JPS606868A - 免疫活性物質を塗布するための支持体 - Google Patents
免疫活性物質を塗布するための支持体Info
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- JPS606868A JPS606868A JP59098915A JP9891584A JPS606868A JP S606868 A JPS606868 A JP S606868A JP 59098915 A JP59098915 A JP 59098915A JP 9891584 A JP9891584 A JP 9891584A JP S606868 A JPS606868 A JP S606868A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/545—Synthetic resin
-
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- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の目的
免疫学では、免疫性物質の結合された表面を有するシラ
スチック物品が頻繁に使用される。
スチック物品が頻繁に使用される。
このような免疫性物質の塗布されたシラスチック物品を
使用することによって免疫学的試験法で通常必要な、非
結合部分から結合部分を分離することが容易になる。す
なわち例えば抗原又はハプテンを測定するためのラジオ
イムノアッセイ（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
）及び酵素免疫定置法（Ｅｎｚｙｍｉｍｍｕｎｏａｓｓ
ａｙ ）は、測定すべき抗原又はハプテンを含有する溶
液を、該抗原又はハプテンに適合せる抗体を塗布した内
面を有するプラスチック容器中に入れることによって実
施さ」する。さらに同容器中に、例えば酵素又は放射性
物質を用いて特徴的に標識された抗原又はハシテンの既
知量を与える。すると測定ずべき抗原／ハシテンと標識
抗原／ハプテンとが抗体結合位置をめぐって競争する。
使用することによって免疫学的試験法で通常必要な、非
結合部分から結合部分を分離することが容易になる。す
なわち例えば抗原又はハプテンを測定するためのラジオ
イムノアッセイ（Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
）及び酵素免疫定置法（Ｅｎｚｙｍｉｍｍｕｎｏａｓｓ
ａｙ ）は、測定すべき抗原又はハプテンを含有する溶
液を、該抗原又はハプテンに適合せる抗体を塗布した内
面を有するプラスチック容器中に入れることによって実
施さ」する。さらに同容器中に、例えば酵素又は放射性
物質を用いて特徴的に標識された抗原又はハシテンの既
知量を与える。すると測定ずべき抗原／ハシテンと標識
抗原／ハプテンとが抗体結合位置をめぐって競争する。
抗体に結合された抗原又はハシテンの量と溶液中に残存
する遊離量との間の平衡が生じる。遊離量を含む溶液を
容器から除去する。抗体によって結合された量は容器壁
に付着しており、そこで検出することができる。
する遊離量との間の平衡が生じる。遊離量を含む溶液を
容器から除去する。抗体によって結合された量は容器壁
に付着しており、そこで検出することができる。
相互に比較可能な数回の測定を実施するためには、プラ
スチック容器の塗布が相応の抗体（抗原又はハシテンを
検出する目的の場合）か又は抗原又はハプテン（抗体を
検出する目的の場合）を用いて極めて大きい均一性をも
って行なわれる必要がある。塗布密度が容器ごとに変動
すると、これは極めて鋭敏な免疫反応に影響を及ぼす。
スチック容器の塗布が相応の抗体（抗原又はハシテンを
検出する目的の場合）か又は抗原又はハプテン（抗体を
検出する目的の場合）を用いて極めて大きい均一性をも
って行なわれる必要がある。塗布密度が容器ごとに変動
すると、これは極めて鋭敏な免疫反応に影響を及ぼす。
測定結果は狂って（る。
従来の技術：
種々の支持体が種々のプラスチックから成る板、球、ス
） ＩＪッゾ、小さい棒又は試験管の形で市販されてい
る。これらの市販の支持体を免疫性物質で塗布する場合
、塗布密度、ひいては免疫反応の際に得られる測定結果
が著しく変動する。感度の高い免疫試験では一般に許容
されえない変動係数が観察される。Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ
−２６（１９８０）７４１〜７４４頁には例えばポリス
チロールから成る微小力価板（Ｍｉｃｒｏｔｉ ｔｅｒ
ｐｌａｔｔｅ ）の場合、５．２〜２９．５ ％の変動
係数が記載されている。
） ＩＪッゾ、小さい棒又は試験管の形で市販されてい
