JPS6067859A - リンパ節疾患及び後天性免疫不全症候群の診断用抗原組成物、検出方法及び診断キット - Google Patents

リンパ節疾患及び後天性免疫不全症候群の診断用抗原組成物、検出方法及び診断キット

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JPS6067859A
JPS6067859A JP58219323A JP21932383A JPS6067859A JP S6067859 A JPS6067859 A JP S6067859A JP 58219323 A JP58219323 A JP 58219323A JP 21932383 A JP21932383 A JP 21932383A JP S6067859 A JPS6067859 A JP S6067859A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はリンパ節疾患及び後天性免疫不全症候群の診断
のための抗原、手段及び方法に関する。
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は最近数ケ国におい
て認められている。この疾患は主として複数の相手を有
する同性愛の男性において報告されており、疫学的研究
は性的経路並びに静脈内薬物投与及び輸血による水平伝
播を示唆している。
ＡＩＤＳの患者に生ずる顕著な細胞性免疫の抑制及び彼
等のＴリンパ球の下部集団の量的変異はＴ細胞酸いはＴ
細胞の下部集団が仮想的感染剤に対する好ましい標的で
はないかということを示唆する。或いは又、これらの変
異はそれに引き続く感染の結果でもあり得る。低下した
細胞性免疫はＡＩＤＳ患者において深刻な日和見感染を
引き起こし１、それらの多くはカボジ肉腫を発現させる
。しかしながら、ＡＩＤＳを発現した或いはしない同性
愛男性及び幼児において執拗な複数のリンパ節疾患の状
況も又記載されている。その様なリンパ節の組織学的側
面は反応性増殖のそれである。その様な症例はこの疾患
の早期成いはより穏やかな形態に対応するものかもしれ
ない。
ＡＩＤＳ及びしばしばＡＩＤＳの前駆的徴候と考えられ
るリンパ節疾患症候群（ＬＡＳ）の主たる病因学的作用
因子の一つが複数のリンパ節疾患を有する同性愛患者の
リンパ節から単離されたＴ−リンパ栄養的レトロウィル
スよりなるべきことが見出された。このウィルスは、ヒ
トＴ細胞白血病ウィルス（ＨＴＬＶ）科（１１，Ｃ，Ｇ
ａ１ｉｏ及びＭ、Ｓ。
Ｒｅ１ｔｚ　’、”Ｊ、Ｎａｔｌ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉ
ｎ５ｔ、　”　６９　（Ｎｏ、６）、１２０９　（１９
８２））とは区別されるように思われる。最後に述べた
ウィルスは所謂ＨＴ　Ｌ　Ｖ　−１サブグループに属し
ていることが知られている。
この患者は頚部リンパ節疾患及び無力症について１９８
２年１２月に医学相談をめた３３才の同性愛の男性であ
った（患者１）。検査結果は腋窩及び爪径部のリンパ節
疾患を示した。熱も最近の体重の減少も見られなかった
。この患者は幾つかの淋病の履歴を有し、１９８２年９
月に梅毒の治療を受けていた。インタビューに際して、
彼は毎年５０人を越える性的交渉の相手を有し、化アフ
リカ、ギリシャ、及びインドを含む多くの国へ旅行して
いたことを明らかにした。彼のニューヨークへの最後の
旅行は１９７９年であった。
実験室の試験はサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）及びエ
プスタイン−バー（Ｅ、Ｂ、）ウィルスについて血清学
的陽性（免疫グロブリンＧ）を示した。
ヒト及びサルの細胞上で培養された彼の咽喉からの細胞
には、単純ヘルペスウィルスが検出された。
頚部リンパ節の生検が行われた。一つの試料は組織学的
検査に当てられ、それはリンパ節の一般構造の変化のな
い胞状増殖を出現させた。免疫組織学的研究は、副皮質
領域において多くのＴリンパ球（○ＫＴ３”）が示した
。全細胞懸濁液の類型化は、６２％の細胞がＴリンパ球
（ＯＫＴ３”）、４４％がＴ−ヘルパー細胞（○ＫＴ４
＋）、及び１６％がサプレッサー細胞（○ＫＴ８”）で
あることを示した。
同一の生検されたリンパ節の細胞をフィトヘマグルチニ
ン（ＰＨＡ）　、Ｔ−細胞生育因子（ＴＣＧＦ）及びヒ
Ｉ・α−インターフェロンに対する抗血清と共に培養培
地に入れた（［細胞は抗生物質、１０−５Ｍβ−ノルカ
プトエタノール、１０％ウシ胎児血清、０．１　％のヒ
トα−インターフェロンに対するヒツジ抗体（中和力価
、１０−５希釈率において７ＩＵ）及び１０％のＰＨＡ
のないＴＣＧＦを補給したＲＰＭＩ−１６４０培地中に
おいて生育した」）。ヒトα−インターフェロンに対す
る抗血清を使用した理由は、レトロウィルスを含むウィ
ルスにより慢性的に感染された細胞により分泌される内
因性インターフェロンを中和するためであった。マウス
系においては以前にインターフェロンに対する抗血清が
１０〜５０の倍率によりレトロウィルス産生を増大し得
ることが示されている（　Ｆ、Ｂａｒｒ５−５ｉｎｏｕ
ｓｓｉ等ｒＡｎｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ！。
（Ｔｎｓｔｉｔｕｔ　Ｐａ５ｔｅｕｒ）　Ｊ　１３０Ｂ
、　３４９　（］、　９７９年）〕。３日後にＰＨＡを
