ｗ　ヒ　／）−ｒ　−ｋ　５＃日日ズ一−！ｒ
ｃ−ＩＦ詳糸用Ｋ　ｇ見１月する。

ｉ　：ｔ、−、、／ビニルエーテルー無水マレイ／酸共
重合体をＩ）ＩＶ’ＩＣＩｔ４Ａと略記する。

実Ｍ１１例１５−フルオロウリジン−ＤＩＩＭＡ結合物 １）ＩＶＥＭＡ　（分子化７０００　）　５（’ｔｏ　
ＴｎｆをＮ−メチルピロリドン２０　ｙｎｅに溶かし、
５−フルオロウリジン１．００ｉ／及びトリエチルアミ
ンＯＡＯｍｅを加えて、室温下４０時間かき１ぜ反応さ
せた。この反応混合物を５００＋＋＋ｉ！の水中に投入
し、炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨ８に調整したのち
、２時間放置した。次いでＩＮ塩酸を加えてｐＨ３に調
整後、ダイアフローメンブレン（ＹＭ−５）を用い限外
ろ過して未反応物、有機溶媒、塩を除いたのち、凍結乾
燥して目的物５９３ｍｇを白色粉末として得た。

このもののＵＶ吸収量からめた５−フルオロウリノン含
有量は３６１重敏係であった。

結合物 ＤＩＶＫＭＡ　（分子量７０００）　５００ｍｇをＮ−
メチ／ｌｚピロリドン２０ｍｅに溶かし、５−フルオロ
ウリジン７５ｍｇ及びトリエチルアミン０．１０＋ｎｅ
を加えて、室温下４０時間かきまぜ反応させた。

反応混合物を実施例１と同様の方法で処理して目的物４
９０　ｍ（／を得た。このものの５−フルオロウリジン
含有量は１６．１重量％であった。

ＤＩＶＫＭＡ　（分子量７０００　）　５００　ｍ’ｊ
をＮ−メチルピロリドン４０−に溶かし、１−β−Ｄ−
アラビノフラノシルシトシンｉ、ｏｏ　ｒ及びトリエチ
ルアミン０．２５ｍｅを加えて、室温下４０時間かきま
ぜ反応させた。次いで反応混合物を５００艷の水中に投
入したのち、炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨ８に調整
後、２時間放置した。次にＩＮ塩酸を加えてｐＨをいっ
たん３付近に下げたのち、ＩＮ水酸化ナトリウム水溶液
でｐＨ５に戻し、ダイアフローメンブレン（ＹＭ−５）
を用い限外ろ過して未反応物、有機溶媒、塩を除き、凍
結乾燥して目的物９３０ｍｆを白色粉末として得だ。

このもののＮ　Ｖ吸収量からめた１−β−Ｄ−アラビノ
フラノシル／トンン含有量は３８．３重量％であった。

ＩＪＩＶＫＭＡ　（分子量７０００　）　５ｏｏ　ｍｇ
、Ｎ−メチルピロリドン４０ｍｅ、■−β−Ｄ−アラビ
ノフラノンシン）・シン１５０７ｎｇ、トリエチルアミ
７０．２５ｍ１＋を用い、実施例３と同様の方法で反応
及び後処理を行って、６５３ｍｇの目的物を得た。

