JPS6070096A - Ｓ−ヌクレオシジル−ｌ−ホモシステインの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、微生物の菌体または菌体処理物を酵素源とし
て用いる特定なヌクレオシドとホモシスティンから対応
するＳ−ヌクレオンジルーＬ−ホモシ、スティンを効率
良く酵素合成して採取する方法に関する。

本発明におけるＳ−ヌクレオンジルーＬ−ホモシスティ
ンは、生体内における活性メチルサイクルに関与する重
要な生理活性物質である日−アプツシルーＬ−ホモシス
ティンの構造類似体であ勺。

新規抗生物質や試薬としての利用が考えられ、その大量
生産が期待されている。

従来％Ｓ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシスティンの製造
方法としては牛の肝臓やルピナスの種子より精製された
Ｓ−アデノシルホモシスティンハイドロラーゼを酵素源
としてホモシスティンと３−ゾアザアデノシン、２−ア
ザ−３−デアザアデノクン、ネブラリンなどのヌクレオ
シド類を反応させ、対応するＳ−ヌクレオシジルーＬ−
ホモンステインを合成する方法が知られている〔例えば
バイオケミストリー（Ｂｉｏａｈａｍｉｓｔｒｙ　）　
２０　。

１１０　（１９８１））。しかしながら、かかる方法Ｉ
ｄＢ−アデノシルホモンステインハイドロラーゼの調整
に非常に経費がかかり、工業的製造法とは言い難い。

そこで本発明者らは、Ｂ−ヌクレオンジルーＬ−ホモシ
スティンの酵素的合成法に関して種々検討を加えた結果
、特定な微生物を用いる場合には精製された酵素を用い
る必要がなく、菌体磨砕物であっても、さらには生菌体
や乾燥菌体の形態であっても効率よく目的物を合成しう
ろことを見い出し本発明を完成するに到った。