含有しない同一培地中において培養を継続した。試料は
逆転写酵素分析及び電子顕微鏡における検査のために規
則的に取り出した。
１５日間の培養後、ＨＴＬＶ−１について説明されてい
るイオン性条件（３，Ｊ、Ｐｏｌｅｓｚ等ｒＰｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、Ｊ　７７．
７４−１５　（１９８０）　）を使用することにより培
養上澄液中に逆転写酵素活性が検出された。ウィルス産
生は１５日間継続され、その後リンパ球増殖の低下と平
行して減少した。
同一方法で培養された末梢血液リンパ球は６週間後にも
逆転写酵素活性について終始陰性であった。
サイトメガロウィルスはＭＲＣ５細胞との長期間の共培
養時に元の生検組織中には検出されたが、培養されたＴ
−リンパ球中には培養の如何なる時点においても検出さ
れなかった。
本発明は後で定義する上記該抗原の源としての新たに単
離したウィルスに関するものである。
しかしながら、先ず以下にＬＡＶ、と命名される新たに
単離されたウィルスについての説明を行う。
このウィルスは健康な提供者から得られたＴリンパ球の
培養液に伝播可能である。特にウィルス伝播はパスツー
ル研究所の輸血センターの健康な成人提供者から確立さ
れたＴリンパ球の培養液を用いて試みられた。３日目に
培養液の半分を混合細胞懸濁液の遠心分離後の生検から
のリンパ球と共培養した。逆転写酵素活性と共培養の１
５５日目上澄液には＆出することができたが、５日目及
び１００日目は検出することができなかった。逆転写酵
素は患者の細胞から放出されたものと同一の特性を有し
、放出量は１５〜２０日間安定であった。提供者のリン
パ球の未感染培養液の細胞は培養が中止された６週間迄
の期間内に逆転写酵素活性を示さなかった。
この感染共培養液の細胞のない上澄液を用いて二つの膝
幣ＬＣ１及びＬＣ５からのＴリンパ球の３日間培養液を
ポリブレン（２μｇ　／ｍ＋）の存在下において感染さ
せた。７日間の遅滞期間後に両方の膜幣リンパ球培養液
の上澄液中に比較的高力価の逆転写酵素活性が検出され
た。感染されなかった同一の培＃液は陰性に留まった。
これらの二つの逐次感染はウィルスが新生児或いは成人
からの正常なリンパ球上で増殖され得ることを明確に示
す。
上記共培養においては、患者１の細胞そのまま（それら
は衰え、最早生育しなかった）、或いは予備Ｘ線照射さ
れるが或いはマイトマイシンＣ処理された細胞が使用さ
れた。
リンパ球の感染培養液から得ることのできるＬＡＶ１ウ
ィルス或いはＬＡＶ１ウィルスＵｍ液は、それらを完全
にその他のＨＴＬＶがら区別する特性を有する。これら
の特性を以下に適宜図面に関連して言及する。それは、
それぞれ逆転写酵素活性及び〔３Ｈ〕ウリジン活性の、
感染リンパ球培養液から得られた細胞のない上澄液のウ
ィルス内容物の超遠心分離後の蔗糖勾配中のＬＡＶｉウ
ィルスの連続画分に対する変化を表わす曲線を示す。
逆転写酵素活性によるＬＡＶ１ウィルス分析は、患者１
からのウィルスに関連して図において用いられた方法に
従って行なうことができる。分析結果を図に示す。患者
１がらのウィルスに感染された膝幣血液Ｔリンパ球は、
１８時間〔９Ｈ〕ウリジン（２８Ｃｉ／ミリモル、　Ａ
ｍｅｒｓｈａｍ　ｉ　２０．！７Ｃｉ／　ｍｌ　）で標
識化された。細胞のない上澄液を５０．０００　ｒｐｍ
において１時間超遠心分離を行なった。ペレットを２０
０μｚのＮＴＥ緩衝液（１０ｍＭ　）リス、　ｐＨ７，
４，１００ｍＭ、ＮａＣ１及び１　ｍＭ　ＥＤＴＡ　）
中に再懸濁し、ＩＥＣ型５Ｂ４９８ｔ：ｌ−ター内にお
いて、５５．００Ｏｒｐｍにおいて９０分間３ｍ１２線
形蔗糖勾配（１０〜６０％）に亘って遠心分離を行った
。画分（２００μｌ）を集め、各両分の３０μ！試料に
ついて５ｍＭ　Ｍｇ２＋及びポリ（Ａ）−オリゴ−（ｄ
Ｔ）　＋ｔ−＋ｅを鋳型プライマーとして用いてＤＮＡ
ＲＮＡ依存ポリメラーゼ活性の測定を行った。各両分の
２０μβ部分を１０％トリクロル酢酸を用いて沈澱させ
た後Ｑ、４５ｔｔｍ　ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　
）フィルターで濾過した。３日−標識酸沈澱物質をパソ
カード（Ｐａｃｋａｒｄ　）βカウンター中で測定した
。
この新規ウィルス単離体がレトロウィルスであったとい
うことは、上記蔗糖勾配中におけるその密度即ち１．１
６及びその〔３日〕　ウリジンを用いた標識化により更
に示された（図）。迅速に沈澱するＲＮＡはＬＡＶ１ウ
ィルスと会合しているように思われる。
元の生検からのウィルス感染細胞並びに第１及び第２ウ
イルス継代からの感染リンパ球を用いて逆転写酵素活性
及び酵素の鋳型特異性に対する最適必要条件をめた。結
果は全ての場合に同一であった。この逆転写酵素活性は
ポリ　（アデニレートーオリゴデオキシチミジレート）
　〔ポリ　（Ａ）−オリゴ（ｄ　Ｔ）　＋＋−＋ａ　〕
に対して強い親和性を示し、Ｍｇ２＋を最適濃度（５ｍ
Ｍ）及び７６８の最適ｐ＋＋をもって必要とした。この
反応はアクチノマイシンＤによっては阻害されなかった
。この特性並びにデオキシアデニレートーデオキシチモ
ジレ−１・よりもリボースアデニレートーデオキシチミ
ジレートに対する優先的な特異性はＤＮＡ−依存ポリメ
ラーゼ類からこのウィルス酵素を区別するものである。
ウィルス産生細胞の超薄切片の電子顕微鏡検査はおそら
くウィルスの未熟及び成熟形態に対応する２Ｍ顆の粒子
