JPS611380A - 新規微生物及びそれらを用いる光学活性化合物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新菌種コリネバクテリウム属或はブレビバク
テリウム属に属する微生物並びにこれらの微生物を用い
て、特定の光学活性なｐ−置換α−フェノキシプロピオ
ン酸及びそれらの誘導体（以下ＰＰＡ系化合物と略す）
のＲ一体の製造方法に関する。

本発明者達は、滋賀県及び大分系の道路周辺の土壌から
、各々肉汁寒天培地により分離した各菌株を、肉汁液体
培地上、３０°Ｃで２４時間培養し、この培養液へＰＰ
Ａ系化合物の８４本を添加して２４時間振とう後、５（
４Ｃをｍ体に変換する能力を有する微生物を検索してそ
れぞれの本菌を取得した。

コリネバクテリウム属に属する微生物（滋賀県土壌より
分離）の−例として、コリネバクテリウムＳＰ、Ｃ−１
６１６微工研菌寄第７６５２号があり、ブレビバクテリ
ウム属に属する微生物（大分県土壌より分離）の−例と
して、ブレビバクテリウムＳＰ、Ｃ−２１９５′４＆工
研菌寄第７６５３号がある。コリネバクテリウムＳＰ、
Ｃ１６１６＠工研菌寄第７６５２号及びブレビバクテリ
ウムＳＰ、Ｃ−２１９５微工研菌寄第７６５３号の菌学
的性質を次に示す。

（、）　　形態（肉汁寒天培地に２４時間培養）（１〕
）各培地における生付状態 （ｃ）　　生理学的性質 糖類から酸、ガスの生成及び資化性（十；有、−；無）
コリネバクテリウムｓｐ、ｃ−↑６１６株は、上述の如
くダラム陽性のこん棒状の碑菌であり、運動性なく、カ
タラーゼ陽性等の性質からコリネバクテリウム属に属す
ると考えられる、１バーノイズ・マニュアル・オフ・デ
グーミナティブ争ハ′クテリオロ７−（Ｂｅｒｇｅｙｓ
　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　ＤＣ１ｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ１
３ａｃＬｅｒｉｏｌｏｌ？ｙ）１８版には、１８種の非
病原性のコリネバクテリウム属の菌種が記載されており
、その多くは土壌から分離されたものである。又、山田
ら（ジャーナル・オブ・ゼネラル・アプライド・マイク
ロバイオロンイー１８巻４１７〜４３１頁、１９７２）
のコリネホームのバクテリアの分類に従って、本菌株は
、コリネバクテリウム　リリウム（Ｃｏｒｙｎｅｌ）ａ
ｃｔｅｒｉｕｍ　　ｌｉｌｉｕｍ）ＡＴＣＣ１５９９０
、コリネバクテリウム　７ラヘスセンス（Ｃｏｒｙｎｅ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍｆ　１ａｖｅｓｃｅｎｓ）　Ａ　Ｔ
　ＣＣ１０３４０、およびコリネバクテリウム　グルタ
ミ力Ａ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｇ！ｕｔ
ａｍｉｃｕｌ＋＋）な２と同じグループに分類された。

それは、本菌株が土壌から分離されたこと、及び非病原
性と考えられることにもよる。

そこで、本菌株と前記３菌株とを比較検討したところ、
次の点で差異が認められた。

１）比較の３菌株に比べて本菌株は細胞が大きい。

２）肉汁平板斜面培養での菌株の色調において、比較の
３菌株は淡黄色であるのに対して、本菌株はクリーム色
の色調が強い。

３）本菌株の特徴であるＰＰＡ系化合物のＳ一体をＲ一
体に変換する能力を前記比較の３菌株は有しない。

以上の結果より、本菌株はコリネバクテリウム属に属す
る新種と認めることが妥当と考えられ、コリネバクテリ
ウムＳＰ、Ｃ−Ｉ　Ｇ　１６（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍＳＰ、Ｃ−１６１６）と命名した。

ブレビバクテリウムＳＰ、Ｃ−２１９５株はダラム陽性
の絆菌で多形成なく、長い細胞が見られる。又、通常単
神菌が、短い鎖状の形態を示すなどの性質からブレビバ
クテリウム属に属すると考えられる。バーノイズ・マニ
ュアル・オブ・デターミナティブ・バクテリオロジー第
７版によると非運動性で硝酸塩を還元し、クリーム色の
色調を持つ菌種としてブレビバクテリウム・ビタルメン
（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｖ　ｉ　ｔａｒｕｍｅ
ｎ　）がある。

しかし、本菌株は、下記の点でブレビバクテリウム・ビ
タルメン（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｖｉｔａ
ｒｕｍｅｎ）とは異なる。

