JPS6118864A

JPS6118864A - Ｄｎａもしくはｄｎａ断片物の塩基配列決定方法

Info

Publication number: JPS6118864A
Application number: JP14090184A
Authority: JP
Inventors: Hisashi Shiraishi; 白石　久司
Original assignee: Fuji Photo Film Co Ltd
Current assignee: Fujifilm Holdings Corp
Priority date: 1984-07-06
Filing date: 1984-07-06
Publication date: 1986-01-27

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［発明の分野］本発明は、ＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列の決
定方法に関するものである。さらに詳しくは、本発明は
、蓄積性蛍光体シートを用いたオートラジオグラフィー
を利用するＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列決定
方法に関するものであ、る。

［発明の背景］支持媒体上において少なくとも一次元的方向に分布して
分布列を形成している放射性標識物資の位置情報を得る
だめの方法としてオートラジオグラフィーが既に知られ
ている。

たとえば、蛋白質、核酸などのような生物体由来の高分
子物質に放射性標識を付与したのち、その放射性標識を
付した高分子物質、その誘導体、あるいはその分解物な
ど（以下、放射性標識物質ともいう）をゲル状支持媒体
上で電気泳動などの分離操作にかけて分離展開し、その
ゲル状支持媒体と高感度Ｘ線フィルムとを一定時間重ね
合わせることにより、該フィルムを感光させ、その感光
位置から得られる該ゲル状支持媒体上における放射性標
識物質の位置情報を基゛にして、その高分子物質の分離
、同定、あるいは高分子物質の分子量、特性の評価など
を行なう方法は既に開発され、実際に利用されている。

特に近年においては、オートラジオグラフィーは、ＤＮ
Ａ（もしくはＤＮＡ断片物、以下同様）の塩基配列の決
定に有効に利用されている。

このオー　トラジオグラフィーを利用してＤＮＡの塩基
配列を決定するための代表的な方法の一つとして、サン
ガーφクールソン（Ｓａｎｇｅｒ−Ｃｏｕｌｓｏｎ）法
が知られている。この方法は、ＤＮＡが二本の鎖状分子
からなる二重ラセン構造を有し、かつその二本の鎖状分
子は、各々四種類の塩基、すなわちアデニン（Ａ）、グ
アニンＣＧ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）なる塩基
を有する構成単位から構成されていること、そして、こ
の二本の鎖状分子の間はこれら四種類の塩基間の水素結
合によって架橋されており、しかも各構成単位間の水素
結合は、Ｇ−Ｃ１よびＡ−Ｔの二種類の組合わせのみに
おいて実現しているというＤＮＡの特徴的な構造に着目
し、ＤＮＡ合成酵素によるＤＮＡ断片の合成、ゲル電気
泳動およびオートラジオグラフィーの手段を巧みに利用
してＤＮＡの塩基配列を決定する方法である。

サンガー・クールノン法において、塩基配列を決定しよ
うとしているＤＮＡあるいはＤＮＡ断片物（以後、これ
らを検体ＤＮＡという）と相補的なりＮＡ断片を合成す
るためには幾つかの方法があるが、基本的には一本鎖の
検体ＤＮＡを鋳型（テンプレート）とし、■記四種類の
塩基を含むモノヌクレオシドトリフオスフェートの存在
下でＤＮＡ合成酵素（ＤＮＡポリメラーゼ）を作用させ
ることにより、検体ＤＮＡと相補的な種々の長さのＤＮ
Ａ断片を合成する。このとき、一部のモノヌクレオシド
トリフオスフェートに放射性標識が伺与されたものを用
いること、おとび合成条件に工夫を凝らして四種の塩基
のいずれか一つに対して特異的になるようにすることに
より、たとえば、１）グアニン（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物、２）アデニン
（Ａ）特異的ＤＮＡ合成物、３）チミン（Ｔ）特異的Ｄ
ＮＡ合成物、４）シトシン（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物、
からなる四種類の放射性標識が付与された塩基特異的合
成りＮＡ断片（Ｉ）ＮＡ合成物）を得る。

次に、上記′の各々の塩基特異的ＤＮＡ合成物をゲル電
気泳動法により同一の支持媒体上で平行して分＃展開し
、各々の塩基特異的ＤＮＡ合成物がそれぞれ一次元方向
に分離展開された分離展開列（ただし、″＆覚的には見
ることができない）を得る。そして、次に前述の方法を
利用してこの分離展開列をＸ線フィルムなどの放射線フ
ィルム上に可視化してオートラジオグラフを得る。

得られたオートラジオグラフは、」二記の例においては
、ｌ）グアニン（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物の展開位置を示
す分離展開列、２）アデニン（Ａ）特異的ＤＮＡ合成物の展開位置を示
す分ｇ！展開列。

３）チミン（Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物の展開位置を示す
分離展開列、４）シトシン（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物の展開位置を示
す分離展開列、の四種類の分ｍ展開列を可視画像として示すものとなる
。

以」二のようにしてグアニン（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物
、アデニン（Ａ）特異的ＤＮＡ合成物、チミン（Ｔ）特
異的ＤＮＡ合成物、およびシトシン（Ｃ）特異的ＤＮＡ
合成物の各ＤＮＡ合成物の展開位置を同定し、鎖状分子
の末端から一定の位置関係にある塩基を順次決定するこ
とにより、対象物の全ての塩基の配列を決定する。

すなわち、ＤＮＡの塩基配列決定のためのオートラジオ
グラフィーは、上述のように放射線写真法を利用するこ
とにより、放射性標識物質の分子単位の位置情報を視覚
的に観測することができるという大きな利点を持ってい
る。

なお、上記に要約したサンガー・クールラン法の特徴お
よび操作については、たとえば次の文献に記載されてい
る。

「遺伝情報を原語で読む・意表を衝いたＤＮＡの塩基配
列解析法ｊ三浦謹一部、現代化学、１９７７年９月号４
６〜５４頁（■東京化学同人刊）Ｓａｎｇｅｒ、　Ｆ、
、　Ｎ１ｃｋｌｅｎ、　Ｓ、　＆　Ｃｏｕｌｓｏｎ、　
Ａ、　Ｒ，。

Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ
Ａ、　７４．　ｐｐ、　５４８３−５４６７　　（１９
７？）しかしながら２、上述のように支持媒体としてゲルを用
いる場合において、このゲルは自己支持性かないため通
常はガラスなどで両面を挟持した状態で分子４展開を行
なうが、その被覆物の変形などによってゲルに厚さムラ
が生じたりすることがあり、放射性標識物質は支持媒体
上で必ずしも一様に分Ｉｌｌ：展開されるとは限らない
。また同様な分離展開の不均一さはゲル中に空気泡が含
まれている場合においても発生する。このような理由か
ら、たとえば、支持媒体の中央付近における分離展開列
の移動距離に比べて両端の分離展開列の移動距離が相対
的に短いといった、いわゆるスマイリング効果がしばし
ば現れる。あるいは、電気泳動により分離展開する場合
において電圧が支持媒体全体に均一に印加されない場合
があり、そのような場合にも、分離展開条件が支持媒体
上で局部的に異なってくるため、得られる分離展開列に
歪みが生じがちである。

従って、前記のような各分離展開列の比較による各塩基
特異的ＤＮＡ合成物の展開位置の同定操作において、そ
れぞれの展開位置の対応関係を誤りなく決定することは
必ずしも容易とは言えず、このため、」二記の同定操作
は従来のオートラジオグラフィーを利用したＤＮＡもし
く　！−ｉ：　Ｄ　Ｎ　Ａ断片物の塩基配列決定法にお
ける大きな問題点とされている。