る。これらの市販の支持体を免疫性物質で塗布する場合
、塗布密度、ひいては免疫反応の際に得られる測定結果
が著しく変動する。感度の高い免疫試験では一般に許容
されえない変動係数が観察される。Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ
−２６（１９８０）７４１〜７４４頁には例えばポリス
チロールから成る微小力価板（Ｍｉｃｒｏｔｉ ｔｅｒ
ｐｌａｔｔｅ ）の場合、５．２〜２９．５ ％の変動
係数が記載されている。
従来、変動係数を改善するという試みがな（・ことはな
かった。ずなわち例えば西独固持許出願公開第２５４４
３６６号明卸ｊ岩によれば、支持体表面への免疫性物質
の結合をグルり／Ｌノアルデヒド架橋によって強化して
一様にすることが試みられで（・る。また塗布時間の変
化によって。
かった。ずなわち例えば西独固持許出願公開第２５４４
３６６号明卸ｊ岩によれば、支持体表面への免疫性物質
の結合をグルり／Ｌノアルデヒド架橋によって強化して
一様にすることが試みられで（・る。また塗布時間の変
化によって。
前塗布又は後塗布を用いて一様の塗布密度を得ろことも
試みられた〔ビオヒエミカ・工・ビメフイジカ・アクタ
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Δｃｔａ）４９２（１９７７）、３９９〜４０７頁〕。
試みられた〔ビオヒエミカ・工・ビメフイジカ・アクタ
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Δｃｔａ）４９２（１９７７）、３９９〜４０７頁〕。
さらにＪ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｂｏｄｓ ２３
（１９７８）、２３〜２８頁ならびに４７（１９δ１
）。
（１９７８）、２３〜２８頁ならびに４７（１９δ１
）。
］、 ２１〜ｌ ２４頁には、洗浄剤（Ｔｗｅｅｎ ２
０又はＴｗｅｅｎ ８０ ）を添加して支持体表面一・
免疫性物質の吸着を強化することが報告されている・・
また塗布密度を均一に設計する他の試みの本質は、免疫
性物質を支持体表面に共有結合することであった。この
原理は例えば西独固持π［出願公開第２７３８１３８号
に提案されて（・る。
０又はＴｗｅｅｎ ８０ ）を添加して支持体表面一・
免疫性物質の吸着を強化することが報告されている・・
また塗布密度を均一に設計する他の試みの本質は、免疫
性物質を支持体表面に共有結合することであった。この
原理は例えば西独固持π［出願公開第２７３８１３８号
に提案されて（・る。
これらすべての努力によってプラスチック表面への抗体
又は抗原の結合が強化され、また変動係数も改善された
。従来使用されている市販製品は５〜１０％の変動係数
を有している。従ってこれらの材料を用いて得られる測
定結果が実地において満足できるような程度に均一な塗
布密度を得ることは奏効しなかった。
又は抗原の結合が強化され、また変動係数も改善された
。従来使用されている市販製品は５〜１０％の変動係数
を有している。従ってこれらの材料を用いて得られる測
定結果が実地において満足できるような程度に均一な塗
布密度を得ることは奏効しなかった。
発明が解決しようとする問題点：
本発明の課題は、免疫活性物質を均一に塗布しうるプラ
スチック支持体を製造することであった〇 発明の構成 問題点を解決するための手段： 前記′課題は、１重量係未満の助剤及び添加物を含有す
るプラスチックより成る支持体を製造することによって
解決される。
スチック支持体を製造することであった〇 発明の構成 問題点を解決するための手段： 前記′課題は、１重量係未満の助剤及び添加物を含有す
るプラスチックより成る支持体を製造することによって
解決される。
免疫学用のこのようなプラスチック物品の製造のために
従来使用されたプラスチックは通常、プラスチックに応
じて１〜５０重量係重量剤及び添加物を含有している。
従来使用されたプラスチックは通常、プラスチックに応
じて１〜５０重量係重量剤及び添加物を含有している。
このような助剤及び添加物としては通常安定剤、滑剤、
可塑剤、離型剤、顔料、充填剤等が使用さ」しる。グリ
スチック支持体の製造のため（で頻繁に使用きＪするプ
ラスチックたるシラン（Ｌｕｒａｎ ）し１．１９１）
えばポ゛り塩化ビニル１〜５重ｇ係、前記のような添加
物を５０重量係までも含有し又いる。・プラスチックと
し、では本発明の場合原則的には、射出成形法でプラス
チック物体を製糸−４“るのに適当なずべてのプラスチ
ックを使用４−ることができる。本発明によるグリスチ
ック支持体の製造のためには特に、ポリスチロール、ハ
シテン又はポリ塩化ビニルが有利であると判明した。