１）細胞の大キサを比較するとブレビバクテリウム・ビ
タルメンが長さ３ミクロンであるのに対し本菌株は、１
１ミクロンと長い菌である。

２）ブレビバクテリウム・ビタルメンがリドマス・ミル
クを酸性にするのに対して本菌株はアルカリ性にする。

３）糖類がらの酸の生成では、ブレビバクテリウム・ビ
タルメンがグルコース、ショ糖、マルトースから酸を生
成するのに対して本菌株は酸を生成しない。

以上の結果より、本菌株はブレビバクテリウム属に属す
る新種と認めることが妥当と考えられ、ブレビバクテリ
ウムＳＰ、Ｃ−２１９５（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍＳＰ、Ｃ−２１９５）と命名した。

一方、本願発明でいうＰＰＡ系化合物は、Ｓ−及びＲ−
配置を持つ光学異性体を有するが、その中Ｒ一体が高い
除草活性を示すことが知られている。一般に、これらの
光学異性体の製法としては、不斉合成、結晶法による分
割、活性塩基による分割、細菌を用いる生物化学的な分
割方法などが知られている。しかしながら、本発明者達
は、微生物によるＳ一体からＲ一体への変換については
、本出願人が先に出願した特願昭５８−２２７４７３号
以外には知らない。

本発明者達は、除草活性の高いＰＰＡ系化合物のＲ−ｍ
ｃを得るべく種々検討を重ねた結果、前述の微生物がＳ
一体を効率良くＲ一体に変換することを見出し、本発明
を完成するに至った。

すなわち、本発明の＃１の発明は、一般式（Ｉ）；（式
中、Ｘは水素原子、アルキル基、フェニル基、ピリジル
基、ベンズオキサシリル基、ベンズチアゾリル基又はキ
メキサリニル基であり、Ｒは水素原子又はカチオンであ
る）で表わされるＰＰＡ系化合物のＳ一体をＲ一体に変
換する能力を有する新菌種コリネバクテリウム属或はブ
レビバクテリウム属に属する微生物であり、第２の発明
はこれらの微生物を用いて、上記一般式（Ｉ）で表わさ
れるＰＰＡ系化合物のＳ一体をＲ一体に変換することを
特徴とする、光学活性なＰＰＡ系化合物のＲ一体の製造
方法である。

前記一般式（Ｉ）で表わされるＸのアルキル基としては
、メチル、エチル、プロピル、ブチル、アミル、ヘキシ
ルなどの炭素数１へ・６のものが挙げられ、フェニル基
、ピリジル基、ベンズオキサシリル基、ベンズチアゾリ
ル基又はキノキサリニル基としては、無置換又は１或い
は２以上のハロゲン原子、トリフルオロメチル基、ノフ
ルオロクロロメチル基、二）・口基、メチル基、シアン
基などで置換されたフェニル、ピリジル、ベンズオキサ
シリル、ベンズチアゾリル、若しくはキメキサリニルな
どが挙げられ、Ｒで表わされるカチオンとしては、ナト
リウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、ジメチ
ルアミン、トルエチルアミンなどのアルカリ金属、アル
カリ土類金属、アンモニウム、有機アミンが挙げられる
。

本発明で用いるＰＰＡ系化合物としては、例えは（７−
（４−ヒドロキシフェアキシ）プロピオン酸（化合物Ｎ
ｏ、　１）、α−［４−（２，４−ジクロロ７二／キシ
）７エ７キシ〕プロピオン酸（化合物Ｎｏ、２）、α−
（４−（３，５−ジクロａ−２−ピリジルオキシ）フェ
アキシ〕プロピオン酸（化合物Ｎｏ、３）、α−（４−
（５４リフルオロメチル−２−ピリジルオキシ）フェノ
キシ〕プロピオン酸（化合物Ｎｏ、４）、ａ〜〔４−（
３−クロロ−５−トリフルオロメチル−２−ピリノルオ
キシ）フェアキシ〕プロピオン酸（化合物Ｎｏ、５）、
α−［４−（６−クロロ−２−ベンズオキサシリルオキ
シ）７エ７キシ〕プロピオン酸（化合物Ｎｏ、６）、α
−［：、４−（６−クロロ−２−ベンズチアゾリルオキ
シ）フェノキシ〕プロピオン酸（化合物Ｎｏ、７）、α
−（４，−（６−クロロ−２〜キメキサリニルオキシ）
フェノキシ〕プロピオン酸（化合物Ｎｏ、８）などが挙
げられ、これらは単独或いは混合して用いてし良く、ま
た、ラセミ体の様なＳ一体及びＲ一体の混合物を用いて
も良い。更に、本発明に用いる菌株は、エステラーゼを
生産するので、前記ｌ〕−置換α−フェノキシプロピオ
ン酸のアルキルエステル、アルコキシアルキルエステル
などのエステル類を原料として用いることもできる。