かくして本発明によれば、８−アザ−９−デアザアデノ
シン、ネブラリン、アデノシン−Ｎ′−オキシド、３−
デアザアデノシン、２−アザ−３−デアザアデノシン、
２−クロロアデノクン％　７−デアザアデノクン　Ｎ６
−メチルアデノシン、イノシン及び１−メチルアデノシ
ンから選ばれるヌクレオシドとホモシスティンを、アエ
ロバクタ−（Ａｏｒｏｂａｃｔｅｒ　）属、アグロバク
テリウム（Ｐａｅｕ４ｏｍｏｎａｓ）属、アルカリゲネ
ス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｇ）（Ｃａｎａｉｄａ　）　
１４、サツカロマイコブシス（Ｌｉｐｏｍｙａ＊ｇ　）
属、スポロポロマイセス属、クロエケラ（Ｋｌｏ＊ｏｋ
ｅｒａ）属、ウイケルハミア（Ｗ専竺ｅｒｈａｍｉａ　
）属、トルラ（Ｔｏｒｕｌｍ　）属、ロドトルラ（Ｒｈ
ｏａｏｔｏｒｕｌｍ　）属、トリコスポロン属に属する
酵母類：ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、リゾプスツクス（
日ｐｏｒｏｔｈｒｉｘ　）属、ベルチシリウムテウム（
Ｅｕｒｏｔｉｕｍ　）　５７４、ンリンドロカルボン（
Ｎｏｃａｒ！ｉａ　）属、ストレプトベルチシリウム属
、レンチヌス（Ｌθｎｔｉｎｕｇ　）属、リオフイラム
（ＬｙＯｐｈｙｌｌｕｍ　）属、ビクノボラス（Ｐｙｃ
ｎｏｐｏｒｕｓ　）属、レビスタ（Ｌｅｐｉｅｔａ　）
属に属する担子菌類に属し、かつ前記ヌクレオシドとホ
モシスティンから対応するＳ−ヌクレオシジルーＬ−ホ
モシスティンを合成する能力を有する微生物の菌体また
は菌体処理物の存在下に水性媒体中で接触させて反応せ
しめ、前記Ｓ−ヌクレオンジルーＬ−ホモンステインを
合成して採取することを特徴とするＢ−ヌクレオンジル
ーＬ−ホモンステイン類の製造法が提供される◎ 本発明において酵素源として用いられる微生物は、上記
の属に属し菌体または菌体処理物の形態で前記ヌクレオ
シドとホモシスティンから対応スるＢ−ヌクレオンジル
ーＬ−ホモシステインヲ合成できる能力を有するもので
あればいずれでもよく、その具体例としては、アエロバ
クタ−・クロアカ！　（Ａｅｒｏｂａａｔｅｒ　ｃｘｏ
ａｏａ＊　）　ＩＡＭ　１２２１、アグロバクテリウム
・チュメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　
ｔｕｉｏｅｆａｃｉｅｎｓ）■７０１３２１５５゜ミク
ロコツカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕａ　１ｕ
ｔｅｕす１：ＦＯ３３３３％コリネバクテリウム・ファ
ンアンス（」ユワμすａｃｔｅｒｉｕｍ　ｆａｓａｉａ
ｎｓ）工Ｐ０１２０７７、アルスロバクタ−・プロビフ
オルミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｅｔａｒｌｏｄｉｎｕｍ）
工ＦＯ！１５５８、キサントモナス・キャンペストリス
（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｅ　ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）工
ＡＭ１６７１、ロドシュードモナス・スフェロイデス−
９７Ｍａｒ （Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕ４ｏｍｏｎａｓ　５ｐｈｅｒｏｉ
ｄｅｓ）　工ＦＯｐｕｔｉｉｔ　）■Ｆｏ　１２９９６
、シュードモナス・ダキュネ（Ｐｓｅｕ４ｏｍｏｎａｇ
　ａａｅｕｎｈａｅ）工ＦＯ１２０４８、シュードモナ
ス・エルギノーザ（Ｐｓｅｕ４ｏｍｏｎａｅａａｒｕｇ
ｉｎｏｓａ　）工Ｆ０　３４４５、アルカリゲネス・７
エカリスＣＡＩＱｌｌｉｇｌｌｌｎ＠＃　ｆａｅｃａｌ
ｉａ　）　Ｉ　Ｐ　０１２６６９％アルカリゲネス・フ
ェカリス　エＦ○１３１１１、アルカリゲネス・ユウト
ロフス（Ａｌａａｌｉｇｅｎｅｓ　＊ｕｔｒｏｐｈｕｉ
　）■ＡＭ１２３０５、アシネトバクタ−φカルコアセ
チカス １２５５２、フラボバクテリウム・ガソゲネスｆｌａｖ
ｉｇｅｎａ　）工ＦＯ３７５３，アゾトバクタ−・工Ｆ
ｏ　１２０１８．プロタミノバクメー・ルバー１０− （Ｓａａｅｈａｒｏｍｙ−ｃ阜り況ｅｒｇｖｉｓｉａａ
　）ＩＦＯ１８’０５゜キャンデイダ・ウチリス（色り
ニーユリｌｖＤ工ＦＯ０３９６、サツカロマイコブシス
・フィブリゲラ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ　
ｆｉｂｕｌｉｇｅｒａ　）工ＦＯ０１０３、ンゾサツカ
ロマイセス・ボンベ（＋３ｈｉｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍ
ｙｃｅｓ　ｐｏｍｂｅ　）工ＦＯ０３４６゜ビヒア−７
アリノサ（Ｐｉｅｈｉａ　ｆａｒｉｎｏｅａ　）工ＦＯ
０４５９、ハンゼヌラΦシルビコラ（Ｈａｎｅｅｎｕｌ
ａｓｉｌｖｉｃｏｌａ）　ＩＰｏ　０８０７．シワニオ
マイセス・工ＰＯ１３５９，サツカロマイコデス・ルド
ウイギー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｄｅｓ　１ｕｄｖ
ｉｇｉｉ　）工Ｆ１００７９８、ハンゼニアスボラ櫓バ
ルバイエンンスＩＦＯ０６７３，スポロボロマイセス・
ホルサチ（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙａｅｓ　ｔｈｅｒｍｏ
ｔｏｌｏｒａｎｓ　）■ＩＦＯ０６６２、クリプトコツ
カス・ネオフォルマンス（０ｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　
ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　）■７０　０４１０、トルロプ
シス轡キャンディダ（Ｔｏｒｕ１ｏｐｅ１ｅｏａｎ４１
ａａ　）工ＦＯ０５８０、クロエケラ・アビキュラタ（
Ｋ１ｏ＊ａｋ＠ｒａ　ａｐｉｃｕｌａｔａ）■’ＦＯＯ
１５１、ウイケルハミアーフルオレッセンス（Ｗｉｏｋ
ｅｒｈａｍｉａｆｌｕｏｖｅｓｅｅｎｓ　）工Ｆｏ　１
１１６、トルラ・デマテアｏｕｔａｎ＠ｕｍ　）工ＦＯ
１１９Ｂ、　オースボリデイウム・ｌｏｎｇｉｓｐｏｒ
ｕｓ　）工Ｆ０　１６７６などの酵母類；ムコール・ズ
ブチリスシムス（Ｍｕｏｏｒｓｕｂｔｉｌｉａｇｉｍｕ
ｓ　）工ＩＦ０　６３３Ｂ、　リゾプス轡ｃｏｒｙｍｂ
ｉｆｅｒａ　）工ＦＯ４００９、アメペルギル３６テレ
ウス（Ａ５１ｐ６ｒｇｉ’１ｌｕａ　ｔｅｒｒｅｕｓ　
）工ＦＯ６３４６、ペニシリウム・エクスパンサム（、
Ｐａｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｅｘｐａｎｓｕｍ　）工ＦＯ
５８５４、モナ９２０３、モナスカス・セロルベセンス
（Ｍｏｎａｓａｕｅとと３竪ｎ５−）ＩＦＯ６４０５、
フザリウム費りルエＰ０　６６０５．アルスロデルマψ
アンシナタム５ａｈｅｎｃｋｉｉ　）工ＦＯ５９８Ｆ＋
、ベルチシリウム。