可塑剤、離型剤、顔料、充填剤等が使用さ」しる。グリ
スチック支持体の製造のため（で頻繁に使用きＪするプ
ラスチックたるシラン（Ｌｕｒａｎ ）し１．１９１）
えばポ゛り塩化ビニル１〜５重ｇ係、前記のような添加
物を５０重量係までも含有し又いる。・プラスチックと
し、では本発明の場合原則的には、射出成形法でプラス
チック物体を製糸−４“るのに適当なずべてのプラスチ
ックを使用４−ることができる。本発明によるグリスチ
ック支持体の製造のためには特に、ポリスチロール、ハ
シテン又はポリ塩化ビニルが有利であると判明した。
ただ、助剤及添加剤の含量が１重量係未満であるような
プラスチック装入材料のみを使用するように注意しなけ
ればならない。好ましくは０゜０２重量多未満の助剤及
び添加物を含有するルラン装人材料又は０．０５重緻係
未満の助剤及び添加物を含有するポリスチロール装入材
料のみを使用する。
プラスチック装入材料のみを使用するように注意しなけ
ればならない。好ましくは０゜０２重量多未満の助剤及
び添加物を含有するルラン装人材料又は０．０５重緻係
未満の助剤及び添加物を含有するポリスチロール装入材
料のみを使用する。
プラスチック支持体は如何なる任意の形状でも製造する
ことができる。板、球、試験管又はストリップ及び小さ
い棒が用いらり、る。
ことができる。板、球、試験管又はストリップ及び小さ
い棒が用いらり、る。
プラスチック支持体は通常射出成形法で製造される。射
出成形の条件は、使用されるプラスチック及び射出成形
装置に依存してメーカーのデータによυ修得されうる常
用範囲で選択することができる。通常、１００〜２５０
パールの範囲の圧力及び１９０〜２８０℃の範囲の射出
温度が選択される。しかし、射出工程の間の使用圧力及
び使用温度は狭い範囲で保つことに注意しなければなら
ない。圧力の変動は±２パール以下、温度の変動は±２
°Ｃ以下でなければならない。さらに最適な成績を得る
ためには射出金型の表面が極めて均質であって、凹凸を
有しないこと及び射出成形金型が、好ましくけ２０〜４
０℃でありかっ±１℃以下で変動する温度に、様に冷却
されることが必要である。
出成形の条件は、使用されるプラスチック及び射出成形
装置に依存してメーカーのデータによυ修得されうる常
用範囲で選択することができる。通常、１００〜２５０
パールの範囲の圧力及び１９０〜２８０℃の範囲の射出
温度が選択される。しかし、射出工程の間の使用圧力及
び使用温度は狭い範囲で保つことに注意しなければなら
ない。圧力の変動は±２パール以下、温度の変動は±２
°Ｃ以下でなければならない。さらに最適な成績を得る
ためには射出金型の表面が極めて均質であって、凹凸を
有しないこと及び射出成形金型が、好ましくけ２０〜４
０℃でありかっ±１℃以下で変動する温度に、様に冷却
されることが必要である。
本発明によ勺製造されたプラスチック支持体には、公知
のようにして一免疫活性物質、すなわち抗体、抗原及び
ハシテンを塗布することができる。このために免疫活性
物質の溶液を塗布のために十分な時間に亘ってプラスチ
ック支持体上に作用させる。溶剤としては一般に、適当
な緩衝剤を含有する水を使用する。溶液のｐ Ｈ値は重
要ではなく、大体において塗布月利に依存する。ｐＨ値
は通常５．０〜８０、好ましくは中性の範囲にある。プ
ラスチック支持体の完全な塗布のためには一般には１２
〜２４時間の作用時間で十分である。温度は１５〜３０
°Ｃの範囲で選択することができる。しかし温度は保温
（Ｉｎｋｕｂａｔｉｏｎ ）の間は±０，５℃内でのみ
変動しなければならない。
のようにして一免疫活性物質、すなわち抗体、抗原及び
ハシテンを塗布することができる。このために免疫活性
物質の溶液を塗布のために十分な時間に亘ってプラスチ
ック支持体上に作用させる。溶剤としては一般に、適当
な緩衝剤を含有する水を使用する。溶液のｐ Ｈ値は重
要ではなく、大体において塗布月利に依存する。ｐＨ値
は通常５．０〜８０、好ましくは中性の範囲にある。プ
ラスチック支持体の完全な塗布のためには一般には１２
〜２４時間の作用時間で十分である。温度は１５〜３０
°Ｃの範囲で選択することができる。しかし温度は保温
（Ｉｎｋｕｂａｔｉｏｎ ）の間は±０，５℃内でのみ
変動しなければならない。
η％宵卑へ鴬す卑惧颯へ鷲へ〆
実際上の塗布に続いて後塗布を行ない、この際免疫性物
質の塗布されたプラスチック支持体を、適当な塩例えば
塩化ナトリウム及び安定剤例えばウシ血清アルブミンを
含有する溶液に暴露するのが有利であると判明した。後
塗布のためには１０〜１２０分、好ましくは１５〜６０
分で十分である。
質の塗布されたプラスチック支持体を、適当な塩例えば
塩化ナトリウム及び安定剤例えばウシ血清アルブミンを
含有する溶液に暴露するのが有利であると判明した。後
