JPS6084302A - アラビノガラクタンおよびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は微生物の存在と関連して治療剤、予防剤または
診断剤として有用なアラビノガラクタンに関する。本発
明はまたアラビノガラクタンの製造法およびそれらを含
有する組成物をも包含するものである。

従って本発明は細菌のような病原性微生物、特にグラム
陰性型のような腸内細菌により惹起される感染の治療的
処置にとって有用な組成物およびアラビノガラクタンに
関する。本発明は特に大腸菌’、　（Ｂｓｃｈｅｒｉａ
ｈｉａ　ｃｏｌｉ）細菌特にに８８＋株のような腸内菌
科（Ｅｎｔｅｒｏｂａａｔｅｒｉａｃｅａｅ）の細菌に
対して適用できる。本発明の組成物はまた予防上および
診断上の処置にも有用である。本発明はまた人間を含む
哺乳動物の治療的処Ｕｔ法をも色名するものである。本
発明は以下に記載される方法に限定されるわけではない
が大腸菌に関連して以下に実質的に説明する。

細狛感染経路は細菌が上皮組織に付着する能力を有する
という事実によりしばしは始まる。

この付着能力は異なる細菌が異なる型の組織に選択的に
付着するという点で特異的である。すなわち、フィムブ
リエ（線毛）を有するに一抗原に８Ｂと表示される大腸
菌が子豚の腸内上皮によく付着することが研究により示
された（Ｊｏｎｅｓ。

Ｇ、ｗ、およびＲｕｔｔｅｒ、　Ｊ、Ｍ、氏の工ｎｆｅ
ｃｔｉＯｎ　ａｎｄ工ｍｍｕｎｉｔｙ第６巻第９１８−
９２７頁（１９７２手）参照）。［８８のフィムブリエ
が大ＦＡ　＠　ｘ、ｓａ　＋　株がモルモットの赤血球
を凝集させる能力があることの原因であることも示され
た（Ｊｏｎｅｓ、σ、１１．およびＲｕｔｔｅｒ、　Ｊ
、Ｍ、氏の１．　（）ｅｎ、　Ｍｉｃｒｏ’ｂｉｏｌ第
８４巻第１６５〜４４頁（１９７４年）参照）。Ｋ８Ｓ
−フィムブリエを欠く突然変異体は腸内上皮に付着する
能力を欠きその結果その大腸菌は豚の腸内にコロニーを
作りえない（Ｓθ１ｌＷＯＯａ、　Ｒ，。

Ｇｉｂｂｏｎｓ、　Ｒ，Ａ、、　Ｊｏｎｅｓ、　Ｇ、Ｗ
、および−ｔｔｅｒ、Ｊ、Ｍ。

氏のＪ、　Ｍｅｄ、　Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌ、第８巻第４
０５〜４１１頁（１９７５年）参照）。さらに、Ｋ２Ｓ
　−フィムブリエは腸内上皮の「刷子縁」膜上の何らか
の構造を認識することが示された。従って、ある種の豚
が腸内上皮においてこの構造を欠くことおよびこの事実
によりその豚が大腸菌に８８＋によシ惹起される腸内感
染に対して抵抗性となることも示された。

従って本発明は人間および動物に感染を起しうる病原性
微生物に関して生体内で正常な受体と置換する能力を有
するココス（Ｃｏｃｏａ）属の樹木からのアラビノガラ
クタンまたはかかるアラビノガラクタンを含有する組成
物を提供するものである。

本発明のもう一つの目的はその治療上の用途に加え診断
上も使用されうる組成物または物質を提供することにあ
る。

本明細咽において使用される「微生物」なる表現は細菌
、ウィルス、動物細胞および植物細胞を包含することが
意図される。本発明ｉｆ：　’Ｒにに８８−　フィムブ
リエのある大腸菌の受体構造に関するがしかしこの型の
細菌に限定されるものではない。

本発明に包含されるアラビノガラクタンは従って治療上
、予防上または診１°１．［［上位用されうる。

本発明によるアラビノガラクタンは好ましくはココヤシ
（Ｃｏｃｏａ　ｎｔｔｃｉｆｅｒａ）　種の制水、すな
わちヤシ型の樹木から回収される。関連する化合物を含
有する樹木では主にココナツ、すなわちココナツの乳汁
または例えばコプラなる名称の下に乾燥形態で利用しう
るその果肉である。

