JPS61129191A - ドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野〕 本発明はアシル基にドコサヘキサエン酸を含有するグリ
セロリン脂質に関するものである。

〔従来の技術〕

天然リン脂質は主にホスファチジルコリン、ホスファチ
ジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスフ
ァチジルイノシトールなどのグリセロリン脂質およびス
フィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質からなり、
細胞の生体膜の重要な成分として存在している。これら
の中でもホスファチジルコリンは一般にレシチンと呼ば
れ、動植物界のリン脂質の中で一番多く存在している。

これらのリン脂質の共通した特徴は親水基と疎水基を持
つことであり、生体膜中では二重層膜を形成し、タンパ
ク質、コレステロールなどとともに物質の透過、選択的
輸送などの生命現象に欠くことのできない機能をはたし
ている。リン脂質は工業的にはすでに天然乳化剤として
用いられ１食品工業、化粧品業界等で用いられている。

また最近リン脂質はその脂質の特徴により水溶液中でリ
ポソームと呼ばれる非常に小さな閉鎖小胞体を作ること
が知られている。

一方、動植物油、とりわけ魚油中の高度不飽和脂肪酸で
あるドコサヘキサエン酸にはコレステロール、中性脂肪
の低下および動脈硬化の予防、そして血栓症の予防など
の生理活性が認められている。また最近ではドコサヘキ
サエン酸を含むリン脂質が抗がん作用を持つと言われて
いる。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、従来このようなドコサヘキサエン酸は酸
化安定性が極めて悪い上に水に不溶であり、医薬として
用いる場合は酸素の透過を防ぐためにゼラチンでカプセ
ル化して用いるなどかなりの制約があった。

本発明は、このような問題点を解決するためのもので、
ドコサヘキサエン酸をリン脂質の構造内に含ませること
により、酸化安定性をよくしたドコサヘキサエン酸含有
グリセロリン脂質を提供することを目的としている。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は、下記一般式〔Ｉ〕で表わされる化合物からな
るドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質である。

（式中、　Ｒ’ＣＯ−およびＲ２ＧＯ−はそれぞれ天然
由来の脂肪酸残基を示し、その一方または両方がドコサ
ヘキサエン酸残基であり、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ４″
（ＣＨコ）３゜〔１３式において、Ｒ’ＣＯ−またはＲ
２Ｃ０−を残基とするドコサヘキサエン酸は、に２２，
６．ω−３（オメガ−３酸・・・二重結合が末端メチル
基側から３番目に位置する）、二重合結合がシス位置で
示される高度不飽和脂肪酸で、生体内で優れた生理活性
を示す。Ｒ’ＣＯ−またはＲ２Ｃ０−の一方がドコサヘ
キサエン酸残基の場合、他方を残基とする脂肪酸として
はパルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸等の炭素数
１０〜２０の通常の飽和または不飽和脂肪酸があげられ
る。

本発明のドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質は、
（１）式におけるＨｌ、　Ｒ２，Ｒ３の組合せにより種
々の化合物があり、代表的な化合物としては、１−バル
ミトイル−２−ドコサヘキサエニルー５ｎ−３−グリセ
ロホスホリルコリン、１−バルミトイル−２−ドコサヘ
キサエニルーＳロー３−グリセロホスホリルエタノール
アミン、■、２−シトコサへキサエニルー５ｎ−３−グ
リセロホスホリルコリン、１，２−シトコサへキサエニ
ルー５ｎ−３−グリセロホスホリルエタノールアミンな
どがあげられる。

本発明のドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質は、
グリセリルホスホリルコリン（Ｇ　Ｐ　Ｃ）、グリセリ
ルホスホリルエタノールアミン（ＧＰＥ）等の脱アシル
リン脂質体と、ドコサヘキサエン酸の無水物、塩化物、
イミダゾール塩等とを反応させることにより製造するこ
とができる。その他の製造方法として全合成によるジア
シルグリセロール等からのグリセロリン脂質の合成法が
あり、この方法によれば天然型光学活性共役酸型グリセ
ロリン脂質のみならず、光学異性体、立体異性体または
それらの混合物の合成も可能である。

上記製造に用いられるドコサヘキサエン酸は魚油、鯨油
などから分解、分離、精製して得られ。

得られたドコサヘキサエン酸は酸無水物、酸塩化物、酸
イミダゾール塩等に変換して用いられる。

また上記製造に用いられる脱アシルリン脂質体はグリセ
ロリン脂質の骨格となるもので、主に大豆、卵黄等の天
然リン脂質を分離、分解または分解、再結晶して得られ
るグリセリルホスホリルコリンまたはグリセリルホスホ
リルエタノールアミン等の脱アシルリン脂質体が使用で
きる。分離はシリカゲルまたは活性アルミナを用い、ク
ロロホルム／メタノール等の混合溶媒で溶出させて行わ
れる。分解はテトラブチルアンモニウｔ１ヒドロキサイ
ドで行われるが、低濃度のカセイソーダ等でおだやかに
分解してもよい。再結晶はカドミウム塩等として行われ
る。グリセリルホスホリルコリン等の脱アシルリン脂質
体は非常に強い吸湿性を示し、そのまま用いることもで
きるが、カドミウム塩などに変換して反応に用いる方が
反応操作上扱いやすく好ましい。再結晶はカドミウム塩
などの形で含水アルコール溶液中で行われる。