アルボ−アトラム（ｖｅｒｔｘａｓｘｘｉｕｍ　ａｌｂ
ｏ−ａｔｒｕｍ）工ＦＯ５９２２，グリオクラディウム
・デリクエ６６１７、トリコフィトン・メンタグロフィ
テス（Ｔｒｉａｈｏｐｈｙｔｏｎ　ｍｅｎｔａｇｒｏｐ
ｈｙｔｅｓ　）工ＦＯ５８０９、フィトフトラ会インフ
ェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　１ｎｆｅｓｔ
ａｎｅ　）工ＦＯ９１７３、シリンドロカルボン・デス
トラフタンス（Ｏｙｌｉｎ！ｒｏｃａｒｐｏｎ　ｄｅａ
ｔｒｕａｔａｎａ）ＩＰｏ　５９９８などの糸状菌類：
ストレプトマイセス・バイグロスコピカス（Ｂｔｒｓｐ
ｔｏｍｙｏｅａ　ｈｙｇｒｏｓｏｏｐｉｃｕａ）工Ｆ’
０　３１９２．ストレプトマイセス・グリセオルス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙａｅａ　ｇｒｉａｅｏｌｕｓ　）工Ｆ
Ｏ３４０３、マイコバクテリウム・フレイ（Ｍｙｃｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍｐｂｌ・１）■ＩＰ０　３１５Ｂ、ノ
カルディアφアステロイデス（Ｎｏｃａｒｌｉａ　ａ＊
ｔｅｒｏ１ｄｓｓ　）工ＦＯ３４２４、ストレプトベル
チシリウムーケンタヶンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉ
ｃｉｌｌｉｕｍ　ｋａｎｔｕｃｈｅｎａｅ　）■Ｐ０１
２８８０、ミクロモノスポラ・コエルレア（Ｍｌｃｒｏ
ｍｏｎｏｓｐｏｒａ　ｃｏｅｒｕｌｅａ　）工ＦＯ１３
５０４、ミクロポリスボラ・アンジオスポラ （Ｍｉｏｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　ａｎｇｌｏｓｐｏｒ
ａ）工′Ｆ０１３１５５゜ストレプトスボランジウムー
ロゼウム （５ｔｒｅｐｔｃ＋ａｐｏｒａｎｇｉｕｍ　ｒｏｓｅｕ
リエＦＯ３７７６、ミクロエロボスボリア・ビオラセア （Ｍｉｃｒｏ−ｒｌｌ、ｏｂｏｓｐｏｒｉａ　ｖｉｏｌ
ｍｃｅａ）工ＦＯ１２５１７などの放線菌類およびグａ
エオフィラム・トラベニＦＯ６５０４、トラメテス・ギ
ボサ（Ｔｒａｎ＋ｅｔｅｓｇ１ｂｂｏｓａ　）■ＩＦＯ
４９４６、ラエチボラス壷サルフレウス（Ｉ＋ａｅｔｉ
ｐｏｒｕｓ　５ｕｌｐｈｕｒｏｕｓ）工ＦＯ６４９７、
レンチヌス瞼ニドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕａθｄｏｄθリ
エＦＯ８！ｉ４０．　リオフィラムリテヵステス（Ｌｙ
Ｏｐｈｙｘｌｕｍ　ｄｅａａ自ｔａｓ　）工ＦＯ３ＣＮ
ｌ。