先に指摘されたように本発明は特に下痢招来性微生物、
ｆｉｌえば大腸菌に８°８＋株またはそれと密接に関連
する細酌に適用しうる。

本発明はまたココナツ果肉、乾燥されたかかる果肉すな
わちコプラ、１１こは脱脂゛されたココナツの果肉から
かかるアシピノガラクタンまたはその加溶媒分解物を回
収する方法をも提供する。かかる回収は適当には親水性
抽出手段、好ましくは水−ベース抽出剤を用いて抽出す
るこトニより遂行される。かかる抽出においては親水性
ベースが得られ、そこから所望のアシピノガラクタンが
適当な方法例えば凍結乾燥、蒸発等により回収されうる
。親水性の相から１ラビノガラクタンを回収する前Ｋ例
えば塩、崩壊産物、他の副生物等の形態で存在しうる低
分子不活性物質を分離することが好ましい。

本発明による活性なアラビノガラクタンは治療上、予防
上または診断上の目的で人間のまたは獣医薬中に使用す
るために慣用の方法で製剤化されうる。組成物または医
薬製剤は投与の様式およびさらに実際の状況の如何によ
り固形、半固形または液体でありうる薬学的に受容しう
る担体と組み合せて活性なアラビノガラクタンを含有し
うる。活性物質はまた担体物質を添加することなくその
ままでも使用されうる。組成物は慣用の薬学的実施と完
全に一致して調製される。

本発明の組成物の適当な形態には錠剤、カプセル、シロ
ップ、懸濁液、溶液、ｍｌｆｍ物、注射、または注入に
適する滅菌形態をした再構成しうる粉末が包含される。

かかる組成物は抗生物質の製剤化に当業者によく理解さ
れた方法で慣用の薬学的実施法に従い慣用の薬学的に受
容しうる物質例えば希釈剤、結合剤、着色剤、香味剤。

防腐剤、崩壊剤等を含有しうる。

本発明の好ましい局面によれば本発明の組成物は豚、特
に子豚の下痢を治療または予防するために治療上または
予防上の目的で使用される。

治療上の目的には活性アラビノガラクタンを適当には動
物の飲料水中に溶解させ、そして特に重症の場合には経
口前管栄養法により投与されうる。

予防目的には活性物質をそのまま、または水溶液中にお
ける漉縮物としてまたは例えば投薬を容易にするための
希釈剤と一緒にして他の適当な製剤として動物の食餌に
直接添加しうる。

適当な量は場合に応じて判定できそして１日当りｔ単位
、例えば１日０．１〜５０ｆでありうる。

下記の例によシ本発明をさらに説明するがこれらは本発
明を限定するものではない。

試験においては大＆菌０１４９　Ｋ８８＋株の型の細菌
が使用された。細菌をＯＦＡ培地上６７℃で１８時間培
養した。細菌の生育塊りＩ）Ｈ７，２のＰＢＳ中でスン
リーとなして細盲１ｇ＆ｉ度ｌＸ１０’／ｍｅとなした
。Ｋ２Ｓ−フィムブリエは下ｎＱ方法で得られた。

細菌菌株をＲｏａｘフラスコ上ＯＦＡ寒天で培養した。

６７℃で２４時間保温培養したのち１フラスコ当りＰＨ
１１０−および滅菌ガラスポールを添加することにより
細菌を収穫した。フラスコを振盪しそして細菌懸濁物を
とり出した。１ｌｌｌ白を遠心分離（３０００ＸＩＦ、
−）−４℃、３０分）によりベレット状となした。上澄
み液を吸引により除去した。細菌をＰＢＳ　１０−中に
再懸濁しそしてこの懸濁液をＷａｒｉｎｇブレンダー中
で２×２０秒処理した。この懸濁液を遠心分離（５００
０ｘ　ｔ。

＋゛４℃、３０分）して細菌をベレット状となした。フ
ィムブリエを含有する上澄み液を吸引によりとり出した
。＃Ｉ菌ペレットを再懸濁し、Ｗａｒｉｎｇプレンダー
中で処理しそして遠心分離後に再び上澄み液を回収した
。２つの上澄み液をプールしそして硫酸アンモニウムを
濃度５０ｆｙまで添加した。攪拌後上澄み液を＋４℃で
１８時間放置し、次に５　［：Ｉ　ＯＯＸ　ｆで遠心分
離を行った。上澄み液を分１ｊ１ｔ　Ｌそして沈殿をＰ
ＢＳで透析した。可溶化されたフィムブリエ７ラクシヨ
ンをもうｍｍ硫酸アンモニウムで沈殿させそして透析し
た。