ドコサヘキサエン酸無水物、塩化物、イミダゾール等と
脱アシルリン脂質体またはそのカドミウム塩等との反応
は、４−ジメチルアミノピリジン等の触媒の存在下、ジ
クロロメタン等の乾燥溶媒中で、常温下に攪拌して行う
と、ドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質が生成す
る。

〔作　用〕

本発明のドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質は優
れた酸化安定性を有し、生体内でドコサヘキサエン酸お
よびグリセロリン脂質に分解してそれぞれの相乗的な生
理活性を示すので、食品。

化粧品、医薬品等として生体に利用することができ、特
にコレステロールの低下、血栓症状の予防などの薬理効
果が高い。

このリン脂質はそのままの形で摂取または投薬等により
生体に利用できるが、リポソームを形成し、その水溶液
として利用することにより、酸素の透過を防ぎ、酸化安
定性の優れた生理活性物質として用いることができる。

このリポソーム水溶液は、透明な注射液または経管栄養
剤などの輸液として用いることができる。

本発明のリン脂質は両親媒性であるため、そのリポソー
ムも両親媒性であり、リポソームの空間を利用して他の
物質を入れ、生体に供給することができる８つまりビタ
ミンＣなどの水溶性物質であればリポソームの内側の小
胞に、ビタミンＥなどの疎水性物質であればリポソーム
膜の疎水部に入れて、生体に供給することが可能である
。リポソームはｉｉ’／’　Ｖ法（超音波処理）により
、リン脂質を有機溶媒に溶解した後、有機溶媒を蒸発さ
せて薄膜を作り、そこに水溶液を加え超音波処理するこ
とにより作ることができるが、このほか溶液注入法など
によっても作ることができる。

〔発明の効果〕

本発明によれば、ドコサヘキサエン酸をリン脂質の構造
中に含ませるようにしたので、酸化安定性が高く、優れ
た生理活性を有し、リポソームとして利用可能なリン脂
質が得られる。

〔実施例〕

以下、参考例、実施例にもとずき本発明をさらに具体的
に説明する。

参考例−１ イワシ、サバ、イカ浦などの油脂を含む雑魚浦をソジウ
ムメチラートの存在下メタノール中でエステル交換反応
し、常法通り雑魚油メチルエステルを得た。このメチル
エステルの脂肪酸組成はＣ，４，８５，３６％、ＣＩ６
＋０　１４．５５％、Ｃ，６□６．り１％。

Ｃ１８，。２．４９％、Ｃ１８，１１３，５５％、Ｃ１
８，４，ω−３２，５２％、Ｃ２ｏ、、　　８．３３％
、　Ｃ２０＋４１　ω−６０，８８％、Ｃ２ｇ＋５．　
　（Ｌｌ−３１１，８１％、Ｃ２□、Ｉ　６．６３％、
Ｃ２２：Ｓｒω−３１，６７％、Ｃ２□、６．　ω−３
１３，４９％、Ｃ２４１１，００％、その他１０．８１
％であった。

次いでこのメチルエステルを薄膜式の分子蒸留機にかけ
前留分をカットした。その後留分の脂肪酸組成は、Ｃ＋
４：ｏ　　１．３１％−Ｃｒ６＋ｏ　　２．１２％、Ｃ
ｒｕ：＋　　１．３５％、ｃｔａ＋。２．４３％−Ｃ１
８１１１１゜９８％、Ｃ１８＋４１．７９％、Ｃ２ｏ、
、　　１１．９５％−Ｃ２０！４＋　ω−６１．０３％
、Ｃ２０１５１（１）−３１６，６４％、Ｃ２２１１１
０，７４％、Ｃ２□、３．ω−３３，０１％−Ｃ２２１
６＋　ω−３２１，２３％、Ｃ２４８□　２．７７％、
その他１１．６５％であった。