「発明の要旨］本発明は、以上に述べたような放射線フィルムを用いる
従来のオートラジオグラフィーに基づくＤＮＡもしくは
ＤＮＡ断片物の塩基配列決定のための操作における問題
点を排除する塩基配列決定法を提供するものである。

すなわち、本発明は、（１）ＤＮＡもしくはＤＮ’Ａ断片物と相補的な塩基配
列を有し、かつ放射性標識が付与されている、塩基特異
的ＤＮＡ合成物を支持媒体上で分離展開して分離展開列
を得る工程；（２）該分離展開列の放射性標識物質群から放出される
放射線エネルギーを蓄積性蛍光体シートに吸収させるこ
とによって、この蓄積性蛍光体シートに該放射線標識物
質群の位置情報を有するオートラジオグラフを蓄積記録
する工程；（３）該蓄積性蛍光体シートを電磁波で走査
して該オートラジオグラフを輝尽光として放出させるこ
とにより放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合成物の
分離展開位置の位置情報を読み取る工程；および、（４）上記（３）の工程において塩基特異的ＤＮＡ合成
物の分離展開位置の位置情報に基づいてＤＮＡもしくは
ＤＮＡ断片物の塩基配列を決定する工程。

を含むＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列決定方法
であって、」−記（１）の放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合
成物を支持媒体」−で分離展開する工程には、ＤＮＡも
しくはＤＮＡ断片物の構成単位である四種類の塩基につ
いて各々の塩基ごとに特異的に合成して得たＤＮＡ合成
物の全てを含む混合物を同一の支持媒体上で同時に平行
して分１ｌｌｌＩｉ開する操作が含まれ、かつ、上記（４）のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列を
決定する工程には、］二記混合物の分＃展開列に現われ
た各分離展開位置を標準として他の分離展開列に現われ
た塩基特異的ＤＮＡ合成物の分離展開位置を比較同定す
る操作が含まれることを特徴とするＤＮＡもしくはＤＮ
Ａ断片物の塩基配列の決定方法からなるものである。

なお、分離展開列を比較同定する操作の標準とする混合
物は、検体ＤＮＡを用いて作られたものであってもよい
し、また、別のＤＮＡを用いて作られたものであっても
よいが、前者の方がより好ましい。

すなわち、本発明者は、従来のオートラジオグラフィー
を利用したＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列決定
方法に附随する問題点の解決を目的として鋭意研究を行
なった結果、放、耐性標識を崩する塩基特異的ＤＮＡ合成物を支持媒
体上で分離展開する際に、四種類の塩基特異的ＤＮＡ合
成物の混合物を同一の支持媒体上で同時に平行して分ｐ
＃展開させてることにより基準列を設け、支持媒体−にに形成されたＤＮＡ合成物の分離展開列（
ＩＪには見えない）から各分離展開物の位置情報を取得
するために、感光材料として従来の放射線フィルＪ・の
代りに輝尽性蛍光体を結合剤中に分散してなる蛍光体層
を有する蓄積性蛍光体シートを用いることにより、各分
離展開物の位置情報をデジタル信号として取得し、かつ、１−記の分離展開物の位置情報を示すデジタル信
号から目的の塩基配列を決定する工程において、−１−
記基準列に現われた各分Ｓ展開位置を標準として他の分
離展開列に現われた塩基特異的ＤＮＡ合成物の分離展開
位置を比較同定する操作を行なうことにより、ＤＮＡも
しくはＤＮＡ断片物の塩基配列の決定が容易に実現する
ことを見出し、これに基づき本発明を完成した。

本発明では感光材料として蓄積性蛍光体シートを使用し
ているので、支持媒体から蓄積性蛍光体シートに蓄積記
録された塩基特異的ＤＮＡ合成物の分離展開物の位置情
報を得るためには、特に可視画像とする必要はなく、そ
の蓄積性蛍光体シートをレーザーなどの電磁波で走査す
ることにより上記の位置情報を読み出し、その位置情報
を画像、記号あるいは数値、あるいはそれらの組合わせ
などの任意な形態に変えで取り出すことが可能となる。

従って、標準となる分離−展面列と比較照合して他の塩
基特異的ＤＮＡ合成物の分離展開物の位置情報を取得す
るための操作は、それぞれの位置情報を表わすデジタル
信号の間の照合、演算などをコンピュータを利用して・
行なうことができるた−め、ＤＮＡもしくはＤＮＡ断片
物の塩基配列を容易かつ高精度に決定することが可能と
なる。

［発明の構成］本発明において用いられる試料の例としては、ＤＮＡも
しくはＤＮＡ断片物をテンプレートとして、放射性標識
が付与されたデオキシヌクレオシドトリフオスフェート
（ｄＮＴＰ）とＤＮ／ｌ？成酵素と全酵素て合成される
各塩基特異的ＤＮＡ合成物およびそれらの混合物が、−
次元的方向に分離展開されて分子Ｉ！展開列を形成して
いる支持媒体を挙げることができる。

本発明において、放射性標識に用いられる放射性元素は
、放射線（α線、β線、γ線、中性子線、Ｘ線など）を
放射するものであれば、どのような核種であってもよく
、その具体例として。

３２ｐ、＋４Ｃ，３５５，３）（，１２Ｓ工などが挙げ
られる。

また、上記放射性標識物質を支持媒体を用いて分離展開
するための方法の例は、たとえば、ゲル状支持媒体（形
状は層状、柱状など任意）、アセテートなどのポリマー
成形体、あるいは濾紙などの各種の支持媒体を用いる電
気泳動、そしてシリカゲルなどの支持媒体を用いる薄層
クロマトグラフィーがその代表的な方法として挙げられ
る。このうちで、高分子物質のゲルから形成された支持
媒体を用いる電気泳動法が好ましい方法である。

すなわち、以上のような方法を利用して、該支持媒体上
に放射性標識を有する塩基特異的Ｄ　Ｎ　Ａ合成物が分
離展開された分＃展開列を形成させることができる。

ただし、本発明においては、上記の反射性標識を有する
塩基特異的ＤＮＡ合成物を支持媒体上で分離展開する工
程を実施する際には、ＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物と相
補的な塩基配列を有し、かつ放射性標識が付与されてい
る、ＤＮＡ構成単位である四種類の塩基についてその各
々の塩基ごとに特異的に合成して得たＤＮＡ合成物の混
合物を同一の支持媒体上で同時に平行して分離展開する
操作も併せて実施する。

支持媒体−Ｌに潜像として得られた分離展開列は、次に
蓄積性蛍光体シート上に放射線エネルギー蓄積像として
蓄積記録される。

本発明において使用する蓄積性蛍光体シートは放射線像
変換パネルとも呼ばれものであり、その例は、たとえば
、特開昭５５−１２１４５号公報などに記載されており
、一般的な構成としては既に公知である。

すなわち、蓄積性蛍光体シートは被写体を透過１、た放
射線エネルギー、あるいは′被検体から発せられた放射
線エネルギーを該パネルの輝尽性蛍光体に吸収させ、そ
ののちに輝尽性蛍光体を可視光線および赤外線などの電
磁波（励起光）を用いて時系列的に励起することにより
、輝尽性蛍光体中に蓄積されている放射線エネルギーを
蛍光として放出させ、この蛍光を光電的に読み取って電
気信号を得、この電気信号を感光フィルムなどの記録材
料、ＣＲＴなどの表示装置にに可視画像として１■ｌ生
するか、あるいは数値化、もしくは記号化した位置情報
などとして表わすものである。