を示し、未熟粒子は細胞表面に発芽し、濃い半月形が血
漿膜に密着している。場合により、ある粒子は細胞表面
から離れながら、この状態に留まる。
成熟粒子は小さな密度の高い偏心コア（平均直径４１ｎ
ｍ）を有する全く異なった形態を有する。
殆どのウィルス粒子が球形（平均直径１３９ｎｍ）或い
は卵形であるが、しかし、ある写真において特にウィル
スが単離された元の培養液にみられる粒子においては、
尻尾を有する形態も又観察される。後者の形態は又培地
中に放出された細胞質の小胞にもみることができる。そ
の様な粒子は又小胞膜から発芽することによっても形成
される。
成熟粒子の形態は、その大きなコアが９２ｎｍの平均直
径をゆうするＨＴＬＶから明確に区別される。
ヘルパーニーリンパ球（Ｌｅ、ｕ３細胞）がウィルスの
主たる標的を形成する。換言すれば、このＬＡＶ１ウィ
ルスは、これらの細胞に対して特別の向性を有する。ｌ
ｅｕ　３細胞は、０ＲＴＨＯにより商標○ＫＴ４として
市販されているモノクローナル抗体により認識可能であ
る。これに対して、主としてサプレッサー或いは細胞毒
細胞であり、０ＲＴＨＯにより商標０ＫＴ８として市販
されているモノクローナル抗体により認識されるＬｅｕ
　２細胞の富化培養液は、同一条件において感染された
場合にも、ウィルス感染後６週間後にも何等の掻知可能
なＲＴ活性を示さなかった。
ＡＩＤＳの殆どの症例において、正常では１を越える０
ＫＴ４＋の０ＫＴ８＋細胞に対する比は０．１以工程度
の値に降下している。
Ｌ　Ａ　Ｖ　１ウイルスは又、Ｔリンパ腫及びＴ白血病
を有する患者の培養されたＴリンパ球からの従来知られ
ているＨＴＬＶ−１単離物がらも免疫学的に区別される
。使用された抗体はＨＴＬＶ−１のｐ１９及びｐ２４コ
ア蛋白質に特異的なのであった。ｐ１９に対するモノク
ローナル抗体口。
Ｒｏｂｅｒｔ−Ｇｕｒｏｆｆ等、ｒＪ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ
、Ｊ　１５４．１９５７　（１９８０）　）及びｐ２４
に対するポリクローナルヤギ抗体（Ｖ、Ｓ、Ｋａｌｙａ
ｎａｒａｍａｎ等ｒ　、ＬＶｉｒｏｌ、　Ｊ　３８．９
０６（１９８１，）　）を患者１の生検からの感染細胞
及び健康な供与者から得られ、同一ウィルスで感染され
たリンパ球に対する間接螢光アッセイにおいて用いた。
ＬＡＶ１ウィルス産生細胞はいずれの型の抗体とも反応
しなかったのに対し、慢性的にＴ（ＴＬＶＩで感染され
ＣＭ、Ｐｏｐｏｖｉｃ、Ｐ、Ｓ、Ｓａｒｉｍ、Ｍ。
Ｒｏｂｅｒｔ−Ｇｕｒｏｆｆ　、　Ｖ、Ｓ、Ｋａｌｙａ
ｎａｒａｍａｎ、、Ｄ、Ｍａｎｎ、ＶＪ。
Ｍｉｎｏｍａｄａ、　Ｒ，Ｃ，Ｇａ１ｌｏ著、ｒｓｃｉ
ｅｎｃｅ　Ｊ　２１９．８５６　（１９８３）　）　、
かつ、対照例として使用された請槽リンパ球の二つの系
統は強い表面螢光を示した。
何れのウィルス抗原が患者の血清内に存在する抗体によ
り認識されるかを決定するために、数回の免疫沈澱実験
を行った。患者１からウィルスで感染されたＩｎ’リン
パ球及び未感染対照例を、Ｃ”Ｓ）メチオニンで２０時
間標識化した。細胞を洗剤を用いて溶解し、細胞質８１
０抽出物を作成した。上澄液中に放出された標識化ウィ
ルスは蔗糖勾配中にハンド形成した。両物質をＴ（ＴＬ
Ｖ−１ｐ２４に対する抗血清、患者１からの血清及び健
康な供与者からの血清試料により免疫沈澱せしめた。免
疫錯体は変性条件下にポリアクリルアミドゲル電気泳動
により分析した。患者１からのつイルス感染細胞及びこ
のウィルスで感染されたＬＣＩ細胞中に存在するｐ２５
蛋白質は患者１がらの血清により特異的に認識されたが
、同様な条件下で得られたＨＴＬＶ−１ｐ２４に対する
抗血清或いは正常な供与者の血清からは認識されなかっ
た。反対に対照例のＨＴＬＶ−感染細胞抽出物中に存在
するｐ２４は、ＨＴＬＶに対する抗体により認識された
が、患者１がらの血清によってと認識されなかった。
！５ｓ−メチ、ｉニンー標織化ウィルスの精製後に検出
された主たる蛋白質（ｐ２５）は約２５，０００　（即
ち２５Ｋ）の分子量を有する。これが患者１の血清によ
り認識される唯一の蛋白質である。他のレトロウィルス
類との類推により、この主たる蛋白質はウィルスのコア
中に位置するものと考えられた。
これは、患者の血清がウィルスのコアを凝集させること
ができることを示す免疫−電子顕微鏡実験において確認
することができる。反対に、エーテル処理ウィルスに対
してウサギ中で形成された抗血清はｐ２５蛋白質を沈澱
させなかった。
精製ウィルスのポリアクリルアミドゲル電気泳動中に見
られるその他の蛋白質のウィルス源は推定がより困難で
ある。ｐ１５蛋白質が銀染色後に見ることができたが、
３５３−メチオニンで標識化後には、おそらく、この蛋
白質中のアミノ酸の不足によりはるかに弱いものであっ
た。より高い分子量範囲において、ウィルス膜の内部或
いは外部のいずれにおいても、ウィルスの細胞蛋白質に
よる汚染が見られるようである。３６Ｋ及び４２に蛋白
質及び８０に蛋白質は常に形成されて精製ウィルスと会
合し、主たる膜蛋白質を代表し得るものである。
Ｎｏ、ｐ１９　（即ち約１９，０００の分子量を有する
もの）がＬＡＶ１抽出物から単離された。
本発明はより詳細にはＬＡＳ或いはＡＩＤＳに罹患した
患者の血清により免疫学的に認識されることの可能な該
ウィルスの抽出物に関する。勿論任意の種類の免疫学的
分析法を使用することが可能である。例えば、免疫螢光
或いは免疫酵素分析法或いは放射性免疫沈澱試験が特に