ビクノボラス・コンネウス（Ｐｙｃｎｏｐｏｒｕｓｃｏ
ａｃｉｎｅｕｓ　）工Ｆ’０　９７６　Ｂ、レビスタ、
ヌダ（Ｌｅｐｉｓｔａ　ｎｕｄａ　）工ＦＯ３０１５９
などの担子菌類が挙げられる。またこれらの菌の天然及
び人工変異菌であっても前記Ｓ−ヌクレオンジルーＬ−
ホモクスティンの合成能を有するかぎ）同様に使用する
ことができる。

本発明におけるＳ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシスティ
ンの合成方法は微生物の菌体またはその処理物の形態で
菌体内酵素の作用を利用するものであるが、この酵素は
微生物を通常の方法で培養することによ、ｂｇｉｘする
ことができる。微生物を培養する培地は、炭素源、窒素
源、無機塩、有機微量栄養源を含有する通常の培地でよ
く、微生物の種類に応じて適宜選択して使用すればよい
。１だ培養方法は通常液体培地で行なわれるが５固体表
面培養によっても行うことができる。培養条件は微生物
の種類に応じて適宜選択すれば良く、温度１５〜ＢＤＣ
，ＰＨ３〜１２の範囲が用いられるが、一般的には温度
２０〜４５ｃ、　ＰＨ４〜９の範囲で１０〜ｆ２０時間
培養すれば良い。培養中には通気攪拌を行って微生物の
生育を促進させることもできる。

本発明におけるＢ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシスティ
ンの合成反応には、前記のようにして培養した微生物が
菌体または菌体処理物の形態で使用される。例えば、微
生物の培養液中の菌体をそのまま使用してもＳ−ヌクレ
オンジルーＬ−ホモシスティンの合成反応は進行するが
、培養液中の成分が障害になる場合や菌体量を多く使用
したい場合には培養液から分離した菌体を用いることが
好ましい。菌体は生菌体のままで充分に使用目的を達す
るが、貯蔵あるいは取扱いの便宜から風乾菌体、凍結乾
燥菌体、アセトン菌体などのような乾燥菌体として用い
ることもできる。また菌体そのものではなく、菌体磨砕
物や菌体抽出物のような菌体処理物の状龍で使用するこ
とも可能である。

更に菌体または菌体処理物を常法に従って固定化して使
用することもできる。

本発明における日−ヌクレオシジルーＬ−ホモンステイ
ンの合成反応は酵素反応基質である前記ヌクレオシドと
ホモシスティンとを微生物菌体または菌体処理物の存在
下に水性媒体中で接触させることによって行われる。

反応に供されるヌクレオシドは８−アザ−９−デアザア
デノシン、ネックリン、アデノシン−Ｎ′−オキシド、
３−デアザアデノシン、２〜アザ−３−デアザアデノシ
ン、２−クロロアデノシン。

７−デアザアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、イノ
シン、１−メチルアデノシンであシ、その構造式は下記
〔工〕〜〔■〕に示すとぅシである。

但し、各化合物と構造式及び記号との関係は下表のとう
シである。

特開■ａＧＯ−７００９６（６） 反応に供されるホモシスティンはＬ体、ＤＬ体のいずれ
であっても使用することができる。また反応の条件は適
宜選択すればよく、基質濃度としてヌクレオノド類を１
　ｍＭ以上、好ましくは１０〜５００ｍＭ、ホモシステ
ィン濃度を１　ｍＭ以上、好ましくは１０〜５００　ｍ
Ｍとすればよい。

なお、本発明におけるホモシスティン７、Ｃル用Ｒは反
応系内においてホモシスナインを供給する物質（例えば
ホモシスチン、ホモシスティンチオラクトンなど）をも
含むものとして理解されるべきである。

反応における系のＰＨは４〜１２、好ましくは６〜１０
に保てばよく、Ｐ’Ｈの調整は通常の方法、たとえばリ
ン酸カリウムバッファー、トリスバッファー、塩化アン
モニウムバッファー、グリシンバッファーなどによって
調整すればよい。

反応温度は５反応がよく進行し酵素活性、基質および生
成物に影譬のない温度であればよく１通常は１５〜６０
Ｃ，好ましく１−１２０〜５　ＤＣであるＯ 反応時間は基質の８−ヌクレオシジルーＬ−ホモンステ
インへの転化率が増大するように設定すればよく、バッ
チ式の場合、通常０．１〜４８時間、好ましくは０．５
〜３６時間である。その他、目的に応じて水性媒体中に
アセトン、エタノールの如き有機溶媒や各種の界面活性
剤を添加１２て反応を行わせることもできる。