以下に、本発明のオートラジオグラフィーにおいて好適
に使用される蓄積性蛍光体シートについて簡単に説明す
る。

上記の蓄積性蛍光体シートは、基本構造として、支持体
と、その片面に設けられた蛍光体層とからなるものであ
る。ただし、この蛍光体層の支持体とは反対側の表面（
支持体に而していない側の表面）には一般に、透明な保
護膜が設けられ、蛍光体層を化学的な変質あるいは物理
的な衝撃から保護している。

以１・、Ｊご白蛍光体層は、輝尽性蛍光体と、これを分散状態で含有支
持する結合剤とからなるものであり、この輝尽性蛍光体
は、放射線を吸収したのち、可視光線および赤外線など
の電磁波（励起光）の照射を受けると発光（輝尽発光）
を示す性質を有するものである。従って、たとえば、放
射性標識物質を含む試料などのような被検体から発せら
れた放射線は、その放射線量に比例して蓄積性蛍光体シ
ートの蛍光体層に吸収され、蓄積性蛍光体シート」−に
は被検体の放射線像が放射線エネルギーの蓄積像として
形成される。この蓄積像は、可視光線および赤外線など
の電磁波（励起光）で励起することにより、輝尽発光（
蛍光）として放射させることができ、この輝尽発光を光
電的に読み取って電気信号に変換することにより、放射
線エネルギーの蓄積像を放射性（標識）物質の位置情報
を示す数値、記号などに変換することができる。さらに
、可視画像として得ることもできる。

本発明において使用する蓄積性蛍光体シートの支持体は
、従来の放射線写真法における増感紙の支持体として用
いられている各種の材料から任意に選ぶことができる。

そのような材料の例としては、セルロースアセテート、
ポリエステル、ポリエチレンテレフタレート、ポリアミ
ド、ポリイミド、トリアセテート、ポリカーポネ−トな
どのプラスチック物質のフィルム、アルミニウム箔、ア
ルミニウム合金箔などの金属シート、通常の紙、バライ
タ紙、レジンコート紙、二酸化チタンなどの顔料を含有
するピグメント紙、ポリビニルアルコールなどをサイジ
ングした紙などを挙げることができる。ただし、蓄積性
蛍光体シーｉ・の情報記録材料としての特性および取扱
いなどを考慮した場合、本発明において特に好ましい支
持体の材料はプラスチックフィルムである。このプラス
チックフィルムにはカーボンブラックなどの光吸収性物
質が練り込まれていてもよく、あるいは二酸化チタンな
どの光反射性物質が練り込まれていてもよい。前者は高
鮮鋭度タイプの蓄積性蛍光体シートに適した支持体であ
り、後者は高感度タイプの蓄積性蛍光体シートに適した
支持体である。

公知の蓄積性蛍光体シートにおいて、支持体と蛍光体層
の結合を強化するため、あるいは蓄積性蛍光体シートと
しての感度もしくは画質を向上させるために、蛍光体層
が設けられる側の支持体表面にゼラチンなどの高分子物
質を塗布して接着性付与層としたり、あるいは二酸化チ
タンなどの光反射性物質からなる光反射層、もしくはカ
ーボンブラックなどの光吸収性物質からなる光吸収層を
設けることも行なわれている。本発明において用いられ
る支持体についても、これらの各種の層を設けることが
でき、それらの構成は所望の蓄積性蛍光体シートの目的
、用途などに応じて任意に選択することができる。

さらに、特開昭５８−２００２００号公報に開示されて
いるように、得られる画像の鮮鋭度を向上させる目的で
、支持体の蛍光体層側の表面（支持体の蛍光体層側の表
面に接着性付与層、光反射層、光吸収層、あるいは金属
箔などが設けられている場合には、その表面を意味する
）には゛、凹凸が形成されていてもよい。

支持体の上には、前記のように蛍光体層が形成されてい
る。蛍光体層は、基本的には粒子状の輝尽性蛍光体を分
散状態で含有支持する結合剤からなる層である。

輝尽性蛍光体は、先に述べたように放射線を照射した後
、励起光を照射すると輝尽発光を示す蛍光体であるが、
実用的な面からは波長が４００〜９００ｎｍの範囲にあ
る励起光によって３００〜５ＱＯｎｍの波長範囲の輝尽
発光を示す蛍光体であることか望ましい。本発明におい
て利用される蓄積性蛍光体シートに用いられる輝尽性蛍
光体の例としては、米国特許第３，８５９，５２７号明細書に記載されてい
るＳｒＳ：Ｃｅ、Ｓｍ、ＳｒＳ：Ｅｕ。

Ｓｍ、Ｔｈ０２　：　Ｅ　ｒ、およびＴ、　ａ　２０２
　Ｓ　：Ｅｕ　、Ｓｍなどの組成式で表わされる蛍光体
、特開昭５５−１’２１４２号公報に記載されているＺ
ｎＳ：Ｃｕ、Ｐｂ、ＢａＯ＊ｘＡｌ２Ｏ３：Ｅｕ［ただ
し、０．８≦Ｘ≦１０］、および、Ｍ２＋０・ｘｓｉ０
２：Ａ［ただし、Ｍ２＋はＭｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｚｎ、Ｃ
ｄ、またはＢａであり、ＡはＣｅ、Ｔｂ、Ｅｕ、Ｔｍ、
Ｐｂ、Ｔｌ、Ｂｉ、またはＭｎであり、又は、０．５≦
Ｘ≦２．５であるコなどの組成式で表わされる蛍光体、
特開昭５５−１２１４３号公報に記載されている　　（
Ｂ　　ａ　　Ｉ−ｘ　　−ｙ　　、　　Ｍ　　ｇ　　ｘ
　　、　　Ｃａ　　ｙ　　）　　　Ｆ　　Ｘ　　：ａＥ
ｕ２＋［ただし、ＸはＣ１およびＢｒのうちの少なくと
も一つであり、Ｘおよびｙは、０くＸ＋ｙ≦０．６、か
つｘｔ７笑０であり、ａは、１０−’≦ａ≦５　Ｘ　Ｉ
　Ｏ−２である］の組成式で表わされる蛍光体。

特開昭５５−１２１４４号公報に記載されているＬｎＯ
Ｘ：ＸＡ［ただし、ＬｎはＬａ、Ｙ、Ｇｄ、およびＬｕ
のうちの少゛なくとも一つ、ＸはＣ９，およびＢｒのう
ちの少なくとも一つ、ＡはＣｅおよびＴｂのうちの少な
くとも一つ、そして、Ｘは、Ｏ＜ｘ＜０．１である］の
組成式で表わされる蛍光体、特開昭５５−１２１４５号公報に記載されている（Ｂ　
ａｌ−）（、Ｍ”　Ｘ）　ＦＸ　：　ｙ　Ａ　［ただし
。