適したものである。
事実及び例外的状況の場合を除いて、罹患患者の血清は
元のままのＬＡＶ１ウィルス或いは同様な表現型或いは
免疫学的特性を有するウィルスを認識しない。ウィルス
の膜蛋白質は患者の血清によっては免疫学的に検出不可
能なものとして現われた。しかしながら、コア蛋白質が
該血清に曝されるや否や免疫学的検出が可匍となる。従
って、本発明はそれが最も粗製のもの、特に単なるウィ
ルスのライゼート、或いはよりネ青製されたもの、特に
ｐ２５蛋白質に富んだ抽出物、或いは更に精製ｐ２５蛋
白質或いはそれに免疫学的に関連した蛋白質に冨んだ抽
出物であると否を問わず、全てのウィルスの抽出物に関
するものである。任意の精製方法を使用することが可能
である。例えば、Ｒ，Ｃ，Ｍｏｎｔｅｌａｒｏ等、Ｊ、
ｏｆ　ＶＩＲＯＬＯＧＹ’、１９８２年６月Ｐ。
Ｐ、　１０２９−１０３８に開示されるような精製方法
を使用することが可能である。
本発明はより一般的には、同様な表現型を有し、ＬＡＶ
ｌから得られるそれに免疫学的に関連した任意のウィル
スの抽出物に関するものである。ＬＡＶ型のウィルスの
源はＬＡＳ−及びＡＩＤＳ−患者からの或いは血友病者
から単離可能なＴ−リンパ球￥を獲物よりなる。
その点において、その他の好ましい抽出物は、次のもの
から単離されたレトロウィルスの正常なリンパ球上で増
殖して得られた二つのレトロウィルスから得られるもの
である。
１）広範なカポジ肉腫病態及び彼の血液中に実際上全く
○ＫＴ４＋リンパ球を有しない激しいリンパ球減少を有
する複数の相手ををする白人の同性愛の者のリンパ節リ
ンパ球、 ２）ニューロトキソブラスモシス（ｎｅｕｒｏｔｏｘｏ
　−ｐｌａｓｍｏｓｉｓ　）及び０．１のＯ，ＫＴ４”
　１０ＫＴ８＋比を示す若いＢ血友病患者の血液リンパ
球。
これらの二つのレトロウィルスはＩ　ＤＡＶｌ及びＩ　
ＤＡＶ　２とそれぞれ命名された（免疫不全関連ウィル
スとして）。これまでに得られた部分的特性化の結果は
Ｉ　ＤＡＶｌ及びＩＤＡＶ２のＬＡＶｌに対する下記の
ような類似性−同一性ではなくとも−を示す：即ち一同
一のイオン要件及び逆転写酵素の鋳型特異性、　− ８超薄切片における同一の形態、 一抗原的に関連したｐ２５蛋白質：　ＬＡＶ１患者の血
清はＩＤＡＶＩ及びＩ　ＤＡＶ２からの９２５を免疫沈
澱させ８反対に■ＤＡＶ２患者からの血清はＬＡＶ１ｐ
２５を免疫沈澱させる。
Ｉ　ＤＡＶ　１患者の血清はより低い抗体価を有すルヨ
うに思ワレ、ＬＡＶｌ及びＩ　ＤＡＶ　１　ｐ２５蛋白
質に対して弱い沈澱帯を与えた。Ｉ　ＤＡＶ　１及びｉ
　ＤＡＶ　２のｐ２５蛋白質はＨＴＬＶｐ２．４抗血清
によっては認識されなかった。
これらの類イ以性は、これらの三つの単離物の全ては同
一群のウィルスに屈することを示唆する。
本発明は、更に診断患者からの血清或いはその他の生物
学的媒体を上記の如きウィルス抽出物と接触させ、その
免疫学的反応を検出することを特徴とする試験管内（ｉ
ｎ　ｖｉｔｒｏ）のＬＡＳ或いはＡＩＤＳの診断方法に
関する。
好ましい方法は、免疫酵素或いは免疫螢光分析法特にＥ
　Ｌ　Ｉ　Ｓ　Ａ、技術によるものである。これらの分
析法は、直接或いは間接の免疫酵素或いは免疫螢光分析
法のいずれであってもよい。
この様に本発明は又標識の型が酵素、螢光、放射性など
のいずれであってもよい標識化ウィルス抽出物に関する
。
その様な分析法としては、例えば次のような方法が含ま
れる。：即ち 一本発明による所定量の抽出物を滴定マイクロプレート
のウェル中に堆積し、 ８該ウエル中に診断すべき血清の次第に増大する希釈液
を導入し、 一マイクロプレートをインキュベートし、−マイクロプ
レートを充分に洗浄し、 −マイクロプレートのウェル中に血液免疫グロブリンに
向けられた標識化抗体を導入しく標識化は基質を加水分
解することのできる酵素から選ばれた酵素により行なわ
れ、これにより基質は次いで少なくとも所定の波長帯域
においてその放射線吸収が変化する）、及び 一疾患の潜在リスク或いは有効存在の目安として基質加
水分解の量を、好ましくは対照例との比較方法において
検出することよりなる。
本発明は又上記診断用のキットに関するものであり、そ
れは、 上記型のウィルスの抽出物或いはより精製された両分（
該抽出物或いは両分は放射性、酵素或いは免疫螢光ラベ
ルなどにより標識化されている）、ヒト抗−免疫グロブ
リン或いは蛋白質Ａ（アガロースビーズなどの水不溶性
支持体に固定されているのが有利である）、 健康なヒトから得られたリンパ球抽出物、緩衝液及び適
当であるならば標識の視覚化のための基材、 よりなることを特徴とするものである。
本発明のその他の特徴は関連ウィルスの好ましい単離及
び培養方法、診断手段として適当な抽出物の好ましい抽
出方法、好ましい診断技術及び達成することのできる結
果についての説明が進むにつれて更に明らかとなるであ
ろう。
１．□グ４）Ｉ≦す１殖 ［’或いは血液のいずれかからの培養されたＴ−リンパ
球、或いは又健康なウィルス陰性の成人の供与者からの
骨髄細胞がウィルス増殖に適したものである。
しかしながら、リンパ球のウィルスを生育する能力には
個人間に幾分の変化がある。従って、ウィルスに対する
抗体を有さず、又そのリンパ球が逆転写酵素活性（ＲＴ
）により検出されるように繰り返し自発的にウィルスを
放出せず、又ウィルス蛋白質を表現しなかった健康的な
成人供与者を選択するのが好ましい。
供与者のリンパ球を得、細胞泳動により分離し、ＲＰＭ