このもののＵＶ吸収量からめた１−β−Ｄ−アラビノフ
ラノシルシトノン含有計ｉｌ″ｌ：］、５．２重喰係で
６った。

実施例５　アドリアマインンーＤＩＶＦ２ＭＡ結合物Ｄ
ＩＶＦＭＡ　（分子量７０００　）　１００　ｍ’ｉを
ｌ　ｍｅの無水Ｎ−メチルピロリドンに溶解し、かきま
ぜながら８　ｍｌのＮ−メチルピロリドンに溶解させた
アドリアマイシン塩酸塩１１００Ｔｎを滴下した。次い
で触媒として５０μｔの無水トリエチルアミンを５ｍｌ
のＮ−メチルピロリドンに溶解したものを１０分間で滴
下した。反応は室温で１２時間、光を遮断した状態で行
った。反応後、無水のｎ−ヘキサンＩｔ中に激しくかき
１ぜながら反応液を滴下し、沈殿した赤い固体物を新し
い１ｔのｎ−ヘキサンで洗浄した。沈殿物を集めて再蒸
留水５０ｍｅに浮遊させ、かき捷ぜながら１重ｉ％炭酸
水素ナトリウム水溶液でｐＨ７，０に調整した。１時間
後に固形物はすべて溶解し、赤い溶液となった。次いで
未反応のアドリアマイシン及び触媒のトリエチルアミン
を除去するため、２回強陽イオン交換樹脂（ダウエック
ス）２００■を加えて１０分間かき筐せたのちろ過し、
１０ｍｅの水で洗浄した。ろ液を分子量１万の分別に相
当する限外ろ過膜（アミコン社製、ＰＭＩＯ）を用いて
再蒸留水によりろ過、洗浄した。ろ液の色が完全になく
なった時点でろ過をｉＬめ、０．２２μ孔径のミリポア
フィルタ−に通しだのち、凍結乾燥した。アトリアマイ
ノンの分解によって生じる水に不溶性のアドリアマイシ
ンは存在しなかった。凍結乾燥によって２０４ｍｆの赤
橙色の綿状固体物が得られた。

このものは４９０ｎｍの可視部の吸収からめたＬころ％
　２９．４重ｔ％のアドリアマイシンを含んでいた。ま
た、このアドリ゛アマインンーＤＩＶＫＭＡ結合物は水
には易溶（５００１１Ｉｇ／ｍｅ）であるが、生理食塩
水には難溶であった。しかし、水に溶解させたのちでは
、生理食塩水に均一に混合することができた。また、こ
のものはＤＭＳＯ，ＤＭＦ’、　Ｎ　−メチルピロリド
ンのような極性溶媒に可溶であっｆｃ／ｒ：、ジエチル
エーテル、ｎ−ヘギサン、ベンゼンなどには不溶でセ〕
つだ。、さらに赤外吸収スペクトルは３３５０．２９４
０　、　１７２０　、　１６６０　、　１６０５．１５
８０．１５２０、】４ｏ５．１３９０　、　１２９０　
、　１２４０　。

１２１０．１１２０．１０９０．１０７０．　１，０２
０．　９５０゜８００、　７７０ｚ−’に吸収をもち、
アドリアマイシン塩酸塩に相当する吸収の他にアミド結
合（１６６０ｔ）ｎ−’）の存在が示された。またｏＴ
視　紫外部の吸収スペクトルには４８５．２９１．２５
３．２３３　ｎｍに吸収があった。

得られたアトリアマイ７ンーＤＩＶＥＭＡ結合物の赤外
吸収スペクトルを第１図Ａに、可視・紫外吸収スペクト
ルを第１図Ｂに示す。

実施例６　アドリアマイシン−Ｄｌ：ＶＥＭＡ結合物結
合型） 実施例５　ＶＣよって得られたアドリアマインンーＤＩ
ＶＥＭＡ結合物の水溶液を凍結乾燥直前に、１重＠係炭
酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ７，０に調整したのち、
ミリポアフィルタ−を通して凍結乾燥した。その結果、
暗赤色の綿状固体物が実施例５に対して定量的に得ら九
、そのものは実施例５の生成物より容易に水に溶けるこ
とを示した。その赤外吸収スペクトルでは１５８０ｃｒ
ｎ’　Ｋ大きな吸収が現われ、１７２０ｏｎ−’におけ
る吸収が減少した。

また、可視・紫外吸収スペクトルは変化しなかった。

得られた生成物の赤外吸収スペクトルを第２図に示す。

実施例７　ア１゛リアマインンーＤＩＩＭＡ結合物実施
例５と同様にして、４０ｍ９のＤＩＶＥＭＡ　（分子Ｍ
７０００）と２０　ｍｇのアドリアマイシン塩酸塩とを
、トリエチルアミン１０μｔを触媒トシてＮ　−メチル
ピロリトノ１０ｎ：ｅ中で反応させたのち、実施例５と
全く同じ処理方法により　５８　ｍｆの赤橙色の凍結乾
燥綿状固体物を得だ。このものは、可視吸収スペクトル
により２２．４重敗％のアトリアマイノンを含むことが
分った。その赤外吸収スペクトル及び可視・紫外吸収ス
ペクトルの吸収位置は実施例５の生成物と同様であった
。