Ｍ”はＭｇ、Ｃａ、Ｓｒ、Ｚｎ、およびｃｄのうちの少
なくとも一つ、又はＣＩ、Ｂｒ、および■のうちの少な
くとも一つ、ＡはＥｕ、Ｔｂ、Ｃｅ、Ｔｍ、　Ｄｙ、　
Ｐｒ、　Ｈｏ、Ｎｄ、Ｙｂ、およびＥｒのうちの少なく
とも一つ、そしてＸは、０≦Ｘ≦０．６、ｙは、０≦ｙ
≦０．２である］の組成式で表わされる蛍光体、特開昭５５−１６００７８号公報に記載されているＭ”
ＦＸａｘＡ：　ｙＬｎ　［ただし、ＭｌｌはＢａ、Ｃａ
、Ｓ　ｒ、Ｍｇ、Ｚｎ、およびＣｄのうちの少なくとも
一種、ＡはＢｅｄ、ＭｇＯ，ＣａＯ１Ｓ　ｒｏ、Ｂａｄ
、ＺｎＯ，Ａｌ２Ｏ２、Ｙ２Ｏ３、Ｌ　ａ　２０３、Ｉ
ｎ２Ｏ３、Ｓ　ｉ　Ｏ２、ＴＭ０１、ＺｒＯ２，ＧｅＯ
２、Ｓｎ、０２、Ｎｂ２Ｏ５、Ｔａ２０５、およびＴ　
ｈ　Ｏ２のうちの少なくとも一種、Ｔ、　ｎはＥｕ、Ｔ
ｂ”、Ｃ：ｅ、Ｔｍ、Ｄｙ、　Ｐｒ、　Ｈｏ、Ｎｄ、Ｙ
ｂ、　Ｅｒ、　Ｓｍ、およびＧｄのうちの少なくとも一
種、Ｘは０文、Ｂｒ、および工のうちの少なくとも一種
であり、Ｘおよびｙはそれぞれ５ＸＩＯ”−’≦Ｘ≦０
．５、および０くｙ≦Ｏ１゛２である］の組成式で表わ
される蛍光体、特開昭５６−１１６７７７号公報に記載されている（Ｂ
ａトＸ、Ｍ”ｘ）Ｆ２　ｍ　ａＢａＸ２：ｙＥｕ　、ｚ
Ａ　［ただし、Ｍｌはへリリウム、マグネシウム、カル
シウム、ストロンチウム、亜鉛、およびカドミウムのう
ちの少なくとも一種、Ｘは号１≦素、臭素、および沃素
のンちの少なく、とも一種、Ａはジルコニウムおよびス
カンジウムのうちの少なくとも一種であり、ａ、ｘ、ｙ
、および２はそれぞれ０．５≦ａ≦１．２５．０≦Ｘ≦
１．１０−’≦ｙ≦２　Ｘ　１０−’、オヨびＯ＜ｚ＝
≦１０′である］の組成式で表わされる蛍光体、特５１
１昭５７−２３６７３号公報に記載されている　　（Ｂ
　　ａ　　＋−ｘ　　、　　Ｍ　　”　　ｘ　　）　　
　Ｆ　　２　　拳　ａ　　Ｂ　　ａ　　Ｘ　　２　　：
ｙＥｕ、ｚＢ［ただし、Ｍ”はベリリウム、マグネシウ
ム、カルシウム、スカンジウム、亜鉛、およびカドミウ
ムのうちの少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素、および沃
素のうちの少なくとも一種であり、ａ、ｘ、ｙ、および
Ｚはそれぞれ０．５≦ａ≦　１．２５、０≦Ｘ≦　１、
１０−６≦ｙ≦２×１’　０−’、および０　＜　ｚ≦
２　Ｘ　１０−’であるコの組成式で表わされる蛍光体
、特開昭５７−２３６７５号公報に記載されている　　（
Ｂａｔ−ｘ　　、Ｍ”Ｘ）　　　Ｆ２　　ｅ　　ａＢａ
Ｘ２　　：ｙＥｕ、ｚＡ［ただし、Ｍｌはへリリウム、
マグネシウム、カルシウム、スカンジウム、亜鉛、およ
びカドミウムのうちの少なくとも一種、Ｘは塩素、臭素
、および沃素のうちの少なくとも一種、Ａは砒素および
硅素のうちの少なくとも−・種であり、ａ、ｘ、ｙ、お
よび２はそれぞれ０．５≦ａ≦１．２５．０≦Ｘ≦１．
１０−６≦ｙ≦２×１０−１、およびＯ（ｚ≦５　Ｘ　
Ｌ　Ｏ−’であるコの組成式で表わされる蛍光体１、特開昭５８−６９２８１号公報に記載されているＭ”
ＯＸ：ｘＣｅ［ただし、ＭｍはＰｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ
、Ｅｕ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、および
Ｂｉからなる群より選ばれる少なくとも一種の三価金属
であり、ＸはＣ１およびＢｒのうちのいずれか一方ある
いはその両方であり、ＸはＯ＜ｘ＜０．１である］の組
成式で表わされる蛍光体、特開昭５８−２０６６７８号公報に記載されているＢ　
ａ　Ｉ　Ｘ　Ｍ　Ｘ　／２Ｌ　Ｘ　７２Ｆ　Ｘ　：　ｙ
　Ｅ　ｕ　２＋［ただし、Ｍは、Ｌｉ、Ｎａ、に、Ｒｂ
、およびＣｓからなる群より選ばれる少なくとも一種の
アルカリ金属を表わし：Ｌは、Ｓｃ、Ｙ、Ｌａ、Ｃｅ、
Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅ
ｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、Ａｎ、Ｇａ、Ｉｎ、およびＴｌ
からなる群より選ばれる少なくとも一種の三価金属を表
わし：Ｘは、Ｃ１，Ｂｒ、および工からなる群より選ば
れる少なくとも一種のハロゲンを表わし：そして、Ｘは
１０−２≦Ｘ≦０．５、ｙはｏ＜ｙ≦０．１である］の
組成式で表わされる蛍光体、特開１（５９−２７９８０号公報に記載されているＢａ
ＦＸ＊　ｘＡ　：　ｙＥｕ２＋［ただし、Ｘは、０党、
Ｂｒ、およびＩからなる群より選ばれる少なくとも一種
のハロゲンでありｚＡは、テトラフルオロホウ醜化合物
の焼成物であり：そして、Ｘは１０−６≦Ｘ≦０．１、
ｙはｏ＜ｙ≦０．１である］の組成式で表わされる蛍光
体、特開昭５９−４７２８９号公報に記載されているＢ　ａ
ＦＸ＊　ｘＡ　：　ｙＥ　ｕ２＋［ただし、Ｘは、ＣＩ
、Ｂｒ、およびＩからなる群より選ばれる少なくとも一
種のハロゲンであり；Ａは、ヘキサフルオロケイ酸、ヘ
キサフルオロチタン酸およびへ、キサフルオロジルコニ
ウム酪の一価もしくは二価金属の塩からなるヘキサフル
オロ化合物群より選ばれる少なくとも一種の化合物の焼
成物であり；そして、Ｘは１０−６≦Ｘ≦０１、ｙはｏ
＜ｙ≦０．１である］の組成式で表わされる蛍光体、特
開昭５９−５６４７９号公報に記載されているＢ　ａ　
ＦＸ　＠ｘ　Ｎ　ａＸ’：ａＥ　ｕ”　［ただし、Ｘお
よびＸ゛は、それぞれ０文、Ｂｒ、および工のうちの少
なくとも一種であり、ＸおよびａはそれぞれＯ＜ｘ≦２
、およびＯｖａ≦０．２である］の組成式で表わされる
蛍光体、特開昭５９−５６４８０号公報に記載されているＭ１ｘ
ＦＸ１１ｘＮａＸ’：ｙＥｕ２＋：　ｚＡ　［ただしＭ
ｌＩは、Ｂａ、Ｓｒ、およびＣａからなる群より選ばれ
る少なくとも一種のアルカリ土類金属であり：Ｘおよび
Ｘ′は、それぞれＣ１，Ｂｒ、および■からなる群より
這ばれる少なくとも一種のハロケンであり、Ａは、■、
Ｃｒ、　Ｍｎ、、　Ｆ　ｅ　。