１１６４０培地中において液体窒素中、−１８０°Ｃに
おいて凍結保存し、５０％の未補充ヒト血清及び１０％
ＤＭＳＯを使用するまで補給した。
ウィルス感染のためには、リンパ球を培養液（Ｒ’ＰＭ
Ｔ　１６４０培地）中にフィトヘマグルチニン（Ｐ）Ｔ
Ａ）と共に５Ｘ１０’細胞／ｍβの濃度で３日・問直い
た。
次いで、培地を除去し、細胞をウィルス懸濁液（ウィル
ス産生リンパ球の粗製上澄液、−８０℃で保存）中に再
懸濁した。細胞／ウィルス濃度の最適条件は５　・−１
０，０００ｃｐｍのＲＴ活性に対して２×１０６細胞で
あり、ＲＴ’活性は前記の方法でめた。２４時間後に細
胞を遠心分離にかけ未吸着ウィルスを除去し、培養液の
ＰＨＡのない培地に再懸濁し、ＰＨＡのないＴＣＧＦ　
（インターロイキン２）　：　（０，５〜Ｉ　Ｕ／　ｍ
ｊ！、最終濃度）、ＰＯＬＹＢＲＥＮ　（Ｓｉｇｍａ　
）　：　（２ｐｇ　／　ｍｌ及び抗−インターフェロン
αヒツジ血清を補給し、５６℃で３０分間不活性化させ
た（７Ｕのα白血球インターフェロンを１　／１００，
０００の希釈率で中和することのできる０、１％の血清
）。
ウィルス産生は１　ｍｌ！試料についてＲＴ活性測定に
より３日毎に試験した。
抗−インターフェロン血清の存在はウィルス産生におい
て重要である。即ち、リンパ球を抗−ヒト−α−インタ
ーフェロン血清の不存在下において感染させると、ＲＴ
活性により測定したウィルスの産生は極めて低いか或い
は遅延する。使用されるヒツジ抗血清は部分的に精製さ
れたα白血球インターフェロンに対して形成され、Ｃａ
ｎｔｅｌｌの技術により作られたものであるのでインタ
ーフェロン以外の成分の役割は排除することができない
。
ウィルスの産生は通電感染後９〜１５日日に開始し、１
０〜１５日間継続する。如何なる場合にも連続的永久系
統の発現は観察されなかった。
２、皇ム火ス二請Ｉ ＥＬ　ｒ　ＳＡにおけるその使用のために、ウィルスを
１０％ポリエチレングリコール（ＰＥ６６０００）沈澱
により濃縮し、２０〜６０％の蔗糖勾配中で２回平衡に
なる迄ハンド形成させた。１．１６の密度におけるウィ
ルスのハンドが次いで回収され、これはそのままＥＬ　
Ｉ　ＳＡ分析に使用可能である。
ＲＴＰＡ放射性免疫沈澱分析に使用するためには、メト
リッツアミド（Ｍｅｔｒｉｚａｍｉｄｅ　）　（Ｎｙｅ
ｇａａｒｄ（Ｏｓｌｏ）によりＮＹＣＯＤＥＮＺの商標
で販売〕の等張勾配における精製が好ましいことが判明
した。
そのような勾配におけるウィルス密度は極めて低かった
（１．１０〜１．１．１）。
細胞及びウィルス（ＲＩＰＡ）の１５３−メチオニンに
よる代謝標識化の後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動
を次のＲＩＰＡに対する修正以外は上記と同様にして行
なった。即ち、ＮＹＣＯＤＥＮＺ中で精製されたウィル
スを５０００／　ｍｌのアプロチニンを含有する４容の
ＲＩＰＡ中で熔解した。５μｌの試験血清とのインキュ
ベーションは３７°Ｃで１時間行なわれ、次いで＋４℃
で１８時間行なわれた。更に免疫錯体とプロティンＡセ
ファロースビーズとのインキュベーションは＋４℃にお
いて３時間行なわれた。
３、ＥＬＩＳＡアッセイ　ウィルス　の゛　」上記の如
き蔗糖勾配中において精製されたウィルスをＲＩＰＡ緩
衝液（０，５％５Ｏ５）中において溶解し、マイクロテ
ストプレート（Ｎｕｎｃ）のウェル上に被覆した。
ＥＬ　Ｉ　ＳＡアッセイの好ましい条件を以下にまとめ
て示す。
各試験血清の一連の希釈液の二重のウェルに添加後、特
異的に固定したＩｇＧをペルオキシダーゼと結合したヤ
ギ抗−ヒ目ｇＧにより発現させる。
酵素反応はオルト−フェニレン−ジアミンを基質として
行なわれ、自動分光光度計を用いて４９２ｎｍにおいて
読まれる。
同一プレート上で各血清は対照抗原について試験される
（ある血清について高い可能性がある非特異性結合を除
去するために同一供与者からの未感染Ｔ−リンパ球の粗
製細胞質ライゼートが使用される）。
血清はウィルス抗原に対する０、Ｄ、と対照細胞抗原に
対する０、Ｄ、の差が少なくとも０．３０であった場合
には陽性（ウィルスに対する抗体）と考えられた。
以下に上記疾患或いは疾患の危険性の被曝を検定するた
めの特別の試験が開示される。
方跋 このＥＬ　Ｉ　ＳＡ試験は血清抗−レトロウィルス型Ｌ
ＡＶ抗体の検出及び滴定のためのものである。
それはレトロウィルス抗原（Ｔリンパ球上で培＃）と、
同一であるが非感染であるリンパ球のライゼートにより
構成される対照抗原との競争試験を行うことよりなる。
抗体の２個の抗原上の結合は、それ自体対応する基質の
添加により出現される酵素で標識化されたヒト８抗グロ
ブリンを用いて発現される。
立ムヱ＾痕ＣＯ皿ｌ− 使用される細胞培養液はヒト起源のＴリンパ球であり、 ＩＩＡｆ幣血液、 骨髄、 健康な供与者の血液、 由来のものである。
細胞のウィルスによる感染後、感染細胞培養液の上澄液
が使用される。それは１０％ＰＥＧを用いて沈澱させる
ことにより濃縮され、次いで２０〜６０％の蔗糖勾配上
において超遠心分離により平衡になるまで精製（２〜３
回）される。
ウィルスの画分を集め、５０，０００　ｒｐｍ　におい
て６０分間遠心分離により濃縮する。
沈降したウィルスを最少容量の緩衝液ＮＴＥ中にｐＨ７
，４，（）リス０．ＯＩＭ、ＮａＣ１Ｏ，ＩＭ　、ＥＤ
ＴＡ　Ｏ，００１Ｍ）において採取する。
蛋白質濃度はローリ−（Ｌｏｗｒｙ　）法によりめる。