血球凝集反応はＰＢＳ中に濃度５％ｖ／ｗとなるまで懸
濁されたモルモット（ＧＲＢＯ）の赤血球を用いて遂行
された。凝集試験は５０μμのＧＲＢＯを微小力価プレ
ート中抗原である５０β℃の細―懸濁液または５０μμ
のフィムブリエ懸鉤液および５０μ２のＰＢＳと混合す
るようにして実施された。

このプレートをパラフィルム（Ｐａｒａｆｉｌｍ）でＪ
″Ｊ印しそして４４℃で４時間保温培養しそして次に記
録した。凝集が肉眼で院みとられうる最後のくぼみが１
血球凝集単位（Ｉ　ＨＵ）と見做される。

抑制実験においてはＰＨ１０代りにその抑制能力が研究
されているアラビノガラクタンの水溶液が添加された。

これらの溶液を２段階希釈により試験した。試験におい
ては３チのＧＲＢ（１！によシ２〜４ＨＵを生ずる細菌
およびフィムブリエの濃度が用いられた。その結果を第
１表に示す。

実施例　１ ココナツ乳汁からの活性アラビノガラクタンの調製 ココナツ乳汁（２２β）を蒸発によ！り２１２で娘縮し
、そして遠心分ｌＩ後綿状の脂肪を濾過によシ除去した
。この溶液を透析しそして分子址約５０００以上の高分
子フラクション（３０ｙ）をセファデックス（Ｓθｐｈ
ａｄｅｃ）　（）１５を充填したカラムに通した。カラ
ムからのボイドフラクションを梨めた（２５Ｆ）。この
７ラクシヨンを分析するとこのものがアシビノースおよ
びガラクトース単位を含南する多楯類を含有することが
示された。

得られたフラクションを親水性化しそして残留物を水に
酵解させて水溶液を形成させ、これを後程血球＆集反応
の抑制に使用するために２段階連続希釈にかける。抑制
実験の結果を下記第１表に示す。

実施例　２ いわゆるエキスｄ　９−　（ｅｘｐｅｌｌｏｒ）からの
活性アジピノガラクタンの調製 エキスば２−１すなわちココナツの果肉から脂肪を除去
した後の残留物１４，９縁をミル中で粉砕することによ
り細分し、仄ニ水１００Ｊｌｔをカ日える。抽出は１０
０℃で４時間行イノれそして７０％エタノール−水で沈
殿させると固形物グ（約Ｉ　Ｖｙが得られる。

次にこの物質を水に溶解させそして不溶物質を遠心分離
により除去する。仄に２一段階連続希釈を行いそして得
られる溶液を抑制実験において試験する。抑制実験の結
果を下記第１表に示す。

実−雄側　３ ココナツの乾燥果肉で構成されるいわゆるコプラを使用
して実施例２の操作を行なう。操作に関連して脂肪を分
離したのちに水溶液が得られこれを２一段階連続希釈に
かける。その抑制実験の結果を下記第１表に示す。

第１表 ＧＲＢＯとに８８−フィムブリエのある細菌またはに８
８−フィムブリエとの間の血球凝集反応の抑制実施例１
　２００ 実施例２　５００ 実施例３　４００ 臨床試験 大腸菌に８８株により惹起される子豚の下痢に及ばずコ
コナツ乳汁グリコシドの抑制作用を研究するために臨床
試験を行なった。用いられる動物は第１日月に帝王切開
して出された子豚６匹である。従ってこれらの子豚は臨
床試験まで外来微生物も含めて何らの環境上の危険にも
未だ直面していない。子豚を２つの群に分け、一方の群
はＩと表示されそしてもう一方の群は■と表示される。