Ｃｏ、およびＮｉより選ばれる少なくとも一種の遷移金
属であり；そして、ＸはＯ＜ｘ≦２、ｙはｏ＜ｙ≦０．
２、および２はＯ＜ｚ≦１０４である〕の組成式で表わ
される蛍光体、本出願人による特願昭５７−１８４４５５号明細Ｊ）に
記載ξれているＭ”ＦＸ−ａＭ”Ｘ’　・ｂＭ　’　”
Ｘ”　２　ｅ　ｃＭｍＸ″’　３　＠　Ｘ　Ａ　：　ｙ
　Ｅｕ　２＋［ただし、ＭｌはＢａ、Ｓｒ、およびＣａ
からなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ土類
金属であり：ＭＩはＬｉ、Ｎａ、に、Ｒｂ、およびＣｓ
からなる群より選ばれる少なくとも一種のアルカリ金属
であり１Ｍ′互はＢｅおよびＭｇからなる群より選ばれ
る少なくとも一種の二価金属であり、　Ｍ　Ｉ＋［はΔ
交、Ｇａ、Ｉｎ、および１文からなる群より選ばれる少
なくとも一種の三価金属であり；Ａは金属酸化物であり
；ＸはＣ１１，Ｂｒ、およびＩからなる群より選ばれる
少なくとも一種のハロゲンであり；Ｘ’、Ｘ”、および
Ｘ“は、Ｆ’、ＣＩ、Ｂｒ、および■からなる群より選
ばれる少なくとも一種のハロゲンであり：そして、ａは
０≦ａ≦２、ｂはＯ≦ｂ≦１０−２、Ｃは０≦Ｃ≦１０
−２、かつａ＋ｂ＋ｃ≧ｔｏ−６−ｃ’あり；ＸはＯ＜
ｘ≦０．５、ｙはＯくｙ≦０．２である］の組成式で表
わされる蛍光体、などを挙げることができる。

ただし、本発明に用いられる輝尽性蛍光体は−１一連の
蛍光体に限られるものではなく、放射線を照射したのち
に励起光を照射した場合に、輝尽性発光を示す蛍光体で
あればいかなるものであってもよい。

また蛍光体層の結合剤の例としては、ゼラチン等の蛋白
質、デキストラン等のポリサンカライド、またはアラビ
アゴムのような天然高分子物質；および、ポリビニルブ
チラール、ポリ酢酸ビニル、ニトロセルロース、エチル
セルロース、塩化ビニリデン・塩化ビニルコポリマー、
ポリメチルメタ・クリレート、塩化ビニル・酢酸ビニル
コポリマー、ポリウ１／タン、セルロースアセテートブ
チレート、ポリビニルアルコール、線状ポリエステルな
どような合成高分子物質などにより代表される結合剤を
挙げることができる。このような結合剤のなかで特に好
ましいものは、ニトロセルロース、線状ポリエステル、
およびニトロセルロースと線状ポリエステルとの混合物
である。

蛍光体層は、たとえば１次のような方法により支持体ヒ
に形成することができる。

まず上記の輝尽性蛍光体粒子と結合剤とを適当な溶剤（
たとえば、低級アルコール、塩素原子含イ１炭化水素、
ケトン、エステル、エーテル）に加え、これを充分に混
合して、結合剤溶液中に蛍光体粒子が均一に分散した塗
布液を調製する。

塗布液における結合剤と輝尽性蛍光体粒子との混合比は
、目的とする蓄積性蛍光体シートの特性、蛍光体粒子の
種類などによって異なるが、一般には結合剤と蛍光体粒
子との混合比は、１：１乃至１：１００（重量比）の範
囲から選ばれ、そして特にｌ：８乃至１：４０（重量比
）の範囲から選ぶことが好ましい。

なお、塗布液には、該塗布液中における蛍光体粒子の分
散性を向上させるための分散剤、また、形成後の蛍光体
層中における結合剤と蛍光体粒子との間の結合力を向上
させるだめの可塑剤などの種々の添加剤が混合されてい
てもよい。そのような目的に用いられる分散剤の例とし
ては、フタル酸、ステアリン酸、カプロン酸、親油性界
面活性剤などを挙げることができる。そして可塑剤の例
としては、燐酸トリフェニル、燐酸トリクレジル、燐酸
ジフェニルなどの燐骸エステル；フタル酸ジエチル、フ
タル酸ジメトキシエチルなどのフタル酸エステル；グリ
コール酸エチルフタリルエチル、グリコール酸ブチルフ
タリルブチルなどのグリコール酸ニスナル：そして、ト
リエチレングリコールとアジピン酸とのポリエステル、
ジエチルングリコールとコハク酸とのポリエステルなど
のポリエチレングリコールと脂肪族二塩基酸とのポリエ
ステルなどを挙げることができる。

」二記のようにして調製された蛍光体粒子と結合剤とを
含有する塗布液を、次に、支持体の表面に均一に塗布す
ることにより塗布液の塗膜を形成する。この塗布操作は
、通常の塗布手段、たとえば、ドクターブレード、ロー
ルコータ−、ナイフコーターなどを用いることにより行
なうことがでＳる。

ついで、形成された塗膜を徐々に加熱することにより転
帰して、支持体上への蛍光体層の形成を完了する。蛍光
体層の層厚は、目的とする蓄積性蛍光体シートの特性、
蛍光体粒子の種類、結合剤と蛍光体粒子との混合比など
によって異なるが、通常は２０ｋｍ乃至１ｍｍとする。

ただし、この層厚は５０乃至５００　ｇｍとするのが好
ましい。

なお、蛍光体層は、必ずしも」＝記のように支持体Ｉ−
に塗布液を直接塗布して形成する必要はなく、たとえば
、別に、ガラス板、金属板、プラスチックシートなどの
シート上に塗布液を塗布し乾燥することにより蛍光体層
を形成した後、これを、支持体上に押圧するか、あるい
は接着剤を用いる方法などにより支持体と蛍光体層とを
接合してもよい。

蛍光体層の上には前記のように保護膜が設けられている
ことが好ましい。この保護膜は、たとえば、酢酸セルロ
ース、ニトロセルロースなどの透明なセルロース誘導体
：ポリメチルメタクリレート、ポリヒニルブチラール、
ポリビニルホルマール、ポリカーボネート、ポリ酢酸ビ
ニル会酢酸ビニルコポリマー、ポリエチレテレフタレー
ト、ポリエチレン、ポリ塩化ビニリデン、ポリアミドな
どの透明な合成高分子物質から形成されるものである。

保護膜の膜厚は、通常０．１乃至１００μｍ、好ましく
は０．３乃至５０μｍとされる。

本発明において、前述のようにして支持媒体りに形成さ
れた放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合成物の分離
展開列を蓄積性蛍光体シートに蓄積記録する工程は、そ
の支持媒体と蓄積性蛍光体シートとを一定時間重ね合わ
せることにより露光操作を行なって、放射性標識物質か
ら放出される放射線の少なくとも一部を蛍光体シートに
吸収させる方法により実施される。