本発明方法を実施するに際しては、本発明でいう新菌種
フリネバクテリウム属或はブレビバクテリウム属に属す
る菌株の培養液或は菌体の懸濁液に、Ｉ）　Ｐ　Ａ系化
合物のＳ一体を投入し、振どう培養してＲ一体に変換す
る。この場合、緩衝液を用いるのが望ましい。変換反応
の培養条件としては、一般にＰＰＡ系化合物のＳ一体の
濃度が０．０１．−１０％、培養温度２０・〜５０°Ｃ
１望ましくは３０〜４０°（：　ＩＴ　Ｈ６〜９、望ま
しくは７〜７．５、培養時開１へ５０時間である。

実施例１ グルコース２０ｇ、コーン・ステイープ・リカー１０ｇ
、大豆粉１０Ｆｌ、ＫＮ○３２ｇ、ＮａＣρ２ｇ、　Ｍ
ｇＳ　０４　・７１−１．ＯＵ、Ｓ、、ＫＣθ０．５ｇ
及び水１．０００ｍρを含み、ｐＨ７，（’１に調整し
た培地１０１ｎθを大型の試験管（２４Ｘ２４０ｍｍ）
に分注し、常法によって殺菌した後、コリネバクテリウ
ムＳＰ、Ｃ−１６１６株又はブレビバクテリウムｓｐ、
ｃ−２１９５株を１白金耳後種して、３０’Ｃで２４時
間振どう培養した。培養後、化合物Ｎｏ、４のナトリウ
ム塩のＳ一体を最終濃度が１．ｍｇ／ｍρとなるように
添加し更に３０°Ｃで２４時間振どう培養しｔユその後
、２Ｎ−Ｉ−ＩＣｉｌ！にて、Ｈ２，０に調整し、１０
ｍθの酢酸エチルで抽出、抽出液中の化合物Ｎｏ、４の
Ｒ一体及びＳ一体の濃度を高速液体クロマト法によって
測定し、第１表の結果を得た。

第　　１　　表 実施例２ 前記実施例１の場合と同様の培地で、コリネノ入′クテ
リウムＳＰ、ＣＩ　６１６株を３０°Ｃで２４時間振ど
う培養した。

培養後、遠心分離により菌体のみを採取し、等量の０，
１．Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７，２）に懸濁した。

そこへ、下記の各化合物のラセミ体を最終濃度力弓ＩＩ
Ｉｇ／　Ｉｌｌρとなるように添加し、更に３０℃で２
４時間振とう培養した。その後、前記実施例１の場合と
同様にして、Ｒ一体及びＳ一体の濃度を測定し、第２表
の結果を得た。

第２表 実施例３ 前記実施例１の場合と同様の培地５０　（ｌ　ｍρを２
θの振とうフラスコに入れ、常法により殺菌後、プレビ
バクテリウ１．ｓｒ’、Ｃ−２１９５株を３０℃で２４
時間振どう培養した。培養後、遠心５分離により菌体の
みを採取し、菌体の３イＢ量の１．５％アルギン酸ナト
リウム水溶液と混合して、＋６ｏｇ７０の塩化カルシウ
ム水溶液中へ滴下し、アルギン酸カルシウム固定化菌体
を作製した。この固定化菌体２０ｇを化合物Ｎｏ、４の
ナトリウム塩のラセミ体３ｍビ／ｍρを含むｆｉｔ　、
　ｉ　Ｍ　＋・リス・塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）５０ｍ
ρに懸濁し、３０℃で２４時間振とうした。その後、前
記実施例１の場合と同様にして、Ｒ一体及びＳ一体の濃
度を測定した。その結果は、１（一体２．５８ｍｇ／ｍ
θ、Ｓ一体０．４２ｍＨ／ｍρであった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘは水素原子、アルキル基、フエニル基、ピリ
   ジル基、ベンズオキサゾリル基、ベンズチアゾリル基又
   はキノキサリニル基であり、Ｒは水素原子又はカチオン
   である）で表わされるｐ−置換α−フエノキシプロピオ
   ン酸及びそれらの誘導体のＳ−体を、Ｒ−体に変換する
   能力を有する新菌種コリネバクテリウム属或はブレビバ
   クテリウム属に属する微生物。 ２、コリネバクテリウム属或はブレビバクテリウム属に
   属する微生物を用いて、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｘは水素原子、アルキル基、フエニル基、ピリ
   ジル基、ベンズオキサゾリル基、ベンズチアゾリル基又
   はキノキサリニル基であり、Ｒは水素原子又はカチオン
   である）で表わされるｐ−置換α−フエノキシプロピオ
   ン酸及びそれらの誘導体のＳ−体を、Ｒ−体に変換する
   ことを特徴とする、光学活性なｐ−置換α−フエノキシ
   プロピオン酸及びそれらの誘導体のＲ−体の製造方法。