かくシてＢ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシスティンを含
有する反応液が得られる。本発明におけるＳ−ヌクレオ
ンジルーＬ−ホモシステインハ前記構造式ＣＩ）、（Ｉ
［）及び［ＩＩ［）におけるーＲが一０ＩＴ、−５−（
ＯＨ，）２−ＯＲ−０００Ｈで示される代品。

金物であ多、それぞれのヌクレオシドに応じたＢ−ヌク
レオンジルーＬ−ホモシスティンが合成される。すなわ
ち、８−アザ−９−デアザアデノシンからは５−Ｓ−ア
ザ−９−デアザアデノシル−Ｌ−ホモシスティン、ネブ
ラリンからはＳ−ネブラリニルーＬ−ホモシスティン、
アデノシン−Ｎ′−オキシドからはＳ−アデノシル−Ｎ
′−オキシド−Ｌ−ホモシスティン、３−デアザアデノ
シンかうｌｒ！８−チアザアデノシル−Ｌ−ホモシステ
ィン、２−アザ−３−デアザアデノシンから１ｊｓ−２
−アザ−３−デアザアゾノンルーム−ホモシスティン、
２−クロロアデノシンからＩＪ　ｓ　−２−クロロアデ
ノシル−Ｌ−ホモシスティン、７−−ｙアザアデノシン
からは５−７−ゾアザアデノシルーＬ−ホモシスティン
　Ｎｌ５−メチルアデノンンからは＋１３−Ｎ６−メチ
ルアデツンルーＬ−ホモシスティン、イノシンからはＳ
−イノシル−Ｌ−ホモシスティン、１−メテルアデノン
ンからは５−１−メチルアゾノンルーＬ−ホモシスティ
ンがそれぞれ合成される。

反応液からＢ−ヌクレオンジルーＬ−ホモンステインを
採取する方法はとくに制限されるものでｌｄ、ｔｘ、＜
、ｆ３−アデノシル−Ｌ−ホモシスティンを単離精製す
る方法として公知の方法をそのまま採用できる。その分
離法としては、例えばＳ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシ
スティン含有液を５ｅｐｈａｄｅｘ　Ｇ　−１０カラ、
ムに通液してゲル濾過りロマトグラフイーを行なって精
製する方法、Ｓ　−ヌクレオンジルーＬ−ホモシスティ
ン含有液を強酸性カチオン交換樹脂に接触させてＳ−ヌ
クレオシジルーＬ−ホモンステインを吸着させた後、硫
酸で溶出させ、溶出液にリンタングステン酸を加えてＳ
−ヌクレオンジルーＬ−ホモシスティンを沈殿させる方
法、Ｓ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシスティン含有液を
活性炭に接触させてＳ−ヌクレオシジルーし一ホモシス
ティンを吸着させた後、エタノール／水／濃アンモニア
水（ｓｏ＝　５Ｑ：　１）で溶出させ、溶出液を減圧上
濃縮して濃縮物のＰＨを酢酸で７に調節した後、Ｓ−ヌ
クレオシジルーＬ−ホモシスティンをＯＣで晶出させる
方法などが例示される。

以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。ただし不発開拡これらの例のみに限定されるものでは
ない。

なお、実施例におけるＳ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシ
スティンの定量は次のようにして行った。

すなわち、反応終了後、反応液を直ちに０〜５Ｃに冷却
し、過塩素酸を添加して反応を停止した。

次いで遠心分離にて不溶物を除去したのち、得られた上
澄液にリン酸カリウムバッファー（ｐＨｚｏ）を添加し
て、生成した過塩素酸カリウムを遠心分離により除去し
た。かくして得られた上澄液の所定量を採取して高速液
体クロマトグラフィー（日立製作断裂％　６３８−３０
型、カラム：　Ｏｏｓｍｏｃｉ１５０１６、Ｄｅｔｅｏ
ｔｅｒ　：　ＵＶ　２６０　ｎｍ）を用いることにより
Ｓ−ヌクレオシジルーＬ−ホモシスティンの定量を実施
した。

実施例１ グルコース１ｙ／ｄｉ、ペプトン１５ｙ／ｄｔ％酵母エ
キス０．３ｆ／ｄｌ、に２ＨＰＯ４０，３ｆｌ／（１１
％Ｎａｐ１０．２ｙ／ｄｔ；、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０２ｆｌ／ｄ１．寒天２ｙ７ｃｔｔからなる寒天斜面
培地（ＰＨ７，０）で２８Ｃ１２４時間培養した第１表
記載の細菌の１白金耳を、グルコース１ｙ７ｔｔｚ、ペ
プトン１５ｆ／ｄ１％酵母エキス０．３１７（１１，に
２ＨＰＯ４０，３ｆ／ｄｌ％ＮａＣ／　０．２１／（ｔ
ｌ、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０２ｆ／（Ｚ／からなｐ
、ＰＨ７，０に調整、加熱滅菌した液体培地１０１＋Ｉ
！に植菌し、２８Ｃで４０時間振盪培養を行なった。遠
心分離にて集菌し、０．１Ｍリン酸カリウムバッファー
（ＰＨ８，０）　で洗浄した後、菌体を８−アザ−９−
デアザアデノシン１０ｍＭ。