なお、−１−記の露光操作では、分離展開列が形成され
た支持媒体は、そのまま、あるいは乾燥処理、分離展開
物の固定処理などの任意の処理を行なったのちに蓄積性
蛍光体シートと重ね合わされ、その露光操作が実施され
る。

また、露光操作において、上記の支持媒体と蓄積性蛍光
体シートとを重ね合わ゛せた状態は、通常は支持媒体と
蓄積性蛍光体シートとを密着させることにより実現する
が、必ずしもそ”れらを密着する必要はなく、それらが
近接した状態で配置さ、れていれば良い。

また、いわゆる露光時間は、放射性標識物質の放射能の
強さ、該物質の濃度、密度など、蓄積性蛍光体シートの
感度、支持媒体と蓄積性蛍光体シートとの位置関係など
により変動するが、露光操作は一定時間、たとえば、数
秒程度以上は必要とする。ただし、本発明に従って感光
材料として蓄積性蛍光体シートを用いた場合には、従来
の放射線フィルムを使用する場合に必要な露光時間に比
較して、その露光時間は大幅に短縮される。また、露光
により蓄積性蛍光体・シートに蓄積記録された放射性標
識物質の位置情報を読み出す操作において、該蛍光体シ
ードに蓄積されているエネルギーの強さ、分布、所望の
情報などに応じて各種の電気的処理を施すことにより、
得られる位置情報の状態を変えることが可能であるため
、露光操作時における露光時間の厳密な制御は特に必要
とはしない。

Ｊ゛ツノ下′−白また、露光操作を実施する温度は特に制限はないが、未
発りＪの蓄積性蛍光体シートを利用したオー　１−ラジ
オグラフィーは、特に１０〜３５℃などの環境温度にて
実施することが可能である。従来のオートラジオグラフ
ィーが氷点以下の温度（たとえば、−８０℃）で実施さ
れているのにくらべると上記のような環境温度で実施す
ることが可能であることは大きな利点である。

次に蓄積性蛍光体シートに蓄積されたオートラジオグラ
フが示す分＃展開された放射性標識物質（放射性標識を
有する塩基特異的ＤＮＡ合成物）の位置情報を読み出し
てそれらの位置情報を表わすデジタル信号を得るだめの
方法について、添付図面の￥（ｔ、１図に示［７た読出
装置（あるいは、読取装置）の例を参照しながら略述す
る。

第１図は、蓄積性蛍光体シート（以下においては、蛍光
体シートと略記することもある）ｌに蓄積記録されてい
る放射性標識物質の一次元もしくは二次元的な位置情報
を仮に読み出すための先読り用読出部２と、放射性標識
物質の位置情報な出力するために蛍光体シート１に蓄積
記録されている放射線画像を読み出す機能を有する本読
み用読出部３から構成される装置している。

先読み用読出部２においては次のような先読み操作が行
なわれる。

レーザー光源４から発生したレーザー光５はフィルター
６を通過することにより、このレーザー光５に．よる励
起に応じて蛍光体シートｉから発生する輝尽発光の波長
領域に該当する波長領域の部分がカットされる。次いで
レーザー光は、ガルバノミラ−等の光偏向器７により偏
向処理され、平面反射鏡８により反射されたのち蛍光体
シート１」二に一次元的ぽ偏向して入射する。ここで用
いるレーザー光源４は、そのレーザー光５の波長領域が
、蛍光体シートｌから発する輝尽発光の主要波長領域と
重複しないように選択される。

蛍光体シート１は、上記の偏向レーザー光の照射下にお
いて、矢印９の方向に移送される。従って、蛍光体シー
ト１の全面にわたって偏向レーザ−光が照射されるよう
になる。な−お、レーザー光源４の出力、レーザー光５
のビーム径、レーザー光５の走査速度、蛍光体シートｌ
の移、送速度については、先読み操作のレーザー光５の
エネルギーが本読み操作に用いられるエネルギーよりも
小さくなるように調整される。

蛍光体シートｌは、上記のようなレーザー光の照射を受
けると、蓄積記録されている放射線エネルギーに比例す
る光量の輝尽発光を示し、この光は先読み用導光性シー
ト１０に入射する。、この導光性シート１０はその入射
面が直線状で、蛍光体シート１上の走査線に対向するよ
うに近接して配置されており、その射出面は円環を形成
し、フォトマルなどの光検出器１１の受光面に連絡して
いる。この導光性シート１０は、たとえばアクリル系合
成樹脂などの透明な熱可塑性樹脂シートを加工してつく
られたもので、入射面より入射した光がその内部におい
て全反射しながら射出面へ伝達されるように構成されて
いる。蛍光体シートｌからの輝尽発光はこの導光性シー
ト１０内を導かれて射出面に到達し、その射出面から射
出されて光検出器１１に受光される。

光検出器１１の受光面には、輝尽発光の波長領域の光の
みを透過し、励起光（レーザー光）の波長領域の光をカ
ットするフィルターが貼着され、輝尽発光のみを検出し
うるようにされている。光検出器１１により検出された
輝尽発光は電気信号に変換され、さらに増幅器１２によ
り増幅され出力される。増幅器１２から出力された蓄積
記録情報は、本読み用読出部３の制御回路１３に入力さ
れる。制御回路１３は、得られた蓄積記録情報に応じて
、濃度およびコントラストが最も均一でかつ観察読影性
能の優れた画像が得られるように、増幅率設定値ａ、収
録スケールファクターｂ、および、再生画像処理条件設
定値Ｃを出力する。

以上のようにして先読み操作が終了した蛍光体シート１
は本読み用続出部３へ移送される。

本読み用読出部３においては次のような本読み操作が行
なわれる。

本読み用レーザー光源１４から発せられたレーザー光１
５は、前述のフィルター６と同様な機能を有するフィル
ター１６を通過したのちビーム・エクスパンター１７に
よりビーム径の大きさが厳密に調整される。次いでレー
ザー光は、ガルバノミラ−等の光偏向器１８により偏向
処理され、平面反射鏡１９により反射されたのち蛍光体
シートｌにに一次元的に偏向して入射する。なお、光偏
向器１８と平面反射鏡１９との間にはｆＯレンズ２０等
か配置され、蛍光体シー）１の」二を偏向レーザー光が
走査した場合に、常に均一なビーム速度を維持するよう
にされている。

蛍光体シート１は、」二記の偏向レーザー光の照射下に
おいて、矢印２１の方向に移送される。従って、先読み
操作におけると同様に蛍光体シートｌの全面にわたって
偏向レーザー光が照射されるようになる。

蛍光体シート１は、上記のようにしてレーザー光の照射
を受けると、先読み操作におけると同様に、蓄積記録さ
れている放射線エネルギーに比例する光量の輝尽発光を
発し、この光は本読み°用導光性シート２２に入射する
。この本読み用導光性シート２２は先読み用導光性シー
トｌＯと同様の材質、構造を有しており、本読み用導光
性シート２２の内部を全反射を繰返しつつ導かれた輝尽
発光はその射出面から射出されて、光検出器２３に受光
される。なお、光検出器２３の受光面には輝尽発光の波
長領域のみを選択的に透過するフィルターが貼着され、
光検出器２３が輝尽発光のみを検出するようにされてい
る。