ウィルスを次いで（ＲＩＰＡ＋５ＤＳ）緩衝液（０，５
％最終濃度）により３７℃において１５分間溶解する。
刃旦事ｌし」１鼠 非感染リンパ球を前記条件により５〜１０日間培養する
。それらを低速で遠心分離し５％のＺＹＭＯＦ　ＲＥＮ
　（Ｓｐｅｃｉａ）　（５００ｕ／ｍ　＃）の商品名で
市販されている製品の存在下においてＲＩＰＡ緩衝液中
で溶解する。４°Ｃにおいて１５分間しばしば渦巻き攪
拌しながら放置後ライゼートを１０．００Ｏｒｐｍで遠
心分離する。この上澄液が対照抗原を構成する。その蛋
白質中濃度はローリ−法により測定する。
都ツー １−プレート＝ＮＵＮＣ−特別にコントロールされたＥ
Ｌ　Ｉ　５Ａ ２−ＰＢＳ緩衝液：　ｐｌ＋　７．５ ３〜ツイ−７（ＴＷＥＥＮ）２０ ４−炭酸緩衝液：　ｐＨ＝９．６　（Ｎａ２Ｃｏ３＝０
．２Ｍ　；ＮａＨＣＯ＝０．２Ｍ） ５−非胎児ウシ血清：凍結状態で保存 （Ｂ　Ｉ　０ＰＲＯ） ６−ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）Ｓ　Ｉ　ＧＭＡ（画
分Ｖ） ７−ペルオキシダーゼ ＰＡＳＴＥＵＲにより標識化されたヒト抗ＩｇＧ　（Ｈ
＋Ｌ）　、１μｌチユーブ中に４℃で保存。
８　Ｌ１葭」液＝　Ｐ　Ｂ　Ｓ緩衝液、ｐＨ７，５＋０
．０５％ＴＷＥＥＮ２０ 複合体の希釈は示された希釈率においてＰＢＳ緩衝液＋
ＴＷＥＥＮ２０　（０，０５％）＋ウシアルブミン０．
５ｇ／　１００μβ中において行なわれる。
９−血症■流双援１笈−ＰＢＳ緩衝液 ＋、０．０５％ＴＷＥＥＮ２０ ＋０．５ｇＢ　Ｓ　Ａ ウシ血清アルブミン／１００ｍＡ １０−韮】コゴとＬ以 ・クエン酸緩衝ン皮ｐ）ｌ＝５．６　クエン酸ニブ−ト
リウム（Ｃ６Ｈ５Ｎａ３０７，２Ｈ２０）、０．０５Ｍ
；クエン酸（Ｃ６Ｈ８０７，Ｉ　Ｈ２０）　、０．０５
Ｍ。
・過酸化水素＝３０％（１１０容）−クエン酸緩衝液使
用中には０．０３％にて使用。
・オルトフェニレンジアミン＝Ｓ　Ｔ　ＧＭＡ緩衝液２
５ｍＡ当たり１５ｍｇ−緩衝液中において即席で希釈さ
れる。
プ２二上皇皿星 使用されるプレートは９６個のＵ字型ウェルを有する（
ＮＵＮＣ＝ＥＬ　Ｉ　ＳＡ）。それらは各々８個のウェ
ルを有する１〜１２番の番号を付けられた１２列を含む
。
抗原の分布は次の通りである。−１００μｐのｐ）！　
９．６の炭酸緩衝液中に希釈されたウィルス抗原を次の
列のウェルの各々（■のマークを付される）中に沈積す
る １−−２−５−６−−９−−１０ −１００１！のｐＨ９，６の炭酸緩衝液中に希釈された
対照抗原を次の列のウェルの各々（ｅのマークを付され
る）中に沈積する ３−−４−７−８−１１−−１２゜ ウィルス抗原の希釈液を各ウィルス産生段階において滴
定する。ウィルス抗原の数個の希釈液を試験し、陽性及
び陰性の公知の対照例（数個の希釈率において）及びペ
ルオキシダーゼで４Ｍ８Ｆｌｉ化したヒトー抗ｒｇＧと
対比し、後者は又数個の希釈率で試験される。
原則として、調製物の蛋白質濃度は５〜２．５μｇ／ｍ
７！である。
対照抗原ムこついては、同一の蛋白質濃度が使用される
。
プレートはプラスチックの蓋で閉じられ４°Ｃで８晩イ
ンキユベートされる。
次いで、それらを一度蒸溜水中に入れ、遠心分離を行う
。ウェルに次いで３００μｌのＰＢＳ１３ｊ衝液中２０
％の非ウシ胎児血清を満たす。
インキュベーションを３７°Ｃにおいて２時間継続する
（被覆プレート）。
プレートを０．０５％のＴＷＥＥＮ２０含有ＰＢＳ緩衝
液中において（ＰＢＳ−ｔｗ緩衝液）３回洗浄する： ・第１回の洗浄　３００メ！ｌ ・第２回及び第３回の洗浄２００μｌ／ウエル。
プレートを注意深く乾燥し、プラスチックの接着フィル
ムでシールする。それらは−８０°Ｃで保存することが
できる。
ＥＬＩ’ＳＡ　応：　屓１ 解凍後、プレートを３回ＰＢＳ−ＴＷＥＥＮ中で洗浄す
る。それらを注意深く乾燥する。
陽性及び陰性対照血清並びに試験血清を先ず管内におい
て０．５％のウシアルブミンを含有するＰＢＳ−ＴＷＥ
ＥＮで希釈する。
選ばれた希釈率は１／４０である。
−１００μβの各血清をウィルス抗原上に二重に沈積し
、対照抗原上に二重に沈積する。
−同一の操作を陽性及び陰性希釈血清についても行う。
一１００μＡのＰＢｓ＋ＴｗＥＥＮ＋ウシ血清アルブミ
ンを２個の■ウェル及び２個のｅウェルに導入し、複合
対照例を形成する。
それらの蓋を付したプレートを３７℃で１時間３０分イ
ンキュベートする。
それらをＰ　Ｂ　Ｓ　十Ｔ　Ｗ　Ｅ　Ｅ　Ｎｏ、０５％
中で４回洗浄する。
一−１００μｌのヒト抗−１ｇＧ　（ペルオキシダーゼ
標識）を選ばれた希釈率において各ウェル中に堆積し、
３７℃でインキュベートする。
プレートを再び（ＰＢＳ＋ＴＷＥＥＮ）緩衝液で５回洗
浄する。それらを注意深く乾燥する。
酵素反応の発現はオルトフェニレン−ジアミン基質（０
，０３％のＨ２０ｚを含有するｐＨ５，６のクエン酸緩
衝液中０．０５％）を用いて行われる。
１００μｌの基質を各ウェル中に分布する。
これらのプレートを暗室中において実験室温度において
２０分間放置する。
読み取りは分光光度計（マイクロプレート用）上で４９
２ｎｍにおいて行われる。
ウィルスに対する抗体を含有するとめなされた血清は０
．３０以上の○ＤＤ（光学密度差−ウィルス抗原の光学
密度一対照抗原の光学密度）を与えたものである。
この技術は定性的滴定並びに定量的滴定を可能にするも
のである。この目的のために被測定血清の数個の希釈液
を用いることも或いは血清の希釈液を同一条件で試験さ