第■群Ｉは前記実施例１に従い調製されたココナツ乳汁
アラビノづジクタンの水溶液と組み合せて大腸菌０１４
９　’（宿−＋　ＳＴ’ｌ’に８８）株で攻撃された。

もう一方の群■は同じ大腸菌のみで攻撃された。１群は
４匹、そして■群は２匹の子豚を用いた。第２日月には
下記スケジュールで実施された。

１３：００　乳７０−　乳７０ｍＡ ｌ４：３０　グリコ７ド０．５ｆ　水６ｍｅ、ｕ口（水
溶液６ｔｎｔ中入経口 １５：００　乳７０ｍ　乳７０１８１ １９：３０　グリコ７ド０．５Ｆ （水溶液６−中）、経口　水６−１経口２〇二〇〇　乳
７〇−乳７０ｍＡ 第２日目の２３：００時に子豚を臨床的に検査した。細
菌での挑戦１０時間後に第１群の４匹のうちの２匹およ
び第■群の２匹ともがわずがな下ｆ４Ｊｔ示した以外は
何ら不規則な観察はみられなかった。

第５８目の０５：００時に新たに臨床的に検査した。第
１群の４匹の子豚すべてが良好な健康状態を示したのに
１一方第■群は２匹ともが死にかかつておりそして自分
らの足で立てなかった。

０６　：　［ＪＯ時には第１群の２匹および第■群の全
２匹の子豚を剖検のため殺した。第３日月の０６＝３０
に第１群の残る２匹の子豚に水溶液６　ｍｅの形態でグ
リコシド０，５ｔを経口投与した。同じ日の０９　：　
００時に同じ子豚に再び同量のグリコシド溶液を乳７０
−と一緒に経口投与した。この時点で子豚達は臨床的に
健康であった。１１：０口時にこれらはまだ臨床的に健
康でありだが両方の子豚とも流動性下痢を示した。第３
日月の１４：００時には２匹の子豚は下痢におかされそ
して殺された。

剖　検 第３日月の０６　：　００時に犠牲にされた第１群の２
匹の子豚は健康な腸を示し、そして子豚のうちの一方は
空腸、回腸および結腸での幾らかの液体放出にかかって
いた。

第■群の２匹の子豚は空腸および回腸に強い内部出血お
よび液体放出を示した。

前記臨床試験結果から、本発明により使用されるグリコ
シドが重い細菌攻撃による子豚の反応に相当影響を及は
すことが見られうる。乙の関連においては試験にかけら
れる子豚は帝王切開で得られ従っていかなる環境的影響
にも全く影響されていないことに留蔗されるべきである
。

この無垢な状態においては勿論子豚は免疫学的見地から
はきわめて感受性が高くそしてそれゆえ細菌処理は大へ
ん劇的である。グリコシド投与の効果はこの実際上の背
景に対して判ｔｌｕｉされねばならない。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）微生物の存在と関連して治療剤、予防剤または診断
   剤として使用するためのココス（Ｃｏｃｏｓ）属の樹木
   から回収されたアジピノガラクタン。 ２）ココヤシ（Ｃｏｃｏｓ　Ｎｕｃｉｆｅｒａ）種から
   回収された前記特許請求の範囲第１項記載のアジピノガ
   ラクタン。 ３）ココナツの乳汁から回収された前記特許請求の範囲
   第１項または第２項記載のアジピノガラクタン。　１ ４）ココナツの果肉、特に乾燥された果肉（コプラ）か
   ら回収された前記特許請求の範囲第１項または第２項記
   載の７２ビノガグ７タン。 ５）下痢招来性微生物、特にその受体が大腸菌（ＩＣ，
   ｏｏｌｉ）　Ｋ８８十株またはそれと密接に関連する細
   菌のそれであるかまたはそれと一致する微生物に関連し
   て使用するための前記したいずれかの項に記載のアジピ
   ノガラクタン。 ６）ココナツの果肉、乾燥されたかかる果肉（コプラ）
   または脱脂されたココナツの果肉からアラビノガラクタ
   ンまたはその加溶媒分解物を回収するに当シ、回収が親
   水性抽出剤を使用する抽出によシ行われることを特徴と
   する方法。 ７）抽出剤が水性であることを特徴とする特許８）抽出
   で得られた親水性の相から低分子不活性物質例えば塩、
   崩解産物，副生物ｖｔー分離しそして次に所望のアラビ
   ノガラクタンを回収することを特徴とする前記特ｉｌＴ
   −請求の範囲第７項記載の方法。 ９）前記特許請求の範囲第１〜５項のいずれかに記載の
   アラビノガラクタンおよびその目的に適う担体を包含す
   る治療上、予防上または診断上有用な組成物。