光検出器２３により検出された輝尽発光は電気信号に変
換され、前記の増幅率設定値ａに従って感度設定された
増幅器２４において適正レベルの電気信号に増幅された
のち、Ａ／Ｄ変換器２５に入力される。Ａ／Ｄ変換器２
５は、収録スケールファクター設定値すに従い信号変動
幅に適したスケールファクターでデジタル信号に変換さ
れ、信号処理回路２６に入力される。信号処理回路２６
では、再生画像処理条件設定値Ｃに基づいて、濃度およ
びコントラストが適正で観察読影性能の優れた可視画像
が得られるように信号処理が行なわれ、次いで必要によ
り磁気テープなどの保存手段を介して、記録装置（図示
なし）へ伝送される。

記録装置は、前述したように支持媒体上の放射性標識物
質の−・次元的もしくは二次元的な位置情報を、たとえ
ば、数字、記号もしくはそれらの組合せなどにより表わ
すデジタル信号として記録する。ただし、−に記のデジ
タル信号を更に処理してオートラジオグラフに対応する
画像を得たのち、この画像を各種の手段、たとえば、感
光材料上をレーザー光等で走査して光学的に記録する手
段、ＣＲ，Ｔ等に電子的に表示するもの、ＣＲＴ等に表
示された放射線画像をビデオ・プリンター等に記録する
手段、熱線を用いて感熱記録材料上に記録する手段など
各種の原理に基づいた画像記録手段を利用して記録する
こともできる。

なお、本発明における蓄積性蛍光体シートに蓄■６記録
された支持媒体上の放射性標識物質の位置情報を読み出
すための方法について、」二記においては先読み操作と
本読み操作とからなる読出し操作を説明したが、本発明
において利用することができる読出し操作は、」二記の
例に限られるものではない。たとえば、支持媒体りの放
射性物質の含有量および、蓄積性蛍光体シートへの蓄積
記録に採用された露光時間が予めわかっていれば、上記
の例において先読み操作を省略することもできる。

本発明に用いられる蓄積性蛍光体シートは、上記の読出
し操作が完了した後、シートに適当な光を照射したりま
たは加熱して残存放射線エネルギーを消去することによ
り、再使用することができる。

また、蓄積性蛍光体シートに蓄積記録された支持媒体」
二の放射性標識物質の位置情報を読み出すための方法と
しては、上記に例示した以外の適当な方法を利用するこ
とも当然可能である。

なお、本発明において支持媒体上の放射性標識物質の「
位置情報」とは、支持媒体上において分離展開列を構成
する放射性標識物質もしくはその集合体の位置を中心と
する各種の情報、たとえば、支持媒体上に分離展開して
いる放射性物質の集合体の存在位置と形状、その位置に
おける放射性物質の儂度、分布などからなる情報の一つ
もしくは任意の組合わせとして得られる各種の情報を意
味する。

以下、本発明のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列
の決定方法を、前記のサンガー・クールラン法を利用し
た場合を例にとり、次の工種類の塩基特異的ＤＮＡ合成
物およびＤＮＡ合成物混合物を用いた場合について説明
する。

Ｉ）グアニン（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物＋アデニン（Ａ
）特異的ＤＮＡ合成物＋チミン（Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物＋シトシヅ（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物、２）グアニン（
Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物、３）アデニン（Ａ）特異的Ｄ
ＮＡ合成物、４）チミン（Ｔ）特異的ＤＮＡ合晟物。

５）シトシン（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物、すなわち、−
上記の１）の混合物が、四種類の塩基特異的ＤＮＡ合成
物を含むもので、標準展開列（基準列）を得るために用
いられる。

まず、検体ＤＮＡをテンプレートとして放射性標識（３
２Ｆ）が付与されたモノヌクレオシドトリフオスフェー
トとＤＮＡポリメラーゼとを用いて常法により、塩基特
異的に合成することにより、　　　　。

上記２）〜５）の特異的ＤＮＡ合成物（各々には放射性
標識°が付されている）を得る。

次に、これらの特異的ＤＮＡ合成物を適宜混合すること
により、上記ｌ）の混合物を得る。

次いで、に記ｌ）の混合物、および２）〜５）の塩基特
異的ＤＮＡ合成物を同一のゲル支持媒体」二で電気泳動
により平行に分ｇＩ展開させて、上記混合物およびそれ
ぞれの塩基特異的ＤＮＡ合成物の分離展開列を得る。

次に、この試料（分離展開列が形成されたゲル状支持媒
体）と蓄積性蛍光体シートとを室温または低温にて数十
分間重ね合わせることにより露光操作を行ない、分離展
開列のオートラジオグラフを蓄積性蛍光体シート上に得
る。そして、この蓄積性蛍光体シートを前述、の方法に
従って電磁波で走査することによりオーＩ・ラジオグラ
フに対応するデジタル信号、すなわち、上記１）の混合
物、および四種類の塩基特異的ＤＮＡ合成物のそれぞれ
が支持媒体−１−にて分離展開されて現われた各分離展
開物の位置情報を表わすデジタル信号を得ることができ
る。

第２図は、放射性標識の付与された塩基特異的ＤＮＡ合
成物およびそれらの混合物がそれぞれ分離７１１　ｒＭ
４されて形成された五列の分離展開列（泳動列）のオー
トラジオグラフを示す。

すなわち、第２図において第１列から第５列は順に、（１）−（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物（２）−（Ａ）特異的ＤＮＡ合成物（３）−（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物＋（Ａ）特異的ＤＮＡ合成牡＋（Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物＋（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物（４）−（Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物（５）−（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物の各分離展開列を示す。

上記の分離展開列のうち第３列は、（Ｇ、Ａ、Ｔ、Ｃ）
の全ての塩基特異的ＤＮＡ合成物を含んだ混合物の分＃
展開列であり、本発明ではこの分離展開列を塩基配列決
定のための内部標準列（基準列）として利用する。

すなわち、前記のようにして得られたデジタル信号は、
第２図に示したオートラジオグラフが記号、数字あるい
はそれらの組合せなどに置き換えられた信号であり、そ
のオートラジオグラフが表わす上記混合物および四種類
のμ基特異的ＤＮＡ合成物のそれぞれが支持媒体上にて
分離展開されて現われた各分離展開物の位置情報をデジ
タル情報として表わしている。

次に、これらのデジタル信号について、以下に述べる照
合、演算などの操作をコンピュータを利用して実施する
。

まず、第３列の内部標準列と、その隣りの第２列の分離
展開列とを比較する。内部標準列には全ての塩基特異的
ＤＮＡ合成物が含まれているから、第２列に現われる（
Ａ）特異的ＤＮＡ合成物の全ての分＃展開物の展開位置
は、内部標準列に現われた分＃展開物の一部に対応する
はずである。従って、第２°列の分離展開物の全てを内
部標準列の分離展開物に対応させることによって内部標
準列と第２列とのずれを容易に補正することができる。

次に、第３列の内部標準列と、その隣りの第４列の分離
展開列とを比較する。内部標準列には全ての塩基特異的
ＤＮＡ合成物が含まれているから、第４列に現われる（
Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物の全ての分ｇＩ展開物の展開位
置は、内部標準列に現われた分ｉｉ開物の一部に対応す
るはずである。またさらに、第２列と第４列は互いに排
他性をもつものであるから、この点をも利用することに
より更に確実に第４列の分離展開物の全てを内部標準列
の分＃展開物に対応させることができる。このようにし
て、第４列の分離展開物の全てを内部標準列の分離展開
物に対応させることによって内部標準列と第４列とのず
れを容易に補正することができる。