ＤＩ、−ホモシスティン１０ｍＭ、リン酸カリウムバッ
ファー（ＰＨ８，０）１００ｍＭ　からなる基質溶液１
−に懸濁し、３０Ｃで２時間振掛して反応させた。結果
を第１表に示す。

第　１　表 ２６一 実施例２ グルコース５ｙ／ｄｚ、ペプトンａ、５ｙ／ｄｚ、酵母
エキスａ、１ｙ／ｒｉｐ、ＫＨ，ＰＯ４ｏ２ｙ／ｄｔ、
に２ＨＰＯ４ａ、１ｙ／ｄｔ、ＭｇＳＯ４自７Ｈ２００
，０２ｆ／ｄ／、寒天２９／ｄｌ　カＣ）ｔＫ、ル寒天
斜面培地（ＰＨ６，０）　−Ｃ２８Ｃ１４８時間培養し
た第２表記載の酵母菌体の１白金耳を、グルコース５ｆ
／ｄｌ、ペプトン０．５１１／ｄｌ、　＃母−１−キス
０．１ｆ／ｄｌ、ＫＨ２ＰＯ４０，２ｆ／ｄｉ、Ｋ２Ｈ
ＰＯ４０，１ｆ／ｄ１％ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０２
ｆ／ｄ！からなシＰＨ６，５に調整、加熱滅菌した液体
培地１０−に植菌し、２８Ｕで４０時間振盪培養を行な
った。遠心分離にて集菌し、０．１　Ｍ　１７ン酸カリ
ウムバツフアー（ＦＴ（８，０）で洗浄した後、歯体を
８−アザ−９−デアザアデノンン１０　ｍＭ、ＤＬ−ホ
モシスティン１０！ＩＩＭ、！Ｊン酸カリウムバッファ
ー（ＰＨ８，０）１００ｍＭからなる基質溶液１−に懸
濁し、３０Ｃで３時間振盪して反応させた。結果を第２
表に示す〇 第　２　表 実施例３ 実施例２と同じ方法で培養したのち、濾過にて集菌し生
理食塩水で洗浄した第３表記載の糸状菌の菌体を用い１
反応時間を５時間とすること以外は実施例２と同様に反
応させた。結果を第３表に示した。

第３表 ２８一 実施例４ 酵母エキｘｏ、２ｙ／ｄｔ５日ｏ１ｕｂｌｅ　５ｔａｒ
ｃｈ　１　ｆ／ｄ／、寒天２ｆ／ｄｌからなる寒天斜面
培地（ＰＩＦＴ７．２）で２８ｃ、４８時間培養した第
４表記載の放線菌の菌体の１白金耳を、ペプトン１９７
ｄｌ、肉エキスｏ、５ｔｔ／ｌＮ、酵母エキス０．Ｉ　
ＩＩ／ｄｌ、　Ｎａｐ／　０．５ｙ／ｄｚからな、９．
ＰＨ７，１に調整、加熱滅菌した液体培地１０ｍ／に植
菌し％２８１Ｚ’で４０時間、振鏝培養を行なった。次
いで実施例１と同じ方法で得た菌体を用い反応時間が４
時間であること以外は実施例１と同じ反応条件で反応さ
せた。結果を第４表に示す。

第４表 ５−８−デアザ− ９−７ザアデノ 菌　株　ルー ナイン収量 （μｍｏ／／ｄ） マイコバクテリウム・フレイ　エＦＯ３１５８αｏ４ノ
カルディア・アステロイデス　ＩＦＯ３４２４０，０４
ストレフトマイセス、クリセオルス　ｒＦｏ　５４０５
　１１３ストレプトベルチシリウム中ケンタケンス　Ｉ
ＦＯ１２８８０１０７！ｌｔｒ処７ｘボ５．ｗｘルｖ７
　ＩＦＯ１５５０４Ｎ４ミクロポリスポラ・７ンジオス
ボラ　エＦ０　１３１５５　１３０ストレプトスボラン
ジウム・ロゼラム　’ＩＦＯ５７７６（Ｌ５１実施例５ グルコース２ｙ／ｄｔ、酵母エキス０３ダ／ｄｌ、ペプ
ト７　ｎ、３　ｆ／ｅ１１．ＫＨ２ＰＯ４０，１ｆ／ｄ
ｌ。