塗布のためには１０〜１２０分、好ましくは１５〜６０
分で十分である。
このように塗布された試験管は無菌的に包装され、その
まま市場に運ばれる、該試験管は数ケ月安定であり、通
常の免疫試験法で使用することができる。該試験はく５
の変動係数を有する０本発明によるプラスチック支持体
を用いて得られる試験結果は、従来慣用のプラスチック
支持体を用いて同様にして得られた結果よりも明らかに
小さい変動幅を有する。
まま市場に運ばれる、該試験管は数ケ月安定であり、通
常の免疫試験法で使用することができる。該試験はく５
の変動係数を有する０本発明によるプラスチック支持体
を用いて得られる試験結果は、従来慣用のプラスチック
支持体を用いて同様にして得られた結果よりも明らかに
小さい変動幅を有する。
実施例：
例１
抗体溶液
燐酸二水素すトリウム−水和物（極上）９５２１を水５
１に溶かしかつ５Ｎ苛性ソーダ溶液でＰＨ７，１に調整
する。この溶液を水１Ｇ５１中に導入攪拌する。場合に
よっては５Ｎ苛性ソーダ溶液を加えてＰｌ（値を７１〜
７．４に調整する。
１に溶かしかつ５Ｎ苛性ソーダ溶液でＰＨ７，１に調整
する。この溶液を水１Ｇ５１中に導入攪拌する。場合に
よっては５Ｎ苛性ソーダ溶液を加えてＰｌ（値を７１〜
７．４に調整する。
この緩衝ｉ ５００ ｍｌ中に抗血清８．５ ｍｌ 及
びウシ血清アルブミン８．５ ｍｌの溶液を入れて３０
分間攪拌する。こうして得られた抗血清溶液を緩衝液を
補充して２ｇとなし、さらに３０分間攪拌する。この溶
液を残りの緩衝液と一緒にして再び３０分間攪拌する。
びウシ血清アルブミン８．５ ｍｌの溶液を入れて３０
分間攪拌する。こうして得られた抗血清溶液を緩衝液を
補充して２ｇとなし、さらに３０分間攪拌する。この溶
液を残りの緩衝液と一緒にして再び３０分間攪拌する。
塗布
ポリスチロール１６８Ｎ Ｋ２１（添加物：〈０、９％
含有）よりなる試験管１００．０００個にそれぞれ抗体
溶液ｌ、 ５ ｍｌ＋ ３％を入れる。抗体溶液を２０
±０．５℃で１６〜１８時間試験管」−作用させ、次い
で吸引する、 後塗布 先ず塩化すトリウム（極上）１７１０５’、ウシｍ１１
の血清アルブミン５７０７−を水１８０１３中に溶かし
、３０分間攪拌し、夜通し室温で放置する。抗体の塗布
された試験管に前記後塗布溶液の１．７ ｍｌ＋ ５％
を入れる。同溶液を試験管上に１５〜３０分作用させる
。次に該試験管を空にし、２回洗浄しかつ乾燥箱で１４
〜１６時間乾燥する。
含有）よりなる試験管１００．０００個にそれぞれ抗体
溶液ｌ、 ５ ｍｌ＋ ３％を入れる。抗体溶液を２０
±０．５℃で１６〜１８時間試験管」−作用させ、次い
で吸引する、 後塗布 先ず塩化すトリウム（極上）１７１０５’、ウシｍ１１
の血清アルブミン５７０７−を水１８０１３中に溶かし
、３０分間攪拌し、夜通し室温で放置する。抗体の塗布
された試験管に前記後塗布溶液の１．７ ｍｌ＋ ５％
を入れる。同溶液を試験管上に１５〜３０分作用させる
。次に該試験管を空にし、２回洗浄しかつ乾燥箱で１４
〜１６時間乾燥する。
変動係数の決定
塗布材料の各下部単位（試験管◇１０．０００）から任
意に試験管１００個（全ｌ係）を取出して記録する。該
試験管を２群に分けて第１組及び第２組の試験のために
それぞれ５ｏ個の試験管群にする。第１組の試験管を用
いて慣用の酵素免疫試験を行なう。基質反応終了後に溶
液を、光度計により通過セル中の基質溶液と比べて測定
し、得られた吸光度の値を記録ずろ。
意に試験管１００個（全ｌ係）を取出して記録する。該
試験管を２群に分けて第１組及び第２組の試験のために
それぞれ５ｏ個の試験管群にする。第１組の試験管を用
いて慣用の酵素免疫試験を行なう。基質反応終了後に溶
液を、光度計により通過セル中の基質溶液と比べて測定
し、得られた吸光度の値を記録ずろ。
個々の吸光度Ｅ１〜Ｅ５ｏから平均吸光度百を語算する
。標準偏差Ｓは方程式（１）： （１） により決定され、変動係数ＶＫは方程式（２）：ＶＫ＝
Ｓ／百〔係〕 により決定される。
。標準偏差Ｓは方程式（１）： （１） により決定され、変動係数ＶＫは方程式（２）：ＶＫ＝
Ｓ／百〔係〕 により決定される。
ポリスチロール１６８Ｎ Ｋ２１から製造された上記試
験管の場合にはこのようにしてＶｌ（＝２．８係の変動
係数が得られる。。
験管の場合にはこのようにしてＶｌ（＝２．８係の変動
係数が得られる。。
Claims (1)
- １．１重量係未満の助剤及び添加物を含有するプラスチ
ックより成ることを特徴とする免疫活性物質を塗布する
ための支持体。 ２、 プラスチックとしてポリスチロール、シラス、ポ
リプロピレン及び／又はポリ塩化ビニルを使用する特許
請求の範囲第１項記載の支持体・ ３、 プラスチックとして０．０２重量係未満の助剤及