次いでこの分子蒸留メチルエステル３００ｇを２５℃で
１２００ｇの尿素が飽和されたメタノール溶液に加え、
１５℃に冷却し２時間保った。析出した尿素付加物をろ
別し、母液を濃縮後ヘキサンで抽出することによりＣ１
６＋１　０．４８％、ｃ’ｔａ＋４３．８６％、Ｃ２０
１１０・３６％・Ｃ２０１４ｔ　ω−６２・１９％・Ｃ
２０１ｊｊ＋　ω−３３３，７７％、Ｃ２□、、　　０
．２２％、Ｃ２２，５，ω−３５，１６％、Ｃ２□、６
．ω−３４８，５９％、その他５．３７％の組成を持っ
たメチルエステル１１３ｇを得た。この尿素付加メチル
エステルをラシヒリングの入った保温された充填塔を持
った蒸留装置により０．０１〜０　、０５＋＋＋ｍＨｇ
で蒸留し、Ｃ２２１６＋　　ω−３９３，５４％。

Ｃ２Ｇ＋５１　（１１−３３，２２％、その他３．２４
％のメチルエステル１４．４１ｇを得た。このメチルエ
ステルを常法通りけん化し、酸に戻して、ドコサヘキサ
エン酸（９３％）１２．３４ｇを得た。

参考例−２ 市販卵黄レシチン５０ｇを、直径８ｃｍのガラスカラム
に充填した１、５Ｑのシリカゲルで分離した。

溶出溶剤にはクロロホルム／メタノール／水＝６５／２
５／４の混合溶媒を用いた。各フラクションごとに薄層
クロマトグラフィーで追跡し、レシチン部から３１ｇの
レシチンを得、ホスファチジルエタノールアミン部から
９ｇのホスファチジルエタノールアミンを得た。得られ
たレシチン３５００ｍＱのエーテルに溶解させ、攪拌し
つつテトラブチルアンモニウムヒドロキサイド１０％メ
タノール１容液８０ｍｆｔを加えた。底に沈殿したグリ
セリルホスホリルコリンをデカンテーションで回収し、
エーテルで洗浄した。得られたグリセリルホスホリルコ
リンは９．１ｇであった。このグリセリルホスホリルコ
リンを温水に溶解し、別に温水に溶解しておいた塩化カ
ドミウム・２．５水塩１８．９ｇと混合して反応させた
。不溶分をろ別し、このグリセリルホスホリルコリン−
塩化カドミウムコンプレックス水溶液に白濁が生じるま
でエタノールを加えて、０〜５℃に一晩放置し、生じた
結晶を回収した。この結晶を再び温水に溶解し、同様に
エタノールを加え結晶化させた。結晶を回収して乾燥さ
せ、１１８ｇのグリセリルホスホリルコリン−塩化カド
ミウムコンプレックスを得た。

実施例−１ 参考例−１で得られたドコサヘキサエン酸（９３％）５
ｇを乾燥クロロホルムに溶解し、ジシクロへキシルカル
ボジイミド１．７ｇを加えて、室温で一晩反応させドコ
サヘキサエン酸（９３％）無水物を合成した。副生じた
ジシクロヘキシル尿素をろ別し、参考例−２のグリセリ
ルホスホリルコリン−塩化カドミウムコンプレックス１
．１ｇとジメチルアミノピリジン０．６２　ｇをこのド
コサヘキサエン酸無水物クロロホルム溶液に加えた６密
栓して室温で攪拌しながら４８時間反応させ１反応後沈
殿物をろ別し、クロロホルムをエバポレーションして粗
レシチンを得た。粗レシチンをメタノール／クロロホル
ム混合溶媒に再溶解し、イオン交換樹脂アンバーライト
ＩＲＣ−５０、丁ＲＡ−４５（ロームアンドハース社商
標）各５ｇを加え、バッチ方式で残存塩化カドミウムを
除いた。メタノールをエバポレーションして再び粗レシ
チンを得た。この粗レシチンをクロロホルム／メタノー
ル／水＝　６５／２５／　４の混合溶媒を溶出剤として
、直径３ｃｍのガラスカラムにシリカゲル０．２℃を充
填したカラムによりカラム分別した。薄層クロマトグラ
フィーで追跡しながらレシチン部を回収し、エバポレー
ションして純１゜２−シトコサへキサエニルー３ｎ−３
−ブリセロホスホリルコリン１．７ｇを得た。

得られた１、２−シトコサへキサエニルー５ｎ−３−グ
リセロホスホリルコリンの元素分析値は次の通りである
。

元素分析値 ＣＨＮ　　（ｔｚｔ％） 理論値　　７１．１５　　９゜１２１゜６０実測値　　
７０゜６２９゜０３　　１．６１３また上記１，２−シ
トコサへキサエニルー５ｎ−３−グリセロホスホリルコ
リンのＮＭＲスペクトルは第り図に示す通りであり、第
１図に付記した位置符号は（ＩＩ）式の通りである。