実施例８　ダウノマイシン−ＤＩＶＫＭＡ　結合物フを
施例５と同様にして、４０■のＤＩＶＥＭＡ　（分−ｒ
−ｉｆｉ７００　’０　）と４０ｍｇのダウノマイシン
塩酸塩をト！Ｊ　ニーｆ−ルｌ　ミン２ｏμｔを触媒と
してＮ−メチルビ０１．’　と７１２ｍ１中で反応させ
たのち、実施例５と全く同じ処理方法ｒ（よ５８７　ｍ
ｇの赤橙色の綿状トす１体物を得た。このものは、可視
吸収スペクトルにより、３２．８型損傷のダウノマイシ
ンを含むことが分った。捷／こ、赤外吸収スペクトルは
３４５ｏ、２９３０．１７０５．１６６０．１６０５．
１５７０．１４０５．１３５０．１２９０．４２３０．
１２１０．１１２０．１０９０゜１０７　（１，１０４
ｆｌ、１０２０．９９０ｉ−’　に吸収をもち、可視　
紫外吸収スペクトルは４８８．２８８．２５１゜２３３
　ｎｍに吸収をもっていた。

得られた生成物の赤外吸収スペクトルを第３図、／４　
Ｋ、可視・紫外吸収スペクトルを第３図Ｂに示す０ 実施例９　ダウノマイシン−Ｄ工ＶＥＭＡ結合物（塩型
） 実施例８で得られたダウノマイシン−Ｄ工ＩＭＡ結合物
の水溶液を１重量係炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ７
，０に調整し凍結乾燥したところ、暗赤色の綿状固体物
が実施例８に対して定量的に得られ、そのものは実施例
８の生成物より水に対する溶解性が高贋ことを示した。

その赤外吸収スペクトルでは１５８０ｔ１ｎ−’に大き
な吸収が現われ、１７２０ｔ＊’における吸収は減少し
た。またＯＴ視・紫外吸収スペクトルは変化しなかった
。

得られだ生成物の赤外吸収スペクトルを第４図に示す。

実施例１Ｏダウノマイシン−ＤＩＶＥＭＡ　Ｍ合物実施
例５と同様にして、４０ｍｆ／のＤＩＩＭＡ　（分子ｚ
７ｏｏｏ）と２０ｍｇのダウノマイシン塩酸塩とヲ（・
’）エチルアミン１０μｔを触媒としてＮ−メチルピロ
’Ｊ　）ンｌ　Ｏｍｅ中で反応させたのち、実施し１１
１５と′？〒ぐ同１〕処理方法によυ、５：３；７ｙの
赤澄色の株結乾燥綿状固体物を得た。このものは、可視
吸収スペクトルからめたところ、２３．５重ｔ％のグウ
ノマ・ｒシンを含んでいた。壕だ、可視・紫外吸収スペ
クトルの吸収位置は実り例８の生成物と全く同してあっ
た。

参考例Ｉ Ｄ工ＶＥＭＡの酸無水物構造を加水分解したポリマーを
生理食塩水に溶解し、８〜１０週令の雄のＣＤＦ１マウ
スの腹腔内に１回投与して、３０日間マウスの生死を観
察した。その結果を第１表に示す。

なお、マウスは１群５〜６匹で繰り返し実験を行い、Ｌ
Ｄｌｏを算出した。

第　１　表 この表から明らかなように、分子量１，２万のＤ工ＩＭ
Ａでは著しく毒性が下ること、及び牌臓肥犬の影響が少
ないことが分った。

参考例２ ０．１規定、ｐＨ７，２のリン酸緩衝生理食塩水（１）
ＢＳ）中におけるアトリアマイ７ン（Ａｄ）　−ＤＩＶ
ＥＭＡ結合物から嵌合物放出を検討した。

実施例５で得られたＡ　ｄ、　−ＤＩ　ＶＥＭＡ結合物
３　、２　ｍｆｊを含む］）ＢＳ　’Ｉ　Ｏｍｅを３７
℃に保ち、一定時間後１１　、１　ｌｎｅをサンプリン
グし、０．１Ｎ塩酸０．４−を加えて該結合物を沈殿さ
せ、遠心分離した上澄液のｒＪＪ視部（４９０ｎｍ）の
吸光度を測定し、Ａｄ放出量をめた。その結果を第５図
に示す。々お放出量は；３つのサンプルの平均値である
。