ＭｇＳＯ４・７１２０　０．口５ｙ／ｄｔ、寒天２　ｆ
／ｄ　／からなる寒天斜面培地（ＰＨ５，０）で２８Ｃ
１９６時間培養した第５表に示す担子菌の菌体１白金耳
をグルコース２ｆ／ｄｌ、酵母エキスＯ，Ｓｆ／ｄ！、
ペプトン０．３　ｆ／１１．’ＫＩＴ２ＰＯ４０，１ｆ
／ｄｉ。

Ｍｇ８０４．７Ｈ２００，０５ｇ／ｄｌからなｆｉＰＦ
１５．０に調整、加熱滅菌した液体培地１０ｍ１に植菌
し、２ＢｔＴで９０時間、振徹培養を行なった。済過に
て集菌し、生理食塩水で洗浄した夫々の菌体を用い、反
応時間が４．５時間であること以外は実施例１と同じ反
応条件で反応させた。結果を第５表に示した。

第　５　表 実施例６ ８−アザ−９−デアザアデノシンのかわりに第６表に示
すヌクレオシド類を用いること及びアルカリゲネス・フ
エカリスエＦＯ１２６６９を用いること以外は実施例１
と同様に反応させ、相当するＳ−ヌクレオシジルーＬ−
ホモシステインヲ合成し、収量を第６表に示した。

３ｌ− ＝３２一 実施例７ 実施例１と同様な方法で得たシュードモナス・ブチダニ
Ｆ＋０１２９９６及びアシネトバクタ−・カルコアセチ
カスエＦＯ１２５５２の菌体、実施例２と同様な方法で
得たサツカロマイセス・セレビジエエ′Ｆ０１８ｏ５及
びシゾサッ力ロマイセス・ボンベニＦＯロ３４６の菌体
、実施例３と同様な方法で得たモナスカス・ルベーＩＦ
Ｏ９２０３及びジベレラ・フジクロイエＦ０　６６０５
　の菌体、実施例４と同様な方法で得たミクロポリスボ
ラ・アンジオスボラエＦＯ１３１５５及びストレプトマ
イセス−ハイグロスコピヵスエＦ＋０３１９２の菌体、
実施例５と同様な方法で得たンゾフィラムーコムネエＦ
Ｏ６５０４の菌体を用いること及び８−アザ−９−デア
ザアデノシンのかわりにネブラリンまたはアデノシン−
Ｎ′−オキシドを用いること以外は実施例１と同様に反
応を行ない、Ｓ−ネプラリニルーＬ−ホモンスティンま
たはＳ−アデノシル−Ｎ′−オキシド−Ｌ−ホモシステ
ィンを合成し、収量を第７表に示した〇実施例８ 実施例１と同じ条件の寒天斜面培地で培養したアルカリ
ゲネス・フエカリスエＦＯ１２６６９の１白金耳を、実
施例１と同じ組成の液体培地５―に植菌し、２８Ｃで２
４時間振盪し前培養を行なった。次にこの前培養液５ｄ
を、２１坂ロフラスコに入れた前培養と同じ組成の加熱
滅菌した培地５００−に植菌し、２８Ｃで４０時間振盪
し本培養を行なった０本培養終了後、生理食塩水で１回
洗浄し１次に遠心分離にて集菌した０集菌した置体は通
風下約１５時間室温にて乾燥した後、更に五酸化リンを
入れた減圧テンケータ−中、５Ｃで１日乾燥した。次に
この乾燥菌体を乳鉢で粉末状にすシつぶし、再び減圧デ
シケータ−中で乾燥することによρ乾燥菌体を調整した
。

８−アザ−９−デアザアデノクン２００ｍｇ、ＤＬ−ホ
モシスティン２００Ｉｎｇ、００５Ｍすｙｙカリウムバ
ッファー（ＰＨ８，０）　１００１１Ｌｌ及び上記乾燥
４ｙ−を３００ｍＪ容量の三角フラスコに入れ。