れるある範囲の対照例と対比することも可能である。
下記に示す表は上記に例示したＥＬ　Ｉ　ＳＡ測定法を
用いて行われたＬＡＶ抗体の最初の血清学的検討結果を
与えるものである。
フランスにおける最初のＬＡＶ抗体の血清学的検討の結
果 ＊　２８人の同性愛者 ３人のハイチ人（女性１人） ４人の毒性患者（女性２人） ＊＊　非特異性結合のコントロールを行うことができな
かったので陽性血清の数はおそらくこの試験において過
大評価されている。
才＊＊５人のＬＡＳ　ＨＴＬＶＩ陽性のうち、３人はハ
イチ生まれであり、１人は長期間ハイチに滞在し、１人
は米国に数回の旅行を行っていた。
それらの全ては又ＬＡＶに対する抗体ををしていた。
この表はＬＡＳを有する同性愛患者中にＬ　Ａ　Ｖ抗体
の高い蔓延率、正常人における極めて低い発注率及び現
在健康な同性愛者におけるウィルス感染の適度な広がり
を明確に示している。後者の群において、全ての陽性の
個人は数多くの相手（毎年５０人を越える）を有してい
た。ＨＴＬＶ抗体の発生率は３つの群の全てにおいて極
めて低かった〔市販のＥＬ　Ｔ　ＳＡ試験試薬（１３ｉ
ｏｔｅＣｈ　）を用いて測定〕。ＡＩＤＳ患者の群はよ
り理解することのできない結果を与えた。即ち、はぼ２
０％がＬＡＶ抗体を有したが、血清の幾つかは疾患の極
めて遅い段階で採られたので体液応答が否定された可能
性がある。
更に又全でのＬＡＳ患者のリンパ球は必ずしも検知可能
のＬＡＶ型ウィルスを産生ずるものではないと言うべき
である。特に、６Å以上のＬＡＳ患者からのリンパ節細
胞を患者ｌについて述べたと同様な培養液に入れ、ウィ
ルス産生を試験した。
その結果、ＲＴ活性により何等のウィルス放出も検出す
ることができなかった。しかしながら、第１の患者の血
清から認識されたｐ２５蛋白質は、三つのその他の症例
にのいて！５Ｓ−メチオニンで標識化されたＴ−細胞の
細胞質抽出物中には検出することができた。これは、そ
の様な症例における同様なウィルスの部分的表現を示唆
する。更に、これらの患者の全て（６／６）はＬＡＶｐ
　２５蛋白質に対する抗体を有し、彼等が全て同様な或
いは同一なウィルスにより感染されていたことを示した
。
興味深いことに、患者の１人（患者２）のリンパ球にお
いては、ＨＴＬＶｌに対して産生されたヤギ抗血清を用
いた場合に弱いが、しかし特定の同一径（ｐ２４〜ｐ２
５）のバンドの免疫沈澱があった。同様に、この患者の
血清はＨＴＬＶ及びＬＡＶに対する抗体を有し、いずれ
のウィルスにもよる二重感染を示唆する。その様な症例
はむしろめずらしいように思われる。
本発明は最後に又特に動物中のｐ２５に対する抗体或い
はモノクローナル抗体の産生のための、ｐ２５蛋白質を
含有するＬＡＶ抽出物或いは精製ｐ２５蛋白質により形
成することのできる生物学的試薬に関するも４のである
。これらの抗体はＬへ■ウィルス或いはＬＡＶ関連ウィ
ルスの抗原決定基を更に研究する際に有用な手段となり
得る。
言語の容易性により、リンパ球のある下部集団或いは関
連するモノクローナル抗体の命名に関して用いられたＯ
ＫＴ命名は、その所有者により登録されていると否とを
問わず、如何なる対応する商標の有効性に反するもので
はない。
更に又、ウィルス抽出物、特にウィルスライゼート或い
は富化画分は又、菌株ＬＡＶＩ、１．ＤＡＶｌ或いはｒ
ＤＡＶ２から得ることのできるｐ２５蛋白質を含有する
抽出物或いは富化画分とのそれらの免疫学的関連或いは
類似性により定義することも可能である。この様にＬＡ
Ｖｌ、ＩＤＡＶＩ或いはＩＤＡＶ２の蛋白質抽出物が同
一血清と行う類似パターンの免疫学的反応を与えること
のできる任意の蛋白質画分はそれらの等漬物と考えられ
なければならず、従って本発明の特許請求の範囲に含ま
れるものである。同様な結論は、勿論その様な等価の蛋
白質抽出物を利用する診断手段（方法及びキット）にも
当てはまるものである。
ＬＡＶ　１ウイルスは、”　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　Ｎ
ａｔｉｏｎａｌｅｄｅｓ　ＣｕＸｔｕｒｅＳｄｅ　Ｍｉ
ｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ”　（Ｃ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、
）に番号１’−２３２として１９８３年７月１５日に寄
託され、Ｉ　ＤＡＶｌ及びＩＤＡＶ２は、Ｃ，Ｎ、Ｃ。
■、に１９８３年９月１５日にそれぞれ番号ｌ−２４０
及びｌ−２４１として寄託された。本発明は実質的に同
一の免疫学的特性を有する限り上記寄託藺株の変異種（
突然変異種）或いは変種の抽出物も包含するものである
。
【図面の簡単な説明】
図は患者１からのウィルスについて行われた分析の結果
を示す図である。 第１頁の続き ◎Ｉｎｔ　、ＣＩ　、”　識別記号 ０発　明　者　ジャンークロード・シ ェルマン ＠発明者　フランソワ・パールー シヌツシ ０発　明　者　フランソワ・ベジネッ トープラン ０発　明　者　クリステイン・ルーシ ュ ０発　明　者　ビリー・ローゼンポー ム ０発　明　者　シャルル・ドーグ− ０発　明　者　ジャークリーヌ・グリ ュスト ■発明者　マリエーテレーズ・ニ ュジエール ＠発明者　フランソワ・レイ 庁内整理番号 フランス国、９２１３０　イック・し・ムーリニュー、
５０リユー・デルパン、ル・カーブリコーネ１０４フラ