び添加物を含有するシラス又は０．０５重量係未満の助
剤及び添加物を含有する。（Ｆ ＩＪスチロールを使用
する特許請求の範囲第１項又は第２項記載の支持体−
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3318184A DE3318184A1 (de) | 1983-05-19 | 1983-05-19 | Traeger zur beschichtung mit immunologisch aktivem material |
| DE33181845 | 1983-05-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS606868A true JPS606868A (ja) | 1985-01-14 |
| JPH0519105B2 JPH0519105B2 (ja) | 1993-03-15 |
Family
ID=6199356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59098915A Granted JPS606868A (ja) | 1983-05-19 | 1984-05-18 | 免疫活性物質を塗布するための支持体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4980299A (ja) |
| EP (1) | EP0126392B1 (ja) |
| JP (1) | JPS606868A (ja) |
| AT (1) | ATE55488T1 (ja) |
| DE (2) | DE3318184A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6266141A (ja) * | 1985-09-19 | 1987-03-25 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 螢光免疫測定法用容器 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE42640T1 (de) * | 1985-09-09 | 1989-05-15 | Progen Biotechnik Gmbh | Verfahren zum immobilisieren von substanzen an kunststoffestphasen und kunststoffestphasen zur verwendung in immunosorbentassays. |
| DE3637421C1 (de) * | 1986-11-03 | 1987-10-29 | Nerbe Plus Ges Fuer Medizinisc | Reaktionsgefaess fuer die Blutgerinnungsreaktion |
| US5262484A (en) * | 1989-04-10 | 1993-11-16 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Azlactone graft copolymers |
| DE19712484C2 (de) * | 1997-03-25 | 1999-07-08 | Greiner Gmbh | Microplatte mit transparentem Boden und Verfahren zu deren Herstellung |
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| DE202008014837U1 (de) | 2008-11-07 | 2010-03-11 | Aj Roboscreen Gmbh | Vorrichtung für die Aufnahme verbundener Reaktionsräume |
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| RU2757771C2 (ru) | 2017-02-07 | 2021-10-21 | Люфстоун Ас | Биомаркеры для диагностики связанного с имплантом риска повторной операции с имплантом из-за асептического расшатывания |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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