窒素雰囲気下、３７Ｃで４時間振盪して反応させたとこ
ろ、反応液中に１８１■の８−８−アザ−９−デアザア
デノシル−Ｌ−ホモシスティンが合成された。その後、
水冷下に３０％過塩素酸水溶液１０−を添加して反応を
停止した後、遠心分離により菌体残液などの不溶物を除
去した。かくして得られた上清液１５０ｍ１を減圧下３
０罰に濃縮し、この濃縮物を５ｅｐｈａｄｅｘ　ｅ　−
１０カラム（３×１５０偏）に通液し、０．０２５％チ
オジグリ　−ル水溶液で溶出することによりゲル濾過ク
ロマトグラフィーを行なった。かくして溶出液の２６０
ｎｍにおける紫外部吸収を測定することにより８−８−
アザ−９−デアザアゾノンルーＬ−ホモンステインに相
当する両分を検出し、次いでこの両分を減圧下に濃縮し
、０〜５Ｃで２日間静置したところ白色結晶物が析出し
たＯこの結晶物をν別し、再度温水よυ結晶化させ、凍
結乾燥することにより白色固体１　！１６　ｍ９が得ら
れたｏ酸及びアルカリによる加水分解テスト、シリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー、ベーパークロマトグラフィ
ー。

高速液体クロマトグラフィー、赤外吸収スペクトル、比
旋光度を測定したところ、この白色固体物は８−８−ア
ザ−９−デアザアデノシル−Ｌ−ホモシスティンである
ことが確認された。

実施例９ 第８表に示すヌクレオシド類を用いること及び第８表に
示す反応時間であること以外は実施例８と同様に反応を
行なったところ、用いたヌクレオシドに相当するＳ−ヌ
クレオンジルーＬ−ホモシスティンが生成した。生成量
を第８表に示した。

次いで、この反応液を実施例８と同様な方法で精製する
ことによシ、第８表に示す量の白色固体物が得られた。

なお、生成物の同定は実施例８と同様な方法で行ない、
反応に用いたヌクレオシドに相当するＳ−ヌクレオシジ
ルーＬ−ホモンステインであることを確認した０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　アエロバクタ−属、アグロバクテリウム属。 ミクロコツカス属、コリネバクテリウム属、アルスロバ
   クタ−属、ブレビバクテリウム属、クロモバクテリウム
   属、キサントモナス属、ロドシュードモナス属、シュー
   ドモナス属、アルカリ土類金属、アシネトバクタ−属、
   フラボバクテリウム属、セルロモナス属、アゾトバクタ
   −属、プロタミノバクタ−属、丈ツカロマイセス属、キ
   ャンデイダ属、サツカロマイコブシス属、シゾサツ力ロ
   マイセス属、ビヒア属、ノλンゼヌラ属、シワニオマイ
   セス属、デバリオマイセス属、サツカロマイコデス属、
   ハンゼニアスボラ属、リボマイセス属、スポロポロマイ
   セス属、クルイベロマイセス属、クリグトコツカス属、
   トルロプシス属、クロエケラ属、ウイヶルハミア属、ト
   ルラ属、ロドトルラ属、トリコスポロン属、オースボリ
   ディウム属、ロデロマイセス属、ムコール属、リゾプス
   属、アブシディア属。 アスペルギルス属、ペニシリウム属、モナスカス属、ノ
   イロスポラ属、オウレオバシディウム属、フザリウム属
   、ジペレラ属、アルスロデルマ属、スボロスリックス属
   、ベルテシリウム属。 グリオクラディウム属、トリコフィトン属、フィトフト
   ラ属、エウロテウム属、シリンドロカルボン属、ストレ
   プトマイセス属、マイコバクテリウム属、ノカルディア
   属、ストレグトペルチシリウム属、ミクロモノスポラ属
   、ミクロポリスボラ属、ストレグトスポランジウム属、
   ミクロエロボスボリア属、プロエオフィラム属、シゾフ
   ィラム属、トラメテス属、ラエテボラス属、レンテヌス
   属、リオフィラム属、ビクノボラス属、レビスタ属に属
   し、８−アザ−９−デアザアデノシン、ネプラリン、ア
   デノンンーＮ′−オキシド％　３−デアザアデノシン、
   ２−アザ−３−デアザアデノシン、２−クロロアデノシ
   ン、７−デアザアデノクン　Ｎ６−メチルアデノシン、
   イノシン及び１−メチルアデノシンから選ハしたヌクレ
   オシドとホモシスティンよシ対応するＳ−ヌクレオンジ
   ルーＬ−ホモシスティンを合成する能力を有する微生物
   の菌体または菌体処理物の存在下に、前記ヌクレオシド
   とホモシスティンを水性媒体中で接触させて反応せしめ
   、前記ヌクレオシドに対応するＳ−ヌクレオンジルーＬ
   −ホモンステインを合成して採取することを特徴とする
   Ｓ−ヌクレオンジルーも一ホモシスティンの製造法。