この図から、２週間経過後、約２０％のアトリアマイ７
ンが放出されたことが分る。

参考例３ １−β−Ｄ−アラビノフラノ／ル７トシン（ＡｒａＣ）
　−ＤＩＩＭＡ結合物からのＡｒａＣ放出速度。

を調べるために、実施例３で得たＡｒａＣ−ＤＩＶＥＭ
Ａ結合物１　結合物音生理食塩水１　ｍｌに溶解させて
３７℃に保った。一定時間毎にサンプリングし、高速液
体クロマトグラフィーで遊離のＡｒａＣ量を測定した。

その結果を第６図に示す。

この図から明らかなように、該結合物からのＡｒａＣ放
出は極めてゆっくりであり、１週間で約５０％のＡｒａ
Ｃが放出されていることが分る。

参考例４ 制ガン活性物質−Ｄ工ＩＭＡ結合物の制ガン活性評価を
Ｐ３８８白血病マウスを用いて行った。

８〜１０週令の雄のＣＤ　Ｆ、マウスの腹腔内に１×１
０６個のＰ３８８白血病細胞を移植し、２４時間後に制
ガン活性物質−ＤＩＶＥＭＡ結合物の溶嵌合物腹腔内に
投与した。１群６匹のマウスを実験群として用い、生存
日数の中央値を対照群と比較し、次の式によシ延命率を
めた。

ただし、Ｔ：治療群生存日数中央値 Ｃ；対照群治療日数中央値 また、６０日の長期生存マウスが生存する場合、その数
をめた。

第２表にＡｒａＣ−ＤＩＶＥＭＡ結合物の制嵌合物性を
、第３表にＡｄ−ＤＩＶＥＭＡ結合物（塩嵌合物制ガン
活性を示す。

２Ｉ′４２表 ｇ）　ＤＩｖｇｍＡｏ分子ｔ：　７０００

【図面の簡単な説明】

第１図Δ及びＢはそれぞれ実施例５におけるアドリアマ
イシン−Ｄ　Ｔ　ＶＥＭＡ結合物結合性吸収スペクトル
及び可視・紫外吸収スペクトル、第２図は実施例（ｊに
おけるアドリアマイシン−ＤＩＶＥＭＡ結合物（塩型）
の赤外吸収スペクトル、第３図Ａ及びＢはそれぞれ実施
例８におけるダウノマイシン−１）ＩＶＥＭＡ結合物の
赤外吸収スペクトル及び可視・紫外吸収スペクトル、第
４図は実施例９にお、けるダウノマイシン−ＤＩＶＥＭ
Ａ結合物（塩型）の赤外吸収スペクトルである。 また、第５図は０．１規定、ｐＨ７，２のリン酸緩衝生
理食塩水中におけるアトリアマイノン−ＤＴｖＥＭΔ結
合物からのアトリアマイノンの放出量と経過日数との関
係を示すグラフ、第６図は生理食塩水中ニおけるｌ−β
−１）−アラビノフラノシルントンン−１）ＩＶＥＭＡ
結合物からの１−β−Ｄ−アラビノフシノフルシトンン
の放出量と経過日数との関係を示すグラフである。 ＜Ｘ＞りぬＶｌｌ−１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １一般式 （式中のＲは制ガン活性を力える残基、ｎはＲと結合す
   るジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合体の分子ｉ
   ２．ｏｏｏ〜１５．０（１０に相当する整数である） で示される高分子化合物及びぞの薬理的に許容しうる塩
   類を活性成分として成る低ｍ性制ガン剤。 ２　有機溶媒の存在下、分子量２，０００〜１５，００
   ０６゛有するジビニルエーテル−無水マレイン酸共重合
   体に、活性水素を有する制ガン活性物質を反応させたの
   ち加水分解し、次いで所望に応じ塩に変えることを特徴
   とする、一般式 （式中のＲは制ガン活性を与える残基、ｎはＲと結合す
   るジビニル−エーテル−無水マレイン酸共重合体の分子
   Ｊ１２，０００〜１５　、０００に相当する整数である
   ） で示される低毒性制ガン剤及びその塩類の製造方法。