ンス国、７５００５　パリ、ブールバール・サン−ジェ
ルマン　２４ フランス国、７５０１５　パリ、リュー・ドウ・ダンツ
イーク１ フランス国、７５０１１　パリ、バッサ−シュ・ドウ・
う・マンΦドール　１１ フランス国、７５００１　パリ、リュー・ジャン−ジャ
ーク・ルソー１９ フランス国、９４２４０　ラエイ・し・ローズ、リュー
・デュ・ゲ　６ フランス国、７５０１５　パリ、リュー・ドウ・う・ク
ロ７・ニベール　２４１ フランス国、７５０１４　パリ、リュー・ドデツサ　１
００発　明　者　クローディーヌ・アセ ラー”−ブラン ｏ発　明　者　ソランシュ・シャマー レ ■出願人　フランソワ・ハールー シヌツシ ｏ出　Ｍ　人　フランソワ・ベジネッ トープラン ■出　願　人　クリステイン・ルーシ ュ ■出　願　人　ビリー・ローゼンボー ム ■出　願人　シャルル・ドーゲー ■出　願　人　ジャークリーヌ・グリ ュスト ■出　願　人　マリエーテレーズ・ニ ュジエール ■出願人　フランソワ・レイ ０出　願　人　クローディーヌ・アセ ラーーブラン ■出願　人　ソランシュ・シャマー フランス国、７５０１５　パリ、リュー・ルクールベ　
１３７フランス国、７５０１５　パリ、リュー・ルクー
ルベ　３２４フランス国、９２３１０　イック・し・ム
ーリニュー、５０　リュー・デルパン、ル・カーフリコ
ーネ１０４フランス国、７５００５　パリ、フールバー
ル・サン−ジェルマン　２４ フランス国、７５０１５　パリ、リュー・ドウ・ダンツ
イーク１ フランス国、７５０１１　パリ、バッサ−シュ・ドウ・
う・マン・ドール　１１ フランス国、７５００１　パリ、リュー・ジャン−ジャ
ーク・ルソー　１９ フランス国、９４２４０　ラエイ・しφローズ、リュー
・デュ・ゲ　６ フランス国、７５０１５　パリ、リュー・ドウ・う拳り
ロワ・ニベール　２４１

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、ＬＡＳ及びＡＩＤＳ罹患患者の血清により免疫学的
    に認識され、Ｔ−リンパ栄養的−レトロウィルスから得
    られるレトロウィルス抽出物であって、その好ましい標
    的がＬｅｕ　３細胞よりなり、Ｍ　ｇ　ｌ＋イオンの存
    在を要求し且つポリ　（アデニレートーオリゴデオキシ
    ーチミジラーゼ）〔ポリ（Ａ）−オリゴ（ｄＴ）１２−
    ＋６〕に対して強い親和性を示す逆転写酵素活性を有し
    、蔗糖勾配中において１，１６０密度を有し、１３９ナ
    ノメータの平均直径及び４１ナノメータの平均直径のコ
    アを有し、その膜蛋白質がＬＡＳ及びＡＩＤＳ罹患患者
    の血清により免疫学的に検出されず、該血清により免疫
    学的に認識され、及びｐ１９蛋白質を有さないＨＴＬＶ
    ウィルスのｐ２４蛋白質抗血清により免疫学的に認識さ
    れないｐ２５蛋白質を含有することを特徴とするレトロ
    ウィルス抽出物。 ２、ＬＡＳ及びＡ、ＩＤＳ罹患患者の血清により免疫学
    的に認識され、Ｃ，Ｎ、Ｃ，Ｍ、にｌ−２３２、ｌ−２
    ４０及びｌ−２４１の番号で寄託されているレトロウィ
    ルスの任意のものから得ることができるレトロウィルス
    抽出物。 ３、特許請求の範囲第１項或いは第２項記載のレトロウ
    ィルス抽出物に免疫学的に関連しているレトロウィルス
    抽出物。 ４、該レトロウィルスの粗製ライゼートよりなる特許請
    求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載のレトロウィ
    ルス抽出物。 ５、精製状態にある特許請求の範囲第１項〜第４項のい
    ずれかに記載の抽出物のｐ２５蛋白質。 ６、診断患者から得られた血清或いはその他の生物学的
    媒体を特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載
    のレトロウィルス抽出物或いは特許請求の範囲第５項記
    載の精製ｐ２５蛋白質と接触させ、及び免疫学的反応を
    検出することを特徴とするＬＡＳ或いはＡＩＤＳのｉｎ
    　ｖｉｔｒｏ診断方法。 ７．ＬＡＳ或いはＡＩＤＳ罹患患者からの血清分析用キ
    ットにおいて、標識化された特許請求の範囲第１項〜第
    ４項のいずれかに記載のレトロウィルス抽出物或いは特
    許請求の範囲第５項記載の精製蛋白質、ヒト抗−免疫グ
    ロブリン、健康人から得られたリンパ球抽出物、緩衝液
    及び適当であれば標識の視覚化のための基材、標識化試
    薬と分析血清との免疫学的反応から得られる標識化複合
    体を検出するための手段、よりなることを特徴とするキ
    ット。 ８、ＬＡＳ或いはＡＩＤＳ分析用キ、トにおいて、特許
    請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載のしＩ・ロ
    ウィルス抽出物或いは特許請求の範囲第５項記載の精製
    蛋白質、標識化されたヒト抗−免疫グロブリン、健康人
    から得られたリンパ球抽出物、緩衝液及び適当であれば
    標識の視覚化のための基材、及び標識化試薬と分析血清
    との免疫学的反応から得られる標識化複合体を検出する
    ための手段よりなることを特徴とするキ・、２ト。
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