上記により得られた１、２−シトコサへキサエニルー５
ｎ−３−グリセロホスホリルコリン５００ａ＋ｇをベン
ゼンに溶解し、　１００ｍｆｆ１容のナスフラスコ中で
ロータリーエバポレーターにより減圧下ベンゼンを除き
、フラスコ壁に膜状に上記ホスファチジルコリンを付着
させた。フラスコに生理食塩水２５ＩＩＩＱを加え、プ
ローグ型超音波発生装置を用い、３５ワツトで、２０分
間窒素気流下で冷却しながら超音波処理した。得られた
リポソーム溶液は、青白色で透明な液体であり、電子顕
微鏡で観察したところ直径約３００人のリポソームを含
んでいた。このリポソーム溶液をフィルターでろ別し、
少量の浮遊物を除き、ウィスター系ラット１０匹にＩｍ
Ｑずつ静注したが、特に免疫反応は認められなかった。

また上記により得られたリポソーム溶液は常温で一週間
以上安定であり、ベンゼンで減圧上共沸脱水して過酸化
物価（Ｐ　ＯＶ　）を測定した結果、ＰＯｖの上昇は認
められなかった。

実施例−２ パルミチン酸７．７ｇを乾燥クロロホルムに溶解し、ジ
シクロへキシルカルボジイミド３．１ｇを室温で一晩反
応させ、パルミチン酸無水物を合成した。副生じたジシ
クロヘキシル尿素をろ別し、参考例−２のグリセリルホ
スホリルコリン−塩化カドミウムコンプレックス１．６
ｇとジメチルアミノピリジン０．６２　ｇをこのパルミ
チン酸無水物クロロホルム溶液に加えた。実施例−１と
同様に反応、精製し、１．２−ジパルミトイル−５ｎ−
３−グリセロホスホリ／Ｌ／−Ｊす’／　（Ｄ　Ｉ’　
Ｐ　Ｃ）　１．９ｇを得た。このＤＰＰ　Ｃｌ００ｍｇ
をエチルエーテル２ｍ１２に溶解し、この、・８液をヘ
ビ毒ホスホリパーゼＡ２５０ｍｇおよび塩化カルシラｔ
、２０μｍｏｌをＯ，ＬＭ）−リス−塩酸緩衝液５ｍＱ
に溶解したものと３７℃で振とうしながら１時間反応さ
せた。ＥＤＴＡ溶液とエタノールで反応を止め、ベンゼ
ンで共沸して′ａ縮乾燥した。これをクロロホルム／メ
タノール／水：　６５／３５／　８の混合溶媒でシリカ
ゲルカラム分離し、１−バルミトイル−５ｎ−３−グリ
セロホスホリルコリン４３ｍｇを得た。

このリゾホスファチジルコリン４３ｍｇを実施例−１と
同様にして得たドコサヘキサエン酸無水物のクロロホル
ム溶液（ドコサヘキサエン酸無水物１５０礼含む）およ
び１２ｍｇのジメチルアミノピリジンと。

実施例−１と同様に反応、精製し、１−バルミトイル−
２−ドコサヘキサエニル−５ｎ−３−グリセロホスホリ
ルコリン３８１１１ｇを得た。

得られた１−バルミトイル−２−トコサヘキサエニルー
５ｎ−３−グリセロホスホリルコリンの元素分析値は次
の通りである。。

元素分析値 ＣＨＮ　　（ｔｙｌ−％） 理論値　　６８．５７　　９．９４　　１．７４実測値
　　６８．１６　　９．８９　　１．７７

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例−１におけるＮ　Ｍ　Ｒスペクトル図で
ある。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式〔 I 〕で表わされる化合物からなる
   ドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質。 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・〔 I 〕 （式中、Ｒ＾１ＣＯ−およびＲ＾２ＣＯ−はそれぞれ天
   然由来の脂肪酸残基を示し、その一方または両方がドコ
   サヘキサエン酸残基であり、Ｒ＾３は−ＣＨ＿２ＣＨ＿
   ２Ｎ＾＋（ＣＨ＿３）＿３、−ＣＨ＿２ＣＨ＿２Ｎ＾＋
   Ｈ＿３、▲数式、化学式、表等があります▼、Ｈ、▲数
   式、化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等
   があります▼または ▲数式、化学式、表等があります▼を示す。）
2. （２）Ｒ＾１ＣＯ−またはＲ＾２ＣＯ−がパルミチン酸
   残基である特許請求の範囲第１項記載のドコサヘキサエ
   ン酸含有グリセロリン脂質。
3. （３）〔 I 〕式化合物が１，２−ジドコサヘキサエニ
   ル−Ｓｎ−３−グリセロホスホリルコリンまたは１−パ
   ルミトイル−２−ドコサヘキサエニル−Ｓｎ−３−グリ
   セロホスホリルコリンである特許請求の範囲第１項記載
   のドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質。