同様に、第３列の内部標準列と、第１列および第５列の
分＃展開列をそれぞれ比較することにより（’Ｇ）特異
的ＤＮＡ合成物と（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物の全ての分
離展開物の展開位置を内部標準列に現われた分離展開物
の一部に対応させることができる。このようにして各塩
基特異的ＤＮＡ合成物の展開位置を同定することができ
る。

このとき、第３列と第２列、第３列と第４列との比較に
おいてずでに求めたずれの値を参考として対応の確度を
高めることができる。さらに、第１、第２、第４、第５
列は互いに排他性を有しているので、第３列に現れる全
ての分離展開物（泳動帯）を重複することなく、これら
の列の泳動帯に対応させるようにして、各塩基特異的Ｄ
ＮＡ合成物の展開位置の同定の確度を高めることができ
る。

なお、これらの各塩基特異的ＤＮＡ合成物の同定操作に
おいて、前記のようにして求めた各分離展開列の間のず
れの程度を適宜コンピュータに入力して、その補正を行
なえば、それらの比較およひ同定は非常に容易となり、
またその精度も向上する。以上のような比較同定操作は
デジタル化されたデータについて行なえばよく、必ずし
も画像化して行なう必要はない。

すなわち、以Ｉニに例示された本発明のＤＮＡもしくは
ＤＮＡ断片物の塩基配列決定方法によれば、従来の、Ｇ
、Ａ、Ｔ、Ｃからなる四群の各塩基＃Ｗ的ＤＮＡ合成物
の分離展開操作を行なったのち、その分離展開列を放射
線フィルム−Ｌに可視画像として得て、これを解析する
方法などを利用する操作に比較して、ＤＮＡもしくはＤ
ＮＡ断片物の各塩基特異的ＤＮＡ合成物の同定操作は非
常に容易となり、またその精度も顕著に向上する。

なお、上記の説明においては、内部標準列となる混合物
の分＃展開列を中央に配置する例を示したが、この内部
標準列は必ずしも中央に配置する必要はなく、他の分子
ａ、展開列に対して任意の位置に配置することもできる
。

また、内部標準列は複数個配置することができる。たと
えば、内部標準列を通常の分離展開列と交互に配置する
ようにすれば本発明によるＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物
の各塩基特異的ＤＮＡ合成物の同定操作は更に容易とな
り、またその精度も更に顕著に向上するなお、本発明のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列
決定法においては、上記の（ｃ＋Ａ＋Ｔ＋Ｃ，Ｇ、Ａ、
Ｔ、Ｃ）の組合わせを利用したＤＮＡの塩基配列決定法
は、ＤＮＡの塩基配・列決定方法の一例であって、本発
明の塩基配列の決定法は、上記の組合わせに限定される
ものはなく、種々の組合わせが可能であり、またその組
合わぜを利用して、」二記の方法に準じる方法により同
様にして塩基配列を決定することができる。

また、前記の例においては、支持媒体上で一次元的方向
に分＃展開して分＃展開列を形成してぃ゛る１列の放射
性標識物質群を用いて説明したが、分離展開列は１列に
限定されるものではなく、１列より多くてもよく、また
１列より少なくてもよい。

すなわち、たとえば、（ａ）：　　（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物、および（ｂ）
　　・　（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物＋（Ａ）特異的ＤＮ
Ａ合成物＋（Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物＋（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物の組合わせを用いてＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物におけ
るクアニン（Ｇ）のみについてその位置を決定すること
もできる。

すなわち、本発明においてＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物
の塩基配列の決定とは、全ての塩基についての塩基配列
の決定のみを意味するものではなく、」−記のように一
部の塩基の位置のみを決定することも含むものである。

なお、これまでの記述は一つの支持媒体を用いて一種類
のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列の決定を行な
う例を示すものであったが、一つの支持媒体を用いて同
時に二種類以上のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配
列を決定を行なうことも＋１丁能である。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明において蓄積性蛍光体シートに蓄積記
録された支持媒体」二の放射性標識物質の位置情報を読
み出すための続出装置（あるいは読取装置）の例を示す
ものである。１：蓄積性蛍光体シート、２：先読み用続出部、３：本
読み用読出部、４：レーザー光源、５、レーザー光、６
：フィルター、７：光偏向器、８：平面反射−鏡、９：
移送方向、１０：先読み用導光性シート、１１：光検出
器、１２：増幅器、１３：制御回路、１４：レーザー光
源、１５：レーザー光、１６：フィルター、１７゜ビー
ム・エクスノ？ンダー、１８：光偏向器、１９：平面反
射鏡、２０：ｆθレンズ、２１：移送方向、２２：本読
み用導光性シート、２３：光検出器、２４：増幅器、２
５：Ａ／Ｄ変換器、２６：信号処理回路第２図は、放射性標識が付与された塩基特異的ＤＮＡ合
成物およびその混合物が支持媒体上で分離展開されて形
成された分離展開列（泳動列）を第２図一４０ス−

Claims

【特許請求の範囲】１、（１）ＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物と相補的な塩基
配列を有し、かつ放射性標識が付与されている塩基特異
的ＤＮＡ合成物を支持媒体上で分離展開して分離展開列
を得る工程；（２）該分離展開列の放射性標識物質群から放出される
放射線エネルギーを蓄積性蛍光体シートに吸収させるこ
とによって、この蓄積性蛍光体シートに該放射線標識物
質群の位置情報を有するオートラジオグラフを蓄積記録
する工程；（３）該蓄積性蛍光体シートを電磁波で走査して該オー
トラジオグラフを輝尽光として放出させることにより、
放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合成物の分離展開
位置の位置情報を読み取る工程；および、（４）上記（３）の工程において塩基特異的ＤＮＡ合成
物の分離展開位置の位置情報に基づいてＤＮＡもしくは
ＤＮＡ断片物の塩基配列を決定する工程；を含むＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列決定方法
であって、上記（１）の放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合成
物を支持媒体上で分離展開する工程には、ＤＮＡもしく
はＤＮＡ断片物の構成単位である四種類の塩基について
各々の塩基ごとに特異的に合成して得たＤＮＡ合成物の
全てを含む混合物を同一の支持媒体上で同時に平行して
分離展開する操作が含まれ、かつ、上記（４）のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基配列を
決定する工程には、上記混合物の分離展開列に現われた
各分離展開位置を標準として他の分離展開列に現われた
塩基特異的ＤＮＡ合成物の分離展開位置を比較同定する
操作が含まれることを特徴とするＤＮＡもしくはＤＮＡ
断片物の塩基配列の決定方法。２、放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合成物および
塩基特異的ＤＮＡ合成物混合物を支持媒体上において分
離展開する工程を、高分子物質からなるゲル上で電気泳
動操作を行なうことにより実施することを特徴とする特
許請求の範囲第１項記載のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物
の塩基配列決定方法。３、標準の分離展開列を得るための塩基特異的ＤＮＡ合
成物として、１）グアニン（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物、アデニン（Ａ）特異的ＤＮＡ合成物、チミン（Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物、シトシン（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物、を含む混合物を用い、そして、放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合成物と
して、２）グアニン（Ｇ）特異的ＤＮＡ合成物、３）アデニン（Ａ）特異的ＤＮＡ合成物、４）チミン（Ｔ）特異的ＤＮＡ合成物、５）シトシン（Ｃ）特異的ＤＮＡ合成物、からなる四群の放射性標識を有する塩基特異的ＤＮＡ合
成物を用いることを特徴とする特許請求の範囲第１項も
しくは第２項記載のＤＮＡもしくはＤＮＡ断片物の塩基
配列の決定方法。